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AGAR ESTRACTO DE

MALTA
Bibliografa: Thom & Church. The Aspergilli.
(1926)
Se emplea para el aislamiento y recuento de mohos y levaduras. Tambin se
puede emplear para pruebas de esterilidad en relacin a la presencia de
estos microorganismos.

HISTORIA
Reddish primero, y Fullmer y Grimes despus, emplearon el extracto de
malta para el cultivo de levaduras, sustituyendo al lpulo. Ms tarde Thom y
Church siguiendo las directrices de Reddish confeccionaron el medio tal
como se conoce actualmente.

FUNDAMENTO
En medio cido, el extracto de malta que es rico en glcidos, es capaz de
aportar todos los nutrientes necesarios para el desarrollo de mohos y
levaduras. Por el carcter cido del medio, se inhibe el crecimiento de la
mayor parte de los grmenes contaminantes.

COMPOSICIN (g/l):
Extracto de Malta ............................................ 12,75
Dextrina ........................................................... 2,75
Glicerina .......................................................... 2,35
Peptona de Gelatina ......................................... 0,78
Agar ................................................................ 15,0

pH: 4,70,2

PREPARACIN
Suspender 33,6 g en 1 l de agua destilada. Calentar y agitar hasta ebullicin
y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 118C durante 10 minutos. Si el
medio se sobrecalienta el agar pierde su capacidad de solidificar.

MODO DE EMPLEO
Incubar entre 25 y 30C de 3 a 5 das. Se recomienda usar paralelamente
con medios como Jugo de Naranja Agar o Extracto de Levadura Agar.

CONTROL DE CALIDAD
Control fsico-qumico Aspecto: polvo fino Solubilidad: total
Color: blanco a beige claro
pH: 4,70,2
CONTROL MICROBIOLGICO
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn,
despus de incubacin a temperatura de 25-30C y observados a las 40-72
horas.

Microorganismos Desarrollo
Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC Satisfactorio
9763 Satisfactorio
Saccharomyces uvarum ATCC
9080

AGAR SABOURAUD
GLUCOSA
Se utiliza para el cultivo de hongos y levaduras y para la numeracin de
estos microorganismos en alimentos y otros materiales. Los medios lquidos
o caldos estn indicados para pruebas de esterilidad; los agares Sabouraud
con glucosa estn especialmente indicados para dermatofitos, mientras que
los que contienen maltosa favorecen el crecimiento de los hongos
filamentosos.
Se aconseja utilizar un medio suplementado con antibiticos cuando las
muestras estn altamente contaminadas.
FUNDAMENTO
En este medio la mezcla de peptonas es la fuente nitrogenada para el
crecimiento de los hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa) es la
fuente energtica.
El Agar Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de USP y Ph.
Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que
suministra todos los requerimientos nutritivos necesarios.
Sin embargo, se recomienda la utilizacin de antibiticos de amplio espectro
en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de
contaminacin bacteriana y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos
saprofitos.
Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos para
mejorar su selectividad:

Potasio Telurito al 0,015% concentracin final, inhibe el crecimiento


bacteriano.
2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro al 100 mg/l, permite diferenciar
Candida albicans de las otras Cndidas.

Penicilina a razn de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias.

Pueden utilizarse otros antimicrobianos, as como indicadores que pueden


hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial.
FRMULA (POR LITRO)
COMPOSICIN (G/L):
D(+)- GLUCOSA .................................................. 40,0 G
MEZCLA DE DIGERIDO PPTICO DE TEJIDO ANIMAL Y DIGERIDO PANCRETICO DE CASENA
(1:1) .............. 10,0 G AGAR ................................................................ 15,0 G

PH: 5,6 0,2


PREPARACION
Suspender 65 g en 1l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y
hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 118-121C durante 15
minutos. Evitar la exposicin excesiva al calor, que favorece la hidrlisis de
los componentes ablandando el medio.
MODO DE EMPLEO
Sembrar la muestra segn fines previstos e incubar entre 20-25C de 3 a 7
das. La Farmacopea Europea recomienda este medio para el recuento total
de mohos y levaduras a 20-25C durante 5 das. Para la promocin de
crecimiento de Candida albicans ATCC 10231 y Aspergillus niger ATCC
16404, inculo 100 ufc, se incuban a 20-25C durante 5 das.
REACTIVOS AUXILIARES
Cicloheximida PB (cd. 375266) Cloranfenicol
Potasio Telurito sol 3,5% (cd. 414724)
2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro PB (cd. 374950)

CONTROL DE CALIDAD
Control fsico-qumico
Aspecto: polvo fino
Solubilidad: ligeramente opalescente
Color: beige claro
pH: 5,60,2

Control microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrn,
despus de incubacin a temperatura de 30C y observacin a los 3-7 das.

Microorganismos Desarrollo
*Candida albicans ATCC 10231 Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 25922 Moderado-
Satisfactorio
Escherichia coli ATCC 8739 Moderado-
Inhibido
Lactobacillus casei ATCC 9595 Satisfactorio
**Aspergillus niger ATCC 16404 Satisfactorio
Saccharomyces cerevisiae ATCC Satisfactorio
9763

BIBLIOGRAFA
Ph. Eur. supl. 6.5 (2009) USP 32 (2009). ATLAS, R. M. and L. C. PARKS (1993), Handbook of
Microbiological Media, CRC Press. Inc. London. VANDERZANT & SPLITTSTOESSER (1992),
Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Food III Ed., American Public
Health Association. Washington D.C. PASCUAL ANDERSON M R. (1992), Microbiologa
Alimentaria, Daz de Santos S.A. Madrid.

AGAR PAPA
DEXTROSA
PROPSITO DE USO
El Agar Papa Dextrosa es utilizado para el cultivo de hongos. Este
producto est conforme a los Requerimientos Armonizados de las
Farmacopeas USP/EP/JP.1,2,3

FUNDAMENTO
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en
ingls) es un medio de propsito general para levaduras y mohos que
puede ser suplementado con cidos o antibiticos para inhibir el
crecimiento bacteriano. Es recomendado para uso con mtodos de
conteo en placa para alimentos, productos lcteos 4-6 y pruebas
realizadas en cosmticos.7 El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado
para el cultivo de levaduras y mohos clnicamente significativos.8 La
base (infusin de papa) nutricionalmente rica, estimula la esporulacin
de los mohos y la produccin de pigmentos en algunos dermatofitos.9

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO


El Agar Papa Dextrosa est compuesto por Infusin de Papa deshidratada
y Dextrosa que fomentan el crecimiento exuberante de los hongos. El
agar es adicionado como agente solidificante. Muchos procedimientos
estndares usan una cantidad especfica de cido tartrico estril (10%)
para reducir el pH de este medio a 3,5 0.1, y as inhibir el crecimiento
bacteriano. No recalentar el medio acidificado, el calentamiento en
estado cido hidrolizar el agar.
FRMULA / LITRO
Infusin de Papa (Potato Infusion) a
partir de 200 g............... 4 gDextrosa
(Dextrose)..............................................
........20 g
Agar........................................................................................ 15 g
*4,0 g de extracto de papa es equivalente a
200 g de infusin de papas. pH Final: 5,6
0,2 a 25C
La frmula puede ser ajustada y/o suplementada de acuerdo a los
requerimientos para cumplir con las especificaciones de rendimiento o
desempeo.

PRECAUCIONES
1. Para uso en el laboratorio.

PROCEDIMIENTO
1. Suspenda 39 g del medio de cultivo en un litro de agua purificada
2. Caliente agitando frecuentemente y permita que hierva por un
minuto para disolver completamente el medio.
3. Autoclave a 121C durante 15 minutos.

ESPECIFICACIONES DE CONTROL DE CALIDAD


Apariencia del Deshidratado: Polvo suelto, homogneo, de color beige
claro.
Apariencia del Preparado: El medio preparado presenta una
apariencia de trazas de niebla a levemente nublado, y de color plido a
amarillo claro.

Respuesta Esperada del Cultivo y Pruebas Promotoras de


Crecimiento de la USP/EP/JP: La respuesta esperada en el Agar Papa
Dextrosa incubado a las temperaturas y durante los tiempos de incubacin
especificados acorde con los requerimientos Armonizados de las
Farmacopeas USP/EP/JP y examinado para determinar crecimiento en los
perodos de tiempos definidos.1,2,3

Microorganismo Inculo Respuesta


Aproximad
Aspergillus niger ATCC 16404 Puntoode
(UFC) Crecimiento
Candida albicans ATCC 10231 10 100 Crecimiento
Penicillium roquefortii ATCC 10110 Punto de Crecimiento
Trichophyton mentagrophytes ATCC Punto de Crecimiento

Los organismos listados son los mnimos que deben ser evaluados para propsitos de anlisis y
pruebas de control de calidad.

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1,2,3


Mtodos de Vertido en Placa4,6
1. Adicione 1 mL de la muestra de la muestra en una placa de petri estril.
2. Adicione la cantidad especificada (10 o 20 mL) del agar estril derretido
(enfriado a 4550C) y revulvalo gentilmente para mezclarlo
completamente. Permita que se solidifique.
3. Incube a 2225C o 3032C (dependiendo del mtodo seguido) durante 27
das o por ms tiempo.

Resultados
Las levaduras crecern como colonias desde un color crema a un color
blanco. Los mohos crecern como colonias filamentosas de variados colores.
Cuente el nmero de colonias y considere el factor de dilucin (si la muestra
fue diluida) al determinar el conteo de levaduras y/o mohos por cada gramo o
mililitro de material.

Almacenamiento
Almacene el envase conteniendo el medio de cultivo deshidratado sellado
firmemente y a una temperatura entre 230C. Una vez abierto y cerrado
nuevamente, coloque el envase en un ambiente con baja humedad a la
misma temperatura de almacenamiento. Proteja el producto de los efectos de
la humedad y de la luz manteniendo el envase firmemente cerrado.

Expiracin
Referirse a la fecha de expiracin estampada en el envase. El medio de
cultivo deshidratado debe ser desechado si no fluye libremente, o si su
apariencia ha cambiado a partir del color original. La expiracin aplica para el
medio de cultivo que haya sido almacenado en su recipiente intacto, original
y bajo las condiciones indicadas.

Limitaciones del Procedimiento


Debido a variaciones nutricionales algunas cepas pueden tener un pobre
crecimiento o ausencia de crecimiento en este medio.

Referencias
1. United States Pharmacopeial Convention. 2007. The United States pharmacopeia, 31st
ed., Amended Chapters 61, 62, 111. The United States Pharmacopeial Convention,
Rockville, MD.
2. Directorate for the Quality of Medicines of the Council of Europe (EDQM). 2007. The
European Pharmacopoeia, Amended Chapters 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4, Council of Europe, 67075
Strasbourg Cedex, France.
3. Japanese Pharmacopoeia. 2007. Society of Japanese Pharmacopoeia. Amended Chapters
35.1, 35.2, 7. The Minister of Health, Labor, and Welfare.
4. Vanderzant, C., and D. F. Splittstoesser (eds.). 1992. Compendium of methods for the
microbiological examination of food, 3rd ed. American Public Health Association, Washington,
D.C.
5. Marshall, R. T. (ed.). 1993. Standard methods for the microbiological examination of dairy
products, 16th ed. American Public Health Association, Washington, D.C
6. www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalmanua
lBAM/default.htm.
7. Curry, A. S., J. G. Graf, and G. N. McEwen, Jr. (eds.). 1993. CTFA Microbiology
Guidelines. The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Washington, D.C.
8. Murray, P.R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (eds.). 1995.
Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
9. Mac Faddin, J. F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of
medical bacteria, vol.1. Williams & Wilkins, Baltimore, MD.

Informacin Tcnica
Para preguntas relacionadas con la preparacin o el rendimiento de los medios de cultivo
deshidratados o para contactar al Departamento de Servicios Tcnicos, comunquese con
Acumedia Manufacturers, Inc. al telfono (517) 372-9200 o al fax (517) 372- 2006.