Prctica N 02: MTODOS DE ESTUDIO

PARASITOLGICO
(Mtodos de concentracin)

I. Introduccin:

COPROPARASITARIO

El estudio parasitolgico de las materias fecales se utiliza para el diagnstico

de enteroparasitosis.
Conjunto de tcnicas complementarias, que permiten demostrar la
presencia de las diferentes formas evolutivas de los enteroparsitos: esporas,
trofozoitos, quistes, ooquistes, huevos, larvas y adultos.

No existe un nico mtodo capaz de demostrar las formas evolutivas

parasitarias:

Diferente morfologa y ciclos.

Diferencias estructurales (tintoriales y en la viabilidad)
Modificaciones por medicacin, pH, etc.
Distinta localizacin en el tubo digestivo, los agentes que se ubican a
nivel terminal, se ubican en la periferia del bolo fecal.
Variaciones en la resistencia de las formas evolutivas.
Perodos negativos, eliminacin intermitente.
MTODOS DE CONCENTRACIN

Fundamento:
Permiten evaluar una mayor cantidad de muestra.
Su sensibilidad y especificidad es
notablemente mayor que el
examen directo.
Existen mtodos especficos para
cada grupo de parsitos.

Pasos previos a la realizacin de

cualquier mtodo de concentracin.

Procedimientos:

A. SEDIMENTACIN

Estn basados en la utilizacin de agua u otros lquidos de baja densidad,

recobrndose las formas evolutivas microscpicas de los parsitos, en el fondo
de un recipiente en el que se depositan por ser ms densos.
- Sedimentacin simple
- Sedimentacin-centrifugacin Telemann (ter- cido clorhidrico)
- Carles y Barthlmy (eter-cido ctrico)
- Ritchie (formol-eter)
- Mtodo de KOH para Cyclospora.

B. FLOTACIN

Los elementos parasitarios se recogen de la superficie de un lquido denso, a la

cual ascienden por su menor peso especfico.
- Flotacin simple, Bass (uncinarias)
- Flotacin centrifugacin, Lane (anquilostomas)
- Faust (sulfato de zinc) huevos de helmintos

C. BIOLOGICOS

Basados en la aplicacin del ciclo vital de los helmintos (eclosin de huevos de

anquilostomas y esquistosomas) y en tropismos particulares de formas
juveniles.
II. Capacidad:
- Reconocer y comprender los mtodos empleados para aumentar la
sensibilidad del estudio parasitolgico
- Desarrollar las tcnicas de concentracin para el estudio de parsitos

III. Meta:
- Concentrar huevos de ciertos helmintos y quistes de protozoos
cuando las infecciones son muy leves y no se detectan en
preparaciones directas.
- Conocer los mtodos de concentracin ms empleados en
Parasitologa.

IV. Materiales y equipos:

- Copa de Sedimentacin - Encendedor

- Gradilla p/ tubos de ensayo
13 x 100 mm
- Mechero de alcohol
- Piceta c/agua destilada
- Pipeta graduada, 1 ml
- Propipeta de goma
- Tubo de ensayo, 13x100
mm
- Tubo cnico de centrfuga
de 10 15 ml.
- Varilla de agitacin
- Bajalenguas de madera
- Lmina cubreobjetos
- Lmina portaobjetos
- Pipeta pasteur de plstico
(Gotero)
- Paraflim
- Piceta con alcohol al 70%
- Desinfectante en frasco
boca ancha (para descarte
de lminas P/O)
- Centrifuga
- Microscopios
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- Reactivos
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- Reactivo de Faust
- Reactivo de Willis
- Solucin salina fisiolgica
- Lugol
- POOL PARASITOLOGICO
- LMINAS DE TEST DE GRAHAM
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- Muestra Requerida
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- Heces frescas recolectadas en frasco (plstico) de boca ancha,
con tapadera, limpio, sin contaminantes (agua del inodoro, orina, tierra
etc.) debidamente identificado.
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V. Procedimientos:
a. Mtodo de Willis (Flotacin)
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1. Con un baja lengua, tomar 1-1.5 g de heces y hacer una suspensin en
unos pocos ml de agua destilada en el tubo de ensayo 13x100
2. Filtrar a travs de gasa humedecida a un tubo de ensayo.
3. Centrifugar a 1,500-2,000 rpm por 2 minutos. Descartar el sobrenadante
(empleando las pipeta Pasteur)
4. Agregar 2-3 mL de solucin de sulfato de zinc y agitar con la varilla de
agitacin hasta suspender totalmente el sedimento. Agregar ms
solucin de sulfato de zinc hasta 1 cm abajo del borde del tubo de
ensayo, sin dejar de agitar.
5. Centrifugar a 2,000 por 2 minutos. Los tubos deben tener posicin
vertical en la centrfuga, no inclinada.
6. Sin sacar el tubo de la centrifuga, remover la pelcula superficial y
colocarlas sobre un porta-objetos.
7. Cubrir con un cubre-objetos. Examinar sistemticamente la preparacin.
Para colorear los quistes, remover con cuidado el cubre-objetos y aadir
una gota pequea de Lugol.
 -
- Para identificar los quistes se procede a examinarlos con el objetivo
100X, para lo cual debe colocarse antes una pequea gota de aceite
sobre el cubre-objetos.
- Puede ejecutarse este mtodo cuando se reciben heces fijadas, para
lo cual la solucin de sulfato de zinc debe tener una densidad de
1.20.
- CAUSAS DE ERROR O RESULTADOS POCO SATISFACTORIOS:
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- En general, si no se sigue el mtodo fielmente.
- Solucin de sulfato de zinc de otra gravedad especfica
- Esperar mucho tiempo despus de preparar la muestra, antes de
observarla al microscopio (ms de 20 minutos)
- No es el mtodo adecuado para huevos de cstodos ni de tremtodos
- Las larvas se encogen y no se puede reconocer su morfologa especfica
 -

b. Mtodo de Faust (Flotacin - Centrifugacin)

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1. En un tubo de boca ancha mezclar 7 ml de formalina al 10% o bien SAF
(sodium acetato formalina) con 1 gr de heces aproximadamente (el
tamao de una avellana), ayudndose de varillas de madera, hasta
conseguir una suspensin turbia.
2. Dejar reposar 15 minutos la muestra.
3. Filtrar por 2 dobleces de gasa a un tubo cnico o de ensayo ayudado por
embudo. Verter el filtrado en un tubo limpio. Tapar tubos
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4. Equilibrar los tubos y centrifugara 1,500 rpm por 2 minutos; destapar.

5. Descartar el sobrenadante.
6. Aadir 3 ml de acetato de etilo. Tapar el tubo con parafilm y
agitar vigorosamente 15 segundos.
7. Transferir a un tubo cnico de centrfuga y centrifugar
durante 3 minutos a 3000 rpm. (tubos enfrentados con la
misma cantidad).
8. Al final de la centrifugacin se obtienen 4 capas: sedimento,
formalina, tapn de detritus y acetato de etilo. Destapar con
cuidado y con un aplicador desprender el tapn de detritus
todo alrededor y decantar el sobrenadante de un solo
movimiento.

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9. Despegar cuidadosamente el tapn de residuos para evitar que caiga en
el sedimento y verter el contenido lquido del tubo (acetato de etilo y
formalina) en un contenedor para residuos evitando que caiga el
sedimento. En el sedimento se encontrarn las formas parasitarias a
estudiar.
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10. Mezclar bien el sedimento con ayuda de una pipeta y transferir una gota
a un portaobjetos limpio.
11. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos.
12. Examinar al microscopio con objetivos 10x y
40x.
- Para colorear quistes, agregar una gota de
Lugol.
13. Descartar material utilizado en desinfectante.
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- Referencias bibliogrficas:
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 MANUAL DE PARASITOLOGIA. Rina Girard de Kamnsky, M.Sc. 2da.
Edicin, 2003.

PARASITOSIS HUMANAS. David Botero, Marcos Restrepo. 5 edicin.

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PROCESAMIENTO DE MUESTRAS PARA DIAGNSTICO DE
PARSITOS INTESTINALES. EHAS. Proyecto AECID 2012
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