Mtodos de calibrao

Mtodos de calibrao

A calibrao determina a
Curva de calibrao ou curva analtica
Representao grfica da resposta
relao entre a resposta
analtica versus a concentrao do
analtica e a concentrao
analito.
do analito.

Medida de uma
propriedade do
analito

Concentrao
do analito
Fonte: SKOOG et. al. Fundamentos
de Qumica Analtica. 8 ed., 2006.

Curva de calibrao externa; 2

Curva de calibrao por adio de padro;

Curva de calibrao por padro interno.

1
 Curva de calibrao externa

O padro externo preparado separadamente da amostra
Prepara-se solues padres de concentraes conhecidas e
crescentes do analito:
A relao entre a
resposta analtica e a
concentrao linear,
e pode ser descrita
matematicamente por
uma equao da reta:
0 mg L-1 1 mg L-1 2 mg L-1 3 mg L-1 4 mg L-1 5 mg L-1
y = mx + b
10

Mede-se o sinal de

Resposta analtica
8
Branco: contm o mesmo resposta (absorvncia,
solvente e reagentes rea do pico) 6
permite medir a resposta
4
instrumental do
procedimento analtico 2
para impurezas ou
espcies interferentes 0 3
nos reagentes
0 1 2 3 4 5

Concentrao, mg L-1

Mede-se o sinal de resposta

(Y) das amostras

Substitui na
curva analtica

y = mx + b

Obtm-se a concentrao
do analito (X)

A faixa de concentrao
da curva selecionada
de maneira que contenha 4
a amostra ...

2
 Obteno da equao da reta: Mtodo dos mnimos quadrados
Melhor reta passa o mais prximo possvel dos pontos
experimentais Mtodo dos mnimos quadrados fornece o
melhor ajuste entre os pontos experimentais e a linha reta.

10
Pressupe que qualquer desvio de desvio vertical
pontos individuais da linha reta (di = yi y)

Resposta analtica
8
decorrente de erros na medida
6
(desvio vertical ou resduo)
consideramos que no h erro nos 4
valores de x (concentraes)
2

0 1 2 3 4 5
A melhor reta aquela -1
que minimiza a soma dos Concentrao, mg L
N 5
quadrados dos resduos para
ssresid = ( yi y )
2
todos os pontos.
i =1

Mtodo dos mnimos quadrados

Existe uma relao linear entre a

resposta medida y e a concentrao do y = mx + b
padro x.

Inclinao 10

n x i yi x i yi
Resposta analtica

m= 8

n x ( x i )
2 2
i 6

Intercepto 2

b=
(x ) y x y x
2
i i i i i 0 y = 2,011x + 0,038
n (x ) ( x )
2 2
i i 0 1 2 3 4 5
6
-1
Concentrao, mg L

3
 Clculo das incertezas...

Desvio padro da inclinao Desvio padro do intercepto

s 2y n s y2 x i2
( )
sm = sb =
n x i2 ( x i ) n (x ) ( x )
2 2 2
i i

Desvio padro de y (regresso)

(y
2
i y)
sy =
n2

Desvio padro inerente medida

sy 1 1 ( y i y)2
sx = + +
m M N
m 2 x i2
( x i )2
7
N

Coeficiente de correlao de Pearson (r)

Indica o grau de correlao entre as variveis x e

r y Quanto mais prximo de + 1, maior indcio de
que h uma relao linear entre as variveis.

n x i yi x i yi
r=
[n x 2
i
2
][
( x i ) n y 2i ( y i )
2
]
r=1 r=-1 r=0 r=0

4
 Obtendo os dados de regresso no Excel...

Barra de ferramentas Dados Anlise de dados

Regresso selecione as colunas dos eixos X e Y e obtm-se
uma planilha parecida com a seguinte:
RESUMO DOS RESULTADOS

Estatstica de regresso
R mltiplo 0,999075835
R-Quadrado 0,998152524 r
R-quadrado ajustado 0,997690655
Erro padro 0,181002499 sy
Observaes 6

ANOVA
gl SQ MQ F F de significao
Regresso 1 70,80228571 70,80228571 2161,116279 1,28073E-06
Resduo 4 0,131047619 0,032761905
Total 5 70,93333333

Coeficientes Erro padro Stat t valor-P 95% inferiores 95% superiores

Interseo 0,038095238 0,130999991 0,290803363 0,785656607 -0,325619047 0,401809523
Varivel X 1 2,011428571 0,043267873 46,48780785 1,28073E-06 1,891297697 2,131559446
9

Construindo a curva analtica no Excel...

Selecione na planilha as colunas e plote um grfico de

disperso. No grfico, clique com o boto direito sobre um dos
pontos do grfico e clique em Adicionar linha de tendncia,
em Opes selecione Linear e Exibir equao no grfico.

Lembrem-se de colocar ttulo no grfico e nos eixos...

10

5
Quando usamos padres externos, consideramos que quando a mesma
concentrao do analito estiver presente na amostra e no padro, a
mesma resposta ser obtida.

Anlise de amostras reais Efeito de matriz da

amostra decorrente da presena de espcies na
matriz que tm propriedades qumicas similares s
do analito As espcies podem reagir com os
mesmos reagentes que o analito ou podem provocar
uma resposta instrumental que no pode ser
facilmente distinguida daquela do analito Esses
efeitos interferem na determinao do analito

OBS: O efeito de matriz pode ser induzido no apenas pela amostra,

como tambm por reagentes e solventes empregados no preparo da
amostra para a determinao. 11

Curva de calibrao por adio de padro

A composio da amostra desconhecida ou complexa e

afeta o sinal analtico Efeito de matriz

No possivel reproduzir a matriz da amostra.

Mtodo da Adio de padro

Quantidades conhecidas de analito so adicionadas amostra

A amostra contaminada com quantidades conhecidas de
uma soluo padro contendo o analito
12

6
 Calibrao pontual

Amostra [X] I X = k [ X ]i
IX [ X ]i
=
Amostra [X]
I X +S [S ] f + [ X ] f
+ I S + X = k ([ S ] f + [ X ] f )
Padro [S]

Vamostra
[ X ] f = [ X ]i
Como ocorre Vamostra+ padro
uma diluio,
temos que: V padro
[ S ] f = [ S ]i
Vamostra + padro

13

Exerccio

O mtodo das adies de padro de ponto nico foi empregado

na determinao de fosfato pelo mtodo do azul de molibdnio.
Uma amostra de 2,00 mL de urina foi tratada com os
reagentes de azul de molibdnio para produzir uma espcie que
absorve a 820 nm, aps isso a amostra foi diluda para 100,00
mL. Uma alquota de 25,00 mL proporcionou uma leitura no
instrumento (absorbncia) de 0,428 (soluo 1). A adio de
1,00 mL de uma soluo contendo 0,500 mg L-1 de fosfato a
uma segunda alquota de 25,00 mL forneceu uma absorbncia
de 0,517 (soluo 2). Utilize esses dados para calcular a
concentrao de fosfato, em miligramas por litro na amostra,
considerando uma relao linear entre a absorbncia e a
concentrao de fosfato e a realizao de uma medida para o
branco. (R = 3,90 mg L-1). 14

7
 Calibrao multipontual
5 mL de amostra 5 mL de amostra 5 mL de amostra 5 mL de amostra 5 mL de amostra 5 mL de amostra
+ + + + + +
0mg L-1 padro 1mg L-1 padro 2mg L-1 padro 3mg L-1 padro 4mg L-1 padro 5mg L-1 padro

30 O eixo x a concentrao de analito

proveniente da soluo padro adicionada
25
Resposta analtica

amostra A interseo da reta extrapolada

20 com o eixo x a concentrao da amostra.
15

10
y = 5,029x + 5,095
y = 0 x = b/m
5 r = 0,99908 15

-2 0 2 4 6 x = concentrao do analito na amostra

Concentrao, mg L
-1
diluda...

Curva de calibrao com padro interno

Quando a quantidade de amostra analisada ou a resposta do
instrumento varia a cada anlise por razes difceis de controlar.

Ex: Variao da temperatura da chama em medidas

fotomtricas, variao da vazo da fase mvel em cromatografia

Mtodo do Padro interno

Uma quantidade conhecida (e fixa) de uma espcie, diferente do

analito e que atua como referncia, adicionada a todas as
amostras, padres e brancos o sinal de resposta a razo
entre o sinal do analito e o da espcie de referncia.
OBS: Na adio de padro, o padro a mesma substncia que o
analito, sendo empregado para compensar um efeito de matriz. J 16
um
padro interno uma substncia diferente do analito, utilizado para
compensar variaes entre uma medida e outra.

8
 Quando ocorrem perdas de amostra, e consequentemente de
analito, durante as etapas de preparo da amostra, deve-se
adicionar o padro interno antes do incio do tratamento da
amostra...

Para que uma substncia possa ser utilizada como padro interno
deve preencher alguns requisitos:

No estar presente na amostra (matriz);

Apresentar caractersticas semelhantes s do analito;

O sinal do PI no deve sofrer interferncia;

Ser estvel, no reagir com os componentes da amostra ou
sistema de anlise.

Deve ter alta pureza.
17

Calibrao pontual

Padro [S] SS [S ]
+ =F
PI [PI] S PI [ PI ]

Determina-se F
(fator de resposta)

Amostra [X] SX [X ]
+ =F
PI [PI] S PI [ PI ]

18

9
 Calibrao multipontual
3 mg L-1 PI 3 mg L-1 PI 3 mg L-1 PI 3 mg L-1 PI 3 mg L-1 PI 3 mg L-1 PI
+ + + + + +
0mg L-1 analito 1mg L-1 analito 2mg L-1 analito 3mg L-1 analito 4mg L-1 analito 5mg L-1 analito

25 O grfico da curva analtica contm a razo

entre o sinal do analito e o do padro interno
Sinal analito/Sinal PI

20
versus a razo entre concentrao do
15 analito e do paro interno
10

5 y = 15,086x + 0,095 S analito [ analito ]

r = 0,99908 = 15,086 + 0,095 19
0 S PI [ PI ]
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
[Analito]/[PI]

Ilustrao do mtodo do padro

interno. Uma quantidade fixa da
espcie contida no padro interno
adicionada a amostras, padres e
brancos. (Fonte: SKOOG et. al.
Fundamentos de Qumica Analtica.
20
8 ed., 2006).

10
 Figuras de mrito de um mtodo analtico

Curva de calibrao da resposta, R, versus

concentrao, c. (Fonte: SKOOG et. al.
Fundamentos de Qumica Analtica. 8 ed.,
2006).

Sensibilidade Inclinao da curva de calibrao (m).

Limite de Menor concentrao que pode

3s
deteco (LD) ser distinguida do rudo com um LD =
m Onde:
certo nvel de confiana. s : desvio padro
do branco ou do
intercepto ou
Limite de Menor concentrao na qual da regresso
10 s
quantificao medidas quantitativas podem LQ =
(LQ) ser feitas. m
21
Faixa dinmica Faixa de concentrao que pode ser determinada com
linear uma curva de calibrao linear.

11