Introduccin

Las enzimas son molculas de naturaleza proteica y estructural que catalizan reacciones qumicas,
siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace que una reaccin qumica que es
energticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinticamente favorable,
es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las
enzimas actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas
diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para
que ocurran a una s tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimticas. La Peroxidasa es un tipo de enzima muy extendida en toda la escala
filogentica. Pertenecen a la categora de las xido-reductasas, catalizan reacciones bisustrato de
carcter redox, utilizando un perxido como oxidante (a lo que deben su nombre) y un segundo
sustrato de caractersticas reductoras que es oxidado por el perxido.

Los biocatalizadores especficos sintetizados por el organismo, llamados enzimas son protenas que
intervienen en las reacciones biolgicas, acelerando la velocidad de reaccin hasta alcanzar su punto
de equilibrio. Las enzimas son sumamente especficas en las reacciones que catalizan y en los
compuestos (llamados sustratos) sobre los que actan. La cintica enzimtica es el estudio del
comportamiento de la velocidad en reacciones catalizadas por enzimas. Las mediciones de la cintica
proporcionan una herramienta bioqumica muy til para calcular la concentracin de una enzima en
una muestra biolgica y comparar su actividad cataltica con la de otras enzimas. Adems, las
mediciones cinticas permiten describir de manera cuantitativa el efecto de un veneno o medicamento
sobre la actividad de una enzima. La velocidad a la que procede una reaccin enzimtica est
controlada en parte por las concentraciones de la enzima y el sustrato. A medida que progresa la
reaccin, aumenta la concentracin de los productos a expensas de la desaparicin de los
correspondientes sustratos, en tanto que la concentracin de la enzima no se altere. La actividad
enzimtica puede expresarse:

a) Por la desaparicin del sustrato (S).

b) Por la aparicin de productos (P).

c) Por modificacin de cofactores (C).

Diversos factores modifican la actividad enzimtica, tales como:

1) Concentracin de sustrato [S]

2) Concentracin de la enzima [E]

3) pH del medio

4) Influencia de la temperatura

5) Efecto de inhibidores y activador

OBJETIVOS
Comprobar la reaccin sobre el perxido de hidrgeno por accin de la enzima catalasa,
presente en tejidos animales y vegetales determinando los productos de reaccin.
Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimtica, como la temperatura, el pH, la
concentracin del sustrato y de la enzima y la presencia de inhibidores.
Confrontar los conocimientos tericos adquiridos en clases con las actividades
experimentales en el laboratorio.
MARCO TEORICO
Los enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones qumicas
que tienen lugar en la clula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces de
aumentar la velocidad de las reacciones qumicas mucho ms que cualquier catalizador
artificial conocido, y adems son altamente especficos ya que cada uno de ellos induce la
transformacin de un slo tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el
medio de reaccin.

FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimtica. Destacaremos dos: el pH y

la temperatura.

EFECTO DEL pH:

El pH es otro factor que influye en la actividad enzimtica, debido a que el pH influye en la ionizacin
de los grupos funcionales de los aminocidos que forman la protena enzimtica. Cada enzima realiza
su accin dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este intervalo habr un pH ptimo
donde la actividad enzimtica ser mxima. Por debajo del pH mnimo o por encima del pH mximo el
enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la mayora de las enzimas el pH ptimo est prximo a
la neutralidad, aunque hay excepciones. La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el
cual su actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente.
Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que otras protenas, se
desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de unos lmites estrechos. De ah la
conocida importancia biolgica de los sistemas tampn.

En la mayor parte de los casos el pH ptimo est prximo a la neutralidad, en consonancia con el pH
intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo muy diverso segn sea el pH del medio en el que
habitualmente actan (los enzimas proteolticos del jugo gstrico tienen pHs ptimos prximos a 2 ya
que este es el pH de dicho jugo). Por ltimo existen algunos enzimas a los que el pH no afecta en
absoluto.

Por ejemplo, la pepsina (enzima estomacal) tiene un pH ptimo de 2, al graficar su actividad

enzimtica para valores crecientes de pH, comenzando desde la zona cida, se obtiene una curva en
forma de campana. El mximo de la curva corresponde al pH ptimo en el cual la enzima tiene su
mxima actividad. En medios muy cidos o muy alcalinos, la enzima se desnaturaliza y se inactiva.
Otras enzimas en cambio tienen una actividad ptima a pH alcalino como la tripsina (enzima
intestinal).

EFECTO DE LA TEMPERATURA:

Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variacin de la actividad enzimtica
con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa de
activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en otras reacciones
qumicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un brusco descenso de la actividad
cuando se alcanza una temperatura crtica. Este efecto no es ms que un reflejo de la
desnaturalizacin trmica del enzima cuando se alcanza dicha temperatura. La Temperatura influye en
la actividad enzimtica.

En general por cada 10C que aumente la temperatura la velocidad de la reaccin aumenta de 2 a 4
veces. Esta regla se cumple hasta que la temperatura alcanza un valor mximo (T ptima) donde la
actividad es mxima. Esto se debe a que al aumentar la T aumenta el movimiento de las molculas y,
por tanto aumenta la probabilidad de encuentro entre el S y el E. Si la T aumenta por encima de la T
ptima, disminuye e incluso cesa la actividad enzimtica debido a que la enzima se desnaturaliza.
Cada enzima posee una T ptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37C.

Los animales poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la T corporal, se ven
obligados a hibernar en la estacin fra pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas
temperaturas es muy baja.

Ejemplo:
Efecto de la temperatura
sobre la actividad
enzimtica en una
enzima tpica humana y
una bacteria termfila.

Desnaturalizacin de una protena

INHIBIDORES:

Son compuestos qumicos que se unen al enzima, en distintos puntos del mismo y
disminuyen o incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden ser de distintos
tipos: iones, molculas orgnicas y a veces el producto final de la reaccin.

A la accin que realizan se la denomina inhibicin. La inhibicin puede ser:

Inhibicin irreversible:
Cuando el inhibidor impide permanentemente la actividad enzimtica, bien porque se
une de forma permanente con grupos funcionales importantes del centro activo o bien
porque altera su estructura. A estos inhibidores se les denomina venenos y a la inhibicin
que realizan se la denomina envenenamiento del enzima.

Ej. La penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared bacteriana. El in cianuro
acta sobre la citocromo oxidasa (enzima respiratorio).

Inhibicin reversible:

El inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante enlaces dbiles e impide el

normal funcionamiento del mismo, pero no la inutiliza permanentemente. Puede ser de
dos tipos.

Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir al centro activo del

enzima impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor y sustrato compiten
por unirse al centro activo del enzima. La accin suele anularse aumentando la
concentracin del sustrato.

No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede actuar de 2 formas:

Sobre el enzima, unindose a el en un lugar diferente al centro activo y
modificando su estructura lo que dificulta que el enzima se pueda unir con el
sustrato.
Sobre el complejo E-S unindose a l y dificultando su desintegracin y por lo
tanto la formacin de los productos.

CONCLUSIONES
Como producto del anlisis de los resultados del experimento realizado en el laboratorio, se pueden
extraer las siguientes conclusiones:

La temperatura es un factor determinante en las reacciones enzimticas porque acelera o

retarda la accin de las enzimas, lo que se evidencia con la produccin de burbujas.
Para que la catalasa funcione correctamente debe tener un ph neutro y temperatura ambiente.
CUESTIONARIO:
1. Cul es la importancia del Km.

La constante de Michaelis-Menten (smbolo Km) corresponde a la concentracin de sustrato con la

cual la velocidad de reaccin enzimtica alcanza un valor igual a la mitad de la velocidad mxima.

En medios con condiciones definidas de pH y temperatura, la constante tiene un valor fijo para cada
enzima y sirve para caracterizarla.

Describe la cintica enzimtica de muchas de ellas. Fue nombrada en honor de Leonor Michaelis y
de Maud Menten. Este modelo cintico es vlido slo cuando la concentracin de enzima es mucho
menor que la concentracin del sustrato (i.e., la concentracin de enzimas es el factor limitante), y
cuando la enzima no tiene regulacin alostrica.

Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la concentracin de sustrato ([S]) se
aumenta hasta alcanzar una velocidad constante de formacin de producto. Esa es la velocidad
mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.
 Diagrama de velocidad de reaccin y constante de Michaelis-Menten.

2. Qu efectos produce las altas temperaturas sobre las enzimas.

Las enzimas son siempre protenas y stas soportan temperaturas relativamente altas. Pero superada
esa temperatura, las protenas se desnaturalizan y por tanto tambin las enzimas.

Se estima que la temperatura aproximada de desnaturalizacin in vitro en de 45 C. In vivo pueden

soportar temperaturas ambientales ms altas pero es porque el cuerpo utiliza todos sus sistemas de
refrigeracin. Se puede vivir a temperaturas de hasta unos 50 C

Este fenmeno tiene la aplicacin industrial de sobrecalentar sustancias, sobre todo alimenticias, que
contengan enzimas que puedan estropearlas. Por ejemplo, cortar una fermentacin vnica para que no
se convierta en actica.

3. Como se clasifican las enzimas?

Las enzimas, se clasifican por tipos de reaccin y mecanismo. Con el descubrimiento de ms y ms

enzimas surgieron ambigedades inevitables y con frecuencia no estaba claro de que enzima se
estaba hablando, para remediar esta deficiencia la Unin Internacional de Bioqumica (IUB, en ingles
internacional Union Of Biochemistry) adopto un sistema complejo pero inequvoco, de la nomenclatura
enzimtica y las clasifico.

Oxidoreductasas:
Estas enzimas catalizan la transferencia de electrones desde una molcula que va a ser el agente
reductor hasta otra molcula receptora y esta ser el agente oxidante.
Las enzimas Oxidoreductasas reaccionan de la siguiente manera:

AH2 + O2 A + H2O
 Se clasifican en:

Deshidrogenadas.
Oxidasas.
Peroxidasas.
Oxigenasas.
Hidroxilasas.
Reductasas.

Transferasas:
Estas enzimas catalizan la transferencia de un grupo funcional de una molcula donante a una
molcula receptora.

Las enzimas Transferasas reaccionan de la siguiente manera:

AB + C A+ CB

Se clasifican en:

Grupos Monocarbonados.
Grupos Aldehdo o Ceto.
Acil Transferasas.
Glicosiltransferasas.
Alquil o Ariltranferasas.
Grupos Nitrogenados.
Grupos Fosfato.
Grupos Sulfato.
 Hidrolasas:
Estas enzimas son capaces de hidrolizar sea descomponer enlaces qumicos por su reaccin con
el agua.

Las enzimas Hidrolasas reaccionan de la siguiente manera:

AB + H2O AH + BOH

Se clasifican en:

Esterasas.
Glucosidasas.
Eter Hidrolasa.
Peptidasas.
Acil anhidro Hidrolasas.
Helicasas.
Etc.

Liasas:
Estas enzimas son las encargadas de catalizar la ruptura de enlaces qumicos en compuestos
orgnicos por un mecanismo distinto a la hidrlisis y a la oxidacin. Como resultado del proceso de la
ruptura de los enlaces se forman frecuentemente nuevos dobles enlaces o nuevas estructuras en
anillos.

Las enzimas Liasas reaccionan de la siguiente manera:

AB A + B

Se clasifican en:
 Actan sobre enlaces C-C.
Actan sobre enlaces C-O.
Actan sobre enlaces C-N.
Actan sobre enlaces C-S.
Actan sobre enlaces C- Haluro.
Actan sobre enlaces P-O.
Etc.

Isomerasas:
Estas enzimas son las encargadas de transformar un isomero de un compuesto qumico en otro

Las enzimas Isomerasas reaccionan de la siguiente manera:

ABC ACB

Se clasifican en:

Rasemasas y Epimerasas.
Cis-Trans- Isomerasas.
Oxidoreductasas Intramoleculares.
Transferasas Intramoleculares.
Liasas Intramoleculares.

Ligasas:
Son las enzimas capaces que catalizar la union entre dos molculas de gran tamao, para dar lugar a
un nuevo enlace qumico.

Las enzimas Ligasas reaccionan de la siguiente manera:

 A + B + XTP AB + XDP + Pi

Se clasifican en:

Forman enlaces C-O.

Forman enlaces C-S.
Forman enlaces C-N.
Forman enlaces C-C.
Forman enlaces esters fosforicos.
Actan sobre enlaces N-metal.

4. A que se llaman zimgenos e isoenzimas.

Zimgenos: Zimogenos o proenzimas son precursores inactivos de las enzimas. Un

zimogeno es una molecula que necesita ser activada para convertirse en una enzima activa, por lo
que es mas exacto decir que los zimogenos son precursores de enzimas, que decir que son
enzimas inactivas. Las enzimas digestivas, algunos factores de la coagulacion y otras proteinas son
sintetizadas como zimogenos.

La sintesis de enzimas en forma de zimogenos es uno de los mecanismos de seguridad conque

cuenta el organismo para su supervivencia.

Ejemplo: La sintesis de enzimas digestivas en forma inactiva es un mecanismo de seguridad para

las celulas que sintetizan esas enzimas, ya que las enzimas proteoliticas sintetizadas como
zimogenos no son activadas hasta que no abandonan la celula.

Isoenzimas: Las Isozimas Isoenzimas son proteinas con diferente estructura pero que
catalizan la misma reaccion. Con frecuencia, las isoenzimas son oligomeros de diferentes cadenas
peptidicas, y usualmente difieren en los mecanismos de regulacion y en las caracterisiticas cineticas.
Desde el punto de vista fisiologico, la existencia de isoenzimas permite que haya enzimas similares
con diferentes caracteristicas, personalizadas de acuerdo a los requerimientos especificos del tejido
o a determinadas condiciones metabolicas.

5. Que son cofactores y mencione ejemplos.

Un cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa molecular, necesario para la
accin de una enzima. El cofactor se une a una estructura proteica, denominada apoenzima, y el
complejo apoenzima-cofactor recibe el nombre de holoenzima.

Aquellos cofactores que estn covalentemente unidos a la apoenzima son denominados grupos
prostticos, ya sean orgnicos (coenzimas) o inorgnicos.

Los cofactores son bsicamente de dos tipos, iones metlicos y molculas orgnicas,
denominadas coenzimas.

Ejemplos

MAGNESIO

HIERRO

ZINC

BIBLIOGRAFIA

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