Espectroscopia

de
luminescncia
molecular
Fotoluminescncia
e Quimiluminescncia
Fluorescncia Molecular
Absoro de ftons emisso de ftons
Fosforescncia Fotoluminescncia
Absoro de ftons emisso de ftons
Quimiluminescncia
Excitao qumica emisso de ftons.

Aplicaes
Qualitativa Desvantagem Quantitativo
Os estados excitados so suscetveis desativao pelas colises e outros
processos,
Espectros muitas molculas no apresentam
caractersticos Baixosfluorescncia ou fosforescncia.
valores de limites de deteco (LOD
~ ppb) esto sujeito a srios efeitos
Por isso os mtodos luminescentes quantitativos
de interferncia.
Lquidos, slidos e gasosos Ampla linearidade
E comum utilizar esta tcnica combinada com tcnicas de separao como
cromatografia e eletroforese. Alta especificidade
 Fluorescncia
x Fosforescncia
Fluorescncia atmica Sdio: 3s 3p 3s
Absorve 589 nm emite 589 nm Fluorescncia ressonante
Fluorescncia molecular fluorescena: n * n
Absorve 490 nm emite 520 nm Deslocamento de Stokes
Fosforescncia antraceno: *
Absorve 280 nm emite 480 nm perda de energia?
Estados excitados Singleto e Tripleto
Diagrama de Nveis
Energticos de Molculas
Fotoluminescentes
Tambm chamado de diagrama
Jablonski
Velocidade de absoro ocorre
em cerca de 10-14 a 10-15s.
A emisso de fluorescncia
ocorre em 10-5 a 10-10s.
J a emisso de fosforescncia
ocorre em um tempo de 10-4 a
10s.
Transio singleto para tripleto
e improvvel (proibida)
 Processos de
Desativao
A molcula excitada pode Relaxao vibracional
retornar ao seu estado
fundamental pela combinao
de varias etapas mecnicas. Imediata (10-12 s) dissipao por
vibrao
Duas destas formas a Coliso com molculas do
fluorescncia e a fosforescncia
envolve a emisso de radiao. solvente
Aumento mnimo de temperatura
As outros processos de do sistema
desativao so no radioativos.
Dissipao de energia = perda de
S ser possvel observar energia
fluorescncia e fosforescncia Deslocamento de Stokes
se a trajetria para o estado
fundamental seja aquela que
minimiza o tempo de vida no emisso > excitao
estado excitado E emitida < E absorvida
 Processos de
Desativao
Converso interna
Processo intermolecular.
Proximidade entre nveis
eletrnicos excitado e nveis
vibracionais de um estado
eletrnico excitado de menor
energia(nveis superpostos)
Resultado prtico:

no importa qual exc

fluorescncia em
 Processos de
Desativao
Converso externa Cruzamento intersistema

Envolve transferncia de Ocorre com a inverso do spin de

energia da molcula excitada eltron excitado o que altera a
multiplicidade da molcula.
para molculas de solvente.
A probabilidade desta transio
depende da proximidade entre os
Obviamente depende de nveis energticos vibracionais.
condies intrnsecas ao
solvente e fatores que Fosforescncia
aumentem ou diminuam o
nmero de colises: Transio triplete singlete
menos provvel que a transio
Tipo de solvente singlete singlete tempo de
vida mdio grande.
Temperatura Evento raro: observado em
Viscosidade baixas temperaturas, solventes
Presena de supressores viscosos ou mesmo em slidos.
 Rendimento
Quntico
a razo entre o nmero de molculas luminescentes e o
nmero total de molculas excitadas; ou seja:

Levando em considerao a discusso feita sobre os

processos de desativao sugere que o rendimento seja
determinado pelas constantes de velocidade relativas para
cada processo.

=
+ + + ++
 Variveis que
Afetam Luminescncia
Fluorescncia e estrutura
Estruturas aromticas condensadas e/ou com alto grau de
conjugao apresentam alta eficincia quntica Ex:
Heterocclicos: no fluorescem
Heterocclicos condensados fluorescem!

Heterocclicos

Heterocclicos
Condensados
 Variveis que
Afetam Luminescncia
Fluorescncia e estrutura
A substituio em anis aromticos afetam a intensidade
relativa de fluorescncia e os valores dos max de
absoro/emisso
 Variveis que
Afetam Luminescncia
Fluorescncia e estrutura
Molculas flexveis tendem a relaxar por vibrao
A flexibilidade causa aumento da constante de converso
interna (kci) o que leva a desativao no-radiativa.

1 0,2
 Variveis que
Afetam Luminescncia
Solvente e Temperatura
Aumento de T ou diminuio de viscosidade do solvente
levam a um aumento no nmero de colises e portanto
aumenta a probabilidade por converso externa (supresso
colisional)
pH
A fluorescncia de compostos aromticos com
funcionalidades cidas ou bsicas apresentam forte
dependncia com o pH
Ex.: anilina/anilnio e fenol/fenolato
Obs: pKa de substncias no estado excitado podem variar
de 3 a 4 unidades em relao ao estado fundamental
 Variveis que
Afetam Luminescncia
Oxignio dissolvido
Oxignio e outras espcies paramagnticas tendem a
diminuir a fluorescncia pelo aumento do cruzamento
intersistemas (fosforescncia). Tambm possvel a
oxidao da espcie fluorescente
Outras molculas em soluo
Molculas com tomos pesados (tetrabrometo de carbono
e iodeto de etila) aumentam a velocidade de inverso de
spin.
Ex: Acrilamida e protenas