Dr. Antonio-Manual Practico de Micro 2016-17

Universidad tcnica de Manab
Facultad ciencias de la Salud
Escuela de medicina
MANUAL DE PRACTICA LABORATORIO

DE
MICROBIOLOGA
Ms.Dr. ANTONIO GONZLEZ VELZQUEZ
PORTOVIEJO MANAB-DICIEMBRE-2016
UNIVERSIDAD TECNICA DE MANABI
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD.
ESCUELA
MEDICINA
Antonio Gonzlez Velzquez.

Dr en Medicina
Especialista en Medicina General Integral
Especialista en Medicina Intensiva y Emergencias
Peditricas
Master en Infectologa y Enfermedades Tropicales
Roman Camba July

Doctorado en MEDICINA y CIRUGIA.
DIPLOMADO SUPERIOR EN ENFERMEDADES ZOONOSICAS.
ESPECIALISTA EN MEDICINA INTERNA
COLABORADORES:
Estudiantes de la Facultad Ciencias de la Salud,

Escuela de Medicina. Universidad Tcnica de
Manab
UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB
Av. Urbina y Che Guevara

Manab, 130103. Ecuador, Portoviejo.
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD. ESCUELA MEDICINA
INDICE
PRLOGO 1
INDICE 2
INTRODUCCIN 4
INSTRUCCIONES GENERALES 5
SEGURIDAD DEL LABORATORIO MICROBIOLGICO. 7
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA. 10

Normativas especificas del estudiante de Medicina.
Protocolos de BIOSEGURIDAD.
UNIDAD I: MICROBIOLOGA GENERALIDADES 12

PRACTICA N 01
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA.
Normas de bioseguridad especifica en Bacteriologa
Acondicionamiento de MATERIALES.
MICROSCOPIO OPTICO
MICROSCOPIO ELECTRONICO
PRACTICA N 02 26
MORFOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.
Estructuras Bacterianas.
PRACTICA N 03
DESINFECCION y ESTERILIZACION DE MATERIALES 34
Mtodos de esterilizacin.
Mecanismos de Accin.
PRACTICA N 04 44
MEDIOS DE CULTIVOS
Clasificacin de los medios de cultivos.
Constituyentes principales de los medios de cultivos.
PREPARACION.
PRACTICA N 05 51
AISLAMIENTO Y SIEMBRA DE BACTERIAS, AEROBIAS Y ANAEROBIAS
Anlisis Cualitativo y Cuantitativo Bacteriano.
Toma de muestras. INOCULO.
SIEMBRA y AISLAMIENTO.
UNIVERSIDAD TECNICA DE
MANABI
FACULTAD CIENCIAS DE LA ESCUELA
SALUD. MEDICINA
PRACTICA N 06 62
LOS COLORANTES.
Tcnicas de TINCION.
Tincin simple.
Tincin compuesta y diferencial.
PRACTICA N 07 66
CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS.
TINCION DE GRAM.
Estructuras de las clulas EUCARIOTAS
Preparacin y Fijacin de Frotis
PRACTICA N 08 74
IDENTIFICACION CLASIFICACION Y TIPIFICACION BACTERIANA.
CULTIVOS PUROS
PCR.
PRACTICA N 09 83
ANTIBIOGRAMAS. Tcnicas y Procedimientos estandarizados.
Sensibilidad y Resistencia. METODO DE KYRBY BAUR.
PRACTICA N 10 89
PRUEBAS BIOQUIMICAS BACTERIOLOGICAS.
Hemlisis, Catalasa, Coagulasa, Bacitracina, Oxidasa, Lactosa,
Metabolismo azucares.
PRACTICA N 11 97
PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRAS.
PRACTICA N 12 103
LAS MICROBACTERIAS. BAAR.
Tincin de ZIEHL NEELSEN.
PRACTICA N 13 108
PARASITOLOGIA.
IDENTIFICACION DE LOS PARASITOS
Examen macroscpico Examen microscpico.
PRACTICA N 14 119
ESTUDIO MORFOLOGICO DE LOS PARASITOS.
Taxonoma PARASITARIA. MICROSCOPIA.
TRABAJO DE PREVENCION. Educacin para la Salud
REFERENCIA BIBLIOGRFICA 131
PROLOGO
A los estudiantes y profesores:
El presente Manual de Prcticas del Laboratorio de Salud e Infeccin Microbiologa y

Parasitologa, se ha realizado para ser un material didctico del laboratorio, el cual
ser utilizado en la Universidad Tcnica De Manab (UTM) en el marco referencial de
los cambios significativos de la sociedad del conocimiento y contempornea.
Se presentar las normas y procedimiento bsicos de trabajo en el Laboratorio de

Microbiologa, para comprender la importancia de realizar un buen manejo y el
reconocimiento del objeto de estudio, desarrollando habilidades y destrezas, que
orientar a la lectura independiente continua.
De antemano se inicia con la introduccin a las Normas de Bioseguridad dentro del

Laboratorio, para un mejor manejo de los diferentes materiales, instrumentos,
equipos, y reactivos qumicos.
La gua cuenta con catorce prcticas explicadas de forma sencilla y ordenada, para
realizar el adecuado procedimiento. Los estudiantes deben leer detenidamente cada
uno de los procedimientos, antes de realizar la prctica respectiva, obteniendo una
mejor comprensin en la observacin del fenmeno biolgico de cada uno de los
seres microscpicos en estudio.
Las prcticas detalladas abordan temas sobre el manejo de bacterias, parsitos,

medios de cultivo, y pruebas bioqumicas, siendo los pilares bsicos y
fundamentales para el aprendizaje de los alumnos en su futura vida profesional.
La Gua cuenta con una prctica especfica estructurada de la siguiente manera, en:
Objetivos y Marco Terico para realizar una conceptualizacin del tema a abordar,
seguidamente se indican los materiales que se utilizarn y su respectivo
procedimiento a manera de pasos enumerados complementados con grficos de
fcil entendimiento.
En la seccin final de la prctica, se redacta la Conclusin en base en los objetivos

planteados, y los resultados propuestos.
De igual manera, se encontrarn las instrucciones para llevar a cabo los

procedimientos de preparacin de soluciones y medios de cultivos comunes
utilizados en el Laboratorio.
Sugerimos este manual para que les pueda servir como una gua y as utilizar los
experimentos propuestos con un gran entusiasmo y perseverancia hacia el xito de
la misma, cumpliendo as con el proceso de enseanza aprendizaje a los futuros
profesionales competentes en su formacin cientfica acadmica y satisfacer todas
sus necesidades, bajo estrictos criterios de estndares de calidad y pertinencia.
El autor agradece anticipadamente la(s) crtica(s) o sugerencia(s) que puedan
tenerlos lectores que sirvan para mejorar el presente trabajo.
INTRODUCCIN.
El conocimiento del mundo bacteriano y su organizacin de acuerdo a un modelo de

estirpe filogentico es un anhelo tan antiguo como la propia bacteriologa.Con la llegada
delas tcnicas de secuenciacin molecular se pudo disponer de las
herramientasadecuadas para construir un modelo taxonmico fundamentado en una
autnticafilogenia estructura en evolucin.
La Microbiologa es la ciencia encargada del estudio de los organismos microscpicos,

deriva de 3 palabras griegas: mikros(pequeo), bios(vida) y logos (ciencia) que
conjuntamente significan el estudio de la vida microscpica. Son estudiados
identificados y considerados Microbios todos los seres vivos microscpicos
consistentes en una sola clula, es decir unicelulares.
Los microorganismos pueden ser Eucariotas (Las clulas poseen ncleo), tales como
los hongos y los protistas, o Procariotas (clulas carentes de ncleo), como las
Bacterias y los Virus (Aunque los virus no son considerados seres vivos estrictamente
hablando).
Las infecciones intrahospitalarias cada vez ms constituyen un serio problema de salud

pblica, ya sea por su efecto sobre la salud de los pacientes, como por los costos que
este problema implica. Esto hace, que en el pas se estn aunando esfuerzos para
implementar sistemas de vigilancia, prevencin y control, orientados a enfrentar este
problema. Por lo que el Medico debe basar su diagnstico en evidencias disponibles,
como son los aspectos epidemiolgicos, y la importante contribucin del Laboratorio
de Microbiologa, que adems de permitir el diagnstico etiolgico, orienta el manejo
clnico teraputico del paciente.
El estudiante de Microbiologa de la Facultad de Ciencias de la Salud, Escuela de

Medicina de la Universidad Tcnica de Manab ser el profesional, quien con los
conocimientos presentes en este manual estar en la capacidad de poder afrontar y
resolver con criterio los problemas presentados ya sea en el desenvolvimiento de sus
competencias basados en evidencias, como realizando medicina preventiva.
INSTRUCCIONES GENERALES
NORMAS GENERALES PARA EL ESTUDIANTE DE
MICROBIOLOGIA MEDICA
1) El estudiante deber previamente conocer su ubicacin de grupo y el local

asignado para las prcticas respectivas de laboratorio de Microbiologa.
2)Todo estudiante debe de tener la competencia objetiva y la destreza
necesaria con cada uno de los equipos de trabajo que va a tener a su cargo y
responsabilizarse durante las prcticas de laboratorio en el nivel respectivo.
Debe cuidar que los equipos e instrumentos de trabajo no sufran dao,
deterioro, ni destruccin alguna, cuidando el patrimonio institucional
universitario.
3)Antes de iniciar actividad o prctica en el laboratorio de microbiologa, cada
uno de los estudiantes deber realizar las consultas con su profesor o
ayudante asignado y en equipo reunir la informacin necesaria y pertinente.
4)El estudiante deber revisar el contenido de cada una de los temas en la gua
y cumplir con cada paso del manual de instrucciones para realizar la
prcticarespectiva, deber conocer los fundamentos tericos-cientficos en
cada proceso y solicitar informacin respectiva, fundamentada y pertinente.
5)Cada uno de los alumnos deber anotar con precisin, detalles de cada uno
de los procedimientos de cada practica y los resultados obtenidos en cada
prctica, responder adecuadamente en la revisin y evaluacin de cada uno
los conceptos tratados, revisados y aprendidos,
6)En cada una de las observaciones microscpicas, debe cumplir con la tarea de
la limpieza y controlar el buen funcionamiento del microscopio, la fuente de
iluminacin los lentes oculares y los lentes objetivos, anotar y dibujar los
caracteres fundamentales desarrollados en cada prctica.
7)El alumno podr ser requerido para efectuar trabajos de investigacin sobre
temas especficos en microbiologa, intra o extra aula, que ser entregado y
calificado por el profesor en un plazo determinado como lo indica el silabo
respectivo.
8)Todo estudiante deber conservar el buen estado y funcionamiento de cada
equipo y del material de cada prctica que se le hay confiado, evitando
causar dao total o parcial, deterioro o prdida del mismo.
9)El acceso al laboratorio de prcticas slo se permite a los alumnos que estn
realizando las prcticas. No se admiten visitas por razones de seguridad.
10) Los laboratorios de investigacin son de acceso restringido al personal
del Departamento.
11) Es obligatorio utilizar batas abrochadas siempre que se est trabajando
en el laboratorio. Durante el periodo de prcticas, la bata no debe
utilizarse fuera del laboratorio.
12) Debe respetarse la prohibicin de beber, comer, masticar chicle o fumar
en el laboratorio y se debe evitar llevarse a la boca ningn objeto
(bolgrafos...) o tocarse los ojos y nariz.
13) En la superficie de trabajo no deben depositarse en ningn momento
ropa u objetos personales.
14) Cada alumno es responsable de la limpieza de su lugar de trabajo y del
material asignado, as como de los microscopios que haya usado.
15) Se deben usar los mecheros Bunsen con precaucin, no dejando
material inflamable cerca y evitando el posible contacto con pelo y ropas.
Se comprobar que se ha apagado el gas al finalizar el experimento y al
abandonar el laboratorio.
16) Est prohibido pipetear con la boca.
17) Ante un vertido accidental de material microbiolgico debe informarse
inmediatamente al profesor encargado del grupo.
18) No se debe forzar un tubo de vidrio o la apertura de un frasco sin tener
protegidas las manos.
19) No se manejarn los autoclaves o el material recin esterilizado si no se

dispone de guantes apropiados.
20) La eliminacin de residuos, material desechable y material reciclable se
realizar siguiendo las pautas de la prctica 1, utilizando los contenedores
dispuestos a tal efecto.
21) Se deben lavar las manos con jabn antisptico ante cualquier
sospecha de contaminacin y siempre antes de marcharse del laboratorio.
Seguridad En El Laboratorio
Antecedentes
La Organizacin Mundial de La Salud (OMS), public en 1983 el primer

Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, detallando los principios bsicos
en cuanto a seguridad biolgica, en el ao 2005 se publica la tercera
edicin de este manual explicando de una manera ms amplia y extensiva
la materia de Bioseguridad, en cuanto a una mala manipulacin de agentes
infecciosos.
Al realizar trabajos con cualquier microorganismo hay que tomar en

cuenta que: Toda muestra biolgica debe ser considerada como infecciosa,
no se puede establecer opiniones personales ante toda manipulacin, por tal
motivo es importante conocer los peligros que implica el manejo de estos
agentes, de acuerdo a su capacidad de riesgo.
Tabla 1. Microorganismos clasificados segn su riesgo.
Microorganismos clasificados segn su riesgo

Microorganismos que tienen pocas
Grupo de riesgo 1 probabilidades
de provocar enfermedades en el ser
(riesgo individual y humano o los
poblacional escaso o
nulo) animales.
Agentes patgenos que pueden
Grupo de riesgo 2 provocar
enfermedades humanas o animales
pero que
tienen pocas probabilidades de entraar
un riesgo
grave para el personal de
laboratorio, la
poblacin, animales o el medio
(riesgo individual
ambiente. La
moderado,
exposicin en el laboratorio puede
provocar una
riesgo poblacional bajo)
infeccin grave, pero existen medidas
preventivas
y teraputicas eficaces y el riesgo de
propagacin
es limitado.
Agentes patgenos que suelen
enfermedades humanas o animales
graves, pero
(riesgo individual que de ordinario no se propagan de un
elevado, individuo a
otro. Existen medidas preventivas y
riesgo poblacional bajo) teraputicas
eficaces.
Agentes patgenos que suelen
enfermedades graves en el ser humano o
los
animales y que se transmiten con
facilidad de un
(riesgo individual y
individuo a otro, directa o
indirectamente. Por lo
poblacional elevado)
regular no existen
medidas preventivas y teraputicas
eficaces
Tabla 2. Relacin de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las
prctica y equipo
Relacin de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las

prctica y equipo
PRCTICAS EQUIPO
GRUPOS DE NIVEL DE TIPO DE DE DE
BIOSEGURID LBORATOR LABORTAOR SEGURIDA
RIESGO AD IO IO D
1 Bsico Nivel 1 Enseanza TMA Ninguno;
Bsica, trabajo en
Investigaci
n. mesa de
laboratorio
al
descubierto
2 Bsico Nivel 2 Servicios de TMA y Ropa Trabajo en
Atencin protectora; Mesa al
seal de descubierto
Primaria; riesgo y
Diagnstico, biolgico CSB para
Investigaci
n. posibles
aerosoles
3 Contencin Diagnstico Prcticas de CSB adems
Nivel 3 especial, Nivel 2 ms de otros
investigaci ropa
n. especial,
medios de
acceso contencin
primaria
controlado y para
flujo todas las
direccional
del actividades
aire
CSB de clase
4 Contencin Unidades de Prcticas de III
Mxima Nivel
4 Patgenos Nivel 3 ms o trajes
peligrosos Cmara de presurizados
junto con
Entrada con CSB
cierre de Clase II,
hermtico, autoclave de
salida con doble puerta
(a travs de
ducha y la
eliminacin pared), aire
especial de filtrado.
residuos
TMA: Tcnicas Microbiolgicas apropiadas. CBS: Cmara de
Seguridad Biolgica
Tabla 3. Clasificacin de los laboratorios segn el nivel de riesgo de los
microorganismos
Clasificacin de los Laboratorios

Se trabaja con organismos reconocidos como
Nivel de patgenos.
Bioseguri Lugar utilizado para enseanza, no se manejan
dad especmenes
clnicos por lo tanto no se requieren barreras
1 primarias
(BS-1) importantes y solo se necesitan mesas de laboratorio.
Equipo de bioseguridad como cmaras de flujo
laminar,
recipientes apropiados anti-aerosoles, guantes,
anteojos,
cubiertas faciales, respiradoras, mandil.
Los agentes son de riesgo moderado como pueden
Nivel de ser: Virus de
Bioseguri la hepatitis B, Salmonella, Toxoplasma, manipulacin
dad de sangre y
muestras clnicas para diagnstico clnico y
2 prcticas de
laboratorio, en la cual una buena tcnica de
(BS-2) manipulacin,
apegada a las normas de bioseguridad, garantiza la
seguridad del
trabajador. Adems de vacunacin contra la
hepatitis B, el
ttano, la tuberculosis, y otros.
Uso de barreras primarias de bioseguridad, mandil,
guantes.
Debe haber sistemas de descontaminacin de
utensilios y
autoclave.
Manejo de agentes transmisibles por aerosoles o por
Nivel de contacto
Bioseguri con piel y mucosa, incluye diagnstico e
dad investigacin. Entre los
agentes estn: el Mycobacterium tuberculosis,
3 Coxiella, Virus de
(BS-2) la Encefalitis de San Luis.
Los residuos deben descontaminarse antes de
desecharse, la ropa
de laboratorio debe esterilizarse antes de enviarla a
lavandera.
Facilidad de las instalaciones, corredores de acceso,
puertas con
cierres automticos, presin negativa, el aire no
recircular y
saldr expelido por un sistema removedor de
partculas HEPA o
tipo N95.
Manejo de muestras siempre con guantes, mandil,
protectores
faciales.
Manejo de microorganismos muy peligrosos o
Nivel de causantes de
Bioseguri
dad enfermedades.
4 Uso obligatorio de cabinas de Bioseguridad tipo III.
El personal debe ducharse, y cambiarse de ropa
(BS-4) antes de entrar y
salir del rea de trabajo.
El edificio debe estar alejado de otras instalaciones y
el aire de
salida debe esterilizarse lo mismo que todos los
desechos.
Acceso restringido solo al personal de trabajo.
Mantener la seguridad y la integridad del personal que labora dentro de las
instalaciones del laboratorio es primordial el uso de medidas de proteccin
sin llevarlas a cabo no deber realizarse ninguna prctica o proceso
experimental sin cumplir con las disposiciones anteriores. Por lo que se
detallan a continuacin las siguientes reglas a seguir dentro del Laboratorio.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO.
1. El acceso al laboratorio de prcticas slo se permite a los alumnos que

estn realizando las prcticas. No se admiten visitas por razones de
seguridad.
2. Los Laboratorios de investigacin son de acceso restringido al personal del
departamento.
3. Es obligatorio utilizar batas o mandil abrochados siempre que se est
trabajando en el laboratorio. Durante el periodo de prcticas, la bata no
debe utilizarse fuera del laboratorio.
4. Debe respetarse la prohibicin de beber, comer, masticar chicle o fumar
en el laboratorio y se debe evitar llevarse a la boca ningn objeto
(bolgrafos) o tocarse los ojos y la nariz.
5. En la superficie de trabajo no deben depositarse en ningn momento ropa
u objetos personales.
6. Cada alumno es responsable de la limpieza de su lugar de trabajo y del
material asignado, as como de los microscopios que haya usado.
7. Se deben usar los mecheros o lmparas de alcohol con precaucin, no
dejando material inflamable cerca y evitando el posible contacto con pelo
y ropas. Se comprobar que se ha apagado el gas al finalizar el
experimento y al abandonar el laboratorio.
8. Est prohibido pipetear con la boca.
9. Ante un vertido accidental de material microbiolgico debe informarse
inmediatamente al profesor encargado del grupo.
10. No se debe forzar un tubo de vidrio o la apertura de un frasco sin tener
protegidas las manos.
11. No se manejarn los autoclaves o el material recin esterilizado si no
se dispone de guantes apropiados.
12. La eliminacin de residuos, material desechable y material reciclable se
realizar siguiendo las pautas de la Prctica N1, utilizando los
contenedores dispuestos a tal efecto.
13. Se deben lavar las manos con jabn antisptico ante cualquier
sospecha de contaminacin y siempre antes de marcharse del laboratorio.
El trabajo en el laboratorio de microbiologa requiere de unas normas

bsicas en el manejo, orden, y cuidado del material de las personas que
laboran all. Las anteriores normas deben ser empleadas en todo momento.
Las siguientes indicaciones generales, son necesarias para llevar a cabo la
prctica de laboratorio.
1. ORGANIZACIN
Conforme a grupos de 8 personas en cada mesa de trabajo cada una
deber estar coordinado y organizado por un lder, ya que de todos los
miembros depender el resultado de la prctica. Se delegar una funcin
a cada integrante del grupo.
2. EL REA DE TRABAJO
El laboratorio de microbiologa dispone de mesas de trabajo, cada una de
ellas equipadas con microscopios, asas, aceite de inmersin, soluciones,
gradilla de tincin, colorantes, lmparas de alcohol industrial.
3. UNIDADES DE SERVICIO
El laboratorio dispone de servicio de agua o lavadero que se encuentra al
costado del laboratorio, lavarse las manos antes y despus de cada prctica
es primordial.
4. EQUIPO PERSONAL
Cada alumno debe traer a la prctica: una bata de laboratorio, un lpiz
vidriografo, una toallita de manos y una libreta de apuntes. Las personas de
pelo largo deben sujetrselo o usar un grupo debe disponer de cinta de
enmascarar de media pulgada, jabn de manos y las muestras para cada
sesin de trabajo.
5. MATERIALES Y EQUIPOS
Los materiales utilizados para cada prctica sern repartidos por el profesor
o lder de cada grupo antes de comenzar. Rotlelos adecuadamente,
indicando su nmero de grupo, mesa, fecha, nmero de muestra. Despus de
que haya realizado la siembra lleve el material a la incubadora al final de la
sesin-. Encienda el microscopio solo el tiempo que lo utilice, guarde la funda
y aljelo de las lmparas de alcohol.
6. LECTURA DE LOS RESULTADOS

Muchas prcticas estn dedicadas a observar el crecimiento de los microbios,
este solo es visible al cabo de varias horas o das de realizar las siembras,
por tal motivo cada laboratorio conlleva una sesin de lectura de los
resultados, esta se realiza durante todo el semestre, las lecturas sern
semanales y correspondern al laboratorio inmediatamente anterior, el
material no ledo tambin ser desechado semanalmente. Una vez tomados
los datos de los resultados entregue los cultivos para su eliminacin.
7. PRECAUCIN DE ACCIDENTES
Informe cualquier accidente o lesin sufrida, en el laboratorio al profesor. Si
llega a romper algo no lo recoja con las manos e informe inmediatamente del
accidente (RECUERDE QUE TODO MATERIAL ES INFECCIOSO SEA
CUIDADOSO). No se debe usar el pelo suelto, use sujetadores para el cabello.
Si tiene lesiones en las manos evite el contacto con el material contaminado,
utilice guantes.
8. RECOMENDACIONES ACADMICAS
Antes de cada sesin entrese sobre el tema de la prctica, lea las
instrucciones y consiga el material solicitado. En el transcurso del laboratorio
tome apuntes constantemente, realice dibujos esquemas de lo observado.
Peridicamente el profesor revisar el manual de laboratorio, el cual se
llevar de forma individual.
PRACTICA #1
INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA
OBJETIVOS
Aprender la rutina y las tcnicas de seguridad en el laboratorio de
microbiologa.
Conocer los principales instrumentos utilizados en el laboratorio de
microbiologa.
Aprender Tcnicas en el manejo de microorganismos.
Montar correctamente una muestra al microscopio, en seco y hmedo.
INTRODUCCION
Clulas Eucariotas y Procariotas
Los hombres poseemos una idea intuitiva de los seres vivos, a los que
reconocemos por su capacidad de crecer, reproducirse y morir, y los
identificamos como vegetales o animales.
Los seres vivos estn formados por clulas; algunos son pluricelulares, como
las plantas y los animales, pero otros y, por tanto invisibles, por lo que no
pudieron ser observados hasta la introduccin del microscopio. Existen dos
clases de clulas: las procariotas y las eucariotas.
Tabla 4. Caractersticas de los tipos de Clulas
Caractersticas de las Clulas

Caracterstic
as Clula Eucariota Clula Procariota
Ejemplo Clula Epitelial EscherichiaColi
Cuerpo No hay membrana nuclear;

nuclear Verdadero Ncleo, membrana No
nuclear, mitosis. hay mitosis
Molcula simple, no
ADN Varios o muchos cromosomas, acomplejada
habitualmente acomplejados
con con histonas
histonas
Composicin
de Tienen esteroles Carecen de esteroles
las
membranas
El sistema respiratorio es
Sistema Presente en orgnulos con parte de
la membrana plasmtica o
respiratorio membranas los cloroplastos del
mesosoma; no hay
mitocondrias
Aparato Presente en orgnulos con Aparato fotosinttico en
membranas internas
Fotosinttico membranas los cloroplastos organizadas;
no hay cloroplastos
La Microbiologa
La Microbiologa estudia los organismos que son demasiados pequeos
para ser claramente percibidos a simple vista, y que se denominan
microorganismos, entre ellos bacterias, virus, algas y hongos.
Normas De Bioseguridad Del Laboratorio

Como objetivo principal de esta gua prctica es ensear a manipular los
microorganismos adecuadamente. Aunque los microorganismos deben ser
manejados con precaucin. Por ello, nunca debe olvidarse la necesidad de
cumplir estos dos requisitos bsicos.
1. Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus

recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de
contaminacin.
2. Evitar que los microorganismos ambientales presentes en la piel,
pelo, aire, ropa, etc. Contaminen nuestras muestras.
Para realizar una buena prctica en el laboratorio de Microbiologa, se

debe tomar en cuenta entre las siguientes reglas de seguridad e
indicaciones:
1. Trabajar con calma y concentracin.
2. Uso de bata de laboratorio.
3. Lavarse las manos con agua y jabn.
4. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado.
5. Como cualquier laboratorio, est prohibido comer, beber, y fumar.
6. No se debe nunca pipetear con la boca.
7. Uno de los riesgos principales en un laboratorio de microbiologa en la
generacin de aerosoles que contengan microorganismos, ya que son
fcilmente inhalados. Los microorganismos deben manejarse siempre
alrededor de la llama del mechero o en una campana de seguridad
biolgica.
8. El transporte y almacenamiento de placas y recipientes que contienen
cultivos representan un riesgo evidente.
9. Bajo ningn concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
10. Nunca se usar una fregadera, papelera o basura comn para
deshacerse del material contaminado. Los desechos contaminados deben
ser esterilizados en el laboratorio antes de procesarlos como residuos.
11. En el laboratorio de microbiologa debe estar siempre presente y
disponible un botiqun bsico de primeros auxilios.
12. En caso de accidente se debe avisar inmediatamente al responsable
del laboratorio, dejando a una persona que vigile para evitar que otros se
contaminen, y se deber cubrir el derrame con un desinfectante.
Un laboratorio de microbiologa es un lugar convenientemente habilitado
donde se pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo
se lleva a cabo con una buena tcnica asptica y por tanto se requiere un
ambiente limpio y ordenado.
Tabla 5. Clasificacin de los agentes infecciosos segn su riesgo biolgico
Clasificacin de Microorganismos segn su riesgo biolgico

Riesgo de
Profilaxis o
Grupo de Riesgo Propagaci
tratamiento
Riesgo Infeccioso na
eficaz
la
Colectivida
d
Poco probable
que
1 causen una No Innecesario
enfermedad
Pueden causar
una
enfermedad y
Generalmente
Poco
2 constituir un probable
posible
peligro para los
manipuladores
Pueden
provocar
una enfermedad
grave y
constituir Generalmente
3 Probable
un serio peligro posible
para los
manipuladores
Provocan una
enfermedad
No conocido en
grave
la
4 y constituyen un Elevado
actualidad
serio peligro
para
los
manipuladores
Materiales De Laboratorio (Generalidades)

En el laboratorio encontramos distintos tipos de materiales: vidrio, plstico,
porcelanaNinguno de ellos, cumple todas las exigencias de laboratorio; as
pues debemos elegir entre ellos, la eleccin va a depender de la aplicacin, del
tipo de producto y de la economa.
El Vidrio
Uno de los requisitos ms importantes que debe cumplir el material de vidrio
es poseer una gran resistencia qumica al agua, cido, bases, y temperatura.
Entre ellos:
MANABI
FACULTAD CIENCIAS DE LA
SALUD. ESCUELA MEDICINA
Tabla 6. Materiales de Vidrio ms usados en el Laboratorio de Microbiologa.
Materiales de Vidrio ms usados en el Laboratorio de

Microbiologa
Material Descripcin Grfico
Recipientes calibrado aproximado o
Vaso no
precipitad calibrado, habitualment
o usados e para
contener soluciones, realizacin de
mezclas.
Al igual que los vasos precipitados se

Matraz trata de
Erlenmeye material de calibracin aproximada,
r no
precisa, pero que permite agitar de
manera
circular mezclas sin que estas se re
rieguen.
Generalmente se trata de un tubo de
Varillas de vidrio
hueco y cerrado en los extremos. Se
agitacin emplea
para agitar
soluciones.
Pequea barra magntica cubierta por

Agitador una
capa de plstico (tefln) y una placa
Magntico debajo de
la cual se tiene un magneto rotatorio a
fin de
crear un campo magntico
rotatorio
Portaobjet Es una lmina de vidrio,
os generalmente de
forma rectangular, empleado para
depositar
muestras que han de ser
observadas al
microscopio.
Cubreobje Son lminas de vidrio que se colocan
tos sobre
muestras que se han de mirar al
microscopio
Permiten la succin de pequeas
Pipetas de cantidades
de sustancia. No estn calibradas,
Pasteur permiten
dispensar el lquido gota a gota.
Pequeo tubo cilndrico de vidrio

Tubo de con un
extremo abierto (que puede poseer
ensayo una tapa)
y el otro cerrado y redondeado, que se
utiliza
en los laboratorios para contener
pequeas
muestras lquidas o slidas.
Recipiente redondo, de cristal o

plstico, con
Caja Petri
una cubierta de la misma forma
que la placa.
Se colocar
emplea para tubos de ensayo y
Gradilla
mantenerlos en posicin
vertical.
Pinza hecha de platino y un filamento

de
nicromo que en un arito de 5
termina mm o
en punta. Se emplea para
Asa transportar o
Bacteriolgi arrastrar o trasvasar inculo
ca (pequeo
volumen que contiene
microorganismos en
suspensin).
Instrumento de plstico o de madera con los
extremos
rodeados de algodn utilizado para recoger
Hisopo muestras y
hacer extendidos en medios de
cultivo.
Pequeo trozo mader redondeada

s s de a con
Palillo de
extremos para muestra
puntiagudos, tomar s y
diente
emulsiones en los
portaobjetos.
Resistente al agua, al alcohol y a la
formalina,
ciertos pueden ser a base de ceras.
Sirven para
Rotulador
detallar la fecha, nombre, procedencia
de la
muestra, cultivo, frotis.
Es un recipiente ovalado de vidrio
resistente al calor,
que almacena alcohol industrial que
Lmpara de empapa un
cordn de algodn hacia el exterior. Sirve
alcohol para calentar
y esterilizar pequeos
materiales.
El plstico
Cada vez son ms tiles de laboratorio que se fabrican en material de este
tipo. Generalmente se trata de material desechable, en los que se debe
evitar de forma especial las contaminaciones.
MANABI
FACULTAD CIENCIAS DE
LA SALUD. ESCUELA MEDICINA
Tabla 7. Equipos Bsicos de Laboratorio de Microbiologa
Equipos Bsicos del Laboratorio de Microbiologa

Descripci
Material n Grfico
Es un sistema de anlisis
Balanzas que se
usan para medir la
masa.
Aparato que pone en

Centrfuga rotacin
una muestra para
acelerar la
decantacin o la
sedimentacin
de sus componentes o
fases,
segn su densidad por
medio
de la fuerza
centrfuga.
Recipiente de presin
Autoclave metlico
de paredes gruesas con
un
cierre hermtico que
permite
trabajar a alta presin
para
realizar una reaccin
industrial,
una coccin o una
esterilizacin
con vapor de
agua.
Incubador Dispositiv sirv
a o que e para
manten
er y hacer crecer
microbiolgico
cultivos s o
cultivos
celulares.
Plato Aparato con el de poder

calenta
Calentador r y mezclar fluidos
contenido
s en recipientes de
laboratori Erlenmeye
o como r,
tubos de ensayo y tubos
de
precipita
do.
Cronmetr Aparato para medir el
o tiempo.
El Microscopio
Los microscopios pticos comnmente usados en microbiologa comprenden
varios tipos: de campo claro, de contraste de fases, de campo oscuro, y de
florescencia. El microscopio corriente se denomina de campo claro, porque
forma una imagen oscura frente a un fondo claro; en el de contraste de fases
las pequeas diferencias en el ndice de refraccin y densidad de la muestra
se convierten en variaciones de intensidad de luz; en el de campo oscuro, el
campo oscuro rodea la muestra aparece negro y el objeto intensamente
iluminado; en el de fluorescencia, la imagen se forma cuando la muestra
marcada con flocromos emite luz.
Microscopio de
Campo Claro
En esta seccin se dar a conocer el manejo del microscopio de campo

claro. Todos los microscopios son de alto costo, fcilmente daables, por lo
cual su cuidado es indispensable para mantenerlo en buenas condiciones.
Para ellos es necesario la familiaridad con sus partes y tener los
conocimientos tericos de la funcin de cada una. As mismo, deben seguirse
instrucciones para su transporte, limpieza, encendido, y apagado y enfoque
de la preparacin que se indican posteriormente.
El microscopio de campo claro est formado por un cuerpo metlico

compacto que incluye una base o soporte y un brazo, donde se fijan el resto
de las partes. En la base se encuentra la fuente de luz; en la parte inferior del
brazo se encuentra la platina, donde se coloca el portaobjetos o revlver, que
sostiene 4 o 5 objetivos de diferentes magnificaciones y en el extremo, la
cabeza portaoculares y los oculares.
Los microorganismos son seres microscpicos.

Su tamao se mide en micras (micrmetro: m),
nanmetro (nm) y el angstrom ()
Sistema de Lentes
Presenta tres lentes colocados a partir de una fuente de luz en el siguiente
orden: un condensador, un juego de objetivos instalado en un soporte
denominado revlver y uno, dos o tres oculares, segn se trate de un
cabeza monocular, binocular o triocular; en este ltimo caso el tercer lente
est dispuesto para un equipo fotogrfico u otro aditamento ptico.
Objetivos. Usualmente los microscopios de luz tienen 4 - 5 objetivos. El de

menor aumento es opcional (mal llamado lupa) y generalmente es de 2,5 o
4X; luego se incluyen objetivos de 10X, 20X, 40X, 100X, ese ltimo tambin
denominado lente de inmersin, por requerir aceite de inmersin. Los
objetivos de menor aumento son ms cortos que los de mayor aumento. A la
vez, los primeros tienen valores pequeos de abertura numrica (AN); por lo
tanto, el lente de inmersin tienen el mximo valor de AN, que generalmente
oscila entre 1.2 a 1.3.
Condensador. El condensador est localizado bajo la platina, tiene la
funcin de condensar la luz en el objeto.
Diafragma Iris. Permite cerrar y abrir regulando el AN del condensador
Oculares. Estn colocados en una cabeza de portaoculares. El aumento final

de la imagen est dado por la combinacin del poder magnificante del
objetivo y el ocular.
Sistema de Iluminacin
Los dos sistemas ms comunes son el bombillo de filamento y la lmpara de
halgeno. En ambos casos la fuente de luz est localizada en un espejo
parablico que produce un haz de luz dirigido hacia el condensador.
Limpieza
Asegurarse de dejar el microscopio siempre limpio, teniendo especial cuidado
con el objetivo de inmersin. Cubrir el microscopio con un protector para el
polvo, que en nuestro medio debera ser de tela.
El Microscopio electrnico:
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD. ESCUELA
MEDICINA
El microscopio electrnico (1934)
1. Mayor nmero de aumentos

2. Acceso a ultraestructura
3. El primero, 1931
4. Los microscopios
electrnicos utilizan rayos de
electrones en lugar de la luz,
lo que les permite tener un
poder de resolucin muy
elevado. La longitud de onda
de los rayos de electrones es
de 0,005 - 0,0003 nm, muy
corta comparada con la de la
luz visible (426 - 750 nm;
violeta - rojo).
Microscopio de barrido: 1965
Microscopa de criofractura 1979
Las dos caras de fractura de la membrana nuclear

Otras tcnicas
Reconstruccin tridimensional a
partir de imgenes de Microscopia
Electrnica
MATERIALES
Para el reconocimiento de materiales de Laboratorio
1. Vaso Precipitado.
2. Pipeta de Pasteur.
3. Tubos de ensayo.
4. Cajas Petri.
5. Portaobjetos.
6. Cubreobjetos.
7. Varilla de Vidrio.
8. Matraz Erlenmeyer.
9. Asa Bacteriolgica.
Para el reconocimiento de Equipo Bsico de Laboratorio
1. Incubadora.
2. Autoclave Horizontal, Vertical.
3. Centrfuga.
4. Balanza.
5. Calentador.
6. Cronmetro.
7. Microscopio.
MEDIOS Y REACTIVOS
1. Aceite de Inmersin.
PROCEDIMIENTOS
1. Con las descripciones anteriores de los materiales que se requieren en el
laboratorio, se proceder a identificarlos y reconocerlos, en cada una de
los grupos de trabajo en sus respectivas mesas correspondientes.
2. Para realizar el enfoque de las placas de los frotis se realizan los
siguientes pasos:
2.1. Colocar el portaobjetos sobre la platina; con el material a
examinar hacia arriba, Escoger el lente objetivo de bajo poder (10X si
se van a observar bacterias). Cerciorarse que el condensador est
colocado arriba y el diafragma cerrado, para luego regular
paulatinamente la cantidad de luz. Encender el microscopio; si se tiene
un regulador de intensidad de luz, girar progresivamente el control
desde cero hasta el punto deseado, sin sobrepasar el lmite indicado
en el regulador.
2.2. Iniciar el enfoque con el control macromtrico y ajustar con el

micromtrico. Mantener ambos ojos abiertos, aun cuando el
microscopio sea monocular; si es binocular, ajustar la distancia entre
los de acuerdo con la distancia entre los ojos. Examinar siempre la
preparacin en bajo poder; esto permitir obtener una visin
panormica, evaluar la calidad de la preparacin en bajo poder; esto
permitir obtener una visin panormica, evaluar la calidad de la
preparacin y escoger la zona a observar.
2.3. Regular la cantidad de luz con el diafragma; notar que cuando se
cierra se reduce la intensidad de la luz, mejora el contraste y aumenta
la profundidad de campo; sin embargo, pierde poder de resolucin, por
lo que debe manejarse cuidadosamente.
2.4. Mover la preparacin al girar los tornillos del carro mecnico,

colocadas a un lado de la platina. Cuando se haya localizado el sitio
que se desea examinar, proceder a aumentar la magnificacin. Para la
observacin de bacterias usualmente se pasa del objetivo que se est
utilizando (10X) al de 4X para colocar fcilmente el aceite de
inmersin y luego se gira el portaobjetivos hasta el objetivo de 100X (o
de inmersin). Abrir el diafragma iris; si no se hace, perder poder de
resolucin y en esta magnificacin esto es crtico.
2.5. Nuevamente cerciorarse que el condensador est colocado

arriba. Si el enfoque previo en 10X ha sido correcto, nicamente se
necesitar ajustar el enfoque girando suavemente el micromtrico. Si
el microscopio es de buena calidad estar parfolizado, (manteniendo la
imagen en foco aunque cambie de objetivo) y no ser necesario hacer
ajustes groseros con el macromtrico para enfocar.
GRFICOS
Reconocimiento de las partes del microscopio.
CONCLUSIN
Los individuos que trabajan en el laboratorio, corren el riesgo de infeccin,
por lo que se debe adoptar un conjunto de normas de seguridad que
sirven para reducir a un nivel aceptablemente bajo el riesgo inherente a la
manipulacin de todo el material peligroso, sea fsico o qumico o
biolgico.
Entre los materiales de laboratorio ms importantes y que sern utilizados
en el laboratorio son: portaobjetos, asa bacteriolgica, lmpara de alcohol;
equipo de laboratorio: autoclave, cronmetro, incubadora y microscopio.
Las Normas de Bioseguridad tiene en consideracin la proteccin de la
integridad del individuo con el fin de mantener seguro las instalaciones
disponibles, el equipo, las prcticas y los procedimientos necesarios en
contra de la exposicin de posibles microorganismos o agentes
patgenos.
Los elementos mnimos que componen el microscopio ptico son una
lente objetivo y otra ocular que produce imgenes ampliadas. Adems del
sistema ptico de lentes, los microscopios pticos poseen un sistema de
soporte, un sistema mecnico de ajuste y un sistema de iluminacin. El
principio de funcionamiento del microscopio ptico es el de
utilizar dos juegos de lentes convergentes que se encuentran situados en
los extremos de un tubo para amplificar una imagen.
CONCEPTOS BSICOS
Asepsia: Ausencia de microorganismos patgenos.

Microorganismos Patgenos: Es causante de enfermedad.
Contaminacin: Presencia de agentes infecciosos vivos en la superficie del
cuerpo, prendas de vestir o artculos sucios (no constituye infeccin).
Infeccin: penetracin y desarrollo o multiplicacin de un agente infecciosos
en el organismo de una persona o animal.
Enfermedad infecciosa: Enfermedad clnicamente manifiesta del hombre
resultados de una infeccin.
Asepsia mdica: Normas ideadas para reducir el nmero de transmisin de
microorganismos patgenos, ej.: lavado de manos.
Desinfeccin: proceso por el que se da muerte a microorganismos
patgenos pero no necesariamente a sus esporas, aplicado sobre un objeto
inanimado (inerte).
Desinfectante: Sustancia empleada para la desinfeccin, ej.: alcohol
yodado, sabln. Antisepsia: Proceso de lisis o inhibicin del crecimiento
bacteriano sobre la superficie de tejidos vivos.
Antisptico: Sustancia empleada para la antisepsia. Por lo general su uso es

inocuo en las personas ej.: alcohol 70, agua oxigenada.
Espora: Microorganismos que en determinadas circunstancias producen una
especie de cpsula que le permite pasar por una fase de inactividad, que
ms tardeen situaciones adecuadas recuperan su actividad, ej.: Clostridium
tetan, causante del ttanos.
Limpieza: Es la remocin mecnica de toda materia extraa en el ambiente,
en superficies y objetos utilizando para ello el lavado manual o mecnico.
Normalmente se usa agua y
detergente para este proceso. El propsito de la limpieza es disminuir el
nmero de microorganismos a travs de arrastre mecnico y no asegura la
destruccin de stos. Bactericida: Sustancia qumica que elimina todas las
bacterias, patgenas y no patgenas, pero no necesariamente las esporas
bacterianas.
Bacteriosttico: Sustancia qumica que previene el crecimiento de
bacterias, pero no necesariamente las destruye. En muchas ocasiones la
diferencia entre bactericida y bacteriosttico nicamente depende de las
condiciones de aplicacin: tiempo, temperatura, pH.
CUESTIONARIO.
1. Cite 5 normas de bioseguridad de mayor importancia en el

laboratorio de microbiologa.
2. Verdadero o Falso
Entre los materiales y quipos ms utilizados de microbiologa
tenemos:
Cucharn, esptula, asa bacteriolgica. ( )

Lmpara de alcohol, autoclave, incubadora. ( )
Varilla, cucharn y portaobjetos. ( )
Portaobjetos, asa bacteriolgica, microscopio. ( )
3. Observar al Microscopio asignado y rotular adecuadamente el

grfico siguiente:
PRACTICA #2
MORFOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS
OBJETIVOS
Definir las caractersticas de las formas bacterianas, describiendo sus
respectivas agrupaciones, microscpicamente.
Identificar los aspectos fundamentales de la morfologa bacteriana
macroscpicamente.
INTRODUCCION
Entre las principales caractersticas de las bacterias se encuentran, su
tamao, forma, estructura, y tipo o modo de agrupacin. Todas estas
caractersticas van a constituir la morfologa propia de las clulas
bacterianas.
Las bacterias son de pequeo tamao, por lo que para su observacin

es preciso utilizar el microscopio ptico. Su tamao se mide en m
(0.000001) y oscila entre 0,2 y 2 m.
La morfologa nos da una informacin primaria sobre el tipo de

bacteria, pero no de forma concluyente.
Las formas bsicas son: esfrica (coco), bastoncillo o cilndrica (bacilo),

helicoidal (espirilo), en forma de coma (Vibrio), espiral (espiroqueta), estrella
y cuadrangular.
Tabla 8. Morfologa Bacteriana
Morfologa Bacteriana
Formas Descripcin Grfico
Micrococcus
Dispuestos de manera individual
y
separados de unos de los otros.
Diplococos
Cocos
Forma
Esfrica Son cocos dispuestos en parejas.
Esferoides, Ejemplo: Neisseria meningitidis
ovoides,
lanceolados
,
reniformes. Estreptococos
Son cocos dispuestos en cadenas.
Ejemplo: Streptococcus pyogenes
Ttrada
Son cuatro cocos agrupados
Sarcina
Es la Agrupacin de 8 cocos en
forma de cubo. Ejemplo:
Micrococcus.
Estafilococos
Son agrupaciones de cocos en
racimos irregulares. Ejemplo:
Staphylococcus aureus.
Diplobacilos
Bacilos en parejas
Estreptobacilos
Bacilos en cadenas
Bacilos
Forma
alargada
Rectos, Empalizada.
ahusados,
ramificados
,
curvos, Cocobacilos.
espirales.
Extremos en Maza.
Extremos Redondos.
Extremos Cuadrados.
Fusiformes.
Espirilo.
Vibriones.
Helicoidale
s
Borrelia.
Tambin
llamadas
espirales,
son
las
espiroquet Treponema.
as
que tienen
espiras
flexibles
y
ondulantes
. Leptospira.
Estructuras Externas de las Bacterias

Una clula bacteriana tpica presenta una serie de estructuras fuera y dentro
de su pared celular. No todas las estructuras se encuentran en todas las
bacterias, pero alguna si son comunes.
En el exterior de una clula bacteriana pueden encontrarse tres tipos

de estructuras: los flagelos, los cuales permiten la movilidad o locomocin,
los Pili tambin llamados fimbrias, pequeos pelos con funciones diversas y
la cpsula, que es una capa mucoide que rodea a la clula.
Flagelos
Una bacteria puede tener uno o ms flagelos, y la localizacin de este
ltimo en la clula puede varias, dependiendo de la especie bacteriana.
Si los flagelos se localizan en un extremo o en ambos extremos de la
bacteria, reciben el nombre de flagelos polares. Si se presentan un solo
flagelo, la bacteria se denomina monotrica; si posee dos o ms flagelos
en solo uno de los extremos, se llaman lofotrica; si posee dos o ms
flagelos en ambos extremos, reciben el nombre de anfitricas; y si posee
flagelos en toda la superficie se denominan peritricas.
Tabla 9. Disposicin de los Flagelos.
Disposicin de los Flagelos

Monotric
as Lofotricas
Anfitricas Peritricas
Pilis o Fimbrias
Apndices diminutos, tambin filamentosos, rectos y cortos,
distribuidos por toda la superficie, y le permiten a la bacteria la
transferir material gentico (Pili sexual), otros sirven para adherirse a
las superficies.
Cpsula
La Cpsula est formada por una sustancia viscosa, en s polisacridos
segregados por la clula bacteriana, sirven para proteger a la bacteria
de la desecacin, la protege de virus bacterianos y de los efectos de
metales pesados que le son txicos.
Colonias Bacterianas.
Una colonia es una agrupacin de bacterias, que se desarrollan en un medio

propicio con nutrientes.
Forma de las Colonias

Segn el espesor, se dividen en: planas, elevadas, semiconvexas,
cncavas, semicncavas, semiesfricas, en meseta.
Segn los bordes, se dividen en: lobuladas, onduladas, rizoides,

redondeadas, filamentosas, espiculadas.
Superficie de Colonia
Corresponde al aspecto de la colonia y se dividen en:
Lisa, rugosa, acuminada, mucosa, seca, es importante
diferenciarlas, ya que stas suelen presentar cpsulas segn
su superficie lisas o rugosas, donde las segundas suelen
presentar cpsulas u otros componentes superficiales que
proporcionan un aspecto ms compacto o rugoso,
relacionando este tipo de bacterias con una mayor virulencia.
Consistencia de la Colonia
Las colonias pueden ser duras, viscosas, mucosas, secas, muy secas,
cremosas, etc. Las colonias mucosas, son muy tpicas de levaduras y
menos frecuentes en bacterias. En general, la mayor parte de las
bacterias producen colonias de consistencia ms o menos mantecosa,
aunque existen excepciones.
MATERIALES
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Palillos.
Lmpara de alcohol.
Guantes.
Mascarilla.
Mandil.
Equipo
Microscopio.
MEDIOS Y REACTIVOS
Aceite de Inmersin.
Suero Fisiolgico.
Muestra de Heces.
PROCEDIMIENTOS
Para poder realizar diferenciar la morfologa bacteriana, es necesario realiza
un frotis en fresco, el cual es un mtodo de observacin in vivo de bacterias,
el cual se realiza de la siguiente manera.
1. Utilizar los guantes, mascarilla, mandil.
2. Encender la lmpara de alcohol, disponer la muestra de heces
atrs de la lmpara encendida.
3. Disponer el portaobjetos delante de la lmpara de alcohol, colocando
una pequea gota de suero fisiolgico.
4. Con ayuda de un palillo sacar una pequea muestra de heces detrs
de la lmpara de alcohol, y extender encima de la gota de suero
fisiolgico, emulsionando la muestra.
5. Colocar un portaobjetos encima del frotis en fresco, y llevar a observar
al microscopio, y dibujar en una hoja bond las bacterias.
6. Si se requiere observar con mayor detenimiento amplificando ms
la imagen usar el aceite de inmersin.
GRFICOS
Realizacin del frotis en fresco. Emulsin de la muestra de heces con la gota de
suero fisiolgico.
Tabla 10. Ejemplos de la Morfologa y Agrupaciones de las bacterias en la

Observacin al Microscopio
Morfologa y Agrupaciones de las Bacterias

Cocos Grampositivos
Staphylococcus Micrococcus Streptococcus
Neumococo Peptococcus Peptostreptococcus

Cocos Negativos
Neisseria Moraxella Acinetobacter

Bacilos
Grampositivos
Corynebacterium Propionibacterium Listeria
Lactobacillus Bacillus Clostridium
Actynomices Nocardia Borrelia

Bacilos
Gramnegativos
Gardnerella Haemophilus Brucella
Enterobacterias Pseudomonas Vibrio
Campylobacter Bacteroides Fusobacterium

CONCLUSIN
Los cocos se agrupan en parejas (diplococos), en cadenas ms o menos
largas (estreptococos), en racimos (estafilococos), y en ttradas o
paquetes cbicos (micrococos), los bacilos se agrupan en parejas
(diplobacilos), raramente en cadenas (Estreptobacilos), en empalizada,
letras (X,L, V) y caracteres chinos (corinebacterias); los espirilos suelen
agruparse pero pueden distinguirse formas con una sola curvatura,
semejantes a una coma (vibrios), y con varias curvaturas y aspecto
ondulado (campilobacterias). Algunas bacterias presentan un gran
polimorfismo; otras, formas filamentosas y ramificadas semejantes a
micelios de hongos (actinomicetos), unas pocas, formas largas, finas o
gruesas, enrolladas en espiral (espiroquetas).
El frotis directo obtenido por disolucin de una partcula muy pequea de
heces en una gota de agua o de solucin fisiolgica, constituye un mtodo
sencillo y rpido de examen de parasitologa (protozoarios, huevos de
tenia) ms no de bacteriologa.
La morfologa y agrupaciones tpicas de las bacterias solamente se
observan cuando las clulas son jvenes. En los cultivos o cuando las
bacterias estn sometidas a condiciones desfavorables, surgen las
llamadas formas de involucin: los cocos se hinchan, los bacilos se curvan
o parecen ramificarse y las estructuras internas desaparecen.
CUESTIONARIO
1. Elabore un mapa conceptual acerca de la distinta morfologa
bacteriana de los cocos.
2. Cite ejemplos de gneros bacterianos de Cocos Grampositivos.
3. Esquematice la diferente disposicin de los flagelos en una

bacteria.
PRACTICA #3
DESINFECCION Y ESTERILIZACIN DE MATERIALES
OBJETIVOS
Conocer los principios generales de las tcnicas de esterilizacin de

vidrios de uso comn en Microbiologa.
Observar el efecto de las condiciones de asepsia en el control de
la contaminacin microbiana en el laboratorio.
INTRODUCCION
Todo material que va a ser utilizado en el laboratorio de microbiologa deber

cumplir una serie de condiciones entre ellas, y de forma esencial, una total
asepsia del material que se va a utilizar, aunque no siempre es estrictamente
necesario. Esto depender de las prcticas que se realicen en cada
momento. As pues, en todo laboratorio de microbiologa se deber tener en
cuenta que:
Todo material utilizado para la recogida de cualquier tipo de muestra que

posteriormente ser procesada ene laboratorio deber estar totalmente
esterilizado.
Todo material utilizado para la realizacin de las pruebas oportunas

(placas petri, tubos de ensayo, medios de cultivo, pipetas, asas de
siembra), en un laboratorio de microbiologa deber estar estril.
Es fundamental que todo material que tenga que estar en contacto con un
grmen problema est estril.
Antes de cualquier esterilizacin, el material deber estar limpio y/o

desinfectado.
Conviene, si es econmicamente viable, utilizar material desechable.
En el laboratorio de microbiologa, el material de uso asptico deber

guardarse separadamente del de uso sptico.
La manipulacin de todo material y/o muestra deber ser la adecuada

siguiendo el protocolo de trabajo preciso, teniendo en cuenta las medidas
cautelares para la prevencin de accidentes laborales.
Bioseguridad
Conjunto de procedimientos y normas para conservar la salud de las
personas con actividad de riesgo para adquirir enfermedades.
Para aislar un microorganismo de un proceso infeccioso es necesario
inocularlo en un sistema estril.
La Desinfeccin y la Antisepsia
Son elementos claves en cada una de las actividades en que se desarrolla un
acto mdico.
Esterilizacin
Es la condicin de estar libre de microorganismos en cualquiera de sus
formas puede realizarse por mtodos fsicos y qumicos. Es un estado
absoluto de pureza.
Desinfeccin
Es la eliminacin selectiva de ciertos microorganismos indeseables a fin
de impedir su transmisin por interferencia en su estructura o
metabolismo.
Es selectiva y se aplica a objetos inanimados o superficies. En general

se usan agentes qumicos desinfectantes o germicidas.
Antisepsia
Es el uso de una sustancia qumica, no txica (antisptico) sobre tejidos
vivos, para prevenir o detener el crecimiento o la accin de los
microorganismos, ya sea inhibiendo su actividad o destruyndolos.
Asepsia
Estado libre de microorganismos.
Mtodos de Esterilizacin
Fsicos
Calor.
Radiaciones.
Filtracin.
Ultrasonido.
Qumicos
Distintas sustancias: como xido de etileno, glutaraldehdo y
formaldehdo.
Mecanismos de
Accin 1.
Alterando el
ADN.
Radiaciones como UV, ionizantes.
Alquilantes, como el glutaraldehdo, formaldehido y xido de etileno.
2. Alterando las protenas y enzimas.
Calor, cidos y lcalis.
Oxidantes, como el perxido de
hidrgeno y Iodo. Metales pesados,
como el mercurio.
3. Alterando la membrana celular.
Mediante el uso
de:
Alcoholes.
Fenoles.
Agentes Tenso-activos, como amonios cuaternarios, jabones y detergentes.
Factores que afectan la potencia desinfectante

1. Tiempo
2. Temperatura
3. PH
4. Concentracin del agente.
5. Presencia de Materia Orgnica
6. Caractersticas del Microorganismo.
Esterilizacin
Fsicos
Calor
Seco:
Incineracin.
Flameado.
Aire caliente.
Hmedo:
Vapor.
Fluente.
A presin.
Tindalizacin.
Aire Caliente
Horno de Pasteur o Estufas
Material de Vidrio, metales, objetos termoestables, a una
temperatura de: 160C X 2 hs
170C X 1
hs 180C X
3 min
Calor Hmedo
Autoclave
Vapor Fluente:
100C X 30 min, para sustancias termolbiles a ms de 100C.
Vapor a Presin:
Ms utilizado y ms seguro: Todo tipo de material de laboratorio
como medios, instrumental, ropa.
121C X 15
min 134C X
7 min
Las temperaturas alcanzadas son: 1 at: 121C; 1,5 at: 126C y 2
at: 134C.
Agentes Qumicos
Desinfectantes:
Alcohol.
Fenol.
Jabones.
Detergentes
catinicos.
Soluciones
cloradas. cidos y
lcalis.
Formaldehdo.
Antispticos:
Alcohol Etlico al 70%.
Clorhexidina.
Jabones.
Detergentes.
Soluciones Yodadas.
Metales Pesados.
Perxido de Hidrgeno 3-6%.
Fenoles y Derivados
Actan en presencia de materia orgnica.
Al 5% excelente desinfectante para Mycobacterium tuberculosis, es de
olor muy picante y txico.
Alcoholes
Etlico o isoproplico al 70%.
Concentraciones menores al 45% tienen una actividad incierta.
Desinfeccin y antisepsia 2 minutos de contacto mata casi al 90% de
los microorganismos cutneos.
Clorhexidina
Potente antisptico para G+ y G-.
Acta en presencia de materia orgnica.
Puede utilizarse en solucin acuosa o alcohlica al 1%.
Detergentes catinicos (amonios cuaternarios)
Mayor actividad a PH alcalino.
No son esporicidas, ni tuberculicidas. En la actualidad las Pseudomonas
son refractarias. Su accin es interferida por la presencia de materia
orgnica, y son neutralizados pro jabones y detergentes aninicos.
Se usan como desinfectantes (saneamiento ambiental).
Cloro y Compuesto
El ms usado: Hipoclorito de Na.
Se usan como desinfectantes de superficie de instrumentos de
laboratorio, en solucin acuosa, material contaminado 1/10, sino al
0.3%.
Inestable, las soluciones se deben preparar en el momento y proteger
de la luz y el calor.
Iodo y Compuestos
Para antisepsia de heridas y piel.
Perxido de Hidrgeno
Se utiliza al 3-6%.
Solucin madre al 30%, a partir de aqu se hace la
solucin final. Se debe preparar antes de usar.
Guardar en frasco caramelo.
Para antisepsia de heridas y desinfeccin (dispositivos mdico-
quirrgicos y lentes de contacto blandos)
Formaldehdo
Se presenta comercialmente en solucin acuosa al 40%, a partir de ella
se realiza la solucin final al 3 u 8 % segn su uso.
Formalina al 8% esporicida, no menos de 18 hs. A
temperatura ambiente. Para desinfeccin (laboratorio,
instrumental, guantes).
Preparacin de vacunas al 0,2% - 0,4%.
Los materiales deben seguir el mismo tratamiento que para el xido de
etileno y glutaraldehdo.
MATERIALES
Portaobjetos.
Hisopos.
Paletas o baja-lenguas.
Pipetas de 10 ml.
Cajas Petri.
Papel de Empaque.
Piola de algodn.
Matraz Erlenmeyer.
Vaso de Precipitacin.
Equipo
Autoclave.
MEDIOS Y REACTIVOS
Hipoclorito de sodio. (NaClO).
Agua destilada (H2O)
PROCEDIMIENTOS
1. Revisar que la vlvula de seguridad del autoclave funcione
normalmente.
2. Proceder a colocar una cantidad necesaria en el recipiente del autoclave,
seguidamente colocar la rejilla base de la olla que sostendr los
materiales que se pretenden esterilizar.
3. Con ayuda de papel de empaque, y piola de algodn, proceder a
envolver cada uno de los materiales a esterilizar.
4. Colocar todos los materiales envueltos en la olla del autoclave.
5. Colocar la tapa del autoclave encima de la olla que contiene los
materiales.
6. Tomando en cuenta la seguridad del autoclave, cerrar las vlvulas a la
par, es decir cada vlvula del lado contrario se cerrarn dos a la vez.
7. Encender el autoclave vertical y esperar a que comience a subir la
temperatura.
8. Revisar que la vlvula de seguridad se encuentre en perfecto estado, y
que el registro de presin sea de 15 libras de presin durante 30 min.
9. Colocar los materiales dentro del autoclave horizontal, y abrir la
compuerta.
10. Guardar los materiales en el autoclave horizontal y cerrar la
puerta.
11. Encender el autoclave y revisar que la presin y la temperatura
se mantengan constante.
12. Verificar que la presin del autoclave horizontal sea de 15 lb de
presin por 30 min.
13. Una vez que ambos autoclaves ya llegaron a la presin y
temperatura ptima de esterilizacin, dejar reposar y esperar a que el
vapor interno se disipe. Una vez que haya toda la seguridad de haber
extrado la mayor parte de vapor, abrir el autoclave y sacar los
materiales empaquetados.
14. Una vez que se requiera de algn material de laboratorio se
buscar en los estantes de materiales, y durante la prctica si se va a
utilizar en ese momento se sacar el material del empaque y se trabaja
solo con el material esterilizado.
GRFICOS
Tabla 11. Procedimiento de esterilizacin de Materiales de Laboratorio.
Procedimiento De Esterilizacin De Materiales De

Laboratorio
Paso N 1 Paso N 2
Paso N 3 Paso N 4
Paso N 5 Paso N 6
Paso N 7 Paso N 8
Paso N 9 Paso N 10
Paso N 11 Paso N 12
Paso N 13 Paso N 14
CONCLUSIN
Todo material antes de ser ingresado en el autoclave debe ser sanitificado
o higienizado, y debe ser sometido a una temperatura de 120C por 15
libras de presin: 15 min, y es una de los mtodos ms eficaces.
La ebullicin de 100C destruye a muchas clulas vegetativas y virus en el
plazo de 10 min, adems de la esterilizacin por medio del autoclave,
existe el mecanismo de pasteurizacin, en la cual se usa una temperatura
elevada y despus se la baja sbitamente a temperaturas bajas.
La esterilizacin es un estado absoluto, y no relativo, para realizarla se la
puede realizar utilizando vapor, en este caso calor hmedo, en la cual
para poder desorganizar a las protenas que forman parte de la pared de
peptidoglucano de las bacterias, es gracias a la presin que acta de
manera negativa sobre la superficie bacteriana.
La presin del autoclave al principio debe ser purgada liberando las
primeras cantidades de aire comprimido y cerrando la vlvula de control,
para as una vez que alcance su temperatura ptima, se proceda a apagar
y dejar reposar hasta que se libere el vapor
contenido, porque se basa en la relacin inversamente proporcional de
que: A mayor temperatura, menor tiempo necesita un material en el
autoclave para ser esterilizado.
En relacin con los materiales de vidrio, estos se proceden a lavar con un
agente qumico, en este caso hipoclorito de sodio (NaClO), para
desinfectarlos, y reducir el nmero de microorganismos presentes en
ellos, y se los seca con toallas desechables.
CUESTIONARIO
1. Qu tipos de sustancias son utilizadas en el proceso de

esterilizacin?
2. Cules son los mecanismos de Accin de los Antimicrobianos?
3. Cul es el concepto de la palabra Antisptico, y Desinfeccin?

PRACTICA #4
MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVOS:
Conocer la clasificacin, preparacin, esterilizacin y distribucin de los
mediosde cultivos.
Adquirir conciencia de la importancia que tiene la correcta preparacin
delmedio de cultivo en la prctica microbiolgica mdica.
Adquirir prctica en el preparado de algunos medios de cultivo a partir de
suscomponentes individuales.
Reconocer la necesidad de evitar la contaminacin tanto de los medios
decultivo como de los elementos utilizados en el laboratorio demicrobiologa
mdica.
INTRODUCCIN
Las bacterias se encuentran en el ambiente junto con otros

microorganismos, raznpor la cual es difcil aislarlas. A menudo nuestro
inters es caracterizar una especiebacteriana, para lo cual debemos estar
preparados para aislar, cultivar e identificar a lamisma. Si bien el
aislamiento es un paso crucial en este camino, comenzaremosexaminando
los medios de cultivo. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otroscomponentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de losmicroorganismos. Es decir, es cualquier
medio que proporcione substanciasnutritivas que permitan el desarrollo y
reproduccin de microorganismos. La diversidadmetablica de los
microorganismos es enorme, por ello, la variedad de medios decultivo
tambin lo es, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todosellos.
El conocimiento de las necesidades nutritivas y fsicas de los
microorganismos esfundamental para seleccionar un medio de cultivo
adecuado.
Los requisitos que debe reunir el cultivo de un microorganismo tienden a
reproducir el habitad o ambiente natural en el que se desarrollan.
Las caractersticas de los microorganismos a tener en cuenta al
momento depreparar un medio de cultivo adecuado para su
desarrollo en el laboratorio son:
Tipo trfico: se refiere a los requerimientos de carbono y energa,
segn los cuales se los clasifica en auttrofos, hetertrofos,
quimiotrofos (litotrofos u
Organotrofos) y fototrofos.
Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos y
microaerfilos.
Temperatura ptima de crecimiento: segn el rango de
temperatura al cual cada microorganismo presenta su mayor
crecimiento, se los clasifica en sicrfilos,
mesfilos y termfilos.
Rango de pH: en general el rango ptimo de pH para la mayora de
las clulas bacterianas oscila entre 6,6 y 7,2.
CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGN SU ORIGEN
Los medios de cultivos pueden clasificarse en:
Naturales: Son aquellos que existen como tales en la naturaleza, por
ejemplo: agua, suero, papa, huevos, leche, sangre, tierra, etc.
Artificiales: Estn compuestos de substancias que son manipuladas
por el hombre en el laboratorio. A los medios artificiales a su vez se los
puede dividir en: sintticos y complejos. Un medio del cual se
conoce exactamente su composicinqumica se denomina sinttico o
qumicamente definido; puede ser una simplesolucin de sales con
una fuente de carbono o puede contener muchos compuestos
orgnicos. Un medio no sinttico o complejo es aquel del que
sedesconoce su composicin qumica exacta; se trata bsicamente de
extractos detejidos vegetales, animales o microbianos, cuya
concentracin no se conoce conexactitud y que proveen todos los
nutrientes necesarios, como por ejemplo el caldo nutritivo.
Clasificacin de los Medios ARTIFICIALES COMPLEJOS segn su
Finalidad
Medios
Artificiales I. COMUNES
Complejos II. ESPECIALES II.a. Enriquecidos
II.b. Selectivos
II.c. Diferenciales
I. Medios comunes: Permiten el desarrollo de una gran variedad de

microorganismos,como el caldo carne y agar carne.
II. Medios especiales: se los clasifica segn su finalidad.
II.a Medios enriquecidos o mejorados: se obtienen a partir de un medio
comn, conel agregado de elementos nutritivos elegidos segn las
necesidades. Se menciona a la sangre, albmina, yema de huevo etc. Se
utilizan para el cultivo de microorganismosexigentes en cuanto a sus
requerimientos nutricionales. Se citan como ejemplos elagar sangre y el agar
chocolate.
II.b Medios selectivos: Estos medios han sido modificados de alguna

manera paraque, en una flora mixta, permitan el desarrollo de determinadas
especies y al mismotiempo inhiban la proliferacin de la flora acompaante.
Para esto ltimo se buscaestablecer condiciones desfavorables de pH,
nutrientes y de temperatura, o por elagregado de inhibidores.
El agar Saburaud es un ejemplo de medio selectivo, en el que el pH de 5,6
favorece eldesarrollo de hongos al mismo tiempo frena el desarrollo de la
mayora de lasbacterias.
Ejemplos de sustancias inhibidoras son algunos colorantes (cristal violeta,
verdebrillante), los antibiticos, el alcohol fenil etlico y la azida de sodio.
II.b.1 Medios selectivos para enriquecimiento: Son medios en que

losmicroorganismos crecen en libre competencia, vindose favorecidos
aquellos para loscuales las condiciones de desarrollo son las ms apropiadas,
no llegndose a inhibirtotalmente el crecimiento del resto de
microorganismos.
II.b.2 Medios selectivos para aislamiento: son medios selectivos slidos,

se utilizanpara sembrar directamente con la muestra incgnita o a partir del
medio de cultivo selectivo paraenriquecimiento.
II.c Medios diferenciales: permiten el desarrollo de muchas de las

especies quecoexisten en una mezcla que se desea aislar. Aunque dos o ms
tipos demicroorganismos pueden crecer en este medio, algn elemento
presente en l permitediferenciarlos, por ejemplo un indicador. Estas
diferencias se basan en algunapropiedad bioqumica que unos poseen y otros
no. Un ejemplo de este tipo es el agarcon eosina azul de metileno que
diferencia Escherichiacolide Enterobacteraerogenes, sobre la base de la
diferencia de color de sus respectivas colonias.
Cuando se cultivan ambas especies sobre agar nutritivo, forman colonias de
colorblanco grisceo. Sin embargo en agar con azul de metileno las colonias
de E. colisonoscuras y con brillo metlico, en cambio las colonias de E.
aerogenesson rosadas conun centro azul y rara vez presentan brillo.
En su mayor parte los medios diferenciales son asimismo selectivos, por el
agregadode agentes que inhiben el crecimiento.
CARACTERSTICAS GENERALES DE UN BUEN MEDIO DE CULTIVO

Un buen medio de cultivo es aquel que le provee a los microorganismos
losnutrientes indispensables en la concentracin adecuada, cantidad
necesaria desales y agua, que tenga la consistencia y el pH adecuados, que
sea estril y que nocontenga sustancias inhibidoras.
Como ya se ha sealado, la provisin de elementos nutritivos en
concentracinadecuada, depende del conocimiento que se tenga de las
condiciones del desarrolloen el hbitat natural. La cantidad de sales y agua
que se agregue a un medio de cultivo, se relacionadirectamente con el pH, la
fluidez y la presin osmtica que se le quiera brindar a cada uno de los
microorganismos y sus colonias.
En funcin de la consistencia se puede clasificar a los medio enlquidos y

slidos. Enel laboratorio, los medios de cultivo pueden presentarse en forma
lquida, en cuyocaso se los denomina caldos, o en forma slida si se le
agrega agar al caldo.
En cuanto a la esterilizacin, este procedimiento garantiza la destruccin de

todos losmicroorganismos no deseados que se encuentran presentes durante
la preparacindel medio de cultivo.
Si los componentes del medio son estables al calor se los lleva al autoclave
(121 C, 15 minutos). Si se requiere sangre u otros componentes inestables,
como antibiticos y compuestos fcilmente oxidables al calor, se los
esteriliza por separado por otros procedimientos y se lo agrega al medio que
ha sido esterilizado cuando se haya enfriado a 500C.
En cuanto a los inhibidores, cabe aclarar que un compuesto puede actuar
comoinhibidor para algunos microorganismos y no para otros.
CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.
Los elementos citados a continuacin, son los ms frecuentemente usados
en lapreparacin de los medios de cultivo, aunque pueden no ser los nicos e
inclusoalguno de ellos puede estar ausente de la preparacin.
Agua destilada o desionizada. Libre de inhibidores del crecimiento.
Agar. El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los
medios de cultivo. El componente dominante en el agar es un
polisacrido, al que acompaan algunas impurezas y que se obtiene de
ciertas algas marinas. Existe en rama o en polvo, se solubiliza en agua
a ebullicin (funde hacia los 98 C) y al enfriarse forma un gel inodoro e
inspido (se gelifica alrededor de los 42 C), dependiendo de su grado
de pureza, por lo que tiene la ventaja de ser slido a la temperatura de
incubacin. Con la excepcin de algunos microorganismos marinos, el
agar no es empleado como nutriente. Para preparar un medio slido se
le agrega agar al 12- 18 %. Si se desea visualizar movilidad se usa agar
blando se le agrega agar al 3%.
Extractos. Para su preparacin, ciertos rganos o tejidos animales o
vegetales (por ejemplo carne, hgado, semillas, etc.) son extrados con
agua y calor, y posteriormente concentrado hasta la forma final de
pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son frecuentemente
empleados en la confeccin de medios de cultivo. Ejemplos: extracto
de carne, de levadura, de malta, etc. En el caso del extracto de carne
en polvo o pasta, provee sustancias nitrogenadas, minerales y
vitaminas, mientras que el extracto de levaduras provee vitaminas del
grupo B, nitrgeno y carbono.
Peptonas. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos
nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad qumica
definida; se obtienen por digestin enzimtica o qumica de protenas
animales o vegetales (soja, carne, gelatina, casena, etc.). Las
peptonas son muy ricas en pptidos y aminocidos, pero pueden ser
deficientes en determinadas vitaminas y sales. Proveen
proteasas,peptonas,polipptidos y aminocidos.
Fluidos Corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o
suero sanguneo son frecuentemente aadidos a los medios empleados
para el cultivo de algunos patgenos. La sangre no puede ser
esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en condiciones aspticas
directamente de un animal sano. Los fluidos corporales no solamente
contribuyen con factores de crecimiento, sino tambincon sustancias
que neutralizan inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.
Sistemas amortiguadores. Algunos componentes son incorporados
al medio de cultivo para mantener el pH dentro del rango ptimo del
crecimiento bacteriano.Los microorganismos ms comunes son
neutrfilos (el pH ptimo para su crecimiento est prximo a la
neutralidad), y sales como fosfatos bisdicos o bipotsicos, o
sustancias como las peptonas, previenen una desviacin del pH.
Indicadores de pH. Indicadores cido- base se aaden a menudo a
los medios de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.
Agentes reductores. Cistena, tioglicolato y otros son agentes
reductores que seaaden a los medios de cultivo para crear
condiciones que permitan el desarrollode los grmenes microaerfilos o
anaerobios.
Agentes selectivos. La adicin de determinadas sustancias al medio
de cultivo puede convertirlo en selectivo (ver ms adelante, clasificacin de
los medios de cultivo). Por ejemplo,
cristal violeta, sales biliares, azida sdica, telurito potsico,
antibiticos, etc., a la concentracin adecuada, actan como agentes
selectivosfrente a determinados microorganismos.
PREPARACIN
En la actualidad, la mayora de los medios de cultivo se encuentran
comercializados,normalmente bajo la forma de liofilizados que es preciso
rehidratar. En general, lapreparacin de un medio de cultivo se reduce
simplemente a pesar la cantidaddeseada del mismo y disolverla en agua
destilada, siguiendo las instrucciones delfabricante y luego esterilizarlo.
En caso que el medio de cultivo debamos hacerlo nosotros, la preparacin de
unmedio de cultivo comienza por hacer un estudio de la frmula que
constituye unareceta que deber respetarse estrictamente.
Primero se agrega agua destilada o desionizada a un recipiente, luego se
vanincorporando todos los ingredientes de la lista en el orden en el que se
encuentran.
Generalmente figura en primer trmino el compuesto que acta como
tampn, comopuede ser el PO4H2K, que adems provee fsforo y potasio.
Es conveniente aadir todos los ingredientes en el orden indicado y
disolverlos de auno antes de agregar el siguiente.
Al finalizar la preparacin y una vez que sta se enfre, se debe verificar que
el pH seael adecuado. En caso de ser necesario se ajusta con CO3Na2
(1N) o ClH (1N).
ACTIVIDADES.
Preparacin de medios de cultivo

Materiales:
- Erlenmeyer
- Pipetas de 10 ml
- Tubos de ensayo con sus tapones
- Gradillas
- Tiras de pH
- Drogas correspondientes a cada frmula
- Balanza
- Autoclave
A. Caldo nutritivo (Caldo carne)

Es el medio complejo ms comn para el cultivo de microorganismos.
Frmula:
Peptona.................... 5
............. g
Extracto de carne....
...... 3 g Agua
c.s.p.................
1000 ml
pH.................................
. 7,2
Preparacin:
1) Colocar un volumen medido de agua destilada en un recipiente.
2) Disolver los ingredientes de a uno y por orden.
3) Llevar a ebullicin agitando peridicamente con una varilla de vidrio.
4) Completar el volumen hasta 1000 ml.
5) Dejar enfriar y medir pH. Si hace falta corregir con HONa 1M.
6) Colocar 10 ml del caldo en tubos de ensayo y volmenes apropiados en frascos.
7) Tapar, colocar capuchn de papel y esterilizar en autoclave 15 minutos a 1 atm.
B. Agar nutritivo
Frmula:
Agar......................... 20
............. g
Caldo nutritivo........ 1000 ml.
Preparacin:
1) Colocar 1000 ml de caldo en un recipiente.
2) Agregar el agar calentando a bao mara agitando hasta disolucin total.
3) Ajustar pH hasta 7,2.
4) Llevar 10 ml a tubos de ensayo.
5) Esterilizar.
Cuando se prepara agar nutritivo no es necesario usar caldo estril, la
esterilizacin selleva a cabo una vez que se ha envasado el caldo compuesto
agarizado.
Se prepararn tubos con agar inclinado o en pico de flauta (slant), para
ello secolocan 5 ml del agar en los tubos de ensayo, se tapan y esterilizan.
Una vez afuera del autoclave, cuando estn an lquidos, se apoyan sobre la
mesada con un ciertongulo hasta que solidifiquen.
Se prepararn tambin tubos con agar para puncin. En este caso, una vez
que lostubos fueron retirados del autoclave se dejan solidificar en posicin
vertical.
Por ltimo se prepararn cajas de Petri con agar nutritivo. Para ello se
puede utilizarmedio de cultivo recin esterilizado y todava lquido, o bien
medio solidificado yfundido a ebullicin en Bao Mara. Se deja enfriar el agar
hasta 45C, luego se lovuelca aspticamente en caja de Petri estril,
teniendo la precaucin de flamearpreviamente la boca del tubo o recipiente a
la llama del mechero. Se deja solidificar en posicin horizontal
PRACTICA #5
AISLAMIENTO Y SIEMBRA DE BACTERIAS AEROBIAS
OBJETIVO
Adquirir conocimientos bsicos tericos y prcticos de la siembra y
aislamiento de microorganismos bacterianos.
INTRODUCCIN.
En la naturaleza los microorganismos se encuentran en comunidades ms o

menoscomplejas. Son diversos los procedimientos existentes para el estudio
de los mismosque dependern del tipo de microorganismo y del perodo de
tiempo de conservacinque se requiera. Para ello existen tcnicas de
siembra, conservacin y mantenimientode los cultivos microbianos.
Una tcnica esencial en Microbiologa es la de obtencin de cultivos puros,
a partir delos cuales podemos realizar estudios sobre las propiedades de los
microorganismos.
Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismo.
Para poderobtenerlo es necesario concurrir a las tcnicas conocidas como
aislamiento.
SIEMBRA
Sembrar una bacteria es colocarla en un medio de cultivo, elegido de

acuerdo a las exigencias vitales del microorganismo, lo que permite su
desarrollo y multiplicacin, sise incuba en condiciones adecuadas, un tiempo
conveniente.
Para ello una pequea porcin de cultivo o muestra, que se denomina
inculo setransfiere al medio con precauciones especiales de asepsia a fin
de evitar laintroduccin de otros microorganismos ajenos al inculo.
El conjunto de pasos a efectuar para lograr una siembra correcta, se conoce
comotcnica asptica.
PROTOCOLO DE TOMA DE MUESTRA/INOCULO
La toma del inculo es simple, pero se requiere tener en cuenta lo siguiente:

1) La siembra siempre debe realizarse al abrigo de las corrientes de aire
(cerrar bienpuertas y ventanas), con movimientos pausados, poco
amplios, sin brusquedad y sin hablar.
2) Coloque frente a usted el mechero y la preparacin o muestra que
contiene losmicroorganismos, as como el resto del material necesario
(portaobjetos,tubos,placas). Todo ello ha de ser alcanzado con facilidad
y sin tropiezos.
3) Se debe trabajar a una distancia no mayor de 15 cm. de la llama de un
mechero.
4) El ansa o aguja de siembra se esteriliza por llameado directo (flamelo
hasta que alcance un rojo incandescente) y antes de retirar el inculo
debe facilitarse su enfriamiento, a fin de evitar el deterioro del material
a sembrar (enfrelo en laproximidad de la llama unos 10 segundos).
5) Una vez realizada la siembra se esteriliza nuevamente el ansa o aguja
a la llamadel mechero antes de depositarla sobre la mesada de trabajo.
6) Nunca debe depositarse un tapn sobre la mesada o gradilla, pues
estos elementos estn cargados de microorganismos. Cuando est
destapado, mantener el tubo en la forma ms horizontal posible para
evitar que los microorganismos del ambiente, en su cada, tengan
acceso alinterior.
7) Las bocas de los tubos de donde se toman los cultivos y la de aquellos
a donde sern transferidos, deben pasarse ligeramente sobre la llama
inmediatamente antes de que el ansa o aguja sea introducida (Figura
1). Tambin se debe flamear la boca del tubo antes de taparlo. Este
procedimiento fija al vidrio los microorganismos que pueden estar en
dicha boca y tiende a crear corrientes haciaafuera (el aire tiende a
salir), disminuyendo as el riesgo de contaminacin.
8) Para retirar el inculo o sembrar medios de cultivos en cajas de Petri,
coloque la placa invertida sobre la mesada de trabajo y levante la parte
que contiene el medio de cultivo con los microorganismos. Llvela a la
proximidad de la llama del mechero y tome el inculo con el ansa de
siembra. Otro mtodo permitido consiste en retirar el inculo o
sembrar, levantando la tapa solo lo suficiente para permitir la
introduccin del ansa o aguja, para evitar que los microorganismos
ambientales sedepositen en la superficie del medio.
9) Si la siembra se realiza con pipeta, sta debe estar convenientemente
preparada yesterilizada hasta el momento de su empleo. Una vez
utilizada se descarta introducindola en una solucin antisptica.
10) Transfiera el inculo a otro medio de cultivo estril, tomando las
mismas precauciones
en su manejo (flameando bocas de tubos, trabajando en laproximidad
de la llama, etc.) La finalidad de una siembra puede ser la de realizar una
transferencia o unaislamiento. La primera se efecta con cultivos puros (una
sola especie bacteriana), yasea con el objeto de renovar el medio de cultivo
para perpetuar la especie, o bien paraconocer alguna de sus propiedades
culturales o bioqumicas. El aislamiento, encambio, se realiza a partir de un
material que contiene una mezcla de especiesbacterianas y su objeto es
separarlas para obtener cultivos puros.
TOMA DEL INCULO.
Si la muestra proviene de un medio lquido, el inculo se toma agitando el
suavementeel ansa dentro del mismo, quedando la muestra adherida por
tensin superficial en elextremo del filamento del ansa de siembra.
Si el medio es slido y se encuentra en superficie la muestra a sembrar (caja
de Petri),tome una pequea porcin de cultivo mediante un ligero roce con el
ansa de siembra.
Si la muestra se encuentra en la profundidad del agar (tubo con agar en pico
deflauta), hunda el filamento dentro del medio hasta tomar una pequea
porcin de lamisma. Flamee la boca del tubo antes de taparlo y colquelo en
el soporte necesario.
TRANSFERENCIA.
La tcnica que se aplica depende de la consistencia de los medios de cultivo

y del tipode recipiente que los contiene.
Se pueden presentar los siguientes casos:
A) Siembra de medio lquido a medio lquido: El procedimiento se
puede realizarcon ansa en anillo, aguja o pipeta y en tubos de ensayo,
matraces o frascos.
B) Siembra de medio slido a medio lquido: El procedimiento se
puede realizarcon ansa en anillo o aguja y en tubo de ensayo, matraces
o frascos.
C) Siembra de medio slido a medio slido: El procedimiento se
puede realizar con ansa o aguja y en tubo de ensayo, ya sea en
superficie o en profundidad o en cajade Petri, en superficie.
D) Siembra de medio lquido a medio slido: El procedimiento se
puede realizar con ansa en anillo, aguja o pipeta y en tubo de ensayo,
ya sea en superficie o enprofundidad o en caja de Petri, ya sea en
superficie o por homogenizacin.
Tcnica de transferencia en tubos de ensayo.

Tcnica para medio lquido
Los dos tubos, el que contiene el medio de cultivo sin sembrar y el que
contiene losmicroorganismos a transferir, se toman con una mano, con las
bocas colocadas a lamisma altura.
Se sostienen con los dedos ndice, medio y anular apoyndolos en el
dedomeique, y se los sujeta con el dedo pulgar muy cerca de la base para
permitir lavisualizacin de toda la superficie del cultivo.
Con los dedos pulgar e ndice (como un lpiz) de la otra mano, se toma la
pipetaestril o el mango de Koll con su aguja o ansa en anillo y se esteriliza.
Se destapan los tubos con los dedos libres de la mano que sujeta el ansa, de
lasiguiente manera: el tapn del tubo ms alejado del operador (que es el
quecontiene la muestra) entre el dedo meique y la palma de la mano; el
tapn del tuboms cercano al operador (que contiene el medio de cultivo
estril) entre el meiquey el anular.
Se flamean las bocas de los tubos, se toma el inculo; se siembra; se
flameannuevamente las bocas de los mismos y se tapan respetando las
procedencias delos tapones y se quema el ansa. Como el inculo procede de
un medio lquido, antes de realizar la transferencia sedebe agitar el tubo para
poner en suspensin a los microorganismos que pudieranestar depositados.
Si la
siembra se realiza en medio lquido, se agita el tubosembrado para distribuir
homogneamente el inculo.
Para realizar la agitacin se toma el tubo cerca del extremo superior con los
dedosndice y pulgar y se golpea suavemente la base del mismo sobre el
dedo ndice dela otra mano con una amplitud de 5 cm. Otra forma consiste
en hacer rotar los tubosentre las palmas de las manos.
Tcnicas para medio slido.

Cuando el medio de cultivo a sembrar es slido, se puede sembrar en
superficie, enprofundidad o en profundidad y superficie.
En superficie:
Por estra: Introducir el ansa en anillo o aguja en el tubo de agar
inclinadohasta el fondo diluyendo el inculo en el agua de condensacin que
seacumula en esa parte, luego mover el ansa suavemente sobre la superficie
delagar con un movimiento en zig-zag ascendiendo desde el fondo hasta la
parte superior del medio.
Por trazo: Introducir el ansa en anillo o aguja en el tubo de agar inclinado
ytrazar una lnea de siembra desde la base del pico de flauta hasta el
extremosuperior, sin ejercer presin para que no se rompa el medio.
En profundidad:
Por puncin: El medio de cultivo que se emplea est solidificado en tubo
enforma vertical y la siembra se realiza con aguja, la que se introduce con
elinculo rpidamente en el seno del medio y se retira de la misma forma.
Lapuncin se realiza en el centro del medio o excntricamente.
En profundidad y superficie:
Por puncin y estra: Se utilizan para la siembra tubos con agar
inclinadopero con mucho fondo. Se introduce la aguja en el tubo de agar
inclinado, sepunza el fondo, se retira y se realiza un trazo o estra en el pico
de flauta.
Tcnica de transferencia en caja de Petri.

La siembra en caja de Petri, puede hacerse:
En superficie
Por estra central: Se levanta la tapa lo suficiente comopara permitir la
introduccin del ansa con la carga demicroorganismos, inicindose la estra
en el borde del medioms alejado del operador y se la extiende hasta llegar
alcentro de la placa, luego se gira sta 180 y se continarealizando otra
estra de la misma manera. Esta divisinevita el obstculo del borde de la
placa.
Por estra en cuadrantes: Se divide la caja en cuatrosectores y se siembra

en estra cada uno de ellos, partiendodel borde de la caja hacia el centro. El
cuadrante a sembrardebe ser el ms alejado del operador y el inculo en
cadacaso puede ser el mismo (la misma especie) o distinto(diferente
especie) para cada cuadrante.
Por diseminacin con esptula de Drigalsky: Se depositasobre el medio

slido contenido en la placa, una ansada ouna gota con pipeta del material a
sembrar, que luego seextender por toda la superficie del medio con una
esptulade DRIGALSKY.
La esptula se introduce inmediatamente despus de suuso en un
recipiente para su esterilizacin en autoclave oen formaldehdo al 5
%.
Por diseminacin con hisopo: Se sumerge en el caldo decultivo, se

escurre el exceso de lquido sobre la pared interiordel tubo y se estran
ambas mitades de la placa de Petri,partiendo de los bordes hacia el centro,
luego se gira 90 yse estran nuevamente ambas mitades, finalmente se
gira45 y se estran ambas mitades.
Por homogeneizacin:
Tcnica de la siembra en tubo para volcar en placa: Elinculo se
introduce con el ansa o pipeta en un tubo con elmedio de cultivo fundido y
enfriado a 45 C en cantidadsuficiente para cubrir la placa de Petri. Se
homogeneiza porrotacin y se vuelca en la placa previo flameado de la boca
deltubo.
Tcnica del agar volcado: Se deposita el inculo con pipeta enel centro de
la caja de Petri y luego se vuelca sobre el mismo elmedio de cultivo fundido y
enfriado a 45C. Se homogeneiza porrotacin para lo cual se le imprime a la
caja movimientoscirculares, en sentido horario y en sentido anti-horario
ymovimientos rectilneos, horizontales y verticales.
Se debe tener en cuenta que de las cajas de Petri preparadas conmedio de

cultivo para sembrar, debe eliminarse el agua desinresis (condensacin)
antes de efectuar dicha operacin. Paratal fin es aconsejable preparar las
placas con 24 hs. Deanticipacin y dejarlas invertidas a temperatura
ambiente.
AISLAMIENTO.
El objeto es obtener cultivos en estado puro, operacin imprescindible y

previa alestudio e identificacin de una especie bacteriana.
Se pueden realizar aislamientos por mtodos generales y por mtodos
especiales.
Mtodos generales de aislamiento.

Estos mtodos utilizan medios de cultivos slidos en caja de Petri.
Por diluciones sucesivas: Se homogeneiza la muestra y se cargael ansa
por nica vez. Luego se pasa el ansa de un tubo a otro. Estos tuboscontienen
agar a 45 C. De esta manera el primer tubo contendr mayorconcentracin
de microorganismos que el ltimo. Luego se pasa el contenidode los tubos a
las cajas de Petri y de all a los tubos con agar en pico de flauta.
Por agotamiento en superficie en una sola caja: Es el mtodoms

utilizado. Se prepara una caja de Petri con el medio de cultivo a la que sele
elimina el exceso de humedad segn se indic anteriormente.
Primero, se marca la parte exterior de la contratapa de acuerdo al esquema.
Se cargael ansa con la muestra, se deposita en un punto de la superficie del
sector (I)cercano al borde, y se extiende en el mismo con estras prximas y
paralelas. Acontinuacin se quema el ansa y se deja enfriar.
Se gira la caja 90 , se pasa el ansa una vez sobre la ltima estra de la
regin yainoculada y se arrastra al sector (II) efectuandosobre l la siembra
sin superponer las estrascon las realizadas antes.
Se quema nuevamente el ansa y de la mismamanera se estra el sector (III).
Luego de quemar el ansa, en el sector (IV) serealizan estras con el material
que se arrastrade (III), ms amplias y que terminan en elcentro de la caja.
Cualquiera sea el mtodo empleado, si se realiza correctamente, podrn
obtenersecolonias aisladas. Estas pueden pertenecer a distintas especies
bacterianas, las quegeneralmente se diferencian macroscpicamente.
En general cada colonia se considera formada a partir de una clula
bacteriana, aunque esto no es del todo cierto pues puede darse el caso de
que dos o ms clulasden origen a una colonia. Si todas pertenecen a una
misma especie, la coloniaresultante ser pura. Caso contrario, la finalidad del
trabajo no se habr cumplido, nologrndose el aislamiento.
Para comprobar la pureza de la colonia aislada se puede realizar una
coloracin deGram. Para ello se pica la colonia y se la identifica con una
marca en el fondo de la caja con un nmero de identificacin. Se hace el
extendido con una porcin de la coloniay si todas las clulas observadas
coinciden morfolgicamente, se repica el resto de lacolonia en un tubo con
agar en estra para obtener un cultivo puro.
A veces la igualdad morfolgica en la coloracin de Gram resulta engaosa

por existirbacterias de diferentes especies (pero iguales morfolgicamente)
presentes dentro dela colonia seleccionada pero en muy bajo nmero debido
a su imposibilidad dedesarrollar. Por consiguiente es necesario realizar
siempre aislamiento para observarla uniformidad de las colonias.
Mtodos especiales de aislamiento.
Mtodos derivados de las propiedades de las bacterias:

Consisten en hacer desarrollar la mezcla bacteriana, en un medio de
cultivoespecial, donde una especie puede dar lugar a colonias de un color
que laidentifiquen (ya sea por cambios de pH o por precipitacin de
elementos delmedio). Un ejemplo, es el aislamiento en el llamado agar-
lactosa- verde-brillante- bilis, donde las bacterias coliformes dan colonias
color rojo intenso enel centro con un halo rosado que destacan del fondo azul
del medio.
Mtodos biofsicos: Se basan en el empleo de condiciones

fsicasdeterminadas que afectan a ciertos microorganismos y no a otros.
A) Empleo de temperaturas disgensicas: La mayora de las bacterias
desarrollan bien a 37C. Sin embargo hay especies que lo hacen hasta
40C -42C y an ms, otras por debajo de 35 C. Estas caractersticas
se pueden usar para la separacin de especies.
B) Termorresistencia de las bacterias esporuladas: Los esporos de
las bacterias son formas de resistencia que toleran temperaturas que
resultan letales para las formas vegetativas. Este comportamiento se
aprovecha parala separacin de las especies que tienen la capacidad
de esporular.
C) Movilidad del microorganismo: Las bacterias mviles desarrollan en

gran parte de la superficie del medio, mientras que las inmviles lo
hacen solo enel punto de siembra.
Mtodos biolgicos: Estos mtodos utilizan la propiedad que tienenciertos

animales de laboratorio de ser receptivos a algunos microorganismos.
Nota: Cuando se realizan aislamientos de bacterias anaerobias, se pueden
aplicarlas mismas tcnicas, teniendo la precaucin de regenerar previamente
el medio decultivo e incubar en anaerobiosis.
ESCUELA
MEDICINA
PRACTICA #6
LOS COLORANTES
OBJETIVOS
Que el estudiante pueda utilizar reconocer y utilizar las tcnicas de
tincin para una mejor observacin e identificacin de los
microorganismos a observar al microscopio.
Que obtenga la informacin bsica para hacer la
descripcin inicial de los microorganismos.
INTRODUCCION:
Son sustancias de origen qumico o biolgico, generalmente tintes,
pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloracin de
tejidos microorganismos para exmenes microscpicos, debiendo tener al
menos, un grupo cromforo que le proporcione la propiedad de teir.
Gracias a estos colorantes se pueden realizar tcnicas de tincin y de esta
manera poder observar de una mejor manera los objetos de estudio.
Estos colorantes se los puede clasificar en:
Colorantes bsicos: La accin colorante est a cargo del catin,
mientras que el anin no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de
azul de metileno+.
Colorante cido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante est a
cargo del anin, mientras que el catin no tiene propiedad, por
ejemplo: eosinato- de sodio+
Colorantes neutros: Estn formados simultneamente por soluciones
acuosas de colorantes cido y bsicos, donde el precipitado resultante,
soluble exclusivamente en alcohol, constituye el colorante neutro, que
tiene la propiedad de teir sus componentes cidos y bsicos, por
ejemplo: La tincin de MG Giemsa.
TCNICAS DE TINCIN:
Las distintas tcnicas de tincin se las utilizan para poder tener una
diferenciacin de los microorganismos y reconocer la presencia de
determinados constituyentes celulares tales como flagelos, capsulas,
esporas, etc.
Estas tcnicas de tincin son importantes de igual manera al momento de la

identificacin morfolgica de las bacterias, pero debe usarse siempre con
precaucin, ya que puede conducir a errores.Las molculas de colorante
forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras
celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales
inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos,
y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no
nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura
realmente existente.
TINCIN SIMPLE
En las tinciones simples se llegan a utilizar solo un colorante con el que se
tie rpidamente el microorganismo especficamente, utilizndose
fundamentalmente para observar su morfologa y tamao. Los colorantes
empleados con mayor frecuencia para este tipo de tincin son los siguientes:
azul de metileno, violeta cristal y fucshina fenicada, entre otros.
MATERIALES
Soporte
Placas portaobjetos
Asa de siembra
Mechero de alcohol
Microscopio
MEDIOS Y REACTIVOS
Cultivos bacterianos
Solucin salina
Colorantes (safranina y cristal violeta)
Aceite de inmersin.
PROCEDIMIENTOS
Poner sobre un portaobjetos una gota de solucin salina y una pequea
alcuota de un cultivo bacteriano con el asa de siembra estril.
Hacer el frotis, en el rea del mechero de alcohol (esterilizado)
formando una pelcula homognea sobre el portaobjetos con el asa de
siembra. Dejar secar.
Fijar la preparacin, pasando a travs de la llama del mechero el
portaobjetos
Cubrir con una pelcula de colorante (cristal violeta o safranina)
durante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.
Dejar secar al aire.
Aadir una gota de aceite de inmersin.
Observar con objetivo de inmersin (100 x).
GRFICOS
*procedimiento al momento de realizar el frotis
Tincin simple con cristal violeta de Staphylococcus aureus, nos proporciona informacin sobre la
forma y la agrupacin en racimos.
TINCIN COMPUESTA
En las tinciones compuestas a diferencia de las tinciones simples se llegan a
utilizar ms de un colorante (safranina, violeta de genciana , azul de
metileno, etc.), de esta manera tener un mejor estudio de las estructuras
bacterianas, y poder tener una mejor diferenciacin de estas. Entre estas
tinciones estn la tincin de gram, que se hablara a continuacin.
TINCIN DIFERENCIALES
Las tinciones diferenciales se utilizan ampliamente en microbiologa;
consisten en la aplicacin de dos o ms colorantes que contrastan en su
intensidad o color y un paso intermedio que provoca una respuesta diferente
entre microorganismos distintos o entre determinadas clulas dentro de una
poblacin.
Las dos tinciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa son la tincin
de gram y la tincin de cido-alcohol resistencia (tincin de Ziehl Neelsen).
Tincin de Gram
Es la tincin diferencial ms utilizada de forma rutinaria y prcticamente la
primera prueba a la que se someten las muestras de cualquier origen antes
de su estudio. Proporciona una informacin esencial, adems de sobre la
forma, tamao y agrupacin celular, como es el tipo y composicin de la
pared que presentan las bacterias. La tincin de Gram divide a las bacterias
con pared del Dominio Bacteria en dos grandes grupos: bacterias con pared
de tipo gram positiva y bacterias con pared de tipo gram negativa.
Tincin de cido-alcohol resistencia

Se trata de un procedimiento de tincin diferencial, conocido como mtodo
de
Ziehl-Neelsen, que tiene gran relevancia por su aplicacin clnica. Permite
poder distinguir aquellos microorganismos cuya coloracin resiste la accin
de alcoholes y cidos suaves (cido-alcohol resistente) de otros que no
resisten la decoloracin (no cido-alcohol resistente).
Dentro de las bacterias cido alcohol resistentes encontramos dos
importantes patgenos: Mycobacterium tuberculosis y Mycobacteriumleprae,
microorganismos responsables de la tuberculosis y la lepra respectivamente.
CONCLUSIN
Las diferentes tcnicas de tincin son para un mejor estudio de las bacterias
a estudiar, en donde permite observar de mejor manera la morfologa y
caractersticas diferenciales de cada grupo de bacterias.
Es importante poder realizar las tinciones si errores para as observar
correctamente en el microscopio.
CUESTIONARIO
Dentro de la clasificacin de los colorantes encontramos?

a) Colorantes cidos y bsicos
b) Colorantes neutros
c) Colorantes diferenciales
d) Ay b son correctos
e) Ninguno es correcto.
Las tinciones pueden llegar a ser

a) Simples
b) Estructuradas
c) Compuestas, diferenciales, agrupadas.
d) Compuestas, simples, diferenciales.
Anote cuatro colorantes que se utilizan generalmente para las coloraciones

en general.
.
.
....
.
http://www.ecured.cu/index.php/Colorante
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/819/834
PRACTICA #7
CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS SEGN LA TINCIN DE GRAM
OBJETIVOS
Ejercitar el uso de una tcnica de coloracin compuesta (Tincin de
Gram).
Determinar el tipo de coloracin que han tomado las bacterias con la
Tincin de Gram.
Aplicar la Tincin de Gram en los frotis de sedimentos de orina, de heces,
de secrecin nasal, de cera de odo.
INTRODUCCIN
Las Bacterias son clulas Procariotas
Como en todas las clulas, el citoplasma bacteriano est rodeado por una
membrana plasmtica. En el interior de esta membrana, sobre cuya
superficie interna se encuentran absorbidas numerosas enzimas, hay un
citoplasma con un cierto nmero de ribosomas y de inclusiones granulares,
as como una molcula de ADN circular, y de una longitud aproximadamente
1000 veces mayor que la clula contiene.
La pared celular est constituida esencialmente de peptidoglucano

La pared celular de las bacterias consiste en una matriz de disacridos
enlazados mediante cadenas cortas de aminocidos (pptidos). La pared
celular de las bacterias Gram-positivas tienen un espesor que oscila entre 15
y 30 nm, y consiste en una macromolcula de este tipo, denominada
peptidoglucano. La pared celular de las bacterias gram-negativas tienen un
espesor de uno 10 nm y posee una capa adicional (la membrana externa)
formada, entre otras molculas, por lipopolisacridos unida a la capa de
peptidoglucano.
Las Bacterias Grampositivas y Gramnegativas

Tincin de Gram
Es una tcnica diferencial de caracterstica taxonmica, ideada por el
histlogo Hans Cristhian Gram, en la cual el proceso de coloracin tiene su
base segn la estructura de la pared celular de las bacterias.
Una caracterstica taxonmica importante de las bacterias es su

respuesta a la tincin de Gram. Las propiedades de tincin de Gram parecen
ser fundamentales, porque la reaccin de Gram se correlaciona con muchas
otras propiedades morfolgicas en formas con relacin filogentica.
Un microorganismo que en potencia es positivo para la tincin de Gram
puede parecerlo slo bajo condiciones ambientales particulares y en un
cultivo joven. Los procedimientos de tincin de Gram, inician con la
aplicacin de un colorante bsico, violeta de genciana. A continuacin se
aplica una solucin de yodo; todas las bacterias se tien de color azul en este
punto del procedimiento. Luego la clula se trata con alcohol. Las clulas
grampositivas que
conservan el complejo de violeta de genciana- yodo adquieren un color azul y
las clulas gramnegativas se decoloran por completo con la adicin de
alcohol. Como ltimo paso se aplica otro colorante (como rojo de safranina)
de forma que las clulas gramnegativas decoloradas adquieran un color
contrastante; las clulas grampositivas adquieren un color violceo.
DIFERENCIACIN
Gram positivas.-Son aquellas que toman una coloracin violcea o azul.
Esto se debe a que su pared celular es mucho ms gruesa por una mayor
cantidad de peptidoglucano y por eso el alcohol-cetona no las decolora.
Componentes especiales de las paredes celulares de bacterias

grampositivas
cidos teicoico y
teicurnico
Polisacridos.
Gram negativas.- Son aquellas que toman contrastante, ante la

decoloracin por el alcohol cetona, y al colorearlas con safranina toman un
color rosado o rojizo. Esto se debe a que la pared celular es menos gruesa,
es decir ms delgada y por tanto el alcohol-cetona disuelve el contenido
lipdico de la pared celular dando la prdida del colorante violeta de
genciana y despus ya decoloradas captan la safranina.
Componentes especiales de las paredes celulares de

bacterias Gram negativas Membrana externa
Es una estructura con bicapa cuya hoja interna tiene una
composicin similar a la de la membrana celular, en tanto que la
hoja externa contiene constituyentes diferentes,
lipopolisacridos(LPS, lipopolysaccharide).
Lipopolisacridos (LPS)
Los LPS de las paredes celulares de bacterias gramnegativas
consisten en un glucolpido complejo, denominado lpido A, el
cual est unido a un polisacrido constituido por una porcin
central y series terminales de unidades repetidas (fi g. 2-19A). El
lpido A se encuentra embebido en la hoja externa de la
membrana a la cual se unen los LPS.El lpido A consiste en
unidades de disacrido de glucosamina fosforilada a la cual se
unen varios cidos grasos de cadena larga.
Lipoprotenas
Las molculas poco comunes de lipoprotenas unen la
membrana externa con las capas de peptidoglucanos.
Espacio periplsmico
La capa de peptidoglucano y una solucin de protenas que se
comporta como un gel. El espacio periplsmico representa casi
20 a 40% del volumen celular, lo que de ninguna manera es
insignificante. Las protenas periplsmicas incluyen
protenas fijadoras de sustratos especficos (p. ej., aminocidos,
azcares, vitaminas, y iones), enzimas hidrolticas (p. ej.,
fosfatasa alcalina y 5-nucleotidasa) que se desdoblan en
sustratos no transportables hacia fosforilasa de amino glucsidos)
que inactivan ciertos antibiticos.
Gram variables.- Algunas bacterias pueden no ser identificados

correctamente por la tincin de Gram, y sin embargo en su estructura estas
bacterias poseen inicialmente una pared de Grampositivas, aunque la capa
de peptidoglucano es ms delgada que las Grampositivas, estas bacterias
luego de ser cultivada y/o tratada se convierten en gramnegativos. Por lo
que toman ambas coloraciones tanto azules como rosadas, es un producto
de error de tincin.
Son poco comunes, Ejemplo: Los gneros actinomicetos, Arthobacter,

Corynebacterium, Mycobacterium, y Propionibacterium tienen paredes de
clula particularmente sensibles a la fractura durante la divisin de clula,
por lo que suelen mancharse grampositivas y gramnegativas.
Tabla 12. Proceso de la tincin de Gram
Etapas en la tincin de Gram

Grampositiva Gramnegativa
Pasos Mtodo s s
Violeta de genciana
Colorante (luego de 30 seg. se Se tie de violeta Se tie de violeta
bsico lava con agua el
exceso de colorante)
Lugo
(Pasado 1 min. Permanece violeta Permanece violeta
Mordiente se lava con agua el
exceso de lugol)
Alcohol de 95% o
Alcohol-acetona. Se decolora
(durante aprox. 30 Permanece violeta
Decoloracin seg. y luego lavar
con agua para
eliminar el resto de
disolvente)
Fucsina o Safranina
(luego de 30 seg. se Permanece violeta Se tie de rosa
Contraste lava con agua el
exceso de colorante)
Colocar sobre el Violeta Rosa
Observar al
frotis una gota de
microscopios aceite de inmersin.
MATERIALES
Tubos de Ensayo.
Guantes.
Portaobjetos.
Laminilla cubre objetos.
Gradilla.
Asa bacteriolgica de platino.
Hisopos.
Lmpara de Alcohol.
Vaso de Precipitacin.
Pipeta de Pasteur.
Palillos.
Equipo
Microscopio.
Cronmetro.
MEDIOS Y REACTIVOS
Violeta de Metilo 10B o Violeta de Genciana. (C25H30N3+Cl-).
Yodo Lugo.
Alcohol Cetona.
Safranina.
Sedimentos de Orina.
Secreciones Nasales.
Heces.
PROCEDIMIENTOS
1. Proceder a colocarse los guantes y mascarilla por normas de bioseguridad.
Toda preparacin de placas cuenta con 3 pasos: la preparacin del frotis,
la fijacin y por ltimo la coloracin.
2. Preparacin de Frotis: Para la preparacin del extendido, se utiliza un

portaobjetos limpio, luego se procede a tomar con una pipeta de Pasteur
una pequea muestra de sedimentos de orina del tubo de ensayo,
manteniendo la tapa del tubo de ensayo en las manos sin dejarla en el
mesn, depositamos al gota de sedimento en un portaobjetos, y
extendemos o emulsionamos segn sea el caso.
Para las muestras de heces, procederemos a disponer de 4 placas limpias,
en la primer y segunda placa se colocara una gota de yodo-lugol, y con la
ayuda de un palillo emulsionamos en el portaobjetos, cubrimos con una
laminilla. Con la tercera placa colocar en el portaobjetos una gota de azul
de metileno y con la ayuda de un palillo emulsionar y cubrir con una
laminilla cubreobjetos. Con la cuarta muestra agregar una gota de suero
fisiolgico, emulsionar con el palillo y cubrir con una laminilla
cubreobjetos.
3. Fijacin: Procedemos a colocar la placa ligeramente rpido a travs de la
parte ms baja de la llama de la lmpara de alcohol encendida, esperando
hasta que se evapore, pero sin exponerla mucho a la flama.
4. Tincin de Gram:
Necesita del siguiente orden de colorantes y procesos:
Colorante Violeta de Genciana por un 1 (minuto). Lavar
Solucin de Yodo Lugo (mordiente) por un 1 (minuto).Lavar. (Si la
solucin est muy diluida proceder a deja por ms tiempo).
Alcohol cetona por 10 - 15 (segundos). Lavar.
Colorante Safranina 30 45 (segundos). Lavar.
5. Enfoque en microscopio.- Siempre al observar una placa es necesario

utilizar primero el objetivo de 4x (panormico), realizando movimientos
bruscos con el macromtrico, luego se procede a utilizar el objetivo de
10x , realizando movimientos leves con el micromtrico, luego se cambia
al objetivo 40x y se verifica si el haz de luz es muy leve o muy
concentrado, as que se procede a mover el condensador de luz, por
ltimo se proceder a utilizar el objetivo de 100x si se desea aumentar
ms la imagen pero siempre haciendo uso del aceite de inmersin.
Preparacin del Frotis.- Se debe hacer un extendido del material en un

portaobjetos, con ayuda de un asa bacteriolgica o de un hisopo, a la vez se
expande en forma circular hacia fuera o sino en forma de zigzag hacia afuera
los 4 sentidos. Si se realiza con un asa bacteriolgica sta tiene un filamento
en su punta, existe un crculo pequeo que puede varias de tamao y
permite coger pequeas cantidades del material a fijar. Existen frotis en
fresco, mtodo de observacin o in vivo para permitir observar movimiento,
ser cultivados o ser sometidos a procesos de tincin, a diferencia del frotis
permanente se puede hacer una preparacin de materia fecal en fresco
fijada.
Fijacin del Frotis.- Una vez colocada el material en el portaobjeto se deja

secar, y luego se procede a aplicar calor, de manera rpida con un
movimiento inclinado de arriba abajo se pasa la placa por la parte ms baja
de la llama encendida de la lmpara de alcohol. Este procedimiento de
fijacin al calor es uno de los procedimientos ms empleado en las tinciones
de las bacterias.
ESCUELA
MEDICINA
GRAFICOS
Preparacin y fijacin de frotis bacterianos a partir de cultivos

slidos y lquidos
CONCLUSIN
Las clulas eucariotas carecen de peptidoglucano en su pared celular, y se
distinguen de las clulas procariotas porque ellas si poseen peptidoglucano,
hacindolas resistentes a la accin de antimicrobianos, y protegiendo a la
bacteria condiciones adversas al medio.
La Tincin de Gram es un proceso de coloracin muy usado en el laboratorio de
microbiologa ya que permite diferenciar a las bacterias grampositivas de las
gramnegativas, debido a que la pared de las grampositivas poseen una pared de
peptidoglucano ms gruesa y adquiere el color violeta, en cambio las bacterias
gramnegativas al tener la pared de peptidoglucano ms fina por lo que pierden
el colorante en el proceso de coloracin.
Las placas o extendidos de muestras biolgicas sometidas al proceso de tincin
de Gram, nos ha permitido observar una gran variedad de bacterias que van
desde estafilococos, cocos y bacilos Grampositivos de bacilos gramnegativos, por
lo tanto nos permite distinguir entre las diferentes morfologa cules son
bacterias grampositivas y gramnegativas.
CUESTIONARIO.
1. Cul es la caracterstica principal que diferencia a las clulas

eucariotas de las procariotas en cuanto a su pared celular?
2. Qu es y para qu sirve el proceso de Tincin de Gram?
3. Cite 1 diferencia primordial y bsica que distingue a las

Bacterias Grampositivas de las Gramnegativas?
PRACTICA #8
IDENTIFICACIN, CLASIFICACIN Y TIPIFICACIN BACTERIANA
OBJETIVOS
Establecer los conceptos de clasificacin, e identificacin bacteriana.
Conocer los distintos mtodos de clasificacin taxonmica, Y las reglas de la
nomenclatura bacteriana.
Describir los lineamientos de identificacin bacteriana.
INTRODUCCION.
1. VISUALIZACIN: Uno de los procedimientos bsicos.
El microscopio ptico es el ms utilizado en los laboratorios de
microbiologa de forma rutinaria. Tambin pueden emplearse el de campo
oscuro, contraste de fases, fluorescencia o electrnico.
El examen microscpico requiere la utilizacin del microscopio. Puede

hacerse una visualizacin microscpica en 2 momentos:
a) directamente de la muestra clnica
b) a partir de los microorganismos obtenidos por cultivo como primer escaln en
la identificacin.
Puede realizarse
1-Directamente: examen en fresco. Se estudian las bacterias "al natural",
sin teir.
2-Mediante una tcnica denominada gota pendiente que se utiliza para

observar la movilidad.
3-Tinciones negativas (Tinta china). Se emplea para ver la cpsula de S.

pneumoniae y Cryptococcus neoformans en LCR.
4-Tinciones. Existen muchas y en general se pueden clasificar en:

Simples utilizan un solo colorante). Por ejemplo: azul de metileno para
observacin de levaduras y protozoos intestinales.
Compuestas (utilizan ms de un colorante y permiten la agrupacin
de las bacterias de acuerdo a su diferente afinidad tintorial). Destacan
la tincin de Gram que agrupa a las bacterias en dos grandes bloques,
bacterias grampositivas y bacterias gramnegativas, y la de Ziehl-
Neelsen utilizada, entre otros, para la tincin de micobacterias.
Especiales: tinciones fluorescentes, tinciones de determinadas
estructuras como la tincin del esporo, tincin de flagelos.
5.-Afinidad tintorial
Tincin de Gram: Permite dividir a las bacterias en
1) Gram positivas (Violetas), retienen el colorante principal tras la
decoloracin con alcohol o alcohol-acetona.
2) Gram negativas (Rojas), pierden el colorante principal tras la
decoloracin por lo que es necesario aplicar un colorante de contraste para
visualizarlas. Esta diferencia de coloracin est basada en la diferencia
estructural de la pared. En las Gram positivas el colorante se fija
fuertemente al peptidoglucano que lo "retiene" e impide que "salga" con el
decolorante. En las Gram negativas el colorante es retenido con menos
fuerza al ser ms delgada la capa de peptidoglucano.
Morfologa:
- Pueden tener diferentes formas:
- Esfricas: cocos (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., etc.)
- Cilndricas: bacilos (Enterobacterias, Pseudomonasspp., etc...)
- Espiroquetas: Treponema pallidum, Borreliaburgdorferi.
- Agrupacin: Pueden aparecer aisladas o asociarse en PAREJAS
[diplococos: (Neisseriagonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae)],
cadenas (estreptococcus), tetradas, sarcinas, racimos (estafilococos),
"letras chinas" (corinebacterias), etc.
- Tamao: las bacterias se miden en metros (1metro = 10-3 mm) y,
en general y como ejemplo, las bacterias esfricas tienen un dimetro
de 1m y las bacterias alargadas 1.5-8 m de longitud, aunque este
parmetro vara en funcin de los diferentes gneros bacterianos.
2.-AISLAMIENTO EN CULTIVO Y
POSTERIOR IDENTIFICACIN POR SUS
CARACTERSTICASFENOTPICAS (MORFOLOGA, CARACTERSTICAS
METABLICAS -PRUEBAS BIOQUMICAS Y
ENZIMTICAS-, ETC.)
Los medios de cultivo pueden clasificarse atendiendo a
varios parmetros: a)Segn su origen pueden ser:
1) Naturales: constituidos por sustancias naturales de composicin
compleja y en ocasiones variable (extracto de carne, extracto de
levadura, patata...),
2) Sintticos o Qumicamente definidos en los que se conoce la
participacin exacta de hidratos de carbono, aminocidos.
3) Semi-sintticos.La constitucin de los componentes aislados de
materia prima compleja y en compuestos obtenidos de sustancias
qumicas.
b) Segn su consistencia pueden ser:
1) Lquidos: medios de enriquecimiento.
2) Slidos: son medios lquidos a los que se les aade para darles
consistencia una sustancia gelificante (agar-agar) obtenida de algas
marinas.
3) Semislidos: lquidos a los que se les aade menor concentracin de
agar que a los slidos.
Cada uno tiene sus finalidades. En la superficie de los medios slidos es
posible ver las colonias resultantes de la multiplicacin bacteriana. Los
medios lquidos facilitan el crecimiento de las bacterias pero en ellos no se
ven colonias, el crecimiento suele detectarse por turbidez. Los medios
semislidos suelen utilizarse para valorar la movilidad de los
microorganismos.
c) De acuerdo a su finalidad y aplicacin pueden ser:

1.- Bsicos: aquellos que llevan todos los elementos bsicos para el
desarrollo de los microorganismos no exigentes.
2.-Enriquecidos: incorporan diferentes sustancias para permitir el
crecimiento de microorganismos ms exigentes. Ej.: agar sangre, agar
chocolate.
3.- Selectivos: medios a los que se aaden diferentes sustancias
(colorantes, sales biliares, antibiticos...) Que son capaces de inhibir a
determinados microorganismos y permitir el crecimiento de otros. En
general se utilizan para inhibir el crecimiento de la flora acompaante y
permitir el crecimiento del patgeno.
4.- Diferenciales: se les aade un hidrato de carbono y un indicador
de pH de forma que si el microorganismo es capaz de utilizar ese
hidrato de carbono se produce un cambio de pH que hace que el
indicador cambie de color y evidencie la reaccin..
5.- Otros medios: de enriquecimiento (son medios lquidos a los que

se les aades sustancias que inhiben el crecimiento de
microorganismos acompaantes favoreciendo el crecimiento de otros
(los patgenos buscados), de transporte, etc.
Siembra de los medios de cultivo

Lo primero que hay que hacer es sembrar la muestra en los medios de
cultivo reseados. Una vez cultivada se procede al aislamiento en cultivo y
posterior identificacin por sus caractersticas fenotpicas (morfologa,
caractersticas metablicas -pruebas bioqumicas y enzimticas, etc.).
Condiciones de cultivo
-Temperatura: la mayora crecen bien a temperaturas entre 35-37C

aunque hay excepciones
-Tiempo de incubacin: depende del tiempo de generacin (tiempo
requerido para que el nmero de bacterias se duplique) de cada
microorganismo. Generalmente 18-24 h. Otros requieren ms tiempo
de incubacin: Brucella spp. , M. tuberculosis.
Atmsfera de incubacin. Los microorganismos respecto al tipo de

respiracin pueden ser:
1.- Aerobios: requieren la presencia de oxgeno molecular.

2.- Anaerobios Facultativos: pueden vivir y multiplicarse en
presencia o en ausencia de oxgeno.
3.- Anaerobios: el oxgeno libre es txico para ellos (algunos son aero-
tolerantes).
4.- Microaerfila: necesitan la presencia de oxgeno libre pero a una
concentracin menor que la atmosfrica (2-10%).
Este hecho tiene como consecuencia que haya que incubarlos en estas
condiciones. Otros hay que incubarlos en una atmsfera con un 5-10%
de CO2 (no es tipo de respiracin sino un requerimiento): se denominan
capnfilos
Identificacin
Se valoran entre otros parmetros:
1)Morfologa y aspecto de las colonias (masa constituida por
bacterias que es visible a simple viste en la superficie de los
medios slidos).
2) Capacidad de crecer a una determinada temperatura.
3) Crecimiento en medios selectivos y diferenciales.
4) Presencia de hemlisis que en los medios con sangre da lugar a
la aparicin de un halo alrededor de la colonia. Puede ser
transparente (hemlisis total o -hemlisis), verdoso (hemlisis
parcial o -hemlisis o no aparecer (no hemolticas o
hemlisis)
5) Pruebas bioqumicas y enzimticas adecuadas para la bacteria
que se sospeche por las pruebas preliminares.
6) Movilidad.
7) Deteccin de productos estructurales: antgenos (reacciones
antgeno-anticuerpo), cidos nucleicos (hibridacin, PCR, etc.).
8) Deteccin de antgenos.
9) Tcnicas genticas de deteccin de cidos nucleicos:
hibridacin, reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), etc.
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR):
En 1983, KaryMullis dio a conocer la tcnica de la reaccin en cadena de la

polimerasa que es una tcnica para la sntesis in vitro de secuencias
especficas de DNA evitando uno de los principales problemas la insuficiente
cantidad de ADN para realizar cualquier procedimiento de laboratorio.
La tcnica se basa en la replicacin del ADN inducida por la DNA

polimerasa, enzima que es capaz de realizar una sntesis de una cadena
complementaria de ADN en el sentido 5-> 3 usando un molde de cadena
sencilla, pero a partir de una regin de doble cadena. Para crear esta regin
doble cadena se usan los denominados iniciadores. Son una PAREJA de
oligonucletidos sintetizados de manera que sean complementarios a cada
uno de los extremos 3 del fragmento de ADN que se desea amplificar.
Partiendo de este principio, la PCR se basa en la repeticin de ciclos

que estn formados por tres etapas:
1.- Desnaturalizacin del ADN doble cadena: la doble hlice de ADN se

separa en dos hebras. Para ello se realiza una incubacin de la muestra
a altas temperaturas (93-97C). La re-naturalizacin se producir
cuando la temperatura disminuya.
2.- Hibridacin de los iniciadores a la zona 3 especfica de cada una de
las hebras: los cebadores, iniciadores se unen a las zonas 3
complementarias que flanquean el
fragmento que queremos amplificar. Se realiza gracias a la bajada de la
temperatura (50-65 C).
3.- Extensin del cebador por actuacin de la DNA polimerasa

(elongacin): se produce la sntesis de una cadena sencilla
(producindose un fragmento de doble cadena por la
complementariedad) en la direccin 5-> 3 mediante la enzima DNA
polimerasa, la cual incorpora los desoxi-nucletidos fosfato presentes
en el medio siguiendo la cadena molde.
Este proceso se lleva a cabo en un equipo llamado termociclador que

realiza los ciclos en los tiempos y temperaturas programadas.
Elementos qumicos necesarios para realizar la PCR

Termociclador
Carga de un gel de agarosa.
Lectura de un gel de agarosa, teido con bromuro de estudio, bajo la luz
ultravioleta.
Hibridacin
La hibridacin o re-naturalizacin de cidos nucleicos (ARN o ADN) es un
proceso por el cual se combinan dos cadenas de cidos nucleicos anti-
paralelas y con secuencia de bases complementarias, en una nica molcula
de doble cadena, que toma la estructura de doble hlice, donde las bases
nitrogenadas quedan ocultas en el interior.
Se utiliza una cadena sencilla de ADN marcada por un mtodo fsico-

qumico, bien sea radiactivo o con un fluorocromo. Esta cadena tiene una
secuencia de nucletidos conocida y se utiliza como sonda para detectar
otras molculas de ARN o ADN de cadena sencilla de secuencia parecida.
REACCIONES ANTGENO ANTICUERPO

Son estrategias de laboratorio que permiten detectar que una reaccin
antgeno-anticuerpo producida en el laboratorio ha tenido lugar. Se basan en
la especificidad de la reaccin, es decir, en que un anticuerpo slo
reaccionar con el antgeno que haya dado lugar a su formacin.
Pueden utilizarse para realizar tanto diagnstico directo como indirecto.

Si conocemos el anticuerpo ( por ej. anticuerpos monoclonales) podremos
identificar el antgeno (en la muestra clnica) que reacciona especficamente
con l, diagnstico directo.
La inmunofluorescencia es una tcnica que emplea anticuerpos
conjugados a fluorocromos.
Los fluorocromos son molculas que al ser excitadas con la energa de
una determinada longitud de onda son capaces de emitir energa de una
longitud de onda mayor.
La inmunofluorescencia indirecta permite la deteccin de anticuerpos

circulantes. Si el antgeno es conocido (disponible en el laboratorio),
detectaremos los anticuerpos que se encuentran en la muestra clnica y
por tanto son desconocidos y que reaccionan especficamente con ellos:
diagnstico indirecto.
Otras tcnicas que se emplean en el diagnstico microbiolgico directo

La descripcin de estas tcnicas se ver en la
prctica 5.
son: deteccin de antgeno capsular mediante tcnicas de aglutinacin con
anticuerpos unido a partculas de
ltex, CIE, RIA y EIA.
Equipo: Microscopio ptico con

MATERIALES objetivos
Portaobjetos. de 4X, 40X y 100X
Cubreobjetos. Mechero de Bunsen o lmpara de
Lpiz graso, alcohol.
Asas bacteriolgicas graduadas,
Papel secante,
Aceite de inmersin
Cultivo en agar de Escherichiacoli
Cultivo en agar de Staphylococcusssp
MEDIOS Y REACTIVOS
Tincin de Gram
Solucin desinfectante KOH al 3%
PROCEDIMIENTOS
Preparaciones Hmedas:
1. Depositar una capa delgada de vaselina alrededor del borde del
cubreobjetos o un pedazo pequeo de plastilina en las 4 esquinas del
cubreobjetos, sin tocar las caras del cubreobjetos con los dedos.
2. En el centro del cubreobjetos, colocar con el asa microbiolgica varias
gotas del cultivo bacteriano.
3. Tome una laminilla y colquela sobre el cubreobjetos, presionando
suavemente.
4. Invierta la preparacin y obsrvala al microscopio con los objetivos de 40X y
100X si se utiliz vaselina, o con el de 10X en el caso de haberse utilizado
plastilina.
Preparacin de Frotis Fijos para Tinciones:

1. Realizar un frotis fijo de cada uno de los cultivos proporcionados.
2. Utilizar laminillas limpias y marcadas para su identificacin, con el lpiz
graso marcar el rea donde se va a colocar la muestra.
3. La metodologa para realizar el frotis bacteriano depender si el cultivo se
encuentra en medio slido o lquido.
Cultivo en lquido: con un asa bacteriolgica previamente flameada y fra,

se introduce en el cultivo bacteriano se coloca en el portaobjetos y se
difunde en el rea marcada y se fija al calor.
Cultivo en medio slido: se coloca una gota de agua destilada estril en el

portaobjetos, se recolecta una colonia de medio slido y se mezcla,
realizando un extendido uniforme.
4. Se debe extender la gota sobre el portaobjetos de forma que el resultado
sea una capa fina.
Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso.

5. Dejar secar las preparaciones (frotis) a temperatura ambiente.
6. Cuando se haya secado el frotis pasar el portaobjetos por la llama del
mechero con la capa del frotis hacia arriba, no aplicar calor en forma
excesiva ya que estropeara la morfologa normal y la estructura de los
microorganismos que se van a teir.
Procedimiento para la tincin de Gram:

1. Preparar frotis fijos a partir de cada uno de los cultivos bacterianos.
2. Agregar sobre la preparacin cristal violeta durante 30 segundos.
3. Lavar con agua destilada
4. Aadir lugol durante 30 segundos.
6. Decolorar con alcohol-cetona por 5 a 10 segundos.
8. Agregar safranina durante 30 segundos.
9. Lavar, secar y observar al microscopio con aceite de inmersin y con el
objetivo de 100X.
GRFICOS
ESCUELA
MEDICINA
CONCLUSIN.
El aislamiento, identificacin y clasificacin para el anlisis de las

bacterias patgenas en el ser humano es imprescindible para la
microbiologa.
El conocimiento va acompaado de la aplicacin del mismo al determinar
la estructura, fisiologa y metabolismo bacteriano en el laboratorio; es
clave el cultivo de microorganismos, su clasificacin e identificacin y
para su posterior interpretacin clnica colonizante o contaminante, su
fenotipo, mecanismo de accin y resistencia; estableciendo as un
diagnstico diferencial entre el agente causal y el hospedador.
CUESTIONARIO.
1. De qu color se tien las bacterias Gram positivas y por qu?
2. De qu color se tien las bacterias Gram negativas y por qu?
3. Con que finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta

objetos y por qu es necesario emplear aceite de inmersin para la
observacin de los Microorganismos?
PRACTICA # 9
TCNICAS DE REALIZACIN ANTIBIOGRAMA
OBJETIVOS
Realizar un ensayo de sensibilidad de un cultivo bacteriano a los
antibiticos, usando el mtodo de Kirby Bauer.
Interpretar los resultados y hacer el informe correspondiente.
INTRODUCCION.
La resistencia de las bacterias es el principal obstculo para la eficacia

teraputica de los antibiticos, pues no solo puede anular la accin
curativa, sino que tiene consecuencias graves ya que provoca la
desaparicin de las clulas susceptibles y la propagacin de resistentes.
El antibiograma es un mtodo in vitro del comportamiento de los

antimicrobianos (antibiticos y quimioterpicos) frente a los agentes
infecciosos. Con los resultados obtenidos se clasifican a las bacterias en:
sensibles, moderadamente sensibles y resistentes, a un determinado
antimicrobiano.
No obstante, la correlacin exacta entre los resultados in vitro y la

respuesta clnica es difcil de predecir, ya existen factores que influencian la
interaccin de los agentes antimicrobianos y los microorganismos en el
paciente.
Entre los factores podemos resaltar:
Farmacocintica
Unin a protenas del plasma
Factores del agente
Vas de administracin
antimicrobiano Accin bacteriosttica o bactericida
Concentracin en el sitio de la infeccin
Enfermedad
Estado inmunolgico
Formacin de absceso
Factores del husped Presencia de cuerpos extraos
Funcin renal y heptica
Cumplimiento del tratamiento
Virulencia
Factores del Alta concentracin de microorganismos
microorganismo Infeccin mixta
Desarrollo de resistencia durante el tratamiento
La metodologa usada para realizar el antibiograma y poder determinar

la sensibilidad bacteriana a los antibiticos requiere de un medio de cultivo
puro que propicie un desarrollo del microorganismo, usualmente se emplea el
agar Mueller-Hinton en las pruebas de sensibilidad de microorganismos
aerbicos de rpido crecimiento; cuando se trata de estreptococos u otras
bacterias exigentes, se le aade 5% de sangre desfibrinada.
De los mtodos existentes, el ms popular es el del disco de papel. La

variante ms utilizada de este mtodo es la de Kirby Bauer, la cual consiste
en utilizar una sola concentracin de antibitico y medir el tamao de la zona
de inhibicin. El mtodo Kirby Bauer, el microorganismo es inoculado en la
superficie de una placa de agar, sobre la cual se colocan discos impregnados
con una concentracin conocida del antibitico. Las placas se incuban por 16-
18 horas a35-37 C. Durante la incubacin, el antibitico difunde radialmente
desde el disco a travs del agar, por lo que su concentracin va
disminuyendo a medida que se aleja del disco; en un punto determinado, la
concentracin del antibitico en el medio es incapaz de inhibir al germen en
estudio.
El dimetro del rea de inhibicin puede ser convertido a las categoras de
sensible, intermedio o resistente (S, I, o R).
MATERIALES
Cultivo Puro de un microorganismo.
Pinzas metlicas.
Guantes y mascarilla.
Hisopos.
MEDIOS Y REACTIVOS
Discos de antibiticos.
Placa con medio de Mueller-Hinton.
PROCEDIMIENTOS.
1. Funda el medio de cultivo y djelo enfriar a 45-50C.
2. Vierta aspticamente suficiente cantidad de medio de cultivo en una placa
de Petri, para obtener una capa de 4 mm de espesor. Para una placa de 10
cm. de dimetro se requieren 30 ml de medio y para una de 15 cm se
requieren 70 ml.
3. Dejar solidificar el medio de cultivo y luego secar las placas durante 30
minutos antes de usarla para la inoculacin
4. Inocular la placa mediante un hisopo estril utilizando una suspensin del
germen de 18 a 24 horas de incubacin con una turbidez equivalente a 1,5 x
106 bacterias (tubo No. 5 de la escala de Mc Farland). Para la inoculacin
sumergir un hisopo estril en el cultivo y eliminar el exceso rotando firme
contra la pared interna del tubo. Frotar el hisopo sobre la superficie del medio
de cultivo.
5. Repetir tres veces, rotando la placa para obtener una dispersin uniforme del
inculo en toda la superficie.
6. Colocar la tapa a la placa y dejar secar el inculo durante 3 a 5 minutos.
7. Colocar los discos con los antibiticos sobre el agar mediante pinzas estriles
o usando un aplicador de discos. Oprimir los discos suavemente con una
pinza para asegurarlo. Los discos deben estar espaciados de manera que su
distancia a la pared de la placa sea de 15 mm y entre ellos de 30 mm.
8. Incubar a 35-37 C hasta el siguiente da (aproximadamente 18-19 horas). Si
se requieren los resultados con rapidez se pueden leer las zonas de inhibicin
despus de 6-8 horas de incubacin, pero estos resultados deben ser
confirmados mediante una nueva lectura despus de la incubacin por 18-19
horas.
9. La medida del dimetro de la zona de inhibicin se hace desde el exterior, sin
quitar la tapa, con una regla milimetrada, un vernier o un instrumento
similar.
10. Interpretar resultados con la tabla 1 o 2 respectivamente.
GRFICOS
Tabla 13.Interpretacin del mtodo de Kirby Bauer
Dimetro de la zona de inhibicin

Contenido
Agente antimicrobiano Resistente Sensible
del disco Intermedio
<o= >o=
BETALACTMICOS, PENICILINAS
Ampicilina Enterobacteriaceae 10 g 13 14-16 17
Ampicilina Estafilococos 10 g 28 - 29
Ampicilina Enterococos 10 g 16 - 17
Ampicilina Estreptococos
10 g 18 19-25 26
hemolticos
MezlocilinaPseudomonasaerugin
75 g 15 - 16
osa
MezlocilinaEnterobacteriaceae 75 g 17 18-20 21
Oxacilina Estafilococos 1 g 10 11-12 13
Oxacilina Neumococos para
1 g - - 20
evaluar sensibilidad a penicilina
Penicilina G Estafilococos 10 U 28 - 29
Penicilina Enterococos 10 U 14 - 15
Penicilina Estreptococos
10 U 19 20-27 28
hemolticos
FACULTAD CIENCIAS DE ESCUELA
LA SALUD. MEDICINA
PiperacilinaPseudomonasaerugin
100 g 17 - 18
osa
PiperacilinaEnterobacteriaceae 100 g 17 18-20 21
COMBIN. CON INHIBIDORES B-LACTAMASA
Amoxicilina / cido clavulnico
20/10 g 19 - 20
Estafilococos
Amoxicilina / Enterobacteriaceae 20/10 g 13 14-17 18
Ampicilina / Sulbactama 10/10 g 11 12-14 15
Piperacilina /
100/10 g 17 18-20 21
TazobactamaEnterobacterias
Piperacilina /
100/10 g 17 - 18
Pseudomonasaeruginosa
Piperacilina /
100/10 g 17 - 18
Esfafilococosmeticilina S
CEFALOSPORINAS
Cefaclor 30 g 14 15-17 18
Cefazolina 30 g 14 15-17 18
Cefepima 30 g 14 15-17 18
Cefixima 5 g 15 16-18 19
Cefoperazona 75 g 15 16-20 21
Cefotaxima 30 g 14 15-22 23
Cefoxitina 30 g 14 15-17 18
Ceftazidima 30 g 14 15-17 18
Ceftixozima 30 g 14 15-19 20
Ceftriaxona 30 g 13 14-20 21
Cefuroxima sdica parenteral 30 g 14 15-17 18
Cefalotina 30 g 14 15-17 18
CARBAPENS
Imipenem 10 g 13 14-15 16
Meropenem 10 g 13 14-15 16
MONOBACTAMAS
Aztreonam 30 g 15 16-21 22
GLICOPPTIDOS
Teicoplanina 30 g 10 11-13 14
Vancomicina Enterococos 30 g 14 15-16 17
Vancomicina Estafilococos 30 g - - 15
AMINOGLUCSIDOS
Amicacina 30 g 14 15-16 17
Gentamicina 10 g 12 13-14 15
Kanamicina 30 g 13 14-17 18
Netilmicina 30 g 12 13-14 15
MACRLIDOS
Azitromicina 15 g 13 14-17 18
Claritromicina 15 g 13 14-17 18
Eritromicina 15 g 13 14-22 23
TETRACICLINAS
Minociclina 30 g 14 15-18 19
LA SALUD. MEDICINA
Tetraciclina 30 g 14 15-18 19
QUINOLONAS
Ciprofloxacina 5 g 15 16-20 21
Fleroxacina 5 g 15 16-18 19
Nalidxico cido 30 g 13 14-18 19
Norfloxacina 10 g 12 13-16 17
Ofloxacina 5 g 12 13-15 16
Trovafloxacina 10 g 13 14-16 17
OTROS ANTIMICROBIANOS
Cloranfenicol 30 g 12 13-17 18
Clindamicina 2 g 14 15-20 21
Nitrofurantona 300 g 14 15-16 17
Polimixina B 300 U 8 9-11 12
Rifampicina 5 g 16 17-19 20
Sulfonamidas 300 g 12 13-16 17
1.25/23.75
Trimetoprima - Sulfametoxazol 10 11-15 16
g
Tabla 14.Controles del mtodo de Kirby

Bauer
Dimetro de la zona de inhibicin (en mm)

Antibiticos Concentracin Con S. aureus Con E. coli
del disco ATCC 25923 ATCC 25922
Ampicilina 10 g 24-35 15-20
Bacitracina 10 U 17-22 -
Cefalotina 30 g 25-37 18-23
Cloramfenicol 30 g 19-26 21-27
Colistina 10 g - 11-15
Eritromicina 15 g 22-30 8-14
Gentamicina 10 g 19-27 19-26
Kanamicina 30 g 19-26 17-25
Meticilina 5 g 17-22 -
Neomicina 30 g 18-26 17-23
Novobiocina 30 g 22-31 -
Oleandomicina 15 g 19-28 -
Penicilina G 10 U 26-37 -
Polimixina B 300 U 7-13 12-16
Estreptomicina 10 g 14-22 12-20
Tetraciclina 30 g 19-28 18-25
Vancomicina 30 g 15-19 -
GRAFICOS:
Prueba de Antibiograma
CONCLUSIN
El conocimiento de la sensibilidad a los antibiticos del microorganismo

causante de la enfermedad, permite determinar la seleccin inicial del
agente teraputico correspondiente, sino que adems en aquellos casos
en los cuales el paciente presente intolerancia a determinado frmaco,
permite seleccionar el ms adecuado para el paciente.
CUESTIONARIO
1. Subrayar lo correcto
Los factores del husped que influyen en la interaccin de los
agentes microbianos y los microorganismos en el paciente son:
a) Vas de administracin, estado inmunolgico, farmacocintica.
b) Enfermedad, estado inmunolgico, formacin de absceso, funcin renal
y heptica, cumplimiento del tratamiento.
c) Virulencia y antibiograma.
d) Enfermedad, estado inmunolgico, formacin de absceso, funcin renal
y heptica, infeccin mixta.
2. Verdadero o falso
Los antibiogramas son mtodos in vivo que determinan la susceptibilidad de
los microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo
condiciones de laboratorio especfica y estandarizada. ( )
3. Subrayar lo correcto
En el mtodo Kirby Bauer, el microorganismo es inoculado en la
superficie de una placa de agar, sobre la cual se colocan discos
impregnados con una concentracin conocida del antibitico. Las
placas se incuban por:
a) 16-18 horas a 35-37 C.
b) 26-28 horas a 35-37 C.
c) 12 horas a 38 C.
d) 16-19 horas a 34-37 C.
PRACTICA #10
PRUEBAS BIOQUMICAS
OBJETIVOS
El alumno aprender:
A reconocer bacterias por sus propiedades metablicas.
A reconocer cada pruebas bioqumicas que se realiza a cada
bacteria para su diferenciacin e identificacin.
INTRODUCCION
Las bacterias no muestran una gran variedad de aspectos morfolgicos y por
tanto su identificacin requiere adems de la informacin obtenida en el
estudio morfolgico, realizar otras determinaciones (fisiologa,
comportamiento bioqumico, etc.).
A continuacin se describe una seleccin de pruebas bioqumicas. Se han de

realizar con cultivos bacterianos puros.
Recomendaciones
1. No aplicar a cultivos mixtos
2. Se han de usar cultivos jvenes, en fase exponencial de crecimiento.
3. La identificacin de cualquier bacteria ha de comenzar por los aspectos
morfolgicos: forma, tincin de Gram, movilidad, etc.
4. Rotular todo el material que se vaya a sembrar.
5. Comprobar la esterilidad de los medios de cultivo antes de su siembra
HEMLISIS
Es el fenmeno de la desintegracin de lo eritrocitos que se produce en el
agar sangre respectivamente, esta es producida por la accin de una enzima
llamada hemolisina (alfa, beta, gamma).
MATERIALES
Mechero de alcohol
Asa
Incubadora
MEDIOS Y REACTIVOS
Agar sangre
Muestra bacteriana
PROCEDIMIENTOS
Realice un aislamiento en una placa de agar sangre tomando una muestra
bacteriana con el asa esterilizado previamente, e incbela a 37C por 24-48
horas.
GRFICOS
*se observa como resultado A: hemolisis beta, B: hemolisis alfa, C: hemolisis

gamma.
CATALASA
Es la enzima de la mayora de las bacterias aerobias, descomponen el
perxido de hidrogeno en agua y oxgeno. El desprendimiento de burbujas
procedentes del oxgeno indica que la prueba es positiva.
MATERIALES
Porta objeto
Pipeta
Mechero de alcohol.
MEDIOS Y REACTIVOS
Perxido de hidrogeno
Muestra de un cultivo bacteriano
PROCEDIMIENTO
En un porta objeto colocar una gota de perxido de hidrogeno y colocar una
muestra de cultivo bacteriano, luego de 5 minutos observar si existen
burbujas en la solucin siendo esta positiva, si en la solucin no se observa
burbujas esta es negativa.
GRAFICOS
*prueba de catalasa
COAGULASA.
Es una protena producida por varios microorganismos que permiten la

conversin del fibringeno en fibrina. Si la prueba resulta positiva el suero
coagulara, dando como resultado un coagulo.
MATERIALES.
Tubo de ensayo
Gradilla
Asa
Incubadora
MEDIOS Y REACTIVOS.
Plasma
Microorganismo de un cultivo bacteriano
PROCEDIMIENTO
Mezcle un asa cargada con el microorganismo obtenido de un cultivo en
medio slido, o 0,1 ml de un cultivo en un medio lquido, con 0,5 ml de
plasma, contenido en un tubo pequeo incube a 37C y examine
peridicamente.
Se considera que la prueba es positiva si el plasma es coagulado en 6 a 18
horas.
GRAFICO
*En esta imagen se observa como resultado la prueba positiva y negativa

BACITRACINA
Esta prueba se la realiza para identificacin de streptococcos.
MATERIALES
Hisopo estril
Tubo de ensayo
Asa
MEDIOS Y REACTIVOS
Agar sangre
Solucin salina
Disco de bacitracina
Muestra de cultivo
PROCEDIMIENTO
Realizar una suspensin densa del microorganismo en estudio (de turbidez
igual a la del estndar 0.5 de la escala de Mac Farland).
Utilizando un hisopo estril, hisopar una placa de agar sangre.
Aplicar un disco de Bacitracina de 0.04 U sobre la
superficie de la placa. Incubar durante 24 horas, a 35-37
C.
Examinar la placa para observar cualquier zona de inhibicin del desarrollo
alrededor del disco de bacitracina.
Sensible: presencia de halo de inhibicin del desarrollo
alrededor del disco. Resistente: ausencia de halo de inhibicin
del desarrollo alrededor del disco.
GRAFICO
*Prueba de Bacitracina
OXIDASA.
Es una prueba utilizada para determinar si una bacteria produce alguna de

las citocromo c oxidasas.
El sistema citocromo esta normalmente presente solo en los organismos
aerobios capaces de usar oxigeno como aceptor final del hidrogeno.
MATERIALES.
Caja Petri
papel filtro cortado en trozos
MEDIOS Y REACTIVOS.
agua destilada
reactivos de oxidasa (toxico)
muestra de cultivo bacteriano
PROCEDIMIENTO.
Poner un trozo de papel de filtro sobre una de las tapaderas de una placa de
Petri. Aadir una gota del reactivo de oxidasa.
Depositar sobre el reactivo masa bacteriana (actuar de forma rpida y con un
asa de platino nueva o con un palillo de dientes) Resultado.
La reaccin positiva la indica un color azul-violeta intenso antes de 10
segundos.
GRAFICO
*prueba de oxidasa; se observa el color azul violeta en el resultado positivo
LACTOSA.
Esta prueba se la utiliza para diferenciar entre las enterobacterias en general

y el grupo de las coliformes. Una manera sencilla de realizar la prueba de la
fermentacin de la lactosa en enterobacterias es sembrar el
microorganismos en agar MacConkey, ya que este medio contiene lactosa y
un indicador de pH (rojo neutro).
MATERIALES.
asa
mechero de alcohol
caja Petri
MEDIOS Y REACTIVOS.
Agar McConkey
Muestra bacteriana.
PROCEDIMIENTO.
Tomando el asa, se obtiene una muestra bacteriana y se siembra el

microorganismo en agar McConkey, ya que este medio, adems de selectivo
frente a bacterias no entricas, es diferencial ya que contiene lactosa y un
indicador de pH (rojo neutro).
Las colonias lactosa (+) aparecern de color rojo o violeta contrastando con
la coloracin amarillenta de las colonias lactosa (-).
GRAFICO
*prueba de lactosa positiva; muestra un color rojizo a diferencia de la reaccin negativa,

que no obtiene ningn color.
CONCLUSIONES
Las pruebas bioqumicas convencionales, generalmente determinan

la actividad de una va metablica (conjunto de reacciones qumicas)
a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que
la bacteria al crecer transforma uno.
Es importante reconocer la importancia de cada una de estas pruebas
bioqumicas, para as tener la especificidad de los objetos a estudiar.
CUESTIONARIO.
Verdadero o falso.
La prueba de hemolisis se la utiliza solo para el reconocimiento de enzimas y
protenas para la
diferenciacin de bacterias Gram negativas.
( )
Identifique que prueba es la que se muestra en los grficos y su reaccin.
Que prueba se realiza para la identificacin de enterobacterias y escriba

como se reconoce si la prueba es positiva?.
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PRCTICA #11
TOMA DE MUESTRA
Objetivos:
Que los estudiantes puedan reconocer el mtodo que se debe realizar
al momento de la toma de muestra.
Reconocer especficamente las muestras que se necesita para el
estudio de cada grupo bacteriano.
Introduccin:
La toma de muestra consiste en la obtencin de muestras biolgicas con el
fin de determinar y aislar el o los agentes etiolgicos de una infeccin a fin
de obtener resultados concretos que ayuden a la obtencin de un
diagnstico exacto.
Es preferible que la toma de muestra sea obtenida antes de comenzar un
tratamiento antibitico, ya que este inhibe el crecimiento bacteriano.
EXUDADO BUCOFARINGEO
Conocido tambin como frotis farngeo.
Materiales
Hisopo esterilizado.
Baja lengua (paleta)
Incubadora.
Medios y reactivos
Agar sangre.
Procedimiento.
Este se realiza utilizando un hisopo (recordando las normas de bioseguridad)
y el baja lengua, este hisopo es introducido hasta la pared posterior de la
garganta rosndolo por esta pared. Una vez tomada esta muestra se hace
una siembra por agotamiento en el agar sangre y colocarlo en la incubadora
a 36 o 37C, esperar el resultado por 24 horas.
GRAFICOS
*toma de muestra bucofarngea
*siembra de la muestra
UROCULTIVO
Es el cultivo de orina necesario para el diagnstico de infecciones urinarias
producidas generalmente por bacterias.
Materiales
Un frasco con tapa ancha estril en donde se colocara la muestra de
orina.
Asa
Incubadora
Medios y reactivos
agar cromgeno de orina o agar MacConkey
muestra de orina tomada previamente.
Procedimiento
Con el asa esterilizada previamente se introduce en la muestra de
orina y se proceder a sembrar por agotamiento en el agar.
Incubar a 35-37C en aerobiosis durante 24-48 horas.
GRAFICO
*siembra de muestra por agotamiento con el asa
*Urocultivo en agar MacConkey, presencia de escherichiacoli
Se realiza una dilucin en un tubo de ensayo con una pequea cantidad de

heces recogida con la ayuda de un asa de siembra desechable y se le aade
un poco de agua destilada, se agita un poco y se obtiene una gota de esta
dilucin. Dicha gota la colocamos en un portaobjetos y aadimos una gota de
Lugol donde colocaremos un cubreobjetos encima para su posterior
observacin al microscopio.
Otro mtodo de observacin es realizando el mismo procedimiento pero
sustituyendo el lugol por el negro sudan. Esta tincin est indicada para la
observacin de grasa.
Prueba de COPRO-PARASITOLOGIA:
Este tipo de pruebas se realiza cuando se sospecha de la presencia en heces

de parsitos. En nuestro caso, la prueba no es necesaria, ya que el paciente
no presenta una sintomatologa como diarrea aguda, gases intestinales
excesivos, dolores clicos, elevacin de eosinfilos en sangre u otros
sntomas.
En el examen de parasitologa se coloca un poco de muestra en el
portaobjetos y se agrega una gota de lugol.
Con un bote de muestra colocar una gasa y aadir 50 ml de suero fisiolgico

para poder filtrar dicha muestra. Al lquido resultante del filtrado de le coloca
en un tubo de centrifuga y se centrifuga 5 min. a 3000 r.p.m. se desecha el
sobrenadante y obtenemos el sedimento que observaremos con una gota de
lugol aadida para poder observar mejor.
Grficos.
ESCUELA
MEDICINA
*resultados de la siembra.
HEMOCULTIVO
Tambin llamado cultivo de sangre, este en un anlisis para verificar si hay
bacterias u otros microorganismos en una muestra de suero. Especficamente
para verificar si hay presencia de bacterias.
Materiales
Jeringa
Algodn
Incubadora
Hisopo
Incubadora.
Medios y reactivos
Botella BACTEC
Agar MacConkey
Agar chocolate
Agar sangre.
Procedimiento
Primero proceder a tomar la muestra con la jeringa esterilizada, recordando
las normas de bioseguridad, por lo menos 10ml de sangre, una vez obtenida
la sangre se inocula en dos frascos o botellas de BACTEC, es necesario que
los frascos no se contaminen ( es preferible realizar dos hemocultivos
tomados de lugares diferentes o con 15 minutos de diferencia).
Incubar la botella inoculada con sangre a 35C
Procesar las botellas que le aparato automatizado detecte como positivas.
Sembrar dos gotas de sangre en cada uno de los agares ya mencionados
(sangre, chocolate, MacConkey).
Incubar los cultivos por 24 horas a una temperatura de 36-37C.
GRFICOS
*botellas BACTEC para la realizacin de hemocultivo

Conclusiones
Es importante poder realizar una buena toma de muestra para obtener

resultados esperados para la identificacin de los microorganismos que
deseamos estudiar.
El recordar tener presente las normas de bioseguridad al momento de
maniobrar con las sustancias biolgicas de las que se desea estudiar.
Se recomienda evitar en lo absoluto la contaminacin de los materiales
e incluso de los reactivos que se utilicen la obtencin de la muestra ya
que esto evitara el desarrollo correcto de las bacterias que se desea
estudiar teniendo como resultado una prctica incorrecta.
Cuestionario
Coloque el nombre de la prueba correspondiente
Cultivo de sangre .
Cultivo de heces
Cultivo de orina ..
Escoja el literal correcto

Exudado bucofarngeo
a) Se toma la muestra de la pared posterior de la garganta
b) Se realiza una siembra por agotamiento en agar sangre
c) Se lo coloca en la incubadora a 27C por 24 horas
d) A y b son correctas
e) A y c son incorrectas
f) Todas son incorrectas.
Describa la imagen que est a continuacin y cite el procedimiento.
..
PRACTICA #12
MICOBACTERIAS
TINCIN ZIEHL NEELSEN
OBJETIVOS
Localizar e identificar la morfologa y agrupacin de las micobacterias
especialmente el Mycobacterium tuberculosis en un frotis realizado con
muestra de esputo tindolo por medio de la Tincin Ziehl Neelsen.
INTRODUCCIN
MICOBACTERIAS
Bacterias aerobias, patgenas oportunistas intracelulares, de contornos
cilndricos, no esporulados inmviles sin flagelos sin cpsulas. No captan
fcilmente los colorantes, pero una vez teidas resisten la decoloracin por
cido-alcohol, particularidad de ser acido-alcohol-resistentes. BAAR.
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
Tambin llamado Bacilo de Koch, descubierta por Robert Koch en 1882,
causante de la Gran plaga blanca.
Morfologa
Bacilos rectos cilndricos, imposibles clasificarlos por la Tincin de
Gram. Se emplea la Tincin de Ziehl-Neelsen.
Crecimiento
Aerobios obligados (parsito intracelular).
Obtienen energa de la oxidacin de carbono.
CO2 - > Proliferacin lenta.
Cada 18h (duplican)- 22 a 33C.
Superficie celular hidrfoba.
Sensible al calor, sobrevive en esputos secos, resistente al fro.
Estructura antignica
Lpidos: bicapa lipdica
cidos miclicos: Lesionan las membranas mitocondriales, confieren
la acido resistencia.
Ceras y fosfolpidos: necrosis caseosa, inhiben la fusin del
fagosoma con el lisosoma.
Dipptido muramilo: granulomas, inhibe la diapdesis leucocitaria
Factor Cord: o cordones serpentinos, formado por un complejo de tres
macromolculas: peptidoglicano (PG), arabinogalactano (AG) y
micolatos. Estimulan la enzima que hidroliza al dinucletido de
nicotinamida y adenina (NADasa), disminuyendo la enzima NAD en el
hospedero, la cual interrumpe la respiracin mitocondrial e inhibe la
diapdesis leucocitaria, causando granulomas crnicos.
Polisacridos: induce la Hipersensibilidad : Antgeno Grupo I
(todas), Grupo II y LLL (cepas de crecimiento lento), Grupo IV
(especfico)
Protenas: Reaccin de la tuberculina (PPD), formacin de anticuerpos.
MATERIALES Equipo: Mechero o lmpara de

Hisopo (sin el algodn). alcohol
Recipiente de desechos. Microscopio ptico
Lmina portaobjeto. Guantes
Muestra de esputo. Mascarilla
Servilleta y pinza.
Suero fisiolgico.
MEDIOS Y REACTIVOS
Tabla 15.Proceso de Coloracin de Ziehl Neelsen
Proceso de Coloracin de Ziehl-Neelsen

Tincin de Ziehl- Tiempo de Accin:
Neelsen aplicacin
Como no captan fcilmente los colorantes,
1. Carbol fucsina: 5 minutos una vez
solucin de teidas resisten la decoloracin con alcohol
fucsina cetona,
particularidad de ser acido-alcohol-
fenicada: 0.3 g resistentes. BAAR.
La fucsina fenicada penetra sus paredes de
cidos
miclicos a travs del calor y las tie de rojo
Decolorante cido-alcohol. Permite decolorar
2. Alcohol cido: 2-3 minutos el medio
Alcohol etlico
98% de contraste
97 ml
cido
clorhdrico2%
3 ml
Azul de
3. Metileno : 30 segundos Colorante bsico de contraste.
0.3 g
PROCEDIMIENTOS.
La muestra debe extenderse y diseminarse sobre la superficie de

portaobjetos esterilizados y nuevos, desengrasados, la existencia de grietas
en el portaobjetos presenta un riesgo y causa de confusin.
1. Preparacin del extendido:

Examen directo y homogeneizado, para la homogenizacin se aade
un volumen equivalente de Nao al 4% (hidrxido de sodio) o suero
fisiolgico a la muestra.
Se coloca en la estufa a 370C durante 15 a 30 minutos y se centrifuga a
3000 r.p.m. durante 20 minutos.
2. Secado del extendido:
Colocar el portaobjetos en posicin horizontal sobre la llama de un
mechero de Bunsen.
3. Fijado del extendido:
Mediante el calentamiento suave, flamendolo sobre la llama.
Esto se efecta pasando 3 veces el lado del portaobjeto que no tiene la
preparacin sobre la llama para que adquiera una temperatura de 800C
Coloracin:
Colocar un pequeo trozo de papel de filtro un poco ms largo que el
tamao del preparado sobre el portaobjeto. Importante: el papel de
filtro tiene que estar por encima del extendido.
i. Cubrir el extendido con carbolfucsina. Flamear por debajo del
portaobjeto hasta el desprendimiento de vapores blancos (evitar
que se produzca la ebullicin por exceso de calor). Dejar enfriar 3
minutos y repetir el flameado hasta nuevo desprendimiento de
vapores blancos. Dejar enfriar 2 minutos. Cuando est frio,
mediante el uso de pinzas, quitar y descartar el papel filtro.
ii. Lavar.
iii. Cubrir la muestra con decolorante (alcohol-cido). Dejar 2
minutos, en el caso de muestras ms gruesas, se deja 3 minutos.
iv. Lavar.
v. Cubrir con Azul de Metileno. Dejar 30 segundos.
vi. Secar el extendido.
vii.Cubrir el extendido con una gota de aceite de inmersin y
observar al microscopio, con objetivo de 100X.
viii. Observar al microscopio no menos de 100 campos.
GRFICOS
1. Porta lmina para la preparacin del frotis.
2. Porta placa (secador).
3. Muestra de esputo.
4. Hisopos
5. Mechero de Bunsen o lmpara de

alcohol.
6
. Pinza.
7
. Recipiente de desechos
Tabla 16. Preparacin del Extendido 8
del Esputo . Lminas porta objeto.
Preparacin del extendido

Ordenar las muestras.
Marcar las lminas portaobjetos.
Partir el hisopo (aplicador).
Tomar la muestra ms purulenta.
Depositar en el portaobjetos.
Extender la muestra uniformemente de 2 cm

(longitud) por 1 cm de (ancho).
Fijar el extendido cuando este seco.
Tabla 17. Ejemplos de Muestras de Frotis
CONCLUSIN
Los bacilos cido-resistentes, comparten una caracterstica pared
celular, ms gruesa que la de muchas otras bacterias, hidrofbica,
cerosa, y rica en cidos miclicos/micolatos. La pared celular es rica en
lpidos, lo que hace que su superficie sea hidrfoba y confiere
resistencia frente a muchos desinfectantes y las tinciones de
laboratorio. Los bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR) aparecen de
color rojo sobre un fondo de azul claro, otras bacterias toman distintas
tonalidades de azul.
CUESTIONARIO
1. Subraye lo correcto:
En relacin a la morfologa del Mycobacterium tuberculosis: Cmo se
presenta?:
a) Cocos.
b) Bacilo, cocobacilo, spirilum, Vibrio.
c) Bacilos alargados.
d) Cocobacilo, bacilo, diplo-bacilo, estreptococo.
En relacin a la Tincin de Ziehl Neelsen: Cul es la composicin del
alcohol cido?:
a) Alcohol etlico 10%.
b) Alcohol etlico 98% (97 ml) y cido clorhdrico 5% (3 ml).
c) Alcohol etlico 98% (97 ml) y cido clorhdrico 2% (3 ml).
d) HCl 6% y etanol.
Cmo se lo conoce al Mycobacterium tuberculosis?
a) Bacilo de Koch.
b) Bacilo de JohneFrothingham.
c) Bacilo de Hansen.
d) Bacilo pulmonar.
PRACTICA #13
PARASITOLOGIA INTRODUCCION Y GENERALIDADES
IDENTIFICACION DE PARASITOS
EXAMEN MICROSCOPIO
EXAMEN MACROSCPICO
OBJETIVOS
Recordar las reglas que se deben respetar y observar en el laboratorio de
parasitologa.
Conocer e identificar la clasificacin parasitaria a travs de los mtodos
microscpicos y macroscpicos.
INTRODUCCION
El laboratorio de parasitologa, es una herramienta til para la
realizacin y confirmacin de la posible presencia de parsitos, en
muestras obtenidas adecuadamente.
El laboratorio de parasitologa cuenta con material de cristalera, as
como soluciones, colorantes y equipo esencial para llevar a cabo las
tcnicas diagnsticas ms comunes. El reconocimiento de material y
equipo de laboratorio permitir llevar a cabo las tcnicas
parasitoscpicas de mayor utilidad.
Identificacin
Asociaciones biolgicas
Seres de la misma especie.
Sociedades, el individuo conserva su individualidad.
Colonias, el organismo no conserva su individualidad.
Seres de distinta especie
Parasitismo: el individuo vive a expensas del otro y le produce
dao
Comensalismo: el individuo vive a expensas del otro y no le
produce dao.
Mutualismo o simbiosis: dualidad, beneficio mutuo, sin causar
dao.
Triada ecolgica
Agente y reservorio contagiante (humano, animal, inanimado)
Husped o mesonero y su variacin individual
estructura gentica
inmunidad.
Edad, nutricin, proteccin por vacunas.
Ambiente:
mecanismos de transmisin, va de infeccin fuente infectante
probabilidad de contagio: hacinamiento, nivel de vida, hbitos y
costumbres , terapia y asistencia mdica.
Parsitos: definicin.-
Seres eucariontes que viven a expensas de otro de distinta especie y le

produce dao.
Desarrollan ciclos evolutivos simples o complejos
Se define el ciclo evolutivo o biolgico a las etapas secuenciales del
desarrollo de un parsito.
Relevancia social.
Importancia de la parasitologa.
Magnitud epidemiolgica ( prevalencia, letalidad), impacto econmico,

aspectos ticos
Complejidad biolgica
- reproduccin, patogenicidad, adaptacin evolutiva, ausencia de
vacunas
asociacin a factores antropolgicos culturales y bio-demogrficos
Factores asociados a las parasitosis:

Socio antropolgicos
Desarrollo de los pueblos: Calidad de vida: salud, alimentacin,
educacin, vivienda, seguridad social. recreacin, trabajo,
vestimenta, libertades humanas, desarrollo y transporte.
Factores
biolgicos : existencia de todos los eslabones del ciclo
(reservorio, huspedes)
geogrficos y climticos :humedad, latitud, altura
Clasificacin de los parsitos y los huspedes.
De acuerdo a su localizacin en el husped:

Ectoparsitos: viven sobre la superficie externa o cavidades que
comunican al exterior. Ej.: caros, garrapatas, piojos.
Endoparsitos: viven dentro del cuerpo de los huspedes. Ej.
Cestodos, nematodos, protozoarios.
De acuerdo a los huspedes no habituales:

Parsitos errticos: aparecen en rganos no habituales. Ej. Fasciola
heptica en el rin o pulmn.
Parsitos accidentales: aparecen ocasionalmente en un husped no
habitual. Ej. Diplidiumcaninum en nios.
Parsitos facultativos: microorganismo de vida libre (no parsitos) y
pueden volverse parsitos en determinados huspedes. Ej. Pelotera
strongyloides, nematodo de vida libre que afecta a animales
domsticos.
De acuerdo al tipo de husped y los rganos de localizacin:
Hiperparsito: parsito que afecta a otro parsito. Ej.

Diplidiumcaninum
Parsito estenoxeno: afecta a la misma especie animal y a un
mismo rgano. Ej. Eimeriatenella.
Parsito eurixeno: puede afectar a varios huspedes y varios
rganos. Ej. Toxoplasma gondii, Tripanosoma cruzi, Crypstosporidium
spp.
De acuerdo al tiempo que pasan dentro del husped:
Parsito temporal: visitan al husped en busca de su alimento. Ej.

Mosquitos hematfagos, pulgas.
Parsito estacionario: parsito obligado, requieren del husped casi
en la mayora de su vida o pasan un perodo de su desarrollo sobre o
dentro del husped y se dividen:
Parsito peridico: permanecen parte de su ciclo de desarrollo y
luego lo abandonan para completarlo y continuar un tipo de vida
no parasitaria. Ej. Gasterophilusspp.
Parsitos permanentes: pasan su existencia completa en los
huspedes, excepto en las pocas en que pasan de un husped a
otro. Ej. Toxocaracanis, Trichinellaspiralis, Haemonchuscontortus.
Tipos de huspedes:
Husped definitivo: el parsito alcanza su madurez sexual o se
reproduce. Ej. Fasciola heptica (metazoario), Babesiabigemina
(protozoario)
Husped intermedario: el parsito lleva a cabo alguna fase
inmadura de su ciclo de vida.
Husped de transporte: el parsito pasa parte de su vida inmadura,
pero no sufre desarrollo en su interior y es expulsado al final.
Husped paratnico: organismo que aloja una fase evolutiva de un
parsito, pero no puede expulsarla debido a que se encuentra
enquistada o encapsulada en los tejidos.
Husped reservorio: organismo vertebrado en donde se alberga un
parsito o una enfermedad, es una fuente de infeccin.
Husped principal: organismo en el que es ms frecuente la
infeccin.
Husped suplementario: organismo en donde un parsito se encuentra
en menor frecuencia.
Husped accidental o vicariante: organismo en el cual un parsito
puede desarrollarse pero no es habitual.
Tipos de ciclos biolgicos:
Ciclo directo: el parsito requiere de un solo husped para su
desarrollo. Ej. Haemonchuscontortus
Ciclo indirecto: el parsito necesita dos o ms huspedes para su
desarrollo. Ej. Fasciola heptica.
Ciclo diheteromongeno: el parsito puede desarrollar su ciclo en
forma directa o indirecta. Ej. Hymenolepis nana.
Ciclo monogentico: parsito que tiene un tipo de reproduccin
sexual o asexual en su ciclo biolgico. Ej. Ascarissuum,
Tricomonasfoetus.
Ciclo Heterogentico: parsito con ciclo sexual y asexual. Ej.
Eimeriaspp, Babesiaspp.
Clasificacin morfolgica:
Protozoos
seres unicelulares
Metazoos
seres pluricelulares
Helmint
os
Artrpo
dos
Protozoos: formas evolutivas

Trofozoito.
forma vegetativa, el parsito se alimenta y se reproduce
Quiste.
forma de resistencia, vive en condiciones ambientales adversas.
Hay quistes (simples), que provienen de un zoto recubierto, y
ooquistes, producto de un cigoto que est en fases de
reproduccin.

Rizpodos: desarrollan seudpodos para su locomocin
Flagelados: tienen diferente nmero de flagelos
Ciliados: poseen cilios en su superficie
Coccidios: forma de banano, poseen un cono apical, y reproduccin
compleja.
Microsporidios: poseen esporas.

Reproduccin en protozoos
Asexuada.
binaria, esquizogonia, endodiogenia.
Sexuada.
Conjugacin, singamia
Helmintos:
Nematelmintos:Gusanos redondos al corte, de diferentes tamaos, se
reproducen por huevos o larvas, para crecer desarrollan mudas
(ecdisis), autctonos. Ej.
Ascarislumbricoides, Enterobiusvermicularis, Trichuristrichiura,
Trichinellaspiralis, Toxocaraspp.
Platelmintos:gusanos planos a la seccin horizontal

Cstodos, gusanos en forma de cinta, de diferentes
tamaos, hermafroditas, se reproducen por huevos, tienen
ciclos evolutivos complejos, desarrollan estados
intermediarios denominados larvas (plerocerocides,
cisticercoides, etc), autctonos. Ej. Taeniasolium,
Taeniasaginata, Hymenolepis nana, D. Latum,
Equinococcusgranulosus.
Tremtodos, forma de hoja, reproduccin sexuada por
huevos, reproduccin asexuada pasando por diferentes
estados larvales, autctono. Ej. Fasciola heptica (Distoma
heptico).

Artrpodos:
Seres de patas articuladas, simetra bilateral, cientos de especies,
metamorfosis (completa, incompleta).
insectos, arcnidos, crustceos, autctonos:
Pediculusspp, Sarcoptesscabiei, Loxosceleslaeta,
Latrodectusmacta.
LA SALUD. MEDICINA
Tabla 18.Clasificacin de
Protozoarios
1. Protozoarios
Seudpodos y
1) Sarcomastigophora Flagelos
2) Ciliophora Cilios
3) Apicomplexa Complejo Apical
EntamoebaHistolyti
4a) Amebas intestinales ca
patgenas
4b) Amebas intestinales EntamoebaHartma
no nni
patgenas EntamoebaColi
IodamoebaButschlii
Endolimax Nana
DientamoebaFragili
s
EntamoebaGingivali
s
NaegleriaAcantham
4c) Amebas de vida libre oeba
5) Flagelados EnteromonasHomin
intestinales y is
genitales RetortamonasIntestinalis
ChilomastixMesnili
GiardiaLamblia
TrichomonasVaginal
is
TrichomonasHomini
s
TrichomonasTenax
6) Patgenas para el Donovani
hombre
Leishmania Braziliensis
Trpica
7) Hemoflagelados Trypanosoma Rhodesiense
Gambiense
Cruzi
Rangeli
8) BALANTIDIUM COLI
9) PARSITOS DEL PlasmodiumMalaria
PALUDISMO e
PlasmodiumVivax (Terciano Benigno)
Plasmodium
(Laverania)
Facilparum (Terciano Maligno)
Plasmodium Ovale (Terciano)
10) TOXOPLASMA
GONDII
11) SARCOCYSTIS E
ISOSPORA Belli
Hominis
12) PNEUMOCYSTlS
CARINII
MANABI
SALUD. MEDICINA
Tabla 19.Clasisificacin de
Helmintos
2. Helmintos
Cstodos D. Latum
pseudofilideos
Taeniidae Taenia Saginata
Solium
Himenolepidida
Cstodos e Echinococus Granulosus
ciclofidelios Mutiloculares
Dilepidida
e Dipyladium Caninum
Tabla 20.Clasificacin de Tremtodos
3. Tremtodos
Phylum Platelmintos
Clase Tremtodos
Subclase Digeneos
Orden Prosostomas
Strigeata
Suborden Amphistoma
Distoma
SUBORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE
S.haematobium
Strigeata Schitosomatidae Schitosoma S.mansoni
S.japonicum
S.intercatalum
Amphistoma Paramphistomatidae Gasrtodiscoides G. hominis
Watsonius W. watsoni
F. heptica
Fasciolidae Fasciola
F. gigantica
Fasciolopsis
F. buski
Clonorchis C.sinesis
Distoma Opisthorchidae Opisthorchis O.felineus
O. viverrini
Heterophyidae Heterophyes H.heterophyes
Metagonimus M. yokogawai
Troglotrematidae Paragonimus P. westermani
LA SALUD. MEDICINA
Tabla 21. Clasificacin de
Nemtodos
4. Nemtodos
SUBCLASE ORDEN SUPERFAMILIA GENERO
Adenophorea Trichinella
(anteriormente Enplidos Trichinelloidea Trichuris
afasmdeos) Capillaria
Strongyloides
Rabdticos Rhabditoidea Ancylostoma
Estrogilinos Ancylotosmatoidea Necator
Ternidens
Metastrongyloidea Angiostrongylus
Metastrongylus
Trichostrongyloidea Tricostrongylus
Ascaris
Ascaridos Ascaridoidea Toxocara
Secernentea Anisakis
(anteriormente Lagochilascaris
fasmdeos) Enterobius
Gongylonema
Thelazia
Oxyuroidea
Spiruroidea Gnathostoma
Oxiuroideos Wuchereria
Thelazoidea
Espirridos Brugia
Gnathostomatoidea
Onchocerca
Filarioidea Dipetalonema
Mansonella
Dirofilaria
Dracunculoidea Dracunculus
EXAMEN DIRECTO MACRSCOPICO

Fundamento
Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los
parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las
caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (color, presencia de
sangre y/o moco, consistencia, etc.).
MATERIALES
Aplicador (baja lengua).
Pinza de metal.
Coladera de plstico o malla metlica.
Muestra de heces fecales.
MEDIOS Y REACTIVOS
Suero fisiolgico.
Solucin yodada de Lugol.
PROCEDIMIENTOS
Agregar suero fisiolgico/Lugol en cantidad suficiente para homogeneizar
la muestra.
En caso de presencia de parsitos adultos, tamizar o colar la muestra.
Observar las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para la
ayuda diagnstica (consistencia, color, presencia de moco, sangre,
alimento sin digerir), as como la presencia de gusanos cilndricos,
anillados o aplanados (enteros o parte de ellos).
EXAMEN DIRECTO MICRSCOPICO
Fundamento
Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas
evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico: (trofozotos, quistes
de protozoos: Entamoebahistolytica, Giardialamblia, Balantidiumcoli, etc.; as
como larvas o huevos de helmintos: Strongyloidesstercoralis,
Ancylostomaduodenalis, Necatoramericanus, Trichostrongylusspp.,
Paragonimus, Fasciola, etc.).
MATERIALES Equipo: Microscopio ptico

Lminas portaobjetos. Mascarilla
Laminillas cubreobjetos. Guantes
Aplicador de vidrio o madera.
Marcador de vidrio.
MEDIOS Y REACTIVOS
Suero fisiolgico.
Solucin de lugol.
Verde brillante.
Rojo neutro.
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero
fisiolgico y, con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia
fecal, emulsionarla y cubrirla con una laminilla cubreobjetos.
2. Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y
proceder a la aplicacin de la muestra fecal.
3. Con el suero fisiolgico, los trofozotos y quistes de los protozoarios se
observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y
vacuolas.
4. En algunos casos, se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a
que no alteran la actividad del trofozoto. Los ms usados son verde
brillante 0,2% y rojo neutro 0,01%.
5. Observar al microscopio a 10X 40X. No es aconsejable usar objetivo de
inmersin (100X), pues se puede ensuciar el microscopio.
ESCUELA
MEDICINA
GRFICOS
Quiste de Giardialamblia con solucin lugol

CONCLUSIN
El estudio de la parasitologa es fundamental para la identificacin

diferencial en el laboratorio de prcticas, aplicando el mtodo directo
macroscpico y microscpico de extendido coprolgico parasitario,
permite realizar determinar el diagnstico de los protozoarios intestinales.
Se ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol, para la bsqueda e
identificacin de quistes, huevos y larvas.
CUESTIONARIO
1. Subraye lo correcto
Entre las caractersticas de los Nematelmintos estn:
a) Seres de patas articuladas, simetra bilateral, cientos de especies,
metamorfosis (completa, incompleta)
b) Son, gusanos redondos al corte, de diferentes tamaos, se reproducen
por quistes, para crecer desarrollan mudas (ecdisis), autctonos. Ej.
Ascarislumbricoides, Enterobiusvermicularis, Plasmodium ovale.
c) Son gusanos redondos al corte, de diferentes tamaos, se
reproducen por huevos o larvas, para crecer desarrollan mudas
(ecdisis), autctonos. Ej. Ascarislumbricoides,
Enterobiusvermicularis, Trichuristrichiura, Trichinellaspiralis,
Toxocaraspp.
d) Son gusanos en forma de cinta, de diferentes tamaos, hermafroditas,
se reproducen por huevos, tienen ciclos evolutivos complejos,
desarrollan estados intermediarios denominados larvas (plerocerocides,
cisticercoides, etc), autctonos.
2. Verdadero o Falso
De acuerdo a las asociaciones biolgicas:
a) Parasitismo, el individuo vive a expensas del otro y no produce dao
(Falso)
b) Mutualismo o simbiosis: dualidad, beneficio mutuo, sin causar dao
(Verdadero)
c) Comensalismo, el individuo vive a expensas del otro y produce dao
(Falso)
3. Subraye lo incorrecto.
De acuerdo a los platelmintos
a) Se dividen en cstodos y tremtodos.
b) Songusanos planos a la seccin horizontal
c) Pertenecen a la clasificacin de los helmintos.
d) Forma infectante:ooquistes.
PRCTICA #14
ESTUDIO MORFOLOGICO DE LOS PARASITOS
Objetivos
Los estudiantes puedan identificar las caractersticas
taxonmicas, morfolgicas de los diferentes parasitos a
estudiar.
Introduccin
Los parsitos son organismos eucariotas que viven de otro sin
necesariamente provocarles la muerte directamente, pero si afectando su
condicin corporal.
Seres de la misma especie
Sociedades, el individuo conserva su
individualidad Colonias, el organismo no
conserva su individualidad
Parasitismo, el individuo vive a expensas del otro y le
produce dao Comensalismo, el individuo vive a expensas
del otro y no le produce dao. Mutualismo, ambos obtienen
beneficios.
Parasitismo
Relacin ntima y OBLIGATORIA entre dos individuos de distinta especie en la
que uno de los simbiontes (PARASITO) depende metablicamente del otro
(hospedador) y existe respuesta inmunitaria por parte del hospedador.
Tipos de parsitos:
Por su Por su tipo de Por su

tiempo de Por su Por su ciclo adaptacin
permanencia localizacin a la vida
en en el especificidad biolgico parasita
el
hospedador hospedador hacia el
hospedador
Parsitos Ectoparasito Parsitos Parasitosmonoxe Parasitos
s nos
permanent
es estenoxenos obligados
Endoparsit Parasitosheterox
Parsitos os Parsitos enos Parasitos
temporale
s eurixenos facultativos
Clasificacin morfolgica de los parsitos:

Protozoos: seres unicelulares
Metazoos: seres pluricelulares
Protozoos:
Son organismos microscpicos, unicelulares que viven en ambientes
hmedos o directamente en medios acuticos, la reproduccin puede ser
asexual (binaria, esquizogonia, endodiogenia) por biparticin y tambin
sexual (conjugacin, singamia) por isogametos o por conjugacin
intercambiando material gentico.
En este grupo de protozoos encontramos:

Sarcodina (Amebas)
Sporozoa ( Esporozoos)
Mastigophora (Flagelados)
Ciliata (Ciliados)
Amebas
Las amebas se caracterizan por su forma cambiante, pues carece de pared
celular, y por su movimiento a base de seudpodos, tambin usados para
capturar alimentos a travs de la fagocitosis.
En su ciclo de vida se los encuentra en quistes y trofozoitos.
GENERO
ENTAMOEBA ENDOLIMAX IODAMOEBA
E histolitica nana butschlii
S dispar
P
E coli
C hartmanii
I
E gingivalis
S polecki
Graficos
Esporozoos
Los esporozoos son paracitos obligados de diversos grupos animales. Viven
dentro de las clulas de su husped y pueden llegar a ser patgenos.
Presentan generalmente alternancia entre fases de reproduccin sexual y
otras multiplicaciones asexuales.
Como caracterstica, son formadores de esporas, carecen de cilios y flagelos
al menos en faces adultas.
Los esporozoos atacan a todo tipo de animales causando
enfermedades muy graves. Son capaces de formar esporas muy
resistentes. Los ms representativos son:
ESPOROZOOS
Son estructuras ovaladas que poseen una

cubierta transparente, y en el interior se
ISOSPORA observa, uno o dos esporoblastos o la
presencia de trofozoitos.
Es un parasito apicomplexo intracelular

obligado. El ooquiste es esfrico, mide de 4-6
m de dimetro y posee 4 esporozoitos en su
interior.
CRYPTOSPORIDIUM
Ligeramente rosados con punteados

citoplasmticos. El parsito internalizado tiene
una forma irregular, descrito como ameboide.
PLASMODIUM
Es un protozoo que mide 4 a 8 m de largo por 2
a 4 m de ancho, tiene forma de media luna con
un extremo aguzado y el otro romo, durante su
ciclo biolgico el protozoo adopta esta forma de
medialuna, puede tres fases que son de
ooquiste, bradizoito y traquizoito
TOXOPLASMA
FLAGELADOS
Son organismos unicelulares mviles, algunos son auttrofos, realizan la
fotosntesis, y otros son hetertrofos, se alimentan por absorcin.
Viven en ambientes hmedos o en medios acuticos, tanto en agua salada
como en agua dulce. Segn en hbitat se dividen:
Flagelados intestinales: (giardialamblia)
Flagelados atriales: parsitos de la boca, uretra y vagina
(trichomonasvaginalis)
Hemoflagelados: se desarrolla en secreciones de la boca, flagelados de
la sangre (leishmaniabrasilienzis y tripanosoma cruzi)
Flagelos
intestinales
Giardialamblia
Causa enteritis por parasitacin de los primeros tramos del intestino delgado.
El trofozoito presenta 8 flagelos y dos los dispuestos en simetra bilateral. En
la parte anterior presenta dos discos suctorios o ventosas. Tiene una
hendidura ventral de la cual salen flagelos ventrales.
Observacin en el microscopio
Grafico
*trofosoito de giardia *quiste de giardia
Flagelados
atriales
Trichomonasvag
inalis
Produce una patologa denominada trichomoniasis urogenital.
El trofozoito presenta una morfologa piriforme, posee 5 flagelos: 4 son
anteriores y libres, el quinto se dirige hacia la parte posterior del cuerpo
celular.
Su reproduccin es binaria.
Hemoflagelados
Leishmania y Tripanosoma cruzi
Leishmania Tripanosoma cruzi

Es el responsable de la Parasito intracelular, es el agente
enfermedad etiolgico
conocida como leishmaniosis. del mal de chagas.
Promastigote; alargada con Amastigote; esfrico, es la
un cilio o forma
flagelo anterior, en el reproductiva en el interior de las
intestino del clulas
invertebrado vector. mamferas.
Amastigote; esfrico y con un Epimastigote; alargado, es la
cilio muy forma
corto que no sobresale de la reproductiva en el tracto digestivo
bolsa flagelar de los
de modo que solo es invertebrados y en medios de
apreciable en el cultivo.
Tripomastigote; tambin
microscopio electrnico. alargado, se
encuentra en la sangre de los
mamferos y es
la forma infectante de ellos.
Tripomastigote
Promastigote
Epimastigote
Amastigote
Amastigote
Ciliados
Estos paracitos presentan cilios en almenos una etapa de vida, su
reproduccin es asexual, la mayora son de vida libre, aunque la mayora son
comensales de vertebrados e invertebrados. Entre estos parsitos tenemos.
Paramecium
Balantidium
Paramecium Balantidium
Su habitad, aguas dulces Se encuentra en el intestino
estancadas con de
abundantes materia orgnica, crustceos, insectos, peces,
los cilios mamferos.
que presentan recubren La nica especie que infecta al
todo la humano es
superficie. el Balantidiumcoli.
Puede presentar reproduccin Trofozoito; son esfricos, son la
asexual, etapa
parastica, estn rodeado por
sexual. cilios y
muestran un movimiento
constante.
Quiste; son ovoides, son la
etapa de
trasmisin, pueden sobrevivir en
el medio
ambiente, carecen de cilios.
Quiste
Trofozoito
Metazoos
Son un grupo de organismos pluricelulares, son hetertrofos es decir
necesitan ingerir materia orgnica y oxgeno para vivir.
Su reproduccin puede ser sexual como asexual en el caso de
algunos parsitos. Se los puede clasificar en:
Platelmintos Trematodos
(planos) Cestodos
Helmintos
Nematelminto
s
(redondos)
Platelmintos:
Conocidos tambin como gusanos planos son despus de las esporas los
metazoos ms simples, presentan tejidos aunque no tienen aparato
circulatorio ni respiratorio y el aparato excretor est formado por una red de
conductos que permiten al animal expulsar al exterior los productos
generados en su organismo.
Los platelmintos son hemafrditas, es decir, el mismo individuo presenta
aparato reproductor masculino y femenino.
Entre los platelmintos encontramos:
Los trematodos.
Los cestodos.
Trematodos
Son parsitos que se caracterizan por tener un cuerpo nico,
no segmentado, en forma de hoja y revestido por un sincitio
denominado tegumento.
Internamente contiene aparato digestivo y sensitivo, entre
otros. Presentan formas variadas segn las especies. En este
caso estudiaremos las de mayor relevancia para el ser
humano.
Schistosoma: Son el agente
causal del proceso
infecciosoconocido como
esquitosomiasis, presentan
un molusco como
hospedador intermediario.
Microscopia electrnica del
parasito Schistosoma, huevo
del parasito.
Los adultos llegan a medir
10-12 mm(macho) y 12-
16mm (hembras),
presentan ventosas, su
tubo digestivo es
incompleto, tiene
reproduccin sexual.
Fasciola; caracterizado por

su forma lanceolada, con
dos ventosas, una bucal y
otra ventral. Es parasito de
los canales biliares y la
vescula biliar.
Es un gusano plano, sin Fasciola heptica adulta; huevo de la
segmentos, carnoso, mide fasciola.
de 2 a 3 cm de largo por 1 a
1,5 cm de ancho.
En la porcin anterior
presenta una ventosa bucal
y otra de mayor tamao en
la zona ventral, que mide
aproximadamente1,6mm.
Es hermafrodita, el huevo
se presenta en el extremo Huevos de
P.Westermani
proximal del tero.
Parasito
adulto.
Los huevos son depositados
en el conducto biliar, son de
color amarillento.
ParagonimusWestermani:ca
usan la paragonimiasis,
estos parsitos se localizan
preferentemente en los
pulmones de los mamferos
causando inflamacin
interna, dolores, tos seca y
fiebre.
Los parsitos adultos miden
7 a 12 mm de largo por 4 a
6 mm de ancho.
Cestodos
Son parsitos obligados que a diferencia de la clase anterior
no tienen aparato digestivo. Se alimentan a travs de la piel
de su cuerpo (osmosis).
Presentan un cuerpo alargado, adaptado a la forma tubular del
intestino, dividido en tres regiones: esclex (rgano de
fijacin), cuello (da origen a la cadena de proglotides) ,

estrbilo ( es el conjunto deproglotides).
Taeniasolium; vive en el
intestinodelgado,
normalmente mide de 3 a 4
m. junto con la
taeniasaginata, son
conocidas como lombriz
solitaria.
Es un gusano en forma de
cinta dividido en segmentos T
o progltides, de color a
e
n
amarillo. i
a
s
o
l
i
u
m
a
d
u
l
t
a
,
h
u
e
v
o
s
d
e
t
a
e
n
i
a
s
o
l
i
u
m
.
Cada progltides es una
unidad de reproduccin
autofecundante e
independiente, que produce
huevos que contienen
embriones infestantes; cada
uno contiene un promedio
de 50.000 a 60.000 huevos
y habitualmente se
desprenden del estrbilo en
cadenas cortas que se
eliminan con las heces.
Otros tipos de cestodos:

Taeniasaginata
Hymenolepis nana
Huevo H. Nana
Echinococcusgranulosus
Diphylobothriumlatum.
Nematelmintos
Tambin conocidos como nemtodos, nematode.Son un filo de vermes
pseudocelomados con ms de 25.000 especies registradas. Se conocen
vulgarmente como gusanos redondos debido a la forma de su cuerpo en un
corte transversal.
Presentan aparato reproductor:
Masculino: Testculos del cual parte un vaso deferente, que desemboca en
la vescula seminal y se contina con el conducto eyaculador; expele su
contenido a travs de la cloaca. Femenino:Ovario del cual parte un
oviducto, desemboca en el receptculo seminal y contina por el tero y
vagina para terminar en la vulva, ubicada en la lnea media ventral de la
mitad anterior del cuerpo.
Entre los nematelmintos encontramos:

Intestinales
scaris lumbricoides
Trichuristrichiura
Enterobiusvermicularis
Strongyloidesstercoralis
Cuestionario
Describa la siguiente imagen:
Colocar en el ndice
correcto:
Parameciu
a) Esporozoos m( )
b) Flagelados Isospora ( )
GiardiaLambl
c) Ciliados ia( )
Entamoebahistolitic
d) Amebas a( )
Identifique los siguientes parsitos:
.
..
PRCTICA #15
ESTUDIO SEROLOGICO E INMUNOLOGICO DE LAS

ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
Objetivos
Cada uno de los alumnos recibirn la capacitacin
metodolgica prctica para el diagnstico de infecciones por
microorganismos que no se pueden cultivar.
Conocimiento del estado inmunitario de un individuo previo a
una vacunacin.
El diagnstico de la enfermedad actual.
El conocimiento y diagnstico de enfermedades infecciosas en
pacientes con tratamiento antibitico.
Capacitacin y conocimiento en el diagnstico retrospectivo
(seroconversin), evaluando en el laboratorio las alteraciones
inmunitarias.
Capacitacin en aspectos de investigacin bsica sero-
inmunolgica.
Introduccin.
La palabra inmunologa deriva del latn immunis que significa sin carga, sin
enfermedad, contndose que todo individuo que no tiene enfermedad es
INMUNE y en el estado de la resistencia especfica a una enfermedad se
denomina INMUNIDAD. EL CONOCIMIENTO cientfico - acadmico y el
desarrollo de la inmuno-serologa durante este siglo, hace ms aplicable en la
prctica evidencias en la prevencin, desarrollo, evolucin y en el
tratamiento de un gran nmero enfermedades infecciosas.
Cada una de las REACCIONES entre ANTIGENOS y ANTICUERPOS son
respuestas de defensa a estmulos exgenos o endgenos y sus derivaciones
patolgicas.
Algunas de la reacciones serolgicas pueden ser CUALITATIVAS y otras
absolutamente
CUANTITATIVAS.
EL DIAGNOSTICO SEROLOGICO es un proceso analtico que mide el nmero
de anticuerpos que se producen ante la presencia de un microorganismo
patgeno sea este un VIRUS, BACTERIAS, PARASITOS, HONGOS en el suero
sanguneo.
Las reacciones serolgicas se emplean adems para IDENTIFICAR

ANTIGENOS O ANTICUERPOS y estimar la cantidad relativa de cada uno de
ellos. Se obtiene informacin definitiva de los microorganismos aislados de
un individuo durante una infeccin.
En muchas enfermedades infecciosas, el paciente desarrolla ANTICUERPOS

ESPECIFICOS en el suero sanguneo, los cuales ejercen actan contra el agente
infeccioso que se pueden identificar mediante pruebas de laboratorio in vitro,
todos estos procesos son OBSERVABLES como
REACCIONES SEROLOGICAS.
FLUJOGRAMA EN LA PRACTICA DEL DIAGNOSTICO Y
TRATAMIENTOS DE LAS
ENFERMEDADES INFECCIOSAS.
METODOLOGIA:
I- MICROSCOPIA DIRECTA. Demostracin del agente etiolgico. II-
CULTIVO. Identificacin del agente etiolgico aislado
III- PRUEBA DE SUSCEPTILIBILIDAD Antibiograma
IV- PRUEBAS SEROLOGICAS Suero del paciente.
Demostracin indirecta de anticuerpos asociados con el
agente etiolgico.
V- EVIDENCIA SEROLOGICA. Tipificacin
VALIDACION DEL INFORME DE LA PRUEBA DE

LABORATORIO.
VI- INTERPRETACION CLINICA DE LA PRUEBA.
En relacin con: 1- Examen clnico del
paciente
Signos y sntomas en el
paciente cuadro de la
enfermedad
2- Historia clnica del paciente
Exposicin a la infeccin
Evolucin de la enfermedad
Inmunizaciones previas
Tratamiento recibido, etc.
3- Estudio epidemiolgico del paciente
VII- DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD
VIII- TRATAMIENTO TERAPEUTICO.
TECNICAS DE DIAGNOSTICO SERO-INMUNOLOGICO
Entre las principales tcnicas que se emplean para el diagnstico de las

enfermedades infecciosas y sus reacciones serolgicas especficas
encontramos:
REACCIN DE PRECIPITACION.
REACCION DE AGLUTINACION.
FIJACION DE COMPLEMENTO.
INMUNOFLUORESCENCIA.
ENZIMAINMUNOANALISIS E.L.I.S.A.
Fundamento
Cada uno de los procedimientos permite observar directamente los
procesos y caractersticas de la reaccin ANTIGENO-ANTICUERPO de los
principales microorganismos y entender cada uno de los ciclos y
estadios.
La especificidad en la deteccin de anticuerpos contra parsitos,
hongos y virus. Determinar la distribucin, la incidencia y
prevalencia de una enfermedad.
La eleccin de la mejor conducta teraputica.
Establecer una verdadera polticas sanitarias
de salud. Mantener un estudio permanente
epidemiolgico.
Las enfermedades infecciosas DIAGNOSTICADAS POR EXAMENES
SEROLOGICOS PUEDEN SER:
SIFILIS
TOXOPLASMOSIS.
LEPTOSPIROSIS
RUBEOLA
MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
HELICOBACTER PILORY
SALMONELOSIS
RICKETTSIOSIS
TRIPANOSOMIASIS
LEISHMANIASIS
ASO
FACTOR REUMATOIDEO
PROTEINA C REACTIVA PCR.
MICOBACTERIUM TUBERCULOSIS MICOBACTERIUM LEPRAE.
MATERIALES
Jeringas desechables 3 5 ml.
Algodn.
Torniquetes
Tubos de ensayos 5 10 cc
Gradillas porta tubos.
SOLUCIONES Y REACTIVOS
Alcohol antisptico, Suero fisiolgico.
PARASITOLOGIA INTRODUCCION Y GENERALIDADES

IDENTIFICACION DE PARASITOS
EXAMEN MICROSCOPIO
EXAMEN MACROSCPICO
OBJETIVOS
Recordar las reglas que se deben respetar y observar en el laboratorio de
parasitologa.
Conocer e identificar la clasificacin parasitaria a travs de los mtodos
microscpicos y macroscpicos.
INTRODUCCION
El laboratorio de parasitologa, es una herramienta til para la
realizacin y confirmacin de la posible presencia de parsitos, en
muestras obtenidas adecuadamente.
El laboratorio de parasitologa cuenta con material de cristalera, as
como soluciones, colorantes y equipo esencial para llevar a cabo las
tcnicas diagnsticas ms comunes. El reconocimiento de material y
equipo de laboratorio permitir llevar a cabo las tcnicas
parasitoscpicas de mayor utilidad.
Identificacin
Seres de la misma especie.
Sociedades, el individuo conserva su individualidad.
Colonias, el organismo no conserva su individualidad.
Parasitismo: el individuo vive a expensas del otro y le produce
dao
Comensalismo: el individuo vive a expensas del otro y no le
produce dao.
Mutualismo o simbiosis: dualidad, beneficio mutuo, sin causar
dao.
Triada ecolgica
Agente y reservorio contagiante (humano, animal, inanimado)
Husped o mesonero y su variacin individual
estructura gentica
inmunidad.
Edad, nutricin, proteccin por vacunas.
Ambiente:
mecanismos de transmisin, va de infeccin fuente infectante
probabilidad de contagio: hacinamiento, nivel de vida, hbitos y
costumbres , terapia y asistencia mdica.
Parsitos: definicin.-
Seres eucariontes que viven a expensas de otro de distinta especie y le

produce dao.
Desarrollan ciclos evolutivos simples o complejos
Se define el ciclo evolutivo o biolgico a las etapas secuenciales del
desarrollo de un parsito.
Relevancia social.
Importancia de la parasitologa.
Magnitud epidemiolgica ( prevalencia, letalidad), impacto econmico,

aspectos ticos
Complejidad biolgica
- reproduccin, patogenicidad, adaptacin evolutiva, ausencia de
vacunas
asociacin a factores antropolgicos culturales y bio-demogrficos
Factores asociados a las parasitosis:

Socio antropolgicos
Desarrollo de los pueblos: Calidad de vida: salud, alimentacin,
educacin, vivienda, seguridad social. recreacin, trabajo,
vestimenta, libertades humanas, desarrollo y transporte.
Factores
biolgicos : existencia de todos los eslabones del ciclo
(reservorio, huspedes)
geogrficos y climticos :humedad, latitud, altura
Clasificacin de los parsitos y los huspedes.
De acuerdo a su localizacin en el husped:

Ectoparsitos: viven sobre la superficie externa o cavidades que
comunican al exterior. Ej.: caros, garrapatas, piojos.
Endoparsitos: viven dentro del cuerpo de los huspedes. Ej.
Cestodos, nematodos, protozoarios.
De acuerdo a los huspedes no habituales:

Parsitos errticos: aparecen en rganos no habituales. Ej. Fasciola
heptica en el rin o pulmn.
Parsitos accidentales: aparecen ocasionalmente en un husped no
habitual. Ej. Diplidiumcaninum en nios.
Parsitos facultativos: microorganismo de vida libre (no parsitos) y
pueden volverse parsitos en determinados huspedes. Ej. Pelotera
strongyloides, nematodo de vida libre que afecta a animales
domsticos.
De acuerdo al tipo de husped y los rganos de localizacin:
Hiperparsito: parsito que afecta a otro parsito. Ej.

Diplidiumcaninum
Parsito estenoxeno: afecta a la misma especie animal y a un
mismo rgano. Ej. Eimeriatenella.
Parsito eurixeno: puede afectar a varios huspedes y varios
rganos. Ej. Toxoplasma gondii, Tripanosoma cruzi,
Crypstosporidiumspp.
De acuerdo al tiempo que pasan dentro del husped:

Parsito temporal: visitan al husped en busca de su alimento. Ej.
Mosquitos hematfagos, pulgas.
Parsito estacionario: parsito obligado, requieren del husped casi
en la mayora de su vida o pasan un perodo de su desarrollo sobre o
dentro del husped y se dividen:
Parsito peridico: permanecen parte de su ciclo de desarrollo y
luego lo abandonan para completarlo y continuar un tipo de vida
no parasitaria. Ej. Gasterophilusspp.
Parsitos permanentes: pasan su existencia completa en los
huspedes, excepto en las pocas en que pasan de un husped a
otro. Ej. Toxocaracanis, Trichinellaspiralis, Haemonchuscontortus.
Tipos de huspedes:
Husped definitivo: el parsito alcanza su madurez sexual o se
reproduce. Ej. Fasciola heptica (metazoario), Babesiabigemina
(protozoario)
Husped intermedario: el parsito lleva a cabo alguna fase
inmadura de su ciclo de vida.
Husped de transporte: el parsito pasa parte de su vida inmadura,
pero no sufre desarrollo en su interior y es expulsado al final.
Husped paratnico: organismo que aloja una fase evolutiva de un
parsito, pero no puede expulsarla debido a que se encuentra
enquistada o encapsulada en los tejidos.
Husped reservorio: organismo vertebrado en donde se alberga un
parsito o una enfermedad, es una fuente de infeccin.
Husped principal: organismo en el que es ms frecuente la
infeccin.
Husped suplementario: organismo en donde un parsito se encuentra
en menor frecuencia.
Husped accidental o vicariante: organismo en el cual un parsito
puede desarrollarse pero no es habitual.
Tipos de ciclos biolgicos:

Ciclo directo: el parsito requiere de un solo husped para su
desarrollo. Ej. Haemonchuscontortus
Ciclo indirecto: el parsito necesita dos o ms huspedes para su
desarrollo. Ej. Fasciola heptica.
Ciclo diheteromongeno: el parsito puede desarrollar su ciclo en
forma directa o indirecta. Ej. Hymenolepis nana.
Ciclo monogentico: parsito que tiene un tipo de reproduccin
sexual o asexual en su ciclo biolgico. Ej. Ascarissuum,
Tricomonasfoetus.
Ciclo Heterogentico: parsito con ciclo sexual y asexual. Ej.
Eimeriaspp, Babesiaspp.
Clasificacin morfolgica:
Protozoos
seres unicelulares
Metazoos
seres pluricelulares
Helmintos
Artrpodos
Protozoos: formas evolutivas

Trofozoito.
forma vegetativa, el parsito se alimenta y se reproduce
Quist
e.
forma de resistencia, vive en condiciones ambientales adversas.
Hay quistes
(simples), que provienen de un zoto recubierto, y ooquistes,
producto de un
cigoto que est en fases de reproduccin.

Rizpodos: desarrollan seudpodos para su locomocin
Flagelados: tienen diferente nmero de flagelos
Ciliados: poseen cilios en su superficie
Coccidios: forma de banano, poseen un cono apical, y reproduccin
compleja.
Microsporidios: poseen esporas.

Reproduccin en protozoos
Asexuada.
binaria, esquizogonia, endodiogenia.
Sexuada.
Conjugacin, singamia
Helmintos:
Nematelmintos:Gusanos redondos al corte, de diferentes tamaos,
se reproducen por
huevos o larvas, para crecer desarrollanmudas (ecdisis),autctonos. Ej.
Ascarislumbricoides, Enterobiusvermicularis,
Trichuristrichiura, Trichinellaspiralis,
Toxocaraspp.
Platelmintos:gusanos planos a la seccin horizontal

Cstodos, gusanos en forma de cinta, de diferentes
tamaos, hermafroditas, se reproducen por huevos, tienen
ciclos evolutivos complejos, desarrollan estados
intermediarios denominados larvas (plerocerocides,
cisticercoides, etc), autctonos. Ej. Taeniasolium,
Taeniasaginata, Hymenolepis nana, D. Latum,
Equinococcusgranulosus.
Tremtodos, forma de hoja, reproduccin sexuada por
huevos, reproduccin asexuada pasando por diferentes
estados larvales, autctono. Ej. Fasciola heptica (Distoma
heptico).
Artrpodos:
Seres de patas articuladas, simetra bilateral, cientos de especies,
metamorfosis (completa, incompleta).
insectos, arcnidos, crustceos, autctonos:
Pediculusspp, Sarcoptesscabiei, Loxosceleslaeta,
Latrodectusmacta.
Tabla 22.Clasificacin de Protozoarios
1. Protozoarios
1) Sarcomastigophora Seudpodos y Flagelos
2) Ciliophora Cilios
3) Apicomplexa Complejo Apical
4a) Amebas
intestinales EntamoebaHistolytica
patgenas
4b) Amebas EntamoebaHartmanni
intestinales no
MANABI
SALUD. MEDICINA
patgenas EntamoebaColi
IodamoebaButschlii
Endolimax Nana
DientamoebaFragili
s
EntamoebaGingivali
s
NaegleriaAcantham
4c) Amebas de vida libre oeba
5) Flagelados intestinales EnteromonasHomin
y is
genitales RetortamonasIntestinalis
ChilomastixMesnili
GiardiaLamblia
TrichomonasVaginal
is
TrichomonasHomini
s
TrichomonasTenax
6) Patgenas para el
hombre Donovani
Leishmania Braziliensis
Trpica
7) Hemoflagelados Trypanosoma Rhodesiense
Gambiense
Cruzi
Rangeli
8) BALANTIDIUM COLI
9) PARSITOS DEL PlasmodiumMalaria
PALUDISMO e
PlasmodiumVivax (Terciano Benigno)
Plasmodium
(Laverania)
Facilparum (Terciano Maligno)
Plasmodium Ovale (Terciano)
10) TOXOPLASMA GONDII
11) SARCOCYSTIS E
ISOSPORA Belli
Hominis
12) PNEUMOCYSTlS
CARINII
Tabla 23.Clasisificacin de Helmintos
2. Helmintos
Cstodos D. Latum
pseudofilideos
Taeniidae Taenia Saginata
Solium
Himenolepidida
Cstodos e Echinococus Granulosus
ciclofidelios Mutiloculares
MANABI
SALUD. MEDICINA
Dilepididae Dipyladium Caninum
Tabla 24.Clasificacin de Tremtodos
3. Tremtodos
Phylum Platelmintos
Clase Tremtodos
Subclase Digeneos
Orden Prosostomas
Strigeata
Suborden Amphistoma
Distoma
SUBORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE
S.haematobium
Strigeata Schitosomatidae Schitosoma S.mansoni
S.japonicum
S.intercatalum
Amphistoma Paramphistomatidae Gasrtodiscoides G. hominis
Watsonius W. watsoni
F. heptica
Fasciolidae Fasciola
F. gigantica
Fasciolopsis
F. buski
Clonorchis C.sinesis
Distoma Opisthorchidae Opisthorchis O.felineus
O. viverrini
Heterophyidae Heterophyes H.heterophyes
Metagonimus M. yokogawai
Troglotrematidae Paragonimus P. westermani
Tabla 25. Clasificacin de Nemtodos
4. Nemtodos
SUBCLASE ORDEN SUPERFAMILIA GENERO
Adenophorea Trichinella
(anteriormente Enplidos Trichinelloidea Trichuris
afasmdeos) Capillaria
Secernentea Strongyloides
Rabdticos Rhabditoidea
(anteriormente Ancylostoma
Estrogilinos Ancylotosmatoidea
fasmdeos) Necator
MANABI
SALUD. MEDICINA
Ternidens
Metastrongyloidea Angiostrongylus
Metastrongylus
Trichostrongyloidea Tricostrongylus
Ascaris
Ascaridos Ascaridoidea Toxocara
Anisakis
Lagochilascaris
Enterobius
Gongylonema
Thelazia
Oxyuroidea
Spiruroidea Gnathostoma
Oxiuroideos Wuchereria
Thelazoidea
Espirridos Brugia
Gnathostomatoidea
Onchocerca
Filarioidea Dipetalonema
Mansonella
Dirofilaria
Dracunculoidea Dracunculus
EXAMEN DIRECTO MACRSCOPICO

Fundamento
Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los
parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las
caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (color, presencia de
sangre y/o moco, consistencia, etc.).
MATERIALES
Aplicador (baja lengua).
Pinza de metal.
Coladera de plstico o malla metlica.
MEDIOS Y REACTIVOS
Suero fisiolgico.
PROCEDIMIENTOS
Agregar suero fisiolgico/Lugol en cantidad suficiente para homogeneizar
la muestra.
En caso de presencia de parsitos adultos, tamizar o colar la muestra.
EXAMEN DIRECTO MICRSCOPICO
Fundamento
Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas
evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico: (trofozotos, quistes
de protozoos: Entamoebahistolytica, Giardialamblia, Balantidiumcoli, etc.; as
como larvas o huevos de helmintos: Strongyloidesstercoralis,
Ancylostomaduodenalis, Necatoramericanus, Trichostrongylusspp.,
Paragonimus, Fasciola, etc.).
MATERIALES Equipo: Microscopio ptico

Lminas portaobjetos. Mascarilla
Laminillas cubreobjetos. Guantes
Aplicador de vidrio o madera.
Marcador de vidrio.
MEDIOS Y REACTIVOS
Suero fisiolgico.
Solucin de lugol.
Verde brillante.
Rojo neutro.
PROCEDIMIENTO
6. Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de suero
fisiolgico y, con ayuda de un aplicador, agregar 1 a 2 mg de materia
fecal, emulsionarla y cubrirla con una laminilla cubreobjetos.
7. Colocar en el otro extremo de la lmina portaobjeto, una gota de lugol y
proceder a la aplicacin de la muestra fecal.
8. Con el suero fisiolgico, los trofozotos y quistes de los protozoarios se
observan en forma natural, y con lugol, las estructuras internas, ncleos y
vacuolas.
9. En algunos casos, se recomienda el uso de colorantes vitales, debido a
que no alteran la actividad del trofozoto. Los ms usados son verde
brillante 0,2% y rojo neutro 0,01%.
10. Observar al microscopio a 10X 40X. No es aconsejable usar objetivo
de inmersin (100X), pues se puede ensuciar el microscopio.
GRFICOS
ESCUELA
MEDICINA
Quiste de Giardialamblia con solucin lugol

PROCEDIMIENTOS
Agregar suero fisiolgico/Lugol en cantidad suficiente para
homogeneizar la muestra.
En caso de presencia de parsitos adultos, tamizar o colar la
muestra.
GRFICOS
Bibliografa.
1. WorldHealthOrganization. (2005). Manual de bioseguridad en el
laboratorio. Captulo IX. Bioproteccin en el Laboratorio, Tercera Ed., Pg.
49:51. Malta, Italia: WorldHealthOrganization.
2. Rodrguez Cavallini, E. (2005). Bacteriologa General: Principios Y Prcticas
de Laboratorio. Seccin I. Bioseguridad en el Laboratorio. Niveles de
Bioseguridad, Pgs. 1:7. Editorial Universidad de Costa Rica.
3. WorldHealthOrganization. (2005). Manual de bioseguridad en el
laboratorio. Captulo XI. Equipo de Bioseguridad, Pgs. 66-72. Malta, Italia:
WorldHealthOrganization.
4. Garca Saavedra, M., & Vicente Garca, J. (2003). Ciencias de la Salud:
Tcnicas de descontaminacin: limpieza, desinfeccin, esterilizacin.
Bloque temtico II. Prevencin de la contaminacin debido al material.,
7ma Ed, 85:110. Paraninfo.
5. Organizacin Panamericana de la Salud (OMP). (2008). Manual de
esterilizacin para centros de salud. reas fsicas y personal central de
esterilizacin. Equipo de proteccin personal. Lavado de Manos. Limpieza
del material. Preparacin y empaque del material. Normas bsicas para la
desinfeccin y esterilizacin. Desinfeccin, 3:60. Washington, Estados
Unidos: Organizacin Panamericana de la Salud.
6. Tortora, G. J., Berdel, R., & Case, C. (2007). Introduccin a la microbiologa.
Captulo VII. Control de crecimiento bacteriano., 7ma Ed, 187-2013.
Argentina: Mdica Panamericana.
7. Instituto Qumico Biolgico (IQB). (s.f.). Sedimento de Orina. Recuperado el
11 de Mayo de 2014, de
http://www.iqb.es/monografia/fichas/orina/orina.htm
8. Medicina ABC. (8 de Noviembre de 2011). El Anlisis de Orina. Recuperado
el 11 de Mayo de 2014, de Introduccin al Sistema Urinario:
http://www.medicinabc.com/2012/11/el-analisis-de-la-
orina.html#axzz31T6xDEin
9. Monografas. (s.f.). Control de la Calidad en el Uroanlisis.
10. Recuperado el 11 de Mayo de 2014, de Introduccin al sistema urinario:
http://www.monografias.com/trabajos5/uroanalisis/uroanalisis.shtml
11. Qumica y algo ms. Un Blog de Qumica y otras Ciencias. (22 de Junio
de 2013). Recuperado el 11 de Mayo de 2014, de Anlisis y Generalidades
de Urianlisis/Orina: http://www.quimicayalgomas.com/salud/analisis-de-
orina/
12. Tener Salud. (1 de Febrero de 2008). Tener Salud. Recuperado el 5 de
Mayo de 2014, de Qu son los Colorantes?:
http://www.tenersalud.com/2008/02/01/colorantes/
13. Wikipedia. (11 de Marzo de 2014). Colorantes. Recuperado el 5 de
Mayo de 2014, de
http://es.wikipedia.org/wiki/Colorantes.yhttps://nefrologia.humv.es/Hernan
doII/nefro/ch1 0.htm
14. Diagnstico Microbiolgico. (2009). Procedimiento y Observacin de la
Tincin de Gram, 12va Ed, 81. Argentina: Mdica Panamericana.
15. P. Garca, M., Fernndez del barrio, M., & Paredes Salido, F. (1997).
Microbiologa Mdica Aplicada. Tincin de Gram, 3era Ed, 23:24. Madrid,
Espaa: Daz de Santo.
16. Vavallini Rodrguez, E., Gambao Coronado, M., & Hernndez Chavarra,
F. (2005). Bacteriologa General. Principios y prctica de laboratorio.
Tincin de Gram, 64:65. Universidad de Costa Rica.
17. Bios. (22 de Agosto de 2007). Recuperado el 29 de Mayo de 2014, de
Manejo del Microscopio: http://benitobios.blogspot.com/2007/08/manejo-
del-microscopio.html
18. Normas para el uso correcto del microscopio ptico.(s.f.).Recuperado el
29 de Mayo de 2014
http://materias.df.uba.ar/2fbygAa2013/files/2012/07/gu
%C3%ADa7_labo_microscop%C3% ADa_avanzada.pdf
19. Scribd. (6 de Junio de 2011). Recuperado el 29 de Mayo de 2014, de
Manual Prctico de Microbiologa:
http://es.scribd.com/doc/57234084/Manual-Practico-de-Microbiologia-I
20. Rodrguez Cavallini, E. (2005). Bacteriologa General: Principios Y
Prcticas de Laboratorio. Seccin III. Observacin Microscpica de
Bacterias, 49-52. Universidad de Costa Rica.
21. De la Rosa Fraile, M., Prieto, J., & Navarro Mar, J. (2011). Microbiologa
en ciencias de la salud: conceptos y aplicaciones. Captulo 2. La clula
bacteriana, 9:14. Elsevier.
22. Stanier, R. Y., Ingraham, J. L., Wheelis, M., & Painter, P. (1992).
Microbiologa. Captulo 3. Naturaleza del Mundo Microbiano, 46-49.
Espaa: Revert.
23. Espinal, G. (2005). Manual de prcticas de microbiologa I. Medios de
cultivo y medios de siembra, 1era Ed., Pg. 20. Editorial INTEC.
24. Bioseguridad en laboratorio II, V Congreso Argentino de
Virologa.Federacin Bioqumica de la Provincia de Buenos Aires. Acta
BioqumicaClnica Latinoamericana, Suplemento N1, 1990.
25. Bioseguridad en laboratorio. V Congreso Argentino de
Microbiologa.Federacin Bioqumica de la Provincia de Buenos Aires. Acta
BioqumicaClnica Latinoamericana. Suplemento N 4, 1988.
26. Brock, Biologa de los Microorganismos. Madigan, Michael T.,
MartinkoGohar M. y Parker Jack. Ed. Pretice Hall. 8 edicin. 1998.
27. Enciclopedia Encarta, 2005.
28. Manual de Bioseguridad en Laboratorio. Organizacin Mundial de la
Salud.1983.
29. Manual de Bioseguridad para Tcnicos de Laboratorio. Celia E. Coto y
col.Publicacin de la Asociacin Argentina de Microbiologa, 1992
30. Manual de Laboratorio, Microbiologa Mdica Aplicada. Universidad
AutonomaMexico.Web-
site:http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia
31. Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, y col. 2 a edicin. Ed.
Masson,Barcelona, 1999
32. Recomendaciones sobre seguridad y bioseguridad para el
laboratorioclnico y hospitalario. Nidia Lucero, Comisin de Bioseguridad
de laAsociacin Argentina de Microbiologa, marzo 1994.
33. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.
AmericanPublic Health Association, Washington, U.S.A. 1995.
34. Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Introduccin a la
microbiologa. Aplicaciones de la Microbiologa. Medios de Cultivo., 9na
ed., 168; 169. Buenos Aires, Argentina: Editorial Mdica Panamericana.
35. Garca Martos, P., Paredes Salido, F., & Fernndez del Barrio, M. (1994).
Microbiologa
clnica prctica. Captulo III. Medios de Cultivo, 2da Ed, Pg. 51. Editorial
Servicio Publicaciones UCA.
36. Procedimientos microbiolgicos hemocultivos, coprocultivos. Objetivos
en prcticas de
laboratorio.http://procedimientosmicrobiologicos.wikispaces.com/COPR
OCULTIVO
37. Seleccin de pruebas bioqumicas para la identificacin de
microorganismos. Prof. Wilson Infante. 2009. Universidad Central de
Venezuela. Ciudad Universitaria, Los Chaguaramos. Caracas, Venezuela.
http://www.ucv.ve/organizacion/facultades/facultad-de-
farmacia/programas-academicos/pregrado/catedras/catedra-de-
microbiologia/material-de-apoyo/seleccion-de-pruebas-bioquimicas.html
38. Toma de muestra y diagnostico

microbiolgico.
http://microbiologiaseminario4.blogspo
t.com/
39. Procedimientos en Microbiologa Clnica. Recomendaciones de la
Sociedad Espaola de Enfermedades. Infecciosas y Microbiologa
Clnica. Editores: Emilia Cercenado y Rafael Cantn.
40. Generalidades de los metazoos parsitos. Alberto Maceday
Irene Gonzales. www.alaquairum.com. 2003-2013.

Dr. Antonio-Manual Practico de Micro 2016-17

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