BIORREMEDIACION

PRODUCCIN DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) POR Bacillus sp.

UTILIZANDO GLICEROL COMO FUENTE DE CARBONO.

Los Polihidroxialcanoatos (PHA) son polmeros biodegradables, producidos

por algunos microorganismos como material de reserva de carbono y
energa, que son almacenados en forma de grnulos en el citoplasma clula
Los PHA son fuertes candidatos para sustituir a los plsticos derivados del
petrleo, dado que poseen propiedades mecnicas similares a varios
termoplsticos sintticos.
En el presente trabajo de estudi la utilizaron del glicerol como sustrato
para la produccin de polihidroxialcanoatos (PHA), por un Bacillus sp. a
escala de matraces. Este fue capaz de crecer a partir de glicerol,
obtenindose hasta una concentracin de biomasa de 2,2 g/L, para una
concentracin inicial de glicerol de 5 g/L en un medio mnimo definido, con
una acumulacin de PHA menor al lmite de cuantificacin.
MATERIALES Y MTODOS
Microorganismo:
El Bacillus sp. fue aislado de un efluente lcteo por el Departamento de
Bioingeniera de la Facultad de Ingeniera y seleccionado como productor de
PHA en diversas fuentes de carbono. La cepa se mantiene en TSB con 20%
de glicerol a -70C.
Medio de cultivo:
El medio de cultivo est constituido por: Na2HPO4 4,45 g/L, KH2PO4
1,5 g/L, MgSO47H20 0,2 g/L, (NH4)2SO4 1g/L, Citrato de Amonio y Hierro III
0.06 g/L, CaCl2H2O 0,01 g/L y 1 mL/L de metales traza. El glicerol utilizado
para componer los medios fue glicerol puro para anlisis (Merck). El medio
de cultivo se esteriliz en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Optimizacin de fuente de carbono:
Las concentraciones de glicerol ensayadas fueron: 1, 5, 10, 20 y 30 g/L. Se
realizaron los cultivos por duplicado, en matraces de 2 L (300 mL) en un
agitador orbital a 250 rpm y 35C, pH inicial 7. Se tomaron muestras a
diferentes tiempos y se determinaron las concentraciones de glicerol
remanente y de biomasa.
Optimizacin de relacin carbono/nitrgeno (CN): Para la
concentracin de glicerol ptima, se ensayaron las relaciones CN: 2, 5, 11 y
17, manteniendo la composicin del medio salvo la concentracin de
(NH4)2SO4, que se modific para cumplir con las relaciones mencionadas.
Los cultivos fueron realizados en matraces de 2 L, (300 mL) en un shaker
orbital a 250 rpm y 35C. Se tomaron muestras a diferentes tiempos y se
determinaron las concentraciones de glicerol y sulfato de amonio
remanentes, biomasa y PHA.
PROCEDIMIENTOS ANALTICOS
Cuantificacin de Biomasa: La densidad celular se determin mediante
medidas de turbidometra a 600nm en espectofotmetro (Unico).
Cuantificacin de glicerol: Las muestras se centrifugaron y los
sobrenadantes se utilizaron para la determinacin de la concentracin de
glicerol residual mediante HPLC (Cromatografa lquida de alto rendimiento)
con un equipo Shimadzu con una columna Shodex sugar KS-801 (8 mm x
300 mm) a 55C, utilizando agua MilliQ como eluente, a un caudal de 0.7
mL/min.
Cuantificacin de PHA: Los pellets obtenidos se secaron y se sometieron a
un proceso de hidrlisis y propanlisis basado en el mtodo prouesto por
Riis et al. (8) para la posterior cuantificacin de los propil-esteres mediante
cromatografa gaseosa, con un GC Shimadzu, equipado con una columna
Agilent DB-WAX (30m x 0,25mm x0,5 m) y detector FID. El gas carrier
utilizado fue H2 y el volumen de inyeccin 1L. Se utilizaron PHB y PHBV
(Sigma) como estndares.
Cuantificacin de amonio: La concentracin de amonio residual fue
realizada mediante un mtodo potenciomtrico con un electrodo de ion
selectivo de amonio (Orion) y se expresa como g/L de (NH4)2SO4.
CONCLUSIN
El Bacillus sp. Fue capaz de crecer a partir de glicerol. Se obtuvo una
concentracin de biomasa de 2,2 g/L para la concentracin de glicerol de 5
g/L, en un medio mnimo definido. Se determin que para la relacin CN 5
se obtiene mayor acumulacin de PHA, que corresponde a un 5%. Se
evidenci que el Bacillus sp. Podra llegar a acumular dos monmeros
distintos de PHA.
BIBLIOGRAFA
PRODUCCIN DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) POR Bacillus sp.
UTILIZANDO GLICEROL COMO FUENTE DE CARBONO. Anala Banacore1 ,
Guadalupe Martnez, Vernica Saravia, Disponible en:
http://aiquruguay.org/congreso/download/P89.pdf