Manual Abc1

Programa Educativo:
Qumico Farmacutico Bilogo
MANUAL DE PRCTICAS
LABORATORIO DE
ANLISIS BIOQUMICOS
CLNICOS 1
Compilador:
M. en C. Mara Guadalupe Maldonado Velzquez
M. en C. Baldemar Ak Canch
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CAMPECHE
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS

PROGRAMA EDUCATIVO: QUMICO FARMACUTICO BILOGO
Manual de prcticas
Laboratorio de
Anlisis Bioqumicos
Clnico 1
COMPILADOR:
M. en C. Mara Guadalupe Maldonado Velzquez
M. en C. Baldemar Ak Canch
REVISIN: 01/2014
CAMPECHE, CAMP. MARZO 2014

DIRECTORIO
Lic. Adriana Ortz Lanz

Rectora
Lic. Gerardo Montero Prez

Secretario General
Mtra. Mara Guadalupe Maldonado Velzquez

Directora de la Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas
Q.F.B. Geovani Araceli Salinas Balderrabano

Coordinador de la Licenciatura en Qumico Farmacutico
Bilogo
M. en C. Patricia Margarita Garma Quen

Presidente de la Academia de Qumico Farmacutico Bilogo
PRESENTACIN
Ciertos compuestos orgnicos y otros inorgnicos forman parte de la vida animal y

vegetal. Muchos de estos compuestos son fundamentales para los procesos
vitales.
El estudio de los compuestos que intervienen en los procesos biolgicos y los
cambios que sufren durante los procesos vitales se denominan Bioqumica.
Como la teora y la practica se complementan mutuamente, este hecho propicia
que los conocimientos as adquiridos sean mas objetivos y comprensibles.
Este Manual comprende las prcticas que servirn de apoyo al Curso de Anlisis
Bioqumicos Clnicos I que se imparte en el Sexto semestre de la Carrera de
Qumico Farmacutico Bilogo.
El conocimiento de la bioqumica es importante para la comprensin,
conservacin de la salud y para entender y tratar de manera eficaz las
enfermedades.
Se abarcan pruebas como glucosa, urea, creatinina, cido rico, perfil de lpidos y
lipoprotenas, protenas, pigmentos biliares, examen general de orina y otros, los
cuales permiten evaluar la capacidad metablica del organismo con relacin a
estos compuestos.
El valor obtenido por un laboratorio despus de determinar la concentracin o la
cantidad de una sustancia en una muestra representa los mejor resultados
obtenibles con el mtodo, reactivos, instrumentos, personal tcnico y profesional
que intervienen en la obtencin y procesamiento del material.
El diagnstico es justamente un amplio campo de actividad que el Qumico debe
comprender en esta poca de alta tecnologa. Las pruebas de laboratorio son
herramientas, por si mismas carecen de utilidad, pero en conjunto con un
antecedente pertinente y un examen fsico, pueden confirmar un diagnostico o
proporcionar informacin valiosa del estado del paciente y su respuesta al
tratamiento.
Tambin se incluye un apartado de medidas de seguridad en los Laboratorios de
Docencia, que contribuyen al mejor desempeo de los estudiantes en la prctica
diaria.
UNIDAD DE APRENDIZAJE: ANLISIS BIOQUIMICOS CLINICOS 1
COMPETENCIA DE LA Realizar los diferentes anlisis bioqumicos-clnicos para

UNIDAD DE contribuir al diagnstico clnico, acorde a la Ley General de
APRENDIZAJE Salud y Normatividad vigente.
1. Realizar los procesos de obtencin, manejo y

almacenamiento de muestras biolgicas, para su
posterior anlisis bioqumicos usando la
metodologa adecuada que garantice la calidad
analtica.
SUB-COMPETENCIAS 2. Aplicar mtodos y tcnicas analticas con calidad,

para el anlisis bioqumico clnico a muestras
obtenidas de pacientes para elaborar un informe de
resultados que apoyen el diagnstico clnico.
3. Interpreta los resultados de las pruebas analticas,

correlacionndola con el cuadro clnico, para
apoyar el diagnstico considerando los estndares
de calidad y principios ticos de la profesin
CONTENIDO
SUBCOMPETENCIA 1........................................................................................................................... 1
PRCTICA 1. EXTRACCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS.................................................................... 2
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 2. QUMICA SANGUNEA DE 3 COMPONENTES ............................................................... 11
PRACTICA 3. DETERMINACION DE ACIDO URICO EN SANGRE .......................................................... 80
PRACTICA 4 DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA .................................................
PRCTICA 5 . DETERMINACION DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA .............................................. 111
SUBCOMPETENCIA 3
PRACTICA 6. DETERMINACION DE ELECTROLITOS(SODIO, POTASIO Y CLORO)
PRACTICA 7 DETERMINACION DE CALCIO
PTACTICA 8. DETERMINACION DE MAGNESIO
PRACTICA 9. PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DE LA ORINA
PRACTICA 10. PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA EL EXAMEN GENERAL DE ORINA
PRACTICA 11. OBSERVACION AL MICROSCOPIOMDEL SEDIMENTO URINARIO
PRACTICA 1. EXAMEN GENERAL DE ORINA
PRCTICA 13. DEPURACIN DE CREATININA EN ORINA ................................................................ 118
ANEXO I. INSTRUMENTOS DE EVALUACIN ................................................................. 124
ANEXO II. LINEAMIENTOS GENERALES EN MATERIA DE SEGURIDAD E HIGIENE A SEGUIR EN LOS
LABORATORIOS ............................................................................................................................... 128
SUBCOMPETENCIA 1
PRCTICA 1. EXTRACCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS
1.1 GENERALIDADES
La sangre consta de una parte liquida, el plasma, en donde estn en suspensin

los glbulos blancos, los glbulos rojos y las plaquetas.
Su anlisis abarca una extraordinaria extensin y las investigaciones pueden
efectuarse sobre la sangre total, en el plasma, en el suero o en los elementos
morfolgicos de la misma.
El tipo de estudio, el estado y la edad del paciente son los factores que rigen la
obtencin de una muestra adecuada de sangre, el sitio de toma y la tcnica
seguida. En la mayor parte de todos los anlisis se necesita una muestra de
sangre venosa; la puncin en una vena debe hacerse con gran cuidado para evitar
hemlisis o hemoconcentracin de la muestra, que se forme un hematoma y que
las venas sufran lesin.
Se necesita elegir un sitio para la puncin venosa y el ms usado es el hueco del
codo; otros sitios son la mueca, el dorso de la mano o el pie.
Cuando la muestra se extrae directamente con el enfermo acostado, se le pedir
que este sobre su dorso con su cabeza un poco elevada y sus brazos reposando
sobre los lados del cuerpo; en sujetos ambulatorios se le pedir que se siente en
una silla y apoye su brazo firmemente en el brazo de una silla o en una mesa.
Cuando se use un aparato vacutainer se unir la aguja con el dispositivo de
sostn antes de aplicar el torniquete. Se colocara una banda de caucho suave por
arriba del sitio de puncin para concentrar la sangre en las venas y aumentar la
presin en ellas de tal manera que se vuelvan ms prominentes y tengan mayor
volumen.
1
Se pedir al individuo que flexione varias veces los dedos de la mano, para
agrandar el calibre de las venas. Se escoger una vena por palpitacin e
inspeccin. Con un movimiento circular desde el centro hacia la periferia se
limpiara el sitio de puncin con alcohol o una solucin de yodo
polivinilpirrolidona y lo secara con una torunda de gasa.
Conviene estirar la piel sobre la vena al presionar exactamente por debajo del
sitio de puncin con el pulgar, de tal forma que quede inmvil. El operador
sostendr la jeringa o el tubo con el bisel de la aguja hacia arriba y el cuerpo de la
aguja en sentido paralelo al trayecto de la vena, con un ngulo de 15 grados
respecto al brazo. Penetrar en la vena con una sola puncin directa de la piel y
la pared del vaso. Se extraer la sangre lentamente con un movimiento de
traccin en el embolo, para producir aspiracin uniforme hasta obtener el
volumen muestras mltiples, se repetir el mtodo con otros tubos mas. Una vez
obtenido la muestra se pedir al paciente que abra el puo tan pronto se ha
reunido el volumen deseado. Se quitar el torniquete y se colocara una torunda
sobre el sitio de puncin para retirar con lentitud y suavidad la aguja. Se le pedir
al paciente que sostenga unos minutos la gasa hasta que ceda la hemorragia para
evitar posibles hematomas.
1.2 OBJETIVO
El alumno realizar correctamente la extraccin de muestras sanguneas capilar y

venosa, aplicando principios ticos.
2
1.3.MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
1 Gradilla
1 Torundas de alcohol
1 Tubos de ensayo de 13x100
2 Lancetas
1 Tapones para tubo
2 Agujas
1 Jeringa desechable
2 Tubo vacutainer
2 Anticoagulante EDTA
1.4.PROCEDIMIENTO
Toma de sangre capilar
Mediante ella se obtendr sangre sin modificar.

El lugar de eleccin es el lbulo de la oreja, el taln o la yema del dedo.
Se limpiara perfectamente con alcohol la zona elegida.
Se deja secar y se realiza la puncin con la lanceta desechable.
La sangre debe fluir libremente, se desecha la primera gota, secndola con una
torunda de alcohol y se hace la toma.
Esta sangre se utiliza para determinar recuento y formula leucocitaria,
hemoglobina, grupo sanguneo, recuentos de plaquetas.
3
Figura 1. Toma de sangre capilar
Figura 2. Toma de sangre de la planta del pie
4
Obtencin de sangre venosa por vacutainer
Escoja un sitio para puncin, por lo regular las venas del hueco del codo.
Con un movimiento circular, limpie la zona con alcohol.
Adapte la aguja vacutainer en su caperuza.
Coloque un torniquete de caucho suave por arriba del sitio de puncin venosa.
Quite el casquete de la aguja y con el bisel hacia arriba introduzca la aguja en la
vena con un ngulo de 15 grados. Introduzca suavemente el tubo vacutainer en
el manguito de la aguja, de tal forma que la sangre penetre en el tubo. Trate de
tomar con firmeza la aguja, para evitar que perfore la vena del paciente
Cuando se llene el tubo, quite el torniquete y retire el tubo vacutainer del
extremo de la aguja. Extraiga la aguja con una torunda seca para aplicar presin
directa al sitio de puncin.
Figura 3. Obtencin de sangre venosa por vacutainer
5
Puncin venosa con jeringa
Haga que el paciente se siente de manera que quede colocado paralelamente a

la mesa de trabajo donde se har la extraccin de sangre.
Ponga el brazo del paciente sobre la mesa de trabajo apoyndolo en un pequeo
cojn dispuesto bajo el codo, con la palma de la mano vuelta hacia arriba.
Puntos para la extraccin de sangre: el sitio ms adecuado es la vena que se
encuentra en el pliegue anterior del codo, en el punto donde sea ms gruesa y
fcilmente visible, aprovechando, de preferencia, una de las ramas que forman
una E inmediatamente arriba del lugar donde se juntan.
Figura 4. Posicion de la vena para la toma de muestra
NO PUNCIONAR EN:
1) Piel lesionada, inflamada o que presenta hematomas o cicatrices.
6
2) Venas tortuosas.
3) El brazo del mismo lado dnde se haya efectuado una mastectoma.
4) Un brazo que lleva una va venosa perifrica.
5) Dnde hayamos pinchado ya sin xito. Prueba el otro lado.
Monte la aguja en la jeringa, sin tocar ms que la base de la aguja. Pruebe aguja y
jeringa para cerciorarse de que no est obstruida y la jeringa es hermtica.
Tpela de nuevo.
Aplique el torniquete
Con la mano derecha coloque firmemente el torniquete alrededor del brazo y
sujete los extremos.
Con la mano izquierda tire de un extremo, cruzndolo.
A continuacin introduzca este extremo por debajo de la parte principal del
torniquete.
El torniquete se deber ajustar solo lo suficiente para aminorar la corriente
sangunea y dilatar las venas, sin apretarlo tanto que reduzca el paso por las
arterias.
Pida al paciente que abra y cierre la mano varias veces, para favorecer la
dilatacin de las venas.
El torniquete no debe permanecer ms de 1 minuto ya que provocara
hemoconcentracin.
Con el dedo ndice de la mano izquierda palpe la vena e introduzca la aguja.
Desinfecte la piel con una pieza de algodn embebida en etanol.
Tome la jeringa con la mano derecha, colocando la yema del dedo ndice sobre la
base de la aguja.
Nunca se intente puncionar una vena por un lado
Nunca se introduzca la aguja con el bisel hacia abajo.
Se sentir que la aguja atraviesa la piel que es resistente
Inmediatamente despus, la pared de la venas, que es menos resistente.
Haga entrar la aguja a lo largo de la vena 1 1.5 cm
7
Con la mano izquierda tire hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente.
Deber entrar sangre en la jeringa.
Siga tirando el mbolo hacia atrs hasta llenar la jeringa con la cantidad de
sangre que necesite.
Retire el torniquete tirando del extremo doblado.
Aplique una pieza seca de algodn sobre la parte donde se encuentra oculta la
punta de la aguja.
Saque la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn.
Pida al paciente que presione firmemente la pieza de algodn durante 3 minutos,
con el brazo extendido.
En la actualidad no se recomienda que se flexione el brazo con la pieza de
algodn (a causa del riesgo de que se forme un hematoma).
Vace sin tardanza alguna y con gran cuidado la sangre en el tubo de ensayo
adecuado.
8
Figura 5. Prioridad de los tubo para la toma de muestra
1.5 CUESTIONARIO
1. Cmo se realiza la extraccin de sangre arterial?

2. Cules serian las variables biolgicas a considerar en la toma de muestra
sanguinea?
9
3. Mencione el equipo bsico de Bioseguridad a emplear en la toma de muestra
1.6 TRATAMIENTO Y DISPOSICION DE RESIDUOS
Los materiales residuales, se depositan en la basura comn.

Los punzocortantes en recipientes hermticos color rojo segn NOM 087
SEMARNAT SSA
Figura 6. Diagrama ecolgico: Tratamiento de materiales punzocortantes.
1.7 EVALUACIN
Ver Anexo I Instrumentos de evaluacin.
1.8.BIBLIOGRAFA
1.- Argeri Lopardo. 1993.Anlisis de Orina. Fundamentos y Prctica. Mxico.
Editorial mdica Panamericana.
10
2.- Bishop Michael L. 2007. Qumica Clnica principios, procedimientos
y correlaciones. 1 Edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana.
Mxico
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 2. QUMICA SANGUNEA DE 3 COMPONENTES
2.1 GENERALIDADES
La glucosa que es un monosacrido de 6 carbonos, es la fuente principal de

energa del organismo., es transformada, por la glucosa oxidasa (GOD), en cido
glucnico y perxido de hidrgeno, el cual, en presencia de peroxidasa (POD)
oxida el cromgeno (4- aminofenazona/fenol) convirtindolo en un compuesto
de color rojo.
La que esta presente en la sangre es producto de la conversin de carbohidratos
ingeridos, en glucosa y otros azucares sencillos, por actividad enzimtica en el
aparato digestivo de la conversin metablica de substancias diferentes de
carbohidratos, en hgado y riones, y de la degradacin del glicgeno heptico
(forma principal de almacenamiento de la glucosa).
La insulina y el guagn son los principales reguladores de los niveles de glucosa,
pero otras hormonas tambin influyen en ellos y son de enorme importancia
para el metabolismo normal de carbohidratos.
Los tbulos renales reabsorben en circunstancias normales la glucosa en forma
completa y la devuelven a la sangre, razn por la cual la presencia de este
carbohidrato en la orina (glucosuria) es anormal y suele denotar un estado
patolgico.
En raras ocasiones la presencia transitoria de azcares reductores en la orina
(galactosa, lactosa, y pentosas) reflejan un estado benigno, como exceso en la
alimentacin, tercer trimestral del embarazo o lactancia.
11
La intensidad y prevalencia de la diabetes obliga a estudios sistemticos de
deteccin inicial de glucosa en muestras de orina.
Las cuantificaciones de glucosa sangunea tambin son tiles para evaluar la
funcin de rganos que secretan hormonas y que regulan la glucosa en sangre
(glucemia), para evaluar la absorcin intestinal de glucosa, y estudiar la funcin
del hgado.
Los estudios en realidad miden la capacidad que tiene la insulina, de transformar
los carbohidratos.
Las pruebas ms tiles miden indirectamente la actividad de tal hormona al
cuantificar las concentraciones de glucosa en sangre (glucemia).
Un factor importante en la deteccin y correlacin de nefropatas y en el
diagnstico de algunas enfermedades extrarrenales o sistemticas, es el anlisis
de orina en busca de niveles anormales de protenas, sus metabolitos y
pigmentos.
El plasma contiene ms de 15 compuestos no protenicos nitrogenados,
predominando la urea.
La urea es el principal componente nitrogenado de la orina, es el producto final
del metabolismo proteico.
Los aminocidos absorbidos en las vellosidades intestinales pasan de la vena
porta al hgado, y dado que esta glndula almacena solo cantidades pequeas de
aminocidos que mas tarde son devueltos a la sangre para utilizar en la sntesis
de enzimas, hormonas y protoplasma nuevo, el exceso es transformado en otras
sustancias como glucosa, glucgeno o grasa.
Antes de la conversin sealada, los aminocidos son desaminados, esto es,
pierden sus grupos amino nitrogenado; tales grupos son transformados en
amoniaco. Este ltimo es muy txico especialmente para el cerebro, razn por la
cual debe ser eliminada con la misma rapidez con que se forma. La hepatopata
grave hace que aumente los niveles de amoniaco en sangre y al final ocasiona
coma heptico. En el hgado el amoniaco se combina con bixido de carbono
para formar urea, que es liberada en la sangre y secretada al final de la orina.
12
La urea se forma principalmente en el hgado (de menor cantidad en el rin) a
partir del amoniaco, de ciertos grupos aminos y del CO2, en presencia de ATP,
por medio de una secuencia cclica de reacciones enzimticas llamadas ciclo de
la urea.
El ciclo de la urea consta de una serie sucesiva de reacciones enzimticas por
virtud de los cuales la molcula de la urea es sintetizada a partir del CO2 y NH3.
En el ciclo son utilizados los aminocidos: Ornitina, Citrulina y Arginina, pero el
NH3 y el CO2 no reaccionan directamente con ellos.
Primero, es sintetizado el fosfato de carbamilo (carbamil fosfato) a partir del
CO2 y NH3 por una reaccin compleja que requiere 2 molculas de ATP. El
fosfato de carbamilo se condensa con un grupo amino terminal de la ornitina
para formar un producto intermedio, el cido argininosuccinico, reaccin que
requiere ATP para consumarse.
El cido argininosuccinico, es desdoblado (fragmentado) para producir
arginina y cido fumarico; el cido asprtico transforma uno de sus grupos
amino hasta Citrulina para formar arginina.
Parte de la arginina, puede posteriormente, usarse en la sntesis de las
protenas; mientras otra parte se hidroliza (desdobla) con la enzima arginasa
para dar urea y uno de los materiales iniciales, la ornitina, completndose as el
ciclo de urea.
La urea se hidroliza, en presencia de ureasa, en amonaco y dixido de
carbono. El amonaco producido en esta reaccin se combina con -
cetoglutarato y NADH en presencia de deshidrogenasa de glutamato para
producir glutamato y NAD. La cantidad consumida de NADH, determinada por la
disminucin de la absorbencia en el ultravioleta, es proporcional a la cantidad
de urea de la muestra.
Los riones normalmente excretan dicho producto nitrogenado de
desecho del metabolismo protenico, pero el decremento de la funcin de los
riones hace que estas sustancias, incluidas urea, cido rico y creatinina, se
acumulen en el plasma. En consecuencia, la disfuncin renal hace que
13
disminuyan los niveles de estas sustancias en la orina. Los sntomas de la uremia
incluye letargo, anorexia, nausea y vomito, deterioro mental y confusin,
sacudidas musculares, convulsiones y coma. La anemia es un carcter
prominente en la uremia crnica porque est deprimida la eritropoyesis.
La creatinina srica constituye un ndice ms sensible de lesin renal, porque la
lesin o trastornos de los riones es prcticamente la nica causa de que
incremente la concentracin del metabolito.
La creatinina es un producto terminal no protenico del metabolismo de la
creatina y a semejanza de esta ltima, aparece en suero en cantidades
proporcionales a la masa muscular; a diferencia de la creatina los riones la
excretan fcilmente, con mnima o nula resorcin por tbulos.
La creatina es un componente de importancia en los msculos, cerebro y sangre.
En el msculo se encuentra en forma de reserva adicional de energa y es
sintetizada en el hgado.
El anhdrido de la creatina, la creatinina se forma y excreta en cantidades
constantes por una reaccin irreversible, y constituye el principal producto
terminal de la creatina. Su produccin es proporcional a la masa total del
msculo y no es modificada relativamente por la actividad fsica, dieta o
volumen urinario normales; por lo que es eliminada del plasma
fundamentalmente por filtracin glomerular y excretada en la orina. Su
concentracin es de
1.5 gr/L de orina. No hay recirculacin de la creatinina, razn por la cual el ndice
de depuracin de esta sustancia es relativamente grande y constante, y por esta
causa constituye un ndice eficaz de la funcin renal.
La biognesis de la creatinina se realiza en primera instancia en el rin, donde
intervienen dos aminocidos la glicina y la arginina que por accin de una
transaminidasa reacciona formando glicociamina y ornitina. La glicociamina en
presencia de S-adenosil metionina conduce a la formacin de creatinina y S-
adenosil homocisteina.
14
Las concentraciones de creatinina en orina y plasma deben expresarse en las
mismas unidades (generalmente en mg/100 mL).
La creatinina en solucin alcalina reacciona con el picrato para formar un
compuesto rojo anaranjado (Reaccin de Jaff), color que es medido por la
lectura de dos puntos.
2.2 OBJETIVO
El alumno aprender a realizar las tcnicas empleadas en la cuantificacin de
glucosa, urea y creatinina en sangre, utilzando de manera correcta los equipos
de laboratorio (analizadores), para correlacionar los resultados con el posible
diagnstico clnico.
2.3 MATERIALES, EQUIPOS, Y REACTIVO
1 gradilla
2 tubos de ensaye de
13x100
1 pipeta de 10 mL
2 tubos sin anticoagulante
Casa comercial Eli Tech
Reactivo R Tampn de fosfato pH 7.4. Fenol, Amino-4-antipinina Glucosa oxidasa
Peroxidasa
Estndar D-glucosa
1 picrato
2 hidrxido de sodio
Patrn: creatinina 2 mg/dl
Suero (libre de hemolisis)
15
Equipo de bioqumica clnica BS-120
2.4 PROCEDIMIENTO
Equipo de qumica clnica Bs-120
1. Se prende el equipo con el botn verde ubicado en la parte lateral

izquierda.
2. Se prende el cpu y el monitor. Se oprime enter.
3. Se da doble click en el logo bs-120. Se selecciona ok.
4. Se escribi en usuario: admin y en contrasea:

admin
5. Aparece la leyenda descargue primer segmento cubeta... se abre el

compartimiento del disco de reaccin y se saca la cubeta. Se cierra y se
seleccion ok
6. Aparece la leyenda coloque segm cub limp en...'', luego se abre el

compartimiento del disco de reaccin y se mete la cubeta. Se cierra y se
selecciona ok
7. Aparece la leyenda coloque segm cub limp en..., se selecciona

siguiente
8. Aparece la leyenda coloque detergente en posicin 35... Se selecciona

ok
9. Se espera a que alcance la temperatura de 37

C
10. Se selecciona solicit cc para programar los controles. Se marcan las pruebas.
Se selecciona ok
11. Se selecciona calibrac y se marcan las pruebas a calibrar. Se selecciona ok

12. En estado se selecciona: disco de reaccin para revisar si hay cubetas sin
usar. Luego disco de reactivos para revisar los niveles de los reactivos (como no
haba suficiente se rellenaron y se seleccion inventario). Posteriormente en
Disco de muestra para revisar que esten seleccionados en el disco no. 10 el
calibrador (en s1), control l1 (en s2) o control l2 (en s3).
13. Se selecciona iniciar, se marca el disco no. 10. Y luego ok
16
14. Al terminar el anlisis, se selecciona finalizar. Se revisa si los valores del
Control estn dentro del rango en cc, seleccionar resu cc, control: el l1 o L2 y
actualizar.
15. En mues sol se escribe el nombre del paciente y se marcan las pruebas. Se
selecciona ok
16. Aparece la leyenda se ha finalizado test actual... Se selecciona reemplazar

y se reemplaza cubeta por cubeta. Al terminar, se selecciona finalizar
17. En resultados se revisan los valores de cada paciente
18. Para salir del sistema se selecciona salir, ok.
19. Aparece la leyenda coloque detergente en posicin 35... Se selecciona

ok
20. Aparece la leyenda coloque segm cub limp en... Se hace el cambio de
cubetas, y se selecciona siguiente
21. Se apaga la computadora y el equipo con el botn verde del lado izq.
22. Al obtener los resultados se verifica si estaban dentro de los rangos de los
controles.
PROCEDIMIENTO MANUAL
Longitud de onda: 505 (500-550 nm)

Cubeta: 1 cm de paso de luz
Temperatura: 37 C o temperatura ambiente (no menos de 20C)
TCNICA:
Pipetear en una serie de tubos:
Blanco Patr Muestra
Muestra n 300 L
Estndar 300 L
Reactivo 3 mL 3 mL 3 mL
Cuadro 1. Tecnica de Glucosa
Mezclar y medir a una longitud de onda de 500 nm.
17
Clculo:
A muestra/Apatrn x n (concentracin del estndar).
Valores de Referencia
Suero: 74-106 mg/dL
3.89-5.55 mmol/L
NOTAS:
Un color ligeramente rosceo de la solucin 1 debido al paso del tiempo no
afecta los resultados de la prueba.
Para concentraciones de glucosa mayores de 500 mg/dL (27.8 mmol/L), mezclar
un volumen de la muestra con un volumen igual de solucin fisiolgica, repetir
la valoracin y multiplicar el resultado por 2.
El color de la reaccin se mantiene estable por lo menos 2 horas no se expone
a la luz directa.
Los volmenes de la reaccin sugeridos pueden ser modificados
proporcionalmente sin ningn cambio en los clculos.
PROCEDIMIENTO Urea UV SERAPAK AMES DE BAYER:
Preparacin de la solucin de trabajo:

Solucin 1: Aadir 30 ml del reactivo 1 A a un vial 1 (o llenar hasta la seal).
Agitar hasta su completa disolucin.
Longitud de onda: 340, 334 o 365 nm
Cubeta: 1 cm Temperatura: 30 o 37C
Lectura: frente a vaco
Tcnica:
Preparar un patrn para cada serie de determinaciones.
La solucin 1 se deber atemperar a la temperatura seleccionada antes de
ser usada. Pipetee en las cubetas
Patrn Muestra
18
Solucin 1 1.00 mL 1.00 mL
Patrn 0.02 mL -
Muestra - 0.02 mL
Cuadro 2. Tcnica de urea
Poner inmediatamente en marcha el cronmetro y mezclar. Lea las

absorbencias (A1) del patrn y de la muestra a los 30 segundos. Exactamente
60 segundos despus de la primera lectura repetir esta de nuevo (A2).
Clculos:
A = A1 A2
A muestra/APatron x 80 = mg urea/dL
1 mg de urea corresponde a 0.467 mg de Nitrgeno de urea.
Intervalo de referencia
Suero: 10-50 mg/dL
NOTAS:
El mtodo es lineal hasta por lo menos 300 mg/ dL (50 mmol/L) de urea
para suero/plasma y 150 g/L (2498 mmol/L) para orina: Para concentraciones
altas diluir la muestra mezclando un volumen de muestra con un volumen de
agua destilada, repetir la valoracin y multiplicar el resultado por 2.
Se puede utilizar todos los anticoagulantes excepto fluoruros y el
heparinato de amonio.
Evitar la contaminacin con iones de amonio o amoniaco
Los volmenes de reaccin sugeridos pueden ser proporcionalmente
modificados sin hacer cambios en los clculos.
La creatinina en solucin alcalina reacciona con el picrato para formar un

compuesto rojo anaranjado (Reaccin de Jaff), color que es medido por la
lectura de dos puntos.
19
Preparacin de la solucin de trabajo:
Mezclar un volumen del Reactivo 1 con un volumen del reactivo 2
Longitud de onda 510 nm Cubeta 1 cm de paso de luz Temperatura 30C

Lectura contra aire.
PROCEDIMIENTO SERAPAK AMES DE BAYER
Pipetee:
Patrn Muestra
Sol. Trabajo 2 mL 2 mL
Atemperar a 30C
Muestra -- 0.2 mL
Patrn O.2 mL --
Cuadro 3. Tcnica de Urea
Conecte inmediatamente el cronometro y mezcle, leer las absorbencias (A1)

del patrn y la muestra contra aire a los 20 seg.
Repita las lecturas (A2) exactamente a los 60 segundos despus de la primera
lectura.
Clculos:
A = A1-A2
Am 2 = mg
creatinina/dL Suero / plasma x
Ap 176.8 = mmol de creatinina/L
Am 1 = mg
creatinina/dL Orina x
Ap 8.4 = mmol de creatinina/L
VALORES DE REFERENCIA:
Suero: Varones 0.7-1.2 mg/dL
20
61-106 mol/L
Mujeres 0.5 1.0
mg/dL
44-88 mol/L
NOTAS:
El mtodo es lineal hasta 20 mg/dL de creatinina (1768 mol/l).
Para concentraciones mayores mezclar un volumen de la muestra, repetir el
anlisis y multiplica por 2 el resultado.
La velocidad de reaccin y la absorbencia de los productos de la reaccin
estn ntimamente ligados a la temperatura; por lo tanto, la muestra y el
patrn deben leerse a la misma temperatura exactamente.
El anlisis tambin se puede llevar a cabo a cualquier temperatura entre 20 y
37C, siempre que la solucin y las cubetas estn debidamente
termostatizadas.
Anote la cantidad de glucosa, urea y creatinia cuantificada por estas tcnicas
Elabore un formato de resultados con los requisitpos establecidos en la NOM

166 y NMX15189
Discuta los resultados y elabore el reporte clnico.
2.5 CUESTIONARIO
1. Explica los diferentes tipos de diabetes (tipo I tipo II, gestacional)
2. Indica cules son las complicaciones de la diabetes:
3. Diga en qu consiste la determinacin de hemoglobina glicosilada y

cundo es til su determinacin.
4. Explique la importancia que representa la dieta y el ejercicio para el

diabtico.
21
5. Explique por qu la urea sangunea es una determinacin que se
considera importante para valorar el funcionamiento renal.
6. Menciona en qu casos se eleva y se disminuye la urea sangunea.
7. Explique en qu consiste la dilisis peritoneal y la hemodilisis, diga

cundo es que se usan en la prctica.
8. Indique las patologas o estados fisiolgicos ue cursen con valores elevados y

disminuidos de la creatinina sangunea.
9. Explique las condiciones en que debe presentarse el paciente para la prueba

y Por qu.
10. Explique en qu consiste la depuracin de creatinina en orina de 24 horas y

qu ventajas o desventajas presenta con respecto a la determinacin de
creatinina sangunea.
DIAGRAMA ECOLOGICO GLUCOSA
0.02 ML suero +
1 mL Glucosa oxidasa
22
cido glucnico + Peroxidasa + 4-aminoantipirina
perxido de hidrgeno +
4-aminoantipirina/fenol
(Compuesto color rojo
UREA
0.02 mL suero +
1 ml ureasa Amonio + dixido
de carbono
Amonio + -
cetoglutarato + NADH + Glutamato + NAD
glutamato
deshidrogenasa
CREATININA
0.2 mL suero + 2 mL cido

pcrico + hidrxido de sodio + Compuesto naranja
fosfato disdico
2.7 EVALUACIN
Ver Anexo I: Instrumentos de evaluacin.
2.8 BIBLIOGRAFA
1.- Bishop Michael L. 2007. Qumica Clnica principios, procedimientos y

correlaciones. 1 Edicin. Editorial Mc Graw Hill Interamericana. Mxico
23
.2. ELITech Clinical System GLUCOSA PAP PL
24
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 3. DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SANGRE
3.1 GENERALIDADES
El cido rico es el producto final ms importante del catabolismo de las bases

puricas adenina y guanina, que forman parte de los cidos nucleicos. Por
un proceso de desafinacin, oxidativa, con intervencin de una enzima, la
adenasa, la adenina se transforma en hipoxantina y la guanina en xantina.
Por accin de una nueva enzima la xantinooxidasa, la hipoxantina se transforma

en xantina y esta por ultimo en cido rico.
La oxidacin de las bases puricas a cido rico se produce sobre todo en el

hgado, que es un rgano rico en xantinooxidasa. La excrecin del cido rico se
hace por va renal. Existen 2 fuentes de cido rico: la endgena, por
destruccin de tejidos del propio organismo y la exgena, proveniente de la
alimentacin. La cantidad diaria eliminada oscila entre 600 y 900 mg con un
promedio de 700 mg.
La alimentacin modifica la excrecin, la que puede llegar hasta a 1500 o

2000 mg diarios con una dieta rica en nucleoprotenas.
METABOLISMO DEL CIDO RICO:
El cido rico se forma por la degradacin de las purinas y por sntesis directa a
partir del 5- fosforribosilpirofosfato (5-FRPF y de la glutamina. En el ser
humano el cido rico es excretado en la orina. En otros mamferos el cido
rico es ulteriormente oxidado en alantona, antes de ser excretado. El nivel
sanguneo normal del cido rico en el hombre es aproximadamente de 4
mg/100 ml.
25
No es muy soluble en pH de 7.4 o menos. El aumento en los niveles sricos de
cido rico se debe tpicamente a trastornos del metabolismo de purinas, la
destruccin rpida de los cidos nucleicos y perturbaciones que se caracterizan
por disminucin de la excrecin renal. Ciertas condiciones aumentan la
cantidad de cido rico eliminada, como son las enfermedades con
grandes destrucciones de material protoplsmico del tipo de las
leucemias, al final de procesos infecciosos como la pulmona e inclusive
despus de hacer ejercicios violentos.
La limitada solubilidad del cido rico y de sus sales en los lquidos biolgicos
explica los principales signos patolgicos. Los cristales de urato mono sdico se
depositan en las articulaciones, los tendones, a su alrededor y en los
tbulos o el tejido intersticial del parnquima renal. La existencia de una
reaccin inflamatoria a los depsitos es bsica para que se produzca la crisis
aguda de gota.
Existe un trastorno metablico del cido rico, la gota que se transmite

genticamente, se caracteriza por un aumento de la concentracin del cido
rico total y deposito del mismo a nivel tisular. En los gotosos, el contenido en
cido rico de la sangre se eleva, y se deposita abundantemente en los tejidos.
Los ndulos gotosos estn formados casi exclusivamente por estos depsitos.
La precipitacin del cido rico en las articulaciones hace progresar la
enfermedad.
La gota es una enfermedad caracterizada por ataques recurrentes de artritis,

deposito de uratos en las articulaciones, los riones y otros tejidos, as como por
niveles sanguneos y urinarios elevados de cido rico.
En el tracto urinario debido al bajo pH de la orina el cido rico precipita y

forma clculos.
La hiperuricemia puede estar causada por diversas anomalas genticas o

adquiridas del metabolismo de las purinas, entre los cuales la sntesis excesiva
26
de purina resulta la ms frecuente y la disminucin del aclaramiento renal de
cido rico es el otro factor principal.
27
3.2 OBJETIVO
El alumno ser capaz de realizar la tcnica de manera correcta para la

cuantificacin de cido rico e interpretar los resultados para establecer un
posible diagnstico de gota.
3.3 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
Suero 1Centrfuga
1 Gradilla 1Espectrofotmetro
10
Aplicadores
2 Pipetas Pasteur
2 Pipetas de 1 y 5 ml
1tampon/enzimas/4aminofenazona/3hidroxi-2,4,6
cido triodobenzoico/potasio ferrocianuro
1 A Surfactante
Patrn: cido rico
Longitud de onda 520 nm (490-530 nm)

Cubeta 1 cm de paso de luz
Temperatura 37C Lectura contra blanco
Preparar un patrn y un blanco para cada serie de determinaciones.
La solucin 1 deber atemperarse hasta temperatura ambiente antes de ser

usada.
3.3 PROCEDIMIENTO
28
Pipetee en tubos de ensayo
Blanco Patrn Muestra

Muestra - - 0.5 mL
Patrn - 0.05 -
Solucin 2.00 mL 2.00 mL 2.00 mL
Cuadro 4. Tcnica de Acido rico
Mezcle e incube a 37C durante 5 minutos

Leer la absorbencia de la muestra (A muestra) y del Patrn (A patrn) contra el
blanco.
CLCULO:
A muestra 6 = mg
cido rico/dL Suero / plasma x
A patrn 357 = mmol de cido

rico/L
INTERVALOS DE REFERENCIA
Suero: Varones 3.4-7.0 mg/dL

202-416 mol/L Mujeres 2.4-
5.7 mg/dL
142-339 mol/L
Notas:
El mtodo es lineal hasta, al menos, 30 mg/dL (1785 mol/dL) de cido rico

Despus del tiempo de incubacin recomendado, el color de la reaccin es
estable por lo menos 2 horas.
Para muestras altamente lipmicas o ictricas (ms de 20 mg/dL) o 342
mol/L de bilirrubina), se deber preparar un blanco de muestra siguiendo el
29
procedimiento indicado para la muestra siguiendo el procedimiento indicado
para la muestra pero utilizando el reactivo 1 A en vez de la solucin 1. El valor
de absorbencia obtenido para el blanco de muestra (ledo contra agua
destilada o salina) debe deducirse del valor obtenido para la muestra.
Concentraciones de levodopa por encima de 0.5 mg/dL pueden causar
resultados ligeramente ms bajos.
El ensayo puede ser llevado a cabo a temperatura ambiente, siendo el
tiempo de incubacin de 10 minutos.
Los volmenes recomendados para esta reaccin pueden ser
modificados proporcionalmente sin cambio alguno en el clculo.
Reporte la cantidad de cido rico cuantificada por este mtodo.
3.5 CUESTIONARIO
1. Diga las condiciones en que debe presentarse el paciente al laboratorio para

la determinacin de cido rico sanguneo?
2.- Diga en que consiste la gota y cules son sus complicaciones?
3.- Cul es la dieta que debe seguir un paciente con esta enfermedad. Justifique?
3.7 TRATAMIENTO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS
DIAGRAMA ECOLOGICO
0.5 ml suero + 2 ml
uricasa Alantona + perxido
de hidrgeno
30
Perxido de hidrgeno + peroxidasa +
[N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropilo) n- Compuesto de color
toluidina] (cromgeno) rojo
Figura 7. Diagrama ecolgico: cido rico.
3.7 EVALUACIN
Ver anexo 1: instrumentos de evaluacin.
3.8 BIBLIOGRAFA

.2. ELI.Tech Clinical System URIC ACID MONO SL
31
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 4. DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES Y ALBMINA
4.1 GENERALIDADES
La protena total es una medicin aproximada de la protena srica que puede

reflejar el estado nutricional y la existencia de problemas como una
enfermedad renal, una enfermedad heptica y muchas otras condiciones. Si la
protena total es anormal, se deben realizar ms exmenes para identificar cul
fraccin de la protena y luego cul protena especfica, es anormal.
Las protenas son componentes importantes de todas las clulas y tejidos y
se forman a partir de los aminocidos. Hay muchas clases de protenas en el
cuerpo con muchas funciones diferentes, por ejemplo, enzimas, algunas
hormonas, hemoglobina (transporta el oxgeno), LDL (transporta el colesterol),
fibringeno (coagulacin de la sangre), colgeno (estructura del hueso y el
cartlago) e inmunoglobulinas (anticuerpos).
Las protenas sricas se dividen en albmina y globulinas, es decir: protena
total = albmina + globulina, siendo la albmina la protena de ms alta
concentracin en el suero (el plasma es suero ms fibringeno) y la protena
portadora de muchas molculas pequeas, pero tambin de primordial
importancia para mantener la presin osmtica de la sangre (evitar que los
lquidos se filtren hacia otros tejidos). De otro lado, las globulinas se dividen
aproximadamente en globulinas alfa-1, alfa-2, beta y gamaglobulinas.
32
La albmina es la ms pequea y ms abundante de las protenas del plasma,
constituye aproximadamente ms de la mitad de las protenas totales.
La molcula tiene una simetra que corresponde a la de un elipsoide con un
dimetro de 38 A y una longitud de 150 A. Se sintetiza en el hgado y tiene una
vida media de aproximadamente 4 semanas.
Este examen es de gran utilidad en la determinacin de una enfermedad
heptica o de una enfermedad renal o si no hay una absorcin suficiente de
protena por parte del organismo.
La albmina es la protena de mayor concentracin en el plasma y transporta

muchas molculas pequeas en la sangre (como bilirrubina, calcio,
progesterona y drogas). Es de vital importancia para el mantenimiento de la
presin onctica de la sangre (es decir, evitar la fuga de lquidos a los tejidos).
Esto se debe a que, a diferencia de las molculas pequeas como el sodio y el
cloro, la concentracin de albmina en la sangre es mucho mayor que en los
lquidos extracelulares.
La albmina es una solucin tamponada reacciona con el verde de
bromocresol (BCG) a travs de una reaccin de enlace con el colorante.
Dado que la albmina es sintetizada por el hgado, la disminucin de la albmina
srica puede ser producto de una enfermedad heptica, pero tambin puede
ser el resultado de una enfermedad renal que permite que la albmina se
escape a la orina. La disminucin de la albmina tambin tiene su explicacin
en una desnutricin o en una dieta baja en protenas.
4.2 OBJETIVO
El alumno ser capaz de determinar la concentracin de Protenas Totales y

albmina del suero de un paciente mediante una tcnica colorimtrica,
utilzando de manera correcta los equipos de laboratorio (analizadores), con el
33
propsito de apoyar el diagnstico de una enfermedad renal y /o valorar el
estado nutricional de las personas.
Suero o plasma. 1 Torniquete

5 tubos de ensayo de 13 x 100 1 Almohadilla
2 gradilla para 90 tubos de 13 x 100 Sistema Vacutainer
2 micropipeta de 20 L 1 Espectrofotmetro MBA 2000 Perkin
2 micropipeta de 100 L Elmer
1 pipeta de 5 mL 1 Centrfuga J-600, Marca SOLBAT
1 perilla de seguridad 1 Ba Mara Aquabath Lablin
1 pizeta Reactivo de Biuret
1 torundas de algodn alcoholadas Reactivo CG
4.4 PROCEDIMIENTO
Preparacin de la solucin de trabajo

SOLUCIN 1: Diluir el contenido de una botella 1 con los siguientes
volmenes de agua destilada: Cdigo 6370: 500 mL. Cdigo 6660: 2000 mL
Aadir el contenido de una botella 1A y mezclar suavemente para evitar la
formacin de espuma. Mantener firmemente cerrado.
El reactivo para albmina est listo para ser utilizado.
Procedimiento de protenas totales
34
Muestra - - 0.05 mL
Patrn - 0.05 mL -
Solucin de Trabajo 2.50 mL 2.50 mL 2.50 mL
Cuadro 5. Tcnica de proteinas totales y albmina
Longitud de onda: 546 nm (530 570 nm)
Temperatura: ambiente
Lectura: Contra blanco
Tcnica
Por cada serie de determinaciones se debe preparar un patrn y un blanco. La
solucin 1 se debe atemperar hasta temperatura ambiente antes de ser
utilizada.
Pipetee en los tubos de ensaye
Mezcle y deje reposar a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se lee la
absorbencia, en un espectrofotmetro a 546 nm, de la muestra (A muestra) y
la del patrn (A patrn)
frente al blanco.
Clculos
A muestra x 6 = g. Protena total/dL
A patrn
35
Procedimiento de albmina
Muestra - - 0.02 mL
Patrn - 0.02 mL -
Solucin de Trabajo 3.00 mL 3.00 mL 3.00 mL
Cuadro 6. Tcnica de Albmina.

Longitud de onda: 628 nm (600 650 nm)
Temperatura: ambiente
Lectura: Contra blanco
Tcnica
Por cada serie de determinaciones se debe preparar un patrn y un blanco. La
solucin 1 se debe atemperar hasta temperatura ambiente antes de ser
utilizada.
Se pipetea en tubos de ensayo.
Mezcle y lea al cabo de 1 minuto. Se lee la absorbencia, en un espectrofotmetro
a 546 nm de la muestra (A muestra) y la del patrn (A patrn) frente al blanco.
Clculos
A muestra
x 5 = albumina mg/dL
A patrn
4.5 CUESTIONARIO
36
1. Menciona que funcin desempea las protenas, albmina y globulina el
organismo?
2. Adems de la determinacin de protenas totales, cules otras
determinaciones se realizan en sangre para valorar funcionamiento heptico.
Diga porqu?
3. Defina las inmunoglobulinas y explique por qu, si las inmunoglobulinas
son protenas, no pueden ser utilizadas para valorar funcionamiento heptico
como en las otras pruebas.
PROTEINAS TOTALES
Complejo coloreado
0.05 ml suero + 2.50
mL reactivo de Biuret
ALBUMINA
0.05 ml suero + 3.00

Complejo coloreado
mL verde de
bromocresol
Figura 8.- Diagrama ecolgico: Protena totales y albmina.
4.7.EVALUACIN
Ver anexo I: Instrumentos de evaluacin.
4.8 BIBLIOGRAFA
37
1.- Bishop Michael L. 2007. Qumica Clnica principios,
procedimientos y correlaciones. 1 Edicin. Editorial Mc Graw Hill
Interamericana. Mxico
2. SPINREACT Determincacin cuantitativa de lpidos totales.
SUBCOMPETENCIA 2
PRCTICA 5. DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y

DIRECTA
5.1 GENERALIDADES
El tiempo de vida de los eritrocitos es un promedio de unos 120 das, despus
de los cuales son destruidos en el sistema reticuloendotelial. Los componentes
de la molcula de hemoglobina son metabolizados en forma diversa: el hierro
es conservado en el organismo y reutilizado para la sntesis de nuevas
molculas de hemoglobina y otros compuestos que contienen este elemento. La
globina es metabolizada posteriormente; el grupo hem bajo la accin de la
enzima hemoxigenasa, se convierte en biliverdina, que es a su vez convertida
en rpidamente en bilirrubina por otra enzima, la biliverdina reductasa. La
bilirrubina es liposoluble, se difunde fcilmente a travs de las membranas
celulares y entra a las clulas, donde puede interferir con los procesos
normales de la fosforilacin oxidativa en las mitocondrias. Sin embargo, el
organismo impide la difusin de este pigmento hacia las clulas, a travs de la
unin de la bilirrubina con la albmina de la sangre circulante. La excrecin del
pigmento es posible gracias a su conjugacin con el cido glucurnico, con lo
que se vuelve ms polar, hidrosoluble y capaz de ser excretada por las
vas biliar e intestinal.
38
La bilirrubina tambin se forma a travs de otra va metablica: la lisis
intravascular de los eritrocitos, proceso en el que se libera hemoglobina que
es fijada por la hepatoglobina y posteriormente captada por los hepatocitos.
La membrana de los hepatocitos es sumamente permeable a la bilirrubina. La
conjugacin con el cido glucurnico, y probablemente en menor grado con
otros radicales como los sulfatos, convierte a la bilirrubina libre en
bilirrubina conjugada, la suma de ambas ser la bilirrubina total. La
conjugacin se realiza en el retculo endoplsmico liso y es mediada por la
enzima glucuroniltransferasa.
Los procedimientos para la determinacin srica estn basados en la clsica
reaccin Diazo de Erlich. En sta, cuando una solucin de cido sulfanlico en
cido clorhdrico diluido es combinada con Nitrito de sodio, se forma cido
nitroso. Este cido inestable, el cual debe ser preparado en el momento del
ensayo, reacciona para formar cido sulfanlico diazotizado. Este ltimo se
acopla con la bilirrubina para producir azobilirrubina, la intensidad de color de
este es proporcional a la concentracin de bilirrubina.
Ya que los estndares de bilirrubina sufren una gran degradacin por su
inestabilidad, el mtodo presentado utiliza una solucin acuosa de N-1-
naftilendiamina dihidroclorhdrico como calibrador, de acuerdo con Bilissis y
Speer.
Esta amina aromtica estable pura se acopla con el cido sulfanlico diazotizado
bajo las condiciones de prueba para dar un colorante azo con cualidades
espectrales similares a la azobilirrubina. El calibrador proporcionado ha sido
preparado para obtener un color equivalente al nivel de bilirrubina a 540 nm.
En el suero se determina qumicamente la bilirrubina total y directa y se
calcula la indirecta por diferencia.
Lo normal es una concentracin de bilirrubina total menor de 1.2 mg/dL y la
mayor parte es bilirrubina indirecta.
39
5.2 OBJETIVO
Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de determinar la
concentracin de Bilirrubinas del suero de un paciente mediante una tcnica
colorimtrica, utilzando de manera correcta los equipos de laboratorio
(analizadores), con el propsito de evaluar la funcin del hgado.
5 Tubos de ensaye. 1 Equipo para extraccin

5 Pipetas Pasteur. 1 Espectrofotmetro MBA 2000
2 Pizeta. Perkin Elmer
6 Guantes de ltex. 1Centrfuga J-600, Marca SOLBAT
2 Gradillas metlicas. Agua destilada.
10 Gasa no estril. cido sulfanlico, 32 mmol/L en
2 Pipetas automticas (1000L y cido clorhdrico diluido.
20L Adicionando acelerador y
estabilizador
Oxidante de Bilirrubina: Nitrito de
sodio 20 mmol/L, acuoso. Adicionado
de un estabilidad.
Estndar de Bilirrubina (10 mg/dL): N-
1-naftilendiamina diclorhdrico,
0.346 mmol/L. Adicionado de
estabilizadores. Equivalente a 10
mg/dL de bilirrubina en el mtodo
40
descrito.
5.4 PROCEDIMIENTO
Procedimiento bilirrubina total (STANBIO) CLAVE 0807838074, LABORATORIOS

LICON, S.A.
. Longitud de onda: 540 nm ( 560-580 nm )
Blanco de Calibrador Blanco de Muestra

1,2,3
Reactivo Muestra
1,2,3
. Cubeta: 1 cm de paso de luz

. Temperatura: ambiente (no inferior a 20 o C o 37 o C)
. Lectura frente a un blanco de muestra
. Tiempo de lectura: 4 seg.
. Direccin de la reaccin: incremento
. Tipo de reaccin: Punto final
Preparacin del reactivo de trabajo

Aada una gota (50 L) de Bilirrubina Oxidante a cada mL de reactivo de
Bilirrubina Total. Invierta suavemente de 3 a 4 veces. El calibrador est listo para
su uso.
Estabilidad y almacenamiento del reactivo.
Cuadro 7. Tcnica de bilirrubina
41
Reactivo de 1.0 1.0 1.0 1.0
Bilirrubina
Total
Oxidante 1 1 - 1
(gotas)
Agua destilada 0.05 - - -
Calibrador - 0.05 - -
Muestra - - 0.05 0.05
El reactivo de Bilirrubina Total, el reactivo oxidante y el estndar son estables

cuando se almacenan a temperatura ambiente, hasta la fecha de caducidad
indicada en su respectiva etiqueta. Descartar el oxidante si presenta una
coloracin amarillo oscuro. El reactivo de trabajo es estable por 7 das de 2-8 C
o por 24 horas a 37C.
Tcnica
Pipetee en cubetas o tubos de ensaye marcados como (blanco de reactivo) RB,
Calibrador C, blanco de muestra (MB) y Muestra (M) los volmenes (mL) excepto
el oxidante, el cual es 1 gota, mezclando bien despus de cada adicin.
Incube las cubetas a temperatura ambiente por lo menos 3 minutos.
Ajuste a 0 el Espectrofotmetro a 540 nm con el reactivo.
Lea C y M BM vs BR a 540 nm en menos de 30 min.
CLCULOS
Bilirrubina Total
BT= M BM x 10 BT: Bilirrubina
C Total
C: Calibrador
BM: Blanco de
muestra
M: Muestra
42
LInealidad
El Mtodo es lineal hasta 20 mg/dL
Sensibilidad 0.018 mg/dL por 0.001 unidades de Abs.
Factores que interfieren en los resultados:

La novobiocina incrementa los niveles de bilirrubina
La exposicin de la muestra a la luz solar directa o a los rayos UV puede
hacer que disminuyan los niveles de bilirrubina.
La hemlisis por el manejo demasiado vigoroso de la muestra
puede alterar la cuantificacin de la bilirrubina.
Notas
Utilcense muestras recientes protegidas de la luz roja
La Hemoglobina da lugar a resultados falsamente bajos en este anlisis:
no deben emplearse muestras hemolizadas
Mtodo lineal hasta (5 mg/dl de Bilirrubina Directa).
BILIRRUBINA DIRECTA (SERA PAK DE BAYER)
Longitud de onda: 570 nm (560 580 nm) Cubeta: 1 cm de paso de luz

Temperatura: ambiente (no inferior a 20 C) o 37 o C
Lectura: frente a un blanco de muestra
Tcnica
Pipetee en tubos de ensaye:
43
Blanco de Muestra Muestra
Muestra 0.20 0.20 mL

ml ml
Reactivo 3.00 -
1
Solucin 1 - 3.00 mL
Cuadro 8. Bilirrubina directa
Mzclese y djese en reposo durante 5 minutos exactamente a temperatura

ambiente o durante 2 minutos exactamente a 37 C.
Lase la absorbencia de la muestra (A) frente al blanco de muestra a 570 nm.
VALORES DE REFERENCIA:
Adultos e infantes (mayores de 1 mes) 0.5 mg/dL

CLCULOS
BILIRRUBINA DIRECTA
Abs muestra x 4.5 = mg de bilirrubina / Dl
Suero o plasma colectado con cualquier anticoagulante comn, libre de hemlisis y tomado
en ayunas para evitar muestras lipmicas.
Las muestras a utilizar deben ser recientes y estar protegidas de la luz del sol,
as como de la luz blanca artificial, ya que la bilirrubina es altamente
fotosensible. Se ha reportado que aproximadamente el 50% de la bilirrubina
puede perderse cuando se expone a la luz solar por 1 hora
La muestra es estable de 4 a 7 das a 2-8 o C
El mtodo es lineal hasta 15 mg/dL de bilirrubina directa.
5.5 CUESTIONARIO
44
1. Explique la funcin de las bilirrubinas y la importancia clnica de su
determinacin.
2. Explique por qu el mdico pediatra solicita en algunos casos en los

recin nacidos la determinacin de bilirrubinas.
3. Diga en que consiste una ex-sanguneo transfusin y por qu en

algunos recin nacidos ictricos debe ser practicada.
BILIRRUBINA TOTAL
1.0 ml cido sulfanlico, cido cido sulfanlico

clorhdrico + 1 gota nitrito diazotizado
sdico (oxidante)
cido sulfanlico diazotizado Azobilirrubina

+ dimetilsulfxido + 0.05 mL
suero
BILIRRUBINA DIRECTA
1.0 ml cido sulfanlico, cido

cido sulfanlico
clorhdrico + 1 gota nitrito
diazotizado
sdico (oxidante)
cido sulfanlico
diazotizado + 0.05 mL Azobilirrubina
suero
Figura 9. Diagrama ecolgico: bilirrubina.
5.7 EVALUACIN
45
Ver anexo I: instrumentos de evaluacin.
5.8 BIBLIOGRAFA

.2.ELItech clinical Systems. Determinacin de Bilirrubina Total y Directa
46
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 6. DETERMINACIN DE ELECTROLITOS (SODIO, POTASIO
Y CLORO)
6.1 GENERALIDADES
El Na+, al ser el catin ms abundante (90%) en el compartimiento

extracelular, e ir acompaado obligatoriamente por un nmero igual de aniones
(bsicamente cloro y bicarbonato), los hace estar implicados en el
mantenimiento del equilibrio hdrico a travs de su efecto sobre la osmolaridad
srica, la conduccin de impulsos nerviosos, la regulacin del equilibrio cido-
base, as como de su participacin en las reacciones qumicas celulares.
El rin tiene la importante misin de preservar el volumen extracelular
regulando la excrecin o retencin de sodio por los tbulos renales mediante el
sistema renina- angiotensina, por ejemplo en la deshidratacin, se
intercambia agua desde el compartimiento lquido intersticial hacia el plasma
para compensar la prdida de lquidos. En condiciones normales, la lleva a cabo
an al precio de alterar el balance de otros electrolitos. Por el contrario, el
balance de agua, llevado a cabo por la sed y el control en la liberacin
hipofisiaria de hormona antidiurtica (aldosterona), regula la concentracin de
sodio en los lquidos extracelulares. Esta hormona es estimulada por los iones
K+ y Na+.
Los trastornos del sodio y del agua corporal total estn ntimamente unidos, ya
que cualquier alteracin primaria de alguno de los dos elementos repercute
inmediatamente en el otro.
El sodio se encuentra en algunos alimentos de forma natural en cantidades
relativamente bajas o aadido en forma de sal para su conservacin o tambin
para aumentar su aceptacin: aceitunas, bacon, panceta, jamn serrano, lomo
47
embuchado, pescados salados o ahumados, precocinados, aperitivos salados
(patatas fritas, cortezas, frutos secos, etc.). Por ejemplo, 100 gramos de
patatas en crudo no tienen ms de 10 mg de sodio; sin embargo, la misma
cantidad de patatas fritas contiene ms de 200 mg de Na. La carne de vacuno
tiene unos 60 mg/100 g; cantidad que se incrementa extraordinariamente
cuando se prepara en forma de hamburguesa = 990 mg/100 g. En conjunto
los alimentos pueden aportar hasta el 70% de todo el sodio que comemos.
Pero adems, el sodio procede tambin de la sal que se aade a los
alimentos en el momento de cocinarlos o de la que se aade directamente en la
mesa que, en conjunto, constituye aproximadamente un 25%. Porcentajes
mucho menores proceden del agua que bebemos y de los medicamentos. Por
todo lo anterior, la dieta generalmente aporta ms sal de la que el cuerpo
necesita y una ingesta alta se asocia con hipertensin arterial.
Anteriormente al fotmetro de flama y los electrodos in-selectivos, el mtodo
ms popular para determinar sodio en los fluidos corporales induca su
precipitacin como una sal triple de acetato de zinc uranilo sdica. Esta tcnica
fue introducida por Kolthoff en 1927, con la subsecuente utilizacin del
precipitado en varias formas. Una aproximacin fue la determinacin
colorimtrica del residuo solubilizado, ya sea directamente, como lo report
Albancese y Lien, o por el monitoreo de la disminucin del color del
sobrenadante amarillo despus de la precipitacin, como lo describi Bradbrury.
El mtodo cuantitativo colorimtrico es una adaptacin del ltimo esquema,
en donde el sodio se precipita del sobrenadante libre de protenas como triple
sal. La disminucin resultante de la absorbencia de la mezcla de reactivo de
color-sobrenadante es proporcional al contenido de sodio de la muestra.
El potasio es el principal catin intracelular. Las clulas de los tejidos contienen
150 mmol/L y los glbulos rojos 105 mmol/L, mientras que en el plasma
sanguneo normalmente slo contiene de 3.5 a 5.3 mmol/L.
Los iones potasio en un medio alcalino libre de protenas reaccionan con el
tetrafenilburato de sodio para producir una suspensin turbia finamente dispersa
48
de tetrafenilborato de potasio. La turbidez producida es proporcional a las
concentraciones de potasio.
Este gradiente de concentracin se logra por el transporte activo de iones de
potasio y sodio. La excrecin urinaria vara con la dieta. Normalmente es de 25
120 mmol / da. Este elemento est implicado en la transmisin de impulsos
nerviosos y musculares, y concentraciones anormales de potasio afectan de
manera adversa estos tejidos. Es un activador obligado de muchas enzimas, por
ejemplo, piruvatocinasa y acetil- CoA sintetasa.
Una concentracin baja de potasio en suero, la hipopotasemia, puede tener su
origen en prdidas de lquido gastrointestinal (vmitos diarrea) enfermedades
renales, niveles aumentados de mineralocorticosteroides (especialmente
aldosterona) o la administracin de diurticos. Tambin puede ser producida
por alcalosis, debido a que el K + se excreta por intercambio con H+ en los

tbulos distales y se mueve hacia dentro de las clulas al intercambiarse
por H+. Una concentracin elevada de potasio en el suero, la hiperpotasemia,

puede ser producida por enfermedad renal aguda crnica o por acidosis
tubular renal.
El cloro reacciona directamente con el tiocianato mercrico para liberar iones
tiocianato.
Estas se combinan inmediatamente con iones frricos para formar tiocianato
frrico rojizo. La absorbencia de este compuesto coloreado es estable a medida
de 500nm
El cloruro es el anin inorgnico principal del lquido extracelular. Es importante
para la conservacin del equilibrio cido-bsico aunque no ejerza una accin
amortiguadora.
Cuando el cloruro se pierde como HCl o como NH4Cl, sobreviene alcalosis; por
el contrario, si el cloruro es retenido o ingerido, se manifiesta la acidosis. El
cloruro (con el sodio) interviene en forma significativa en el control de la
osmolaridad de los lquidos corporales.
49
Su interpretacin puede ser elevada y disminuida. La elevada se presenta en
insuficiencia renal (cuando la ingestin de cloro excede a su excrecin), nefrosis,
acidosis tubular renal, hiperparatiroidismo, deshidratacin y sobre tratamiento
con solucin salina. La disminuida es en la enfermedad gastrointestinal
(vomito, diarrea, succin gastrointestinal), insuficiencia renal (con restriccin
de sal), hipertratamiento con diurticos, enfisema, acidosis diabtica,
insuficiencia suprarrenal y alcalosis metablica.
Los mtodos clsicos para la determinacin de Cl han estado basados en la
combinacin de este in con otros como Ag o Hg para formar un componente de
Cl no disociado.
El ms popular para la estimacin de cloro en fluidos corporales desde 1941 ha
sido la titramtrica de Shales; usando soluciones estandarizadas de nitrato de
mercurio y difenilcarbazona como indicador.
El bromuro encontrado en intoxicaciones con bromuro o sedaciones fuertes ser
calculado como cloro, como yoduro, como tiocianato y iones sulfihidrilos.
Residuos de cloro en vidrio a partir de muchas fuentes incluyendo agua corriente
deben ser removidos por lavados con cido ntrico seguidos con otro lavado con
agua destilada.
6.2 OBJETIVO
El alumno ser capaz de cuantificar la cantidad de sodio en suero mediante, mediante

una tcnica colorimtrica, utilzando de manera correcta los equipos de laboratorio
(analizadores), con la finalidad de evaluar el equilibrio cido-bsico del organismo.
Suero plasma heparinizado 1 Espectrofotmetro MBA 2000 Perkin
50
2 Pizeta de 500 mL Elmer
2 Pipeta automtica de 1000 L 1 Centrfuga J-600, Marca SOLBAT
10 Gasas no estriles. 1 Cronometro
2 vaso de precipitado de 50 mL
6 guantes de ltex.
2 Gradilla metlica
1 Termmetro calibrado
2 Agitador de vidrio
4 Pipeta Pasteur con bulbo
6 tubos de ensaye 13 x 100 mm
REACTIVOS. Sodio
Solucin de acetato de uranilo, 5.3 g/dL y acetato de zinc, 15.4 g/dL en solucin
acuosa cido acetilo-etanol.Reactivo precipitante.
Estndar de sodio.
Potasio
Reactivo de Borato de Potasio
Solucin acuosa de tetrafenilborato de sodio, 0.2 mol/L
Reactivo de Hidrxido de Sodio. Hidrxido de sodio acuoso, 2.0 mol/L
Reactivo de TCA Precipitante.
Solucin acuosa de cido tricloroactico (TCA) 0.3 mol/L
Estndar de Potasio (Equivalente a 4.0 mmol/L) Solucin de cloruro de Potasio en
TCA acuoso (0.3 mol/L)
Cloro
Reactivo de color de cloro directo
Estndar de cloro directo
6.4 PROCEDIMIENTO
51
SODIO
Preparacin del sobrenadante libre de protenas.
Se aade 0.5 mL de suero diluido a tubos marcados.
Se aade 0.5 mL del Reactivo precipitante gota a gota a cada tubo con agitacin
vigorosa. Se deja reposar por 5 minutos, despus se centrifuga a alta velocidad
por 5-10 minutos.
Se trabaja con el sobrenadante
Aada a los tubos marcados:
Reactivo blanco Estndar Muestra

Agua destilada 0.5 mL ------ ------
Estndar ------ 0.5 mL ------
Sobrenadante ------ ------ 0.5 mL
Reactivo de color 2.5 mL 2.5 mL 2.5 mL
Cuadro 9. Tcnica de sodio

Se mezclan los tubos y se incuban por 10 minutos a 1-25 C.
Despus se mezclan fuertemente y se centrifugan a alta velocidad por 5 minutos.
Se transfiere el sobrenadante de cada tubo a la celdilla apropiada.
Se lee a 420 nm contra agua.
Se registra la Absorbancia del Reactivo Blanco, Estndar y Muestra en 30 minutos.
CLCULOS Sodio en suero:

Absorbancia del Reactivo Blanco Absorbancia de la muestra x 140
Absorbancia del Reactivo Blanco Absorbancia del estndar
Valor de referencia
Rango normal en suero: 135-155 mmol/L
Linealidad.
Lineal de 0-160 mmol/L
52
Notas:
Evitar la lisis.
Lavar correctamente el material de vidrio con HNO3 10-20%, enjuagarlo
con agua destilada, y evitar su contacto con el polvo.
Preparacin de la solucin de trabajo: Mezcle 1 volumen de borato de potasio
con 1 volumen de Hidrxido de sodio. Djelo reposar por un tiempo mnimo de
15 a 30 minutos antes de utilizarse.
POTASIO
Longitud de onda 380 nm
Temperatura Ambiente
Cubeta 1cm paso de luz
TCNICA
Aada estndar o sobrenadante claro a la mitad de la superficie del reactivo de
trabajo, asegrese que cada celdilla sea mezclada con cuidado antes de proseguir
con la siguiente muestra, de acuerdo al siguiente esquema:
Reactivo
Blanco (RB) Estndar (S) Muestra (U)
Reactivo de 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL

Trabajo
Estndar ----- 0.1 mL -----
Sobrenadante ----- ----- 0.1 mL
Agua Destilada 0.1 mL ----- -----

Cuadro 10. Tcnica dePotasio
Nota: Puede utilizar todos los volmenes al doble si el instrumento que

utiliza requiere cantidades superiores a 1.0 mL.
53
Incube todas las celdillas a T0 ambiente por 5 minutos.
Lea S y U contra RB a 580 nm en un intervalo de 60 minutos.
CLCULOS
Los valores se pueden derivar por la siguiente ecuacin:
Potasio en suero (mmol/L) = Au X 4
As
De acuerdo a lo anterior se calcul las diferencias de las absorbencias obtenidas:
INTERVALO DE REFERENCIA
Rango normal en suero: 3.6 5.5 mmol/L
PROCEDIMIENTO CLORO
Hg +2 + 2(SCN) + 2Cl - HgCl2 + 2(SCN)
Fe +3 + 3(SCN) Fe(SCN)3
Tcnica
Marque una serie de tubos o cubetas limpias como RB (blanco de reactivo), M
(muestra), y S (estndar).
Adicione los siguientes volmenes:
BLANCO STANDAR MUESTRA
1.0 mL 1.0 mL
Reactivo de color
1.0 mL 0.01 mL -----
Estndar de cloro
-----
Muestra ---- ----- 0.01 mL
-
Cuadro 11.- Tcnica Cloro
Mezcle el contenido de cada tubo, el color es estable por lo menos 6 horas.

Lea la absorbencia de M y S contra RB.
CLCULOS
54
Cloro (mEq/l)= AM X 100 AS
VALORES DE REFERENCIA
Suero/plasma= 98-106 mEq/l
6.5 CUESTIONARIO
1. Menciona que funcin que desempean los cloruros en el organismos y

como se relacionan con los dems electrolitos?
2. Diga la importancia clnica de la determinacin de cloruros en suero.
3. Diga porque es importante la determinacin en algunos casos de cloruros en
el sudor de recin nacidos o pacientes peditricos y en que consiste .Explica
4.- En que consiste la fibrosis qustica?

SODIO
0.5 ml suero + 0.5 ml reactivo precipitante Sobrenadante
0.5 ml sobrenadante + 2.5 ml acetato de uranilo,

Complejo color
acetato de zinc, cido acetilo-etanol
sobrenadante
POTASIO
0.5 ml suero + 0.5 ml solucin acuosa de cido Sobrenadante

tricloroactico TCA (reactivo precipitante) libre de protenas
0.1 ml sobrenadante + 1.0 ml solucin acuosa de Suspensin turbia

tetrafenilborato de sodio, hidrxido de sodio acuoso finamente dispersa de
tetrafenilborato de
potasio
CLORO
0.01 mL suero + 1.0 mL tiocianato Cloruro mercrico + tiocianato

55
mercrico
Tiocianato + iones frrico Tiocianato frrico
rojizo
Figura 10.- Diagrama Ecolgico: electrolitos.
6.7 EVALUACIN
Ver anexo 1: Instrumentos de evaluacin.
6.8 BIBLIOGRAFA

56
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 7. DETERMINACIN CALCIO
7.1. GENERALIDADES
El calcio es reabsorbido en los tbulos proximales bajo la influencia de la

Hormona paratiroidea. Su equilibrio depende de su excrecin e ingestin.
Las prdidas orgnicas del calcio se dan en: excrecin urinaria, sudor
y tracto gastrointestinal.
La cantidad de calcio ingerida que es absorbida disminuye conforme el calcio de
la dieta aumenta, as la cantidad de calcio absorbida permanece constante.
El calcio de los alimentos es ingerido o absorbido en el intestino delgado con
ayuda de la vitamina D y regulado por la Hormona Paratiroidea (HPT).
La concentracin de calcio en el lquido extracelular es del 65% de la que se
encuentra en plasma, la diferencia se debe al gran contenido protenico
presente.
El calcio es indispensable para la formacin y conservacin del hueso, el
mantenimiento de un grado normal de excitabilidad y tono muscular y el
funcionamiento adecuado de muchas enzimas, incluyendo las que intervienen
en la coagulacin de la sangre adems participa en la conservacin de la
permeabilidad fisiolgica de las membranas celulares y sus poros. El calcio se
disocia de las protenas en solucin cida, seguido por una reaccin directa con
el orto-cresolftaleina. En un subsecuente medio alcalino el complejo Ca-OCPC
forma un color prpura, el cual puede ser medido espectrofotomtricamente.
57
El calcio puede verse incrementado (hipercalcemia) en
casos de:
Hipervitaminosis (vitamina D)
Metstasis cancerosas de huesos.
Hiperparatiroidismo grave.
Insuficiencia renal aguda y crnica.
Sndrome de Leche y lcali.
Enfermedad de Paget.
La disminucin de los niveles sricos de calcio (Hipocalcemia) puede deberse a:
Enfermedad de Addison.
Alcalosis metablica
Tetania por citrato.
Tetania por oxalato.
Raquitismo.
Osteomalacia.
Hipoparatiroidismo.
Nefritis crnica.
Avitaminosis, especialmente de vitamina D.
7.2 OBJETIVO
Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de cuantificar la cantidad de

ion calcio en muestras sanguneas, utilzando de manera correcta los equipos
de laboratorio (analizadores), con la finalidad de apoyar el diagnstico de
diversos trastornos de equilibrio cido-bsico del organismo.
58
Nota: El material de vidrio empleado debe de estar adecuadamente limpio (HNO3
al 20%).
1 Pizeta de 100 mL con agua destilada 1 Espectrofotmetro
5 Tubos de ensaye de 13 por 100. 1 Centrfuga
2 Gradilla metlica para tubos de 1 Cronmetro
ensaye de 13 por 100.
2 Celdillas de 1 cm de paso de luz.
2 Pipeta automtica de 500 L con
puntillas.
2 Pipeta automtica de 10 L con
puntillas.
1 Bote recolector de RPBI
10 Pares de guantes de ltex
10 Gasas no estriles
1 Papel de estraza
5 Cubre bocas
BLANCO REACTIVO ESTNDAR MUESTRA
7.4 PROCEDIMIENTO
Mtodo colorimtrico cuantitativo de Sarker y Chauhan modificada. Stanbio-

Licon
Longitud de onda: 550 nm.
Temperatura: ambiente. Celda: 1 cm de paso de luz.
Lectura: Contra blanco de reactivo.
59
ESTNDAR - 0.01 mL. -
MUESTRA - - 0.01mL.
REACTIVO COLOR 0.5 mL. 0.5mL. 0.5mL.
REACTIVO BASE 0.5 mL. 0.5mL. 0.5mL.
Cuadro 12. Tcnica Calcio
La cantidad de calcio en la muestra es proporcional al color desarrollado en la

reaccin.
TCNICA
Prepare tubos de ensaye con los siguientes reactivos y volmenes:
Mezcle e incube, por un minuto a temperatura ambiente.
CLCULOS
Mediante la siguiente ecuacin:
Ca (mg/dL) = Absorbancia de la muestra X 10
Absorbancia del estndar
VALOR DE REFERENCIA.
Suero: 9.2 a 11.0 mg/dL
Linealidad
El mtodo es lineal hasta 15 mg/dL, para lecturas por arriba de este valor se
realizar una dilucin y se considerar el valor de esta.
7.5 CUESTIONARIO
60
1.- Menciona qu funcin desempea el calcio en el organismo y como se
relacionan con los otros electrolitos explica?
2.- Diga cual es la importancia clnica de la determinacin de calcio srico en un

paciente?
3.- Explica de que manera influyen los niveles de calcio y fosforo en

enfermedades seos?
0.01 mL suero + solucin

Calcio libre de
cida
protenas
Calcio libre de protenas + Ca-OCPC Complejo

solucin alcalina + orto- color prpura
cresolftaleina
Figura 11. Diagrama Ecolgico: calcio.
7.7 EVALUACIN
7.8 BIBLIOGRAFA
.
61
2.- Graff.. 1987. Anlisis de Orina. Atlas A Color. 1 Reimpresin. Editorial.
Mdica Panamericana.
3.- ngel, M., G. y ngel, R., M. 2000. Interpretacin Clnica de Laboratorio 6.
Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Bogot Colombia
4.- ngel M.; G. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clnica 2. Edicin,2000,
Bogot Colombia. Editorial Mdica Panamericana
5.- G. Ruiz Reyes .A. Ruiz Reyes. Fundamentos de interpretacin Clnica de los
exmenes de laboratorio. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
62
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 8. DETERMINACIN DE MAGNESIO.
8.1 GENERALIDADES
El magnesio es un catin intracelular ms abundante despus del potasio. Es

importante para la funcin neuromuscular, regula el metabolismo intracelular,
activo muchas enzimas esenciales, modifica el metabolismo de cido nucleicos y
protenas.
Por otra parte tambin facilita el transporte de sodio y potasio a travs de la
membrana celular.
Por su efecto en la secrecin de la hormona paratiroidea, influye en los niveles
intracelulares de calcio.
El magnesio y el Azul-1 de Xylidyl se combinan bajo condiciones alcalinas para
formar un quelato rojo-prpura soluble en agua con un mximo de Absorbancia
a 520 nm. La interferencia por el Calcio se previene por la presencia del GEDTA
(cido tetra actico Glicoterdiamina N,N,N,N), el cual encubre completamente
un quelato de calcio teido semejante. El color del quelato de magnesio es
estable y el ensayo no est sujeto a interferencia por otros iones orgnicos
La mayor parte de magnesio est presente en los huesos y en lquido
intracelular. Una pequea cantidad est en lquido extracelular. Se absorbe en el
intestino grueso y se excreta en orina y heces.
El cuerpo humano normal contiene aproximadamente de 20-28 g de
magnesio principalmente en huesos y msculo. De ambos sitios se moviliza
fcilmente durante una deficiencia. El magnesio es un componente esencial en
muchas reacciones enzimticas, ya sea como metaloenzima o como un
activador intermediario. Es el ms importante en aquellas reacciones en las
63
que se involucra la transferencia de un grupo fosfato y en la sntesis de
protenas.
Deficiencias severas de magnesio puede resultar en el deterioro de las
funciones neuromusculares. Los sntomas usualmente no ocurren hasta que los
niveles de magnesio caen por debajo de 1 mEq/L (0.5 mmol/L). Debido a que el
funcionamiento renal juega un papel muy importante en la homeostasis del
magnesio, la excrecin urinaria del magnesio es tambin un ndice til de la
deficiencia o exceso del mismo.
8.2 OBJETIVO
Al trmino de la prctica el alumno determinar cualitativamente magnesio en

suero mediante unl Mtodo colorimtrico, utilzando de manera correcta los
equipos de laboratorio (analizadores), los resultados le permitirn evaluar la
funcin neuromuscular o renal.
Suero. Recomendaciones: Remover la muestra del coagulo lo ms rpido posible y

con mucho cuidado para prevenir la hemlisis y para evitar el aumento de
magnesio debido a su elusin de los eritrocitos. El suero es estable por 7 das a 2-
8 C y por un mes a 20 C.
2 Pizeta de 100 ml con agua destilada.
2 Gradilla metlica para tubos de ensayo de 10x150 mm.
5 Cubre bocas.
10 Pares de guantes de ltex.
10 Gasas no estriles.
1 Papel de estraza.
64
5 Tubos de ensayo 10 X 150 mm.
1 Pipeta automtica de 1000 L con puntillas.
1 Pipeta automtica de 10 L con puntillas.
1 Bote recolector de RPBI.
Reactivo de magnesio Regulador Tris 0.2 mol/L Carbonato de Potasio 70
mmol/L GEDTA . 40 mmol/L Azul de Xylidyl. 0.1 mmol/L Azida de Sodio y 0.1 %
Activadores
Estndar de Magnesio (2.0 mEq/L)
Solucin acuosa de Cloruro de Magnesio con azida de sodio como preservativo.
Estabilidad y almacenamiento del reactivo.
Tanto el reactivo como el estndar son estables de 275-281 K (2-8 C) hasta
la fecha de caducidad marcada en la etiqueta.
1 Espectrofotmetro MBA 2000 Perkin Elmer
1 Centrfuga J-600, Marca SOLBAT
1
Blanco Calibracin Prueba Cronme
Reactivo de trabajo 2000 L 2000 L 2000 L
tro
Agua destilada 20 L
Estndar 20 L
Muestra 20 L
8.4 PROCEDIMIENTO
Cuadro 13. Tcnica de Magnesio

Tcnica
Aada a las cubetas los siguientes volmenes (mL).
Mezcle bien
Incube las celdillas a temperatura ambiente por 3 minutos
65
Lea S y U contra RB a 520 nm.
CLCULOS
Los valores se pueden se pueden derivar de la siguiente
ecuacin: Magnesio de suero (mEq/L) = Au X 20As
Intervalo de referencia
En suero:
1.9-2.5 mg/100 mL
Linealidad
El procedimiento es lineal de 0 a 4.3 mEq/L.
Se deben preparar diluciones si los valores son mayores que la linealidad.
INTERFERENCIAS
El EDTA y el oxalato capturan al catin, perjudicando su cuantificacin.
El suero con hemlisis evidente debe descartarse, pues los eritrocitos
contiene niveles elevados de magnesio.
El uso excesivo de anticido o catrticos o el goteo endovenoso excesivo
de sulfato de magnesio, incrementan los niveles del mineral en suero.
La administracin duradera de soluciones endovenosas sin magnesio
hace que desciendan los niveles del mineral.
La administracin endovenosa de gluconato de calcio puede disminuir
falsamente la magnesemia si se mide con el mtodo de amarillo Titn.
La hemlisis por el manejo demasiado vigoroso de la muestra hace que
aumenten de manera considerable los niveles de magnesio en suero.
8.5 CUESTIONARIO
1. Valores elevados de magnesio se presentan en?:

2. Valores bajos de magnesio se presentan en:?
66
0.01 ml sobrenadante + Azul-1 de Quelato rojo-prpura

Xylidyl + regulador Tris, carbonato soluble en agua
de potasio
Calcio de la muestra + cido tetra Encubre completamente un

actico glicoterdiamina N,N,N,N quelato de calcio teido
(GEDTA)
semejante
Figura 12. Diagrama Ecolgico: Magnesio.
8.7 EVALUACIN
8.8 BIBLIOGRAFA

2 Althof S, Kindler J, Heintz R. 2003. El sedimento urinario. Editorial Mdica
Panamericana. Mxico.
67
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 9. PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LA
ORINA
9.1 GENERALIDADES
El anlisis de orina (sistemtico) es un mtodo muy usado para la deteccin inicial de

alteraciones de vas urinarias y de tipo general. La normalidad de la orina sugiere
la ausencia de alguna enfermedad grave, en tanto que los datos anormales
sugiere la presencia de alteraciones es el ms antiguo y comn de las pruebas
realizadas en el laboratorio y puede lucir como una biopsia cuerpo porque nos da
informacin sobre todos los rganos y sistemas del cuerpo.
Una correcta evaluacin de este anlisis nos puede proveer de informacin sobre
metabolismo de Carbohidratos, funcin renal, infecciones del sistema urinario,
equilibrio cido-base y condiciones hemolticas.
La orina es un fluido biolgico dinmico, es decir sus componentes varan de acuerdo a
las condiciones en que se encuentra el espcimen.
El tiempo y la temperatura son los factores que con mayor frecuencia modifican las
caractersticas iniciales de la orina. De no ser procesado el espcimen en el perodo
ptimo de una hora despus de la miccin las caractersticas pueden variar.
La seguridad de un uroanlisis depende de la calidad de la
muestra.
En trminos generales las muestras de orina debern llegar rpidamente al Laboratorio
y debern ser analizadas tan rpido como se pueda despus de su llegada.
El espcimen debe ser colectado en un recipiente limpio hermtico, desechable
e irrompible. La muestra deber estar libre de contaminacin fecal, no deber contener
papel higinico o cualquier otro material extrao.
Los tipos de muestra que se pueden utilizar son:
Al azar
Orina diurna
Orina nocturna
68
Primera de la maana
Orina de 24 horas.
Deber proporcionarse al paciente la siguiente informacin segn sea el

caso.
INSTRUCCIONES PARA LA RECOLECCION DE MUESTRA (MUJERES)

ESTIMADA PACIENTE: PARA QUE EL RESULTADO DE SU ANALISIS SEA CONFIABLE Y DE
UTILIDAD PARA QUE EL MDICO HAGA UN ADECUADO DIAGNOSTICO, ES INDISPENSABLE
QUE SIGA LAS INDICACIONES SIGUIENTES.
SI TIENE DUDAS, VEA LA ILUSTRACION AL FINAL.

1) Si est tomando vitamina C (cido ascrbico) suspenda la toma por lo menos 24
horas antes de recolectar su muestra o recolecte su muestra por lo menos 24 horas
despus de la ultima vez que tom vitamina C. Avise al personal del laboratorio si est
tomando cualquier otro medicamento.
2) ABSTENGASE DE TENER RELACIONES SEXUALES 3 DIAS ANTES DE PROPORCIONAR SU
MUESTRA AL LABORATORIO.
3) Si est menstruando o reglando espere a que termine el periodo. Dos das despus
podr recolectar la muestra. En caso de ser necesario que proporcione la muestra a
pesar de estar reglando, es necesario que utilice un tampn (Tampax) para evitar la
contaminacin de la muestra de orina con sangre.
4) De ser posible, utilice guantes de ltex; de no ser posible el uso de guantes, lave
perfectamente sus manos con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de jabn
puede causar errores en el anlisis.
5) Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de
jabn puede causa errores en el anlisis. Seque perfectamente. Inicie la toma de
muestra de acuerdo a las indicaciones siguientes:
a) Debe sentarse en el excusado con las piernas separadas y con los dedos separar los
labios mayores que cubren la vagina.
b) Al separar los labios mayores con los dedos pulgar e ndice quedar al descubierto
el orificio urinario.
69
c) Con una gasa (de preferencia estril) se realiza una limpieza en la parte interna de
los labios genitales (meato urinario) y el rea que lo rodea con un movimiento de
adelante hacia atrs. este procedimiento debe repetirse con una segunda gasa.
d) Manteniendo los labios del rea genital separados se debe iniciar la miccin. Se
inicia la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el
excusado.
e) En el recipiente que se le proporcion en el laboratorio, recolecte la fraccin
del chorro medio. Termine de orinar desechando la fraccin final en el excusado.
6) Vace la muestra de orina en los dos tubos de ensaye que le proporcion el
personal del laboratorio y coloque la tapa.
7) En las etiquetas, anote su nombre y la hora en la que recolect su muestra y
adhirala a los tubos.
8) Lleve su muestra de inmediato al laboratorio ya que deber ser analizada en un
periodo mximo de una hora despus de la recoleccin.
9) Si no puede llevar de inmediato la muestra al laboratorio, protjala de la luz
y refrigrela a 4 C.
Figura 13. Recoleccin demuestra de orina en mujeres
70
INSTRUCCIONES PARA LA RECOLECCION DE MUESTRA DE ORINA (HOMBRES)
ESTIMADO PACIENTE: PARA QUE EL RESULTADO DE SU ANALISIS SEA CONFIABLE y DE
UTILIDAD PARA QUE EL MDICO HAGA UN ADECUADO DIAGNSTICO, ES INDISPENSABLE
QUE SIGA LAS INDICACIONES SIGUIENTES.
1) Si est tomando vitamina C (cido ascrbico) suspenda la toma por lo menos 24

horas antes de recolectar su muestra o recolecte su muestra por lo menos 24 horas
despus de la ultima vez que tom vitamina C. Avise al personal del laboratorio si est
tomando cualquier otro medicamento.
SI TIENE DUDAS, VEA LA ILUSTRACION
2) De ser posible, utilice guantes de ltex; de no ser posible el uso de guantes, lave
perfectamente sus manos con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de jabn
puede causa errores en el anlisis.
3) Realice un aseo del rea pbica con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de
jabn puede causa errores en el anlisis. Seque perfectamente.
4) Inicie la toma de muestra de acuerdo a las indicaciones
siguientes:
a) En pacientes NO circuncidados se retrae la piel que cubre la cabeza del glande
(pene) con un movimiento hacia atrs para exponer el meato uretral.
b) Debe realizar una limpieza con una gasa (de preferencia estril). Empiece por la
punta y recorra la gasa hacia la base.
c) Este procedimiento debe repetirse con una segunda gasa
d) Inicie la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha en el

excusado.
e) En el recipiente que se le proporcion en el laboratorio, recolecte la fraccin del
chorro medio
f) Termine de orinar desechando la fraccin final en el excusado.
5)Vace la muestra de orina en los dos tubos de ensaye que le proporcion el personal
del laboratorio y coloque la tapa.
6)En las etiquetas, anote su nombre y la hora en la que recolect su muestra y
adhirala a los tubos
71
7)Lleve su muestra de inmediato al laboratorio ya que deber ser analizada en un
periodo mximo de UNA HORA despus de la recoleccin.
8)Si no puede llevar de inmediato la muestra al laboratorio, protjala de la luz

y refrigrela. La muestra deber transportarse al laboratorio tan pronto como sea
posible.
Figura 14. Recoleccion de muestra de orina (HOMBRES)
Los datos normales en los anlisis de orina en el aspecto macroscpico son:
- El color debe ser pajizo
- El olor moderado
72
- Un aspecto transparente
- Una densidad de 1.025 a 1.030
Los siguientes datos anormales por lo regular sufren o sugieren

alteraciones:
Color: Los cambios pueden ser consecuencia de dieta, frmaco y muchos trastornos
metablicos inflamatorios e infecciosos.
Olor: En la diabetes sacarina, la inanicin y la deshidratacin surge un olor frutal que es
caracterstico de la formacin de cuerpos cetnicos. En la infeccin de vas urinarias es
comn un olor ftido (E.coli). La enfermedad de orina en jarabe de arce y la
fenilcetonuria tambin ocasionan olores caractersticos.
Transparencia: La orina turbia puede poseer leucocitos o eritrocitos, bacterias, grasas y
trastornos que puede denominarse infeccin renal.
El examen qumico de la orina nos puede proveer de informacin sobre el metabolismo
de carbohidratos, funcin renal, infecciones del sistema urinario, equilibrio cido-base y
condiciones hemolticas. En el se incluyen las pruebas para pH, protenas, glucosa,
bilirrubina, nitrito, sangre, cetonas, urobilingeno y esterasa de leucocitos.
Densidad: La disminucin de la densidad (hipostenuria) es un signo caracterstico de
Diabetes inspida, glomerulonefritis, pielonefritis, insuficiencia renal aguda,
hipercalcemia e hipopotasemia. El incremento de la densidad es caracterstico de
trastornos hepticos, insuficiencia congestiva cardiaca, deshidratacin y nefrosis.
PH: El pH alcalino de la orina puede ser consecuencia del sndrome de Fanconi,
infeccin de vas urinarias y alcalosis metablica. El pH cido de la orina se observa en
tuberculosis renal, pirexia, fenilcetonuria y alcaptonuria.
Protenas: La proteinuria sugiere la presencia de nefropatas como glomeruloesclerosis,
glomerulonefritis aguda o crnica, nefrolitiasis, rin poli qustico, e insuficiencia renal
aguda o crnica.
Azcares: La presencia de estos, suele denotar Diabetes sacarina pero tambin puede
ser consecuencia de sndrome de Cushing, feocromocitoma e hipertensin intracraneal.
La fructosuria, galactosuria, pentosuria, denotan a menudo trastornos metablicos
hereditarios pocos frecuentes.
73
Cetonas: Su presencia es un signo caracterstico de la Diabetes sacarina. Las cetonas
tambin pueden aparecer en casos de inanicin y situaciones en que aumenta
las necesidades metablicas, junto con la disminucin en la ingestin de alimentos
como en el caso de diarrea y vomito.
Nitrito: Los grmenes que son responsables de la mayora de las infecciones de las vas
urinarias, reducen el nitrato presente en la orina a nitrito. La prueba que se basa en el
principio de la prueba de Giess, comprueba este nitrito, y con ello, en forma indirecta,
los grmenes formadores de nitrito en la orina. Usando la primera orina matinal, la
cuota de acierto puede llegar a un 90%. Para elevar la cuota de acierto, son
importantes las siguientes condiciones:
La orina debe permanecer en la vejiga durante un tiempo prolongado (4-8 horas), se
recomienda la utilizacin de la primera orina matinal es recomendable comer
verduras y reducir las bebidas la noche anterior, suprimir antibiticos o
quimioteraputicos 3 das antes; la ingestin de grandes cantidades de Vitamina C
puede similar un resultado falso negativo; un resultado falso positivo puede ser
provocado por medicamentos que tien de rojo en la zona cida (fenazopiridina).
Urobilingeno: Una sal de diazonio estable reacciona con el urobilingeno produciendo
casi instantneamente un colorante azoico rojo. La prueba es especfica para
urobilingeno y no es susceptible de las interacciones conocidas de la prueba de Erlich.
La orina no deber ser expuesta a la accin de la luz solar. De esta manera se
eliminan resultados demasiados bajos o falsos negativos debido a la oxidacin.
Resultados demasiados altos o falsos positivos pueden ser causados por
medicamentos que se tien de rojo en la zona cida.
Bilirrubina: La comprobacin se basa en la copulacin de una sal de diazonio con
bilirrubina. La presencia de grandes cantidades de Vitamina C puede dar lugar a
resultados demasiados bajos o falsos negativos. La orina no deber ser expuesta a la luz
solar.
Sangre: El papel de prueba contiene un hidroperxido orgnico que produce la
oxidacin del indicador bajo la accin de Hb o mioglobina respectivamente. Los
valores normales indicados en el perfil urinario se refieren a eritrocitos intactos. El
lmite para 5 a 10 eritrocitos/ l es valido igualmente para Hb proveniente de 5 a 10
eritrocitos/l. Debido a una hemlisis aumentada tal como puede presentarse al dejar la
74
orina durante un perodo prolongado, se observan a partir de aproximadamente 20 a 30
eritrocitos/l, valores ms altos que con la correspondiente concentracin de eritrocitos
intactos. Resultados falsos positivos pueden ser causados por restos de detergentes
fuertemente oxidantes en el recipiente de la orina.
9.2 OBJETIVO
Realizar correctamente la determinacin de los parmetros fsicos en muestras

de la orina como parte del Urianlisis, los resultados podrn ser utilizados
para correlacionarlos con el sedimento urinario.
1 Urinmetro
2 Papel pH
1 Probeta de 100 ml
T2 iras reactivas para orina
1 Termmetro de 20 a 110C
5 Tubos Urintek
2 Gradilla
10 Gasa
1 Papel sanitario
5 Orina de miccin reciente
5 Tiras reactivas Ames 10 SG de Bayer
Agua destilada
5 Clinitek 50
1 Centrfuga Clnica
9.4 PROCEDIMIENTO
75
EQUIPO DE SEGURIDAD QUE DEBE USARSE DURANTE EL ANALISIS: BATA,
GUANTES DE LATEX y DE SER POSIBLE, LENTES DE SEGURIDAD.
1. Verifique que la muestra se encuentre en un recipiente que cumpla

con los requisitos establecidos (limpio, estril, desechable, boca ancha... etc)
2. Verifique que el recipiente tenga una etiqueta adherida al cuerpo (no a la
tapa) en la cual se encuentre anotado claramente el nombre del paciente y la
hora de recoleccin de la muestra
3. De no ser procesada la muestra en el transcurso de una hora (mximo 2)
despus de su emisin deber conservarse en refrigeracin (entre 4 y 6 C) y
protegida de la luz hasta el momento que se procese, el perodo mximo que se
podr mantener en refrigeration es de 4 horas.
4. Si la muestra fue refrigerada, permita que alcance la temperatura
ambiente (entre 22C y 26 C.
5. Homogenice la muestra y deposite 12ml en un tubo de ensaye que tenga
tapa y de ser posible con graduacin.
6. Los tubos de ensaye deben tener una etiqueta adherida con el nombre del
paciente o su nmero de identificacin.
7. Coloque la tapa a los tubos.
8. Homogenice invirtiendo el tubo.
9. Observe las caractersticas fsicas del espcimen
Color
El espcimen deber ser examinado bajo buenas condiciones de luz ya travs del
recipiente contra un fondo blanco. Las variaciones de color de la orina
normal van desde amarillo plido hasta mbar oscuro estas variaciones
dependen de la dieta y de la concentracin de la muestra.
Las orinas de color anormal o muy obscuras pueden interferir con la

interpretaci6n de los resultados de algunas reas reactivas de la tira. Si una
76
muestra es suministrada en estas condiciones, los resultados no sern
reportados y se explicar detalladamente en la forma de reporte.
Figura 15. Color de la orina
ASPECTO
La muestra bien mezclada deber ser examinada a travs de un recipiente claro,

el cual se observa frente a una fuente de luz. La orina normal de reciente
emisin es visualmente clara, cualquier orina que no sea clara requiere de una
observacin microscpica para determinar la causa de la turbidez.
Figura 16. Color de la orina
OLOR
Hay pocas ocasiones cuando el olor de la orina tiene algn significado clnico.
Cualquier olor inusual deber ser escrito en la forma de reporte. Los olores
77
amoniacales son los ms comunes debido a la degradaci6n bacteriana de la urea
y pueden indicar un espcimen viejo o una infecci6n en el tracto urinario.
GRAVEDAD ESPECFICA (GE)
La gravedad especifica de la orina es definida como el peso de la orina

comparada con el peso de un volumen igual de agua destilada a la misma
temperatura.
Vierta aproximadamente 40 ml de orina en

la probeta
Descienda suavemente el Urinmetro en la orina
y Sultese. Espere a que el Urinmetro se
detenga.
No deber tocar las paredes, ni el fondo de la
probeta.
Figura 17.- Medicin de la graveda especfica

Lase la Gravedad especfica (GE) que
indique la escala del Urinmetro en la
superficie de la orina (punto ms inferior del
menisco).
Retire el Urinmetro.
Mida la temperatura de la orina
inmediatamente con el termmetro.
CLCULOS
Observe la temperatura a que se encuentra calibrado el Urinmetro (el

fabricante la indica marcndola en el instrumento). Habitualmente es de 20C.
Tome nota de la temperatura que se ha medido en la orina.
78
Aada a la GE registrada:0,001 por cada 3C que mida la temperatura de la orina
por arriba de la temperatura de calibracin del Urinmetro.
En el caso contrario reste de la GE que se ha registrado: 0,001 por cada 3 C que
tenga la temperatura de la orina por debajo de la temperatura de calibracin.
Ejemplo
El Urinmetro se ha calibrado a 20C. La temperatura de la orina es de 26C. La

GE medida es de 1,021.
La temperatura de la orina es 6C mayor que la temperatura de calibracin. Aada
a la GE:
6 x 0,001 = 2 x 0,001 = 0,002 3
Por lo tanto, la GE real de la orina ser: 1 ,021 + 0,002 = 1,023.
VALORES DE REFERENCIA
GE normal: 1,020 (variacin normal: 1,010~1.025).

GE baja: menos de 1,010* (trastornos renales o
endocrinos). GE elevada: superior a 1,025 (glucosuria,
proteinuria).
Una cifra reducida carece de importancia si el paciente ha ingerido una gran
cantidad de lquidos antes del ensayo.
Una vez observadas las caractersticas fsicas, contine con las caractersticas
qumicas:
TCNICA MANUAL DE LA TIRA REACTIVA
Emplear orina fresca y sin centrifugar, mezclar bien la muestra de orina.

Sumerja la tira reactiva brevemente (1 segundo como mximo) en la
orina.Al retirarla rasar, el canto lateral en el borde del tubo para eliminar
el exceso de orina.
oque con el borde de la tira la superficie de un material absorbente (gasa),
sin tocar las reas reactivas.
79
Figura.- 18 Lectura de la tira reactiva en forma manual
Al cabo de 30-60 segundos compare el color de la tira reactiva con la escala
cromtica que aparece en la etiqueta del tubo.
80
Figura 19. Parmetros de la tira reactiva
Respete los tiempos estimados para cada analito.

La orina a analizar no deber de tener ms de 2 hrs. de emitida.
81
PROCEDIMIENTO MTODO SEMIAUTOMATIZADO CLINITEK 50
Figura 20. Encienda el equipo
Figuraura 21. Saque una tira del

frasco y tpelo inmediatamente.
Fig 22. Sumerja la tira en la orina

por un segundo
Figura 23. Presione el botn

y remueva la tira de la
orina, deslizando el borde
de la tira sobre la boca del
recipiente.
82
Figura 24. Toque con el borde de la tira la
superficie en un material absorbente
(gasa), sin tocar las reas reactivas.
Figura 25. Coloque la tira en el carril dentro

de los diez segundos que marca el equipo.
Figura 26. Retire la tira y seque el exceso

de orina con un papel absorbente.
Espere el ticket de impresin de los resultados.
83
9.5 CUESTIONARIO
1. Describa la formacin de la orina

2. Elabore un formato de resultados acorde a la NOM 007 SSA-1 2011. Para la
Organizacin y funcionamiento de los Laboratorios Clnicos.
1. GLUCOSA
ORINA + 2.2 mg
Glucosa oxidasa
cido glucnico +
1.0 mg Peroxidasa + 8.1 mg yoduro de
perxido de hidrgeno + potasio (cromgeno)
Cromgeno
(Del verde al
caf)
2. BILIRRUBINA
ORINA + 0.4 mg 2,4-dicloroanilina
diazotizado + 37.3 mg amortiguador
Cromgeno
(Del crema al caf)
84
3. CETONA
cido acetoactico de la orina + Cromgeno

(Caf claro, y del rosa al
7.1 mg nitroprusiato de sodio prpura)
4. GRAVEDAD ESPECFICA
Pka de Polielectrolitos de la orina + 2.8 mg Cromgen

azul de bromotimol (indicador) + 68.8 mg o
metil vinil ter/ anhdrido malico + 28.4 (Del verde-azul al
mg hidrxido de sodio verde- amarillo)
5. SANGRE
Hemoglobina + peroxidasa de la Cromgen
sangre + 6.8 mg dihidroperxido de o
diisopropilbenceno + 4.0 mg (Del amarillo -naranja al
3,3,5,5- tetrametilbencidina verde oscuro o azul)
6. pH
PH de la orina + 0.2 mg rojo de

metilo + 2.8 mg azul de
Cromgeno
bromotimol (indicadores) (Del naranja al amarillo y
del verde al azul)
7. PROTENA
orina + 0.3 mg azul de Cromgeno (Amarillo, verde-

tetrabromofenol + 97.3 amarillo y del verde a verde-
mg amortiguadores azul)
8. UROBILINGENO
orina + 0.2 mg p- Cromgeno

dietilaminobenzaldehdo (Del rosa plido al rosa
intenso)
9. NITRITOS
Orina + 1.4 mg cido p-arsanlico +1.3
85
mg 1,2,3,4 tetrahidro (h)quinolin-3-ol Compuesto
diazonino
10. LEUCOCITOS
Esterasas de los leucocitos

de la orina + 0.4 mg derivado 3-hidroxi-5-fenil pirrol
de pirrol ster aminocido
3-hidroxi-5-fenil pirrol + Compuesto

0.2 mg sal de diazonio
diazonio
(Crema y
violeta)
Figura 27. Diagrama Ecolgico: tira reactiva de orina.
9.7 EVALUACIN
Ver anexo I : Instrumentos de evaluacin.
9.8 BIBLIOGRAFA

2 Althof S, Kindler J, Heintz R. 2003. El sedimento urinario. Editorial Mdica
4.- ngel M.; G. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clnica 2.
Edicin,2000, Bogot Colombia. Editorial Mdica Panamericana
exmenes de laboratorio. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. 86
.
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 10. PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA EL

EXAMEN GENERAL DE ORINA
10.1 GENERALIDADES
La cantidad de glucosa que aparece en la orina depende del nivel de glucemia la

velocidad de filtracin glomerular y del grado de reabsorcin tubular. Por lo
general no existe glucosa en la orina hasta que el nivel de la glucosa en sangre
no supera 160-180 mg/dl cifra que es el umbral renal para la glucosa (Weller
1971). La glucosa es una de las sustancias con umbral renal ya que resulta
totalmente reabsorbida por los tbulos cuando su concentracin sangunea se
halla dentro de los lmites normales. El umbral renal para la glucosa depende de
la velocidad de filtracin glomerular y de la capacidad reabsortiva de los
tbulos. Cuando el valor de glucemia supera el umbral renal (los tbulos no
pueden reabsorber toda la glucosa filtrada) y se produce glucosuria.
Normalmente este nivel no es sobrepasado aun despus de la ingesta de
grandes cantidades de hidratos de carbono. Puede existir una pequea cantidad
de glucosa en la orina normal pero el nivel de ayuno en un adulto es de slo
alrededor de 2- 20 mg de glucosa por 100 ml de orina (Krupp y col. 1979). Si los
niveles circulantes de glucosa exceden de 180-200 mg% grandes cantidades de
este monosacrido pueden permanecer en orina.
Para comprender la presencia de glucosa en la orina es importante reconocer la
fuente de glucosa que se encuentra en la sangre; hay tres fuentes principales de
glucosa sangunea:
1) La digestin de almidones y de hidratos de carbono produce glucosa que es
absorbida desde el intestino.
80
2) La gluconeognesis que es la conversin de precursores diferentes de los
hidratos de carbono en glucosa (protenas y grasas).
La glucogenlisis es decir la hidrlisis del glucogno almacenado en
el hgado.
Las tiras reactivas (N-Multistix) se basan en la reaccin de acoplamiento de una
sal de diazonio con la bilirrubina en un medio cido.
El N-Multistix contiene la sal de 2,4-dicloro-anilina diazonio. Se lee a los 20
segundos y el color vara del ocre a diferentes tonos de canela (tostado) o
prpura. Se miden as 0,2-0,5 mg/dl de bilirrubina.
Resultados falsos negativos: puede haberlos en presencia de elevada
concentracin de cido ascrbico, de nitrito, o si la bilirrubina sufri oxidacin a
biliverdina.
Resultados Falsos positivos: los pacientes que reciben altas dosis de
clorpromacina pueden tener estos resultados, los cuales se deben tambin, a
veces, a metabolitos de frmacos como la fenazopiridina, que da un color rojo a
un pH bajo.
Prueba Enzimtica
(Clinistix)
La prueba con tira reactiva es excelente y especifica para la glucosa. Detecta la
oxidacin de la glucosa a cido glucnico.
Glucosa oxidasa
Glucosa + Oxigeno (aire) Ac. Glucnico + H2O2
Peroxidasa
H2O2 + o-toluidina o-toluidina oxidasa (F18 azul) + H2O
Otras tiras reactivas utilizan la o-toluidina como sustrato para la reaccin

del indicador.
La orina debe estar a temperatura ambiente, ya que la refrigeracin interfiere
con esta prueba.
81
La glucosa aparece en la orina en caso de Diabetes Mellitus glucosuria renal y
otras situaciones clnicas. La presencia de cido ascrbico puede enmascarar
la glucosa y conducir a resultados errneos.
Prueba de Reduccin
1.- Estn basadas en la reduccin de ciertos iones metlicos por la glucosa,
cuando se aaden en la orina se efecta una reaccin trmica de la que resulta
precipitacin y cambio de color en la orina
2.- Se consideran inespecficas para la glucosa porque la reaccin puede ser
efectuada por otras sustancias reductoras de la orina.
a) Hipocloritos o cloro.
b) Otros azcares como galactosa, lactosa, fructosa,
maltosa.
TABLETAS DE CLINITEST
El Clinitest (Ames Co.) es un mtodo de autocalentamiento para la
determinacin semicuantitativa de sustancias reductores en la orina. Las
tabletas contienen los siguientes reactivos: sulfato de cobre, cido ctrico,
hidrxido de sodio y carbonato de sodio. Las sustancias reductoras presentes en
la orina reaccionan con el sulfato de cobre reduciendo los iones cpricos a xido
cuproso.
Resultados positivos falsos: El cido nalidxico) las cefalosporinas) el
probenecid y los conservadores urinarios formalina y formaldehido pueden si
se encuentran presentes en grandes cantidades) dar lugar a resultados positivos
falsos.
Resultados negativos falsos: No los hay si se siguen estrechamente todas las
indicaciones para realizar el procedimiento.
TABLETA REACTIVA ICTOTEST

El Ictotest es una prueba con tabletas que se basa en la misma diazo reaccin de
las tiras reactivas, pero es mucho ms sensible que stas; el Ictotest permite
82
detectar de 0,05 a 0,1 mg/dl. Debido a su elevada sensibilidad es el
procedimiento recomendado cuando se solicita la determinacin de bilirrubina.
Tambin sirve como buena prueba confirmatoria para resultados positivos con
tiras reactivas.
La tableta contiene los siguientes reactivos: p-nitrobenceno-diazonio; p-
toluensulfonato, cido sulfosalicilico, bicarbonato de sodio y cido brico.
En el procedimiento se utiliza una especie de paspart que est hecho de una
mezcla de asbesto y celulosa. Cuando se coloca la orina sobre el paspart, sus
cualidades absorbentes hacen que la bilirrubina quede en su cara externa. El
cido sulfosaliclico proporciona el medio cido para la reaccin. Tambin acta
con el bicarbonato de sodio tornando la tableta efervescente, lo cual ayuda en
parte a su disolucin. La sal de diazonio se une a la bilirrubina sobre el
paspart y se obtiene el color azul o prpura.
Cuerpos cetnicos: Los cuerpos cetnicos incluyen, cido acetoactico, acetona,
y cido beta-hidroxibutirico. Los cuerpos cetnicos que se forman en el hgado
durante el metabolismo de cidos grasos circulan por todo el cuerpo hasta los
tejidos, para mayor oxidacin. En circunstancias normales con una dieta
corriente a base de carbohidratos, protenas y grasa, por la orina se excretan
diariamente menos de 125 mg de cuerpos cetnicos. En caso de privatizacin
del total o parcial de carbohidratos, se acelera notablemente el metabolismo de
las grasas, aceleracin que sobrecarga la capacidad del hgado para metabolizar
los fragmentos de Acetil CoA, derivados de cidos grasos, con lo cual se forman y
liberan cantidades importantes de cuerpos cetnicos en sangre.
Los tejidos extra hepticos como los riones poseen una gran capacidad para la
cetolisis, sin embargo, cuando la magnitud de la citognesis del hgado excede
la cetolisis en tejidos perifricos aumenta la concentracin de cuerpos
cetnicos en sangre que hace que dichas sustancias aparezcan en la orina
(cetonuria), y esta ltima es caracterstica de la inanicin, de al diabetes sacarina
no controlada y constituye un signo de acidosis metablica de diversas causas;
por lo regular no guarda relacin con enfermedad intrnseca de vas urinarias.
83
Para la identificacin de cetonuria se cuenta con tiras reactivas en el comercio
para usar en mtodos de deteccin inicial; dichas tiras estn impregnadas de
nitroprusiato sdico y son especificas del cido diactico y sensibles a 100 mg
en 100 ml, cuando se humedece la tira en la orina la presencia de cido diactico
ocasiona cambios cromticos que pueden ser comparados con una escala
colorimtrica para calcular la concentracin aproximada.
Otro mtodo de deteccin inicial que se usa ampliamente porque tiene los
mismos resultados en plasma y orina, y reacciona a concentracin incluso de 5
mg de acetona por
100 ml, es la tableta Acetest (no especifica para cido diactico). La tableta
contiene glicina, nitroprusiato sdico, fosfato di sdico y lactosa. El cido
diactico o la acetona en presencia de glicina, hace que la tableta adquiera color
azul-violceo.
Otras 2 pruebas, la Rothera y la del Cloruro frrico de Gerhardt han sido
sustituidas en gran parte por las tiras y tabletas reactivas. La prueba de Rothera
detecta cetonas por medio de la reaccin de una mezcla de nitroprusiato sdico
y sulfato de amonio en una mezcla de orina. Si el estudio es positivo surge un
anillo rosa prpura en la interfase de los elementos reactivos. Esta prueba es
sensible a niveles de cido actico de 1-5 mg en 100 ml y a niveles de cetona de
10-25 mg en 100 ml; es inespecfica al cido diactico.
En la prueba de Gerhardt de cloruro frrico se agrega una solucin con esta
sustancia a un tubo de ensayo con orina. Si existe el cido diactico la solucin
se torna rojo intenso. Esta prueba es inespecfica porque los salicilatos
ocasionan una reaccin falsamente positiva, tampoco es sensible.
La prueba de Hart es un mtodo analtico, el nico, excepto la cromatografa,
que es especfico para identificar cido beta-hidroxibutirico.
El anlisis de las muestras de orina por parte del laboratorio en busca de niveles
anormales de protenas y sus metabolitos, es un factor importante en la
deteccin y correlacin de nefropatas y en el diagnstico de algunas
enfermedades extrarrenales o sistmicas.
84
En circunstancias normales, el contenido de protenas de la orina es demasiado
pequea para ser detectado en los mtodos sistemticos de identificacin.
La orina contiene cantidades minsculas de protenas plasmticas de bajo peso
molecular o protenas renales derivadas de clulas tubulares. La proteinuria
benigna puede ser resultado de cambios en la posicin del cuerpo como en el
caso de la proteinuria ortostatica, o relacionarse con estrs, exposicin al fro o
fiebre.
Los niveles de protenas excesivamente grandes en la orina detectables por
estudio de identificacin inicial, casi siempre denotan nefropatas. La
proteinuria patolgica puede ser resultado de mayor permeabilidad
glomerular por diversas causas, incluidas glomerulonefritis, insuficiencia
congestiva cardiaca o lesin tubular renal, con defectos en la resorcin de
protenas.
Las infecciones de las vas urinarias bajas, como en el caso de la cistitis tambin
puede originar proteinuria.
En casi todas las formas de nefropatas caracterizadas por proteinurias, la
protena prevaleciente en la orina es la albmina, por que es la de mayor tamao
y puede filtrarse con mayor facilidad y es la ms abundante de todas las
protenas.
La presencia de algunas protenas anormales en la orina tiene importancia
especial en el diagnostico, como en el caso de la protena de Bence-Jones en la
orina, cuya presencia sugiere fuertemente mieloma mltiple.
Normalmente no existen cantidades detectables de bilirrubina en orina. En el
intestino, las enzimas bacterianas convierten la bilirrubina, pasando por un
grupo de compuestos intermedios, en diversos compuestos relacionados que se
denominan en forma colectiva Urobilingeno, y la mayor parte de este pigmento
incoloro, y su variante oxidada; la urobilina (pigmento marrn) se pierde con el
las heces. Una pequea parte de este Urobilingeno se excreta por los riones, y
en la orina existe un nivel normal de aproximadamente de 1-4 mg/24 hrs, o
menos de una unidad Erlich/2 h.
85
El nivel normal de bilirrubina total en el suero es de alrededor de 1 mg/ dl o
menos; cuando el nivel de bilirrubina supera la cifra de 2.5 mg/dl
aproximadamente los tejidos toman el color amarillo de aquella, y a esto se le
conoce como ictericia. Si la ictericia se debe a un aumento en el nivel de
bilirrubina no conjugada, no habr excrecin de esta en la orina, porque la
bilirrubina no puede filtrar a travs del glomrulo. Pero si la causa de la ictericia
es un aumento del nivel de bilirrubina hidrosoluble, entonces habr bilirrubina
en orina.
10.2 OBJETIVO
El alumno ser capaz de determinar los niveles de glucosa, cuerpos cetnicos,

protenas y bilirrubina en orina, empleando tcnicas alternas a la tira reactiva.
5 Tubos de ensaye de 16 x
150
2 Pinza
5 Tubo recolector
Urintek
5 Pipeta Pasteur
1 Gradilla
Tubos de ensayo 13x100
2 Pipeta de 5 ml
5 Papel filtro
1 Cronmetro
1 Pizeta
1 Gotero
86
10 Gasa
1 Almohadilla
Agua destilada
5 pastilla de Reaccin (Clinitest)
Reactivo de Rothera
1 Acetest
cido ntrico
5 Tiras reactivas Microalbumin
Tiras reactivas N-Multistix
5 Tabletas Ictotes
Reactivo de Imbert (nitroprusiato de sodio 5
gr)
Agua destilada 50 ml
cido actico glacial 50 ml
Amoniaco concentrado
10.4.PROCEDIMIENTO
Glucosa:
Emplear orina fresca y sin centrifugar, mezclar bien la muestra de orina.

1. Sumergir la tira reactiva brevemente (1 seg. como mximo) en la orina.
2. Al retirarla rasar el canto lateral en el borde del recipiente para eliminar el
exceso de orina.
3. Al cabo de 30-60 seg. compare el color de reaccin con la escala cromtica
que aparece en la etiqueta del tubo.
Los cambios de color que aparecen en el margen de las reas reactivas o bien al
cabo de ms de 2 min. carecen de importancia diagnostica. La orina a analizar no
deber de tener ms de 2 horas de emitida.
87
CLINITEST
I. Recolecte orina en un recipiente limpio con un gotero en posicin vertical

coloque 5 gotas de orina en el tubo de prueba. Enjuague el gotero con agua y
adicionar 10 gotas de agua al tubo.
2. Coloque una tableta en el tubo permita que se lleve a cabo la reaccin

completamente. No agite el tubo durante la reaccin o por los 15 segundos
despus de haber terminado la reaccin.
3. Al final del periodo de 15 segundos agite el tubo suavemente para mezclar el

contenido en el tubo. lgnore los cambios de color despus del perodo de los 15
segundos.
4. Anote el resultado de acuerdo al valor asignado al bloque de color con el que

ms se acerque al color del lquido.
Figura- 28 Resultados del clinitek para la determinacion de glucosa en orina.
Negativo % % % 1% 2 % o ms
250 mg/ dl 500 mg/dl 750 mg/dl 1000 mg/dl 2000 mg/dl
14 mmol/l 28 mmol/l 42 mmol/l 56 mmol/l 111 mmol/l
Cuerpos cetonicos:
Se le indicara al paciente que orine y despus se le dar un vaso con agua para
beber. Unos 30 min. mas tarde se le pedir que recoja una segunda muestra de
orina de mitad de chorro y utilice alguno de los siguientes mtodos:
- ACETEST -
1. Retire una tableta del frasco y tpelo inmediatamente. Coloque la tableta

sobre una hoja de papel blanco, limpio y seco.
2. Coloque una gota de orina directamente sobre la tableta.
88
3. Compare el color de la tableta con la carta de colores a los 3 segundos
despus de aplicar la muestra.
Figura 29. Lectura de cuerpos cetnicos
Negativo mg/dl Bajo A

l
20 mg/dl t
o
8
0
-
Moderad
1
o 0
0
30-40 m
mg/dl g
/
d
l
89
- ROTHERA
La presencia de cuerpos cetnicos en cantidades anormales, se pone en
evidencia por la aparicin de un color violeta al agregar nitroprusiato sdico en
medio alcalino.
TCNICA:
En un tubo de ensayo coloque 5 ml de orina y se agregue 20 gotas de reactivo de

Imbert; mezcle perfectamente y deslice por las paredes del tubo 1 ml de
amoniaco de modo de obtener una reaccin zonal. Cuando la reaccin es
positiva en el punto de contacto de ambos lquidos aparece un amarillo violeta
cuya intensidad es proporcional a la cantidad de cuerpos cetnicos presentes.
La sensibilidad del mtodo es de aproximadamente 5 mg % para cido actico y

25 mg% para cido diactico.
Los resultados se reportaran como: positivo de la reaccin escrita con trminos

de escaso, regular o abundantes.
Proteinas:
La Reaccin del anillo de Heller se basa en la coagulacin de la protena por

accin del cido ntrico agregando la orina sobre el cido de tal modo que
obtenga una reaccin zonal. Tcnica:
En un tubo de ensayo coloque 1 ml de cido ntrico concentrado, manteniendo

inclinado el tubo, agregue por las paredes la orina filtrada, a fin de obtener dos
capas de liquido. La formacin de un anillo blanco en la zona de contacto de
ambos lquidos, nos indica la presencia de protena. Si la muestra contiene muy
escasa cantidad de protena, tarda de 2 a 3 minutos en aparecer dicho anillo.
00
90
Figura 30. Lectura de la proteina
La formacin de un anillo coloreado puede ser causada por la presencia de

bilis u otros pigmentos urinarios
TCNICA DE LA TIRA REACTIVA MICROALBUMIN

PROCEDIMIENTO
1) Recolecte una muestra de orina fresca en un recipiente limpio y seco.
2) Saque una tira del frasco y vuelva a taparlo bien
3) Sumerja las reas reactivas en la orina, asegurndose de que se mojen ambas
(no moje las bandas de color cerca del extremo de manipulacin)
4) Saque la tira inmediatamente, deslizando el borde de la tira contra el reborde
del recipiente para eliminar el exceso de orina.
5) Oprima la tecla verde (iniciar) del analizador Clinitek 50 al mismo tiempo que
saca la tira de la orina.
6) Seque la tira tocando slo el borde sobre un papel absorbente.
7) Coloque la tira reactiva, con las reas reactivas hacia arriba dentro de la
tablilla de anlisis/alimentacin del instrumento. Deslice la tira a lo largo de la
tablilla hasta que toque el extremo de la bandeja.
8) La tablilla se introduce automticamente en el instrumento, donde la tira
es identificada y leda. Los resultados se muestran o se imprimen tan pronto
como estn disponibles.
9) Anote los resultados obtenidos y deseche la tira en un contenedor de
basura apropiado.
00
91
NOTA: Limpie la tablilla de anlisis con un pauelo de papel hmedo y sin
pelusas, cuantas veces sea necesario para impedir la acumulacin de orina.
TABLA DE
RESULTADOS
Anlisis Abreviatura Resultados impresos mostrados

Convencionales Unidades S.I.
10mgL 10
Albmina ALB 30 30
mg/L
mg/l mg/l
10 0.9 mmol/L
80 80
50 4.4 mmol/L
Creatinina mg/dl
CRE mg/L
100 mg/dl 8.8mg/L
mmol/L
mg/dl
200 mg/dl
150mg 17.7 mmol/L
150mg
300 mg/dl 26.5 mmol/L
Relacin < 30 mg/g
/L normal < 3.4 mg/mmol
/L normal
albmina A:C 30- 300 mg/g 3.4 -33.9 mg/mmol
creatinina anormal anormal
> 300 mg/g altamente > 33.9 mg/mmol
anormal Altamente anormal
Tabla 1. Tabla de resultados
Bilirrubinas:
TIRAS REACTIVAS: N-MULTISTIX:
1. Humedezca la tira reactiva con orina recin emitida, se sumerge completa y
brevemente para evitar la dilucin de los componentes de la tira, escurra la tira
para eliminar el exceso de orina y compare el color con la carta de color en el
tiempo indicado.
2. Siga las instrucciones del fabricante con
fidelidad.
00
92
NOTA: Las tiras reactivas no se deben usar en
sangre.
PRUEBA CONFIRMATORIA ICTOTES
Para realizar la prueba:
1. Sobre una toalla de papel colocar la almohadilla absorbente que viene

incluida con el
Ictotest. Agregue 10 gotas de orina sobre la almohadilla.
2. Tomar una tableta reactiva Ictotest en la tapa del frasco y colocarla en el
centro de la almohadilla hmeda no tocar la almohadilla con los dedos) tapar
rpidamente el frasco.
3. Colocar una gota de agua sobre la tableta esperar 5 segundos y luego colocar
una segunda gota de agua de tal manera que se derrame sobre la almohadilla.
4. A los 60 segundos observe el color desarrollado sobre la almohadilla
alrededor de la tableta. El desarrollo de un color azul o morado sobre la
almohadilla indica presencia de bilirrubina. Deber ignorarse el tono rosa o rojo.
Figura 31. Lectura de bilirrubiba

por medio de tableta
Negativa Positiva
00
93
TIRA REACTIVA CLINITIX
Glucosa ox
oxidasa
cido glucnico + perxido de
Glucosa + Oxgeno (aire)
hidrgeno
Peroxidasa
Perxido de hidrgeno + O-toluidina oxidasa (F18
o- toluidina
azul) + H2O
TABLETAS DE CLINITEST
Orina + sulfato de cobre +

cido ctrico + hidrxido de xido cuproso
sodio + carbonato de sodio
TABLETAS REACTIVAS ACETEST
Orina + 1.0 mg nitroprusiato de

sodio + 94 mg fosfato disdico
+ 9.0 mg cido aminoactico +
73 mg borato de sodio + 20 mg
lactosa violceo
00
94
00
95
REACCIN DEL ANILLO DE HELLER
Orina + 1.0 mL cido ntrico Formacin de un

concentrado anillo blanco
TIRA REACTIVA MICROALBUMIN
Albumina
Orina + 1.9 mg colorante de Compuesto coloreado

sulfoneftalena (del verde al agua
marina)
Creatinina
Orina + 2.5 mg sulfato cprico + 4.5

mg dihidroperxido de Compuesto coloreado (del
diisopropilbenceno + 2.0 mg anaranjado al verde o azul)
3,3,5,5-
BILIRRUBINA
TABLETA REACTIVA ICTOTEST
Compuesto coloreado
Orina + 0.46 mg 2,4-dicloro-
(del ocre al canela
anilina diazonio + 87.45 mg cido
tostado
sulfosaliclico
00
96
REACCIN DE ROTHERA
Orina + 20 gotas reactivo de Imbert Compuesto amarillo violeta

(5 g nitroprusiato de sodio + 50 ml
agua destilada + 50 ml cido actico
glacial)+ 1 mL amoniaco concentrado
Figura 33. Diagrama Ecolgico: tira reactiva.
10.7. EVALUACION
Ver anexo I . Instruemnto de Evaluacin
10.8. BIBLIOGRAFIA
1.-Argeri Lopardo. 1993.Anlisis de Orina. Fundamentos y Prctica. Mxico. Editorial mdica

Panamericana
2.- Althof S, Kindler J, Heintz R. 2003. El sedimento urinario. Editorial Mdica Panamericana.
Mxico.
3.- ngel, M., G. y ngel, R., M. 2000. Interpretacin Clnica de Laboratorio 6. Edicin. Editorial
Mdica Panamericana. Bogot Colombia
4.- ngel M.; G. Diccionario de Laboratorio aplicado a la Clnica 2. Edicin,2000, Bogot
Colombia. Editorial Mdica Panamericana
5.- G. Ruiz Reyes .A. Ruiz Reyes. Fundamentos de interpretacin Clnica de los exmenes de
laboratorio. 2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
6.- Hamilton/M.B. Rose. 1985. Diagnostico Clnico.-1 Edicin. Editorial Interamericana, Mx
00
97
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 11. OBSERVACIN AL MICROSCOPIO DE

SEDIMENTO URINARIO
11.1 GENERALIDADES
El examen microscpico constituye una parte vital del anlisis de orina de rutina.
Es una herramienta diagnostica valiosa para la deteccin y evaluacin de
trastornos renales y del tracto urinario, as como de otras enfermedades
sistemticas. El valor del examen microscpico depende de 2 factores
fundamentales:
1) El examen de una muestra adecuada.

2) El conocimiento de la persona que realiza el
estudio.
La mejor muestra para el anlisis de orina de rutina es la primera orina de la
maana, ya que por lo general proporciona el medio concentrado y cido
necesario para mantener estructuras como cilindros y hemates.
El sedimento debe examinarse lo antes posible despus de su recoleccin, pero si
no es posible hacer el examen en forma inmediata, puede refrigerarse la muestra
durante algunas horas.
-Clulas -
Entre las clulas presentes en la orina se encuentran eritrocitos (hemates o
glbulos rojos), leucocitos (glbulos blancos) y clulas epiteliales provenientes de
cualquier punto del tracto urinario, desde los tbulos hasta la uretra, o como
contaminantes procedentes de vagina o vulva.
Eritrocitos:
00
98
Normalmente no aparecen hemates en la orina; sin embargo, la presencia de 1-2
hemates por campo de gran aumento por lo general no se considera anormal.
Leucocitos:
En promedio, la orina normal puede contener hasta 2 glbulos blancos por campo
de gran aumento. Son de mayor tamao que los eritrocitos, pero ms pequeos
que las clulas del epitelio renal.
El aumento de leucocitos en la orina esta asociado con procesos inflamatorios en
el tracto urinario o en sus adyacencias. La presencia de gran nmero de leucocitos
en la orina, en especial cuando se encuentran en cmulos, es muy sugestiva de
infeccin aguda como pielonefritis, cistitis, uretritis.
Clulas Epiteliales:
Pueden provenir de cualquier sitio del tracto urinario, pueden encontrarse en la
orina como consecuencia del desprendimiento normal de clulas viejas. Un
incremento indica inflamacin de la porcin del tracto urinario donde proceden.
Se conocen 3 tipos fundamentales de clulas
epiteliales:
- Tubulares
- De Transicin
- Pavimentosas
- Cristales -
Por lo general no se encuentran cristales en la orina recin emitida, pero aparecen
dejndola reposar durante un tiempo. Cuando la orina esta sobresaturada con un
compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de
ste se encuentran alteradas, el resultado es la formacin de cristales. En
algunos casos esta precipitacin se produce en el rin o en el tracto urinario y
puede dar lugar a la formacin de clculos urinarios (piedras). Entre los cristales
de mayor importancia se encuentran la cistina, la tirosina, la leucina, el
colesterol y las sulfamidas.
La formacin de cristales depende del
pH.
00
99
Orinas cidas.-
Los cristales ms comunes que se pueden encontrar en este tipo de orina son:
el cido rico, oxalato de calcio y los uratos amorfos.
Con menor frecuencia hay cristales de sulfato de calcio, uratos de sodio, cido
hiprico, cistina, leucina, tirosina, colesterol y sulfamida.
Orinas Alcalinas.-
Entre los cristales encontrados se incluyen: fosfato triple (fosfato amonico-
magnesico), fosfatos amorfos, carbonato de calcio, fosfato de calcio y biuratos de
amonio, tambin llamados uratos de amonio.
Cilindros -
Se forman en la luz de los tbulos del rin. Pueden formarse por precipitacin o
gelificacin de la mucoprotena de Tamm-Horsfall, por agrupamiento de clulas o
de otros materiales dentro de una matriz proteica, por adherencia de clulas o de
material a la matriz, o por conglutinacin de material en el interior de la luz
tubular. Algunos cilindros pueden contener protenas plasmticas.
Los cilindros se disuelven en orinas alcalinas, en orinas neutras de densidad 1.003
o menos. La presencia de cilindros en la orina se acompaa con proteinuria.
Pueden estar presentes en casos de dao glomerular, dao tubular, inflamacin
renal, infeccin renal.
Los diferentes tipos de cilindros
son:
Cilindros hialinos, eritrocitarios, leucocitarios, epiteliales, granulosos, creos
y grasos.
La presencia de cilindros se informa haciendo referencia al tipo y nmero por
campo de bajo aumento.
Estructuras Diversas -
Otras estructuras que pueden aparecer en la orina son: bacterias, hongos,
cilindroides, espermatozoides, moco y grasa.
Artificios -
00
100
Una variedad de objetos extraos pueden entrar en la muestra de orina durante la
recoleccin, al transportarla, etc. Dentro de los cuales se encuentran: cristales de
almidn, fibras, gotitas de aceite o estructuras diversas.
Parsitos -
Ocasionalmente pueden encontrarse parsitos en la orina, ya sea porque el
tracto urinario ha sido contaminado por heces fecales o por contaminacin vaginal.
Entre los parsitos ms comunes se encuentran: Trichomonas vaginalis, Enterobius
vermicularis, Schistosoma haematobium, huevos de este mismo.
11.2 OBJETIVO
El alumno observar el sedimento al microscopio con la finalidad de identificar las
estructuras presentes en el mismo, de esta manera integrar los resultados de
propiedades fsicas y qumicas para correlacionarlos y emitir un posible
diagnstico.
5 Tiras reactivas para orina Multistix 10 SG

5 Tubos Urintek
2 Cmara Kova Glastic Slide
1 Colorante Kova Stemheimer-Malbin
1 Gradilla
5 Pipeta Pasteur
5 Orina recin emitida
1 Microscopio
1 Centrfuga
5 Clinitek 50
00
101
11.4.PROCEDIMIENTO
Antes de realizar la observacin del sedimento urinario es necesario conocer las

caractersticas fsicas y qumicas de la orina, ya que esto provee informacin
acerca de las estructuras que se pueden en ella, para lo cual se tendr que realizar
siguiendo las instrucciones de las prcticas anteriores.
A continuacin:
1. Deposite 12 ml de orina en un tubo de recoleccin Urintek.
2. Centrifugue durante 5 minutos a una velocidad de 1500 a 2000 rpm (calculado
para una centrfuga con rotor de radio aproximado de 6 pulgadas)
3. Elimine cuidadosamente 11 ml del sobrenadante y conserve en el tubo 1 ml
para re suspender el sedimento
4. Adicione al sedimento una gota de colorante Stemheimer-Malbin,
mezcle suavemente con una pipeta desechable hasta obtener una mezcla
homognea.
5. Con una pipeta Pasteur o con un capilar coloque una gota de la suspensin del
sedimento teido en la esquina de una cmara de KOVA Glastic slide 10.
6. La cmara se llena por capilaridad.
Figura 34. Localice la cmara y las estructuras de mayor tamao (cilindros)

con Objetivo DE 100X.
Figura 35. Estudie los otros elementos formes con Objetivo de aprendizaje 400 X.
00
102
Figura 36. Estudie los otros elementos formes con Objetivo de aprendizaje 400 X.
7. Para cuantificar el nmero de elementos formes realice el conteo en 10

cuadros pequeos (vistos con 100X) o en 5 cuadros (visto con 400X).
Determine el promedio y multiplique por el factor 7.5. El resultado es el
nmero de elementos formes/l.
GALERIA DE IMAGENES
Figura 37. Eritrocitos Figura 38. Leucocitos
Figura 39- Clulas epitelio renal Figura 40. Clulas del epitelio de transicin
Fiigura 41. Clulas epitelio plano Figura 42 Clulas del epitelio
00 dtransicin
103
Figura 43. Acido rico Figura 44. Oxalato de Calcio
Figura 45. Urato amorfo Figura 46. Acido rico
Figura 47. Cistina Figura 48. Leucina
00
104
Figura 49. Tirosina Figura 50.- Colesterol
00
105
Figura 51. Bilirrubina Figura 52.. Cristales de
contraste radiogrfico
Figura 53. Fosfato triple Figura 54. Fosfato triple
00
106
Figura 55. Fosfato amorfo Figura 56. Placa de fosfato de calcio
Figura 57. Cilindro eritrocitario Figura 58. Cilindro leucocitario
Figura 59. Cilindro hialino Figura 60. Espermatozoides
00
107
Figura 61. Levaduras Figura 62. Filamentos mucoides
Figura 63. Fibras Figura 64. Cilindro granuloso y cabello
Figura 65. Cristales de almidn Figura 66. Enterobius vermicularis
00
108
REPORTE DE RESULTADOS:
Examen Microscpico del Sedimento.

(Campo de gran aumento, x 400)
ELEMENTOS FORMADOS RESULTADOS VALOR DE

REFERENCIA
Eritrocitos: Por campo 0 a 1 por campo
Leucocitos: Por campo 0 a 4 por campo
Cilindros (tipo / nmero): Por campo Ocasionales
Granulosos Hialinos
Eritrocitarios Creos
Leucocitarios Mixtos
Leucocitos y clulas epiteliales

Cristales:
ELEMENTOS FORMADOS RESULTADOS VALORES DE

REFERENCIA
Clulas epiteliales Por campo Ocasionales
Filamentos de Mucina Por campo Ocasionales
Bacterias Por campo Escasas
Levaduras Por campo Ausentes
Piocitos Por campo Ausentes
Tabla 3.- Resultados del exmen microscpico
00
109
Son residuos no peligrosos, se desechan en la basura municipal
11.6 EVALUACION
11.7 BIBLIOGRAFIA

Panamericana
Mxico.
00
110
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 12. EXAMEN GENERAL DE ORINA
12.1 GENERALIDADES
Un examen general de orina completo consiste

en:
Examen de las caractersticas fsicas, nos da informacin del aspecto, color,
olor, densidad)
Examen de las propiedades qumicas (pH, protenas glucosa, bilirrubina,
nitrito, sangre, etc.)
Examen microscpico del sedimento.- Nos da informacin acerca de la
presencia de cilindros, eritrocitos, leucocitos, cristales, bacterias, clulas, etc.)
Actualmente se emplea el trmino
uroanlisis.
Este debe efectuarse bajo las siguientes
circunstancias:
Un examen mdico de
rutina
Examen regular en pacientes de ginecologa y
obstetricia.
Como un dispositivo de seleccin para la deteccin de infecciones en el tracto
urinario (especialmente en pacientes en edad avanzada y peditrica).
Antes de la ciruga.
Con pacientes
hospitalizados.
Una correcta evaluacin de este anlisis nos puede proveer de informacin
sobre el metabolismo de carbohidratos, funcin renal, infeccin del sistema
00
111
urinario, equilibrio cido- bsico y condiciones hemolticas. Algunas condiciones
como la infeccin de la vejiga pueden estar presentes pero en forma
asintomtica el paciente no muestra ningn sntoma- Un adecuado
desarrollo del uroanlisis puede frecuentemente detectar condiciones
asintomticas.
12.2 OBJETIVO
El alumno ser capaz de integrar la metodologa sealada anteriormente para

efectuar un examen general de orina, utilzando de manera correcta los equipos
de laboratorio (analizadores), para poder establecer un posible diagnstico
clnico.
5 Tubos Urintek 1 Microscopio
1 Gradilla 1 Centrfuga
5 Pipeta Pasteur 1 Clinitek 50
1 Cmara para sedimento

10 Gasa
5 Papel absorbente
5 Primera orina de la maana (chorro medio)
5 Tiras reactivas para 10 analitos
1 Colorante Stemheimer-Malbin
1 Acetest (si fuese necesario)
1 Ictotest (si fuese necesario)
1 Clinitest (si fuese necesario)
Microalbumin (si fuese necesario)
00
112
12.4.PROCEDIMIENTO
Emplee las tcnicas descritas en las prcticas 9 a 11.
Los desechos son los mismos sealados en las prcticas correspondientes
00
113
Resultados:
Nombre del Paciente:
Edad: Gnero: Fecha y hora de la toma de muestra:
EXAMEN GENERAL DE ORINA (EGO).
Examen Fsico
Volumen: mL
Color:
Aspecto:
Examen Qumico*
PARMETRO RESULTADOS VALORES DE REFERENCIA
Gravedad Especfica 1.010 - 1.025
PH 4.6 8
Estereasa Leucocitaria g / dL 0 g / dL
Nitritos NEGATIVOS
Protenas mg / dL 0 mg / dL
Glucosa Mg NO DETECTABLE
Cetona mg / dL 0 mg / dL
Urobilingeno UE / dL HASTA 1 UE / dL
Bilirrubina mg / dL 0 mg / Dl
Hemoglobina gL 0 gL
*Lectura de la tira reactiva MULTISTIX-SG10 en el equipo semi-automatizado CLINETEK.

Examen Microscpico del Sedimento.
(Campo de gran aumento, x 400)
ELEMENTOS FORMADOS RESULTADOS VALOR DE

REFERENCIA
Eritrocitos: / dL Por campo 0 a 1 por campo
Leucocitos: Por campo 0 a 4 por campo
Cilindros (tipo / nmero): Por campo Ocasionales
Granulosos Hialinos
Eritrocitarios Creos
Leucocitarios Mixtos

Leucocitos y clulas epiteliales
Cristales:
00
114
ELEMENTOS FORMADOS RESULTADOS VALORES DE
REFERENCIA
Clulas epiteliales Por campo Ocasionales
Filamentos de Mucina Por campo Ocasionales
Bacterias Por campo Escasas
Levaduras Por campo Ausentes
Piocitos Por campo Ausentes
Tabla 4.- Resultados del examen general de orina
12.5 CUESTIONARIO
1. Anota dos factores normales y dos patolgicos que hacen que el rin produzca mayores
cantidades de orina.?
2. Diga cules son los procesos que se llevan a cabo en el rin para la formacin de la orina.?
3. Indica la importancia clnica que tiene el realizar el examen general de orina en el
paciente.?
4. Indica para cada uno de los parmetros qumicos, que situaciones (enfermedades o
patologas) se relacionan con niveles elevados.?
5. En qu situacin clnica est indicada la realizacin de la microalbuminuria. Explica?
Lo sealado en las prcticas 9-11
12.7 EVALUACION
00
115
12.8 BIBLIOGRAFIA

Panamericana
Mxico.
00
116
00
117
SUBCOMPETENCIA 3
PRCTICA 13. DEPURACIN DE CREATININA EN ORINA
13.GENERALIDADES
La creatinina srica constituye un ndice ms sensible de lesin renal, porque la
lesin o trastornos de los riones es prcticamente la nica causa de que
incremente la concentracin del metabolito.
La creatinina es un producto terminal no protenico del metabolismo de la
creatina y a semejanza de esta ltima, aparece en suero en cantidades
proporcionales a la masa muscular; a diferencia de la creatina los riones la
excretan fcilmente, con mnima o nula resorcin por tbulos.
La creatina es un componente de importancia en los msculos, cerebro y sangre.
En el msculo se encuentra en forma de reserva adicional de energa y es
sintetizada en el hgado.
El anhdrido de la creatina, la creatinina se forma y excreta en cantidades
constantes por una reaccin irreversible, y constituye el principal producto
terminal de la creatina. Su produccin es proporcional a la masa total del
msculo y no es modificada relativamente por la actividad fsica, dieta o
volumen urinario normales; por lo que es eliminada del plasma
fundamentalmente por filtracin glomerular y excretada en la orina. Su
concentracin es de
1.5 gr/L de orina. No hay recirculacin de la creatinina, razn por la cual el ndice
de depuracin de esta sustancia es relativamente grande y constante, y por esta
causa constituye un ndice eficaz de la funcin renal.
La biognesis de la creatinina se realiza en primera instancia en el rin, donde
intervienen dos aminocidos la glicina y la arginina que por accin de una
transaminidasa reacciona formando glicociamina y ornitina. La glicociamina en
00
118
presencia de S-adenosil metionina conduce a la formacin de creatinina y S-
adenosil homocisteina.
Las concentraciones de creatinina en orina y plasma deben expresarse en las
mismas unidades (generalmente en mg/100 mL).
13.2 OBJETIVO
A travs de este estudio se evaluara la filtracin glomerular y se detectara

posible lesin renal
1 Centrifuga
2 Pipetas graduadas de 1,5 y 10 ml
1 Espectrofotmetro
1 Gradilla
Picrato
Hidrxido de sodio
1 Orina de 24 horas diluida 1:50 con agua destilada
Patrn: Creatinina 2 mg/dl (176.8 mol/L) Listo para ser usado
13.4.PROCEDIMIENTO
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA: La creatinina en solucin alcalina reacciona con el

picrato para formar un compuesto rojo anaranjado (Reaccin de Jaff), color que
es medido por la lectura de dos puntos.
00
119
PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE TRABAJO:
Mezclar un volumen del Reactivo 1 con un volumen del reactivo 2
Longitud de onda 510 nm
Cubeta 1 cm de paso de
luz Temperatura 30C
Lectura contra aire
PROCEDIMIENTO SERAPAK AMES DE BAYER

Pipetee:
Patrn Muestra
Sol. Trabajo 2 mL 2 mL
Atemperar a 30C
Muestra -- 0.2 mL
Patrn O.2 mL --
Tabla 5.- Procedimiento serapak ames de bayer
Conecte inmediatamente el cronometro y mezcle, leer las absorbencias (A1)
del patrn y la muestra contra aire a los 20 seg.
Repita las lecturas (A2) exactamente a los 60 segundos despus de la primera
lectura.
CLCULOS:
A = A1-A2
Am 1 = mg creatinina/dL
Orina
Ap x 8.4 = mmol de creatinina/L
VALORES NORMALES:
Orina: Varones 0.7-1.2 mg/dL
00
120
61-106
mol/L Mujeres 0.5 1.0
mg/dL
44-88 mol/L
Se mide la creatinina en sangre y orina y se relaciona con la siguiente frmula:
NOTAS:
El mtodo es lineal hasta 20 mg/dL de creatinina (1768 mol/L).
Para concentraciones mayores mezclar un volumen de la muestra, repetir el
anlisis y multiplicar por 2 el resultado.
La velocidad de reaccin y la absorbencia de los productos de la reaccin
estn ntimamente ligados a la temperatura; por lo tanto, la muestra y el
patrn deben leerse a la misma temperatura exactamente.
El anlisis tambin se puede llevar a cabo a cualquier temperatura entre 20
y 37C, siempre que la solucin y las cubetas estn debidamente
termostatizadas.
Orina + 2 mL picrato + hidrxido de Compuesto rojo anaranjado (Reaccin

sodio de Jaffe).
Figura 67.- Diagrama Ecolgico: depuracin de creatinina.
13.6 EVALUACION
00
121
13.7 BIBLIOGRAFIA
1.-Argeri Lopardo. 1993.Anlisis de Orina. Fundamentos y Prctica. Mxico.

Editorial mdica Panamericana
2.- Althof S, Kindler J, Heintz R. 2003. El sedimento urinario. Editorial Mdica

6.- Hamilton/M.B. Rose. 1985.Diagnostico Clnico.-1 Edicin. Editorial
Interamericana, Mx
00
122
S
ANEXOS
00
123
ANEXO I. INSTRUMENTOS DE EVALUACIN
(INDIVIDUAL).
Fuente: Martha Rosales Raya / Adecuado por comit de academia.
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR LA BITCORA DE LABORATORIO

Fuente: M.E.S. Luis Bolaos Celis / Adecuado por comit de academia.
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL REPORTE DE LABORATORIO

Fuente: M en C. Rafael Manuel de Jess Mex lvarez/ Adecuado por comit de
academia.
00
124
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL DESEMPEO EN EL LABORATORIO
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL DESEMPEO EN EL LABORATORIO (INDIVIDUAL)

ALUMNO: Grado/grupo: Matricula:
Puntos: 1 2 3 Observacion
Ponderaci
es y
Aspectos a evaluar Escala n
sugerencias
Acondiciona y prepara A veces Con regularidad Siempre
su rea de trabajo
Prepara en forma A veces Con regularidad Siempre
adecuada equipos y
materiales
Forma de trabajo del Individual Con su equipo Colaborativamente
alumno
Es organizado en su Escasamente Medianamente Totalmente

forma de trabajo
Toma notas Medianamente

Inadecuada Adecuadamente
elaboradas y aporta de adecuada
su experiencia
Demuestra
Insuficiente Suficiente Excelente
conocimiento al
realizar las actividades
de la prctica
Muy cuidadoso y
Emplea de forma Poco cuidadoso Cuidadoso
meticuloso
adecuada equipo(s),
reactivos y materiales
Realiza los Muy cuidadoso y

Poco cuidadoso Cuidadoso
experimentos meticuloso
atendiendo a las
medidas de seguridad
Atiende a las Medianamente

indicaciones de Inadecuadamente Adecuadamente
adecuada
trabajo del docente
y/o instructores
Su actitud de trabajo Con compaeros,
es respetuoso con Slo con Con compaeros e instructor y
compaeros, compaeros instructor sujeto/objeto de
instructor y estudio
sujeto/objeto de
estudio
En el equipo realiza de Escasamente Medianamente Totalmente
adecuada las tareas
que se le
encomiendan
En el desarrollo de la En todo el
Por intervalos
prctica emplea el Escasamente desarrollo de la
breves
tiempo prctica
eficientemente
Al concluir la prctica
colabora con el equipo Escasamente Medianamente Totalmente
con la limpieza y
entrega de materiales
00
125
Total de puntos
Fuente: Martha Rosales Raya / Adecuado por comit de academia.
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR LA BITCORA DE LABORATORIO
EQUIPO No.
Puntos Puntos
Criterio Indicadores
4 3 2 1 Ponderados
Es una libreta costurada, enumerada,
Presentacin en buen estado, aspecto x 0.2=
presentable
Usa ttulos y subttulos para
Forma 20%
organizar y guardar un orden en el x 0.2=

registro de las actividades
Organizacin realizadas en el laboratorio.
Se indica quienes participaron en el
experimento mediante un listado x 0.2=
con firmas.
Describe en forma breve, clara y X 0.8=
precisa el experimento(s) a realizar
Introduccin Explica en forma breve y clara lo
que se pretende probar X 0.8=
experimentalmente
Describe el procedimiento del
experimento(s) con enunciados X 0.8=
Procedimiento* claros y completos.
Presenta una secuencia correcta de X 0.8=
los pasos y estn enumerados
Se registra los acontecimientos y
Contenido 80%
sucesos que ocurren como resultado

del experimento(s), mediante datos, X 0.8=
esquemas, dibujos, tablas, fotos o
videos segn se requiera para cada
Registro de caso.
observaciones* Se registran las observaciones en
secuencia correcta de acuerdo al X 0.8=
orden de los eventos.
Se registr los eventos o sucesos
significativos del experimento(s) X 0.8=
observado.
Emplea un lenguaje tcnico y propio
Conceptos de la disciplina para expresar X 0.8=
cientficos principios, hechos o ideas
registradas.
Total de
*Estos aspectos son crticos no pueden faltar en la bitcora puntos
Fuente: M.E.S. Luis Bolaos Celis / Adecuado por comit de academia.
00
126
ESCALA ESTIMATIVA PARA EVALUAR EL REPORTE DE LABORATORIO
EQUIPO No.
Puntos Puntos
Criterio Indicadores
4 3 2 1 Ponderados
Es un texto en un folder de aspecto presentable,
Presentacin elaborado a computadora, hojas blancas tamao X 0.2=
carta, con una portada de datos generales.
Fecha de Entrega el informe de laboratorio completo en la X 0.2=
Forma 20%
entrega fecha establecida
Organizacin Usa ndice, ttulos y subttulos para organizar el X 0.2=

informe de laboratorio que presenta.
Ortografa Presenta un mximo de dos errores ortogrficos o X 0.2=

de puntuacin
Referencias El documento contiene la bibliografa citada en el X 0.2=
bibliogrficas informe para sustentar el trabajo.
Describe en forma breve, clara y precisa el X 0.8=
experimento(s) a realizar
Introduccin
Redacta en forma breve y clara el objetivo de lo X 0.8=
que pretende lograr experimentalmente.
Hiptesis Se formula hiptesis el experimento en forma
(En caso de clara basada en el razonamiento del fundamento X 0.8=
requerirse) terico.
Describe el procedimiento del experimento(s) con X 0.8=
enunciados claros y completos.
Procedimiento*
Presenta una secuencia correcta de los pasos y X 0.8=
estn enumerados
Se reporta en orden y en forma correcta los datos
de los acontecimientos y sucesos que ocurrieron X 0.8=
Contenido 80%
como resultado del experimento(s),

Registro de Se construye de manera correcta: esquemas,
observaciones* dibujos, tablas y grficos que muestran de manera X 0.8=
objetiva los resultados obtenidos
Se reporta los eventos o sucesos significativos del X 0.8=
experimento(s) observado.
Se discuten los resultados (datos experimentales
obtenidos) con citas bibliogrficas que lo X 0.8=
soporten.
Discusin y Se concluye contrastando objetivo(s) con X 0.8=

Conclusin* resultados y referencias bibliogrficas.
Se justifica la aceptacin o rechazo de la
hiptesis, contrastando los datos experimentales X 0.8=
obtenidos con las referencias bibliogrficas (en
caso de manejar hiptesis).
Conceptos Emplea un lenguaje tcnico y propio de la

disciplina para expresar principios, hechos o ideas X 0.8=
cientficos
registradas.
Total de
*Estos aspectos son crticos no pueden faltar en el reporte puntos
Fuente: Rafael Manuel de Jess Mex lvarez / Adecuado por comit de academia.
00
127
ANEXO II. LINEAMIENTOS GENERALES EN MATERIA DE SEGURIDAD E
HIGIENE A SEGUIR EN LOS LABORATORIOS
Las actividades de carcter docente e investigador que se llevan a cabo en las

prcticas de laboratorios del Programa Educativo de Qumico Farmacutico
Bilogo de la Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas (FCQB) de la Universidad
Autnoma de Campeche (UAC) conllevan, en determinados casos, un riesgo
dependiendo del tipo de trabajo que se desarrolle.
Este documento recoge los lineamientos necesarios para llevar a cabo un trabajo
seguro y eficiente atendiendo a las indicaciones del Reglamento Federal de
Seguridad e Higiene y Medio ambiente de Trabajo, publicado en el Diario Oficial
de la Federacin, el 21 de enero de 1997, Normatividad en materia de Seguridad
e Higiene de la Secretaria del Trabajo y Previsin Social, Sistema de Gestin
Ambiental Yum Kaax ISO 14001:2004 de la Universidad Autnoma de Campeche
y Reglamento Interno de los Laboratorios en los que se realizan prcticas de
docencia de la FCQB de la UAC.
Solo se permitir trabajar a los alumnos bajo la responsabilidad de un

profesor o de la persona asignada de manera previa por el Coordinador del
Programa Educativo o de Posgrado e Investigacin.
Realizar nicamente tareas enmarcadas en el mbito de trabajo del
laboratorio para las que ha sido autorizado.
Se deber llevar siempre la bata de manga larga y los equipos de
proteccin individual exigidos segn el tipo de trabajo que se realice
(goggles, mascarilla protectora, guantes de latex, calzado cerrado que
cubra el empeine, de tacn ancho o corrido con altura mxima de 4 cm, de
00
128
piel, que no sea de tela ni de material plstico, incluida la suela) segn lo
solicite el profesor.
No se permite ingresar con bermudas o short y, en el caso de las mujeres,
el largo de la falda debe ser debajo de la rodilla.
Hombres y mujeres con cabello largo debern portar el pelo recogido
hacia atrs.
No llevar pulseras, colgantes, mangas anchas ni prendas sueltas que
puedan trabarse en montajes, equipos o mquinas.
No fumar, comer ni beber.
No realizar reuniones o celebraciones.
No guardar alimentos ni bebidas en los frigorficos del laboratorio.
Mantener el orden en las sesiones de laboratorio y tratar con respeto al
laboratorista, compaeros y profesores.
Verificar que el material y los equipos de laboratorio a emplear se
encuentren en ptimas condiciones de funcionamiento.
Antes de hacer uso de cualquier material y/o equipo consulte su

operatividad con el laboratorista.
Mantener las mesas de trabajo limpias y sin objetos personales en las
superficies (libros, cajas o accesorios innecesarios) para el trabajo que se
est realizando.
Tener la autorizacin para el uso de un producto, equipo o instalacin
concreta.
Lavar y enjuagar todo el material de vidrio con agua destilada y secarlo.
Leer la etiqueta o consultar las fichas de seguridad de productos qumicos
antes de utilizarlos por primera vez.
Para efectuar pipeteos utilice siempre propipeta o perilla
No tocar ni probar, sin el uso de guantes a los productos qumicos.
Calentar tubos de ensayo de lado y utilizando pinzas.
00
129
Por su seguridad utilizar gradillas y soportes.
Comprobar la temperatura de los materiales antes de sujetarlos
directamente con las manos.
En caso de ser necesario utilizar las campanas de extraccin.
Etiquetar adecuadamente los frascos y recipientes a los que se haya
transvasado algn producto o donde se hayan preparado mezclas,
identificando su contenido, a quin pertenece y la informacin sobre su
peligrosidad (reproducir el etiquetado original).
Reportar cualquier accidente o anomala ocurrida durante la prctica, de
manera inmediata al laboratorista.
Salvaguardar todos los implementos y dispositivos de seguridad e higiene
(extintor, sealamientos, regadera y lavaojos de emergencia, etc.)
habilitados en el interior del laboratorio.
Revisar la Normativa correspondiente de acuerdo a la NOM-062-ZOO-
1999, Cuidado y uso de animales de laboratorios y la NOM-087-
SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental-Residuos
peligrosos biolgico-infecciosos-Clasificacin y especificaciones de
manejo para el caso de emplear animales de laboratorio y muestras
biolgico-infecciosas respectivamente.
El material y equipo que se rompa o sufra desperfectos en el transcurso de
la prctica, se deber reportar al laboratorista de inmediato.
Asegurar la desconexin de equipos, agua y gas al terminar el trabajo.
Recoger materiales, reactivos, equipos, y depositar los residuos en los
contenedores correspondientes.
Lavarse las manos antes de dejar el laboratorio.
00
130
ANEXO III
FORMA DE REPORTE DE LAS PRCTICAS
PORTADA
1. LOGOTIPO DE LAUAC Y DE LA FACULTAD
2. NOMBRE DE LA UNIVERSIDAD
3. NOMBRE DE LA FACULTAD O ESCUELA
4. NOMBRE DEL PROGRAMA EDUCATIVO
5. NOMBRE DE LA ASIGNATURA
6. GRADO EN QUE SE IMPARTE
7. NOMBRE DEL MAESTRO RESPONSABLE DE LA ASIGNATURA
8. NOMBRE DE LOS INTEGRANTES DEL EQUIPO
9. FECHA DE ELABORACIN
PRCTICAS:
1. NUMERO PROGRESIVO DE LA PRCTICA.
2. NOMBRE DE LA PRCTICA.
3. INTRODUCCIN: INCLUYE JUSTIFICACION, OBJETIVOS E
HIPOTESIS (OPCIONAL)
4. GENERALIDADES:
DEFINICION.
METABOLISMO.
FISIOLOGIA NORMAL Y ANORMAL (FISIOPATOLOGIA).
METODOS DE ANALISIS (DISCUSION VENTAJAS Y DESVENTAJAS).
INDICACIONES EN LA OBTENCION Y PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS
BIOLOGICAS. (INCLUIR CITAS BIBLIOGRFICAS)
1. METODOLOGA UTILIZADA:
INCLUYE PROCEDIMIENTOS, MATERIALES EQUIPOS, REACTIVOS DE LABORATORIO
Y MUESTRAS PROBLEMA Y/O BIOLGICAS UTILIZADAS.
00
131
FUNDAMENTO: DESCRIPCION ESCRITA, DESCRIPCION ESQUEMATIZADA POR
MEDIO DE FORMULAS.
REACTIVOS: (PREPARACION) CASA COMERCIAL? INDICAR CUAL.
MATERIAL PARA LA PRUEBA: BIOLOGICO.
TECNICA:
CALCULOS.
VALORES DE REFERENCIA: CURVA DE CALIBRACION (SI ES NECESARIA).
2. RESULTADOS.
INCLUIR DATOS DEL PACIENTE CON VALORES DE REFERENCIA
INTERPRETACIN CLINICA: VALORES ELEVADOS SE ENCUENTRAN EN:
VALORES DISMINUIDOS SE ENCUENTRAN EN:
3. OBSERVACIONES
4. CONCLUSIONES
5. CUESTIONARIO RESUELTO
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
LIBRO:
NOMBRE DEL AUTOR (INICIANDO POR APELLIDOS, NOMBRES
COMPLETOS): TITULO Y SUBTITULO. TOMO. NUMERO DE EDICION.
VOLUMEN. PAGINAS.
REVISTAS:
NOMBRE DE AUTOR (IGUAL QUE EL LIBRO): TITULO DEL TRABAJO.
NOMBRE ABREVIADO OFICIAL DE LA REVISTA. PERIODICO. VOLUMEN.
NUMERO DE PRIMERA PGINA. AO DE PUBLICACION.
TESIS:
NOMBRE DEL AUTOR (IGUAL QUE ANTERIOR): TITULO DE TESIS.
UNIVERSIDAD. UBICACIN. INSTITUTO O FACULTAD DONDE SE REALIZ
LA TESIS.
NOTAS:
00
132
A) LOS AUTORES TIENEN UN APELLIDO Y UNO O DOS NOMBRES; SE
ESCRIBEN COMPLETOS Y CON LETRAS MAYSCULAS.
B) LOS OTROS AUTORES TIENEN DOS APELLIDOS Y UNO O DOS

NOMBRES SE ANOTAN COMPLETOS Y CON LETRAS MAYSCULAS.
EJEMPLOS:
1.- KAPLAN LAWRENCE A; PESCE AMADEO J.: Qumica Clnica. Tcnicas de

laboratorio-fisiopatologa- mtodos de anlisis. Edit. Mdica
Panamericana. Trad. Dr. Ubaldo Patrone. Buenos Aires. 1986. p (en
singular) 7 o pp (varias) 43-48, 510-513.
2.- SOTO LPEZ, ISMAEL: Napolen en la qumica forense.

Elementos Rev. De Ciencias exactas, Naturales y aplicadas. Universidad
Autnoma de Puebla. 2,45: 1987.
00
133
ANEXO IV DISPOSICIN DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICO INFECCIOSOS A.
PROCEDIMIENTOS
1. RECOLECCION
Diariamente el responsable de cada equipo de trabajo deber supervisar que los
recipientes de recoleccin para residuos peligrosos biolgico-infecciosos
cumplan los requisitos de etiquetado y que se lleve a cabo correctamente la
recoleccin de los mismos
Los requisitos de los recipientes son:

Color rojo
El smbolo de riesgo biolgico
Las siglas de residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI)
rea de trabajo
Tipo de residuo
Tratamiento
Figura 1. Tipos de bolsas y contenedores para RPBI
00
134
Recoleccin de los residuos peligrosos biolgicos infecciosos
rea de trabajo Recipiente Residuos peligrosos

Toma de muestra Contenedor de plstico Agujas y lancetas
con
Bolsas de plstico Jeringas que contengan
sangre
Bioqumica clnica tapa
Gradilla Tubos con paquete
globular y
Bolsas de plstico lquida.
Puntillas con suero
suero.
B. TRANSPORTE INTERNO
El responsable de cada equipo se responsabiliza del transporte de los residuos
peligrosos biolgico-infecciosos cumpliendo con las especificaciones definidas
en las etiquetas de los recipientes y que sean entregados al tcnico Laboratorista.
Cuando se termine de realizar el anlisis

Los tubos con suero, plasma u sangre total, despus de pesarlos, se
entregan al Tcnico del Laboratorio, el cual recibir los tubos y proceder a
almacenarlos de manera temporal.
Las bolsas de plstico se amarran, se pesan y se entregan de igual manera.
El contenedor de punzocortantes se tapa, mas no se sella, esto se realiza
solamente cuando llega a la capacidad recomendada (80 %).
C. ENVASADO (Despus del transporte y previo al tratamiento)

Se envasan los residuos peligrosos biolgicos infecciosos como se indica en
la Norma
Oficial Mexicana NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002
135
Tipos de residuos Estado fsico Envasado Colores
Recipientes Liquido Recipiente Rojo
con hermtico
Cultivos Slido Bolsas de Rojo

sangre de plstico
plstico
Residuos Slido calibre
Bolsas de Rojo
no plstico
Punzocortantes Slido calibre 200
Recipiente rgido Rojo
12.5 N
de
atmicos calibre 200
Metal
Figura 2. Tamao y Tipo de contenedores
Los recipientes se llenan a un 80% como mximo de capacidad se cierran

teniendo la leyenda que indique residuos peligrosos biolgico infecciosos
136
D. 4.-ALMACENAMIENTO (este corre a cargo del Tcnico de Laboratorio)
Las caractersticas de este espacio deben ser:

Encontrarse separado de alumnos, visitas, sitios de reunin y oficinas
Separado de lavabo y equipos
Deber contar con letreros alusivos de residuo peligrosos biolgico
infecciosos
Solamente debern tener acceso el personal capacitado y autorizado.
Su periodo de almacenamiento debe ser acorde a la Norma, tomando en
cuenta la cantidad total de RPBI generado en el Laboratorio al mes.
137
MARCO JURDICO
Reglamento Federal de Seguridad e Higiene y Medio ambiente de Trabajo.

Publicado en el Diario Oficial de la Federacin (D.O.F.), el 21 de enero de 1997.
NOM-002-STPS-2010,Condiciones de seguridad - Prevencin y proteccin contra
incendios en los centros de trabajo. D.O.F. 9-XII-2010.
NOM-005-STPS-1998,Relativa a las condiciones de seguridad e higiene en los
centros de trabajo para el manejo, transporte y almacenamiento de sustancias
qumicas peligrosas. D.O.F. 2-II-1999
NOM-010-STPS-1999,Condiciones de seguridad e higiene en los centros de
trabajo donde se manejen, transporten, procesen o almacenen sustancias
qumicas capaces de generar contaminacin en el medio ambiente laboral. D.O.F.
13-III-2000.
NOM-017-STPS-2008,Equipo de proteccin personal - Seleccin, uso y manejo en
los centros de trabajo. D.O.F. 9-XII-2008.
NOM-018-STPS-2000,Sistema para la identificacin y comunicacin de peligros y
riesgos por sustancias qumicas peligrosas en los centros de trabajo. D.O.F. 27-X-
2000.
NOM-026-STPS-2008,Colores y seales de seguridad e higiene, e identificacin
de riesgos por fluidos conducidos en tuberas. D.O.F. 25-XI-2008.
NOM-028-STPS-2004,Organizacin del Trabajo-Seguridad en los Procesos de
sustancias qumicas. D.O.F. 14-I-2005.
NOM-062-ZOO-1999. Cuidado y uso de animales de laboratorio. D.O.F. 18-VI-
2001.
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin ambiental-Salud ambiental-
Residuos peligrosos biolgico-infecciosos-Clasificacin y especificaciones de
manejo. D.O.F. 17-II-2003.
138
NOM-052-SEMARNAT-2005, que establece las caractersticas, el procedimiento
de identificacin, clasificacin y los listados de los residuos peligrosos. D.O.F. 23-
VI-2006.
Sistema de Gestin Ambiental Yum Kaax de la Universidad Autnoma de
Campeche. Octubre 2010.
Reglamento Interno de los Laboratorios en los que se realizan prcticas de
docencia de la Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas de la Universidad
Autnoma de Campeche. Agosto de 2012.
139

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Programa Educativo:

Qumico Farmacutico Bilogo

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS

CAMPECHE, CAMP. MARZO 2014

Lic. Adriana Ortz Lanz

Lic. Gerardo Montero Prez

Mtra. Mara Guadalupe Maldonado Velzquez

Q.F.B. Geovani Araceli Salinas Balderrabano

M. en C. Patricia Margarita Garma Quen

Ciertos compuestos orgnicos y otros inorgnicos forman parte de la vida animal y

COMPETENCIA DE LA Realizar los diferentes anlisis bioqumicos-clnicos para

1. Realizar los procesos de obtencin, manejo y

SUB-COMPETENCIAS 2. Aplicar mtodos y tcnicas analticas con calidad,

3. Interpreta los resultados de las pruebas analticas,

PRCTICA 1. EXTRACCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS

La sangre consta de una parte liquida, el plasma, en donde estn en suspensin

El alumno realizar correctamente la extraccin de muestras sanguneas capilar y

Toma de sangre capilar

Mediante ella se obtendr sangre sin modificar.

Figura 2. Toma de sangre de la planta del pie

Quite el casquete de la aguja y con el bisel hacia arriba introduzca la aguja en la

vena con un ngulo de 15 grados. Introduzca suavemente el tubo vacutainer en

el manguito de la aguja, de tal forma que la sangre penetre en el tubo. Trate de

Cuando se llene el tubo, quite el torniquete y retire el tubo vacutainer del

directa al sitio de puncin.

Figura 3. Obtencin de sangre venosa por vacutainer

Haga que el paciente se siente de manera que quede colocado paralelamente a

Figura 4. Posicion de la vena para la toma de muestra

1. Cmo se realiza la extraccin de sangre arterial?

Los materiales residuales, se depositan en la basura comn.

Figura 6. Diagrama ecolgico: Tratamiento de materiales punzocortantes.

Ver Anexo I Instrumentos de evaluacin.

PRCTICA 2. QUMICA SANGUNEA DE 3 COMPONENTES

La glucosa que es un monosacrido de 6 carbonos, es la fuente principal de

2.3 MATERIALES, EQUIPOS, Y REACTIVO

Equipo de qumica clnica Bs-120

1. Se prende el equipo con el botn verde ubicado en la parte lateral

2. Se prende el cpu y el monitor. Se oprime enter.

3. Se da doble click en el logo bs-120. Se selecciona ok.

4. Se escribi en usuario: admin y en contrasea:

5. Aparece la leyenda descargue primer segmento cubeta... se abre el

6. Aparece la leyenda coloque segm cub limp en...'', luego se abre el

7. Aparece la leyenda coloque segm cub limp en..., se selecciona

8. Aparece la leyenda coloque detergente en posicin 35... Se selecciona

9. Se espera a que alcance la temperatura de 37

11. Se selecciona calibrac y se marcan las pruebas a calibrar. Se selecciona ok

13. Se selecciona iniciar, se marca el disco no. 10. Y luego ok

16. Aparece la leyenda se ha finalizado test actual... Se selecciona reemplazar

17. En resultados se revisan los valores de cada paciente

18. Para salir del sistema se selecciona salir, ok.

19. Aparece la leyenda coloque detergente en posicin 35... Se selecciona

Longitud de onda: 505 (500-550 nm)

Cuadro 1. Tecnica de Glucosa

Mezclar y medir a una longitud de onda de 500 nm.

PROCEDIMIENTO Urea UV SERAPAK AMES DE BAYER:

Preparacin de la solucin de trabajo:

Poner inmediatamente en marcha el cronmetro y mezclar. Lea las

1 mg de urea corresponde a 0.467 mg de Nitrgeno de urea.

Suero: 10-50 mg/dL

La creatinina en solucin alcalina reacciona con el picrato para formar un

Longitud de onda 510 nm Cubeta 1 cm de paso de luz Temperatura 30C

PROCEDIMIENTO SERAPAK AMES DE BAYER

Cuadro 3. Tcnica de Urea

Conecte inmediatamente el cronometro y mezcle, leer las absorbencias (A1)