Dr.

Antonio Barbadilla

1
REPLICACIN DEL ADN
 HIPTESIS SOBRE LA DUPLICACIN DEL ADN

CONSERVATIVA

DISPERSIVA

SEMICONSERVATIVA
REPLICACIN CONSERVATIVA DEL ADN
REPLICACIN SEMICONSERVATIVA DEL ADN
 EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL

Mathew Meselson Frank Stahl

EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL
EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL
 EXPERIENCIAS DE MESELSON Y STAHL

CONTROL (Centrifugacin del ADN conocido) RESULTADOS DEL EXPERIMENTO

14 15 ADN 14N y
ADN N ADN N 1 generacin 2 generacin 3 generacin
ADN 15N

Descarta el modelo Descarta el modelo

conservativo dispersivo

INTERPRETACIN DEL EXPERIMENTO 3 generacin

Cultivo con 15N Cultivo con 14N 2 generacin
1 generacin
LA REPLICACIN DEL ADN ES SEMICONSERVATIVA

Hebra Hebra Hebra Hebra

nueva original nueva original
 REPLICACIN DEL ADN

La ADN-polimerasa une nucleticos slo en sentido 5-3. Por ello,

las hebras del nuevo ADN son complementarias y antiparalelas.

Ori = origen de replicacin

(secuencia especial de nucletidos)

Horquillas de replicacin

Burbuja de replicacin

Las clulas eucariotas poseen muchos ori.

El ADN bacteriano posee un solo ori.
 REPLICACIN

DEL ADN EN BACTERIAS

LA REPLICACIN EN CLULAS PROCARIOTAS
LA REPLICACIN EN CLULAS PROCARIOTAS
REPLICACIN DEL ADN AULA 360

Etapas de la replicacin del ADN

en bacterias

1. Iniciacin: apertura y desenrollamiento del

ADN.
2. Elongacin: sntesis de dos nuevas cadenas
de AND.
3. Correccin de errores.

GELV
 INICIACIN: APERTURA Y DESENROLLAMIENTO DEL ADN

Origen nico de replicacin

Horquillas de replicacin
ENZIMAS IMPLICADAS EN LA FASE DE INICIACIN: REPLISOMA

Rompe los puentes de H entre

ambas hebras y las separa.

Leen la secuencia de cada

cadena y elaboran dos
copias complementarias.

Girasas

(SSBP)
Mantiene la separacin de las dos hebras,
evitando autoapareamientos, y permitiendo que se
inicie la horquilla de replicacin.
Elimina las tensiones y los
superenrollamientos que se
producen al romperse la hlice.
ENZIMAS IMPLICADAS EN LA FASE DE INICIACIN: REPLISOMA

Elimina las tensiones y los superenrollamientos que se

producen al romperse la hlice.

Topoimerasas
Girasas

Origen de replicacin

Helicasa
SSB
(Protenas Rompe los puentes de H entre
ambas hebras y las separa.
estabilizadoras)

Mantiene la separacin de las dos hebras, evitando autoapareamientos,

y permitiendo que se inicie la horquilla de replicacin.
 ETAPA DE INICIACIN

Consiste en el desenrollamiento y apertura de la doble hlice de ADN

Origen de replicacin (seal de iniciacin)

Ori C Evitan las tensiones debidas a un superenrrollamiento
Girasa Horquilla de
Topoisomerasa replicacin
Protenas
especficas

Protenas SSB

Impiden que el ADN

se vuelva a enrollar

Helicasa
Las protenas
especficas se
unen al punto La helicasa rompe los
de iniciacin enlaces de hidrgeno Burbuja de
entre las bases y abre la replicacin
doble hlice
LA HELICASA DESENROLLANDO LA HORQUILLA DE REPLICACIN
 FASE DE ELONGACIN. POLIMERASAS IMPLICADAS

Junto a las enzimas que participan en la iniciacin, en esta fase actan

las ADN polimerasas.

Funcin NUCLEASA Funcin EXONUCLEASA

POLIMERASAS
Direccin Funcin Direccin Funcin

Elimina el
5 3
cebador
POLIMERASA I
Replicacin Correccin
5 3 3 5
o sntesis de errores

POLIMERASA III Correccin

3 5
de errores

Correccin
POLIMERASA II 3 5
de errores
 FASE DE ELONGACIN. SNTESIS DE LAS NUEVAS HEBRAS

FASE DE INICIACIN

ARN polimerasa III

FASE DE ELONGACIN
 FASE DE ELONGACIN. SNTESIS DE LAS NUEVAS HEBRAS

P
OH

OH
P
P

P
5 3
P P + H2O
P

P
OH

OH
P

P
P

P
PRIMER PROBLEMA A RESOLVER POR LA ADN POLIMERASA III

La ADN-polimerasa III puede sintetizar ADN in vitro,

pero no de novo, es decir, slo puede elongar cadenas.
Por ello, toda nueva cadena de ADN comienza por un
fragmento de ARN (el primer) (pues el ARN se puede
sintetizarse de novo gracias a la ARN polimerasa =
primasa), que acta como cebador o iniciador; este
primer ser despus eliminado.

ARN Primer

El cebador, ms proclive al error, es un ARN,

ya que puede detectarse y eliminarse
fcilmente por la ADN polimerasa I.
 SEGUNDO PROBLEMA: EL CRECIMIENTO BIDIRECCIONAL
Cmo era posible que las dos hebras de la horquilla crecieran en
paralelo, ya que, al ser antiparalelas, si una creca en sentido
5-3, la otra deba hacerlo en sentido 3-5.
 SOLUCIN AL PROBLEMA: LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Los fragmentos de Okazaky son sintetizados al principio por la ARN-polimerasa, y

despus por la ADN-polimerasa, en direccin 5-3. Los fragmentos pierden su
ARN y se unen, por lo que aparentemente la hebra crece en direccin 3-5.
SOLUCIN AL PROBLEMA: LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI
SOLUCIN AL PROBLEMA: LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI
 LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI

En la hebra retardada, la ADN-polimerasa III recorre las hebras molde en

sentido 3- 5, uniendo los nuevos nucletidos en el extremo 3, de modo
que la nueva hebra crece en sentido 5- 3.

5
5 Una de las hebras se
sintetiza de modo contnuo.
3 Es la conductora o lider.
Fragmentos de
5 Okazaki
3 3
3
5 3
La ADN polimerasa necesita un
fragmento de ARN (cebador o
primer) con el extremo 3 libre 5
para iniciar la sntesis.

La otra hebra se sintetiza de modo

discontinuo formndose fragmentos que
se unirn ms tarde. Es la retardada.
LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Hebra retardada
Hebra conductora o lder
 RESUELTO EL PROBLEMA DEL CRECIMIENTO BIDIRECCIONAL

Horquilla de replicacin Burbuja de replicacin

 ENZIMAS IMPLIDADAS EN LA ELONGACIN

Partiendo del primer, empieza a sintetizar

una hebra de ADN en sentido 5-3 (hebra
ADN polimerasa III conductora o lder).

SSBP

Primer (cebador)
Primasa (ARN-polimerasa)

SSBP

ADN polimerasa III

Sintetiza el primer
Sintetiza los fragmentos de
(10 nucletidos de ARN) cebador
Okazaky (hebra retardada).
 ENZIMAS IMPLICADAS EN LA HEBRA RETARDADA

ARN-polimerasa (primasa)
Retira el primer y aade
nucltidos de ADN en su lugar
Primer

Primer

ARN-polimerasa (primasa)

Actividad
exonucleasa ADN-polimerasa III

Une los dif. fragmentos

de Okazaky sintetizados

ADN-ligasa

ADN-polimerasa I
 PROCESO DE ELONGACIN

1 La primasa sintetiza un cebador en cada 2 Las ADN polimerasa comienzan la sntesis

hebra de la burbuja de replicacin. de la hebra conductora por el extremo 3 de
cada cebador.
Cebador

Primasas

Cebador

3 La primasa sintetiza un nuevo cebador 4 La ADN polimerasa comienza a sintetizar un

sobre cada hebra retardada. fragmento de ADN a partir del nuevo cebador.
Hebra retardada

Hebra retardada

5 Cuando la ADN polimerasa llega al cebador 6 La ligasa une los fragmentos de ADN.
de ARN, lo elimina y lo reemplaza por ADN.
Nuevo cebador

Ligasas

Nuevo cebador
 PROCESO DE ELONGACIN

ADN-ligasa

ADN-polimerasa I

ADN-polimerasa III

ARN-polimerasa (primasa)
Hebra retardada

Fragmento
Primer
de Okazaki

Hebra conductora o lder

ADN-polimerasa III
Primer o cebador
REPLICACIN EN LAS BACTERIAS
REPLICACIN EN LAS BACTERIAS
Escherichia coli replicando su ADN
 CORRECCIN DE ERRORES

La replicacin del ADN por las ADN polimerasas debe ser exacta,
rpida y fiel, pues de ello depende que la informacin gentica se
transmita con fidelidad de generacin en generacin.

Como los errores en la sntesis del ADN son inevitables, en el complejo

multienzimtico del replisoma existen enzimas correctoras vigilando lo que
hace la ADN polimerasa III, detectando y corrigiendo las secuencias errneas,
mediante la correccin de pruebas y la correccin postreplicativa.
CORRECCIN DE PRUEBAS POR LAS ADN POLIMERASAS I Y III

Las enzimas ADN polimerasas I y III, adems de polimerizar (funcin nucleasa),

son autocorrectoras: miran hacia atrs antes de incorporar el nucletido
siguiente y, si detectan un error en el apareamiento, eliminan el ltimo
nucletido (funcin exonucleasa) e introduce el nucletido adecuado.

En E. Coli, las polimerasas I y III cometen un error de apareamiento por cada

106 nucltidos adicionados. Su actividad autocorrectora reduce el error de
apareamiento a uno por cada 108 nucletidos adicionados.
 CORRECCIN POSTREPLICATIVA DEL MAL APAREAMIENTO

Esta correccin se realiza por enzimas

correctoras del replisoma, las cuales
detectan el nucletido mal apareado
porque, mientras la hebra molde (parental)
tienen metiladas las adeninas de las
secuencias GATC, existe un lapso de tiempo
en el que las adeninas de las secuencias
GATC de la hebra rplica estn an sin
metilar. En este intervalo las enzimas
correctoras descubren los posibles errores.

Una enzima endonucleasa corta el

segmento en el lugar donde el nucletido
mal apareado va a ser eliminado.
 CORRECCIN POSTREPLICATIVA DEL MAL APAREAMIENTO

Por ltimo, la secuencia correcta se

regenera cuando la ADN polimerasa I
rellena el hueco y la ADN ligasa vuelve a
unir los segmentos de la hebra rplica.

La correccin postreplicativa
aumenta por 100 la exactitud de la
rplica, cometindose un error por
cada 1010 pb.
 REPLICACIN

DEL ADN EN EUCARIOTAS

 LA REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Es similar a las bacterias: es semiconservativa y bidirecional.

En el ADN de las eucariotas se abren varios ojos de replicacin

simultneamente, llamados replicones.
LA REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS
LA REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Las flechas indican los extremos de los ojos de replicacin

 LA REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

Es muy parecida a las bacterias, salvo en algunas diferencias:

La replicacin se inicia simultneamente en varios puntos del cromosoma llamados replicones.

Existen cinco tipos de ADN polimerasas (, , , , y ).

Las histonas se duplican durante la replicacin. Junto al ADN formarn el nucleosoma. Los
nuevos nucleosomas se incorporan a la hebra retardada y los viejos en la conductora.

Telmero
Cuando se elimina el ltimo 3
cebador, la ADN polimerasa 5 3 5
no podr rellenar el hueco, al 5
5
no poder sintetizar en
Cebador ltimo cebador
direccin 3 - 5.
3
5
Debido a esto el extremo del
cromosoma (telmero) se va
5
acortando cada vez que la La ADN polimerasa polimeriza Eliminacin de
clula se divide. Esto se desde el extremo 3 libre cebadores
asocia al envejecimiento y
muerte celular. 3
Hebra ms corta
5

5
 DUPLICACIN DE LAS HISTONAS Y SU REPARTO

El ADN se asocia a las histonas formando los nucleosomas.

La replicacin es ms lenta que en las procariotas.

La hebra conductora o lder

se asocia a las nucleosomas Los nuevos nucleosomas
antiguos. se incorporan a la hebra
retardada.
 TELMEROS: ENVEJECIMIENTO Y MUERTE CELULAR

Los cromosomas eucariticos son lineales y presentan en sus

extremos los telmeros, constituidos por secuencias repetitivas.
Cuando se replica el ADN lineal, los extremos 5de los telmeros
no pueden ser replicados.

Cadena lder: sntesis contnua

Cadena retardada: sntesis discontinua

Cuando se elimina el ARN cebador del extremo 5de cada una de las hebras
recin sintetizadas, el hueco que queda no lo pueden rellenar las ADN
polimerasas, porque no encuentran extremos hidroxilos 3 libres sobre los que
adicionar nuevos nucletidos.
DUPLICACIN A NIVEL DE LOS TELMEROS
 EL ACORTAMIENTO DE LOS TELMEROS Y LA APOPTOSIS

Al no poder replicar los extremos, el telmero se va acortando en

cada ciclo de replicacin durante la fase S del ciclo celular. Ello se
relaciona con el envejecimiento y la apoptosis o muerte celular
programada.

No se puede cebar.
Se acorta en cada
replicacin.
No se puede cebar.
Se acorta en cada
replicacin.

Cuando se produce la prdida de una cantidad importante de material gentico

de los telmeros, quedan al descubiertos los extremos pegajosos de los
cromosomas. stos se unen unos con otros y se altera el reparto equitativo de
los cromosomas durante la mitosis. Entonces la clula activa el mecanismo de
apoptosis. As, la clula sabe cuntas divisiones celulares son an posibles.
EL ACORTAMIENTO DE LOS TELMEROS Y LA APOPTOSIS

Clula normal
EL ACORTAMIENTO DE LOS TELMEROS Y LA APOPTOSIS
 LA TELOMERASA: CLAVE DE LA INMORTALIDAD

La telomerasa neutraliza el acortamiento de los telmeros de

algunas clulas, como la clulas madre y las cancergenas,
convirtindolas en inmortales.

La telomerasa es una ribonucleoprotena que acta como

transcriptasa inversa. Contiene una hebra de ARN que acta como
molde para la sntesis de la secuencia telmerica de ADN, que se le
aade a los extremos 3de cada cromosoma, evitando su
acortamiento en cada replicacin.
 LA TELOMERASA: CLAVE DE LA INMORTALIDAD

TERT = telomerasa
Djalo ya, esto
se acab