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GUA DE PRCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA DE PRCTICA DE LABORATORIO

BIOQUMICA

ALBERTO GARCA JEREZ


Docente - Director

Bucaramanga
1 Contenido
2 INTRODUCCIN ............................................................................................. 6
3 PRE INFORME DE LABORATORIO................................................................ 8
3.1 Portada....................................................................................................... 8
3.2 El ndice General........................................................................................ 8
3.3 Introduccin................................................................................................ 8
3.4 Revisin bibliogrfica ................................................................................. 8
3.5 Materiales y Mtodos ................................................................................. 9
3.6 Plan de Trabajo .......................................................................................... 9
3.7 Nomenclatura............................................................................................. 9
3.8 Referencias ................................................................................................ 9
3.9 Anexo ......................................................................................................... 9
4 INFORME DE LABORATORIO...................................................................... 10
4.1 Portada..................................................................................................... 10
4.2 Resumen.................................................................................................. 10
4.3 El ndice General...................................................................................... 10
4.4 Introduccin.............................................................................................. 10
4.5 Revisin bibliogrfica ............................................................................... 10
4.6 Materiales y Mtodos ............................................................................... 11
4.7 Resultados ............................................................................................... 11
4.8 Discusin.................................................................................................. 11
4.9 Conclusiones............................................................................................ 11
4.10 Recomendaciones ................................................................................ 11
4.11 Revisin bibliogrfica ............................................................................ 11
4.12 Referencias........................................................................................... 12
4.13 Anexo.................................................................................................... 12
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ........................... 13
5.1 NORMAS PERSONALES ........................................................................ 13
5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS ......... 14
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE INSTRUMENTACIN ................ 15
5.4 NORMAS DE EMERGENCIA .................................................................. 15
5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS...................................................... 15
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS AMINOCIDOS. ......... 17
6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO ........................................................ 20
6.2 REACCIN CON LA NINHIDRINA .......................................................... 21
6.3 REACCIN DE BIURET .......................................................................... 22
6.4 REACCION XANTOPROTEICA............................................................... 23
6.5 REACCION DE MILLON .......................................................................... 24
6.6 REACCION DE SAKAGUCHI .................................................................. 25
6.7 PREGUNTAS:.......................................................................................... 27
7 Practica 3. BIOQUMICAS DE LAS PROTENAS .......................................... 29
7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES ........................................................ 31
7.2 REACCIN DE BIURET .......................................................................... 32
7.3 REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS ....................................... 34
7.4 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PROTENAS: MTODO
DE BRADFORD................................................................................................. 35
7.5 PREGUNTAS:.......................................................................................... 38
8 Prctica 4: IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS .................................. 40
8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ....................................................... 44
8.2 PRUEBA DE BENEDICT ......................................................................... 45
8.3 REACCIN DE FEHLING........................................................................ 46
8.4 REACCIN DE MOLISCH ....................................................................... 47
8.5 PRUEBA DE TOLLENS ........................................................................... 48
8.6 REACCIN DE LUGOL (YODO) ............................................................. 50
8.7 PREGUNTAS........................................................................................... 50
9 Practica 5. CARACTERSTICAS DE LOS CIDOS GRASOS....................... 52
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. ....................................................... 53
9.2 SOLUBILIDAD EN LPIDOS .................................................................... 53
SAPONIFICACIN ........................................................................................ 54
9.3 REACCIN CON EL SUDN III .............................................................. 55
9.4 PREGUNTAS:.......................................................................................... 56
10 BIBLIOGRAFA............................................................................................ 57
Tablas

Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos.............................................................. 17


Tabla 2 Aminocidos proteicos con nomenclatura clsica sistema de tres letras y
sistema de una sola letra, impuesto en gentica molecular. ................................. 18
Tabla 3 Pruebas bioqumicas para identificar aminocidos................................... 19
Tabla 4 Materiales y reactivos............................................................................... 20
Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reaccin de ninhidrina. .......................... 21
Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reaccin de Reaccin de Biuret. ........... 22
Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reaccin Xantoprotica. ........................ 23
Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reaccin de milln. ................................ 24
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reaccin de Sakaguchi.......................... 25
Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminocidos en las diferentes tcnicas. 26
Tabla 11 Descripcin de reactivos y mtodos. ...................................................... 29
Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos......................................................... 31
Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reaccin de Biuret. .............................. 33
Tabla 14 Reaccin De Aminocidos Azufrados, Grupos SH................................. 34
Tabla 15 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0
hasta. .................................................................................................................... 37
Tabla 16 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0
hasta ..................................................................................................................... 37
Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en carbohidratos. ................... 41
Tabla 18 Materiales y reactivos............................................................................. 44
Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azcares reductores) ...... 45
Tabla 20 Reaccin de Fehling (detecta la presencia de azcares reductores) ..... 46
Tabla 21 Reaccin de Molisch. ............................................................................. 47
Tabla 22 Prueba De Tollens.................................................................................. 48
Tabla 23 Reaccin de almidones con lugol (yoduro potsico). ............................. 50
Tabla 24 Clasificacin de lpidos. .......................................................................... 52
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos......................................................... 53
Tabla 26 Determinacin de solubilidad en lpidos. ................................................ 53
Tabla 27 Ensayo de Saponificacin. ..................................................................... 54
Tabla 28 Tincin: Reaccin con el Sudn III. ........................................................ 55
Ilustraciones

Ilustracin 1 Clasificacin de carbohidratos. ......................................................... 41


Ilustracin 2 Molcula de glucosa. ........................................................................ 44
2 INTRODUCCIN

La gua de prcticas de laboratorio introduce al estudiante en los


procedimientos experimentales ms ampliamente usados en bioqumica.
Incluye anlisis de macromolculas como carbohidratos, lpidos, protenas
y cidos nucleicos. El estudiante tambin se familiarizar de las
instalaciones y los equipos usados en las prcticas de bioqumica. Es de
gran importancia la lectura y compresin del documento con anterioridad
a la asistencia de las prcticas, adems del desarrollo de las consultas
que permitan entender cada procedimiento.

Los objetivos de las prcticas del curso de bioqumica son:

1. Que el estudiante sea capaz de comprender e integrar los conceptos


tericos con la actividad prctica incluyendo una adecuada manipulacin
de las tcnicas de laboratorio, desde la actividad procedimental hasta la
entrega de resultados o informe final.

2. Que el estudiante adquiera una preparacin en Bioqumica que le


permita comprender la transversalidad que tiene la actividad prctica,
tanto en otros cursos del programa de estudio como en las actividades
profesionales que l desempear, as mismo que le permitan desarrollar
una actitud de pensamiento crtico y de liderazgo en el trabajo que se de
en el grupo.

3. Que el estudiante realice las a actividades las practicas, teniendo en


cuenta las normas de seguridad y las indicaciones que del docente
responsable de la prctica considere.

4. Que el estudiante adquiera los elementos formativos que incluye:


lectura previa de esta gua, planeacin de la actividad, asistencia a las
prcticas, resolucin de problemas con la metodologa empleada,
interpretacin de resultados y presentacin de resultados en el informe
de laboratorio.
La bioqumica es una rama de la ciencia encargada de descifrar los
mecanismos esenciales de los seres vivos, con una fase terica y una fase
prctica, la primera se da a travs de los distintos referentes bibliogrficos
y el segundo se apoya en el desarrollo de la gua de prcticas de
laboratorio del curso de bioqumica.

El desarrollo del trabajo prctico se apoya en una serie de pasos que van
describiendo el progreso de una tcnica a travs de mediciones, clculos,
observaciones cualitativas y cuantitativas de los procedimientos
planteados en la gua. La prctica de laboratorio integra, en el estudiante
la habilidad de trabajar en el laboratorio, utilizando las tcnicas ms
habituales de un laboratorio bioqumico y aprendiendo a interpretar los
resultados experimentales.
3 PRE INFORME DE LABORATORIO

En la redaccin de los preinformes se deben conjugar los verbos en tiempo


presente atemporal y en tiempo futuro cuando se indiquen las acciones
que se van a realizar. Esta elaboracin es individual.
Ejemplo La centrifuga gira a 1600 revoluciones por minuto.

La estructura de los preinformes es la siguiente:

3.1 Portada
La pgina de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestin encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificacin.
3.2 El ndice General
Presenta toda la informacin del contenido, incluyendo el ndice general,
el ndice de tablas, el ndice de figuras y el ndice de anexos
-ndice General
-ndice de Tablas
-ndice de Figuras
-ndice de Anexos
3.3 Introduccin
Describir las prcticas a desarrollar explicado las principales
caractersticas de las tcnicas, as como, descripcin de objetivos
generales y especficos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
seccin realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
3.4 Revisin bibliogrfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temticas
propuestas por la gua del componente prctico. Se toman los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que se platea para
desarrollar en la gua. Tenga presenta que hay que dar los crditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
3.5 Materiales y Mtodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, as como describir la informacin relvate que
permita el buen desarrollo de la prctica.
3.6 Plan de Trabajo

Primero que todo identifique quien es el docente encargado de la prctica,


describa los principales datos personales, as como la identificacin de la
fecha lugar de la prctica. Tenga presente las normas de bioseguridad y
como debe asistir al desarrollo del componente prctico (Uso de pantaln
jean, zapato cerrado, bata blanca, guantes etc.). Define aqu que
elementos debe tener en cuenta para el desarrollo de la prctica de
acuerdo a las indicaciones que haga el docente de la prctica y la
descripcin que se de en la gua.
3.7 Nomenclatura
La Nomenclatura deber ser presentada en tablas, que presenten
ordenadamente sustancias qumicas o unidades, identificadas con
smbolos, abreviaturas.
3.8 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisin a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus caractersticas
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos, la informacin bsica a ofrecer es Autor(es). /Ao de
publicacin./Ttulo:/subttulo./Mencin del traductor y/o
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario, /Casa
editora. /Pginas o volmenes. / (Mencin de serie)
Esta informacin se detalla el final del documento y su descripcin es de
acuerdo a las normas para trabajos escritos.
3.9 Anexo
En stos se deben colocar toda aquella informacin referente a fichas de
seguridad, reactivos, equipos y otra informacin que se considere
relvate.
4 INFORME DE LABORATORIO
En la redaccin de los informes se deben conjugar los verbos en tiempo
pasado. Esta actividad es grupal.
La estructura de los informes es la siguiente:
4.1 Portada
La pgina de acuerdo a lo establecido por las normas para trabajos
escritos, en el entorno de gestin se encuentra un manual de normas APA.
La portada contiene el nombre la universidad, la escuela a que pertenece
el nombre de los integrantes del grupo con los datos necesarios para su
identificacin
4.2 Resumen
Indicar una breve resea de lo hecho durante la prctica y los objetivos,
principales resultados y las conclusiones del trabajo realizado.
4.3 El ndice General
El contenido, incluyendo el ndice general, el ndice de tablas, el ndice de
figuras y el ndice de anexos
-ndice General
-ndice de Tablas
-ndice de Figuras
-ndice de Anexos
4.4 Introduccin
Describir las prcticas a desarrollar explicado las principales
caractersticas de las tcnicas, as como, descripcin de objetivos
generales y especficos que da lugar al trabajo experimental. Esta es una
seccin realizada, redactando las ideas de los autores o sea ustedes.
4.5 Revisin bibliogrfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temticas
propuestas por la gua del componente prctico. Se toma los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que de platea para
desarrollar en la gua. Tenga presenta que hay que dar los crditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
4.6 Materiales y Mtodos
Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las
precauciones a tener, as como describiendo la informacin relvate que
permita el buen desarrollo de la prctica.
4.7 Resultados
Presentar la informacin sobre el desarrollo de las prcticas de forma
estructurada, completa y ordenada de la actividad experimental.
Presentando grficos, tablas, clculos y dems notas que describa la
ejecucin de la prctica.
4.8 Discusin
La discusin contendr un anlisis crtico de los resultados obtenidos de
la actividad prctica y los conceptos tericos.
4.9 Conclusiones
Derivan de los resultados y la discusin del trabajo.
4.10 Recomendaciones
El trabajo realizado debera mostrar nuevos caminos para otras
experiencias de laboratorio similares. En esta seccin se enumerarn
claramente las actividades que podran realizarse para proyectar la
informacin obtenida en la investigacin.
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisin a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus caractersticas
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos la informacin bsica a ofrecer es Autor(es)./Ao de
publicacin./Ttulo:/subttulo./Mencin del traductor y/o
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario,/Casa
editora. /Pginas o volmenes./ (Mencin de serie )
Esta informacin se detalla el final del documento.
4.11 Revisin bibliogrfica
Consiste en presentar y describir un tema de acuerdo con las temticas
propuestas por la gua del componente prctico. Se toman los principales
aspectos tericos de acuerdo a la metodologa que se platea para
desarrollar en la gua. Tenga presenta que hay que dar los crditos
respectivos a los autores consultados y las ideas resultantes son
redactadas por el estudiante.
4.12 Referencias
Es un conjunto de datos precisos y detallados con los que un autor facilita
la remisin a fuentes documentales, o a sus partes, y a sus caractersticas
editoriales. Por lo general y de acuerdo con la normas para trabajos
escritos la informacin bsica a ofrecer es Autor(es)./Ao de
publicacin./Ttulo:/subttulo./Mencin del traductor y/o
editor./Edicin./Ciudad y/o pas de publicacin en caso necesario,/Casa
editora. /Pginas o volmenes./ (Mencin de serie )
Esta informacin se detalla el final del documento.
4.13 Anexo
En stos se deben colocar toda aquella informacin referente a fichas de
seguridad, reactiva y equipos esta otra informacin que se considere
relvate.
5 Practica 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO

Referente terico seguridad y normas de laboratorio


Se entiende la prctica de laboratorio, como la estrategia pedaggica que
facilita la consolidacin del aprendizaje y el desarrollo de competencias
disciplinares. La prctica de laboratorio puede desarrollarse en una sesin
o en varias sesiones de acuerdo a las indicaciones que se den en la
programacin de cada periodo acadmico.

En el laboratorio se realiza, para el caso del curso de bioqumica, prcticas


experimentales: en donde se aprenden a manipular equipos, reactivos
qumicos, conformndose pequeos grupos de trabajo para el desarrollo
de la actividad. Para llevar a cabo las prcticas de laboratorio se requiere
que el estudiante tenga un conocimiento terico bsico sobre el tema y
lea detenidamente la gua de laboratorio.

5.1 NORMAS PERSONALES

La vestimenta deber ser apropiada y cmoda, que facilite la movilidad


para la actividad que se desarrolla en los laboratorios. Debe cubrir reas
considerables de la piel con pantalones (jeans), blusas con mangas, la
bata y guantes.

Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe


portar en todo momento Bata blanca de Laboratorio.

Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio,


igualmente evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o
introducir lapiceros u otros en boca nariz y odos.

Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar


a las instalaciones del laboratorio se recomienda que se haga cuando est
presente el docente encargado de la prctica, as como no ausentarse
antes de terminar la prctica.
El rea del laboratorio es exclusivamente para realizar el trabajo de la
prctica; cualquier tipo de accin social como cortejar, charlas ajenas a
la prctica e igual que las bromas pueden causar prdida de tiempo y
posibles incidentes de alta gravedad.

5.2 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS

Cuando se tiene que hacer una reaccin qumica se debe escoger el


recipiente adecuado a la cantidad que se va a usar. Los ensayos se hacen
en tubos de ensayo o en placas de gotas, nunca en vasos, matraces, etc.
No usar recipientes alimenticios para contener productos qumicos e
igualmente cualquier recipiente que se utilice para la recepcin productos
es necesario rotular, brindando la mayor informacin sobre la sustancia
contenida.
De los materiales de laboratorio No utilice vidrio agrietado, el material de
vidrio en mal estado aumenta el riesgo de accidente. No deben utilizarse
para pipetear jeringuillas provistas de aguja hipodrmica o aspirar con la
boca pipetas de vidrio. Compruebe la temperatura de los materiales antes
de cogerlos directamente con las manos.

Si cuenta con sistemas de extraccin y renovacin mecnica de aire


activados, mantngalos siempre en funcionamiento. Utilizar las campanas
extractoras siempre que sean posible.
Para detectar el olor de una sustancia, no se debe colocar la cara
directamente sobre el recipiente: utilizando la mano abierta como
pantalla, es posible hacer llega una pequea cantidad de vapor hasta la
nariz. Los frascos deben cerrarse inmediatamente despus de su uso.
Al momento de trabajar con cido, para diluirlos vierta el cido sobre el
agua, nunca al contrario.
No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos
utilizados. Nunca debe sacar sustancias qumicas del laboratorio sin
autorizacin.
5.3 NORMAS PARA LA UTILIZACIN DE INSTRUMENTACIN

Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza se


utilizar un recipiente adecuado.
Se debe mantener perfectamente limpio y seco el lugar dnde se
encuentre situado cualquier instrumento con contactos elctricos. Leer las
instrucciones de uso de los instrumentos.
Debe revisarse el material de vidrio para comprobar posibles fisuras,
especialmente antes de su uso a vaco o presin.

5.4 NORMAS DE EMERGENCIA

En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir
de forma ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya
impartido el Profesor. Localizar al iniciar la sesin de prcticas los
diferentes equipos de emergencia en el correspondiente laboratorio:
Duchas y lavaojos, Botiqun, Absorbente para derrames, Alarma de
emergencia, Salida de emergencia y Recipiente para el vidrio roto.

Al finalizar la prctica, limpia el rea de trabajo y entrega los materiales


utilizados limpios y en buenas condiciones. Por ltimo esperar las
indicaciones para retirarse de las instalaciones del laboratorio.

5.5 MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS.

Se har la discusin sobre las normas de seguridad antes descriptas y las


que encuentran en el Reglamentacin y Normas de Bioseguridad en los
Laboratorios de la
UNAD y Otras Disposiciones.

Identifique la sealizacin que encuentra en el laboratorio, fotografi o


dibuje los pictogramas y describa en el informe de laboratorio que
significan con que elementos de seguridad se cuenta. (Duchas, extintores,
cmaras extractoras, etc.)
Preguntas
a) Escriba el nombre del reactivo y la formula qumica de los
productos usados en la prctica.
Ejemplo, Nitrato de plata (AgNO3)
c) Escriba una propiedad fsica de la sustancia.
Ejemplo, Son cristales blancos Densidad: (20/4): 4,352
d) Mencione posibles riesgos que representa la sustancia para
la salud.
En contacto con la piel y ojos puede provocar irritacin y quemaduras.
Por ingestin puede causar irritaciones en las mucosas de la boca,
garganta, esfago y tracto intestinal.
e) Indique cual es el equipo o la vestimenta de
seguridad necesaria para manipular la sustancia.
Usar equipo respiratorio adecuado. Utilizar guantes y gafas
apropiadas. Utilizar ropa de trabajo adecuada (bata de laboratorio) y
lavarse las manos y la cara antes y al finalizar el trabajo.
f) Resuma la informacin obtenida en el rea de reactividad
del smbolo de diamante
En cuanto a la salud (rombo azul), el nmero 2 indica que es un reactivo
peligroso. En cuanto a inflamalidad (rombo rojo), el nmero 0 indica que
no es inflamable. En cuanto a la reactividad (rombo amarillo), el nmero
0 indica que es estable. En cuanto a algn riesgo especfico (rombo
blanco), no presenta alguno.
6 Practica 2: PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS
AMINOCIDOS.

Referente terico de aminocidos

Los aminocidos se denominan as por tener un grupo amino (-NH2) y un


grupo carboxilo (-COOH).
Es posible agrupar los aminocidos en clases principales basadas en las
propiedades de sus grupos R, en especial de su polaridad, o tendencia a
interaccionar como el agua a pH biolgico (cerca del pH 7.0). La polaridad
de los grupos R vara enormemente desde totalmente apolar o hidrofbico
(insoluble en agua) hasta altamente polar o hidroflico (soluble en agua).

Tabla 1 Clasificacin de los aminocidos.

Grupos R Propiedades de los aminocidos

Apolares Los grupos R de esta clase de aminocidos son apolares e


alifticos hidrofbicos.

Las cadenas laterales de la alanina, valina, leucina e


isoleucina tienden a agruparse entre s en las protenas,
estabilizando las estructuras proteicas a travs de
interacciones hidrofbicas.

Otros aminocidos que conforman este grupo son:


glicina, metionina y prolina.

Aromticos Fenilalanina, Tirosina y Triptfano, con sus cadenas


laterales aromticas, son relativamente apolares
(hidrofbicos). Todos ellos pueden participar de
interacciones hidrofbicas.

Polares sin carga Los grupos R de estos aminocidos son ms solubles en


agua, que los aminocidos apolares, debido a que
contienen grupos funcionales que forman puentes de
hidrgeno con el agua.

Incluye este grupo la serina, treonina, cistena,


asparagina y glutamina.
Cargados Estos aminocidos pueden tener el grupo R cargado
positivamente (bsicos) o negativamente (cidos), siendo
ms hidroflicos que los dems aminocidos.

Los aminocidos en los que los grupos R tienen una carga


neta positiva significativa a pH 7.0 Lisina, arginina e
histidina

Con una carga neta negativa a pH 7.0 son: aspartamo y


el glutamato.

La cadena R es de estructura variable y es la responsable de las caractersticas particulares de los AA y de su


clasificacin, en funcin de sta podemos agrupar a los 20 aminocidos, en diversas categoras as mismo, la
nomenclatura puede hacerse utilizando un cdigo de tres letras o de una, tal como se observa en la
siguiente tabla:

Tabla 2 Aminocidos proteicos con nomenclatura clsica sistema de tres letras y sistema de
una sola letra, impuesto en gentica molecular.

Nomenclatura

Una Tres Nombre


Clasificacin
letra letras

A Ala Alanina

G Gly Glicina

I Ile Isoleucina Ae
Apolares alifticos

L Leu Leucina Ae

V Val Valina

F Phe Fenilalanina Ae

Apolares aromticos
W Trp Triptfano Ae

C Cys Cisteina
Apolares con azufre
M Met Metionina Ae

N Asn Asparagina Polares alifticos y sin


Q Gln Glutamina carga
S Ser Serina

T Thr Treonina Ae

Y Tyr Tirosina Polar aromtico y sin


carga

R Arg Arginina
Polar con carga
H His Histidina Ae
positiva
K Lys Lisina

D Asp Ac. Asprtico o Aspartato Polar con carga


E Glu Ac. Glutamico o Glutamato negativa

P Pro Prolina Iminoacido


Ae = Aminocido esencial
Tomado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de bioqumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Tabla 3 Pruebas bioqumicas para identificar aminocidos.


Prueba bioqumica Descripcin de la reaccin qumica entre los
aminocidos y los reactivos.

El grupo alfa-amino de los aminocidos forma


complejos coloreados con la ninhidrina: violeta
Reaccin con la azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo
ninhidrina grupo amino es primario, amarillo para la prolina e
(Hidrato de hidroxiprolina y caf para la asparagina que tiene un
tricetohidrindeno) grupo amido en la cadena lateral. Esta reaccin
tambin identifica los grupos alfa-amino libres
presentes en pptidos y protenas

El anillo fenlico tiene un comportamiento


caracterstico frente a las sales de Mercurio a pH
Reaccin de Milln cido, formando complejos color rojo ladrillo con el
anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la
contienen.

Los anillos aromticos presentes en algunos


aminocidos reaccionan con cido ntrico
Reaccin concentrado formando nitroderivados de color
Xantoprotica amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin
permite reconocer la presencia de Tirosina,
Fenilalanina y Triptfano.
El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de
Reaccin de la Arginina reacciona con soluciones de alfa naftol en
Sakaguchi presencia de Bromo en medio alcalino formando
complejos coloreados rosados o rojos.

La presencia de anillos aromticos fenlicos o


nitrogenados en la cadena lateral de los Aminocidos
se puede identificar mediante la reaccin con cido
Reaccin de Ehrlich sulfanlico y nitrito de Sodio por formacin de sales
de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as
detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o
formando pptidos y protenas.

El anillo indlico presente en la cadena lateral de los


Reaccin de alfa-aminocidos libres o haciendo parte de pptidos
Adamkiewick o y protenas se puede reconocer mediante reaccin
Hopkins Cole con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma
complejos de coloracin violeta o

Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cistena


y Cistina se reconocen por la formacin de
Reaccin con acetato precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris
de Plomo alcalino oscuro o negro que se forman cuando reacciona con
Acetato de Plomo en medio alcalino.

6.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO


Tabla 4 Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

NaOH Gradilla 2

Sulfato cprico Pinza para tubos 2


(CuSO)

cido Pipetas Pauster con bulbo 4


actico(CH3COOH)

Cloruro de sodio Beaker o vasos de precipitados de 500 mL 5


(NaCl)

albmina Estufa 1

cido ntrico (HNO3) Cmara de flujo laminas 1


Hidrxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 4
(NaOH) ml.

Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4

Naftol

Hipoclorito de sodio

Reactivo de
Hopkins- Cole

cido sulfrico
(H2SO)

Reactivo de Milln

Aminocidos:
Glicina, tirosina,
triptfano,
fenilalanina y
arginina

Fenol

Albumina de huevo

Procedimiento

6.2 REACCIN CON LA NINHIDRINA

El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con


la ninhidrina: violeta azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo
grupo amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y caf
para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral.
Esta reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes
en pptidos y protenas. Precauciones la ninhidrina es toxica.

Tabla 5 Procedimiento a realizar para la reaccin de ninhidrina.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
con 1.5 mL Preparar los tubos de Agregar 2 ml de
1 ninhidrina
de Glicina1% ensayo. solucin de
ninhidrina (0.3%)
con 1.5 mL
2 de ninhidrina
Agregue a cada tubo de
Albmina1%
ensayo 1.5mL de la
con 1.5 mL solucin correspondiente.
3 de Tirosina ninhidrina

1%
2 ml de solucin (0.3%)
con 1.5 mL de
4 ninhidrina de ninhidrina a cada 1.5 ml de solucin
Glicina 1%
tubo. respectiva
con 1.5 mL de
5 ninhidrina +
Triptfano 1%
Tubos de ensayo en un Bao de agua
bao de agua hirviente hirviente por 10
por unos 10 minutos. minutos.
con 1.5 mL de
6 ninhidrina
Leucina al 1%
Observar y tomar
apuntes de los cambios.

6.3 REACCIN DE BIURET

Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los


aminocidos ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH
que se destruye al liberarse los aminocidos. El reactivo de Biuret lleva
sulfato de Cobre (II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se
une con los enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta
(Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de
protenas.

Tabla 6 Procedimiento a realizar para la reaccin de Reaccin de


Biuret.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 5 ml de NaOH 2,5N
solucin de
1 + Preparar los tubos de 1 ml de
Leucina al
ensayo.
1% sulfato cprico NaOH 2,5N

NaOH 2,5N +
con 1.5 mL
Agregue a cada tubo
2 de + 3 gotas de solucin
de ensayo agregue 1
Albmina1% de sulfato cprico
sulfato cprico ml de
al 1%
NaOH 2,5N NaOH 2,5N de la
con 1.5 mL solucin
3 de Tirosina + correspondiente.
1%
sulfato cprico
NaOH 2,5N Agregue 3 gotas de
con 1.5 mL
4 de Glicina + solucin de sulfato
1% cprico al 1% a cada
5ml de solucin
sulfato cprico tubo de ensayo.
respectiva

Agite cada tubo de


con 1.5 mL NaOH 2,5N ensayo
de
5 +
Triptfano
1% sulfato cprico Observar y tomar
apuntes de los
cambios.

6.4 REACCION XANTOPROTEICA.


Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con
cido ntrico concentrado formando nitroderivados de color amarillo o
anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de
Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.

Tabla 7 Procedimiento a realizar para la reaccin Xantoprotica.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 1.5 ml Agregue, 0,5 ml de


de solucin HNO3 HNO3
1 Preparar los tubos de
de Triptfano + ensayo. +
1%
NaOH

Agregue, 0,5 ml de HNO3


concentrado en cada
HNO3
tubo, en la campana de
con 1.5 mL + extraccin.
2 de
Albmina1% NaOH
1.5 ml de solucin
Retire los tubos del bao respectiva
y djelos enfriar.
HNO3 +

con 1.5 mL + Bao de agua
3 de Metionina Agregue lentamente 1 ml hirviente por 10
1% NaOH de Amoniaco (NH4OH) minutos.
concentrado en la
+
campana de extraccin o
1.5 mL. de NaOH al 40%, Agregue 1 ml de
HNO3 Amoniaco (NH4OH)

con 1.5 mL 1.5 mL de NaOH al
de +
Observar y tomar 40%.
4
Fenilalanina NaOH apuntes de los cambios.
1% +

observe el cambio
de color

6.5 REACCION DE MILLON

El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales


de Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo
fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen.

Tabla 8 Procedimiento a realizar para la reaccin de milln.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 1.5 ml Reactivo de Agregue 15 gotas del Reactivo de


de solucin Milln Milln
1 Preparar los tubos de ensayo.
de Tirosina
1% + +
sulfato cprico

Reactivo de agregue 15 gotas del Reactivo de Milln


con 1.5 mL Milln a cada tubo de ensayo
2 de
+
Albmina1%
sulfato cprico Agregue 3 gotas de solucin de sulfato
cprico al 1% a cada tubo de ensayo.
Reactivo de
Milln 1.5 ml de solucin respectiva
con 1.5 mL
3 de Leucina +
+ Retire con cuidado los tubos de ensayo
1%
del bao de Mara y colquelos en la
sulfato cprico Bao de agua hirviente por 10
gradilla.
minutos

+
Observar y tomar apuntes de los
Dejar enfriar.
cambios.

6.6 REACCION DE SAKAGUCHI

El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina


reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio
alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos
Tabla 9 Procedimiento a realizar para la reaccin de Sakaguchi.
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

Hidrxido de Sodio Enfre en bao de hielo por 10


(NaOH minutos.
Preparar los tubos de ensayo.
con 5 mL de + +

1 solucin de
alfa-naftol 1 ml de Hidrxido de Sodio (NaOH) al
Arginina 1% Enfre en bao de hielo por 10 minutos. 5%
+
+
hipoclorito de Sodio
1 ml de Hidrxido de Sodio (NaOH) al 5% a Dejar enfriar 10 minutos.
Hidrxido de Sodio cada tubo de ensayo.
(NaOH +

+ 2 gotas de alfa-naftol al 1%.
con 1.5 mL de Dejar enfriar 10 minutos.
2
Albmina1% alfa-naftol +

+ 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
Agregue con un gotero, 2 gotas de alfa-naftol 10%.
hipoclorito de Sodio al 1% a cada tubo de ensayo.

Hidrxido de Sodio
con 1.5 mL de
(NaOH
3 protena de Agregue 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
trigo 1%. 10% a cada tubo.
+
alfa-naftol

+ Observar y tomar apuntes de los cambios.

hipoclorito de Sodio

Hidrxido de Sodio
(NaOH

+
con 1.5 mL de
4 5 ml de solucin respectiva
Leucina alfa-naftol

hipoclorito de Sodio

Tabla 10 Resumen de las reacciones de aminocidos en las diferentes tcnicas.

NINHIDRINA

(-) incolora (+) Violeta o (+) Rojo o


amarillo claro amarillo
No es protena, fuerte
protena ni polipptido o Hidroxiprolina
aminocido aminocido o prolina

BIURET

(-) Azul o (+) Violeta


amarillo Protenas y
aminocidos polipptidos

XANTOPROTICA
COAGULACIN

(-) Incoloro (+) Amarillo, (-) No (+) Coagula


naranja o coagula
Otros Albminas o
verde
aminocidos globulinas
Tirosina,
fenilalanina o Histonas,
triptfano protaminas o
polipptidos

ADAMKIEWICK o
HOPKINS COLE SULFATO DE AMONIO

(+) Azul o (-) Incoloro (+) Precipita (-) No


violeta Globulinas Precipita
Tirosina o
Triptfano Fenilalanina Albminas

MILLN

(+) Rojo (-) Incoloro

Grupo SH Tirosina Fenilalanina

SAKAGUCHI

(+) Negro o
(-) Incolora gris
(+) Rojo
Otros Cistena,
Arginina
aminocidos cistina,
metionina

Tomada:

6.7 PREGUNTAS:

Escriba la reaccin para cada una de las pruebas realizadas.


Proponga de acuerdo a la pruebas una clasificacin de los aminocidos
utilizados y relacione la importancia de la aplicacin de algunas de estas
pruebas aplicadas a otras reas del conocimiento como: microbiologa,
qumica de alimentos entre otras.
Para el siguiente pentapptido, diga cuales pruebas y porque sern
positivas. (ALA-
VAL-GLY-GLU-LYS)
Defina los siguientes trminos: aminocidos, protenas, anlisis
cualitativo, cuantitativo.
7 Practica 3. BIOQUMICAS DE LAS PROTENAS

Referente terico de protenas y aminocidos.


Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras
clulas. Los aminocidos (compuestos orgnicos) son los ladrillos de
construccin de la protenas. Los aminocidos se agrupan de acuerdo con
su comportamiento qumico. La sntesis de las protenas ocurre mediante
la unin entre s de las cadenas de aminocidos. Los distintos aminocidos
imparten diferentes comportamientos qumicos en la estructura de
las protenas. Debido a la presencia de diferentes aminocidos en las
uniones peptdicas las protenas reaccionan con una variedad de
compuestos formando productos coloreados.

Los aminocidos tiene tres tipos de reacciones qumicas importantes: (1)


reacciones debido a la presencia del grupo carboxilo (COO- ), (2)
reacciones debidas al grupo amino (NH), y (3) reacciones debido al grupo
R.
Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son generales
y se dan para todos los aminocidos. Las reacciones del radical R son
reacciones especficas; por ejemplo, cistena da una reaccin para azufre,
triptfano da ciertas reacciones de color debido a que su molcula
contiene el grupo indol, tirosina da otras reacciones de color debido a su
grupo fenlico, etc.

Existen reacciones de coloracin que son especficas para aminocidos de


esas protenas y son importantes tanto para la deteccin como para el
dopaje de aminocidos y protenas. Existen tambin reacciones generales
porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las protenas
como grupos amino o uniones

Tabla 11 Descripcin de reactivos y mtodos.


Mtodo Descripcin Desventajas

Biuret Gornell AG, C. J. Bardawill, and M. M. El mtodo se usa para


DAVID. Determination of serum soluciones que tienen de
proteins by means of the biuret.
reaction. J. BioZ. Chem. 177: 751- 0.5 a 10 mg
766, 1949 protena/ml.

Se basa en la reaccin de sales de


Cu+2 con molculas que contienen
Es un mtodo poco
ms de dos enlaces peptdicos en un
sensible. Es til cuando
medio alcalino; el cobre es reducido
se quiere analizar
a Cu+ formando complejos color
grandes lotes de
prpura que tienen un mximo de
protena.
absorcin a 540 nm.

Lowry Lowry, OH, NJ Rosbrough, AL Farr,


and RJ Randall. J. Biol. Chem. 193:
265. 1951
Este es un mtodo muy
sensible, por lo que
Resulta de la reaccin de Biuret permite trabajar con
sobre los enlaces peptdicos, adems soluciones muy diluidas
de la reduccin del reactivo de de protenas (0.02 - 0.5
fosfomolibdato-fosfotungstato (Folin- mg protena/ ml)
Ciocalteu) por las protenas
pretratadas con cobre en medio
alcalino, dando una coloracin azul,
determinado a 650 nm.

El Cu+ y los grupos R de la tirosina,


triptofano y cistena reaccionan con
el reactivo de Folin, produciendo un
producto inestable que es reducido a
azul de molibdeno/tungsteno.

Bradford Bradford, M. M. (1976) Anal. Muestra interferencias


Biochem. 72, 248 con detergentes

Basado en el Azul Brillante de


Coomasie G-250 cambia de rojo a
azul, al unirse a residuos aromticos
y arginina en las protenas.

La reaccin entre el colorante y la


protena es muy rpida
(aproximadamente 2 min), y el
completo protena-colorante
permanece disperso en solucin por
un tiempo relativamente largo.

Rango de deteccin: 0.5-10 mg


protena/ml.

7.1 PROCEDIMIENTO Y MATERIALES

Tabla 12 Materiales y Materiales y reactivos.


Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo ninhidrina Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

NaOH Gradilla 2

Sulfato cprico (CuSO) Pinza para tubos 2

cido Pipetas Pauster con bulbo 4


actico(CH3COOH)

Cloruro de sodio (NaCl) Beaker o vasos de precipitados de 500 5


mL

albmina Estufa 1

cido ntrico (HNO3) Cmara de flujo laminas 1

Hidrxido de sodio Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 4


(NaOH) 10 ml.

Acetato de Plomo Pera de goma para pipetas 4

Naftol Vidrios reloj grandes

Hipoclorito de sodio Probeta 100 ml

Reactivo de Hopkins- Baln aforado de 25 ml


Cole

cido sulfrico (H2SO) Agitador de vidrio

Reactivo de Milln Balanza analtica

Aminocidos: Glicina, Espectrofotmetro


tirosina, triptfano,
fenilalanina y arginina
Fenol Micropipeta 10 L

Albumina de huevo Micropipeta 20- 200 L

Agua destilada Micropipeta 20- 200 L

cido fosfrico Micropipeta 200-1000 L

Etanol 1 caja con puntas de 200 L


(amarillas) para micropipeta

1 caja con puntas de 200 L


(amarillas) para micropipeta

1 caja con puntas de 1000 L (azules)


para micropipeta.

Agitador vrtex mltiple para tubos

7.2 REACCIN DE BIURET

Entre las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven


por tanto para su identificacin, destaca la reaccin del Biuret. Esta
reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos
ya que se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye
al liberarse los aminocidos. El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre
(II) y sosa. El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los
enlaces peptdicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya
intensidad de color depende de la concentracin de protenas.

Tabla 13 Procedimiento a realizar para la reaccin de Biuret.


Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

CuSO4 al Preparar los tubos de


con 3 mL de 1% ensayo.
4 a 5 gotas de
solucin de
1 + solucin de CuSO4
Albmina de
al 1%
huevo 1% hidrxido Aadir de 4 a 5 gotas
sdico de solucin de CuSO4al +
1%
con 3 mL de CuSO4 al 2 ml hidrxido
solucin de 1% sdico
aminocidos
2 + Aadir 2 ml de solucin
Tirosina,
de hidrxido sdico al
Triptfano o hidrxido
20%.
Fenilalanina. sdico

CuSO4 al
1% Agitar para que se
con 3 mL de mezcle.
3 +
Leche 1%

hidrxido
sdico Observar y tomar
apuntes de los
CuSO4 al cambios.
1% con 3 mL de
con 3 mL de solucin respectiva
4 Aceite de +
cocina +
hidrxido
sdico Agitar y observar
color violeta, azul o
CuSO4 al amarillo.
1%
con 3 mL de
5 +
Glucosa
hidrxido
sdico
7.3 REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS

Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de


sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin
de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Tabla 14 Reaccin De Aminocidos Azufrados, Grupos SH.


Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

hidrxido Preparar los tubos de 2 ml hidrxido


sdico ensayo. sdico
con 3 mL de
solucin de + +
1
Albmina de acetato de Aadir 2 ml de solucin de solucin de
huevo 1% plomo hidrxido sdico al 20%. acetato de
plomo al 5%

+
hidrxido Aadir 10 gotas de
con 3 mL de sdico solucin de acetato de
solucin de plomo al 5%
aminocidos +
2
Tirosina, acetato de
Triptfano o plomo Calentar el tubo hasta
Fenilalanina. ebullicin.


hidrxido
sdico Observar y tomar apuntes con 3 mL de
de los cambios. solucin
con 3 mL de +
3 respectiva
Leche 1% acetato de
plomo +

El precipitado de color Calentar el


negruzco indica que se ha tubo hasta
con 3 mL de hidrxido formado sulfuro de ebullicin.
4 Aceite de sdico
cocina +
acetato de Plomo, utilizndose el
plomo azufre de los aminocidos

hidrxido
sdico

con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo

7.4 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE PROTENAS: MTODO


DE BRADFORD.

Prctica sugerida de acuerdo a la disposicin de los recursos.


INTRODUCCION

Existen varios mtodos para determinar la concentracin de protenas de


una muestra, tales como la determinacin de la absorbancia a 280 nm, o
mediante la formacin de derivados coloreados de las protenas, base de
los mtodos de BIURET o de LOWRY. En estos casos se forma un complejo
coloreado de cobre con el enlace peptdico; en el mtodo de Lowry,
adems del complejo anterior tambin se forma un derivado de las
tirosinas que contribuye a la absorbancia total.

El mtodo de Bradford se basa en el empleo de emplea un colorante


hidrofbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de cido fosfrico
tienen un color pardo y que, al encontrarse en el entorno hidrofbico del
interior de una protena, origina un color azul intenso que se puede medir
fcilmente. Este mtodo depende, pues de la interaccin relativamente
inespecfica entre un colorante hidrofbico y las protenas, por lo que es
relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como restos
de detergente y lquidos orgnicos como el metanol.
La determinacin de protenas por el mtodo de Bradford consiste en la
cuantificacin de la unin de un colorante, el Azul de Coomassie G-250,
a la protena, comparando esta unin con la de diferentes cantidades de
una protena estndar (Albmina de Suero Bovino (BSA)). La
cuantificacin se hace midiendo la absorbancia en un espectrofotmetro,
a 595 nm, y graficando la absorbancia vs la concentracin de protenas,
obteniendo una curva de calibracin de la protena estndar. Con esta
curva de calibracin, se puede interpolar la concentracin de protenas en
una muestra al medir su absorbancia a 595 nm.

1- Reactivo de Bradford
Azul de coomasie G-250 5 mg
Etanol 2.5 ml
cido fosfrico 5 ml
Agua Hasta 50 ml
Mezclar en el orden indicado, disolver con agitacin y a continuacin filtrar

2-Patrn de albmina. Disolver 10 mg de albmina bovina en 10 ml de


agua destilada, con lo que tenemos una disolucin madre con una
concentracin de 1 mg/ml.

1-Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0 hasta


60 g; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 l.

Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolucin madre de albmina


bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.

METODO

1-Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango desde 0 hasta


60 g; de tal manera que el volumen final en cada tubo sea de 300 l.
Mezclar para ello el volumen adecuado de la disolucin madre de albmina
bovina de un 1 mg/ml y el correspondiente volumen necesario de agua,
de acuerdo con la siguiente tabla.

Tabla 15 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango


desde 0 hasta.
g (prot) 0 10 20 30 40 50 60

l (alb) 0 10 20 30 40 50 60

l (agua) 300 290 280 270 260 250 240

l total 300 300 300 300 300 300 300

2-Preparacin de tres diluciones de la muestra problema:

Hacer una dilucin 1:20 de la leche comercial; a continuacin realizar


las diferentes diluciones de acuerdo con la siguiente tabla.
Tabla 16 Preparar la curva patrn de albmina bovina en un rango
desde 0 hasta
Leche diluida A B C

V. leche (l) 20 25 30

V. agua (l) 280 275 270

V. total 300 300 300

Finalmente aadir 3 ml del reactivo de Bradford a todos los tubos; tanto


a las diluciones que contienen la albmina como a las que contienen la
leche diluida. Agitar los tubos y a continuacin proceder a la lectura de la
absorbancia a 595 nm en el colorimetro.

RESULTADOS
1- Elaboracin de la recta patrn. Para ello representar en el papel
milimetrado adjunto la absorbancia de cada uno de los tubos que
contenan albmina bovina frente a la cantidad de protenas
correspondiente. Si se dispone de una calculadora con capacidad para
hacer rectas de regresin, compruebe el coeficiente de correlacin de la
recta obtenida. En cualquier caso determine la pendiente de la recta.

2- Para las tres diluciones del problema, interpolar la absorbancia


obtenidas sobre la recta representada para saber la cantidad de protenas
presentes en cada una de ellas. Alternativamente, haga el clculo
mediante la pendiente de la recta.

3- Teniendo en cuenta los volmenes de muestra usados en cada caso y


teniendo en cuenta la dilucin realizada, calclese la concentracin de
protenas en la muestra analizada. Dar el resultado en gramos de
protenapor 100 ml de leche.

7.5 PREGUNTAS:

Cules son los principales mtodos colorimtricos usados en la


determinacin de protenas?
Cul es la reaccin de un alfa-aminocido y ninhidrina?
Cul es la reaccin con el reactivo de Biuret?
Qu protenas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?

Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo? 2. Cul


de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin? 3.
Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?
4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret? 5. Una protena coagulada
podra dar la reaccin del Biuret? 6. Si se realiza la reaccin del Biuret
sobre un aminocido como la Glicina es positiva o negativa? Por qu?
8 Prctica 4: IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

Referente terico.

Los hidratos de carbono constituyen el grupo de biomolculas ms


abundante sobre la superficie terrestre, representando aproximadamente
el 75 % de la materia orgnica existente. En ocasiones, se denominan
tambin carbohidratos, azcares, sacridos o glcidos. Todos son
trminos que hacen referencia a su sabor dulce, o a que poseen la
composicin Cn (H2O)n. Estas molculas usualmente contienen carbono,
hidrgeno y oxgeno en una proporcin de 1:2:1. Los carbohidratos se
clasifican como monosacridos, disacridos o polisacridos, dependiendo
del tamao y la complejidad de la molcula. Los monosacridos se
componen de una sola molcula de azcar. Cuando dos monosacridos se
unen se produce un disacrido, y cuando dos o ms se unen se produce
un polisacrido.

En los animales los carbohidratos son esenciales desde el punto de vista


energtico, ya que muchos rganos y clulas del cuerpo humano, como
el cerebro y los glbulos rojos, obtienen su energa principalmente de la
glucosa. Pero sus funciones no se restringen a ser nicamente fuente de
energa, sino que tambin pueden desarrollar funciones estructurales, de
reconocimiento celular y adhesin. Estructuralmente, un hidrato de
carbono tpico es una cadena hidrocarbonada con varios grupos alcohol y
un carbono ms oxidado, en forma de grupo carbonilo. Este grupo oxidado
puede situarse en el extremo de la cadena (aldehdo), o adyacente, en
posicin 2 (cetonas)
Ilustracin 1 Clasificacin de carbohidratos.

Todos los monosacridos y los disacridos con enlace mono-carbonilo,


cuando se encuentran en solucin a pH alcalino, tienen la capacidad de
reducir otros compuestos. Esta capacidad reside en las caractersticas
del grupo carbonilo (C anomrico en formas cicladas) libre. Esta
propiedad, y por tanto, la presencia de un azcar reductor, se ponen de
manifiesto mediante las reacciones de:

Tabla 17 Diferentes ensayos para reconocimiento en


carbohidratos.
Ensayo Descripcin del ensayo

Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de


carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se
hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos
y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil
furfural los cuales reaccionan con -naftol formando un color
prpura violeta.

Fehling -Fehling A: CuSO4 disuelto en H2O

-Fehling B: NaOH y tartrato Na-K disueltos en agua

(Detecta la presencia de azcares reductores) Los azcares


reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el in
Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo
carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio
fuertemente bsico, como es en este caso el NaOH, el in Cu 2+
formara Cu (OH)2 insoluble, por eso se aade tartrato sdico
potsico en el Fehling B (el reactivo de Fehling consta de dos
componentes: Fehling A y Fehling B) que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.

NaOH +Calor

+R

CuSO2 Cu(OH)2 Cu2O (rojo


(azul) ladrillo)

Reaccin

Benedict (Detecta la presencia de azcares reductores) Se basa en la


reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es
similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil y el
estabilizante (citrato sdico) utilizados hacen que este test sea
ms sensible y estable.

-Sulfato cprico.

-Citrato de sodio.

-Carbonato anhidro de sodio

Barfoed cido actico

Acetato cprico

(Detecta la presencia de monosacridos) El reactivo de Barfoed


es dbilmente cido y es reducido solamente por
monosacridos, formndose como producto de reaccin xido
cuproso.

En medio cido, tan slo los monosacridos son capaces de


reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+ as producido reduce al cido
fosfomolbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

Ioduro Los polisacridos sin ramificar forman complejos caractersticos


cuando reaccionan con yodo. Los ramificados tambin lo hacen,
pero los complejos formados tienen menos intensidad de color.
Seliwanoff Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la conversin
de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensacin
con resorcinol formando as complejos coloreados.
Bial El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual
forma complejos de coloracin slo con las pentosas.
Lugol El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro,
permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por
la formacin de una coloracin azul violeta intensa y el glicgeno
y las dextrinas por formacin de coloracin roja.

Rotacin ptica

Es una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y


determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente
monosacridos, ocasionada por la presencia de centros asimtricos o
quirales en la estructura molecular, los cuales desvan el plano de luz
polarizada. Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la
presentan todas aquellas sustancias denominadas ptimamente activas,
por tener en su estructura centros quirales.

Para la medicin de la rotacin ptica los factores importantes a tener en


cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material
ptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los
cambios en la temperatura ocasionan solo pequeas variaciones en las
medidas de la rotacin.

Los datos de rotacin ptica se representan como |] = rotacin especfica


o | M] = Rotacin molecular, donde:
|| = /LC
: Rotacin observada en grados angulares
L: Longitud en decmetros del paso de luz polarizada a travs de la
muestra
C: Concentracin en gramos por mililitro.
M: Peso molecular

| M | = M x | |/100 cuando el plano de luz polarizada se desva en el


sentido de las manecillas del reloj se antepone un signo positivo al nmero
de grados que fue rotado el plano de luz.
El plano de luz polarizada hacia la derecha se llaman dextrgiros o dextro
rotatorios, y esa caracterstica se indica anteponiendo el signo (+) al
nombre del compuesto. Los compuestos que desvan el plano de luz
polarizada hacia la izquierda se llaman levgiros o levo rotatorios, y esa
caracterstica se indica anteponiendo el signo (-) al nombre del
compuesto.

O H O H Los prefijos D y L no tienen nada que ver


C C con el carcter dextro/levo rotatorio de la
H C OH HO C H molcula, sino que indican la posicin del
HO C H H C OH OH del penltimo carbono en la
H C OH HO C H representacin de Fischer. Para indicar su
H C OH HO C H poder rotatorio hay que utilizar los signos
CH2OH CH2OH (+) y (-). Da la casualidad de que el D-
D-glucose L-glucose gliceraldehdo es dextrgiro (D-(+)-
gliceraldehdo) y de que el L-gliceraldehdo
es levgiro (L-(-)-gliceraldehdo), pero pueden existir compuestos que
pertenecen a la serie D y que son levgiros, como la D-(-)-fructosa.

Ilustracin 2 Molcula de glucosa.

8.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.

Tabla 18 Materiales y reactivos.


Reactivos Materiales Cantidad

Reactivo de Benedict Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15


Reactivo Fehling A y Gradilla 2
reactivo Fehling B

Lugol Pinza para tubos 2

Glucosa Pipetas Pauster con bulbo 4

sacarosa Beaker o vasos de precipitados de 500 5


mL

almidn Estufa 1

Fructosa Cmara de flujo laminas 1

Reactivo Fehling A y B Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 4


ml.

-naftol Pera de goma para pipetas 4

Vidrios reloj grandes

Probeta 100 ml

Baln aforado de 25 ml

Agitador de vidrio

Balanza analtica

8.2 PRUEBA DE BENEDICT

Es similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil y el estabilizante


(citrato sdico) utilizados hacen que este test sea ms sensible y estable.

Tabla 19 Prueba de Benedict (detecta la presencia de azcares


reductores)
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de
reactivo de
1 Glucosa al
Benedict Preparar los tubos de Agregue a cada tubo
1%
ensayo. de ensayo 2
con 3 mL de
reactivo de ml de reactivo de
2 sacarosa al
Benedict Benedict
1% Agregue a cada tubo de
ensayo 2 +
con 3 mL
reactivo de
3 de almidn
Benedict
al 1%
con 3 mL ml de reactivo de Bao de agua
de jugo de reactivo de Benedict. hirviente por
4
cebolla al Benedict
10 minutos.
1%
Tubos de ensayo en un
con 3 mL de
reactivo de bao de agua hirviente
5 Fructosa al
Benedict por unos 10 minutos.
1%

Agite cada tubo de ensayo


con 3 mL reactivo de
6
de agua Benedict Observar y tomar apuntes
de los cambios. Positiva 3 ml de solucin
aparece un precipitado respectiva
rojizo, verde o amarillo.

8.3 REACCIN DE FEHLING

Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el in


Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del
azcar se oxida a grupo carboxilo.

Tabla 20 Reaccin de Fehling (detecta la presencia de azcares


reductores)

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 mL de Reactivo Fehling A


1
Glucosa al 1% Reactivo Fehling B Preparar los tubos de ensayo. Aadir reactivo Fehling A y
reactivo Fehling B
con 3 Ml de Reactivo Fehling A
2 +
sacarosa al 1% Reactivo Fehling B Aadir 1 ml del reactivo Fehling A
y 1 ml del Bao de agua hirviente por
con 3 mL de Reactivo Fehling A
3 10 minutos.
almidn al 1% Reactivo Fehling B
Tubos de ensayo en un bao de
con 3 mL de Reactivo Fehling A agua hirviente por unos 10
4 jugo de cebolla minutos.
al 1% Reactivo Fehling B
con 3 mL de Reactivo Fehling A
5
Fructosa al 1% Reactivo Fehling B Bao de agua hirviente por

10 minutos.


con 3 mL de Reactivo Fehling A
6 Observar y tomar apuntes de los
Lactosa al 1% Reactivo Fehling B cambios.

3 ml de solucin respectiva

Reactivo Fehling A: disolver 7 g CuSO4 5 H2O en 100 ml de agua


destilada.
Reactivo Fehling B: 35 g de tartrato de sodio y potasio + 12 g NaOH en
100 ml de agua destilada

8.4 REACCIN DE MOLISCH


La presencia de carbohidratos en una muestra se pone de manifiesto por
la reaccin de Molisch, que a cierto punto es la reaccin universal para
cualquier carbohidrato. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante
del cido sulfrico sobre los hidratos de carbono. En dicha reaccin el
cido sulfrico cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos de la
muestra y la deshidratacin a furfural (en las pentosas) o
hidroximetilfurfural (en las hexosas). Estos furfurales se condensan con
el alfa naftol del reactivo de Molisch (reaccin de Molisch) dando un
producto coloreado.

Tabla 21 Reaccin de Molisch.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

reactivo de Molisch
con 3 mLde de
1 + Preparar los tubos de ensayo. reactivo de Molisch
Glucosa al 1%
H2SO4 +

reactivo de Molisch Agregue dos gotas de reactivo de Incline el tubo y deposite 1


con 3 mL de Molisch mL de H2SO4
2 +
Sacarosa al 1%

H2SO4
reactivo de Molisch Mezcle bien No mezcle
con 3 mL de
3 +
Galactosa al 1%
H2SO4 Incline el tubo y deposite 1 mL de
H2SO4 concentrado deslizndolo
reactivo de Molisch lentamente por la pared del tubo.
con 3 mL de Ribosa
4 +
1%
H2SO4 No mezcle. Slo coloque el tubo en
posicin vertical y observe la
reactivo de Molisch
formacin del anillo rojo violeta que
con 3 mL de
5 + aparece en la zona de contacto de los
Fructosa al 1%
dos lquido
H2SO4 3 ml de solucin respectiva

+
reactivo de Molisch
con 3 mL de coloque el tubo en posicin
6 + vertical y observe la
maltosa al 1%
H2SO4 formacin del anillo rojo
violeta

8.5 PRUEBA DE TOLLENS


En primer lugar, hemos de limpiar el tubo de ensayo donde se realizar
el experimento, hirviendo en ste NaOH al 10%. Entonces, se aaden 3
gotas de la muestra problema (o bien 50 mg de slido), y 2,5 ml de
reactivo de Tollens recin preparado. Agitar el tubo y dejarlo estar
durante 10 minutos. Si al cabo de ste tiempo no se observa reaccin, se
calienta el tubo en un bao de agua caliente.

Tabla 22 Prueba De Tollens.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

NaOH al 5%
con 3 mL de solucin
1 + Preparar los tubos de ensayo. dos gotas de solucin de
Glucosa al 1%
AgNO3 al 5% -naftol

NaOH al 5% aadir 2 gotas de una disolucin de +


con 3 mL de solucin
2 + NaOH al 5% 1 mL de H2SO4
de Sacarosa al 1%
AgNO3 al 5%
NaOH al 5% ml de disolucin acuosa de AgNO3 al
con 3 mL de solucin 5%
3 +
de Galactosa al 1%

AgNO3 al 5%
Agitar el tubo y aadir
NaOH al 5%
con 3 mL de solucin gota a gota y con agitacin NH4OH
4 + 2N, hasta que se consiga disolver el
de Lactosa 1%
precipitado de AgOH
AgNO3 al 5%

NaOH al 5% 3 ml de solucin respectiva
con 3 mL de solucin No mezcle. Slo coloque el tubo en
5 +
de Fructosa al 1% posicin vertical y observe la
AgNO3 al 5% formacin del anillo rojo violeta que
aparece en la zona de contacto de los
NaOH al 5% dos lquido
con 3 mL de solucin
6 +
de maltosa al 1%
AgNO3 al 5%

8.6 REACCIN DE LUGOL (YODO)


La prueba de yodo se da como consecuencia de la formacin de cadenas
de poliyoduro a partir de la reaccin entre el almidn y el yodo presente
en el reactivo de lugol.

La amilosa y la amilopectina son componentes del almidn pero la amilosa


es de estructura lineal, con enlaces (1-4), que forma hlices en donde
se juntan las molculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces (1-4) (1-
6), que forma hlices mucho ms cortas y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.
8.7 REACCIN DE LUGOL (YODO)
La prueba de yodo se da como consecuencia de la formacin de cadenas
de poliyoduro a partir de la reaccin entre el almidn y el yodo presente
en el reactivo de lugol.

La amilosa y la amilopectina son componentes del almidn pero la amilosa


es de estructura lineal, con enlaces (1-4), que forma hlices en donde
se juntan las molculas de yodo formando un color azul oscuro; mientras
que la amilopectina es de estructura ramificada, con enlaces (1-4) (1-
6), que forma hlices mucho ms cortas y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse presentando un color intermedio entre anaranjado
o amarillo.

Tabla 23 Reaccin de almidones con lugol (yoduro potsico).

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de solucin
1 lugol
Glucosa al 1%
Preparar los tubos de Agregar 5 gotas de lugol
con 3 mL de solucin ensayo.
2 lugol
sacarosa al 1%

con 3 mL de solucin
3 lugol Agregar 5 gotas de lugol
almidn al 1%

con 3 mL de solucin
4 lugol
jugo de cebolla al 1% Observar y tomar apuntes
de los cambios.
con 3 mL de solucin
5 de almidn de papa al lugol
1%

3 ml de solucin respectiva

6 con 3 mL de agua lugol


Observar y tomar apuntes de los
cambios.

8.8 PREGUNTAS
Explique por qu el monosacrido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.

Cules son las aplicaciones prcticas de las pruebas estudiadas?


Defina los siguientes trminos: carbono anomrico, centro quiral,
levorrotatorio.

Dibuje los monosacridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa,


clasifquelos segn el nmero de tomos de carbono y la funcin principal

Efectu un enlace hemiacetlico y uno hemicetlico, escriba las


diferencias entre ambos enlaces.

Escriba las funciones: aldehdica, cetnica, alcohlica, cida, colquelas


en orden de reactividad y explique el porqu de ese orden.

Explique en qu consiste la hidrlisis cida de disacridos.

Defina los siguientes trminos: azcar reductor y azcar no reductor, cite


ejemplos.

Efectu un enlace glucosdico.


9 Practica 5. CARACTERSTICAS DE LOS CIDOS GRASOS

Los lpidos (del griego lypos, grasa) son biomolculas orgnicas formadas
bsicamente por
C, H y O, aunque este ltimo elemento se encuentra en proporciones
mucho ms bajas que los dos primeros. Adems, pueden contener P, N y
S. Constituyen un grupo de sustancias muy heterogneas con
caractersticas qumicas diversas, pero con algunas propiedades fsicas
comunes, que podran resumirse en estas dos:
_ Son mayoritariamente insolubles en agua.
_ Son solubles en disolventes orgnicos, tales como ter, cloroformo,
alcanos (ej: hexano), benceno, acetona y alcoholes.

De acuerdo a la estructura qumica los lpidos se clasifican en dos grupos,


de acuerdo al contenido en su composicin cidos grasos (Lpidos
saponificables) o no lo posean
(Lpidos insaponificables).

La saponificacin consiste en una hidrlisis alcalina de la preparacin


lipdica (con KOH o NaOH). Los lpidos derivados de cidos grasos (cidos
monocarboxlicos de cadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones)
y alcohol, que son fcilmente extrables en medio acuoso.

Tabla 24 Clasificacin de lpidos.


Lpidos saponificables Simples Acilglicridos

Cridos

Complejos Fosfolpidos

Glucolpidos

Lpidos insaponificables Terpenos

Esteroides

Prostaglandinas
9.1 MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.
Tabla 25 Materiales y Materiales y reactivos.
Reactivos Materiales Cantidad
Aceite de girasol Tubos de ensayo (140 mm*14mm) 15

Agua destilada Gradilla 2

Hexano Pinza para tubos 2

Acetato de etilo Pipetas Pauster con bulbo 4

Etanol Beaker o vasos de precipitados de 500 mL 5

NaOH Estufa 1

KOH Cmara de flujo laminas 1

Reactivo Sudn III Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml. 4

Pera de goma para pipetas 4

Vidrios reloj grandes

Probeta 100 ml

Baln aforado de 25 ml

Agitador de vidrio

Balanza analtica

9.2 SOLUBILIDAD EN LPIDOS


Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella
se dividen en pequesimas gotitas formando una emulsin de aspecto
lechoso, que es transitoria, puede seprese en reposo, por reagrupacin
de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita
sobre la de agua. Por el contrario, las grasas con solubles en los
llamados disolventes orgnicos como el ter, benceno, xilol, cloroformo,
etc.

Tabla 26 Determinacin de solubilidad en lpidos.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de Aceite 4 mL de agua Preparar los tubos de ensayo. 4 mL de hexano


1
vegetal destilada
con 3 ml de Aceite
2 4 mL de hexano
vegetal
4 mL de hexano

Agite los tubos.

deje reposar unos minutos 3 ml de Aceite vegetal

+
Observar y tomar apuntes de los Agite los tubos
cambios.
+

Dejar en reposo.

Observar y tomar apuntes de los


cambios.

SAPONIFICACIN
Muchos lpidos, como por ejemplo: los cidos grasos, reaccionan con
bases fuertes, NaOH o KOH, dando sales sdicas o potsicas que reciben
el nombre de jabones. Esta reaccin se denomina de saponificacin. Son
saponificables los cidos grasos o los lpidos que poseen cidos grasos
en su estructura.

Tabla 27 Ensayo de Saponificacin.


Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

3 mL de 3 mL de NaOH Agregar manteca en un tubo de


1 ensayo.
aceite vegetal (1 N) Preparar los tubos de ensayo.

3 mL de Agregar 3 mL solucin de NaOH


2 3 mL de KOH
aceite vegetal
(1 N).

Agitar.

Bao de agua hirviente por 3 ml de la solucin de NaOH (1


N).
10 minutos.
+

Dejar enfriar. Bao de agua hirviente por

10 minutos.

Observar y tomar apuntes de los Observar y tomar apuntes de los


cambios. cambios.

Si posible repetir el mismo procedimiento con


KOH

9.3 REACCIN CON EL SUDN III


El Sudn III es un colorante que se utiliza para detectar especficamente
las grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las
grasas. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tie las grasas de color
rojo anaranjado.

Tabla 28 Tincin: Reaccin con el Sudn III.

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo

con 3 ml de 3 ml de Aceite vegetal


1 Aceite Sudan III
vegetal Preparar los tubos de ensayo.

con 3 mL de
2 Aceite Tinta roja Agregar 3mL de aceite vegetal.
vegetal

Agregar 8 gotas de Sudan III

8 gotas de Sudan III

Observar y tomar apuntes de los


cambios.
Observar y tomar apuntes de los
cambios.
9.4 PREGUNTAS:

Qu son los jabones? Cmo se pueden obtener los jabones?


Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
Indica lo que ocurre con las mezcla aceite sudan III y aceite-tinta y
explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.
Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos
de reposo? Y con la de los otros compuestos empleados? A qu se deben
las diferencias observadas entre ambas emulsiones?
Qu ocurre con la emulsin cuando se le aade detergente?
10 BIBLIOGRAFA

Bejarano, L. D. C., & de Qumica, P.GUA DE LABORATORIO DE BIOQUMICA.

Gonzlez, M. P. (2003). Prcticas de laboratorio y de aula Narcea Ediciones.

HERNNDEZ-BERMDEZ, C.GLORIA GUTIRREZ-VENEGAS.

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_2011-1/BQMA-SIB2.PDF

Rivera, E. I. V. (2005). Prcticas de bioqumica descriptiva USON.

TORRES, G. (2013). 6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS PRCTICA no. 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION
DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS. UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA YA DISTANCIA.

Universidad de Bogot, & Jorge Tadeo Lozano. (2014). GUA no 9: ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS.
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Universidad de la frontera, Temuco Chile. (2014). Aminocidos. Retrieved from


http://cmcc.ufro.cl/wiki/doku.php?id=molecular:aas

https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos/reaccion-de-benedict.
http://www.academia.edu/6410068/BIOQUIMICA_INF_4

Universidad Complutense de Madrid. (Marzo de 2007). UCM- Manual de Gestin de Residuos Peligroso. Recuperado el
15 de Enero de 2012, de http://www.ucm.es/info/ucmp/cont/descargas/documento28113.pdf

Lineamientos para el desecho de productos qumicos (s.f.). Disponible 17 de enero de 2013, en


http://xml.cie.unam.mx/xml/dir/seguridad/Lineamientos_para_el_Desechos.pdf

Stoscheck, C.M. (1990): Quantitation of protein. Methods in Enzymology, 182: 50-69


http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/practicasgenerales.htm

http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf

http://veterinaria.uaemex.mx/_docs/603_958_MP%20Bioqu%C3%ADmica.pdf
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
NOMBRE DEL CURSO: BIOQUMICA
RBRICA DE EVALUACIN PRCTICAS DE LABORATORIO.

Criterios de desempeo de la actividad individual

Aspectos
Valoracin alta Valoracin media Valoracin baja Puntaje
evaluados
El estudiante viste ropa
adecuada y lleva el No viste
pelo recogido. Cumple adecuadamente y
PRESENTACIN estrictamente las no cumplen con
EN EL normas de ninguna de las 25
LABORATORIO laboratorio. Bata blanca normas bsicas de
y zapatos cerrados laboratorio.
(25) (0) (0)
El estudiante, asiste
puntualmente, trae al
El estudiante trae al El Estudiante no
laboratorio el gua de la
laboratorio el gua, trae gua, ni
prctica, los clculos
ms no hace una elementos
PREPARACIN necesarios ya
lectura previa de la necesarios para la
PREVIA DE LA planteados y la 25
misma y le faltan los realizacin de la
PRCTICA informacin necesaria
elementos exigidos prctica de
buscada y los
para la prctica. laboratorio.
elementos que
docentes exigi.
(25) (12) (0)
No lleva el pre
informe al
Desarrolla de forma
Desarrolla parte del laboratorio o lo
correcta todas las
pre informe pero lleva pero no
Pre informe exigencias del pre 20
alguna no es correcta. cumple con lo
informe
solicitado en la
gua.
(20) (12) (0)

TOTAL PUNTAJE EVALUACION INICIAL 70


UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
NOMBRE DEL CURSO:
RBRICA DE EVALUACIN UNIDAD X
Criterios de desempeo de la actividad grupal
Aspectos Valoracin Puntaj
Valoracin alta Valoracin media
evaluados baja e
El equipo
realiza la
prctica con
El equipo realiza la
DESEMPE El grupo realiza mucha
prctica con dificultad.
O DEL perfectamente la dificultad. No
Aplica los conocimientos
ALUMNO prctica. Aplican los sabe aplicar los
adquiridos pero con
EN BASE A conocimientos conocimientos
inseguridad. Presenta 30
CONOCIMI adquiridos. Presenta adquiridos.
dificultades en la
ENTOS seguridad en sus Presenta
realizacin de los
DEMOSTRA acciones. dificultades en
clculos.
DOS la realizacin
de los
clculos.
(30 X puntos) (12 X puntos) (0 X puntos)
El Grupos entrega el
informe de laboratorios
con :
- revisa bibliografa
El equipo - realiza la portada,
realiza la introduccin desde
prctica donde plantea los
con mucha objetivos, muestra
dificultad. resultado, concluye y
No sabe reporta la bibliografa en El grupo no
El grupo presenta un
aplicar los normas APA. presenta
informa parcial de la
conocimien - contesta cuestionarios informe de
prctica de laboratorio. 25
tos - resolvi los ejercicios laboratorio.
adquiridos. - entrega informe a
Presenta tiempo
dificultades - Aporta informacin
en la adicional.
realizacin - Aporta fotografas
de los - Elabora las
clculos. conclusiones con
dificultades y
propuestas de mejora.
(15 X puntos) (0 X puntos)
(25 X puntos)

Total de puntos de la prctica 125/500. Discriminados en 70 puntos participacin individual y 55


grupal.