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VALIDACIN DE MTODOS

ANALTICOS, FISICOQUMICOS Y
MICROBIOLGICOS

Licda. Lucrecia Arriola


Guatemala, 11 de septiembre de 2012

1
VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

I. GENERALIDADES

Licda. Lucrecia Arriola 2


2
OBJETIVOS DEL CURSO
1. Intentamos contestar las siguientes preguntas:
Q es validar?
Qu lid ?
Por qu valido?
Para qu valido?
Cundo valido?
Cmo
mo val
valido?
do?
2. Conocer la diferencia entre Validacin y
Verificacin
3 Conocer
3. C l
los requisitos ded l
las normas
internacionales sobre la validacin de mtodos

3
VALIDACIN??

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LA VALIDACIN DE MTODOS

Por qu es necesaria la
validacin analtica?

Cul es el propsito de
la validacin analtica?

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Qu es validacin de mtodos analticos?

Validacin: Confirmacin mediante el suministro


de evidencia objetiva de que se han cumplido los
requisitos para una utilizacin o aplicacin
especfica
p prevista.
p

Validacin de un procedimiento analtico:


Procedimiento para establecer pruebas
documentales que demuestren cientficamente que
un mtodo analtico tiene las caractersticas de
desempeo que son adecuadas para cumplir los
requerimientos de las aplicaciones analticas
pretendidas
pretendidas.

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Qu es validacin de mtodos analticos?

Es realizar un conjunto de pruebas de manera de:


a) Comprobar varios aspectos del comportamiento
del mtodo.
b) E
Establecer
bl que sirve
i para ell fin
fi previsto.
i

La validacin
L lid i i li
implica l
la d
demostracin
t i d
de l
la
determinacin de las fuentes de variabilidad y del
error sistemtico y al azar de un procedimiento,
procedimiento no
slo dentro de la calibracin sino en el anlisis de
muestras reales.

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Qu es verificacin de mtodos?

Verificacin: Confirmacin mediante la


aportacin de evidencia objetiva de que se han
cumplido los requisitos especificados.

Indicar el proceso que lleva a cabo el


laboratorio con el fin de demostrar su
capacidad para ejecutar correctamente un
mtodo normalizado cuando lo realiza
exactamente como est
descrito
d i en la
l norma.

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Para qu valido un mtodo analtico?
Para cumplir con requisitos de las
normas internacionales:
a) BPM (Industria Farmacutica)
b)) Norma
m ISO 17025 ((Acreditacin
de Laboratorios de Ensayo y de
Calibracin)
c)) Norma
N ISO 15189 (Acreditacin
(A dit i
de Lab. Clnicos)
d) Organismos Internacionales como
FAO, USP y otras farmacopeas,
OMS, ICH (Conferencia
Internacional Tripartita sobre
Armonizacin)
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Para qu valido un mtodo analtico?

Para emitir resultados exactos y


precisos que sean reproducibles
precisos,
para generar
p g la confianza en
nuestros clientes.

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Cules son los tipos
p de mtodos?
1.Mtodos Normalizados:
Mtodo analtico desarrollado
por un organismo de
normalizacin
li i u otro
t organismo
is
reconocido cuyos mtodos son
generalmente aceptados por el
sector tcnico correspondiente.
(Ref. ILAC-G18).
NOTA: El desarrollo del mtodo
incluye la etapa de su validacin.

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Cules son los tipos
p de mtodos?

2. Mtodos No Normalizados:
Mtodo analtico desarrollado por
un tercero o que ha sido adaptado
por el laboratorio a partir de un
mtodo normalizado. (Ref. ILAC-
G18).
G18)
NOTA: El desarrollo del mtodo,
as como su adaptacin,
d i incluyen
i l l
la
etapa de su validacin.

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Cules son los tipos
p de mtodos?

3. Mtodos Desarrollados p
por
el Laboratorio:
Mtodo analtico que no se
encuentra en normas u otras
colecciones de mtodos, ni en
publicaciones de terceros,
habiendo sido desarrollado por
el propio laboratorio.
laboratorio
NOTA: El desarrollo del mtodo
incluye la etapa de su validacin.
validacin

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Qu mtodos se validan?

1. Los Mtodos No Normalizados.

2. Los Mtodos diseados por el Laboratorio.

3.Los Mtodos Normalizados que han sido


modificados por el Laboratorio o utilizados fuera del
alcance previsto.

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Qu mtodos se validan?

La val
validacin
dac n de los mtodos de ensayo debe
debe:
Reflejar las condiciones reales de ensayo.
L
La extensin
xt si ded lal validacin
lid i necesaria
s i depender
d p d
del mtodo y su aplicacin.
LLa debe
d b realizar
li p s n l calificado
personal lifi d para
p esa
s
actividad.
En todos
t d s los
l s casos
c s s un parmetro
p rm tr para
p r la
l validacin
v lid cin
de ensayos es la descripcin del mtodo de ensayo.

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Qu mtodos se verifican?
1.Los Mtodos Normalizados.
2. Los Mtodos Oficiales.

3 Los Mtodos de Org.


3. Org Nacionales o Internacionales
Reconocidos.

Es recomendable
d bl la
l utilizacin
tili i de
d mtodos
t d s normalizados
li d s
cuando stos estn disponibles y sean apropiados.
"El llaboratorio
b t i d b
debe confirmar
fi m que pueded aplicar
li
correctamente los mtodos normalizados antes de las
pruebas o calibraciones. Si el mtodo normalizado cambia,
p
la confirmacin se repetir ". USP
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Cmo se dividen los mtodos segn el
RTCA 11
RTCA. 03 39: 06 ?
11.03.39:

1. C
Categora
I

2 Categora II
2.

3 Categora III
3.

4.. Categora
g IV
V

5. Mtodos Microbiolgicos

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Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA
RTCA. 11 03 39: 06 ?
11.03.39:
Se deben validar los siguientes
g procedimientos analticos
p
qumicos, fsicos y microbiolgicos:
Categora I: pruebas cuantitativas del contenido del
principio activo, son procedimientos
d qumicos
o
microbiolgicos que miden el analito presente en una
muestra determinada.
m m

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Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA
RTCA. 11 03 39: 06 ?
11.03.39:
Categora II: pruebas para
la determinacin del
contenido de impurezas o de
valores lmites para el control
de impurezas. Pueden ser
pruebas cuantitativas o una
prueba cualitativa para
determinar si la impurezap
est presente en la muestra
por encima o por debajo de un
valor
l lmite
l it especificado.
ifi d
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Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA
RTCA. 11 03 39: 06 ?
11.03.39:

Las categoras I y II miden con exactitud las


caractersticas de pureza de la muestra. Los
parmetros de validacin requeridos por una
prueba
b cuantitativa
tit ti son diferentes
dif t a los
l d
de una
prueba cualitativa de cumplimiento de lmite.

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20
Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?
Categora III: son pruebas fisicoqumicas que miden
caractersticas propias del desempeo del
medicamento, por ejemplo la prueba de disolucin. Las
caractersticas de la validacin son diferentes a las de
l otras
las t pruebas,
b aunque las
l pueden
d incluir.
i l i

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Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA
RTCA. 11 03 39: 06 ?
11.03.39:
Categora IV: pruebas de identificacin. Aquellas que se
realizan
li para asegurar
s l identidad
la id tid d de
d un analito
lit en una
muestra. Esto normalmente se realiza por comparacin de
una p
propiedad
p de la muestra, contra la de un estndar de
referencia, por ejemplo espectros, comportamiento
cromatogrfico, reactividad qumica y pruebas
microcristalinas.
microcristalinas

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Qu procedimientos analticos se validan
segn el RTCA
RTCA. 11 03 39: 06 ?
11.03.39:
Pruebas microbiolgicas
microbiolgicas: aquellas que se realizan para
asegurar la calidad microbiana del medicamento.

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Cmo seleccionar e implementar un mtodo
analtico nuevo?
1. De preferencia, que sea un mtodo
normalizado
n rmalizad de versin reciente.
reciente
2. Que el mtodo sea apropiado para el
tipo de muestra a analizar.
analizar
3. Determinar si el Laboratorio cuenta
con personal capacitado para el
anlisis a realizar.
4 Determinar si el Laboratorio cuenta
4.
con las instalaciones y condiciones
ambientales requeridas para el
anlisis.
lisis

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Cmo seleccionar e implementar un mtodo
analtico nuevo?
5. Descripcin del procedimiento
incluyendo el alcance del mtodo
(aplicabilidad, tipo), tipo de
compuestos y de matriz.
6. Detalle de reactivos, estndares de
referencia que se utiliza.
7. Lista de equipos y requisitos de
funcionamiento y rendimiento.
8. Definir los parmetros del mtodo.
9. Detalle de condiciones e
i l t i del
implementacin d l mtodo,
t d incluyendo
i l d
la preparacin de la muestra.
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25
Cmo seleccionar e implementar un mtodo
analtico nuevo?
10. Definir los procedimientos
estadsticos y clculos
representativos.
11. Definir los procedimientos para
11
el control de calidad en la rutina.
12. Definir los grficos
representativos, cromatogramas,
espectros y curvas de calibracin.
13. Definir los criterios de
aceptacin / rechazo de los datos.
14. Consideraciones de seguridad.
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Etapas para desarrollar
sarro ar un mtodo
m to o analtico
ana t co

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Qu requisitos
q debo cubrir antes de validar
un mtodo analtico?

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Qu son los parmetros del desempeo del
mtodo analtico
Son las
S l s propiedades,
i d d s caractersticas
t sti s o capacidades
id d s
cuantificables del mtodo que indican su grado de
calidad;
cal dad; incluyen
ncluyen exact
exactitud,
tud, efecto matr matricial,
c al,
repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad,
especificidad, lmite de deteccin, lmite de
cuantificacin,
tifi i li
linealidad,
lid d rango, sensibilidad,
ibilid d
robustez, fortaleza y otras caractersticas
relacionadas con los resultados obtenidos por el
mtodo.

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29
Qu parmetros del desempeo se
determinan en cada mtodo analtico?
Parmetros de los procedimientos analticos fisico-
q
qumicos y p g
potencia microbiolgica, g ICH.
segn

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30
Qu parmetros del desempeo se
determinan en cada mtodo analtico?
Segn la USP 34:

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31
Qu parmetros del desempeo se
determinan en cada mtodo analtico?
Parmetros de desempeo de los procedimientos
g
microbiolgicos

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Extensin de la Validacin

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Qu son los parmetros del desempeo del
mtodo
t d analtico
lti

Son las
S l s propiedades,
i d d s caractersticas
t sti s o capacidades
id d s
cuantificables del mtodo que indican su grado de
calidad;
cal dad; incluyen
ncluyen exact
exactitud,
tud, efecto matr matricial,
c al,
repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad,
especificidad, lmite de deteccin, lmite de
cuantificacin,
tifi i li
linealidad,
lid d rango, sensibilidad,
ibilid d
robustez, fortaleza y otras caractersticas
relacionadas con los resultados obtenidos por el
mtodo.

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34
EXACTITUD DE LOS RESULTADOS
ANALTICOS
EXACTITUD: Proximidad
P ximid d de
d la
l concordancia
n d n i entre
nt
el resultado de una medicin y un valor verdadero
del mensurando
m u

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Estimacin de la Exactitud

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Estimacin de la Exactitud
1. Agregando cantidad conocida del estndar al
producto

a. Determinar por duplicado el contenido


promedio del analito en la muestra con el
mtodo a validar.
b Enriquecer las muestras con estndar: para
b.
preparar las soluciones, se mantiene
constante
c nstant la
a cant
cantidad
a de mu
muestra
stra ttomada
ma a y
se agregan cantidades variables del
estndar.

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Estimacin de la Exactitud
Agregando cantidad conocida del estndar al producto

c. L exactitud es evaluada utilizando un m


La mnimo
m de nueve
determinaciones, tres concentraciones y tres
determinaciones de cada concentracin. (por ejemplo:
concentraciones de 80%,
80% 100% y 120% de la
concentracin normal de trabajo del mtodo; o 100%,
125% y 150% cuando no se puede reproducir la matriz
d l analito)
del li )

d. Calcular el % de Recuperacin con la frmula:

% Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o de


referencia) * 100%

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Estimacin de la Exactitud
Agregando cantidad conocida del estndar al
producto
Criterio de Aceptacin y Documentacin:
El porcentaje de recuperacin puede estar entre
90 y 110% del valor terico. Una recomendacin
+/ 4 veces la desviacin estndar
es usar +/-
relativa.
Para Disolucin: 97% - 103%
Para Muestras biolgicas: 15% del valor
verdadero

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Estimacin de la Exactitud
Agregando cantidad conocida del estndar al producto
p
Criterio de Aceptacin y Documentacin:
Para Trazas: Menor a 100 ppb: 60% - 110% de
recuperacin
Mayor a 100 ppb: 80% - 110% de
recuperacin
Menos de 1 ppb: 70% - 120% de
recuperacin
p

Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del


ensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el
promedio,
di la
l desviacin
d i i estndar,
t d desviacin
d i i estndar
t d
relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de
recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro
de los resultados en una hoja de datos.

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Estimacin de la Exactitud
2. Comparando los resultados de un estndar o Material
de Referencia Certificado

Determinar por duplicado el valor promedio del estndar


o material de referencia certificado por el mtodo a
validar.
lid C
Comparar ell resultado
lt d obtenido
bt id con ell valor
l
declarado.

Tomar en cuenta la disponibilidad y estabilidad del


estndar o MRC, as como la incertidumbre que tenga el
valor verdadero.

La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de 30


determinaciones: 5 concentraciones y 6 determinaciones
concentracin
de cada concentracin.

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Estimacin de la Exactitud
2. Comparando los resultados de un estndar o Material de
Referencia Certificado
Criterio de Aceptacin y Documentacin:
El porcentaje de recuperacin puede estar entre 98 y 102%
del valor terico o 2% de error relativo. Se calcula con la
siguiente frmula:

% Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o de


referencia) * 100%

Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del


ensayo y el porcentaje de recuperacin.
recuperacin Calcular el
promedio, la desviacin estndar, desviacin estndar
relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de
recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de
l s resultados
los s lt d s en
n una
n hoja
h j de
d datos.
d t s

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Estimacin de la Exactitud
3. Comparando los resultados con un mtodo oficial
con exactitud
exact tud bien
b en definida
def n da

La muestra debe ser analizada utilizando el mtodo


a validar y un segundo mtodo bien caracterizado,
caracterizado
el cual debe tener una exactitud bien definida y
establecida.

Se analizan 6 muestras por duplicado a la


concentracin normal de trabajo por ambos
mtodos.

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Estimacin de la Exactitud
3. Comparando los resultados con un mtodo oficial con
exactitud bien definida

Criterio de Aceptacin y Documentacin:


Se lleva a cabo un anlisis de varianza, del porcentaje de
recuperacin o del error relativo en porcentaje, para
determinar si hay o no diferencia significativa entre la
exactitud de los mtodos comparados.
p

Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor del


ensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el
promedio,
di la
l desviacin
d i i estndar,
d desviacin
d i i estndar
d
relativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje de
recuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de
los resultados en una hoja de datos.

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PRECISIN DE LOS RESULTADOS
ANALTICOS
PRECISIN: Es el grado de concordancia entre
los resultados independientes de una medicin,
medicin
obtenidos en condiciones estipuladas, ya sea de
repetibilidad
p o de reproducibilidad
p y depende
p de
la distribucin de los resultados sin estar
relacionada con el valor verdadero.

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PRECISIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS
Hay 3 niveles para determinar la Precisin del Mtodo:
1.REPETIBILIDAD: Coincidencia entre los resultados de
mediciones
di i sucesivas
i realizadas
li d en las
l mismas
i
condiciones de medicin.
2.REPRODUCIBILIDAD: Coincidencia entre los
resultados de mediciones realizadas en diferentes
condiciones de medicin en un mismo laboratorio o
entre 2 laboratorios.
laboratorios
3.PRECISIN INTERMEDIA: Medida de la precisin de
los resultados de un mtodo en condiciones diferentes
d analista,
de li t d
da, equipo
i y lote
l t de
d reactivos,
ti d t
dentro
del mismo laboratorio. No es necesario determinar
precisin intermedia,, cuando se ha determinado
p
reproducibilidad.
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PRECISIN- REPETIBILIDAD
Para determinar la precisin entre ensayos o
repetibilidad, se trabaja con submuestras de una
muestra homognea, bajo las mismas condiciones
medicin: el mismo procedimiento de medicin, el
mismo observador,
observador el mismo instrumento de medicin,
medicin
en un perodo corto de tiempo. Hay 2 formas de
determinarla:
1. Hacer un mnimo de 9 determinaciones: 3
rplicas a 3 concentraciones diferentes o 9
determinaciones al 100% de la concentracin
normal de trabajo.
2. hacer un mnimo de 6 determinaciones a una
concentracin que corresponda con la de la
muestra problema.
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PRECISIN- REPETIBILIDAD

Criterio de Aceptacin y Documentacin:

Se establece de acuerdo a un valor mximo


aceptable para el parmetro escog
escogido,
do, segn el
tipo de anlisis y su propsito especfico.

Registrar los resultados en el formato de datos,


as como los clculos de la media y los
parmetros de dispersin escogidos: s,s SDR,
SDR
CV o intervalo de confianza.

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PRECISIN INTERMEDIA
Se determina realizando un mnimo de seis
determinaciones al 100% de la concentracin esperada.
(Diferentes das, analistas y equipo).
Criterio de Aceptacin
p y Documentacin:
RSD < 2,0% para macrocomponentes
RSD < 10,0% para componentes menores
RSD < 3,0%
3 0% para mtodos
t d empleados
l d en disolucin
di l i
RSD < 10% para muestras biolgicas

Registrar los resultados, as como los clculos de la media,


la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa
(coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza.
confianza

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PRECISIN- REPRODUCIBILIDAD
Se determina realizando un mnimo de seis
determinaciones al 100% de la concentracin esperada.
(
(Se realiza
li l
las d
determinaciones
i i analizando
li d en diferentes
dif
das, por diferente analista, horas del da, equipos).
Criterio de Aceptacin y Documentacin:
Se espera una variabilidad mayor, que para el caso de la
repetibilidad.
Registrar los resultados, as como los clculos de la media,
la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa
(coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza.
No se realiza precisin intermedia cuando se estima la
reproducibilidad.
d ibilid d

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ERROR EN LOS RESULTADOS ANALTICOS

ERROR: Resultado de una medicin menos un


valor verdadero del mensurando.

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Determinacin de Exactitud y de
Precisin del mtodo analtico
La norma ISO- 5725 nos describe las
cons derac ones que se deben tomar en cuenta para
consideraciones
determinar la exactitud y la precisin de una
medicin:
Contar con un mtodo establecido.
El nmero de factores que cambiarn en la
d t min in
determinacin.
El alcance de medicin.
El nmero de puntos a realizar.
realizar
La disponibilidad de los materiales y quipos.
El nmero de repeticiones
repeticiones.
Cronograma para realizar las mediciones.
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ESPECIFICIDAD
Es la habilidad que muestra un mtodo para
distinguir entre un analito e impurezas conocidas,
conocidas
precursores sintticos, metabolitos, o productos
de degradacin. Esta se muestra en su resolucin
hacia estos componentes.
Documentacin
Imprimir cromatogramas o datos que muestren la
resolucin de un mtodo.
Criterio de Aceptacin
Los componentes contaminantes no deben
interferir con el anlisis del analito en cuestin.
cuestin .

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LMITE DE DETECCIN
Determinar la menor concentracin a la que se detecte el
analito en la matriz de la muestra.
D
Documentacin
t i
Imprimir el cromatograma o registrar la menor
concentracin detectable en una hoja de registro.
Criterio de Aceptacin
No hayy un lmite de deteccin mnimo. Sin embargo,
g p para
mtodos cromatogrficos el lmite superior suele ser un
valor de al menos tres veces la lnea base (o nivel de
ruido) Para otros instrumentos puede ser el lmite de
ruido).
operacin del instrumento, segn lo haya establecido el
fabricante.
Canadian Health Protection Branch (CHPB) establece una
razn de 3:1 entre la seal y el ruido.
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LMITE DE DETECCIN
Para Mtodos No Instrumentales:

Se preparan 10 blancos independientes y 10 blancos


enriquecidos a la concentracin ms baja aceptada.
Una vez preparadas las soluciones,
soluciones se llevan a cabo
las mediciones de cada una y posteriormente se
calcula la desviacin estndar de cada g grupo
p de
datos.

Con estos datos se puede calcular el lmite de


deteccin:

LD = Valor promedio del blanco + 3S

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LMITE DE CUANTIFICACIN
Determinar la menor concentracin en la que un
anal to en la matr
analito z/muestra puede ser determ
matriz/muestra nada
determinada
con la exactitud y precisin requeridas para el
mtodo en particular. Este valor puede ser la menor
concentracin
t i en la
l curva del
d l patrn.
t
Documentacin
Imprimir el cromatograma o anotar el dato de la
menor concentracin cuantificable en la hoja j de
datos. Proveer datos que demuestren exactitud y
precisin requeridas en el criterio de aceptacin.

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LMITE DE CUANTIFICACIN
Criterio de Aceptacin

El lmite de cuantificacin para mtodos cromatogrficos


es la concentracin que proporciona una razn seal a
ruido con una relacin de 10 a 1 y que es menor o igual a
ruido,
10% de la precisin, o una relacin de 20 a 1 y es menor o
igual a 5% de la precisin.

En el lmite de cuantificacin, se deben cumplir los


criterios de aceptacin de exactitud y linealidad. CHPB
establece
bl que ell lmite
l i de
d cuantificacin
ifi i es ell mejor
j
estimado de una concentracin baja, que derive en una
desviacin estndar relativa de aproximadamente
p 10%,,
en, al menos, seis rplicas.
Licda. Lucrecia Arriola 57
LINEALIDAD
Capacidad de un mtodo analtico para generar resultados
directamente proporcionales a la concentracin del
analito o valor del parmetro de la muestra,
muestra dentro de un
rango.

H 2 formas
Hay f d determinar
de d t i l linealidad:
la li lid d

1. Preparar soluciones patrn de por lo menos cinco


diferentes concentraciones del estndar,
que estn
distribuidas regularmente y que cubran del 80%-120% o
50%-150%,
5 5 , del intervalo
nt r a o de tra
trabajo
ajo esperado,
sp ra o, con
diluciones a partir de una misma solucin madre y
analizando en duplicado para cada dilucin, o realizando
por duplicado la solucin madre y analizando 1 vez cada
dilucin.
Licda. Lucrecia Arriola 58
LINEALIDAD
2)Usar seis rplicas por concentracin. Analizar las
soluciones conforme el mtodo en cuestin.

Criterio de Aceptacin y Documentacin:

La curva de
L d calibracin
lib i se grafica
fi colocando
l d l
las
concentraciones de las soluciones en el eje horizontal (x)
y las respuestas
p del instrumento en el ejej vertical (y),
esta relacin debe ser lineal con un coeficiente de
determinacin (r2) de por lo menos 0.98. (Es preferible
0 99)
0.99). Los valores deben caer dentro de una zona
horizontal angosta, los que queden fuera no son
aceptables para ser incluidos en el intervalo normal de
t b j
trabajo.
En donde:
Licda. Lucrecia Arriola 59
LINEALIDAD
CV menor o igual a 2.0% (desviacin estndar relativa o
coeficiente de variacin)
r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlacin es
una medida del grado de asociacin entre las mediciones y
la concentracin del analito)
r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinacin
mide la exactitud con la que se ajusta la curva de
regresin a los valores experimentales de y)
b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la lnea)
m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la
lnea)

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Evaluacin de la Linealidad

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Evaluacin de la Linealidad

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RANGO O INTERVALO
Intervalo entre la concentracin mxima y mnima de
anal to en la cual se puede determinar
analito determ nar al analito
anal to con
un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad
utilizando el mtodo en cuestin.

a) Procedimiento:

V ifi
Verificar que ell mtodo
t d analtico
lti proporciona
i
linealidad, precisin y exactitud aceptables cuando
se aplica a muestras que contienen el analito en los
extremos y dentro del intervalo.

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RANGO O INTERVALO
Deben considerarse los rangos especificados mnimos
que se indican
nd can a cont nuac n
continuacin:

Valoracin de macrocomponentes 80-120% de la


concentracin de prueba

Uniformidad de contenido 70-130% o el


i t l ms
intervalo apropiado
i d segn
lla Monografa.
M f

Prueba de disolucin 20% p


por encima
del intervalo especificado.

Cuantificacin de impurezas 50%- 120%


LC o 50%

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RANGO O INTERVALO
Criterio de Aceptacin y Documentacin:

Determinar que los niveles de precisin, exactitud y


linealidad de las mediciones utilizando el mtodo a
validar, en el rango de las concentraciones del analito
cumple con su respectivo criterio de aceptacin.

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VALIDACIN DE MTODOS
MICROBIOLGICOS

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Validar mtodos microbiolgicos requiere:

1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.


2. Usar cepas de referencia y cepas de referencia
certificadas.(Material de referencia).
3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE
FACTORES.
4 Ensayos Interlaboratorios.
4. Interlaboratorios
5. La estimacin de la incertidumbre.

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Lmite de deteccin
El nmero ms bajo de microorganismos que
pueden ser detectados, pero en nmeros que no
pueden ser estimados exactamente.

Lmite de cuantificacin
Aplicado a pruebas microbiolgicas cuantitativas. El
nmero ms bajo de microorganismos,
microorganismos dentro de
una variabilidad definida, que pueden ser contados
bajo las condiciones experimentales del mtodo bajo
evaluacin.
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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Cultivos de referencia
Termino colectivo para la cepa de referencia y los
stocks de referencia.

Material de referencia
Material suficientemente homogneo y estable en
relacin a una o ms propiedades especificadas, el
cual ha sido establecido como idneo para el uso
previsto, en un proceso de medicin.

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Sensibilidad
La fraccin del nmero total de cultivos positivos o
colonias correctamente asignadas en una presunta
inspeccin (7).

Especificidad (selectividad)
La habilidad del mtodo para detectar el rango
requerido de microorganismos que podran estar
presentes en la muestra.

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Los mtodos de ensayos estandarizados se
consideran validados. Sin embargo, el mtodo de
ensayo especfico para ser utilizado por un
determinado laboratorio para el anlisis de un
producto especfico necesita mostrar que es
adecuado para su uso en la recuperacin de
bacterias, levaduras y mohos en la presencia del
producto especfico.
especfico

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
El laboratorio debe demostrar que los criterios de
desempeo del mtodo de ensayo estndar pueden
ser satisfechos por el laboratorio antes de introducir
el ensayo con propsitos de rutina (mtodo de
verificacin) y que el mtodo de ensayo especfico
para el producto especfico es adecuado
(adecuacin del mtodo de ensayo incluyendo
controles positivos y negativos).
negativos)

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VALIDACIN DE MTODOS
MICROBIOLGICOS
Los mtodos de ensayo no basados en compendios
u otras referencias reconocidas deben ser validados
antes de su uso. La validacin debe incluir, cuando
sea apropiado, determinacin de la exactitud,
precisin, especificidad, lmite de deteccin, lmite de
cuantificacin, linealidad y robustez. Potenciales
efectos inhibitorios de la muestra deben ser tomados
en cuenta al ensayar los diferentes tipos de
muestra Los resultados deben ser evaluados con
muestra.
mtodos de estadstica apropiados, como se
describe en las farmacopeas nacionales,
nacionales regionales
o internacionales.
Licda. Lucrecia Arriola 73
VALIDACIN DE MTODOS
MICROBIOLGICOS
Control de calidad interna

El laboratorio debe contar con un sistema de


aseguramiento de calidad interna o control de
calidad (por ejemplo: manejo de desviaciones, uso
de muestras adicionadas, rplicas de ensayos,
participacin en ensayos de aptitud) para asegurar la
consistencia de resultados rutinarios y su
conformidad de acuerdo a un criterio establecido.
establecido

Licda. Lucrecia Arriola 74


VALIDACIN DE MTODOS
MICROBIOLGICOS
Control de calidad interna

La validacin de mtodos microbiolgicos se realiza


especialmente utilizando los resultados del control
interno de la calidad, se estima la repetibilidad y la
reproducibilidad.

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VALIDACIN DE MTODOS

MICROBIOLGICOS
Validar mtodos microbiolgicos requiere:

1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.


2. Usar cepas de referencia y cepas de referencia
certificadas.(Material de referencia).
3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE
FACTORES.
4 Ensayos Interlaboratorios.
4. Interlaboratorios
5. La estimacin de la incertidumbre.

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Definiciones y Frmulas usadas en la
Validacin de Mtodos
1. Desviacin Estndar
1
Es la medida de cmo se dispersan los valores
alrededor de la media en la distribucin de valores.
Se calcula con la frmula:

i= n
1 2
s= xi - x
n -1 i=0
En donde: n es el nmero de valores

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Definiciones y Frmulas usadas en la
Validacin de Mtodos
2. DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPETIBILIDAD
2
Es la desviacin estndar de los resultados de los anlisis
obtenidos bajo condiciones de repetibilidad.
k
1 2
sI ni 1 si
N k i 1

En donde n es el nmero de valores


N es el nmero de repeticiones
k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con
un nivel
i ld de confianza
fi d
dell 95%
2
s i es el cuadrado de la desviacin estndar
Licda. Lucrecia Arriola 78
Definiciones y Frmulas usadas en la
Validacin de Mtodos
3 DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPRODUCIBILIDAD (total)
3.
La desviacin estndar de los resultados de anlisis obtenidos bajo
condiciones de reproducibilidad.

2 2
N k s I k 1 s Z
s
N 1
En donde N es el nmero de repeticiones
k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel
2
de confianza del 95%
si es el cuadrado de la desviacin estndar

sZ2 es el cuadrado de la desviacin estndar entre las


Licda. Lucrecia Arriola repeticiones o series 79
Definiciones y Frmulas usadas en la
Validacin de Mtodos
4 DESVIACIN ESTNDAR RELATIVA (RSD)
4.
Es la comparacin de la desviacin estndar con respecto a la media,
generalmente se expresa en % y se denomina como Coeficiente de
Variacin Se calcula con la siguiente frmula:
Variacin.

s
CV 100 %
x

En donde s es la desviacin estndar

x es el promedio de las mediciones

Licda. Lucrecia Arriola 80


Definiciones y Frmulas usadas en la
Validacin de Mtodos
5 PRECISIN INTERMEDIA
5.
Medida de la precisin de los resultados de un mtodo de ensayo en
condiciones diferentes de analista, da, equipo y lote de reactivos, dentro
del mismo laboratorio con la misma muestra homognea
homognea.

k
1 2
sZ ni xi x
k 1i 1

En donde
n es el nmero de valores
k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel
de confianza del 95%
sZ es la
l ddesviacin
i i estndar
t d entret llas repeticiones
ti i o series
i

Licda. Lucrecia Arriola


x es el promedio de las mediciones
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Protocolo de Validacin

Licda. Lucrecia Arriola 82


Componentes de la Calidad de los
anlisis

Licda. Lucrecia Arriola 83


MUCHAS GRACIAS

Licda. Lucrecia Arriola 84


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