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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA

MODELAGEM, SIMULAO E CONTROLE DE BIOPROCESSOS

UMA ABORDAGEM INTRODUTRIA

CURITIBA, FEVEREIRO DE 2006

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA

MODELAGEM, SIMULAO E CONTROLE DE BIOPROCESSOS

UMA ABORDAGEM INTRODUTRIA

Nmero do BANPESQ/THALES: 2004014247

Orientador: Prof. Dr. Luiz Augusto da Cruz Meleiro DEQ/UFPR

Bolsista: Tarcila Bueno Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
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MODELAGEM, SIMULAO E CONTROLE DE BIOPROCESSOS
UMA ABORDAGEM INTRODUTRIA

1. RESUMO

O presente relatrio apresenta os resultados finais do projeto de pesquisa em modelagem

e simulao de bioprocessos. De acordo com o cronograma proposto para este projeto de
pesquisa, as atividades realizadas at o momento consistiram da reviso bibliogrfica referente
fase inicial do projeto, estudo das principais caractersticas, formulao e seleo de modelos
matemticos adequados para descrever o comportamento de bioprocessos e o estudo da
linguagem de programao cientfica FORTRAN. Alm disso, foram realizadas algumas
simulaes computacionais de operao industrial para avaliao da dinmica de processos
fermentativos considerando alguns dos tipos de reatores industriais mais utilizados para este fim,
sendo tambm proposta uma estratgia de controle automtico para o bioprocesso A-B-E
operando em regime de batelada alimentada e contnuo.

2. OBJETIVOS

O principal objetivo deste projeto realizar um estudo sobre a modelagem matemtica, a

simulao computacional e o controle automtico de bioprocessos. Este trabalho serviu de base
para futuros projetos de pesquisa visando o desenvolvimento de modelos matemticos mais
sofisticados, de tcnicas de identificao de parmetros on-line e off-line e de estratgias de
controle avanado para bioprocessos.

3. INTRODUO

A pesquisa em modelagem matemtica reportada na literatura tcnica especializada refere-

se basicamente s reaes que ocorrem no interior da clula. Dessa forma, a modelagem
matemtica de processos fermentativos pode ser definida como a tentativa de representar,
atravs de equaes matemticas, os balanos de massa para cada componente do biorreator
associados s complexas transformaes bioqumicas que ocorrem nos processos e s
velocidades com que estas reaes se processam. A formulao de um modelo matemtico deve,
segundo alguns autores, possuir um comprometimento entre o grau de complexidade razovel e
soluo (esforo computacional) economicamente desejvel. Por sua vez, a simulao do
processo corresponde a sua anlise (por exemplo, sua otimizao), atravs do modelo
matemtico proposto (BORZANI et al., 2001).
A exigncia bsica para se avaliar o comportamento dinmico de um processo qumico a
disponibilidade de um modelo matemtico que descreva como os estados (variveis de interesse)
do processo variam com o tempo. Dado um conjunto de dados de entrada, um modelo pode ser
utilizado para predizer a sada (ou resposta) de um processo. O desenvolvimento da modelagem
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matemtica dos processos fermentativos permite atingir entre outros, os seguintes objetivos:
organizar informaes desconexas a respeito dos fenmenos biolgicos num conjunto coerente;
pensar (e calcular) logicamente a respeito de quais componentes e interaes so importantes
num sistema complexo; descobrir novas estratgias para explicar o comportamento das clulas
submetidas a determinados ambientes; corrigir falhas eventualmente existentes no entendimento
convencionadas de determinados fenmenos e, finalmente, entender as caractersticas
qualitativamente essenciais de determinados processos (BORZANI et al., 2001).
Um dos objetivos da modelagem matemtica e simulao, como ferramenta do
desenvolvimento tecnolgico de processos fermentativos, prever o comportamento dinmico e
estacionrio do processo, inclusive em condies no testadas empiricamente, possibilitando a
determinao das condies operacionais economicamente timas do sistema, auxiliando no
projeto e ajuste de algoritmos de controle, no qual o modelo matemtico formulado passa a ser
parte integrante do mesmo (BORZANI et al., 2001).
Na formulao de modelos matemticos que representem adequadamente os processos
fermentativos, muitas dificuldades so encontradas devido necessidade de incorporar uma srie
de caractersticas que os diferenciam dos processos qumicos convencionais. Entre estas
caractersticas, podem ser citadas as seguintes: baixas concentraes e baixas velocidades de
reao, como resultado da utilizao de um meio diludo; complexidade da mistura reagente e
capacidade do sistema (clulas microbianas) de sintetizar seu prprio catalisador; conhecimento
insuficiente de vrios fenmenos limitantes da velocidade de produo e falta de sensores para
automao on line; problemas de esterilidade, segurana e eventualmente da toxicidade dos
processos fermentativos (BORZANI et al., 2001).
No controle de bioprocessos, observa-se que h diferenas no controle comparado
indstria de snteses qumicas em muitos aspectos que afetam a sua instrumentao, tanto
negativa quanto positivamente. Um aspecto em que os bioprocessos so considerados mais
fceis de controlar que eles so mais estveis, e a maioria das variveis mais importantes tende
a sofrer alteraes lentamente com o tempo na ausncia de falhas nos equipamentos. Um
problema significante com os bioprocessos, entretanto, que uma vez que a populao de clulas
tenha morrido, o processo est perdido sem possibilidade de recuperao, e o rendimento do
produto at aquele ponto pode ser inaceitvel. Isso pode significar uma perda substancial de
tempo e dinheiro. Um outro aspecto em que os bioprocessos apresentam problemas em relao
instrumentao, que eles devem ser absolutamente estreis, e o ambiente estabelecido para a
produo de uma desejada linhagem celular pode tambm permitir o crescimento de clulas
indesejveis. Desta forma, todos os sensores de medida das variveis do bioprocesso devem ser
instalados e mantidos de modo a permitir a esterilidade do processo.
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4. REVISO BIBLIOGRFICA

4.1 Estudo e Formulao dos Modelos Matemticos de Processos Fermentativos

Inicialmente deve-se reconhecer que num processo fermentativo, esto envolvidos dois
sistemas que interagem continuamente: a fase biolgica composta pela populao microbiana ou
pela cultura de clulas animais ou vegetais e a fase ambiental ou o meio de cultura, como
comumente conhecido e que contm substratos e produtos do processo (BORZANI et al., 2001).
Idealmente a modelagem de uma fermentao deveria predizer o resultado de milhares de
transformaes qumicas que ocorrem pela ao de uma populao microbiana, ou de uma
cultura de clulas animais ou vegetais. Sem dvida, uma descrio completa de todas as vias e
interaes metablicas pertinentes ao desenvolvimento microbiano seria extremamente complexa,
ou mesmo impossvel. Felizmente, sabe-se que, ao menos na rea de cincias exatas, muitos
problemas podem ser estudados usando uma medida das vrias propriedades das diversas
entidades em questo. Nesse sentido importante lembrar que o modelo ainda pode ser vlido se
somente um nmero limitado de mecanismos governantes so considerados em detalhe. Portanto
na elaborao da modelagem de processos fermentativos, geralmente so introduzidas
simplificaes de maneira a se obter modelos possveis de serem manuseados e generalizados
(BORZANI et al., 2001).

Classificao dos Modelos Matemticos Utilizados em Processos Fermentativos

Modelos Fenomenolgicos: baseiam-se na formulao de hipteses e correlaes

tericas ou empricas para explicar os fenmenos e o comportamento das variveis do processo
observados experimentalmente. Os modelos fenomenolgicos so baseados nas leis de
conservao de massa e energia, nos fenmenos de transporte e nas relaes fsico-qumicas,
cinticas e termodinmicas (BORZANI et al., 2001).

Modelos Entrada e Sada (ou empricos): estabelecem relaes empricas para

correlacionar o efeito de variaes nas variveis de entrada ou manipulveis: (caso, por exemplo,
das concentraes iniciais em sistemas operados em batelada ou das concentraes de vazes
de alimentao dos sistemas operados em forma contnua) nos valores das variveis de sada ou
medidas do processo (caso do perfil de concentraes possveis de serem medidas no interior do
biorreator, ou no seu efluente ao longo do tempo), (BORZANI et al., 2001).

Equaes de Balano

As equaes de balano do processo devem ser formuladas para cada varivel de estado e
para o volume de controle do sistema em estudo. Para os processos fermentativos realizados em
biorreatores homogneos, o volume de controle corresponde ao prprio volume til do biorreator.
A equao geral de balano apresenta-se como:
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Termos de entrada:
Fluxo global atravs das fronteiras geomtricas do sistema
Difuso atravs da fronteiras geomtricas do sistema (importante apenas para biorreatores
heterogneos, onde os volumes de controle so infinitesimais);
Transporte atravs das fronteiras entre as fases (caso do transporte de oxignio da fase
gasosa para a fase lquida);
Gerao dentro do volume de controle (geralmente crescimento celular e produo de
produtos metablicos).

Termos de sada :
Fluxo global atravs das fronteiras geomtricas do sistema;
Difuso atravs das fronteiras geomtricas do sistema;
Transporte atravs das fronteiras entre as fases;
Consumo dentro do volume de controle (geralmente morte celular ou consumo de substratos)

Estudo da Cintica de um Processo Simples

O processo de criao de um modelo matemtico de fermentao comea usualmente de
um esquema simplificado de reaes derivadas do conhecimento das vias metablicas
envolvidas. Quando se compe o modelo matemtico, taxas de reao so usualmente
aproximadas pelo uso de uma das relaes derivadas da teoria das reaes qumicas ou
enzimticas. A tabela abaixo resume as relaes empregadas utilizadas com mais freqncia para
a descrio apropriada da dinmica de sub-sistemas metablicos individuais (VOLESKI e
VOTRUBA ,1992).

Tabela 1: Sumrio das taxas mais freqentes usadas para expressar uma cintica simples
no modelo de simulao de processos fermentativos.
r1 = kS

r2 = kS n
kS
r3 =
K+S
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kS n
r4 =
K + Sn
r5 = k [1 exp( S / K )]

r6 = k exp( S / K )
kK
r7 =
K+S
kK
r8 =
K + Sn

O esclarecimento da funo e o significado fsico-qumico dos modelos das taxas de

reaes matemticas individuais listados na Tabela 1 so apresentados a seguir (VOLESKI e
VOTRUBA, 1992):

Taxa de reao do tipo r1: caracterizada pela relao linear entre a taxa de fenmeno e a
concentrao do substrato de reao. A reao caracterizada por este tipo de taxa de reao
basicamente controlada por difuso. A relao linear entre as taxas de sub-processos e a
concentrao de substrato no tpica para os processos biolgicos porque todas as taxas de
reao catalisadas enzimaticamente so usualmente baixadas do que a taxa de difuso a qual
deste modo no se tornaria a taxa de controle dos parmetros. Relaes lineares entre a taxa de
reao e a concentrao de substrato, entretanto so tpicas pelo declnio de processos dentro da
clula, e pela influncia de substncias atpicas na clula.

Taxa de reao do tipo r2: derivada da adsoro isotrmica de Freundlich e tpica para
processos controlados por adsoro fsica sobre superfcies slidas ou sobre estruturas. Este
fenmeno caracterizado em sua maioria por reaes hidrolticas. A cintica deste tipo pode ser
aplicada na modelagem de processos envolvendo a utilizao de substratos slidos como
celulose, amido, entre outros.

Taxa de reao do tipo r3: uma das muitas frmulas tpicas utilizadas para a modelagem de
processos fermentativos porque representa a taxa de mudana de fenmenos controlados por
quimiosoro do substrato sobre o stio ativo assim como sobre a molcula da enzima. O valor da
constante k representa a velocidade mxima com a qual o subsistema pode participar em todo o
processo.

Taxa de reao do tipo r4: a modificao dos casos anteriores de quimiosoro onde h mais
de um stio ativo presente em cada molcula biocataltica. A cintica deste tipo til para
descrever as dinmicas de mecanismos de reaes em complexos multienzimticos, em
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organelas especializadas ou, assim como a reviso de Harder and Roels, quando se modela a
sntese de enzimas catablicas, as quais so controladas pela taxa da sntese de RNAm em torna
da dependncia da quimiosoro da protena CA e da cAMP no stio do promotor do DNA
cromossomal. O uso deste mtodo para descrever as taxas de reao de um subprocesso,
entretanto, no muito freqente na modelagem prtica porque a equao resultante contm
parmetros difceis de identificar e tambm porque o comportamento sigmoidal dos sub-sistemas
chave na biossntese no muito usual. Os clculos da simulao dos processos subseqentes
podem ser significativamente diminudos quando este tipo de modelo com parmetros de nmeros
no integrais n so usados, porque a expresso numrica da quantificao Sn finalizada pelo
uso dobrado de sries que expressam numericamente o exponencial e o logaritmo.

Taxa de reao do tipo r5: um tipo um tanto incomum de taxa de reao sugerida para
descrever o processo dinmico. Esta taxa baseada na pura interpretao fsica derivada das
equaes de movimento num ponto de massa cercado caracterizado pela dissipao de foras. A
fora exercida pelo ponto da unidade de massa contra a resistncia aos seus arredores
expressa pela equao bsica = . 2
Substitui-se a velocidade definida no espao de estado pela concentrao onde:
dD dP
v=r= = (1)
dt dt
e seguindo o rearranjo da equao original onde o tempo eliminado, a equao modificada pode
ser resolvida pelas condies vinculadas a trajetria onde: (S = 0 ,r = 0 ) e (S >> 0; r = k )
O uso da cintica tipo r5 no to freqente na composio de um modelo matemtico
para simulao de processos. Isto poderia ser usado, entretanto, para a descrio de taxas de
sub-processos com considerao limites internos de reao do sistema, assim como neste caso,
por exemplo, na reao de modelagem concernente a incorporao de elementos ou fosfatos em
vrias estruturas celulares ou na parede celular.

Taxa de reao do tipo r6: derivado de uma hiptese fsica similar assim como o modelo
cintico acima. A substncia com concentrao S, entretanto, considerada diretamente
participante na dissipao da energia cintica durante o curso da reao. A relao para
dissipao de energia cintica, entretanto, resolvida por diferentes condies vinculadas na
trajetria metablica (S = 0; r = k ) . O uso prtico desta equao na simulao da reao de
reduo de atividade (slow-down - reao de ordem zero) e, conseqentemente, para expressar
alguma realimentao no processo. Este tipo particular de cintica, similarmente r5, no
extensivamente usado na prtica. A interpretao fsica pode ser, quando comparada ao modelo
de inibio derivada da cintica enzimtica, um tanto quanto incerta.
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Taxa de reao do tipo r7: Este tipo baseado no princpio do impedimento reversvel hipottico
do stio ativo de reao por quimiosoro da substncia de concentrao S. Esta substncia
bloqueia a atividade enzimtica e causa um efeito demonstrado por inibio negativa. Modelos
deste tipo de taxa podem ser usados em modelos de simulao de processos em termos capazes
de realizar um realimentao negativa no esquema metablico do processo.

Taxa de reao do tipo r8: uma variao da taxa acima (r6) derivada da inibio de um grande
nmero de stios ativos de reao de um processo bioqumico. Uma vantagem desta abordagem,
que usa altos valores para o expoente n, a possibilidade da simulao de um sub-sistema
metablico quando a concentrao da substncia S excede um certo valor final. Isto feito
atravs de uma funo do tipo sigmoidal. A identificao e os problemas computacionais
associados a este tipo de cintica so similares queles com a taxa tipo r4 descrita acima.
Quando se constri um modelo matemtico de processos fermentativos, o uso de uma
simples relao de taxa listada na Tabela 1 pode cobrir o necessrio para muitos casos
relacionados ao primeiro e segundo nvel do sistema hierrquico. Freqentemente, usa-se
combinaes destas relaes de taxa baseados na superposio de vrios fenmenos simples
fornecidos no sub-sistema. O mtodo da superposio depende de relaes recprocas entre os
sub-sistemas. Freqentemente, a adio ou multiplicao do produto usada dependendo se
existe um efeito seqencial ou alternativo de acordo com as seguintes relaes:

n
r = ri (2)
i =1

n
r = ri (3)
i =1

4.2 Identificao de Modelos Matemticos

A formulao de um modelo matemtico de processos fermentativos, do ponto de vista da

anlise dos sistemas, usualmente realizada em trs estgios (VOLESKI e VOTRUBA, 1992):

1. Anlise qualitativa da estrutura do sistema, usualmente baseada no conhecimento das vias

metablicas e da biognese do produto desejado;
2. Formulao do modelo em uma forma matemtica geral. Este estgio s vezes chamado
de sntese da estrutura do operacional do processo.
3. Identificao e determinao dos valores das constantes do modelo e/ou parmetros que so
baseados em experimentos ou dados de outras operaes de um processo real.
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4.3 Controle operacional do processo

No controle de um bioprocesso, sensores (temperatura, presso, pH, oxignio dissolvido,

nvel) acoplados ao biorrreator transmitem um sinal pneumtico ou eltrico calibrado de acordo
com uma escala da varivel para um indicador, registrador ou controlador. Estes indicadores,
registradores e controladores podem ser constitudos de unidades individuais, unidades
combinadas que realizam estas trs funes para uma ou mais variveis ou sistemas complexos
de controle distribudo com capacidade praticamente ilimitada. Como o prprio termo implica, os
indicadores simplesmente medem as variveis ou um valor em escala definidas, os registradores
realizam uma cpia dos valores, alm de indic-los, e os controladores comparam o valor da
varivel medida com o valor desejado, o set point, computam o erro, e calculam uma resposta
baseada no algoritmo do controlador. A resposta do controlador geralmente transmitida a um
elemento controlador final: o sinal geralmente atua sobre uma vlvula de controle, mas ele pode
ser uma entrada para um controlador de velocidade ou o set point de outro controlador ou ser
usado de outras formas para controlar o processo. O elemento final de controle age sobre a
varivel manipulada para produzir os resultados desejados. A combinao de um sensor, um
indicador, registrador ou controlador, e um elemento final de controle (quando um controlador
usado) constitui um loop de controle.

O algoritmo de controle mais comum na indstria de bioprocessos o algoritmo de

controle proporcional integral (PI). O erro fornecido ao algoritmo PI e uma sada calculada, a
qual depende das constantes do controlador. A combinao dos dois componentes do algoritmo
de controle (proporcional e integral) apresentada na seguinte equao:

t n
F ( K ) = FR + K C E (K ) + E (K )
I K =1

onde F(K) a sada, Kc o ganho proporcional, E o erro, i o tempo integral e t o

tempo. A resposta devido ao componente proporcional do algoritmo de controle baseada no

tamanho do erro. O ganho pode ser qualquer valor em uma faixa que o controlador aceite. Se uma
sada para a vlvula de controle maior do que 1 ou menor do que 0, a vlvula completamente
aberta ou fechada (dependendo da ao). O ganho proporcional determina, portanto, o quanto o
loop de controle sensvel. O elemento integral do controlador PI calcula uma sada baseada no
tempo em que o erro est presente.
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5. MATERIAIS E MTODOS:

5.1 Estudo da Linguagem Fortran e de Mtodos Numricos para Resoluo de Equaes

Diferenciais

Como este projeto de cunho terico-computacional, iniciou-se nesta etapa o estudo da

linguagem de programao FORTRAN, a qual inclui recursos de programao estruturada, de
operaes sobre caracteres, de manipulao e de uso de arquivos, entre outros (HEHL, 1986).
Uma vez que a simulao dinmica de um processo envolve a resoluo de equaes
diferenciais, um estudo inicial realizado nesta etapa mostrou que o mtodo de Runge-Kutta de 4
ordem um mtodo numrico adequado para integrar o tipo de equaes diferenciais
normalmente utilizadas para representar o comportamento dinmico de bioprocessos. A idia
bsica deste mtodo aproveitar as qualidades dos mtodos da srie de Taylor
computacionalmente aceitveis (RIGGIERO e LOPES, 1996).

De forma resumida, podemos dizer que os mtodos de Runge-Kutta se caracterizam por

certas prioridades, tais como: so de passo igual a um, no exigem clculo de qualquer derivada
de f(x,y), porm, preciso calcular f(x,y) em vrios pontos; aps expandir f(x,y) pelo mtodo de
Taylor para funo de duas variveis em torno de (xn, yn) e agrupar os termos semelhantes, sua
expresso coincide coma do mtodo de srie de Taylor de mesma ordem (RIGGIERO e LOPES,
1996).

5.2 Descrio dos processos

Modelagem de processos alternativos da fermentao A-B-E (Acetona, Butanol e Etanol)

O processo fermentativo proposto trata da converso fermentativa da matria prima
(acares) em uma mistura de solventes orgnicos acetona, butanol e etanol como produtos
finais acumulados no caldo fermentativo. Este processo fermentativo anaerbio representa uma
complexa formao de produto no associado ao crescimento atravs de dois intermedirios
associados ao crescimento celular, o cido butrico e o cido actico. Alm disso, ocorre a
formao de hidrognio e dixido de carbono durante a bioconverso catalisada por uma bactria
estritamente anaerbia, Clostridium acetobutylicum, a qual dotada de um comportamento
fisiolgico bastante interessante.

O modelo matemtico deste processo pode auxiliar no estudo deste tipo de fermentao de
vrias formas (VOLESKI e VOTRUBA, 1992):

- Direcionar o trabalho experimental atravs de simulaes computacionais de formas

alternativas de operao do processo (usando biorreatores do tipo tanque agitado ou do tipo
tubular, operao em regime contnuo ou batelada, com clulas livres ou imobilizadas, etc.).
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- Fornecer a base terica para o desenvolvimento de estratgias de controle automtico e
otimizao do sistema fermentativo.

Diferentes modos de operao da fermentao A-B-E foram considerados neste estudo,

desde a linha de operao da fermentao em batelada at os tpicos modos de operao em
regime contnuo, considerando tambm as operaes com reteno de microrganismos e
batelada alimentada. A modelagem fenomenolgica tem a grande vantagem de que os termos
matemticos individuais usados nas equaes dos modelos tm um significado fsico real na
interpretao do processo (VOLESKI e VOTRUBA, 1992).

Os experimentos originais da cultura em batelada, realizados por VOLESKI e VOTRUBA

(1992) e utilizados neste trabalho, foram realizados usando a bactria Clostridium acetobutilicum.
A cepa produziu pouco resduo de cido butrico no fim da fermentao e uma boa produo dos
solventes orgnicos. A cultura sofreu um processo de seleo da cepa usando um meio
enriquecido com cido butrico. O meio Clostridium reforado semi-slido (RCM) foi usado para
manuteno da cultura e ativao dos esporos. O meio RCM contm (em g/L): extrato de levedura
3,0; Lab-Lemco powder, 10,0; Amido solvel, 1,0; Dextrose 5,0; Cistena hidroclorida 0,5; NaCl
5,0; acetato de sdio, 3,0; Agar 0,5. Seguido de esterilizao, pH foi de aproximadamente 6,8. Os
esporos foram armazenados em tubos teste screw-capde 15 cm. Cada tubo foi usado para o
incio de uma fermentao. Os esporos foram aquecidos e agitados (shocked) colocando os tubos
testes na gua de banho (70 a 75C) por 20 a 25 minutos. Transferiu-se 3% do inculo para
garrafas de soro de 100ml contendo 30ml da mesma soluo RCM. Depois de 24 horas de
ativao dos esporos, 3% do inculo foi passado para um meio de cultura em glicose lquida
contendo em (g/l): Glucose, 50; Extrato de levedura, 11; (NH4)SO4 ,9; K2HPO4, 0,8; KH2PO4, 0,8;
(MgSO4 . 7H2O), 0,3;(FeSO4.7H2O), 0,02; (MnSO4.H2O), 0,02; NaCl 0,02. Depois de 16 a 20
horas, 3% do inculo foi usado para experimentos em cultura em batelada conduzidos em um
fermentador modificado de capacidade igual a 14 litros (Microferm), contendo 10 litros de caldo de
fermentao em pH inicial de 6,4. Antes da inoculao, o fermentador foi pulverizado com gs
nitrognio altamente puro para asseguar a anaerobiose. Os solventes e os cidos do caldo
fermentativo foram analisados em cromatografia gasosa (Carle gs chromatograph) (VOLESKI e
VOTRUBA, 1992).

Processo em batelada (descontnuo) de fermentao A-B-E

A fermentao em batelada a mais usada, principalmente na rea alimentcia. Seu modo
de operao pode ser descrito assim: no instante inicial, a soluo nutriente esterilizada no
fermentador inoculada com microrganismos e incubada, de modo a permitir que a fermentao
ocorra sob condies timas (BORZANI et al., 2001).

A fermentao descontnua (batelada) pode levar a baixos rendimentos e/ou produtividades,

quando o substrato adicionado de uma s vez no incio da fermentao, pois este pode exercer
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efeitos de inibio, represso ou desviar o metabolismo celular a produtos que no interessam.
Alm disso, este tipo de operao apresenta tempos mortos, ou seja, tempos em que o
fermentador no est sendo usado para o processo fermentativo propriamente dito, tais como
tempo de carga e descarga da dorna e perodo correspondente a lavagem e esterilizao do
fermentador. Por outro lado, a operao em batelada apresenta menores riscos de contaminao
(comparados aos processos contnuos de fermentao) e grande flexibilidade de operao
(BORZANI et al., 2001).

Balano de massa para o crescimento celular:

dX
= 0,56( y 1) X k 2 BX
dt

dy KI
= [ k1 S 0,56( y 1)] y
dt KI + B

Balano material para o substrato:

dS S
= k 3 SX k 4 X
dt S + KS

Balano material para o cido butrico

dBA KI BA
= k5 S X k6 X
dt B + KI K BA + BA

Balano material para o cido actico

dAA S KI AA S
= k8 X k9 X
dt S + KS KI + B AA + K AA K S + S

Balano material para o butanol

dB d ( BA)
= k 7 SX 0,841
dt dt
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Balano material para a acetona

dA S d ( AA)
= k10 X 0,484
dt S + KS dt

Balano material para o etanol

dE S
= k11 X
dt S + KS

O modelo matemtico para o processo de fermentao em batelada apresentado neste

trabalho consiste em uma srie de equaes diferenciais ordinrias representando os balanos de
massa do biorreator para o substrato, a biomassa, metablitos intermedirios e produtos chave
finais. O modelo matemtico foi capaz de refletir bem todas as fases da cultura em batelada. O
comportamento do processo pode ser visto na Figura 1.

4,5 10 60 12

9 11
4,0
50 10
8
3,5 Biomassa Butanol
Produtos intermedirios (g/l)

9
Acetona
7 Etanol
3,0 40 Substrato 8
Substrato (g/l)
Biomassa (g/l)

Produtos (g/l)
7
2,5
5 30 6
2,0 5
4
1,5 cido Butrico 20 4
cido Actico 3
3
1,0
2
10 2
0,5 1 1

0,0 0 0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 0 5 10 15 20 25 30 35

Tempo (h) Tempo (h)

Figura 1 Processo fermentativo A-B-E em reator de mistura operando em regime de batelada.

Processo em batelada alimentada A-B-E

O processo em batelada alimentada definido como uma tcnica onde um ou mais
nutrientes so adicionados ao fermentador durante o cultivo e em que os produtos a permanecem
at o final da fermentao. A vazo de alimentao pode ser constante ou variar com o tempo, a
mudana de volume pode ou no ocorrer, dependendo da concentrao de substrato e da taxa de
evaporao do sistema. O processo em batelada alimentada til para o estudo da cintica de
processos fermentativos, pois permite a manuteno de baixos nveis de substrato por longos
perodos de tempo, que favorvel a estimao de parmetros cinticos, tambm permite manter
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a concentrao celular constante e controlar velocidades de crescimento em condies
transientes. Alm disso, h evidncias que as mximas velocidades de alguns processos podem
ser encontradas somente nestas circunstncias (BORZANI et al., 2001).

Balano de massa para o crescimento celular:

dX 1 dV
= 0,56( y 1) X k 2 BX X
dt V dt

dy KI
= [ k1 S 0,56( y 1)] y
dt KI + B

Balano material para o substrato:

dS S 1 dV
= k 3 SX k 4 X+ (S 0 S )
dt S + KS V dt

Balano material para o cido butrico

dBA KI BA 1 dV
= k5 S X k6 X ( BA)
dt B + KI K BA + BA V dt

Balano material para o cido actico

dAA S KI
= k8 X D( AA)
dt S + KS KI + B

Balano material para o butanol

dB d ( BA) 1 dV 1 dV
= k 7 SX 0,831[ + .( BA)] B
dt dt V dt V dt

Balano material para a acetona

dA S d ( AA) 1 dV 1 dV
= k10 X 0,5[ + . AA] A
dt S + KS dt V dt V dt
 16
Balano material para o etanol

dE S 1 dV
= k11 X E
dt S + KS V dt

O modelo matemtico foi capaz de refletir bem o comportamento do processo operando em

regime de batelada alimentada, como pode ser visto na Figura 2.

4,5 3,0 60 10

4,0 9
2,5 50
Biomassa 8
3,5
Produtos intermedirios (g/l)
7
3,0 2,0 40
Biomassa (g/l)

Substrato (g/l)

Produtos (g/l)
2,5 Substrato
cido Butrico
1,5 30 Butanol 5
cido Actico
2,0 Acetona
Etanol 4
1,5 1,0 20
3
1,0
2
0,5 10
0,5 1

0,0 0,0 0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40
Tempo (h) Tempo (h)

Figura 2 Processo fermentativo A-B-E em reator de mistura operando em regime de batelada

alimentada.

Processo contnuo de fermentao A-B-E

O processo de fermentao contnua caracteriza-se por possuir uma alimentao contnua
no meio de cultura a uma determinada vazo constante atravs da retirada contnua de caldo
fermentado. A manuteno do volume constante no reator de primordial importncia, afim de
que o sistema atinja a condio de estado estacionrio, condio na qual as variveis de estado
(concentrao de clulas, de substrato limitante e de produto) permanecem constantes ao longo
do tempo de operao do sistema (BORZANI et al., 2001).

Balano de massa para o crescimento celular:

dX
= 0,56( y 1) X k 2 BX DX
dt

dy S KI
= [ k1 0,56( y 1)] y
dt S + KS KI + B
 17
Balano material para o substrato:

dS S
= k 3 SX k 4 + D( S 0 S )
dt S + KS

Balano material para o cido butrico

dBA S K IBA
= k 5' X D( BA)
dt S + K S K IBA + B

Balano material para o cido actico

dAA S KI
= k8 X D( AA)
dt S + KS KI + B

Balano material para o butanol

dB S D( BA)
= k 7' X 0,831[ + D.( BA)] DB
dt S + KS dt

Balano material para a acetona

dA S d ( AA)
= k10 X 0,5[ + D.( AA)] DA
dt S + KS dt

Balano material para o etanol

dE S
= k11 X DE
dt S + KS

O modelo matemtico foi capaz de refletir bem o comportamento do processo operando em

regime contnuo, como pode ser visto na Figura 3.
 18

13
8
12
11 7
cido Butrico
10 Substrato Biomassa

Produtos Intermedirios
9 Butanol 6 cido Actico
8 Acetona
Etanol
Produtos

7 5

6
4
5
4
3
3
2 2
1
0 1
0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 80 100 120 140

Tempo (h) Tempo (h)

Figura 3 Processo fermentativo A-B-E em reator de mistura operando em modo contnuo.

Processo contnuo com reteno de clulas

A operao de fermentao contnua com reteno de clulas tem como objetivo a obteno
da alta densidade celular no reator, aumentando-se assim consideravelmente as velocidades, e,
portanto em ltima anlise, a produtividade do processo. O reciclo de clulas pode ser interno ou
externo, ao reator (BORZANI et al., 2001).

Balano de massa para o crescimento celular:

dX
= 0,56( y 1) X k 2 BX
dt

dy
= [ ( S , B) 0,56( y 1)] y
dt

Balano material para o substrato:

dS S
= k 3 SX k 4 X + D( S 0 S )
dt S + KS

Balano material para o cido butrico

dBA KI BA
= k5 S X k6 X D( BA)
dt B + KI K BA + BA
 19
Balano material para o cido actico

dAA S KI AA
= k8 X k9 X D( AA)
dt S + KS KI + B K AA + AA

Balano material para o butanol

dB D( BA)
= k 7 SX 0,831[ + D.( BA)] DB
dt dt

Balano material para a acetona

dA S d ( AA)
= k10 X 0,5[ + D.( AA)] DA
dt S + KS dt

Balano material para o etanol

dE S
= k11 X DE
dt S + KS

O modelo matemtico foi capaz de refletir bem o comportamento do processo operando em

regime contnuo com reteno de clulas, como pode ser visto na Figura 4.

10
6

5 8
Produtos Intermedirios

4
6
cido Butrico
Produtos

Biomassa
3 Substrato cido Actico
Butanol 4

2 Acetona
Etanol
2
1

0 0
0 20 40 60 80 0 20 40 60 80

Tempo (h) Tempo (h)

Figura 4 Processo fermentativo A-B-E em reator de mistura operando em modo contnuo com
reteno de clulas.
 20
5.3 CONTROLE DIGITAL REALIZADO NOS REGIMES EM BATELADA ALIMENTADA E
CONTNUO.

Foram propostas estratgias de controle operacional para regimes de operao em batelada

alimentada e contnuo. Pde-se observar graficamente, que o microrganismo sofre uma inibio
devido ao acmulo de cido butrico no meio de cultura. Devido a este metablito txico, props-
se que o controle funcionasse de forma a manter a concentrao de cido butrico constante no
meio de cultura atravs do aumento da taxa de diluio do caldo feito com a adio de substrato
ao meio. Quando o sensor detectar concentraes de cido butrico maiores que 5g/l, um sinal
enviado ao controlador, e, comparado ao set point, gera-se um erro. A resposta proporcional ao
erro e integral do erro. O sinal do controlador atua na vlvula de alimentao fazendo com que o
meio nutriente seja adicionado ( uma vazo constante) ao caldo fermentativo e
conseqentemente haja reduo da concentrao do metablito inibidor. A simulao proposta
com o algoritmo do controlador PI, gerou os seguintes grficos de controle.

6 10
Butanol
9 Acetona
5 Etanol
8 Set-point
Butanol
7
4 Acetona
Etanol
6
Produtos (g/l)

Produtos (g/l)

Set-point
3 5

4
2
3

2
1
1

0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 20 40 60 80 100 120 140 160
Tempo (h) Tempo (h)

Figura 5 Controle do processo fermentativo A-B-E em reator de mistura operando: a) em regime

de batelada alimentada com set point igual a 5g/l, e b) em regime contnuo variando o set point.

6. RESULTADOS E DISCUSSO

Ao longo do perodo de trabalho, realizaram-se as seguintes etapas:

1. Reviso bibliogrfica introdutria referente modelagem matemtica de processos

biotecnolgicos e estudo do processo fermentativo A-B-E;
2. Estudo da linguagem de programao FORTRAN;
 21
3. Realizao de simulaes computacionais, utilizando o FORTRAN, do processo
fermentativo A-B-E em diferentes modos de operao (batelada, batelada alimentada,
contnuo, contnuo com reteno de clulas).
4. Realizao do controle operacional do processo A-B-E operando em regime de batelada
alimentada.

Os principais objetivos deste trabalho foram estudar as tcnicas de modelagem

matemtica aplicada a processos fermentativos, implementar a simulao computacional e
controle operacional de um processo fermentativo de importncia significativa para a indstria de
biotecnologia, alm da avaliao de alguns mtodos numricos para a integrao de equaes
diferenciais.
De acordo com os resultados apresentados nos grficos acima, pode-se perceber que os
objetivos foram alcanados plenamente, pois os resultados obtidos atravs da simulao
computacional foram totalmente coerentes com aqueles obtidos experimentalmente, ou seja, os
grficos reproduzem com fidelidade o comportamento do microrganismo nas condies
apresentadas (dados obtidos na literatura VOLESKI e VOTRUBA, 1992).
Pode-se ainda, observar atravs dos grficos gerados que o controle operacional proposto
(o controlador PI atuou de forma a controlar a concentrao de cido butrico, por manipulao da
vazo de alimentao), teve seus parmetros bem ajustados e controlou de forma estvel todas
as perturbaes hipotticas geradas tanto no regime de batelada alimentada, quanto no regime
contnuo de operao.
No regime contnuo de operao observou-se que nas variaes geradas por diversos set
points, o controlador agiu de maneira otimizada, gerando poucas oscilaes.
Observando os grficos de simulao do processo fermentativo, percebe-se que no decorrer
do processo, aps algumas horas, quando a concentrao de cido butrico excedesse o limite
celular, o processo estaria caminhando para a morte celular e para a perda de produtividade. A
partir da avaliao da modelagem, e com a proposta de controle apresentada, foi fornecido s
clulas um ambiente encorajante ao desempenho fermentativo. Com a concentrao do
composto inibidor controlado, foi possvel obter o produto de interesse em uma concentrao
tima e evitar a queda de biomassa durante o processo fermentativo.

7. CONCLUSES

Os estudos realizados at o momento, proporcionaram o embasamento terico fundamental

para o desenvolvimento e o aperfeioamento adequados nas reas de modelagem matemtica e
simulao e controle de bioprocessos. Devido ao carter computacional do projeto, pde-se
explorar certas habilidades na rea de programao cientfica.
 22
Utilizou-se com estudo de caso a modelagem matemtica e a simulao do processo
fermentativo para a produo de acetona, butanol e etanol (A-B-E). Nesta etapa foram
investigados alguns tipos alternativos de processos de produo (produo em batelada,
produo em batelada alimentada, produo contnua, produo contnua com reteno de
clulas).
Os modelos matemticos do processo foram capazes de descrever adequadamente o
comportamento do processo, reproduzindo fielmente os dados de literatura.
Verificou-se que a estratgia de controle proposta foi capaz de controlar o processos
adequadamente, tanto na operao em batelada alimentada quanto em modo contnuo.

8. REFERNCIAS

BORZANI, W.; AQUARONE, E.; LIMA, U.A. e SCHIMIDELL, W.; Biotecnologia Industrial;
Volume 2; Editora Edgard Blucher LTDA, 2001; 522p

HEHL, M. E., Linguagem de programao estruturada FORTRAN 77, Ed Mc Graw- Hill,

So Paulo, 1986, 511p.

RUGGIERO, M.A.G. e LOPES, V.L.R.; Clculo Numrico: Aspectos tericos e

computacionais, So Paulo: Pearson Education do Brasil, 2 Edio,1996, 406p.

VOLESKI B. e VOTRUBA J.; ; Elsevier Science Publishers B. V.; London New York
Tokio; 1992; 266p.
 23
APNDICE

Tabela 1 - Constantes cinticas utilizadas

Constantes Batelada Contnuo Reteno de clulas Batelada Alimentada

Cinticas

K1 0,0090 (l/g.h) 0,44 (h-1) 0,38 (l/g.h) 0,0090 (l/g.h)

K2 0,0008 (l/g.h) 0,0008 0,014 (l/g.h) 0,0008 (l/g.h)

K3 0,0255 (l/g.h) 0,005 (l/g.h) 0,03 (l/g.h) 0,0255 (l/g.h)

K4 0,6764 (h-1) 1,25 (h-1) 0,85 (h-1) 0,6764 (h-1)

K5 0,0136 (l/g.h) 0,6 (l/g.h) 0,270 (l/g.h) 0,0136 (l/g.h)

K6 0,1170 (h-1) 0,0 0,050(h-1) 0,1170 (h-1)

K7 0,0113 (l/g.h) 0,367 (l/g.h) 0,090 (l/g.h) 0,0113 (l/g.h)

K8 0,7150 (h-1) 0,225 (h-1) 0,660 (h-1) 0,7150 (h-1)

K9 0,1350 (h-1) 0,0 0,01 (h-1) 0,1350 (h-1)

K10 0,1558 (h-1) 0,187 (h-1) 0,132 (h-1) 0,1558 (h-1)

K11 0,0258 (h-1) 0,033 (h-1) 0,019 (h-1) 0,0258 (h-1)

K12 0,6139 (h-1) - 0,6 (h-1) 0,6139 (h-1)

K13 0,0185 (h-1) - 0,019 (h-1) 0,0185 (h-1)

K14 0,00013 (l/g.h) - - 0,00013 (l/g.h)

KI (g/l) 0,833 6,0 0,42 0,833

KS (g/l) 2,0 1,0 1,0 2,0

KBA (g/l) 0,5 0,0 0,5 0,5

KAA (g/l) - 0,0 0,5 0,5

KIBA (g/l) - 0,97 -

D hr1 - - 0,113 -
 24

Tabela 2 - Nomenclatura utilizada

X Biomassa

P Produto

S Substrato

E Etanol

AA cido Actico

BA cido Butrico

B Butanol

A Acetona

y RNA- marcador

D Taxa de Diluio

V Volume

Tabela 3 Condies Iniciais para a resoluo numrica das EDOs.

Condies Iniciais Batelada Contnuo Reteno Batelada

em g/l X de clulas Alimentada

X 0,03 4,2 4,24 0,03

S 52,0 5,0 3,3 50,0

AA 0,0 1,8 3,27 0,0

AB 0,0 0,81 5,88 0,0

E 0,0 0,24 0,24 0,0

A 0,0 5,88 0,81 0,0

B 0,0 3,9 1,84 0,0

y 1,0 1,2 1,2 1,0