Prctica 1

Ingeniera de bioprocesos
Produccin de un alcano metano en condiciones mesfilas
partir de sustratos orgnicos

Fundamento terico:
Todos los sustratos orgnicos son susceptibles de producir metano en funcin de su composicin orgnica. Tal
es el caso de algunos residuos hortofrutcolas y residuos agroindustriales. El pltano, mango, glicerina industrial
como entre otros residuos, han destacado estadsticamente por su volumen alto de produccin y concomitante
generacin de residuos. Estos residuos a su vez, son susceptibles de reciclarlos o darles un uso posterior. La
generacin de metano, se plantea como un factor que coadyuva a la sustentabilidad energtica a nivel nacional e
internacional. De aqu, la importancia de conocer este compuesto orgnico y visualizar las diversas fuentes de
ste, los procedimientos para obtenerlo y conocer a grandes rasgos los parmetros ms importantes a cuidar en
un proceso sin necesidad de ser un personal altamente calificado.

Materiales y mtodos
5 residuos o sustratos:
1. Pltano macho
Se requiere 100
2. Mango ataulfo
gramos de cada
3. Mezcla de vegetales (tomate, lechuga y cebolla)
sustrato
4. Papaya
5. Glicerina
Equipo y material:
1 medidor volumtrico de gas Ritter
1 jeringa de plstico de 60 mL de volumen
1 Llave de paso (3 puntos)
1 manmetro digital
1 licuadora domstica
1 vaso de precipitado de vidrio de 200 ml
1 termmetro hasta 100 C
1 agitador de vidrio
2 botellas serolgicas de 110 mL
1 micropipeta
1 probeta de 100 mL
2 recipientes de plstico tapa blanca
1 pipeta quebrada de la punta para tomar muestras espesas
Equipo especial:
1 bao mara automtico precalentado a 35 C
1potenciometro
Soluciones:
1 solucin de macronutrientes* (* Ver en hoja anexa)
1 solucin de micronutrientes*
1 solucin buffer de fosfatos*
1 solucin 7 M de NaOH*
 Procedimiento:

1. Sistema de reaccin.-
El sistema de reaccin ser una botella serolgica de 110 mL de volumen total. Antes de usarla se requiere que
se calcule el volumen gaseoso del sistema que contendr el biogs producido. Para tal efecto se muestra la
botella con su respectiva descripcin:

1. Tome una botella serolgica vaca y seca

y llnela con 80 mL de H2O (agua de la
llave)
2. Anote el menisco de tal volumen
(marcador indeleble) como marca de
aforo. Registre el peso en gramos (m 1)
con el liquido junto con su tapn de
neopreno y el arillo metlico
3. Retire el tapn con el arillo y llene con
H2O hasta derramar y cierre nuevamente.
Registre el peso en gramos (m2)
4. Calcule el volumen gaseoso del sistema
en mL, densidad del agua = 1 g/mL

Volumen gaseoso = m2-m1 = mL

Preparacin de los sustratos.-

A excepcin de la glicerina, todos los dems sustratos debern ser molidos por espacio de 2 minutos en una
licuadora domestica sin adicin de agua, es decir, la pulpa madura sin material inerte. Al final de la molienda
conservarlos en un recipiente de plstico. Tomar la muestra a agregar al reactor y conservar el resto en
congelacin para efecto de futuras medidas analticas.

Peso de sustrato Volumen de agua

50 g 62 mL de H2O

Caracterizacin fisicoqumica de residuos hortofrutcolas e

inoculo.
DQO ST STV Volumen
Residuo STV/ST STV/DQO agregar
(g/L) (g/L) (g/L)
Pltano 139.4 226.2 169.3 0.75 1.21 2
Mango 53.9 139.8 130.8 0.94 2.43 5
Papaya 46.3 78.2 51.3 0.66 1.11 10
Mezcla de 21
16.2 39.6 35.2 0.89 2.17
hortalizas
Glicerina 0.1
1800 NA NA NA NA
industrial
Solucin sinttica 6
30 NA NA NA NA
para el testigo +
Inoculo 6.1 10.7 5.9 0.55 0.97
NA= no aplica por ser muestra liquida no polar (aceite)
Preparacin de los ensayos de BMP:
Para todos los ensayos sin importar el sustrato se proceder como sigue:
1. Agregar a la botella serolgica la cantidad de muestra designada en mL, esto con la pipeta quebrada para
que no haya retencin de slidos
2. Agregar 20 mL de solucin buffer
3. Agregar 23 mL de inculo
4. Agregar 350 micro litros de resazurina
5. 1 mL de micro y 2 mL macronutrientes
6. Aforar con agua de la llave hasta 80 mL
7. Corregir con NaoH 7 molar el pH del sistema hasta alcanzar pH 8
8. Incubar en el bao mara a 35C

Preparacin de los ensayos de BMP (Testigo positivo (+) y negativo (-)):

Testigo positivo: se proceder al igual de un ensayo con los sustratos verdaderos excepto que en lugar del
sustrato real, se proceder a adicionar un sustrato de biodegradabilidad conocida (solucin sinttica).

Testigo negativo: se proceder al igual de un ensayo con los sustratos verdaderos excepto que este no lleva
ningn volumen de sustrato.

Monitoreo de la cintica.-
El BMP (siglas en ingls de biological methane potential) es un valor mximo de produccin de metano divido
entre la cantidad de materia orgnica de un sustrato medido en demanda qumica de oxgeno (mL
CH4/gDQOsubstrato mL CH4/g SSVsubstrato). Representa la cantidad de metano que puede producir un eventual
sustrato (Prez, 2008). La figura 1 muestra un perfil clsico de BMP para todo tipo de desecho. En el caso de la
presente prctica se deber realizar un seguimiento diario afin de obtener toda la cintica a partir del
lanzamiento de la cintica hasta alcanzar la meseta de produccin, lo significar que se ha terminado la
biodegradabilidad del sustrato.

BMP

Figura 1. Perfiles de BMP clsico de un sustrato orgnico (lodo residual aerobio)

calculo de BMP de la meseta del perfil e interpolado al eje de las Y.

Calculos.-
gO2
1. gCH 4 Al
trmino de la prctica deber realizar una estequiometra para la oxidacin del metano y
encontrar la demanda qumica de oxgeno terica ThDQOCH4. Expresado en
2. Calcule la cantidad del alcano (CH4) que se producir por efecto de la conversin del material orgnico.
Datos350 mL CH4 = 1 g DQO en condiciones normales de presin y temperatura (0C, 1 atm de
presin y con el supuesto fisicoqumico de 22.4 L/mol.
3. Calcule la produccin de metano a condiciones reales de trabajo (35C).
Ecuaciones tiles PV= nRT, R= 0.082 L-atm/K-mol
Preparacin de la solucin de macro y micro nutrientes
Macronutrientes (mg/L)
Cantidad
Reactivo
(mg/L)
KH2PO4 390
K2HPO4 610
NH4Cl 300
NaCl 200
MgCl. 6 H2O 200
CaCl2 200
EDTA 250
Extracto de Levadura 300
Colocar en frascos ambar y esterilizar a 121C/25 a 1 Kg/cm2 de presin y refrigerar 4C.
Micronutrientes (mg/100ml)
Cantidad
Reactivo
(mg/100ml)
HCl al 25% 10 mL
FeCl. 4 H20 1500
ZnCl 70
MnCl. 2 H20 80
H3BO3 6
COCl2. 6 H20 104
CuCL2. 2 H20 2
NiCl2. 6 H20 24
Na2Mo O4. 2 H20 36
Na2SeO3. 5 H20 3
nN
Na2WoO4. 2 H20 4
Se adicionarn 2 mL de esta solucin por cada litro de medio. Esterilizar a 121C por 25 a 1 Kg/cm 2 de
presin.

Preparacin de la solucin buffer

Materiales:
Reactivos (Na2HPO4 y KH2PO4 )
Vasos de precipitado
Balanza analtica
Varilla de vidrio
Agua destilada
Matraz volumtrico
Pizeta
Metodologa:
Para preparar la solucin buffer se tiene que realizar un clculo para determinar cunto de cada reactivo se
necesita para hacer 500 ml de solucin, despus de realizar los clculos se procede a pesar en los vasos de
precipitado con ayuda de la balanza analtica que da resultados ms precisos, una vez pesados se tienen que
diluir con agua destilada y posteriormente se agrega al matraz volumtrico, una vez agregados se tiene que
aforar con agua destilada hasta los 500 ml, con ayuda de una pizeta , se tapa y etiqueta el matraz, se homogeniza
y se refrigera.
Clculos:
54 g 27 g Na2 HP O4
Na2 HPO 4 ( )
L
( 0.5 L ) =
0.5 L de H 2 Odestilada
18 g 9 g de K H 2 PO 4
KH 2 PO 4 ( )
L
( 0.5 L ) =
0.5 L de H 2 O destilada

Para preparar la solucin buffer se tiene determinado que para un litro de solucin se necesitan 54 g de
Na2HPO4 y 18 g de KH2PO4 por lo que hay que calcular cunto de cada reactivo se necesita para preparar 500
ml de solucin, y se realiza de la siguiente forma:
Debido a que no se cuenta en el laboratorio con Na2HPO4 anhdrido, se us Na2HPO4. 7H2O (significa que
tiene cierto porcentaje de agua), se ponder usando los pesos moleculares de cada reactivo como se muestra a
continuacin para poder usarlo.
27 g de N a2 HP O 4 X g de N a 2 HP O 4 .7 H 2 O
=
141.9 g 267.9 g
X =50.97 g de N a 2 HP O 4 .7 H 2 O

Preparacin de solucin sinttica para un litro de agua destilada.-

Acetato de sodio anhidro 22.1g

Alcohol etlico 4ml
Propionato de sodio anhidro 4.16g
Glucosa anhidro 1.41g
Butirato de sodio 1.2g
Almidn 1.26g

Acetato de sodio anhidro 22.1g

Propionato de sodio anhidro 4.16g
Glucosa anhidro 1.41g
Almidn 1.26g

5gDQO/L
 Procedimiento para la purga de reactores en Batch

1.- Homogenizar la solucin dentro del frasco

2.- Conectar el manmetro con la manguera del reactor y abrir la llave clamp para tomar la lectura de la presin. NOTA: si la
presin es mayor a 150mbar se realizar la purga del mismo.

3.- El sistema debe de encontrarse tal como se muestra en la imagen, con las vlvulas cerradas.

4.- Abrir todas las vlvulas e inyectar cuidadosamente aire o nitrgeno con el fin de presurizar todo el sistema. Una vez
presurizado cerrar la ltima vlvula
5.- Conectar la manguera del reactor, abrir la llave clamp y abrir cuidadosamente la primer vlvula

6.- Dejar que pase el biogs para que pase a travs de la trampa de gases que contiene NaOH 3N con el fin de que el CO 2
contenido en el biogs se disuelva en el NaOH y el contador Ritter solo contabilice el metano. Cuando termine de pasar el
gas, cerrar la vlvula y las llaves clamp.

7.- Una vez purgados todos los tratamientos se cierran todas las vlvulas.