Discusin.

Cuando en una fermentacin se producen varios productos finales la bacteria dispone de

diferentes alternativas para reoxidar del NADH, no existe a priori una estequiometria
definida. En cada caso concreto, segn sea la bacteria y las condiciones de cultivo, puede
cuantificarse tanto el consumo de glucosa (u otro sustrato) como la produccin de
productos finales I.

Las levaduras como microorganismos quimiohetertrofos, necesitan compuestos

orgnicos como fuentes de carbono y energa (FCE). Los glcidos, principalmente las
hexosas, son los compuestos ms utilizados como FCE tanto para el metabolismo
aerbico como anaerbico VIII.

Saccharomyces cerevisiae es un microorganismos muy utilizado en la microbiologa

industrial, en la produccin de pan, grasas glicerina y la ms importante la de bebidas
fermentadas I. En las levaduras, bajo condiciones anaerbicas el NAD+ se regenera por
medio de la fermentacin alcohlica: la conversin del piruvato en etanol y CO 2. Mediante
dos reacciones consecutivas catalizada por dos enzimas III (ilustracin 2). Por cada mol de
glucosa que entra en la va Embden Meyerhof Parnas se producir 2 moles de piruvato,
los cuales al incorporase al metabolismo fermentativo (fermentacin alcohlica), se
producir 2 moles de dixido de carbono y 2 moles de etanol. Esto es muy importante
que sea tomado en cuanta en el momento de elaborar un balance de fermentacin IX.

Ilustracin 1. Reacciones llevadas a cabo en

fermentacin alcohlica.
Por lo anterior podemos decir que S. cereviciae, en condiciones de anaerobiosis, por
cada mol de glucosa produce 1 mol de Dixido de carbono y 1 mol de etanol, por esta
razn nuestros clculos dependen de muchos factores, tales como el mtodo y los errores
cometidos durante su ejecucin.

Saccharomyces cerevisiae, Zymomonas mobilis (fermentacin del pulque) y otras

levaduras como Leuconostoc descomponen la glucosa para producir etanol, reoxidando
NADH aunque cabe mencionar que la estequiometria vara dependiendo el
microorganismo, pues tericamente no tienen la misma relacin de productos oxidados y
reducidos y en la prctica estos pueden variar an ms.

La fermentacin alcohlica es un proceso muy complejo; el incremento de la

concentracin de etanol a medida que transcurre la fermentacin supone un obstculo
para el correcto crecimiento y desarrollo de la levadura por los efectos negativos que
esto conlleva. El etanol afecta la permeabilidad de la membrana celular disminuyendo su

1
selectividad, de forma que las levaduras en un medio con alta concentracin alcohlica
pierden propiedades funcionales y no pueden retener cofactores y coenzimas VIII. Una
diferencia importante entre las levaduras silvestres y las levaduras de vino cultivadas es
su tolerancia al etanol. La mayor parte de las levaduras silvestres pueden tolerar
solamente alrededor de un 4 % v/v de etanol; cuando la concentracin de alcohol llega a
este punto, la fermentacin se detiene.X

Los balances de fermentacin son esenciales para su aplicacin en la industria, el

principal objetivo del anlisis de las fermentaciones es el de dirigir tanto carbono como
sea posible desde un sustrato hacia un producto metablico de importancia industrial, y
obtener el mximo rendimiento posible. VIII

Ahora bien en la prctica se realizo un microensayo de una fermentacin alcohlica, una

de las fermentaciones que solo tiene dos productos metablicos: el etanol y el dixido de
carbono. Los cuales se les determin su concentracin por los mtodos de Conway y
gravimtrico, respectivamente, para conocer el % de carbono recuperado en el proceso
fermentativo, as como tambin se determin la concentracin de glucosa fermentada.
Estos mtodos pueden presentar interferencias que afectan los balances de
fermentacin.

El mtodo de Conway, como ya hemos mencionado, se basa en la oxidacin del alcohol

por accin de una solucin de dicromato de potasio en medio cido por cido sulfrico. El
alcohol es oxidado cuantitativamente a cido actico y el dicromato es reducido a cromo
trivalente, de acuerdo con la siguiente reaccin.

2 K2Cr2O7 +8 H2SO4 + 3 CH3CH2OH 2 K2SO4 + 2 CH3CHOO + 2 Cr2(SO4)3 + 11 H2O

En cuanto a la manera en que fue llevado a cabo el experimento, podemos decir que fue
adecuada, ya que se estuvo al tanto de que no se mezclaran el contenido de la cmara
central (K2Cr2O7), con el contenido de la cmara externa (H 2SO4 y K2CO3) y se procur
recuperar la mayor cantidad posible de K2Cr2O7.

El rendimiento terico estequiomtrico para la transformacin de glucosa en etanol es de

0.511 g de etanol y 0.489 g de CO 2 por 1g de glucosa XI. Nosotros obtuvimos una
recuperacin de ____ mmol de Etanol que correspondera a ____% del total, tomando
como base 2 mmol de Etanol. Por lo que podemos decir que nuestro rendimiento fue
bueno.

Este mtodo es apropiado para la determinacin de glucosa en diversos jugos y nctares

de fruta (naranja, durazno, tomate) y de verduras (zanahoria), como tambin en vinos y
mieles. Dada la especificidad de la glucosadehidrogenasa frente a la glucosa, no
reacciona con la fructosa, ni la sacarosa. Se eliminara la incubacin a ebullicin ya que
la incubacin es a temperatura ambiente y el tiempo de incubacin ya que son 5 mim
adems de poder trabajas con alcuotas pequeas. VIII

La ventaja del mtodo de Conway, es que el material y el equipo que se utiliza para la
determinacin es ms accesible, aunque tambin presenta una fuerte desventaja, ya que
es relativamente inespecfico, ya que otros alcoholes, cetonas y aldehdos reducen el
dicromato, as como tambin existe la posibilidad de la descomposicin del dicromato por
2
 exposicin a la luz y considerando que es un mtodo indirecto de oxido reduccin
colorimtrico y depende del complejo colorido que se forma por la reaccin del dicromato
con el etanol, ste no es muy estable, con lo que se pierde la intensidad del color y el
complejo colorido no tiene la misma absorcin por lo que produce una seal distinta a la
inicial y existe prdida.

Otra situacin a considerar por prdida es que el etanol presenta una elevada presin de
vapor, en donde es parcialmente miscible y la presin atmosfrica es relativamente baja.
Otras formas para determinar etanol son:

Cromatografa de gases

Micro difusin

Determinacin por picnmetro

Determinacin enzimtica (Alcohol Deshidrogenasa)

Titulacin

Si bien los mtodos sugeridos requieren del tratamiento previo el que podra presentar
mayores inconvenientes sera la determinacin por medio de una titulacin, ya que
presenta interferencias en el mtodo, al no ser especfico para un sola especie qumica
y en general para un cambio de vire solo depende el pH.

Asimismo, la relacin de productos oxidados entre productos reducidos es de 0.276

(donde el producto oxidado es CO2 y el reducido es el CH3CH2OH), lo que significa que
existe mayor cantidad de productos reducidos que de oxidados y a sabiendas de que
para determinar la cantidad de CO2 se realiz por un mtodo gravimtrico, podemos
pensar que de entrada, el CO2 no se captur totalmente en el NaOH acuoso y por
consiguiente en los lavados no se encontrara el CO 2 en su totalidad, tambin podemos
considerar como una prdida con slo destapar el matraz microfermentador ya que el
gas contenido en este es CO2. Sabiendo que se trata de un mtodo gravimtrico, tambin
se puede considerar que hay prdidas al momento de realizar los lavados, ya que
pudieran quedar trazas de BaCO3 en el matraz y obviamente estas no son cuantificadas.

Viendo las anteriores situaciones podemos considerar que la relacin entre la cantidad de
productos oxidados y reducidos (O/R) no es cercana a uno debido a que durante las
determinaciones para cada producto, pudieron haber tenido prdidas de producto en la
determinacin de la relacin, y podemos corroborarlo con nuestro por ciento de carbono
recuperado.

Notamos que la cantidad de carbono recuperado en funcin de la glucosa suministrada a

Saccharomyces cerevisiae, existe un rendimiento del ___ %, cuando las prdidas de CO 2
permitidas estn en un intervalo del 87-95%. Por lo que en cuanto a recuperacin de CO 2
podemos decir que fue deficiente.

Tomando en cuenta, la citas bibliogrficas y los antecedentes, podemos dar anlisis de la

prdida de producto que existi o que delimit la cuantificacin total de los productos en
3
 medida de la glucosa que se aadi para obtener etanol y dixido de carbono y deducir
que las variaciones presentadas por la relacin de los productos oxidados y reducidos se
debi meramente a errores aleatorios tanto del mtodo como de los analistas, sabiendo
que Saccharomyces cerevisiae se encontraba en las condiciones ptimas para llevar a
cabo la fermentacin.

Conclusiones.

El ndice O/R fue de un valor de ____ donde el producto oxidado es CO2 y el

reducido es el CH3CH2OH por lo que no se llev a cabo un flujo de carbonos
correspondiente nicamente a la fermentacin alcohlica.
La recuperacin de CO2 fue deficiente al tener un rendimiento de ____% con
respecto a los intervalos establecidos de 87-95%
Los errores en la fermentacin representados en el balance de fermentacin
pudieron verse en su mayora por errores de los analistas al formarse ms
producto reducido durante la fermentacin.
La fermentacin por Saccharomyces cerevisiae debido al anlisis de sus productos
fue una fermentacin alcohlica.
Para un mejor balance de fermentacin para la cepa utilizada S. cerevisiae es
necesario utilizar equipos para evitar su prdida de gas y un equipo que se
encuentre estable para su ptimo manejo.

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