Las propionibacterias son, en general, bacterias

grampositivas, no motrices, positivas a la catalasa, no

polimerizantes, en forma de varilla, anaerbicas a
aerotolerantes, capaces de fermentar diferentes
carbohidratos y ciertos polialcoholes para producir
principalmente cido propinico, cido actico y
dixido de carbono.
El cido propinico es el principal producto de la va
del cido dicarboxlico, tambin conocida como ruta
del succinato. Este cido orgnico y sus sales son
capaces de inhibir los microorganismos [1 - 5]. La
opinin predominante es que el cido propinico
perturba el gradiente de pH a travs de la membrana
celular, una fuerza motriz esencial para anaerobios
facultativos para transportar nutrientes y metabolitos.
Debido a la naturaleza hidrfoba del cido propinico y
de la membrana celular, el cido no disociado puede
difundirse a travs de la membrana bacteriana en el
citoplasma y luego disociarse en un anin de protn y
propionato dentro de la clula. As, se crea una
"filtracin" interna de protones. Con el fin de mantener
el gradiente de protones funcionales a travs de la
membrana, extra adenosina trifosfato (ATP) debe ser
consumido por H + -ATPasa para expulsar el protn,
disminuyendo el ATP disponible para el metabolismo
celular [6, 7].
Por lo tanto, el crecimiento de hongos, levaduras y
algunas bacterias se inhibe.
cido propinico se utiliza en el pollo y otros piensos
para prevenir la infeccin de moho [8]. Tambin se
utiliza para la fabricacin de plsticos a base de
celulosa, herbicidas y perfumes. Las sales de calcio,
sodio y potasio del cido propinico se utilizan como
conservantes de alimentos, generalmente reconocidos
como aditivos alimentarios inocuos. En la actualidad,
ha habido un creciente inters en la produccin de
cido propinico por procesos fermentativos [9 - 11].
En los ltimos aos, las preocupaciones sobre la oferta
incierta y el agotamiento eventual de las reservas
mundiales de petrleo han fomentado investigaciones
sobre formas alternativas de producir derivados
petroqumicos. Un ejemplo es el cido propinico, que
actualmente se produce comercialmente mediante la
oxidacin de propano en fase lquida o
propionaldehdo [4, 12, 13]. Si se obtuvieran buenos
rendimientos de cido propinico mediante la
fermentacin de desechos industriales de bajo costo o
de fuentes renovables, la produccin biolgica podra
ser econmicamente competitiva, adems de reducir
los residuos industriales contaminantes [14].
Existen pocos informes y datos sobre la produccin de
cido propinico por fermentacin con glicerol, aunque
el glicerol se ha convertido en una fuente barata de
carbono porque los nuevos procesos de produccin de
combustible a partir de aceites vegetales proporcionan
una gran cantidad de glicerol como subproducto. ].
El objetivo de la presente investigacin fue estudiar el
uso de glicerol por Propionibacterium acidipropionici
comparndolo con otras fuentes de carbono en lote
Fermentacin y, adems, evaluar la capacidad de
produccin de cido propinico a dos temperaturas
diferentes.
MATERIALES Y MTODOS

Microorganismos y medios
El P. acidipropionici ATCC 4965 utilizado en este
estudio se cultiv en una base sinttica
Medio que hace uso de lactosa, glicerol o melaza de
caa de azcar como fuentes de carbono.
El cultivo se cultiv en agar profundo a 30C y se
almacen a 4C. El medio de conservacin contenido
por litro de agua desionizada: 1 g de KH2PO4, 2 g
(NH4) 2HPO4, 5 mg de FeSO4 7H2O, 10 mg de
MgSO4 7H2O, 2,5 mg de MnSO4 H2O, 10 mg de
CaCl2 6H2O, 10 mg de CoCl2.6H2O , 5,0 g de extracto
de levadura, 5,0 g de lactato de sodio y 7,0 g de agar y
el pH se ajust a 6,8 antes de la autoclavadura.

La precultiva y los medios de inculo tenan la misma

composicin que el medio de conservacin sin agar.
Adems, se aument la concentracin de lactato sdico
a 20 g l-1, mientras que la concentracin de extracto de
levadura aument a 10 g l-1.
El medio de fermentacin para la fermentacin por
lotes tena 20 gliceroles gl-1 [medio basal con glicerol
(BMG)], 30 gl-1 lactato sdico [medio basal con lactato
(BML)] o melaza 40 gl-1 [medio basal con caa de
azcar Melaza (BMSM)] como fuente de carbono. El
medio basal y las fuentes de carbono se prepararon
independientemente. El pH de estas dos soluciones se
ajust a 6,8 - 7,0 antes del autoclave. Despus de
esterilizacin por calor a 121 C y 1 bar durante 15 min,
se mezclaron aspticamente en los matraces de
fermentacin.

Preparacin del Inculo

Una colonia aislada de placa de agar profunda se

transfiri a 2 ml de medio de precultivo y se incub a
30 C durante 48 h. Se transfiri una parte de este
cultivo (0,4 ml) a un matraz de tapn roscado de 40 ml
que contena 40 ml de caldo de medio de inculo. P.
acidipropionici se cultiv sin agitacin durante 24-36 h
a 30 C en caldo de medio de inculo (A660 final =
0,8) y se inocul al 1% (v / v), en 1 l de caldo de
fermentacin en el l Frascos
Fermentaciones por lotes
El modelo de fermentacin discontinua se realiz en
tres medios diferentes, BML, BMG y BMSM, y se
realiz en frascos de 1 l con un volumen final de 1 l con
el fin de reducir la presencia de oxgeno. Las
fermentaciones se llevaron a cabo sin control de pH en
incubacin esttica a dos temperaturas diferentes, 30 y
36C. Los experimentos se realizaron por duplicado, y
los resultados obtenidos son el promedio de estos
ensayos independientes.
Se retiraron muestras de 40 ml al comienzo de la
fermentacin ya intervalos peridicos
Intervalos durante 6 das.

Fuente de carbono y determinacin de cidos orgnicos

Las concentraciones de lactato, glicerol, sacarosa, cido
propinico y cido actico se determinaron mediante
cromatografa lquida de alto rendimiento (Shimadzu
Liquid Chromatograph, detector de ndice de refraccin
RID-10A) usando la columna de exclusin inica
Aminex HPX-87H (Bio-Rad, Hercules, CA, EE.UU.)
operado a 60 C, con H2SO4 5 mM como fase mvil a
un caudal de 0,6 ml / min. Las muestras para anlisis
se diluyeron con agua purificada (miliQ) de acuerdo
con su concentracin y se centrifugaron para eliminar
las clulas, luego se filtraron a travs de filtros de
tamao de poro de 0,22 \ mu m (Millipore) y se
almacenaron a -20C antes del anlisis. Un
Chromatopac de Shimadzu (modelo CR6A)
Se utiliz para analizar los datos y representar los
cromatogramas. La concentracin del producto
Se calcul comparando las reas de los picos con las de
las normas externas. La concentracin de cido
propinico se duplic ( 2), para una visualizacin
clara.
Biomasa y determinacin del pH El pH de la muestra
de la porcin de 40 ml se midi en un pHmeter de
microprocesador HANNA HI9321, que se calibr con
dos puntos estndar antes de las medidas.
La densidad ptica (OD) de las clulas se midi a 660
nm en un Shimadzu UV-1601
Espectrofotmetro. Se traz una curva estndar entre
el peso seco de la clula y la absorbancia y se us para
determinar el peso celular en las muestras de su
absorbancia. Las muestras se diluyeron con agua
destilada para que OD estuviera entre 0,2 - 0,8.

Resultados
Fermentacin por lotes utilizando glicerol como fuente
de carbono
Con el fin de determinar los parmetros de
rendimiento y productividad para evaluar el cido
propinico
Fermentacin, los experimentos se llevaron a cabo con
diferentes fuentes de carbono a
Diferentes temperaturas utilizando un modelo de lotes
fermentativo.
Las figuras 1a yb muestran un patrn de fermentacin
tpico usando BMG a 30 y 36 C,
respectivamente. La fermentacin a 30 C acaba de
consumir la mitad del sustrato, y se produjeron 6,77 g
l-1 de cido propinico sin ninguna formacin de cido
actico. La produccin de biomasa slo alcanz 2,42 g
l-1. El crecimiento celular y el consumo de glicerol
alcanzaron la meseta despus de 70 h, y se observ que
la produccin de cido propinico continuaba. La
variacin del pH fue muy alta y rpida, es decir, el pH
cambi 2,5 puntos en menos de 40 h, y alcanz una
fase de meseta alrededor de 4,4.
Indicadores cido-base[editar]
Artculo principal: Indicador pH

Indicador11 Zona de viraje Color 1 Color 2

Rojo de cresol (1) 0.2-1.8 Rojo Amarillo

Azul de timol (1) 1,2-2,8 Rojo Amarillo

Rojo congo 3,0-5,2 Azul-violeta Rojo

Naranja de metilo 3,1-4,4 Rojo Amarillo-anaranjado

Azul de bromocresol 3,8-5,4 Celeste Verde

Verde de bromocresol 3,8-5,4 Amarillo Azul-verdoso

Rojo de metilo 4,2-6,2 Rojo Amarillo

Tornasol 5,0-8,0 Rojo Azul

Prpura de bromocresol 5,2-6,8 Amarillo Prpura

Azul de bromotimol 6,0-7,6 Amarillo Azul

Rojo neutro 6,8-8,4 Rojo Amarillo

Rojo de cresol (2) 7.1-8.8 Amarillo Prpura

Azul de timol (2) 8,0-9,6 Amarillo Azul

Fenolftalena 8,2-10,0 Incoloro Magenta

Timolftalena 9.3-10.5 Incoloro Azul

Carmn de ndigo 11,6-14,0 Azul Amarillo