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Patologa 2007;45(3):126-40

Revista latinoamericana
Artculo de revisin

Interpretacin bsica de inmunohistoqumica. Caractersticas generales


de diversos anticuerpos y su localizacin celular y subcelular
Diego L Jorge Buys,* Csar O Lara Torres,**,*** Carlos Ortiz Hidalgo**,***

RESUMEN

En aos recientes la inmunohistocuqmica se ha convertido en una importante herramienta para el diagnstico histopatolgico. La tcnica
de inmunoflurescencia desarrollada por Albert Coons y colaboradores sent las bases de la inmunohistoqumica actual. Para la adecua-
da interpretacin de los inmunorreactantes los patlogos debemos de estar familiarizados con la localizacin celular y subcelular de los
anticuerpos. Hay antgenos celulares localizados en la membrana, el ncleo o el citoplasma as como antgenos extracelulares. Debido
a la gran variedad de factores capaces de influir en la demostracin de antgenos pueden surgir diversos problemas tcnicos y de inter-
pretacin. La fijacin, el tipo, la duracin, el pH del fijador, la temperatura, la sensibilidad de la clona utilizada, el sistema de deteccin y
el cromgeno, entre otros, son esenciales para la adecuada inmunomarcacin.
Palabras clave: inmunohistoqumica, anticuerpos, localizacin.

ABSTRACT

In recent years, immunohistochemistry has become and important tool in diagnostic histopathology. The immunoflorescence technique
described by Albert Coons and colleagues was the cornerstone for what latter became immunohistochemistry. Pathologists have to be
familiarized with the precise cellular and subcellular location of the immunohistochemical reaction for proper interpretations of immunos-
tains. There are cellular antigens with membranous, nuclear and cytoplasmic staining as well as extracellular antigens. Many technical and
interpretative pitfalls may arise because of a wide variety of factors that may influence the demonstration of antigens in paraffin embedded
tissue sections. Fixation, type of tissue, duration and pH of fixative, temperature, as well as the sensitivity of the antibody clone, detection
system, and chormogen, amongst others, are important considerations for proper immunolabling.
Key words: Immunohistochemistry, antibodies, localozation.

L
a inmunohistoqumica es una tcnica que ha tisulares, la deteccin de complejos inmunitarios, la
revolucionado la histopatologa. El desarrollo localizacin de antgenos virales en clulas infectadas
de la metodologa de anticuerpos marca- y de antgenos tumorales en diversas neoplasias. A
dos con fluorescena (inmunofluorescencia pesar de esta trascendente innovacin, la tcnica de
indirecta) realizado por Albert H Coons (figura 1A), inmunofluorescencia fue, hasta cierto punto, de utilidad
Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier, en la limitada en la patologa quirrgica diagnstica, quiz
Universidad de Harvard en 1941, fue el antecedente debido a que requiere tejido fresco y un microscopio
del florecimiento de la inmunopatologa.1 especial (de fluorescencia) que no cuenta con la mejor
El uso de anticuerpos marcados con isotiocianato de resolucin morfolgica. Pero sin duda el mtodo creado
fluorescena le permiti a Coons el estudio detallado por Coons y col. sent las bases de la inmunohistoqu-
de diversos antgenos, la identificacin de protenas mica actual.
En 1959 Rodney Porter y Gerald Edelman descri-
* Departamento de Patologa, Hospital Espaol, Mxico, DF. bieron la estructura de las inmunoglobulinas, por lo
** Departamento de Patologa, Centro Mdico ABC, Mxico, que en 1972 recibieron el premio Nobel de Fisiologa o
DF.
*** Departamento de Biologa Celular y Tisular, Universidad Medicina. Su descubrimiento fue posible gracias a que
Panamericana. Mxico, DF. obtuvieron grandes cantidades de estas protenas de
Correspondencia: Dr. Carlos Ortiz Hidalgo. Departamento de pacientes con mieloma de clulas plasmticas (mieloma
Patologa. Centro Mdico ABC, Sur 136, nm. 116, colonia Las mltiple). Las inmunoglobulinas del mieloma, prote-
Amricas, CP 01120, Mxico, DF.
E-mail: cortiz@abchospital.com nas de Bence-Jones y macroglobulinas monoclonales
Recibido: enero, 2007. Aceptado: julio, 2007. jugaron un papel fundamental en el esclarecimiento
La versin completa de este artculo tambin est disponible en
de la estructura, gentica, sntesis y metabolismo de
internet: www.revistasmedicasmexicanas.com.mx las inmunoglobulinas. Algunos aos despus, Susu-

126 Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007


Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

mu Tonegawa, premio Nobel de Medicina en 1987, En el prrafo final de la carta publicada el 7


describi la diversidad de los anticuerpos, demostr la agosto de 1975 en la revista Nature, Klher y Milstein
compleja recombinacin somtica y los mecanismos de indicaron que: It is posible to hybridise antibody-produ-
hipermutacin a que estn sujetos los linfocitos B en sus cing cells from different origins. Such cells can be grown
mecanismos de produccin y sntesis de inmunoglobu- in-vitro in massive cultures to provide specific antibody.
linas, lo que les permite su selecta especificidad ante la Such cultures could be valuable for medical and industrial
demanda de millones de antgenos potenciales.2 use.3

Figura 1. A) Albert H. Coons, B) Cesar Milstein, C) Georges J.F. Khler, D) Niels K. Jerne.

En 1984 Cesar Milstein, Georges JF Khler y Niels Actualmente existen numerosas estrategias
K Jerne recibieron el Premio Nobel de Medicina por teraputicas oncolgicas que utilizan anticuerpos
su aportacin para la produccin de anticuerpos monoclonales como el anti-CD20 (Rituximab),4 anti-
monoclonales2 (figura 1 B, C, D). Estos investigadores CD117 (Gleevec) 5 y anti-Her2/neu (Herceptin), 6
pudieron unir dos clulas y obtener un hbrido (hibri- determinantes que pueden hacerse evidentes en el
doma) que comparten caractersticas funcionales de tejido obtenido por biopsia mediante inmunohis-
ambas poblaciones celulares. Fusionaron un linfocito toqumica con anticuerpos monoclonales dirigidos
B del bazo de un ratn inmunizado con eritrocitos de contra CD20, CD117 y Her2/neu, respectivamente
oveja (que produca anticuerpos contra un eptope (vide infra).7
del eritrocito), con clulas plasmticas de mieloma El uso de anticuerpos monoclonales es parte de
de un ratn, la clula resultado de esta fusin viva la rutina de los laboratorio de patologa debido a que
de forma indefinida in vitro. Este hbrido es capaz son de gran utilidad en el diagnstico de tumores me-
secretar inmunoglobulinas en contra del eptope tastsicos de primario desconocido, tumores de partes
del eritrocito de oveja, debido a que el hibridoma blandas, linfomas y leucemias y pueden ayudar a la
tambin haba adquirido la facultad de secrecin identificacin de algunos agentes infecciosos;8 adems,
de inmunoglobulinas del mieloma y su capacidad los anticuerpos monoclonales pueden ser de utilidad
para vivir in vitro. As fue como pudieron producir como factores pronsticos y predictivos en diversos
anticuerpos in vitro en contra de un solo determinan- tumores.
te de una compleja estructura antignica. Klher y Es necesario que el patlogo conozca las ca-
Milstein demostraron que virtualmente es posible ractersticas biolgicas generales de los antgenos
fusionar cualquier clula con lneas celulares de utilizados, as como el tejido con el cual reacciona, la
mieloma, produciendo as cantidades homogneas localizacin celular donde la inmunorreaccin debe
ilimitadas de anticuerpos con la especificidad de la encontrarse, y tener en mente las posibles reacciones
clula fusionada. cruzadas inespecficas de cada anticuerpo. Como

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Jorge Buys DL y col.

ejemplos estn las inclusiones nucleares de biotina INTERPRETACIN Y CATEGORIZACIN DE


en el endometrio gestacional mal interpretadas como INMUNORREACCIONES BASADA EN LA
infeccin por herpes virus,9 la expresin aberrante LOCALIZACIN CELULAR
de CD43 y CD5 en algunos linfomas B de clulas
pequeas, la expresin de receptores de estrgenos Es menester informar no slo si la inmunorreaccin es
en adenocarcinomas pulmonares,10 la positividad del positiva o negativa, sino tambin la distribucin citol-
HMB45 en pecomas,11-13 y la expresin de CD117 en gica y las caractersticas de expresin de los antgenos
tumores desmoides y otros tumores de tejidos blan- empleados. Si no se especifica la localizacin subcelular
dos.14-16 (nuclear, membranosa o citoplsmica) del inmuno-
Muchas de las discrepancias informadas en la lite- rreactante, el informe diagnstico podra carecer de
ratura se han atribuido a problemas metodolgicos y significado. Por ejemplo, en ocasiones el Her2/neu
tcnicos, primordialmente relacionados con la tcnica (cerbB2) o el CD99 presentan reaccin granular cito-
de conservacin y procesamiento de los tejidos.17,18 Por plsmica que debe considerarse negativa, pues tanto
esto es necesario el uso de mtodos estandarizados el Her2/neu como el CD99 deben interpretarse como
para inmunohistoqumica diagnstica, con un con- positivos, exclusivamente cuando la reaccin se en-
tinuo programa de calidad, validez independiente cuentra en la membrana celular (vide infra).
y acreditacin de laboratorios especializados en la Segn el sitio de localizacin, la inmunomarcacin de
materia.19 antgenos celulares puede presentarse en la membrana,
En este artculo se discute la evaluacin de la in- el ncleo o el citoplasma. Existen antgenos, como el
terpretacin de la inmunomarcacin, con nfasis en la amiloide, la fibronectina, la laminina y la colgena tipo
localizacin celular y subcelular de diversos anticuerpos. IV cuya localizacin es extracelular (cuadro 1).

Cuadro 1. Patrones de localizacin para diferentes anticuerpos


Membranoso Citoplsmico Nuclear Extracelular Mixto
CD1a Caldesmn Receptor de Estrgenos Osteocalcina B-catenina (M/N)
CD2 /CD3 /CD4/ CD5/ CD7/ Actina de msculo liso Receptor de Progesterona Osteonectina Calrretinina (N/C )
CD8
CD10 Actina msculo especifica Receptor de Andrgenos Colgena IV S-100 (N/C)
CD20 Desmina p53 Laminina ALK (N/C)
CD21 Calponina p63 Componente amiloide P WT1 (N/C)
CD23 Vimentina PAX5 CD3 (M/C)
CD31 Citoqueratinas Oct 2 CD79a (M/C)
CD34 Bcl-2 Oct 3/4 CD15 (M/Golgi/C)
CD43 CD61 (GPIIIa) Bob 1 CD30 (M/Golgi/C)
CD45 CD68 Ciclina D1 LMP1 (M/Golgi/C)
CD56 Mieloperoxidasa TdT Fascina (C/M)
CD57 TIA-1 Bcl-6
Inmunoglobulinas Granzima B NPM
Kappa Perforina Miogenina
Lambda TRAcP MyoD1
CD99 DBA 44.1 p16
CD123 Kappa p21
CD138 Lambda CMV
Glucoforina Inmunoglobulinas Telomerasa
Espectrina Cromogranina CDX-2
Trombomodulina Sinaptofisina TTF-1
E-cadherina Neurofilamentos Ki-67
PLAP GFAP PCNA
EMA AMACR VPH
Distrofina Antgeno Prstata Especifico Antgeno T del Virus JC
CEA a-Inhibina
PGP 9.5 Gonadotropina corinica
humana
VEGF a-fetoprotena
Her2/neu ( c-erbB2) HMB-45
EGFR1 Melan-A
Glut-1 Mamoglobina
CD117 (c-kit) VEGF
CD31 Prolactina
CD34 ACTH

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Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

Expresin en la membrana celular membrana por su localizacin lineal a lo largo de la


La decoracin de la membrana puede presentarse en interfase membrana-citoplasma.7
diferentes circunstancias (figura 2): Algunos anticuerpos dirigidos contra antgenos
de las membranas suelen producir marcacin peri-
metral, que puede estar acompaada de acentuacin
citoplsmica para-nuclear (aparato de Golgi) como
el CD30, CD15, el LMP-1 y el EMA (este ltimo en
casos de linfoma anaplsico de clulas grandes). Esto
se debe a que el aparato de Golgi es el sitio donde se
agregan los carbohidratos a las protenas antes de ser
transportadas hacia la superficie celular (figura 2).
En ocasiones, la marcacin es exclusivamente en el
aparato de Golgi, cuando la densidad de las molculas
en la superficie celular es muy baja para su detec-
cin inmunohistoqumica, como puede verse con el
CD15 (LeuM1), como en algunos casos de linfoma de
Hodgkin clsico (figura 2); la fascina tiene marcacin
membranosa y citoplsmica.7
Figura 2. Inmunomarcacin de membrana: CD31 en clulas La polarizacin normal de las clulas epiteliales
plasmticas reactivas. E-caderina en carcinoma mamario ductal
hace que algunos antgenos de la membrana muestren
infiltrante. CD117 en seminoma clsico. CD138 en mieloma de
clulas plasmticas. Distrofina, marcacin submembranal en marcacin restringida o predominante en su superficie
msculo esqueltico (cortesa Dra. B de Len). EMA membrana y apical, como puede verse con el antgeno de membra-
acentuacin paranuclear en linfoma anaplsico de clulas grandes. na epitelial, el antgeno carcinoembrionario, la villina
CD15 positivo granular en regin paranuclear. CD30, clulas de
Reed-Sternberg con marcacin membranosa y paranuclear. o en las superficies baso-laterales, como cuando se
utiliza E-caderina, -catenina, o Ep-cam (figura 3). Este
1) Antgenos localizados en la membrana celular:

Molculas de adhesin celular como: caderi-


nas, molculas plaquetarias de adhesin endotelial
(PECAM) , molculas de adhesin celular neural
(N-CAM), molculas de adhesin celular epitelial
(Ep-CAM).
Protenas y receptores de la superficie celular o
transmembranosas, como el factor de crecimiento epi- Figura 3. Inmunomarcacin con antgeno carcinoembrionario.
drmico (EGFR), Her2/neu (c-erbB-2), CD117 (c-kit), (CEA). A) Carcinoma hepatocelular. Ntese la polarizacin de la
CD31, CD34, algunos antgenos leucocitarios (CD20, inmunoraccin hacia la superficie apical de las clulas (flechas).
B) Carcinoma mucinoso de la glndula mamaria. La positividad al
CD3, CD43,CD138), el factor de crecimiento derivado
CEA exhibe acentuacin en la parte adluminal (flechas).
de las plaquetas (PDGFR) y la protena latente de
membrana del virus de Epstein-Barr (LMP1). es el patrn de marcacin polarizado de algunos an-
tgenos en clulas normales y puede reemplazarse por
2) Molculas con patrn membranoso. Se obtiene este marcacin perimetral en neoplasias malignas debido
patrn debido a que los anticuerpos se unen a prote- a los trastornos en la polaridad celular que ocurren
nas de membrana y con el citoesqueleto subyacente, en las clulas neoplsicas.20 El carcinoma mucinoso
como la -catenina (en clulas epiteliales), la distrofina es un ejemplo de polaridad alterada. Esta variante de
(en clulas musculares) y la espectrina (en eritrocitos). carcinoma mamario mucinoso podra ser una forma
Estas protenas muestran inmunorreactividad de de carcinoma in situ en donde la mucina, en lugar de

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Jorge Buys DL y col.

ser secretada hacia la superficie apical celular, por me- Otro marcador de membrana con implicaciones
dio de un mecanismo de inversin de la polaridad, pronsticas es el factor de crecimiento epidrmico que
produce secrecin hacia el estroma, lo que conlleva normalmente se expresa en los estratos basal y supra
el desprendimiento del epitelio de su estroma subya- basal de los epitelios escamosos estratificados y se
cente. De esta forma, la mucina invade el estroma y sobreexpresa en varios carcinomas, por incremento
separa a las clulas de su membrana basal. Lo anterior en el nmero de copias gnicas.23 El anti-EGFR (Ge-
no slo explica el excelente pronstico del carcinoma fitinib) se utiliza en el tratamiento de carcinomas
mucinoso de la mama sino, adems, el hecho de que del pulmn, carcinomas de la cabeza y el cuello, y
casi la mayor parte del moco es extracelular.21 En el otros tipos de tumores. La evaluacin inmunohisto-
carcinoma mucinoso la expresin de algunos inmuno- qumica del anti-EGFR es membranosa y, de manera
rreactantes, como el antgeno de membrana epitelial similar al Her2/neu, existe una forma de evaluar la
y el antgeno carcinoembrionario predominan hacia sobreexpresin del factor de crecimiento epidrmico:
la superficie basal, lo que traduce esta inversin de multiplicando la extensin e intensidad de la positi-
la polaridad (figura 3).21 vidad de la marcacin (0,1,2,3).23,24
Los siguientes tres ejemplos de inmunorreaccin 2) Los antgenos leucocitarios, que incluyen CD-1,
membranosa tienen relevancia clnica bajo ciertas CD-2, CD-3, CD-4, CD-5, CD-7, CD-8, CD-19, CD-20,
circunstancias: CD-43 y CD-45, son receptores de la superficie celular
o ligandos involucrados en el reconocimiento, inte-
1) La expresin membranosa del Her-2/neu tiene raccin, adhesin y transduccin celular de seales
implicaciones pronsticas. Existe correlacin directa o interaccin con protenas solubles-glicoprotenas y
entre la expresin de HER-2/neu y la resistencia a matriz extracelular. La marcacin inmunohistoqumica
citoxano/metotrexato y tamoxifeno. Con tecnologa para estos antgenos produce un patrn perimetral de
recombinante se desarroll un anticuerpo monoclo- membrana debido a la distribucin uniforme de estos
nal contra HER-2/neu, conocido como traztuzumab antgenos en la superficie celular. La expresin de mem-
(huMAB HER-2, Herceptin) que inhibe al HER- brana en los linfocitos neoplsicos puede ser el blanco
2/neu y, a su vez, bloquea el crecimiento de la clula de anticuerpos teraputicos. El ms utilizado en el
neoplsica. Por inmunohistoquimica utilizando Her- tratamiento de linfomas de clulas B y linfoma de Hod-
cepTest (DAKO Corporation), o con cerbB2/CB11 se gkin de predominio linfoctico nodular es el anticuerpo
puede determinar si hay expresin de Her2/neu. La anti-CD-20/rituximab (Mabthera).25 Rituximab es un
interpretacin se hace mediante una escala que va de anticuerpo monoclonal quimrico murino-humano que
0 a 3 (marcacin de membrana) con equivalencia con se une especficamente al CD20 y establece funciones
la sobreexpresin gnica. Cuando las clulas tienen para mediar la lisis de las clulas B.
menos de 20,000 receptores no muestran inmuno- Otro anticuerpo del que recientemente puede
marcacin (negativo, 0); si tienen cerca de 100,000 disponerse es el Campath-1H (Alentuzumab). Este
receptores muestran inmunomarcacin parcial, leve o anticuerpo est dirigido contra el CD52, que es una
moderada de la membrana con menos de 10% de las protena que se encuentra en la membrana de los lin-
clulas con marcacin completa en la membrana (po- focitos B, y que se ha utilizado en el tratamiento de la
sitivo, 1+); cuando tienen 500,000 receptores muestran leucemia linfoctica crnica.26
inmunomarcacin en la membrana en ms de 10% de 3) El CD117 (c-kit) es una protena transmembranosa
las clulas (positivo, 2+), y si tienen aproximadamente de 145 KDa que funciona como receptor de la tirosina
2300,000 receptores muestran inmunomarcacin com- cinasa.27 El gen c-kit se localiza en el cromosoma 4
pleta de la membrana en ms del 10% de las clulas (4q11-12) prximo al gen del receptor del factor de
(positivo, 3+). Cuando se realiza inmunohistoqumica crecimiento epidrmico (EGFR). El CD117 es un epto-
estandarizada en tejidos bien fijados y procesados hay po localizado en el dominio extracelular del receptor
una excelente correlacin entre el nmero de genes y es estructuralmente similar a otros receptores con
amplificados y la expresin proteica membranosa.22 actividad de tirosina cinasa, como el receptor del factor

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Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRs), y el


factor estimulante de colonias (CSF1R) entre otros. El
c-kit, normalmente, se expresa en las clulas hemato-
poyticas progenitoras, clulas cebadas (mastocitos),
clulas germinales, melanocitos y clulas intersticiales
de Cajal. La mutacin da como resultado la activacin
constitutiva del c-kit, que participa en la patognesis
de los tumores del estroma gastrointestinal y repre-
senta uno de los mayores criterios diagnsticos para
estos tumores. La demostracin inmnohistoqumica
de CD117 no slo contribuye al diagnstico de los
GIST, sino en la seleccin de los pacientes que pue-
den beneficiarse con el tratamiento con el inhibidor
del receptor de tirosina cinasa STI571 (Gleevec ).28
Existen algunos informes de la expresin de CD117 en Figura 4. Inmunomarcacin nuclear. TdT en linfoma linfoblstico,
TLE1 en sarcoma sinovial, p63 clulas mioepiteliales de la gln-
sarcomas de clulas claras,29 tumores desmoides intra- dula mamaria. Receptores de estrgenos en carcinoma mamario
abdominales,15 angiomiolipomas,30 y otros tumores ductal, WT1 en tumor seroso de ovario, Ki67 en linfoma B difuso
de partes blandas.16 Por las caractersticas biolgicas de clulas grandes.
del c-kit, que es un receptor transmembranoso, la El Pax-5 y Oct2 son marcadores de expresin nuclear
inmunomarcacin debe ser predominantemente de la intensa en linfocitos B y contribuyen al diagnstico
membrana celular o citoplasmtica con acentuacin de linfoma de Hodgkin clsico y al de predominio
de la primera. linfoctico. La familia de transcriptores nucleares Pax
est compuesta por nueve miembros que funcionan
EXPRESIN NUCLEAR durante la embriognesis y regulan la diferenciacin
celular.32-35 El Pax 5 (localizado en el cromosoma 9p13)
Existen diversos anticuerpos dirigidos contra las codifica a una protena de lnea especfica de linfocitos
protenas o enzimas nucleares. La mayor parte de los B (B-cell specific activator protein/BSAP) que se expresa
antgenos nucleares incluye a protenas asociadas al en clulas precursoras B (pro-B y pre-B) y linfocitos
ciclo celular, protenas reparadoras de genes, enzimas maduros. La expresin dbil granular nuclear en las c-
nucleares, factores de trascripcin, productos de genes lulas de Reed-Sternberg es de utilidad en el diagnstico
supresores tumorales, receptores de hormonas esteroi- inmunohistoqumico del linfoma de Hodgkin clsico.36
des, protenas ligadoras de calcio, y algunas protenas El Oct2 es un factor de trascripcin nuclear de clulas
virales nucleares (cuadro 1 y figura 4). B que se une especficamente al octmero (5ATTG-
La decoracin nuclear puede ser homognea granu- CAT-3) y regula la activacin de la expresin gnica
lar, como: TdT, bcl-6, p63 y los receptores de estrgenos, de inmunoglobulinas en conjunto con la coactivacin
progesterona y andrgenos; con patrn moteado, como de BOB-1. El Oct2 se expresa en la mayor parte de los
lo expresa del antgeno nuclear latente del Herpes virus ncleos de los linfocitos B y en casi todos los linfomas
humano 8, o granular fino con acentuacin nucleolar B. El Oct2 es positivo en los ncleos de las clulas L y
como el Ki-67 (MIB-1), telomerasa, nucleofosmina o H (en palomita de maz) del linfoma de Hodgkin con
transductin-like enhancer of split 1 TLE-1 (figura 4). El predominio linfoctico nodular y es negativo hasta en
WT1, por sus siglas en ingls [resultado de la trans- 75% de las clulas de Reed-Sternberg del linfoma de
locacin recproca t(11;22) (p13;q11) o (p13;q12)], es Hodgkin clsico (figura 5).37
un marcador nuclear que se encuantra en el tumor de En algunos anticuerpos la marcacin nuclear puede
Wilms, tumor desmoplsico intraadbominal y tumo- estar acompaada de positividad citoplasmtica varia-
res serosos del ovario; sin embargo, en algunos otros ble, quiz relacionada con la difusin de molculas o
tumores puede haber positividad citoplsmica.31 localizacin parcial de las molculas en el citoplasma,

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Jorge Buys DL y col.

Figura 5. Inmunomarcacin con Oct-2. A) Linfoma de Hodgkin de


predominio linfoctico nodular. Inmunomarcacin nuclear en clulas
L y H. B) Linfoma de Hodgkin clsico (esclerosis nodular). Ntese
que la clula de Reed-Stermberg (centro) es negativa, mientras que
los linfocitos B pequeos reactivos muestran positividad nuclear.

como la protena S-100, la calretinina, y el Alk-1 (este


ltimo en algunas circunstancias produce marcacin
simultnea del ncleo y el citoplasma, vide infra).38 Figura 6. Inmunomarcacin citoplsmica. A) Tumor de Warthin H y
E. Antimitocondrias en el mismo tumor de Warthin de la figura A y
en un caso de carcinoma mamario oncoctico. CD68 en macrfagos,
EXPRESIN CITOPLSMICA prolactina en hipfisis normal, triptasa en mastocitoma cutneo,
Tia-1 en linfoma T/NK.
El citoplasma contiene diversos orgnulos y una
red de estructuras que forman el citoesqueleto exocrina o apcrina se localizan, predominantemente,
(microfilamentos, filamentos intermedios y microt- por debajo del polo apical de las clulas (localizacin
bulos) responsable de la forma, rigidez, transporte luminal).
intracelular y de la movilidad celular. Los antgenos
citoplasmticos muestran tres patrones de tincin: b) Patrn citoplsmico fibrilar
a) granular, b) difuso, y c) fibrilar (cuadro 3). El esqueleto celular est compuesto por filamentos:
pequeos (actina), grandes (microtbulos) e inter-
a) Patrn citoplsmico granular medios (citoqueratina, vimentina, desmina, protena
La decoracin citoplsmica granular identifica fibrilar cida glial, neurofilamentos, nestina, periferi-
los antgenos que se localizan en los orgnulos, na, internexina y lamininas nucleares). Las fibras del
como: anticuerpos anti-mitocondriales, enzimas y citoesqueleto forman una malla que se extiende desde
protenas lisozomales (CD68), grnulos citopls- la membrana nuclear hasta la membrana celular,
micos de los mastocitos (triptasa, CD117), grnulos por lo que la inmunomarcacin de estas protenas
citotxicos (CD56, Tia-1), grnulos secretores neu- exhibe de forma caracterstica un patrn fibrilar,
roendocrinos (cromogranina, sinaptofisina, PGP frecuentemente con acentuacin submembranosa
9.5), hormonas (prolactina, ACTH, hormona del debido al revestimiento laminar que estas fibras
crecimiento) y algunos microorganismos (figu- tienen por debajo de la membrana celular y simulan
ra 6). La marcacin puede parecer homognea cuando el patrn de marcacin de membrana. Con diversos
la clula est empaquetada por dichos orgnulos o anticuerpos en los carcinomas de clulas pequeas
grnulos, pero en la observacin detallada se podrn (queratinas), carcinomas de clulas de Merkel (CK
identificar grnulos en una proporcin del citoplasma 20, cromogranina A), tumor desmoplsico de clulas
celular. Los grnulos citoplasmticos pueden tener pequeas (desmina) y tumores rabdoides malignos
polarizacin celular particular, como los grnulos (queratina/vimetina) puede apreciarse acentuacin
de las clulas neuroendocrinas del aparato gastro- en la decoracin en la regin perinuclear (punto
intestinal que se concentran en la base de la clula, paranuclear) debido a la existencia de cmulos o
que es el polo donde son vertidos hacia los vasos agregados de filamentos intermedios en esta regin
sanguneos del estroma. Los grnulos de secrecin (figura 7).

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Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

Cuadro 2. Deteccin de protenas relacionadas con eventos moleculares especficos

Protena detectada (IHQ) Enfermedad Gen de fusin Translocacin Patrn de tincin

Ciclina D1 Linfoma de clulas del CyclinD1-IgH t(11;14)(q13;q32) nuclear


manto
Mieloma mltiple CyclinD1-IgH t(11;14)(q13;q32) nuclear
Bcl-2 Linfoma folicular bcl-2-IgH t(14;18)(q32;q21) nuclear
bcl-2-IgL t(2;18)(p12;q21) nuclear
Bcl-10 Linfoma MALT bcl-10-IgH t(1;14)(p22;q32) nuclear
API2-MALT1 t(11;18)(q21;q21) nuclear
bcl-10-Ig? t(1;2)(p22;p12) nuclear
ALK-1 Linfoma anaplsico de NMP/ALK t(2;5)(p23;q35) nuclear y citoplsmico
clulas grandes
TPM3-ALK t(1;2)(q21;p23) citoplsmico con acen-
tuacin membranosa
TPM4-ALK t(2;19)(p23;p13.3) citoplsmico con acen-
tuacin membranosa
TFG-ALK t(2;3)(p23;q21) citoplasma
ATIC-ALK Inv(2)(p23;q35) citoplasma
CLTCL-ALK t(2;22)(p23;q11.2) citoplsmico granular
MSN-ALK t(X;2)(q11-12;p23) membranoso
WT1 (carboxi-t) Tumor de clulas EWS-WT1 t(11;22)(p13;q12) Nuclear (en ocasiones
pequeas redondas puede haber marca-
desmoplsico cin citoplasmica,
ver texto)
FLI1 Sarcoma de Ewing/ EWS/FLI1 t(11;22)(q24;q12) nuclear
PNET
TFE3 Carcinoma renal con PRCC-TFE3 t(X;1)(p11.2;q21) nuclear
tXp11.2
ASPL-TFE3 t(X;17)(p11.2;q25) nuclear
PSF-TFE3 t(X;1)(p11.2;p34) nuclear
NonO-TFE3 Inv(X)(p11;q12) nuclear
SYT Sarcoma sinovial SYT-SSX1,2,4 t(X;18)(p11.2;q11) nuclear

c) Partn citoplasmtico
Los antgenos que producen un patrn de marcacin
citoplasmtico incluyen: protenas del citoplasma o
vesculas grandes, como: hemoglobina, albmina,
mioglobina, tiroglobulina, enolasa neurona espec-
fica, inmunoglobulinas, CD3, CD79a, bcl-2 y algunas
protenas virales, como el HBsAg, que produce un
patrn homogneo de tincin, casi siempre paranu-
clear. La positividad para estas molculas puede,

Figura 7. Inmunomarcacin citoplsmica. Arriba izquierda y arriba


derecha, neurofilamentos y queratina 20 en tumor de clulas de
Merkel, ntese la acentuacin paranuclear (punto paranuclear).
Abajo izquierda pared muscular de intestino con actina, marcacin
fibrilar. Abajo derecha. Tumor desmoplsico de clulas pequeas
con desmina, ntese la acentuacin paranuclear.

Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007 133


Jorge Buys DL y col.

algunas veces, mostrar un patrn granular. Las cinasa que quiz juegue un papel fundamental en la
inmunoglobulinas, CD3, CD79a, y bcl-2 tienen mar- gnesis de los LACG.40,41 La localizacin inmunohis-
cacin citoplsmica con acentuacin alrededor de la toqumica subcelular de ALK puede correlacionarse
membrana nuclear. Existen casos raros de linfomas con el patrn de traslocacin. En los LACG con t(2;5)
B de clulas grandes con abundante matriz fibrilar (NPM-ALK) la expresin de ALK coexiste tanto en el
que mediante el uso de CD20 exhibe inmunorreac- ncleo como en el citoplasma. La marcacin granular
cin positiva con patrn de marcacin citoplsmica citoplsmica se relaciona con la t (2;22) (traslocacin
estriada, lo que indica que el material est formado entre el gen de la clathrina-CLTCL y el gen ALK), y
por membrana celular con procesos celulares inter- la marcacin de membrana y citoplasma indica t(1;2)
digitantes (figura 8).39 (traslocacin entre el gen de la tropomiosina- TPM3
y el gen ALK).42,43 La positividad inmunohisto-
qumica para ALK representa un punto esencial en
el diagnstico de los LACG (figura 9). La expresin
del ALK puede identificar un subtipo de LACG que,
predominantemente, ocurre en pacientes jvenes, con

Figura 8. Linfoma no Hodgkin difuso de clulas grandes con matriz


fibrilar y formacin de pseudosrosetas. Izquierda H&E, derecha
CD20. Ntese como las clulas se agregan formando pseudoro-
setas y las membranas son marcadas con CD20.

EXPRESIN INMUNOHISTOQUIMICA COMO


REFLEJO DE EVENTOS MOLECULARES

La expresin inmunohistoqumica de algunos antge-


nos es el resultado de productos de expresin gentica
secundarios a traslocaciones especficas (cuadro 2). Figura 9. Alk-1 en linfoma anaplsico de clulas grandes. A) Mar-
Como referencia se citan tres ejemplos. cacin nuclear y citoplsmica. B) Marcacin granular citoplsmica.
(vase texto).
1) ALK. La expresin de ALK (Anaplastic lymophoma
kinase) en los linfomas anaplsicos de clulas grandes buena respuesta a la quimioterapia y pronstico favo-
(LACG) refleja la traslocacin t(2;5)(p23;q35), que se rable.44,45 Por excepcin, algunos linfomas difusos de
encuentra hasta en 70% de estos linfomas. El gen de clulas grandes B pueden expresar ALK. Estos casos
la cinasa del linfoma anaplsico (ALK) codifica una presentan, predominantemente, morfologa inmuno-
tirosina cinasa transmembranosa, que pertenece a la blstica-plasmoblstica y pueden tener crecimiento
superfamilia de receptores de insulina y se localiza en sinusoidal.46 El patrn de inmunomarcacin tambin
el cromosoma 2p23. En los linfomas anaplsicos de c- se correlaciona bien con el gen traslocado, que es cito-
lulas grandes con la traslocacin clsica t(2;5)(p23;35), plasmtico granular cuando es CLTCL (Clathrina), y
el gen ALK se fusiona con el gen de nucleofosfamina nuclear-citoplasmtico cuando es NPM.46
(NPM) que se localiza en el cromosoma 5 y codifica La expresin del ALK no es exclusiva de los LACG,
una protena nuclear.31,32 Esta fusin de genes resulta puede encontrase en otros tumores, como los inflama-
en la produccin de una protena quimrica con el torios miofibroblsticos (en donde se ha identificado
extremo amino terminal de nucleofosfamina unido al la traslocacin del gen ALK), en el rabdomiosarcoma
dominio citoplsmico del gen de la cinasa del linfoma alveolar, el mesenquimoma maligno, los liposarcomas
anaplsico. Esto lleva a la activacin de la tirosina pleomrficos y mixoides, el sarcoma de Ewing/tumor

134 Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007


Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

neuroectodrmico primitivo, el sarcoma fibromixoide 3) BCL-10. El Bcl-10 es una protena adaptadora,


de bajo grado, el osteosacroma extraesqueltico, los con una unin a caspasa (caspase recriutment do-
schwannomas, los lipomas y en el mieloma de clulas main/CARD) que promueve la apoptosis y activa la
plasmticas.47-50 pro-caspasa 9 y NF-kB, descrita por primera vez en
los linfomas B tipo MALT.56 Lo normal es que Bcl-10
2) BCL-2. El Bcl-2 (B-cell lymphoma-2), descrito se exprese en el citoplasma de linfocitos B localizados
en 1984 por Tsujimoto y col (con la participacin en centros germinales y en la zona marginal.
de Peter C. Nowell, quien describi el cromosoma La expresin nuclear de BCL-10 se manifiesta en un
Filadelfia) fue la primera protena que se relacion grupo de linfomas B de la zona marginal, extraganglio-
con traslocaciones y que se identific en linfomas nar (linfomas MALT) con traslocacin t(1;14)(p22;q32)
(linfoma folicular).51 El Bcl-2 es una protena que se o t(11;18)(q21;q21). Puede haber inmunomarcacin
localiza en la membrana interna mitocondrial (y en citoplsmica en casos de LZM con t(14;18) que afectan
menor proporcin en la membrana nuclear y el retculo el gen MART1.57,58 Los casos de LZM con marcacin
endoplsmico) que juega un papel fundamental en la nuclear positiva tienen menor edad de presentacin
proteccin celular contra la apoptosis.52 El Bcl-2 suele (51.4), mayor predominio del sexo masculino (19/14)
encontrarse en el citoplasma de los linfocitos B de la y predileccin por la localizacin pulmonar y del
zona del manto, en algunas clulas del centro germinal aparato digestivo, comparados con los casos con solo
y en algunos linfocitos T. En la traslocacin t(14;18) marcacin citoplasmtica (como en los linfomas MALT
identificada en los linfomas foliculares se yuxtapone el tiroideos). En los casos originados en el aparato diges-
gen que codifica para la protena Bcl-2 del cromosoma tivo existe correlacin entre el porcentaje de tumores
18 con el gen de cadena pesada de inmunoglobulina Bcl-10 positivos y el grado de invasin de la neopla-
del cromosoma 14, e induce la sobreexpresin de Bcl-2. sia. Fueron positivos al Bcl-10 36.4% de los tumores
Esta traslocacin sucede en 75 a 90% de los linfomas confinados a la mucosa y en 100 % de los casos de los
foliculares y puede hacerse evidente por medio de tumores con extensin mas all de la serosa. Adems
inmunomarcacin con anti-Bcl-2. Esto se observa en de su reconocida expresin en linfomas B tipo MALT,
un porcentaje mayor de casos de linfomas foliculares la expresin de Bcl-10 puede presentarse en algunos
grado I, comparada con los de grado III.53 Debido a casos de linfomas linfoplasmocticos (macroglobuli-
que los centros germinales reactivos no son positivos nemia de Waldenstrom, 55%), todos con positividad
al Bcl-2, la inmunomarcacin con este anticuerpo ha nuclear.57 En general, este ltimo grupo de linfomas
sido de gran utilidad en el diagnstico diferencial entre muestra mayor ndice de afeccin de la mdula sea,
hiperplasias y linfomas foliculares. No obstante, la pero no existe correlacin entre la positividad al anti-
expresin de Bcl-2 no es especfica de linfomas folicu- cuerpo y las concentraciones sricas de paraprotena
lares ni indica necesariamente un origen folicular, ya IgM de cadenas ligeras o variables clnicas.57
que puede existir en otros procesos linfoproliferativos,
aunque en ellos la sobre-expresin de la protena no ANTGENOS EXTRACELULARES
se vincula con la traslocacin (14;18).54
Debido a que algunas clulas T son positivas al a) Osteocalcina
Bcl-2 en los folculos neoplsicos, es necesario realizar Existen diversas protenas que intervienen en el pro-
marcadores complementarios para clulas B y T para ceso de mineralizacin, que al identificarlas mediante
evidenciar qu clulas son las reactivas al Bcl-2 en inmunohistoqumica son de importancia diagnstica
dichas neoplasias. El Bcl-2 es de utilidad en el diag- en los tumores seos. La osteocalcina es una de las
nstico diferencial entre linfomas difusos de clulas principales protenas intraseas, de funcin poco
grandes con inmunofenotipo B y el linfoma de Burkitt. precisa, que predominantemente se localiza en el
El linfoma de Burkitt es negativo al Bcl-2 mientras que citoplasma de los osteoblastos.59 Es una molcula
el linfoma difuso puede expresar Bcl-2 hasta en 30% de peso aproximado de 5.8 KDa compuesta por 49
de los casos.55 aminocidos que incluyen tres residuos cido gamma-

Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007 135


Jorge Buys DL y col.

carboxilglutmico (gla). Despus de su produccin glndula mamaria tienen una membrana basal bien
por los osteoblastos, la osteocalcina se incorpora a la desarrollada que puede ser resaltada por medio de
matriz sea y una fraccin se libera a la circulacin inmunomarcacin con colgena IV. Lo anterior y la
y puede medirse como parmetro bioqumico del existencia de clulas mioepiteliales evidenciadas por
metabolismo seo. La osteocalcina se sobreexpresa medio de la actina (p63 o CD10) favorecen el proce-
en presencia de anlogos de la vitamina D, como la so reactivo sobre un carcinoma.63 Para distinguir la
1,25dihidroxivitamina D2 y la 24-epi-1,25dihidroxi- pseudoinvasin provocada por cortes tangenciales en
vitamina D2, en el paso final de la diferenciacin un plipo adenomatoso de un verdadero adenocar-
osteoblstica y en la formacin de osteoide. Est de- cinoma infiltrante puede utilizarse colgena IV (vide
mostrado que algunos fibroblastos pueden expresar infra). Un ejemplo de la utilidad de la colgena IV en
eptopes que pueden producir reacciones cruzadas sarcomas es el diagnstico diferencial histolgico entre
cuando se utilizan anticuerpos policlonales anti-os- histiocitoma fibroso maligno, fibrosarcoma y tumor
teocalcina, por lo que para un diagnstico especfico maligno de vaina nerviosa perifrica. La existencia de
se requieren anticuerpos monoclonales con recono- colgena IV o laminina favorece el tumor maligno de
cimiento selectivo de pptidos. En la deteccin de vaina nerviosa perifrica, cuando la P-S100 y el CD57
tumores formadores de hueso, la osteocalcina tiene (marcadores de tumor maligno de vaina nerviosa
70% de sensibilidad y 100% de especificidad, compa- perifrica) son negativos.64
rada con 90% de sensibilidad y 50% de especificidad Con E-caderina y colgena tipo IV es posible
informada con la osteonectina.59 Adems, hay que evaluar el estado de las uniones intercelulares junto
considerar que la osteonectina puede ser positiva en con la membrana basal. En el adenocarcinoma estos
el tumor de clulas gigantes, el condroblastoma, en anticuerpos muestran marcacin discontinua en 65%
clulas endoteliales y fibroblastos, por lo cual debe con E-caderina y 96% con colgena IV. Las glndulas
tenerse precaucin en su interpretacin.60,61 en focos de pseudoinvasin muestran expresin mem-
branosa intensa, difusa y continua con E-caderina y
b) Colgena tipo IV y laminina continua y bien delimitada en la membrana basal con
La colgena tipo IV es el principal componente colgena tipo IV.65
estructural de la membrana basal.62 Los genes que co-
difican para la molcula de la colgena IV se localizan c) Amiloide
en el cromosoma13q. La colgena IV difiere de los El trmino amiloide (amylum) lo acu en 1838 el bo-
otros tipos de colgena en su secuencia de aminoci- tnico Matthias Schleiden para describir la apariencia
dos, pues no forma fibras y su estructura helicoidal del almidn en las plantas. En 1854 Rudolf Virchow
se interrumpe. La laminina y la enactina-nidogen emple el trmino para designar a los cuerpos ami-
son otros de los componentes de la membrana basal lceos del sistema nervioso debido a su reaccin con
que se une a los glucosaminoglicanos: actan como tinciones de yodo. Virchow estaba convencido que
puente para la unin de la colgena tipo IV de la los cuerpos amilceos cerebrales podan considerar-
membrana basal con la matriz adyacente. Adems, la se idnticos al almidn de las plantas y aplicaba el
colgena IV forma el sustrato para el crecimiento de trmino amiloide para las enfermedades llamadas
algunas clulas endoteliales, musculares y de nervios degeneracin lardcea o ceroide de rganos, como
perifricos y participa en la interaccin intercelular. el hgado o el bazo.66
Quiz la alteracin estructural de la colgena IV La existencia de amiloide define un grupo de
contribuya a diversas alteraciones en la morfologa enfermedades con etiopatogenia diversa, cuyas ca-
celular.62 ractersticas sobresalientes son: el depsito tisular de
Los anticuerpos contra colgena IV son tiles para material proteinceo acelular, amorfo, eosinfilo y que
evaluar la integridad de las membranas en clulas muestra birrefringencia color verde-manzana con luz
normales, as como la ausencia de sta en carcinomas. polarizada con la tincin de rojo Congo.67 El amiloide
La adenosis esclerosante y la microglandular de la corresponde a diversos grupos de protenas fibrilares

136 Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007


Interpretacin bsica de inmunohistoqumica

no ramificadas que, por difraccin de rayos X, orientan CONSIDERACIONES TCNICAS


perpendicularmente al eje de la fibra a las cadenas de
amiloide, en una especie de patrn de plegamiento Factores que influyen en la inmunomarcacin
beta (b fibrilosis). En la evaluacin de las inmunomarcaciones son
Un elemento ms de ayuda para la identificacin importantes dos elementos: 1) el factor preanaltico
del material amorfo eosinfilo sospechoso como ami- (intrnseco) y 2) el factor analtico (extrnseco).
loide es la presencia de una molcula pentagonal de
25 KDa, llamada componente amiloide P, que es parte 1) El factor pre-analtico se refiere a las caracte-
de todos los tipos de amiloide.69,70 Existen anticuerpos rsticas del tejido y su preservacin antignica. La
comerciales dirigidos en contra del componente P. conservacin adecuada de las caractersticas antig-
En un estudio de 169 biopsias con amiloidosis, todas nicas del tejido depende del tipo de fijador empleado,
fueron positivas para el componente P.67 de la fijacin adecuada, y del tiempo de la fijacin.73
Despus de que se determina que el material amor- El formol buffer al 10% es el fijador ms utilizado. El
fo es amiloide, el siguiente paso es la caracterizacin pH del formol tiene influencia directa en la conserva-
de la protena amiloidognica, pues el tratamiento cin antignica del tejido y la variacin de este puede
mdico es diferente, dependiendo de la causa subya- alterar la estructura proteica de los eptopes. Algunos
cente a la produccin de amiloide. Hasta el momento procedimientos tcnicos, como el sobrecalentamiento
se han identificado ms de 20 diferentes tipos de del tejido, la descalcificacin y la congelacin, tambin
sustancias generadoras de amiloide. Los tipos ms pueden afectar la preservacin antignica.73
frecuentes de amiloidosis son los provocadas por: 2) Los factores analticos (extrnsecos) son los ele-
a) cadenas ligeras de inmunoglobulinas (AL/45%/ mentos externos al tejido que pueden controlarse en el
amiloidosis primaria), b) el amiloide AA (amiloidosis laboratorio de inmuohistoqumica e incluyen: el tipo
reactiva/AA-19%) y c) por transtiretina (ATTR-12%/ de anticuerpo utilizado, la sensibilidad y dilucin, el
amiloide senil). Algunos otros tipos de substancias sistema de deteccin, los cromgenos empleados, el
amiloidognicas poco frecuentes son la 2-microglo- mtodo de recuperacin utilizado y la interpretacin
bulina, calcitonina, fibringeno, apolipoprotena AI, de la reaccin por el patlogo. (Para mayor detalle
lisozima, queratoepitelina y lactoferrina.67 sobre factores intrnsecos y extrnsecos consltese la
Para la caracterizacin de AL se utilizan anti- referencia 73).
cuerpos contra las cadenas ligeras kappa y lambda
de las inmunoglobulinas. El material casi siempre Falsos positivos por biotina endgena
es positivo a uno de los dos inmunorreactantes.
Desafortunadamente el AL deriva de las porciones La biotina es una protena que acta como cofactor
variables de las cadenas ligeras o por lo cual cada en la reaccin de descarboxilacin, es parte del com-
paciente poseer un tipo nico de amiloide L, lo que plejo de la vitamina B, y se encuentra en clulas ricas
disminuye las posibilidades de que un solo anticuerpo en mitocondrias, como en las clulas de los tbulos
sea capaz de detectar todas las variantes. Aunado a contorneados proximales del rin, los hepatocitos, las
esto, las protenas amiloides, especialmente el tipo L, clulas apcrinas y las clulas de Hrthle de la tiroi-
pueden precipitar otras protenas sricas y provocar des.74 Durante la recuperacin antignica inducida por
inmunomarcacin positiva con ms de un anticuer- el calor (Heat induced antigen retrieval/ HIAR) puede
po. Una dificultad ms estriba en la coexistencia de incrementarse la actividad de la biotina endgena y la
dos o ms protenas amiloides en el mismo paciente actividad tipo biotina (actividad de unin a avidina) y
(AL+A2M, AL+ATTR, AA+A2M).71-73 Por lo tanto, producir marcaciones falsas positivas cuando se utiliza
es importante identificar si existe restriccin de ca- un sistema de deteccin inmunohistoqumico tipo
denas ligeras en las clulas plasmticas del tejido en avidina-biotina.75,76 Estos falsos positivos se presentan,
estudio y correlacionarlas con los hallazgos clnicos sobre todo, con algunos anticuerpos, como es el caso
del paciente. de la inhibina en carcinomas hepatocelulares, del virus

Patologa Revista latinoamericana Volumen 45, nm. 3, julio-septiembre, 2007 137


Jorge Buys DL y col.

herpes simple en endometrio gestacional, y del cito- cuado, la inmunohistoqumica no nos ser de mucha
megalovirus cuando se utiliza hibridacin in situ.77,79 ayuda, e incluso los resultados pueden ser confusos
La tincin de biotina se localiza con ms frecuencia y orientarnos a un diagnstico errneo. Al pensar
en el citoplasma, casi siempre con patrn granular o en seleccionar una batera de anticuerpos debemos
moteado. La biotina tambin puede localizarse en el preguntarnos:
ncleo, como puede verse en el endometrio gestacio-
nal, en las mrulas del carcinoma de endometrio, 1) Cul es el diagnstico ms probable, dada la
en el blastoma pulmonar, en la variante cribiforme del morfologa de la lesin y el cuadro clnico?
carcinoma papilar de tiroides, en el pancreatoblastoma 2) Qu anticuerpos podran reaccionar en forma
y en los adenomas colnicos.80-83 Estas falsas positivas positiva y cules seran negativos en la lesin que
secundarias a la actividad de biotina endgena pueden estamos pensando, y
sospecharse cuando la localizacin y el patrn subce- 3) Cmo estos anticuerpos deberan localizarse en
lular de un anticuerpo dado no es el esperado, como la membrana, en el ncleo o en el citoplasma?
el patrn idntico de marcacin visto con mltiples
anticuerpos dirigidos contra diferentes antgenos, Es claro que la ayuda de la inmunohistoqumica
particularmente si la tincin es dbil. La forma de est directamente relacionada con las preguntas que
solucionar esta marcacin de biotna endgena es con nosotros hagamos durante el examen morfolgico de
la inmunomarcacin con un bloqueo avidina-biotina la lesin y que las inmunorreacciones interpretadas
o un sistema de deteccin alternativo que no incluya aisladamente, en la mayor parte de las situaciones,
avidina-biotina, como el sistema de deteccin de po- no son de mucha utilidad; es decir, slo obtendre-
lmeros o peroxidasa-antiperoxidasa. Sin embargo, mos respuestas adecuadas si hacemos las preguntas
estos sistemas de deteccin no estn totalmente libres correctas.
de tinciones inespecficas. Un ejemplo relativamente
comn es observar la tincin citoplasmtica difusa REFERENCIAS
dbil en las clulas del msculo liso usando el sis-
tema de deteccin de polmeros (EnVision/Dako); 1. Taylor CR. Principles of immunomicroscopy. In: Immunomi-
croscopy. A diagnostic Tool for surgical pathologists. Mayor
adems, algunos anticuerpos por s solos tambin problems in Pathology. 3rd ed. New York: Saunders, 2006;pp:1-
pueden producir tinciones inespecficas (como algu- 46.
nos anticuerpos policlonales). 2. Stone MJ. Monoclonal antibodies in the prehybridoma Era:
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CONCLUSIN 3. Kohler G, Milsten C. Continuous cultures of fused cells secre-
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La inmunohistoqumica ha contribuido al diagnstico
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pronsticas y determinado algunas formas especficas myelogenous leukemia. N Engl J Med 2007;357:258-65.
6. Hudis CA. Trastuzumab-mechanism of action and use in
de tratamiento. La inmuohistoqumica es una tcnica clinical practice. N Engl J Med 2007;357:39-51.
laboriosa que requiere, por parte del histotecnlogo, 7. Chuek W, Chan JKC. Subcellular localization of immunohisto-
conocimiento profundo del procedimiento, as como chemical signals. Knowladge of the ultrastructural of biologic
features of the antigens helps predict the signal localization
del histopatlogo la interpretacin adecuada con and proper interpretation of immunostains. Int J Surg Pathol
correlacin morfolgica estricta. Para la seleccin 2004;185:185-206.
de los anticuerpos se necesita que el diagnstico de 8. Chan JK. Advances in immunohistochemistry: impact on surgi-
cal pathology practice. Semin Diagn Pathol 2000;17:170-7.
presuncin sea lo ms exacto posible, dirigido tanto
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por el conocimiento de la morfologa como por la optically clear nuclei in gestational endometrium. A potential
presentacin clnica. Es obvio que si no incluimos en pitfall in the diagnosis of pregnancy-related herpesvirus infec-
nuestro diagnstico diferencial el diagnstico ade- tion. Arch Pathol Lab Med 1994;118:831-3.
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