UNIVERSITE DE OUAGADOUGOU

UNITE DE fORMATION ET DE RECHERCHE

EN SCI ENCES DE LA SANTE
UfRISDS

SECTION PHARMACIE
Anne universitaire 2002-2003 thse N 13

CONTRIBUTION A L'ETABLISSEMENT DES VALEURS

DE REFERENCE DE PARAMETRES BIOLOGIQUES CHEZ
LE BURKINABE ADULTE:

Evaluation de cinq paramtres reprsentatifs de l'activit

enzymatique au service de Chimie Biologie du Centre Hospitalier
National Yalgado OUEDRAOGO (CHN-YO) OUAGADOUGOU

THESE
Prsente et soutenue publiquement pour l'obtention du grade de
Docteur en pharmacie (Diplme d'Etat)
Par
Edwige Annick BOUABRE
Ne le 11 Novembre 1975 Abidjan ( Cte d'Ivoire)

DIRECTEUR DE THE5E JURY

Pr. 1. Pierre GUISSOU Prsident: Pr. Odile NACOULMA
Membres:
CO-DIRECTEUR Pr. 1. Pierre GUISSOU
Dr. Jean SAKANDE Pr. Ag. Patrice ZABSONRE
Pr. Ag. Alain BOUGOUMA
 UNIVERSITE DE OUAGADOUGOU

Unit de formation et de Recherche

des Sciences de la Sant
( UFRlSDS )

LISTE DES RESPONSABLES ADMINISTRATIFS

D'irecteur Pr. Amadou SANOU

Directeur Adjoint Pr. Ag. Y. Joseph DRABO
Coordonateur de la Section Pharmacie Pr .Ag. Mamadou SAWADOGO
Coordonateur de la Section Mdecine Pr Amadou SANOU
Coordonateur de la Section Techniciens
Suprieurs Pr Blaise KOUDOGBO
D'irecteur des Stages de la Section Mdecine
(Ouagadougou) Pr. Ag. Y. Joseph DRABO
Directeur des Stages de la Section de Pharmacie Dr Jean Baptiste NIKIEMA
Secrtaire Principal M. TRAORE Fakouo
Chef de Service Administratif M. TAllETA Harouna
et Financier (CSAF)
Responsable de la Bibliothque Mme TRAORE Mariam
Chef de la Scolarit Mme ZERBO Kadi
Secrtaire du Directeur Mme BONKIAN Edwige
Secrtaire du Directeur Adjoint Mme KABRE Hakita

LISTE DES ENSEIGNANTS DE L'UFRlSDS

AU TITRE DE L'ANNEE 2002 1 2003

ENSEIGNANTS PERMANENTS

Professeurs titulaires

Rambr Moumouni OUIMINGA Anatomie organogense

Hilaire TIENDREBEOGO (in memoriam) Smiologie et Pathologies
mdicales
Tinga Robert GUIGUEMDE Parasitologie
Bobilwind Robert SOUDRE Anatomie- Pathologique
Amadou SANOU Chirurgie Gnrale et Digestive
Innocent Pierre GUISSOU Pharmacologie - Toxicologie
Bibiane KONE Gyncologie - Obsttrique
Alphonse SAWADOGO Pdiatrie
Blaise SONDO Sant Publ.ique

Professeurs associs
Blaise KOUDOGBO Toxicologie

Martres de Confrences

Julien YILBOUDO Orthopdie -Traumatologie

Kongor Raphal OUEDRAOGO Chirurgie -Traumatologie
Franois Rn TALL Pdiatrie
Jean KABORE Neurologie
Joseph Y. DRABO Mdecine 1nterne 1Endocrinologie
Jean LANKOANDE Gyncologie-Obsttrique
Issa SANOU Pdiatrie
Ludovic KAM Pdiatrie
Adama LENGANI Nph rologie
Oumar TRAORE N 1 Orthopdie-Traumatologie
Kampadilemba OUOBA Oto Rhino Laryngologie
Piga Daniel ILBOUDO Gastro-entrologie
Albert WANDAOGO Ch'irurgie Pdiatrique
Adama TRAORE Dermatologie Vnrologie
Mamadou SAWADOGO Biochimie
Arouna OUEDRAOGO Psychiatrie
Joachim SANOU Anesthsie- Ranimation
Thophile L. TAPSOBA Biophysique - Mdecine
Nuclaire
Daman SANO Chirurgie Gnrale
Patrice ZABSON RE Cardiologie
Jean Gabriel OUANGO Psychiatrie
Georges KI- ZERBO Maladies 1nfectieuses
Rabiou CISSE Radiologie
Blami DAO Gyncologie- Obsttrique
Alain BOUGOUMA Gastro- Entrologie
Michel AKOTIONGA Gyncologie-Obsttrique
Rasmata OUEDRAOGO/TRAORE Bactrio-Virologie
Maitres-Assistants

Lady Kadidiatou TRAORE Parasitologie

Si Simon TRAORE Chirurgie
Abdoulaye TRAORE Sant Publique
Boubakar TOURE Gynco- Obsttriq ue
Alain ZOUBGA Pneumologie
Boubacar NACRO Pdiatrie
Abel KABRE Neuro-Chirurgie
Mal'mouna DAO /OUATTARA ORL
Nicole Marie KYELEM / ZABRE Maladies Infectieuses
Antoinette TRAORE / BELEM Pdiatrie
Kapoun KARFO Psychiatrie
Timothe KAMBOU Chirurgie
Jean Baptiste NIKIEMA Pharmacognosie
Ali NIAKARA Cardiologie
Andr K. SAMANDOULOUGOU Cardiologie
Pingwend BONKOUNGOU Pdiatrie
Nonfounikoun Dieudonn MEDA OphtaLmologie
Athanase MILLOGO Neurologie
Nazinigouba OUEDRAOGO Ranimation
Diarra YE / OUATTARA Pdiatrie
Laurent OUEDRAOGO Sant Publique
Lassana SANGARE Bactrio- Virologie
Y. Abel BAMOUNI Radiologie
Arsne M. D. DABOUE Ophtalmologie
Claudine Lonie LOUGUE / SORGHO Radiologie
Lucie Valerie Adlal'de NEBIE Cardiologie
Moussa BAMBARA Gyncologie-Obsttrique
Appolinaire SAWADOGO Gastro-Entrologie
Martial OUEDRAOGO Pneumo-Phtisiologie
Pascal Antoine NIAMPA Dermatologie
Emile BANDRE Chirurgie gnrale et digestive
Issa Touriddomon SOME Chimie Analytique
Rasman SEMDE Galnique

Chef de travaux

Jean Bosco OUEDRAOGO Parasitologie

Assistants

T.Christian SANOU (in memoriam) Oto Rhino Laryngologie

Doro SERME (in memoriam) Cardiologie
Hamad OUEDRAOGO Anesthsie- Rani mation physiologie
Alexis ROUAMBA Anesthsie- Rani mation physiologie
M. Thophile COMPAORE Chirurgie
Rigobert TH IOMBIANO Maladies Infectieuses
Raphal DAKOURE Anatomie-Chirurgie
Raphal SANOU (in memoriam) Pneu mo- ph tisiologie
Oumar TRAORE N2 (in memoriam) Radiologie
Vincent OUEDRAOGO Mdecine du Travail
S. Christophe DA Ch'irurgie
Aurlien Jean SANON Chirurgie
Barnab ZANGO Chirurgie
Blandine THIEBA Gyncologie-Obsttrique
Abdel Karim SERME Gastro- Entrologie
Fatou BARRO Dermatologie
GOUMBRI 1 Olga LOMPO Anatomie Pathologique
Moussa KERE Sant Publique
Innocent NACOULMA Orthopdie-Traumatologie
Franoise Danielle MILLOGO/TRAORE Gyncologie-Obsttrique
Z. Thdore OUEDRAOGO Sant Publique
P. And r KOALAGA Gyncologie-Obsttrique
Syranyan SEKOULE Psychiatrie
Dieudonn OUEDRAOGO Chirurgie maxilo-faciale
Moussa OUEDRAOGO Pharmacologie

Assistants Biologistes des Hpitaux

Idrissa SANOU Bactrio-Vi rologie

Harouna SANON Hmatologiel Immunologie
Jean SAKANDE Biochimie
Elie KABRE Biochimie

ENSEIGNANTS NON PERMANENTS

UFR des Sciences de la vie et de la
terre (UFRlSVT)
et
L1FR des Sciences exactes et
Appliques (UFRI SEA)

Professeurs Titulaires
 Akry COULIBALY Mathmatiques
Sita GUINKO Botanique-Biologie Vgtale
Guy V.OUEDRAOGO Chimie Minrale
Laya SAWADOGO Physiologie- Biologie Cellu laire
Laou Bernard KAM ( in memorian ) Chimie
GUENDA Zoologie
Odile NACOU LMA Bioch'imie

Matres de Confrences

Boukary LEGMA Chimie-Physique Gnrale

Franois ZOUGMORE Physique
Adama SABA Chimie Organique
Philippe SANKARA Cryptogamie-Phytopharmacie
Gustave KABRE Biologie Gnrale
Abdoulaye SAMATE Chimie Organique

Matres-Assistants

Makido B. OUEDRAOGO Gntique

Raymond BELEMTOUGOURI T.P. Biologie Cellula'ire
Drissa SANOU Biologie Cellulaire

Assistants

Apolfnaire BAYALA (in memoriam) Physiologie

UFR des Sciences Juridiques Politiques

(UFRlSJP)

Assistants
Jean Claude TAlTA Droit

ENSEIGNANTS VACATAIRES

M. DAHOU ( in mmoriam) Hydrologie

Dr Annette OUEDRAOGO Stomatologie
Dr Adama THIOMBIANO Lgislation Pharmaceutique
Dr Sidiki TRAORE Galnique
Mr Mamadou DIALLO Anglais
Dr Badior OUATTARA Galnique
 Dr Alassane SICKO Anatomie
Dr Sylvestre TAPSOBA Nutrition
Dr Maminata TRAORE / COULIBALy Biochimie
Dr Seydou SOURABIE Pharmacognosie
Dr Flix KINI Chimie
Dr Lamine OUEDRAOGO Biologie Cellulaire
Dr Marie Franoise OUEDRAOGO Mathmatiques
Mme Cecile OUEDRAOGO Anglais

ENSEIGNANTS MISSIONNAIRES

A.U.P .E.L.F.

Pr 0 Lamine DIAKHATE Hmatologie (Dakar)

Pr 0 Abibou SAMB Bactrio-Virologie (Dakar)
Pro Mbayang NDIAYE-NIANG Physiologie (Dakar)
Pr. Emmanuel BASSENE Pharmacognosie (Dakar)
Pr Mamadou BADIANE Chimie Thrapeutique (Dakar)
Pr Babacar FAYE Pharmacologie (Dakar)

Mission Franaise de Coopration

Pro Etienne FROGE Mdecine Lgale

Pr Raphal DARBOUX Histologie- Em bryologie

Mission de ('Universit Libre de

Bruxelles (.!:&.ID

Pro Jean NEVE Chimie Thrapeutique

Pr Viviane MOES
0 Galnique
JE, 1)E,1)lE, CE,
TllAVAI1
 A mon pre cleste

Ta bont envers moi siest renouvele chaque jour de ma vie. Tu as su

rpondre chacun de mes dsirs selon ta volont. Sois en glorifi.

A mes parents
Votre patience, votre indulgence nlont pas eu de limites.

Trouvez, ici le fruit des efforts et endurances que vous vous tes imposs.

En tmoignage, recevez toute mon affection et ma gratitude et que Dieu

vous bnisse.

A toi Jean-Flix

Que de chemin et dl obstacles nous avons parcourus, puisse Dieu dans son

amour et dans sa grce veuillez sur nous tout au long de notre vie

commune. Je t'aime.

A mon grand-frre Charles

Tu as t pOlir moi, un frre ,lin ami ,et un vritable soutien durant ce long

chemin que nous avons parcouru. Puissions-nous rester toujours unis dans

le parcours qui nous reste faire.

A mes petits frres( Alain, Olivier et Jean-Claude)

Ce travail qui est aussi le votre est le prix de plusieurs annes dl efforts.

Restons toujours unis. Je vous aime.

A mes cousins, cousines, tantes et oncles

Toute ma reconnaissance.
... A mes amis (Aubin, Tour, Grard, Oussni) et ceux de eCR

Profonde gratitude pour votre affection et vos soutiens multiformes.

... A Mr Bnao, Mr Kam, Adama, Sonia, Yaya et Franois

Je vous suis trs reconnaissante Pour m'avoir aide dans la ralisation de

ce travai 1. Puisse Dieu dans sa misricorde et dans sa bont vous le rendre

au centuple.

... A mes compagnons de travoil( Franoise, Jack, Amina)

Tout est bien qui finit bien; puissions toujours garder cet esprit d'quipe.

... A mes promotionnaires

En souvenir des moments agrables et difficiles passs ensembles.

Restons toujours solidaires.

...A mes compatriotes

Pour votre prcieuse amiti.

... A mon pays La Cte d'Ivoire

Berceau de mes anctres, terre chrie

...Au Burkina Faso

Tu es pour moi une seconde patrie pour m'avoir accueillie durant ces

annes comme ta fi Ile.

cf{ J{<:)~ Mcf{ITI\R~
RT J(jG-R~
... A notre matre et prsident de jury:

Le Professeur Odile NACOULMA

C'est un grand honneur que vous nous faites en acceptant de prsider
cette thse.
Vos qualits humaines et pdagogiques font de vous un grand maltre .
Veuillez trouver ici, l'expression de notre dfrente gratitude.

... A notre matre et directeur de thse:

Le Professeur 1. Pierre GUISSOU.

Nous avons apprci sa juste valeur votre comptence professionnelle.
Vous avez accept de diriger ce travail pendant des mois durant, votre
laboratoire nous tait ouvert en permanence.
Puisse ce travail, dirig des mains de maltre, satisfaire vos souhaits.

... A notre matre et juge:

Le Professeur Agrg Patrice ZABSONRE

C'est un honneur pour nous que vous ayez accept de siger dans le jury
de cette thse. Vous avez bien voulu nous apporter votre soutien, en
acceptant de lire et de corriger ce travail malgr vos multiples occupations.
Nous voulons vous remercier pour l'intrt que vous avez a'insi port cette
thse.
... A notre matre et juge:

Le Professeur Agrg Alain BOUGOUMA

Nous sommes trs honors de votre prsence dans le jury de cette thse.
Vous avez bien voulu nous apporter votre soutien, en acceptant de Ure et de
corriger ce travaH malgr vos multiples occupations. Permettez-nous de vous
remercier pour avoir accept de siger dans ce jury.

... A notre matre et codirecteur de thse:

Le Docteur Jean 5AKANDE.

Vous nous avez guids pas pas dans la ralisation de ce travail. Votre
gratitude et votre constante disponibilit nous ont merveills. Vos qualits
humaines et scientifiques resteront pour nous un modle.
Soyez assur de notre sincre gratitude et de notre profonde estime.
"Par dlibration, l'unit de formation et de recherche

en sciences de la sant a arrt que les opinions mises

dans les dissertations doivent tre considres comme

propres leurs auteurs et qu'elle n'entend leur donner

aucune approbation ni improbation."

 LISTE DES ABREVIATIONS

ALAT Alanine amino transfrase

ASAT Aspartate amino transfrase

CHNYO Centre Hospitalier National Yalgado OUEDRAOGOO

CNP 2-Chloro-4 nitrophnol

CNPG2 2-Chloro-4 nitrophnyl maltoside

CNPG3 2-Chloro-4 nitrophnyl maltotrioside

GGTou yGT Gamma Glutamyl transpeptidase

IR Intervalle de rfrence

LDH Lactico Dshydrognase

MDH Malate Dshydrognase

NADH Nicotinamide Adnine Dinuclotide rduit

NAD+ Nicotinamide Adnine Dinuclotide oxyd

PAL Phosphatases alcalines

S Ecart-type

TGO Transaminase glutamique oxaloactique

TGP transamin~se glutamique pyruvique

Xou m Moyenne
 SOMMAIRE

INTRODUCTION......................................................................................................... 1
ENONCE DU PROBLEME.......................................................................................... 3
OBJECTIFS DE LETUDE.......................................................................................... 5
PREMIERE PARTIE: RAPPELS BIBLIOGRAPHIQUES
1. CONCEPT DES VALEURS DE REFERENCE EN BIOLOGIE CLINIQUE 6
1. Dfinition . 6
2. Etablissement des valeurs de rfrence . 7
2.1. La slection des individus de rfrence . 8
2.2. la prparation des 'individus pour le prlvement .. 10
2. J. Le traitement des spcimens biologiques . 12
2.4. L'analyse biochimique par des mthodes fiables .. 12
2.5. L'analyse statistique des rsultats obtenus . 12
3. Intrt des valeurs de rfrence . 14
3.1. Intrt dans le diagnostic mdical. . 14
3.2. Intrt dans le pronostic et le suivi thrapeutique .. 14
3.3. Intrt en pidmiologie . 15
Il. LES ENZyMES . 16
1.Gnralits sur les enzymes . 16
1. 1. Dfinition . 16
1.2.Structure . 16
1.3.Localisation des enzymes dans lorganisme . 17
1.4.Nomenclature et classification . 17
1.5.Activit des enzymes . 19
1.5.1.Notion de spcificit des enzymes .. 19
1.5.2.Cintique enzymatique . 20
1.5. 3.Mesure de l'activit enzymatique . 25
2. Enzymologie en Biologie clinique . 29
2.1. Indications des explorations enzymologiques en clinique .. 30
2.1 . 1. Affections Hpatiques . 30
2.1.2. Atteintes Cardiaques .. 32
2.1.3. Affections pancratiques . 33
2.1.4. Autres affections . 34
2.2. Monographie des enzymes tudies . 35
2.2.1. Les transaminases .. 35
2.2.2. La gamma glutamyl transpeptidase . 39
2.2.3. Les phosphatases alca lines . 42
2.2.4. L'alpha amylase . 45
2.3. Donnes des travaux raliss sur les valeurs de rfrence de
l'activit de quelques enzymes 47
 2.3.1. Travaux raliss en Afrique.................................................................. 47
2.3.2. Travaux raliss en Europe................................................................... 50
DEUXIEME PARTIE: ETUDE REALISEE
1. MATERIEL ET METHODES ~....................................................... 52
1. Cadre d~ l'tude................................................................................................... 52
2. Type et priode d'tude.................................................................................... 53
3. Population d'tude 53
3.1. Echantillonnage.............................................................................................. 53
3.1.1. Critres d'inclusion................................................................................. 53
3.1.2. Critres d'exclusion ;............................................... 54
3.2. Homognit de la population d'tude...................................................... 54
4. Matriel d'tude................................................................................................. 55
4.1. Instrument de Collecte des donnes.......................................................... 55
4.2. Matriel de prlvement 55
4.3. Matriel de laboratoire utilis..................................................................... 55
5. Mthodes dtude................................................................................................ 56
5.1. Prparation des sujets pour le prlvement............................................. 56
5.2. Traitement des spcimens biologiques........................................................ 56
5.3. Mthodes analytiques de dosage................................................................ 57
5.3.1. Fiabilit des mthodes analytiques utilises.................................... 57
5.3.1.1. Evaluation de l'exactitude.......................................................... 57
5.3.1.2.Evaluation de la prcision 57
5.3.2.Principe des mthodes de mesure de l'activit des
enzymes e, t ud"lees . 59
5.3.2.1. Principe de la mthode de dtermination cintique de
L'activit de L'A5AT...................................................................... 60
5.3.2.2. PrIncipe de la mthode de dtermination cintique de
L'activit de l'ALAT...................................................................... 61
5.3.2.3. Principe de la mthode de dtermination cintique
de l'activit de la yG T............................................................. 62
5.3.2.4. Pr'incipe de la mthode de dtermination cintique
de l'activit des PAL............................................................... 63
5.3.2.5. Principe de la mthode de dtermination cintique
de l'activit de l'alpha amylase............................................. 64
5.4. Traitement statistique des rsultats obtenus 65
6. Problmes thiq ues................................................ 66
Il. RESULTATS DE L'ETUDE 67
1.Caractristiques dmographiques de la population d'tude........................ 67
1.1. Population d'tude.......................................................................................... 67
1.2. Age des individIJs 67
1.3. Homognit de la population...................................................................... 69
2. Fiabilit des mthodes analytiques utilises................................................. 71
3. Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes dans la population
d'tude 72
4. Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes en fonction du sexe....... 73
5. Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes en fonction de la
classe d'ge 74
6. Rapport A5AT/ ALAT 75
III. DiSCUSSiON.......................................................................................................... 76
1. LIMrrES DE LETUDE 76
2. LES RESULTATS................................................................................................... 78
CONCLUSiON............................................................................................................... 84
RECOMMANDATIONS 85
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES......................................................................... 86
ANNEXES
RESUME
 LISTE DES ILLUSTRATIONS

1. TABLEAUX

Tableau 1 : Spcificit d'organe relative aux mesures d'activit

enzymatique.................................................................................. 30
Tableau Il : Valeurs de rfrence de l'activit de quelques enzymes
rapportes par des auteurs africains....................................... 50
Tableau III : Valeurs de rfrence de quelques activits enzymatiques
rapportes par des auteurs europens.................................... 51
Tableau IV : Paramtres mesurs et mthodes analytiques utilises...... 59
Tableau V : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de
l'activit de l'ASAT et leurs concentrations........................... 60
Tableau VI : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de
l'activit de l'ALAT et leurs concentrations......................... 61
Tableau VII : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de
l'activit de la yGT et leurs concentrations..................... 62
Tableau VIII : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de
l'activit des PAL et leurs concentrations........................... 63
Tableau IX : Ractifs util.iss dans la dtermination cintique de
l'activit amylasique et leurs concentrations................... 64
Tableau X : Rpartition de la population selon le sexe........................... 67
Tableau XI : Homognit du poids et de la taille de la population
dtude ,. o , 69
Tableau XII : Homognit du poids et de la taille de la population
masculine selon la classe dge................................................ 70
Tableau XIII : Homognit du poids et de la taille de la
population fminine selon la classe d'ge.............................. 70
Tableau XIV: Valeurs statistiques de la fiabilit des mthodes
analytiques utilises.................................................................. 71
Tableau XV : Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes tudies
chez l'adIJlte :................................................. 72
Tableau XVI : Rpartition des valeurs de rfrence de l'activit des
enzymes tudies en fonction du sexe................................. 73
Tableau XVII : Rpartition des valeurs de rfrence de l'activit des
enzymes tudies en fonction de la classe d'ge 74
Tableau XVIII.: Valeur du rapport ASAT/ALAT en fonction du
sexe................................................................................................ 75
Tableau XIX: Valeur du rapport ASAT/ALAT en fonction de la classe
dge................................................~........................................ 75
Il. FIGURES

Figure 1 : Variations de la vitesse d'une raction enzymatique en

fonction de la concentration en substrat (la concentration
en enzyme tant constante).......................................................... 20

Figure 2 : Spectre d'absorbance du NAD oxyd et rduit........................... 26

Figure 3 : Reprsentation graphique de l'volution des marqueurs

bioch'imiques au cours de l'infarctus.......................................... 33

Figure 4 : Distribution de la population en fonction de l'ge................... 68

Figure 5 : Distribution de la population en fonction du sexe selon la 69

tranche d'ge .
Introduction 1

La Biochimie est la science qui tudie la structure des molcules vivantes,

leur concentration dans chaque ~ellule ou chaque liquide biologique, leur
mode de formation( anabolisme, dgradation).
Dans les cellules des tres humains, des mcanismes physiologiques de
rgulation mtabolique permettent aux sujets prsums sains, de maintenir
les constituants biochimiques des milieux biologiques, dans des limites de
concentrations considres comme valeurs normales ou usuelles. Ainsi, les
variations qualitatives et! ou quantitatives mme relativement faibles de ces
paramtres biologiques peuvent tre indicatrices dans les tats
pathologiques. C'est l le but mme de la biochimie clinique, qui est
d'apprcier un tat pathologique en mesurant le degr de modification
qualitative ou quantitative d'un paramtre biochimique.
De nos jours, la Mdecine s'appuie beaucoup sur les examens biologiques
dont les rsultats sont souvent dterminants, en complment des examens
para-cliniques, pour une aide au diagnostic.
La prsomption diagnostique ou le suivi clinique seront conforts par les
rsultats des analyses biologiques les plus appropries et accessibles.
Les progrs de la physiopathologie et des techniques de laboratoire ont
mis en vidence non seulement la spcificit de nombreux marqueurs
biologiques, mais galement les difficults d"interprtation fine des examens
de laboratoire. En effet, toute interprtation correcte des rsultats produits
par le laboratoire a plus de signification que si ces rsultats peuvent tre
interprts par comparaison avec une srie de valeurs dite "de rfrence"
obtenue partir d'individus slectionns selon des critres bien dfinis
(population de rfrence). On comprend que le choix de la population de
rfrence soit capital, car il conditionne toute l'interprtation des dosages.
Suivant la technique utilise, mme en absence de causes d'erreurs de
manipulation, les rsultats pour les mmes paramtres diffrent parfois de
faon notable: on parle de variations analytiques. D'autres facteurs de
variations tels que les variations intra et 'interindividuelles peuvent aussi
influencer les rsultats.
Introduction 2

Il revient donc au biologiste de connaltre les variations biologiques et

analytiques afin d'tablir des valeurs de rfrence pour guider les
investigations du c1.inicien dans la dmarche diagnostique ou de suivi de
l'volution de la maladie.
Parmi les mcanismes de rgulation biologique endogne de l'organisme
humain, l'activit des systmes enzymatiques se caractrise par une
importante spcificit vis--vis d'organes et de tissus. Les enzymes
prsentent a'insi un intrt fondamental dans la physiopathologie.
L'activit des aminotransfrases(A5AT et ALAT), ainsi que celle de la Gamma
Glutamyl Transpeptidase(GGT ou yGT), des phosphatases alcalines (PAL) et
de l'alpha amylase trouvent leur intrt dans les pathologies hpatiques,
cardiaques et pancratiques entre autre.
Nous avons ralis une tude de dtermination de valeurs de rfrence de
l'activit de ces enzymes d'intrt biomdical chez le burkinab adulte.
L'tablissement des valeurs de rfrence mettra la disposition des
cliniciens une banque de donnes qui leur permettra de confirmer un
diagnostic, de prendre une dcision thrapeutique, de vrifier un tat de
sant, de fixer une limite de dcision adapte chaque cas particulier.
Enonc du problme 3

La sant est dfinie par l'OMS comme tant un tat de bien-tre physique,
mental, social et non simplement l'absence de maladie ou d'infirmit.
En Biochimie stricte, la sant peut tre considre comme cette situation
dans laquelle des milliers de ractions intra et extra cellulaires propres
l'organisme se produisent dans des conditions et des taux permettant sa
survie maximale dans l'tat physiologique (oppos l'tat pathoLogique).
Au Burkina Faso, Les pathoLogies hpatiques constituent de nos jours un
probLme de sant publique. Ce sont des affections graves ( cas d'hpatites
fulminantes) qui peuvent voLuer vers la chronicit (cirrhose, cancer
primitif du foie). Leur prvalence gnrale actuelle est juge croissante par
certains praticiens cause des changements du mode de vie des populations
(habitudes alimentaires, alcoolisme, facteurs environnementaux etc.).
Les pathoLogies cardiaques, pendant Longtemps occultes en Afrique sub-
saharienne et attribues aux populations des pays industrialiss figurent
actuellement, aprs les maladies infectieuses et parasitaires, parmi les
pathologies qui proccupent fortement les autorits sanitaires africaines
particulirement celles du Burkina Faso.
Les facteurs dterminants dans la prise en charge correcte de ces
pathologies sont multiples:
./ les dysfonctionnements biologiques tels que la lyse cellulaire, la
perturbation de l'activit enzymatique etc.,
./ l'environnement,
./ les habitudes alimentaires,
./ l'htrognicit des populations,
./ les effets secondaires des mdicaments etc.
Le diagnostic et le suivi clinique des pathologies hpatiques et cardiaques
sont surtout axs sur la dtermination de l'activit de certaines enzymes
notamment, les transaminases (ASAT et ALAT), les PAL, la GGT, et l'alpha
amylase.
Enonc du problme 4

De ce fait, l'utilisation de valeurs de rfrence d'une population donne par

une autre population fait courir le risque de diagnostic clinique par excs ou
par dfaut. En effet au Burkina Faso, les valeurs de rfrence utHises par
les prescripteurs et les biologistes jusqu'ici sont celles des pays occidentaux
(origine des ractifs et matriels de laboratoire d'analyse biomdicale). On
comprend aussi pourquoi la premire tche de tout biologiste est d'laborer
les valeurs de rfrence de sa propre population; la valeur de rfrence
tant" la valeur d'une proprit mesure sur un individu suppos sa'in et
slectionn l'aide de critres bien dfinis; c'est--dire se trouvant dans
un tat de sant dcrit avec clart et prcision".
En Europe et dans certains pays africains comme la Cte d'Ivoire , le
Cameroun, le Togo, le Congo des tudes ont rapport que les valeurs de
rfrence subissaient des. variations lies au sexe et
l'ge[1,4,9,23,27,58,59]. Mais au Burkina Faso, en dehors d'tudes menes
par Taita [48] sur certains paramtres hmo-biologiques, Ouedraogo [31] sur
les femmes en gestation et Zba [60] sur le profil lipidique des hypertendus,
les tudes sur les valeurs de rfrence n'ont jusque l jamais t menes de
faon systmatique. C'est pourquoi nous nous sommes proposs d'tablir des
valeurs de rfrence de quelques enzymes d'intrt biomdical telles que
('alanine aminotransfrase (ALAT) ou transaminase glutamique pyruvique
(TGP), l'aspartate aminotransfrase (A5AT) ou transaminase glutamique
oxaloactique (TGO), la gamma glutamyl transpeptidase (GGT) , les
phosphatases alcalines (PAL) et l'alpha amylase chez l'adulte burkinab.
Nous nous sommes limits ces enzymes non seulement pour des raisons
de logistiques disponibles et de budget, mais galement cause de la
prescription frquente de leurs examens par les cliniciens.
Le but de notre tude tait de fournir des valeurs quantitatives exactes et
prcises qui serviront la dfinition d'un tat de bonne sant, la
prvention individuelle et collective et la surveillance des thrapeutiques.
~1lJE,efIt~ 1)E,
1'E,TlJ1)E,
Objectifs 5

1. Obiectif gnral

Etablir sur prlvements sanguins des valeurs de rfrence de l'activit de

cinq enzymes d'intrt biomdical chez l'adulte burkinab prsum sain au
Centre Hospitalier National Yalgado OUEDRAOGO ( CHN-YO).

2. Obiectifs spcifiques

1-Slectionner une population de rfrence pour l'tude.

2-Dcrire le profil de ces individus prsums sains slectionns.
3-Dterminer les valeurs de rfrence de l'activit des enzymes tudies
chez ces individus.
4- Comparer les valeurs obtenues celles indiques par la littrature.

L'atteinte de ces objectifs ontribuera disposer d'lments d'appui au

diagnostic, au pronostic, au suivi thrapeutiq~e et l'pidmiologie.
 ~llRMIRllR ~AllTIR:
llAYPR1~
~~~_. 1? I1?11 <:)(illA~}IT ~(j R~
Gnralits 6

1. CONCEPT DE VALEURS DE REFERENCE EN BIOLOGIE CLINIQUE

Le concept de valeurs de rfrence quoique s'appliquant toutes les

catgories de sujets est gnralement utilis pour les sujets sains[20,29 ,46].
Afin d'viter une confusion entre valeur de rfrence , valeur normale et
valeur usuelle, il importe de les dfinir.

1. Dfinitions

';- Les valeurs de rfrence: ce sont des valeurs mesures sur des
individus en bonne sant se trouvant dans des conditions soigneusement
dcrites, en particulier du point de vue des facteurs de variations
potentiels risquant d"introduire un biais dans la distribution de rfrence
et permettant une interprtation en fonction des objectifs[21 ,39,46,47].
';- Les valeurs normales: ce sont des valeurs mesures sur un sous-
ensemble bien reprsentatif de la population d'individus tout venant, non
tris, n'ayant pas modifi leurs conditions habituelles de
vie[21,39,46,47].
);.. Les valeurs usuelles: ce sont des valeurs obtenues sur des populations
htrognes c'est-d'ire des populations pour lesquelles plusieurs
facteurs de variations n'ont pas t suffisamment contrls. Ce terme
s'applique par exemple des populations htrognes[21,39,46,47]
souvent rassembles pour des raisons de facilit (groupe d'tudiants en
mdecine, donneurs de sang etc.).
~ L'individu ou les individus de rfrence : c'est ou ce sont tous les
'individus qui ont t slectionns selon des critres bien
dfinis[21 ,39,46,47] .
" La population de rfrence : elle comprend tous les 'individus
susceptibles de servir de rfrence[21 ,39,46,47].
);.. L'chantillon de rfrence: c'est un sous-ensemble form d'un nombre
adquat d'individus issus de la population de rfrence[21 ,39,46,47].
Gnralits 7

), L'intervalle de rfrence: il est dfini par deux limites de

rfrence[21 ,39,46,47] ; toutes les valeurs se trouvant entre ces deux
limites ainsi que les valeurs des deux limites font partie de l'intervalle de
rfrence.
,. La valeur observe: elle est la valeur d'une variable biologique que l'on
se propose de comparer avec les valeurs de rfrence, la distribution de
rfrence, les limites de rfrence ou l'intervalle de rfrence
[21,39,46,47].

2. Etablissement des valeurs de rfrence

Les valeurs de rfrence doivent tre tablies partir d'une population

homogne encore appele ensemble de rfrence[2,36,41 ,44], Le degr
d'homognit est fonction des critres de slection retenus pour
caractriser les ensembles de rfrence[2,36,41,44]. Les valeurs de
rfrence ne peuvent tre adaptes systmatiquement d'u n pays l'autre
car les populations concernes ont des caractristiques nutritionnelles,
socio-conomiques et environnementales qui les distinguent les unes des
autres[2], Sur la base de ces diffrents critres, les valeurs de rfrence sont
obtenues selon deux types de slection:
., la slection par tri a posteriori
), la slection par tri a priori

La slection par tri a posteriori

Elle est ralise sur une population importante tout venant

(gnralement > 1000)[41,44]. Elle consiste d'abord prparer les sujets
pour le prlvement, ensuite leur soumettre un questionnaire
[24,26] (annexe1), Aprs quoi, on effectue le prlvement qui est trait pour
ensuite tre analys. Avec les rsultats obtenus, on slectionne un
chantillon de rfrence partir des critres de partition et d'exclusion,
Gnralits 8

Enfin, on tablit des valeurs de rfrence aprs avoir effectu un traitement

statistique des rsultats, et vrifi la reprsentativit par rapport la
population gnrale.

La slection par tri a priori

Contrairement la slection a posteriori, la slection par tri a pnon

s'effectue par mesure d'irecte des constituants biologiques sur un chantillon
limit de la population (gnralement entre 50 et 150 individus de
rfrence)[37,44]. On slectionne d'emble notre chantillon de rfrence
sur la base de critres de partition et d'exclusion. Une fois les sujets choisis,
on les prpare au prlvement avant de l'effectuer. Ensuite, les spcimens
recueillis sont traits et analyss. Les rsultats obtenus sont soumis au
traitement statistique en vue de l'tablissement des valeurs de rfrence.

Dans les deux cas de slection, il est ncessaire de suivre un protocole

bien dfini qui comporte plusieurs tapes:

~ la slection des 'individus de rfrence

);- la prparation des individus pour le prlvement
~ le traitement des spcimens biologiques
);- l'analyse bioch'imique par des mthodes fiables
);.. le traitement statistique des rsultats obtenus.

2.1. La slection des individus de rfrence

Elle impose la prise en compte de tous les facteurs de variations

biologiques et pathologiques[36,41]. Ils permettent de dduire les critres
de partition et les critres d'exclusion.
Gnralits 9

2.1.1. Impact des variations biologiques dans l'tablissement des

valeurs de rfrence

Les variations biologiques, lorsqu'elles ne sont pas prises en compte

peuvent influencer la production des valeurs de rfrence[27]. En effet,
elles sont difficilement maltrisables[23]. C'est ainsi qu'une liste non
exhaustive prsente sous forme de mots cls a t consigne dans un
tableau ( annexe 2).

2.1.2. Choix des critres de partition

Ces critres permettent de trier un sous ensemble homogne. Ce sont des

critres maltrisables[23,36,41 ,44]. Cependant, il ne faut pas pour des raisons
pratiques augmenter leur nombre. Il serait raisonnable d'en prvoir 3 5
pour les examens de laboratoire courants. Les plus frquents tant:
);0 l'ge,
.., le sexe,
.., la masse corporelle.

2.1.3. Choix des critres d'exclusion (annexe 3)

Ces critres sont, par dfinition non maltrisables[23]. Ils entralnent un

biais incontrlable, variable d'un individu l'autre[23, 36,41,44]. En pratique
courante, il faut essentiellement chercher exclure les sujets:
);0 atteints d'affections diverses,
.., prenant des mdicaments,
);0 tant dans des tats physiologiques particuliers,
.., les sujets atteints de dviation ou les sujets risque tels que les obses,
les alcooliques, les fumeurs et les consommateurs de cola.
Gnralits 10

2.2. La prparation des individus pour le prlvement

Certains facteurs et recommandations de base sont prendre en

considration en vue de l'tablissement des valeurs de rfrence.

2.2.1. Facteurs prendre en compte pour le prlvement

A ct d'un certain nombre de rflexions que doivent susciter le

problme de dsinfection cutane pralable (intrt, nature du produit
dsinfectant selon le dosage faire, etc.), trois ordres de considrations
sont analyser en fonction de l'origine du spcimen, de la nature de
l'chantillon, et des caractristiques du matriel de prlvement[15].

2.2.1.1. L'origine du spcimen

L'origine se rsume trois possibilits:

la ponction artrielle utilise surtout pour le dosage des gaz du
sang,
la ponction veineuse qui se fait en gnral au pl.i du coude,
le prlvement capillaire effectu chez les petits enfants.
De ces trois possibilits, la ponction ve'ineuse reste la plus utilise. Elle
comporte des gestes qu'il faut normaliser. Cependant nous devons avoir
l'esprit qu'H vaut mieux rejeter les sujets difficiles prlever plutt que
d'laborer des rgles complexes adaptes plusieurs cas.

2.2.1.2. Le choix de la nature du spcimen

La nature du spcimen peut tre:

le sang total qui est surtout utilis dans le dosage des gaz du sang;
GnraUts 11

le srum qui bien que long obtenir a l'avantage d'tre plus facile
manipuler (limpidit, stabilit la conservation, bonne compatibilit
avec les appareils automatiques) ;
le plasma qui est immdiatement disponible et le rendement est plus
avantageux.

Au niveau du choix, le mieux serait d'opter pour un spcimen

permettant la dtermination du plus grand nombre de paramtres
biologiques possibles et le srum sied cela.

2.2.1.3. La normalisation du matriel de prlvement

la normalisation du matriel de prlvement passe par un choix entre les

diffrents et nombreux moyens disponibles. Ces choix peuvent tre classs
en trois catgories:
Le choix du type de matriel
L'utilisation des tubes usage unique sous ou sans vide au moyen d'un
systme permettant de les changer pour une mme ponction veineuse est
un usage courant pour la plupart des prlvements.
Le choix de la nature du matriel
Deux matriaux sont utiliss pour la fabrication des tubes: le verre et
diverses matires plastiques (rsine poxy, chlorure de polyv'inyle,
polythylne, polypropylne). Le principal inconvnient dans l'utilisation de
tubes en matire plastique est la mauvaise rtraction du caillot. Le verre
quant lui comporte des risques de contamination (Ca 2+, Na+), mais il a
l'avantage d'tre strilisable.
Le choix du matriel de ponction
Il faut normaliser les caractristiques des aiguilles de prlvement.
GnraUts 12

2.2.2. Les recommandations de base[15,23]

Elles sont les suivantes:

), le sujet doit tre jen depuis 10 heures, mais il peut bo'ire de l'eau;
,. le prlvement doit tre effectu le matin entre 7 et 10 heures . Le
patient ayant dormi 7 8 heures;
), Il ne doit pas avoir fum deux heures avant le prlvement;
), le patient doit se reposer 15 minutes avant le prlvement;
), il faut faire le prlvement du sang veineux au pli du coude sans ou avec
un temps de pose de garrot trs court.

2.3~ Le traitement des spcimens biologiques

Le sang total doit tre prlev sur tube sec et centrifug dans les 30
minutes aprs le prlvement[23, 58,59]. Le sru m recueilli doit tre
aliquot et conserv -20C jusqu'au dosage.
Les spcimens hmolyss doivent tre systmatiquement limins[23].

2.4. L'analyse biochimique par des mthodes fiables

La fiabilit est la confiance accorde aux rsultats obtenus l'aide d'une

mthode de dosage, et cela en fonction de sa sensibilit, sa spcificit, sa
I.imite de dtection, son exactitude et sa prcision[51]. Ces deux derniers
critres doivent ncessairement tre valus ou rvalus de manire
satisfaisante par un contrle de qualit journalier partir d'un srum de
contrle[1 0, 51]. .

2.5. Analyse statistique des rsultats obtenus

L'analyse statistique des rsultats peut se faire sur micro-ordinateur

l'aide d'un logiciel d'analyse statistique tel que Epi Info version 6.04[5,11].
Gnralits 13

Le but du traitement des valeurs de rfrence est de dterm'iner l'intervalle

de rfrence de manire pouvoir interprter toute valeur observe
ultrieurement dans les meilleures conditions[5,11]. La validit de tout
intervalle de rfrence obtenu dpend bien entendu de la rigueur avec
laquelle les critres de slection des individus ont t respects, des
conditions dans lesquelles les chantillons ont t prlevs et du soin avec
lequel les dosages ont t raliss[5,11]. La mthode de dtermination de
l'intervalle de rfrence est fonction du type de distribution des valeurs de
rfrence obtenue. A ce titre, il existe trois types de mthode
statistique[5, 11]:
" la mthode intuitive qui est applique lorsque l'chantillon de rfrence
(n) est trs faible( n<20). C'est la rgle du bon sens qui prvaut. Cette
mthode est utilise lorsqu'il est difficile d'obtenir des individus
rpondant aux caractristiques requises par les critres de partition et
d'exclusion.
'Y la mthode paramtrique gaussienne qui est utilise lorsque la
distr'ibution des valeurs suit la loi Normale. Elle est caractrise par sa
forme en cloche et par la proprit remarquable d'tre dtermine
entirement partir de deux paramtres que sont la moyenne (m) et
l'cart-type (5).
L'intervalle de rfrence est alors donn par la formule: m 1,965 au
risque a=5%.
m=Moyenne des valeurs, Xi les valeurs observes ( ou obtenues)
s= cart - type
'Y la mthode non paramtrique des quantiles qui est applique lorsque la
distribution n suit aucune loi mathmatique. Elle consiste aligner les
valeurs obtenues par ordre croissant et liminer 2,5% des valeurs basses
et 2,5% des valeurs hautes , soit 5% des valeurs. Les valeurs restantes
constituent l'intervalle de rfrence qui contient 95% des valeurs,
encadr par la plus petite et la plus grande valeur de rfrence
rsiduelle, yant chappes l'limination.
Gnralits 14

Il faut garder l'esprit que d'un point de vue clinique l'intervalle de

rfrence sert de guide pour fourn'ir une interprtation des valeurs
observes.

3. Intrt des valeurs de rfrence

Les valeurs de rfrence sont mises profit comme index dans de

multiples circonstances.

3. 1. 1ntrt dans le diagnostic mdical

L'tablissement des valeurs de rfrence pour chaque constituant

biologique permet aux cliniciens:
'); de fixer une limite de dcision adapte chaque cas particulier
de patient,
')r de vrifier un tat de sant chez un patient,
., d'alerter le patient sur les risques encourus,
., de confirmer ou conforter un diagnostic mdical,
., de dpister une affection cliniquement non dcelable.

3.2. Intrt dans le pronostic et le suivi thrapeutique

L'tude comparative des valeurs de rfrence des populations saines et

des valeurs des populations malades permet de classer les examens suivant
leur pouvoir discriminant[3,4,40,43,45].
Les valeurs de rfrence permettent galement d'valuer l'effet
thrapeutique, et! ou de surveiller un risque d la prise de mdicaments.
On peut ainsi valuer la position d'une mesure isole par rapport aux limites
de distribution d'une population saine ou sous la mme thrapeutique et en
GnraUts 15

tirer des conclusions quant la suite du traitement ( le poursuivre ou le

modifier).
Par ailleurs, l'effet des mdicaments sur les examens de laboratoire peut
galement tre apprci en comparant les distributions d'individus soumis
une thrapeutique et celles composes d'individus tmoins des fins de
surveillance et de pharmacovigilance. Parmi les exemples plus significatifs,
on peut citer l'influence qu'exercent les mdications anovulatoires et
anticonvulsivantes. On peut ainsi noter une augmentation nette de l'activit
de l'ALAT et une diminution de l'activit des PAL plasmatiques chez les
femmes sous, contraceptifs oraux. On observe un phnomne similaire pour
les thrapeutiques anticonvulsivantes, quoique beaucoup plus marqu pour
certaines enzymes plasmatiques telles que la GGT, l'A5AT et les PAL.

3.3. 1ntrt en pidmiologie

L'tablissement des valeurs de rfrence permet de mesurer la prvalence

de certaines pathologies dans une population un chelon rgional, national
ou international[3,4,40,43,45]. Pour cela il est souhaitable que l'influence
des variations biologiques soit rduite au minimum.
Une autre application pidmiologique est la comparaison des valeurs
observes sur des populations trs diffrentes. On peut ainsi tudier des
diffrences ethniques, de rgime alimentaire, de rgime socioculturel ou
gntique.
On peut galement suivre l'volution long terme des conditions de sant
d'une population [3,4,40,43,45]. De mme les conditions de transmiss'ibHit
des valeurs de rfrence d'un laboratoire l'autre, ou d'un pays l'autre,
pourront tre prcises[3,4,40,43,45].

En somme, les intrts multiples des valeurs de rfrence dans notre

contexte justifient le bien fond de notre travail.
Gnralits 16

Il. LES ENZYMES

1.Gnralits sur les enzymes

1. 1. Dfinition

Les enzymes sont des catalyseurs biologiques de nature protique qui

permettent aux ractions chimiques ncessaires la vie et la
multiplication cellulaire de s'effectuer vitesse leve et avec une
spcificit qui limine la formation de sous produits[56].

1.2: Structure

Les enzymes sont des molcules protiques formes soit d'une seule
chalne polypeptidique (enzymes michaeliennes) soit de plusieurs chalnes
polypeptidiques ( enzymes allostriques) [7,56].
Sur le plan supramolculaire, les enzymes peuvent tre reparties en deux
groupes que sont:
);- Les holoenzymes
On parle de holoenzymes lorsque la structure primaire de l'enzyme est
constitue uniquement d'un enchalnement d'acides amins[7,56].
);- Les htroenzymes
Les htroenzymes sont constitues d'une partie protique appele
apoenzyme et d'une partie non protique appele cofacteur[7,56]. Lorsque
le cofacteur est solidement fix l'apoenzyme, on parle de groupement
prosthtique. Par contre lorsque le cofacteur est faiblement fix
l'apoenzyme on parle de coenzyme ou cosubstrat; comme son nom
l'indique, il joue un rle de transporteur entre deux ou parfois plusieurs
ractions distinctes.
Gnralits 17

1.3. Localisation des enzymes

1.3.1. Localisation intracelullaire

La rpartition cellulaire des enzymes est irrgulire. Certaines enzymes

sont retrouves dans tous les tissus(ubiquitaires); d'autres sont prsentes
dans des organes prcis, d'o la notion de spcificit d'organe[7 ,50,56].
Ainsi, en fonction de leur localisation dans la cellule on aura:
". les enzymes cytoplasmiques
> les enzymes subcellula'ires ou particulaires qui sont prsentes
dans les nombreux organites.
Parmi les enzymes intracellulaires nous pouvons citer: les transaminases,
les phosphatases alcalines(PAL), les gammaglutamyl transpeptidases(GGT),
la lactico dshydrognase(LDH), la cratine phosphokinase(CPK) etc.
Une destruction des cellules va entralner la libration des enzymes
intracellulaires dans le sang circulant.

1.3.2. Localisation extracellulaire

Ces enzymes sont synthtises et dverses immdiatement l'extrieur

de la cellule soit:
> dans le sang circulant,
'" dans le tube digestif pour exercer leur action, c'est le cas de l'a
amylase et de la lcithine cholestrol acyl transfrase(LCAT).

1.4. Nomenclature et classification

La classification des enzymes permet de mettre en vidence les relations

et les ressemblances qui existent entre les enzymes du mme groupe. Elle
souligne galement les lments distincts entre les diffrentes enzymes.
Ainsi un certain nombre d'enzymes ont t dnommes en ajoutant le suffixe
Gnralits 18

"ase" au nom du substrat sur lequel l'enzyme exerce son action

catalytique[7, 50, 56]. Par exemple l'amylase catalyse l'hydrolyse de l'amidon,
les lipases hydrolysent les lipides et les protases hydrolysent les protides.
Cependant , dans de nombreux cas, cette nomenclature s'est avre peu
pratique et des dnominations non systmatiques n'apportant aucune
information sur le type de ractions catalyses ont t consacres par
l'usage ( pepsine, trypsine, catalase). C'est pourquoi en 1961, devant le
nombre rapidement croissant d'enzymes nouvellement dcouvertes, une
classification et une nomenclature systmatiques ont t adoptes sur la
recommandation de la Commission Internationale des Enzymes[7,50,56].
L'avantage est qu'il apparalt non seulement le type de raction catalyse ,
mais' aussi le nom du substrat et celui de l'accepteur. Dans ce nouveau
systme chaque enzyme porte un numro d'ordre 4 chiffres spars par
des points.
Le premier chiffre indique la classe de l'enzyme. Ainsi, six classes d'enzymes
ont t identifies:
),> classe 1 : les oxydorductases qui catalysent le transfert des
-lectrons seuls ou accompagns de protons.
),> classe 2 : les transfrases qui catalysent le transfert d'un groupe
d'une molcule une autre.
Les oxydorductases et les transfrases ncessitent en gnral un
coenzyme.
),> classe 3 : les hydrolases catalysent l'hydrolyse de diverses liaisons.
),> classe 4 : les lyases catalysent la rupture ou la I.iaison de
composs chimiques, au cours de laquelle se forme ou
disparalt une double liaison,
),> classe 5 : les isomrases dplacent des groupes l'intrieur
d'une molcule sans que la formule brute du substrat ne varie,
),> classe 6 : les ligases ( ce sont des synthtases) forment des liaisons
entre un carbone et un mtallol'de en utilisant l'nergie fournie par
l'hydrolyse d'une molcule d'ATP).
Gnralits 19

Le second chiffre dsigne la sous-classe de l'enzyme qui est dfinie selon le

mcanisme de la raction, par exemple les dshydrognases transfrent les
atomes d'hydrogne.
Le troisime chiffre indique la nature de la molcule servant d'accepteur.
Le quatrime chiffre enfin, reprsente le numro d'ordre de l'enzyme dans
le sous groupe.
On peut prendre comme exemple la phosphatase alcaline, son numro
de classification est EC 3.1. 3.1 :
EC signifie Enzyme classification
Le premier chiffre (3) dsigne la classe des hydrolases
Le second chiffre (1) dsigne les estrases qui hydrolysent les liaisons esters
Le troisime chiffre (3) dsigne les estrases qui hydrolysent un ester
monophosphorique (phosphatases)
Le quatrime chiffre (1) dsigne la phosphatase alcaline.

1.5. Activit des enzymes

1.5. 1. Notion de spcificit des enzymes

1.5. 1.1 . Spcificit de raction

Cette notion traduit la manire dont s'exprime l'activit catalytique des

enzymes l'gard d'un ou de plusieurs substrats[56]. En effet un mme
substrat peut subir diverses transformations (dcarboxylation,
dshydrognation etc.) qui sont catalyses par des enzymes diffrentes.

1.5.1.2. Spcificit de substrat

Cette spcificit peut tre:

~ large lorsque l'enzyme agit sur une grande varit de
composs[56] ,
Gnralits 20

);- ou au contraire trs troite lorsque l'enzyme n'agit que sur un

substrat[56] .
On peut distinguer:
.,/ la spcificit de liaison qui sera rompue ou cre au cours de la
raction, exemple: les hydrolases;
.,/ la spcificit de groupe de substrats tels que les protases;
.,/ la strospcificit c'est dire lies aux proprits optiques; En
effet il existe des acides amins oxydases qui vont ag'ir soit sur les
formes lvogyres, soit sur les formes dextrogyres des acides amins.

1.5. 1 .3. Spcificit d'organe

A l'origine toutes les cellules d'un organisme avaient le mme quipement

enzymatique de dpart. Mais avec le temps, "il y a eu une rpression de la
biosynthse des enzymes en fonction de la spcialisation de ces
organes[30,54]. Ainsi, on retrouvera des enzymes dans des organes bien
prcis. Comme exemple on a l'ure qui est uniquement synthtise par le
foie parce que toutes les enzymes de l'urognse sont localises au niveau
du foie.

1.5.2. Cintique enzymatique

La cintique enzymatique est la vitesse avec laquelle les ractions

enzymatiques se produisent.

1.5.2.1. Modle de Michaelis-Menten

L'tude de la cintique enzymatique repose sur le modle de Michaelis-

Menten(1913). Selon ce modle lors d'une raction enzymatique, le substrat
est fix par l'enzyme et dans cet environnement il ragit beaucoup plus
Gnralits 21

rapidement pour donner le produit[7,25,37,56]. La cintique enzymatique

est reprsente selon la raction suivante:
E+S ~ES ~ E+P
E=Enzyme ,S= Substrat, P= Produit et ES= Complexe enzyme substrat

1.5.2.2. Expression mathmatique de la vitesse de raction des

enzymes

Soit un substrat S en contact avec une enzyme E pendant un temps

donn. Pour mesurer la vitesse de cette raction, on peut soit mesurer:
../ la quantit de substrat qui dispara'it ,
. ../ ou la quantit de produit qui appara'it[7,25,37,55,56].
La vitesse de la raction est reprsente par le schma suivant:
v

Vmax

VmaxJ2

Km [8]

Figure 1: Variations de la vitesse d'une raction enzymatique en fonction de

la concentration en substrat (la concentration en enzyme tant constante).

L'expression mathmatique de la vitesse est donne par la formule suivante:

Vmax [5]
V =-----
Km + [5]
Gnralits 22

Km = Constante de Michaelis-Menten qui exprime l'affinit de l'enzyme pour

le substrat. Km est en ralit une concentration de substrat pour laquelle la
vitesse est gale la moiti de la vitesse maximale (Vmax ).

1.5.2.3. Dtermination de Km

On peut dterr:niner Km graphiquement partir:

);- de la courbe v=f(s) ci-dessus;
~ des mthodes de linarisation que sont celles de:
- Unewaver et Burk
- Eadie Hofstee
- Dixon

1.5.2.4. Facteurs influenant la cintique enzymatique

Plusieurs facteurs sont capables d'influencer la vitesse d'une raction

catalyse par une enzyme, notamment la dure de contact entre E et S, la
concentration du substrat dans le milieu ractionnel et la concentration en
enzyme, le pH de ce milieu, la temprature de raction, la force ionique et
la nature du mil.ieu tamponn.

1.5.2.4.1. Dure de contact entre l'enzyme et le substrat

La vitesse d'une raction catalyse par une enzyme volue en fonction

du temps. On dfinit la vitesse V=dP / dt c'est--dire le nombre de moles de P
(produit) formes par unit de temps (t). Pour tudier l'accumulation de P en
fonction du temps, H est ncessaire que E soit constant et 5 en large excs.
Au dbut de la raction quand l'enzyme est sature de substrat, la vitesse
de raction reprsente par dP / dt l'origine correspond la vitesse initiale.
La vitesse est constante, indpendante de la concentration des espces
ragissantes, facHe mesurer. On dit alors que la raction est d'ordre nul.
Gnralits 23

Avec le temps, on assiste la d'iminution de la concentration en substrat,

l'augmentation des produits de la raction, la dnaturation de l'enzyme et
l'apparition ventuelle de produits inhibiteurs. Tous ces phnomnes
aboutissent une diminution progressive de la vitesse de raction en
fonction du temps. On dit que la raction est alors d'ordre 1.
La vitesse initiale reprsente la meilleure mesure exprimentale de
l'activit enzymatique dans la mesure o elle est proportionnelle la
concentration en enzyme.

1.5.2.4.2. Nature du substrat

La nature du substrat modifie le Km de l'enzyme. En gnral, on choisit

des substrats tels que les vitesses de raction mesures soient les plus
rapides. Une autre exigence est d'utiliser un substrat spcifique qui ne soit
transform que par une enzyme dont on veut mesurer l'activit dans les
conditions de dosage.

1.5.2.4.3. Concentration en substrat

La concentration en substrat influence la cintique enzymatique. En effet

si la concentration en enzyme est maintenue constante et que l'on fait varier
la concentration en substrat [5], on constate d'abord une augmentation
rapide de la vitesse; mais si [5] continue croltre, la courbe s'inflchit et
pour les valeurs leves de [5] la vitesse de la raction n'augmente plus. Elle
tend plutt vers une l1mite Vmax ( figure 1) .
Pour mesurer une activit enzymatique il faut que le substrat soit en
quantit saturante.
Gnralits 24

1.5.2.4.4. Influence de la temprature sur l'activit

enzymatique

Deux phnomnes antagonistes et 'indpendants se produisent la suite d'un

accroissement de temprature. Ce sont :
" d'une part, l'action de la temprature sur la cintique chimique de
la raction enzymatique. En effet les vitesses des ractions chimiques
augmentent avec la temprature. Une augmentation de 10C double
peu prs la vitesse de raction;
~ d'autre part, l'action dnaturante de la temprature sur la fraction
protique de l'enzyme, ce qui entralne son inactivation. En effet,
l'lvation de la temprature qui accrolt l'agitation molculaire,
provoque une dnaturation des protines qui, dans le cas des
enzymes, entralne une inactivation le plus souvent irrversible.
Il est donc trs important de contrler avec prcision la temprature
pendant la priode de contact entre l'enzyme et le substrat.
La temprature laquelle dbute l'inactivation thermique est variable d'une
enzyme l'autre. Dans un but de standardisation il a t propos de retenir
la temprature de 30 C pour dterminer les activits enzymatiques en
chimie clinique.

1.5.2.4.5. Influence du pH

Pour des concentrations constantes en enzyme et en substrat, la vitesse

de la raction est maX'imale pour un certain pH appel pH optimum et nulle
pour d'autres. Ce pH optimum varie avec l'enzyme considre et la nature
des constituants du mH1eu ractionnel tels que le substrat et le systme
tampon. Des pH extrmes peuvent dans certains cas inactiver l'enzyme en la
dnaturant. Il rsulte de ceci que les mesures d'activits enzymatiques
doivent tre effectues pH constant.
Gnralits 25

1.5.2.4.6. Autres facteurs modifiant l'activit enzymatique

Ce sont:
};;. Les activateurs et les inhibiteurs surtout. Les activateurs sont
susceptibles d'augmenter la vitesse ractionnelle. Il peut s'agir de
coenzymes, dans ce cas, ils sont ajouts en excs au milieu
ractionnel.
Des ions en gnral des cations bivalents sont des activateurs
(Mg2 +,Zn 2+,Mn 2 +... ). Leur concentration doit tre ajuste, car leur excs
inhibe parfois l'enzyme. Les 'inhibiteurs provoquent la dnaturation ou mme
la dgradation des enzymes de faon irrvers'ible.
};;. Les conditions de prlvement et de conservation;
)0> La stabilit de l'enzyme dans le plasma c'est dire son temps de
demi-vie (T 112 )

1.5.3. Mesure de l'activit enzymatique

On peut mesurer l'activit enzymatique soit en mesurant la vitesse

d'apparition du produit de la raction (6P) soit en suivant la disparition du
substrat(65) [30].

1.5.3.1. Mesure de l'activit enzymatique en continue

Il s'agit d'une mesure cintique. Deux cas de figures peuvent se prsenter.

)0- Cas o le substrat ou le produit ou le cofacteur ont une proprit

analytique qui est immdiatement mesurable
A titre d'exemple nous avons la Mthode colorimtrique en cintique des
phosphatases alcalines.
Gnralits 26

PAL
Paranitrophenyl phosphate + H20 ... paranitrophnol + acide
(incolore) Ph> 7 (jaune) phosphorique

La vitesse de formation du paranitrophnol est proportionnelle la quantit

d'enzyme dans le srum.

,. Mthodes cintiques utilisant les nicotinamides adnines

dinuclotides rduits ou oxyds (NADH/NAD ou NADPH/NADP)

Les nicotinamides adnines dinuclotides sont des cofacteurs des

dshydrognases. Les formes rduites et les formes oxydes de NAD et NADP
ont des comportements optiques diffrents.

i. lnfll)

Figure 2: Spectre d'absorbance du NAD oxyd et rduit. (.:;dJ

Gnralits 27

Comme exemple, nous avons le dosage des dshydrognases et celui des

transaminases avec l'alanine amino transfrase ( ALAT ).

Dosage des dshyd rognases

Le dosage se fait selon la raction suivante:

AH2 A

NAD
.NADP

Dosage de l'ALAT

On peut coupler cette raction des dshydrognases avec d'autres

ractions qui n'utilisent pas de NAD+ et NADP+ pour dterminer l'activit de
certaines enzymes comme les transaminases. La mesure de l'activit de
l'ALAT se fait selon la raction ci dessous:
ALAT
Alanine + ctoglutarate glutamate + pyruvate
~
LDH
pyruvate + NADH 2 ~----
.. lactate + NAD+

La mesure de la vitesse de disparition de NADH 2 340 nm permet de

dterminer l'activit de l' ALAT.

1.5.3.2. Mesure de "activit enzymatique en discontinue

Il s'agit d'une mesure en fin de raction encore appele mesure en point

final ou end po'int method, Cette mesure concerne gnralement les cas o
 Gnralits 28

le produit, le substrat ou le cofacteur ont une proprit analytique

mesurable, A titre d'exemple nous avons la mthode colorimtrique en
point final des phosphatases alcalines. La raction est la suivante:
PAL
Paranitrophenyl phosphate + HzO ... paranitrophnol + acide
(incolore) Ph> 7 (j aune) phosphorique

On arrte la raction un certain temps donn soit par chauffage, ou par

alcalinisation brutale, ou par refroidissement et on effectue la lecture par
spectrophotomtrie,

1.5.3.3. Expression des rsultats de mesures d'activit

enzymatique

L'activit enzymatique est exprime en unit enzymatique savoir:

'" l'Unit internationale(UI) qui correspond la quantit d'enzyme qui

catalyse la transformation d'une mmole de substrat par minute;
'" le Katal ( kat) ,. unit du systme international (SI) , qui est la quantit
d'enzyme qui catalyse la transformation d'une mole de substrat par seconde.
C'est une unit qui a du mal s"imposer car elle est trop grande.
Gnralits 29

2. Enzymologie en Biologie Clinique

L'enzymologie d'intrt clinique peut tre dfinie comme l'analyse

quantitative et/ou qualitative des enzymes contenues dans les milieux
biologiques dans un but mdical[28]. Cet aspect s'est dvelopp
considrablement ces dernires annes grce la connaissance des enzymes
et grce aux progrs analytiques.
Les enzymes sont des catalyseurs dont le taux normal et leur
fonctionnement normal conditionnent le bon fonctionnement de l'organisme.
Pour ce faire, leur dosage apporte des informations sur le diagnostic, le
pronostic et la surveillance thrapeutique.
Les enzymes sont synthtises dans les cellules des diffrents organes
l'intrieur desquels, elles exercent leur activit[50]. Le taux des enzymes
dans le sang circulant doit tre faible[50]. Dans certaines circonstances
pathologiques, leur taux augmente dans le sang. Il peut s'agir d'une part de
lsions cellulaires provoques par les agents suivants[23]:
- infectieux ( virus, bactries, parasites ),
- chimiques ( toxiques, mdicaments ),
- physiques,
et d'autre part de tumeurs ( adnome de la prostate ).
La rpartition des enzymes dans les organes n'tant pas stricte, il est
ncessaire de tenir compte de la spcificit relative des enzymes afin de
choisir le meilleur paramtre pour explorer l'organe ls[50].
Gnralits 30

Tableau 1:Spcificit d'organe relative aux mesures d'activit enzymatique

Enzymes Principales sources

A- Enzymes haute spcificit
Phosphatases acides prostate, cellules sanguines
Ornithine carbamyl tranfrase Foie
Arginase Foie
Sorbitol dshydrognase Foie
Alcool dshydrognase Foie
5' Nuclosidase Villosits et membranes de hpatocyte
Glutamate dshydrognase Foie
Amylase Pancras, glandes salivaires
Lipase Pancras
B-Enzymes moyenne spcificit
ASAT Foie, cur, muscle du squelette
Isocitrate dshydrognase Foie, coeur
ALAT Foie
Cratine kinase Muscle du squelette, cur, cerveau
GGT Foie
C-Enzymes basse spcificit
PAL Os, foie, intestin, placenta, rein
LDH Tous les tissus

2.1. Indications des explorations enzymologique- en clinique

2.1.1. Affections hpatiques

2.1.1.1. Cytolyse hpatique

La souffrance cellulaire hpatique ou syndrome de cytolyse implique une
permabilit accrue de la membrane plasmatique hpatique[6]. Cela se
Gnralits 31

traduit par l'irruption dans le plasma circulant du fer, de la vitamine B12 et

des principales enzymes de l'hpatocyte. En pratique hpatologique, les
marqueurs biologiques les plus fidles de la cytolyse hpatique explors sont
cits ci-aprs.

2.1.1.1.1. Les transaminases

La cytolyse provoque une flche de ASAT-ALAT prcoce et trs leve

dans l'hpatite virale [6]. La hauteur de la flche est grossirement
proportionnelle l'tendue de la ncrose. Sa retombe rapide aux normes en
quelques semaines atteste de la gurison sans squelle. L'ALAT est
habit"uellement plus leve que l'ASAT car dans l'hpatocyte la moiti
environ de l'ASAT est d'origine mitochondriale. Une retombe lente des
transaminases plaide en faveur du passage l'hpatite chronique et fait
redouter long terme l'volution vers la cirrhose.

2.1.1.1.2. La lactico dshydrognase ( LDH )

La LDH existe sous forme de 5 isoenzymes aisment sparables

l'lectrophorse[6]. La LDH s spcifique du foie augmente significativement
au cours de la cytolyse hpatique.

2.1.1.1.3. Autres enzymes

Quelques enzymes sont rigoureusement spcifiques de l'hpatocyte mais

du fait du cot lev de leur exploration[6], elles ne sont pas habituellement
tudies. Il s'agit:
- du sorbitol dshydrognase
- de l'ornithine carbamyl transfrase
- de la 1-phospho fructose aldolase
Gnralits 32

2.1.1.2. Cholestase

Au cours des syndromes cholestasiques , un certain nombre d'enzymes

augmentent dans le sang circulant. Le bilan de la cytolyse hpatique pour
tre complet s'accompagne de mesures d'activit des enzymes dits " de
cholestase " ou d'inflammation biliaire [6]suivantes :
- les phosphatases alcalines,
- la 5' nuclosidase,
- la gamma glutamyl transfrase.

2.1.2. Atteintes cardiaques

Le syndrome biochimique de l'infarctus du myocarde est cohrent et

univoque[6]. Il contraste avec la considrable variabilit des formes
cliniques. Dans les cas typiques o signes cliniques et lectriques s'avrent
indiscutables, les marqueurs biologiques tout en confirmant le diagnostic
vont permettre de suivre l'volution sur plusieurs sema'nes en dcelant le
cas chant des complications ou en attestant finalement la gurison sans
squelles. Dans les cas atypiques, les marqueurs biologiques sont
remarquablement fidles rorienter vers le myocarde, pour affirmer un
diagnostic prcoce ou quelquefois rtrospectif.
Les enzymes spcifiques de la cytolyse cardiaque explores au cours de
l'infarctus du myocarde sont [6]:
- la cratine phosphokinase (CPK ) et son isoenzyme spcifique
du muscle cardiaque (CKMB ),
- la LDH et son isoenzyme spcifique cardiaque ( aHBDH ),
- l'aspartate amino transfrase.
La cintique des enzymes de la cytolyse cardiaque couramment explores
est reprsente sur le schma suivant ( Figure3) :
Gnralits 33

..........
~

'"
.~
.
, ", LDH
.~ : Mb .'
1

~
\Il
.,
1 - _ oHBDH

~
.g-
::l
O'Q)

~, 'nt\;"~K'TGO
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1 :1,' 1 \ -"_'"

'I~ -,f" ~ \ ~KLlO -.

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. . .... -
-t~~1 ;;;1:136~I;;::-t1~t.1
l 12 hourrs :::TI- - - - t - - r - - " t - - " " " t - - -
heuros 60 heures 1 + - -~
1 1 2 3 4 5 6 7 B Temps
Dbul de en IOurs
l'infilrclus

Figure 3 : Reprsentatlon graphlque de l'volution des marqueurs

biochimlques au cours de l'lnfarctus. [50]

2.2.3. Enzymes pancratiques

Dans les pancratltes causes par la lithiase vsiculaire, l'alcool sme

chronique, la prise de certains mdicaments, les infections etc.; il Y a
libration des enzymes pancratiques dans le sang[50]. L'exploration des
pancratites est base sur le dosage des enzymes suivantes:
- L'amylase srique et urinaire, l'amylase srique augmente
aprs quelques heures et se normalise en 2-3 jours. Quant
l'amylasurie, elle est plus tardive mais persiste plus
longtemps.
La lipase srique qul augmente dans la pancratite aigu
mais son dosage est long et peu fiable.
GnraUts 34

2.1.4. Autres affections

Enzymes du rein

A ct de sa fonction d'puration, le rein intervient comme glande

endocrine qui secrte la rnine[28]. La mesure de l'activit de la rnine
plasmatique permet de rechercher l'tiologie de certaines hypertensions
artrielles.

Enzymes de la prostate

L'intrt de la mesure de l'activit des phosphatases acides est li

l'existence d'une corrlation hautement significative[28] avec l'volution des
tumeurs de la prostate ( adnome, cancer de la prostate ).

Enzymes du mtabolisme osseux

L'lvation de l'activit des PAL du plasma est le reflet d'une activit

ostoblastique exagre[28]. L'activit des PAL augmente au cours de la
maladie de Paget, du rachitisme et de l'ostomalacie o les concentrations
sont les plus leves avant tout traitement. L'lvation de l'activit des PAL
peut galement s'observer lors de l'hyperthyrol'die, des mtastases osseuses
et du mylome.

Enzymes musculaires

Quarante pour cent ( 40% ) des protines solubles d'un muscle sont
constitues par des enzymes[28]. Elles interviennent:
- dans la glycolyse: fructose 1,6 diphosphate aldolase,
glycraldhyde 3 phospho dshydrognase;
- dans le mtabolisme des acides gras: lipase, thiokinase
Gnralits 35

- dans le mtabolisme de l'adenine triphosphate: CPK,

myokinase, ATPase
Dans les cas de cytolyse musculaire comme la rhabdomyolyse, il y a
libration de ces enzymes dans le sang permettant ainsi d'valuer l'tendue
des lsions.

Enzymes du tube digestif

Dans le tube digestif, on retrouve les enzymes impliques dans la

digestion des aliments[28] telles que:
- les protines: protases ( trypsine, pepsine, chymotrypsine );
- les glucides: alpha amylase salivaire et pancratique;
- les lipides: lipases, LCAl.
La mesure de l'activit de ces diffrentes enzymes permet de rendre
compte du mtabolisme de ces aliments et de l'tat des glandes
productrices( glandes salivaires, pancras etc.)

2.2. Monographie des enzymes tudies

La gamme des enzymes explores en bioch'imie clinique est varie.

Cependant, certains dosages relvent du domaine de laboratoires
spcialiss. Nous avons choisi dans notre travail d'tudier les enzymes
couramment prescrites au CHN- YO.

2.2.1. Les transam'inases

2.2.1.1 Dfinition

Les transaminases ou aminotransfrases sont des enzymes intracellulaires

qui catalysent le transfert d'un groupement amin d'un acide amin sur un
acide ctonique[14,50,52,53,54,55]. Cette raction aboutit la formation
d'un nouvel acide amin et d'un nouvel acide ctonique. La transam'ination
Gnralits 36

est un processus trs gnral de dgradation et de synthse des acides

amins.
Deux enzymes ont t particulirement tudies en biologie clinique dans le
srum sanguin, il s'agit de:

),- L'alanine amine transfrase (ALAT) ou transaminase glutamique

pyruvique (TGP, EC 2.6.1.2) avec un T 112 =47 10 heures[52,55] ;
." L'aspartate amine transfrase (A5AT) ou transaminase glutamique
oxalo-actique (TGO, EC2.6.1.1) avec un T112 =17 5 heures[53,54] .
L'ALAT catalyse la raction suivante:
ALAT
Lalanine + 2 a ctoglutarate. L-glutamate + L-pyruvate

L'ASAT quant elle catalyse la raction suivante:

ASAT
L-aspartate + 2 a ctoglutarate . - - . L-glutamate + oxaloacetate

2.2.1.2. Rpartition

Ces deux enzymes libres dans le plasma par cytolyse, sont trs
rpandues dans les tissus, principalement au niveau du foie et des muscles
lisses (cardiaques) et stris (squelettiques) mais aussi au niveau du pancras,
du cerveau, des reins[50].

L'ALAT se retrouve surtout dans le tissu hpatique et un moindre

degr, dans le myocarde et les autres tissus. C'est la raison pour laquelle,
la phase initiale d'une ncrose hpatocytaire avec 'importante cytolyse , le
taux de l'ALAT sera plus lev dans le sang que celui de l'ASAT.
Gnralits 37

L'A5AT quant elle est essentiellement prsente dans le cur mais on

la retrouve aussi dans le foie, le rein et les muscles,

2.2.1.3.Mthodes de mesure de l'activit enzymatique

Intrt du dosage [14] : Le dosage est utile dans les pathologies cardiaques
pour mettre en vidence un infarctus du myocarde ou myocardite
(conjo'intement au dosage des (PK), Il permet galement de mettre en
vidence une affection hpatique et de suivre son volution, Un rapport
A5AT / ALAT> 1 associ une hypergammaglobulinmie et un abaissement
du taux de l'antithrombine III , suggre fortement la prsence d'une
cirrhose, Enfin, le dosage est indispensable dans le suivi des patients
thyliques traits par des antituberculeux (risque d'hpatite
mdicamenteuse) ,

2.2.1.3.1. Mthode cintique en continue utilisant le

NADH/NAD

C'est la mthode la plus importante[30] , Elle est base sur des ractions
de couplage de la raction de transamination une raction indicatrice
mettant en jeu le systme nicotinamide dinuclotide oxyd et rduit[30],
La mesure de l'activit catalytique de l'ALAT fait intervenir la LDH et le
couple NADH/NAD+ cofacteur de l'enzyme [52,55]selon la raction:
LDH
Pyruvate +NADH+ H+. Lactate + NAD+
Dans ces conditions, la variation d'absorbance observe 340 nm
correspondant la vitesse d'oxydation du NADH+H+ est gale la vitesse
d'apparition du pyruvate et donc l'activit de l'ALAT,
Gnralits 38

Quant la mesure de l'activit catalytique de l'A5AT, elle est base sur la

raction suivante[53, 5A] :
MDH
Oxaloactate + NADH+ H+ ~ Malate + NAD+

MDH= Malate deshydrognase

On mesure la disparition du NADH + H+ 340 nm.

2.2.1.3.2. Mthode cintique colorimtrique

Nous avons la raction :

'" la 2-4 dinitro-phenylhydrazine qui est une mthode peu spcifique car
elle forme des hydrazones avec tous les groupements carboxyl[31 ,48].
'" aux sels de diazonium qui est une raction spcifique de l'oxaloactate
mais elle prsente des 'interfrences avec l'ure, le glucose, la
bilirubine[55] .

2.2.1.3.3. Mthode fluorimtrique

C'est une mthode dlicate employer, mais elle trs sensible[52,53,54,55].

2.2.1.4. Variations physiopathologiques

2.2.1.4.1. Variations physiologiques

L'activit enzymatique plasmatique des transaminases varie chez les

hommes et les femmes en fonction de l'ge[52,53,54,55]. En effet, Les
activits sont plus faibles chez les femmes que chez les hommes. Par
contre, la surcharge pondrale affecte moins les transaminases chez les
femmes que chez les hommes. Un autre lment qui influence l'activit des
Gnralits 39

transaminases est l'exercice physique. En effet, l'exercice physique

augmente l'activit des transaminases de 2% chez l'homme. Il y a aussi les
rgimes alimentaires riches en sucrose qui influencent l'activit
enzymatique. Les mdicaments comme les contraceptifs oraux, les
antipileptiques, les hypolipmiants et hpatotoxiques augmentent les
transaminases. Par contre, l'alcool diminue leur activit.

2.2.1.4.2. Variations pathologiques

L'lvation des transaminases est nette dans plusieurs affections

particulirement cardiaques et hpatiques (jusqu' 100 fois la valeur normale
dans les hpatites aigus). On observe une augmentation des transaminases
dans les affections [14]suivantes:
)i> affections cardiaques (A5AT / ALAT> 1) telles que l'infarctus du myocarde,
myocardite etc.;
)00 affections hpatiques (A5AT / ALAT < 1 except la cirrhose o
A5AT/ALAT>1) telles que hpatites infectieuses, mdicamenteuse,
toxique; alcoolique etc.;
'" affections pancratiques avec la pancratite aigu biliaire ou thylique;
);- affections musculaires avec les polymyosites, les dystrophies
musculaires etc.

2.2.2. La yglutamyl transpeptidase (EC 2.3.2.2)

2.2.2.1 Dfinition

La yGT est une glycoprot'ine membranaire avec un T 1/Z =3 4 jours

retrouve au niveau de nombreux tissus[42,57].

Elle catalyse le transfert du groupe yglutamyl d'un peptide un autre ou un
acide amin. Elle prsente galement une activit hydrolasique et pour
certains auteurs, une activit glutaminasique. Du fait de sa localisation
Gnralits 40

membranaire, la yGT joue un rle important dans le mtabolisme du

gtutathiollet -clans te transportmembranaire des acides amins et des
peptides. EUe- partk:ipe ~s-si la voie de- dtoxkatioA- du glutatnion et au
mtabolisme des leucotrines.

2.2.2.2. Rpartition

C'est une enzyme ubiquitaire ( rein, pancras, foie, voies biliaires, cur,
rate etc.). La fraction dans le plasma est exclusivement hpato-
biliaire[42,57] . Ce qui fait de la yGT un excellent marqueur d'Inflammation
des voies biliaires.

2.2.2.3. Mthodes de mesure de l'act;vit enzymat;que

Intrt du dosage[14]: Le dosage permet de dtecter des alcoolismes

inavous (augmentation de la yGT en association frquente avec une
macrocytose et une hyperuricmie). Il est galement utile dans la
surveillance du patient alcoolique. Il permet de diffrencier les
augmentations de l'activit des PAL d'origine hpatobiliaire, des PAL d'origine
osseuse. Enfin, il est utile dans la surveillance des cholestases; en effet, une
diminution significative de la yGT en cas de lithiase biliaire est suggestive
d'une limination calculeuse.

2.2.2.3.1. Mthode c;nt;que colorimtrique

Nous avons la mthode utilisant soit:

)0- le Ly-glutamyl-4-nitranilide comme substrat[42,57] selon la raction
suivante:
yGT
Glutamyl-4- nitranilide + glycylglycine -'glu-glycylglycine + 4 nitraniline
Gnralits 41

La vitesse de formation de la 4-nitraniline , qui correspond l'activit de la

yGT est dtermine en mesurant l'augmentation d'absorbance 405 nm.
~ le Ly-glutamyl-3-carboxy-4-nitroani/ide en prsence de la glycylglycine
selon la raction suivante [42,57]:

Ly-glutamyl- 3-carboxy-4- nitroanilide y-glu-glycylglycine

+ +

glycylglycine acide 5-amino-2-nitrobenzoYque

La vitesse de la raction est mesure dans le sens de l'apparition de l'acide
5-amino-2-nitrobenzoYque 410 nm.

2.2.2.3.2. Mthode cintique colorimtrique aprs

diazotation

Cette mthode utilise le y-glutamyl sulfanilite et eUe a l'avantage de se

colorer en rouge ce qui vite l"interfrence avec la bilirubine[42,57]. C'est
une technique qui est peu utilise.

2.2.2.3.3. Autres Mthodes

Il Y a aussi des techniques fluor;mtr;ques, rad;och;m;ques, ou mme

;mmunoch;m;ques qui permettent de mesurer la quantit de la protine .
Mais eUes ne sont pas utilises couramment dans les laboratoires de biologie
clinique[42,57].
GnraUts 42

2.2.2.4. Variations physiopathologiques

2.2.2.4.1. Variations physiologiques

L'activit des yGT augmente avec l'ge, le sexe, le poids, la grossesse,

l'exercice musculaire, la catgorie socioprofessionnelle, les mdicaments
(contraceptifs oraux), l'alcool[42,57].

2.2.2.4.2. Variations pathologiques

o~ note une augmentation des yGT dans les affections [50]suivantes:

),; Ethylisme chronique tel que les cirrhoses d'origine thyUque
", Cancers du foie
", Intoxications mdicamenteuses par les anticoagulants, les
antipileptiques, les neuroleptiques et certains contraceptifs oraux.
", Affections pancratiques et hpatiques telles que les pancratites
aigus, le cancer de la tte du pancras ,les hpatites virales.

2.2.3. Les phosphatases alcalines ( PAL, EC 3.1.3.1 )

2.2.3.1.Dfinition

La PAL est une glycoprotine dimrique de masse molculaire voisine

de 170 Kda avec un T 1/2 =3 7 jours[8,19] . Chaque molcule renferme
quatre atomes de zinc . L'activit catalytique dpend galement de la
prsence de magnsium dans le milieu.
Les PAL catalysent l'hydrolyse en mHieu alcalin d'un grand nombre de
phosphate organique en librant de l'orthophosphate et un alcool, un phnol
ou un ose. Elles sont galement doues d'une activit transfrasique qui est
mise profit dans certaines mthodes de mesure d'activit. Les PAL peuvent
Gnralits 43

hydrolyser les esters pyrophosphoriques. Elles jouent un rle important dans

la calcification et la minralisation du squelette.

2.2.3.2.Rpartition
Les PAL sont localises essentiellement dans les membranes plasmiques
des cellules. On les retrouve dans le foie, le rein, les os , llntestin[8,19].

2.2.3.3. Mthodes de mesure de l'activit enzymatique

Intrt du dosage: Son intrt se trouve dans l'exploration des affections

osseuses ou hpatiques ( en cas de cholestase), la surveillance de la maladie
de Paget et des affections noplasiques[14].

2.2.3.3.1. Mthode cintique colorimtrique

Les PAL catalysent l'hydrolyse du paranitrophnylphosphate ( PNPP) en

paranitrophnol (PNP) et acide phosphorique. Le PNP de coloration jaune est
libr proportionnellement l'activit de la PAL[8, 19] . La raction est la
suivante:
PAL
PNPP + H20 ---. PNP + P0 4H3
Il s'agit du suivi de l'apparition du paranitrophnol 405 nm ( substrat
paranitrophnyl phosphate).

2.2.3.3.2. Mthode colorimtrique en point final

On mesure le paranitrophnol en fin de raction [50].

Gnralits 44

2.2.3.4.Variations physiopathologiques

2.2.3.4.1.Variations physiologiques

L'activit des PAL varie avec l'ge. En effet les PAL sont trs leves la
naissance mais l'ge adulte entre 20 et 50 ans il n'y a pas de variation
lmportante[8,19]. Les PAL sont plus lves chez l'homme que chez la
femme d'environ 20%. L'activit phosphatasique est plus leve chez les
individus du groupe sanguin 0 et B que ceux du groupe A. Une augmentation
des PAL s'observe galement dans la prise de certains mdicaments
(contraceptifs oraux) et au cours d'un rgime nutritionnel riche en
carbohydrate.

2.2.3.4.2.Variations pathologiques

Des augmentations des PAL sont observes dans:

).- les affections hpatiques comme les cancers primitifs du foie et lors des
calculs des voies biliaires[14].
);- les affections osseuses [14] telles que:
la maladie de Paget
-les ostomalacies et le rachitisme
-les tumeurs osseuses
- la maladie de Hodgkin
Par contre on note une hypophosphatsmie [14] dans les maladies
suivantes:
-les hypophosphatsmies congnitales,
-l'hypoparathyrordie.
Gnralits 45

2.2.4. L'alpha amylase (EC 3.2.1.1.)

2.2.4.1. Dfinition

C'est une enzyme qui hydrolyse l'amidon alimentaire et fait apparaltre

des dextrines, du maltose et du glucose avec un T 1/2 =3 6 jours[6].

2.2.4.2. Rpartition

L'amylase est essentiellement labore par deux organes: les glandes

salivaires et le pancras[6].

2.2.4.3. Mthodes de mesure de l'activit amylasique

Intrt du dosage: Le dosage permet de confirmer la suspicion clinique de

parotidite ou d'affection des glandes salivaires. Il est utilis en cas de
douleurs abdominales pour dtecter des pathologies pancratiques. Il
permet galement de suivre l'volution d'une pancratite aigu[14].

2.2.4.3.1. Mthode cintique colorimtrique

Le dosage de l'activit amylasique du srum repose sur une mthode

colorimtrique enzymatique[50]. Trois types de substrats peuvent tre
utiliss avec cette mthode. Il y a la mthode qui utilise l'thylidne G7
PNP comme substrat . Le principe en est le clivage de substrat par l' a
amylase puis par l'a glucosidase en PNP ( paranitrophnol) et glucose. On
mesure la vitesse de la coloration du paranitrophnol 410 nm et cette
vitesse est proportionnelle l'activit amylasique.
Gnralits 46

Il Y a aussi la mthode cintique colorimtrique qui utilise le 2-chloro-4-

nitrophnyl maltotrioside (CNPG 3 ) comme substrat selon la raction:
a amylase
5 CNPG 3 3CNP+3 MALTRIOSE+2 CNPG 2+2 glucose

CNPG 2 =2-chloro-4-nitrophnyl maltoside

2.2.4.3.2. Mthode cintique en UV

L'activit de l'amylase peut galement tre mesure par une mthode UV

en cintique utilisant le maltottraose comme substrat selon la raction:
a amylase
Maltottraose +H20 --.. 2 maltoses
hydrolase
Maltose + phosphate --.. glucose + ~ D glucose-1 phosphate

phosphoglucomutase
~ D glucose-1 phosphate --.. glucose-6 phosphate

G6 PDH
glucose-6 phosphate + NAD+ --.. 6 phospho-gluconate + NADH + H+

G6 PDH = glucose 6 phosphate deshydrognase

La vitesse de formation du NADH est proportionnelle l'activit
catalytique de l'a amylase. Elle est dtermine par la mesure de
l'augmentation d'absorbance 340 nm.

2.2.4.3.2. Mthode nphlmtrique

Elle est base sur la mesure de la vitesse de diminution de l'a amylase[30].

Gnralits 47

2.2.4.4. Variations physiopathologiques

2.2.4.4.1. Variations physiologiques

L'activit amylasique augmente avec l'ge. Elle est plus leve chez l'homme
que chez la femme[6].

2.2.4.4.2. Variations pathologiques

On note une augmentation de l'amylase dans les pathologies

suivantes[14] :
pathologies pancratiques:
- pancratites aigus
. pancratites chroniques en pousse aigu
-ulcre perfor bouch
pathologies des glandes salivaires:
-parotidite suppurative
-oreillon ( avec ou sans atte'inte pancratite associe)
calcul dans les glandes salivaires
autres pathologies
-cholcystite
-obstruction intestinale

2.3. Donnes de travaux raliss sur les valeurs de rfrence de

l'activit de quelques enzymes

Certains auteurs africains et europens ont publi des travaux sur

l'tablissement des valeurs de rfrence propres leur population.
Gnralits 48

Z. 3.1, Travaux raliss en Afrique

Quelques travaux ont t raliss en Afrique sur les valeurs de rfrence

des paramtres biochimiques. Il ressort de ces travaux que les valeurs de
rfrence sont superposables d'un pays africain un autre en dehors de
quelques paramtres. Par ailleurs ces auteurs ont observ pour la
cholestrolmie et la protidmie des diffrences significatives entre les
valeurs africaines et europennes.

2.3.1.1. En Cte d'Ivoire

Les travaux raliss par Yapo et collaborateurs [4,5,9 ] en Cte d'tvo'ire

ont port sur les valeurs de rfrence de 21 constituants biochimiques
sanguins chez l'adulte et chez l'enfant. Ils ont observ de faon gnrale une
augmentation des valeurs des diffrents paramtres en fonction de l'ge
except l'activit des PAL qui est plus leve chez l'enfant. Ils ont attribu
l'augmentation des PAL chez l'enfant l'activit leve de l'hormone de
croissance et des ostoblastes. Ils ont galement observ une augmentation
des valeurs de certains paramtres biochimiques chez l'homme par rapport
la femme en dehors du cholestrol total qui est plus lev chez la femme
ivoirienne.

2.3.1.2. Au Togo

Une tude togolaise [27] a port sur l'tablissement des valeurs de

rfrence de quelques constantes biologiques des travailleurs togolais. Cette
tude a mis l'accent sur les variations pranalytiques, analytiques et
biologiques qui pourraient 'influencer leurs rsultats.
GnraUts 49

2.3.1.3. Au Congo

Acker et coll. [1] ont ralis une tude sur la dtermination de quelques
constantes biochimiques chez le congolais normal. Il est ressorti que certains
facteurs auraient une influence non ngligeable sur les paramtres
biochimiques. Il s'agit de facteurs environnementaux, nutritionnels etc.

2.3.1.4. Au Cameroun

Taga [49] dans son tude a mis l'accent sur l"influence des techniques de
dosage. En effet, il a fait ressortir que les rsultats taient diffrents selon
qu'il 's'agisse de mthode chimique ou enzymatique. Par contre Boun et
coll. [9] en plus de l'influence des techniques de dosage, ont voqu
l'influence des variations pranalytiques, et biologiques sur les rsultats
obtenus.

2.3.1.5. Au Burkina Faso

Les travaux ont port sur le profil biologique au cours de certaines

circonstances physiopathologiques (infarctus myocardique aig [22],
drpanocytose[13], femme en gestation[31], donneurs de sang[48] ,
hypertension artrielle [60]).
En somme, les travaux raliss au Burkina Faso n'ont pas port sur
l'laboration de valeurs de rfrence des enzymes chez les sujets sains.
Les rsultats des travaux de ces diffrents auteurs africa'ins sont consigns
dans le tableau ci-aprs:
GnraUts 50

,
Tableau Il: Valeurs de rfrence de l'activit de quelques enzymes
rapportes par des auteurs africains

~_P:::~:~~~)S
Rsultats Rfrences
IR (m)
1

- - - ------- .. ~
1

7-35(15) 60
16-58(29,98) 9,49
1
1

!
14-56(35 ) 49 i
1

ALAT(UI/I) 6-28(13) 60
1

11-41 (20,98) 9,49 1

11-40(25,4) 49 1

1
1
_.------_. --- -_. - ---- -_._--_._----_ _-
.... - --- -- i

GGT(UI/l) 14-42(28,20) 9,49

1--------_.-. . . .-.
1- PAL(UI/I)
2-52(27)

39-210(91)
36-153(84,48)
49

60
9,49 1

i
27-209(118) .-
49
-------- ---
._.... .._----------_.,'
,- . _._--
1

Amylase (UI/l) 6-26(15,35) 9,49 1

L ____ --- -
118(39-197)
._ . _ _ _ _ ~ _ _ _ _ _ ._ _ _ _ _ ~ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 0'_'.
-_.
49

2.3.2. Travaux raliss en Europe

Des auteurs europens [6,19,42,54,55] ont prsent des tudes ralises

sur les enzymes. Il est ressorti que ces paramtres subissent l'influence du
sexe, de l'ge, des facteurs pranalytiques ( prlvement, temps de pose du
garrot etc.) et analytiques ( technique de dosage etc.).
Les valeurs sont consignes dans le tableau ci aprs.
Gnralits 51

Tableau III : Valeurs de rfrence de l'activit de quelques enzymes

rapportes par des auteurs europens

----,--_.-
!
-

Paramtres i Rsultats Rfrences 1

IR (m)
-- _. __._._-

ASAT(UI/I) 6-30 54

ALAT(UI/I) 7-35 55
-- ..- __
. ."------ . __.'- _.- - -

GGT(UI/l) 5-35 42
--t--- --- ---_._----_._-
i
j

. ~~_: ~~-
PAL(UI/l) 35-110

'-----_l
Amylase(UI/I) 20-160

En rsum, ces valeurs de rfrence ainsi dtermines l'aide de

mthode bien dfinie sont susceptibles de varier significativement d'une
population une autre, l'intrieur d'un mme pays et a fortiori d'un pays
un autre. Ces variations seraient lies divers critres[23,59] d'ordre
gntique, nutritionnel, environnemental, infectieux etc.
C'est pourquoi, nous avons orient nos travaux sur l'tablissement des
valeurs de rfrence propres au burkinab en vue de mettre la disposition
des c1.iniciens une gamme de val.eurs pour une interprtation plus rationnelle
et plus fiable des examens de laborato'ire.
1)ROXIRMR 1?AllTIR:
N~i1\R RT(1)R
MATRI1JR1 RT
MRi}r~1) R~
Matriel et mthodes 52

1. MATERIEL ET METHODES
i

1. Cadre de l'tude

1.1. Le CHN-YO

Notre tude s'est droule au Centre Hospitalier National Yalgado

Oudraogo (CHN-YO) Ouagadougou au Burkina Faso . Cr en 1956 et
fonctionnel depuis 1961, il est devenu en mars 1990 un CHN et en 2002 un
CHU (Centre Hospitalier Universitaire) en la personnalit morale et
l'aut~nomie financire d'un tablissement publique caractre
administratif (EPA).
En tant que centre de sant de rfrence national, il offre des so'ins
spcialiss aux malades des structures priphriques. Outre sa mission de
soins, le CHN-YO a pour vocation de dvelopper la recherche, de raliser des
activits mdicales et d'tre un partenaire privilgi pour la formation des
praticiens mdicaux et personnel infirmier et sage-femmes. Il abrite en son
se'in les services administratifs, les services cliniques et mdico- techniques
parmi lesquels les laboratoires dont celui de la chimie-biologie qui nous a
servi de cadre d'tude.

1.2. Le service de chimie biologie

Il a pour vocation d'effectuer les analyses biochimiques courantes. Dans ce

laboratoire sont raliss un certain nombre d'examens biologiques qui
permettent l'exploration de certains organes savoir:
./ le dosage des substrats tels que ure, cratinine dans l'exploration
de la fonction rnale;
./ la mesure de l'activit des enzymes telles que les transaminases, les
GGT dans l'exploration hpatique;
./ l'ionogramme etc.
Matriel et mthodes 53

2. Type et priode d'tude

Nous avons ralis une tude descriptive transversale. La collecte s'est

droule de Janvier 2002 Juin 2002.

3. Population d'tude

Notre tude a concern des individus slectionns parmi les personnes

venues en consultation externe au centre hospitalier, le personnel du CHN-
YO , les accompagnants et les visiteurs de malades hospitaliss. La slection
a t base sur des critres d'inclusion et d'exclusion.

3.1. Echantillonnage

Nous avons effectu un chantillonnage alato'ire s'imple selon la

mthode de slection a priori prconise par G. Siest. Elle consiste runir
sur la base de critres d'exclusion et d'inclusion un chantillon de rfrence
d'env'iron 50 150 individus par classe d'ge pour former un sous-ensemble
homogne.

3.3.1. Critres d'inclusion

Ont t inclus dans notre tude , les sujets rpondant aux critres
suivants:
~ tre de nationalit burkinab,
~ prsenter des signes physiques de bonne sant,
~ habiter la ville de Ouagadougou,
~ tre g de 15 50 ans.
Matriel et mthodes 54

3.3.2. Critres d'exclusion

Ont t exclus de notre tude les sujets:

". atteints d'affections (annexe 3) responsables de perturbations affectant
l'activit srique des enzymes retenues dans notre tude;
". sous traitement mdicamenteux modifiant certaines activits
enzymatiques telles que l'activit de la yGT avec la prise de mdicaments
'inducteurs; il y a aussi les contraceptifs oraux qui augmentent l'activit
des enzymes;
". dans des tats physiques particuliers: femmes enceintes, sportifs aprs
un exercice physique intense.
". prsentant des facteurs de risque:
./ surcharge pondrale(masse pondrale >120% du poids idal tabli selon
la formule de Lorentz qui permet de calculer un "poids thorique
idal" (Pi) en Kg en fonction de la taille (T) en cm:
Pi Kg = T cm- 100 - (Tcm -150 )/ 4 pour les hommes
Pi Kg = T cm- 105 - (Tcm -150 )/ 4 pour les femmes
./ tat d'amaigrissement majeur ( masse pondrale <80% )
./ autres facteurs: l'alcoolisme, le tabagisme, la consommation
rgulire de cola

C'est ainsi que 559 personnes ont pu tre retenues.

3.2. Homognit de la population d'tude

Nous avons effectu un test de Fisher Snecdecor au seuil de 5% pour

valuer l'homognit de notre population d't~de aussi bien au niveau du
poids qu'au niveau de la taille.
Matriel et mthodes 55

4. Matriel d'tude

4.1. Instrument de collecte des donnes

La collecte des donnes s'est faite au moyen de fiches d'enqute . Ces

fiches ont t tablies pour chaque individu en tenant compte des critres
d'inclusion et d'exclusion retenus. La fiche comporte les rubriques suivantes:
identification de l'individu ( Nom, Prnom(s), ge, sexe, poids, taille ..)
consommation d'alcooL
consommation de tabac
consommation de cola
nature de mdicaments rcemment administrs et pouvant interfrer
avec les rsultats des dosages effectuer: contraceptifs oraux,
antipileptiques, anticonvulsivants, antidpresseurs, certains
anticancreux etc.
rsuLtats du bilan biochimique sanguin pratiqu.

4.2. Matriel de prlvement

Nous avons utilis pour le prlvement:

des tubes hmolyse secs de Sml en plastique,
des aiguilles vacutainer,
des seringues de Sml,
un garrot en caoutchouc,
de l'alcool iod et du coton pour la dsinfection.

4.3. Matriel de laboratoire utilis

L'analyse des spcimens bioLogiques a requis :

une centrifugeuse 5804R , rfrigre de marque Eppendorf,
Matriel et mthodes 56

~ un automate de marque COBAS MIRA PLUS dont la bande spectrale est de

340 700 nm,
~ des micropipettes de 20j..ll et de 1ml,
~ des trousses de ractifs chimiques du laboratoire BioMrieux:
./ enzyline ASAT /GOT monoractif,
./ enzyline ALAT/GPT monoractif,
./ enzyline yGT,
./ enzyline a Amylase RTU,
./ enzyline PAL optimis,
./ du srum de contrle enzymatique "Zymotrol" .

5. Mthodes d'tude

5.1. Prparation des sujets pour le prlvement

Les 'individus jen depuis 10 heures au moins et ayant dormi 7 8

heures ont t prlevs entre 7h et 10h aprs s'tre assur qu'ils n'ont ni fait
d'exercices physiques intenses ,ni fum 2 h avant le prlvement. Aprs un
repos de 15 mil:'ll,Jtes du sujet dans la salle de prlvement, nous avons
effectu le prlvement au niveau du pli du coude l'aide d'un garrot peu
serr pendant mo'ins de deux(02) minutes.

5.2. Traitement des spcimens biologiques

Le sang total prlev sur tube sec a t centrifug 5000 tours/minute

pendant 5 minutes 9C dans les 30 minutes qui ont suivi le prlvement. Le
srum recueilli a t aliquot et conserv -20
0
( jusqu'au dosage.
Les spcimens hmolyss ont t systmatiquement Um'ins.
Matriel et mthodes 57

5.3. Mthodes analytiques de dosage

5.3.1. Fiabilit des mthodes analytiques utilises

Les mthodes analytiques employes pour la mesure des paramtres

bioch'imiques sont des mthodes valides par les laboratoires fabriquant les
ractifs et vrifies sur les appareils du laboratoire de Chimie-Biologie du
CHNYO.
Dans le cadre de notre tude, nous avons rvalu L'exactitude et la
prcision des diffrentes mthodes de dosage par un contrle de qualit
journalier partir d'un srum de contrle, afin de montrer que les rsultats
que nous avons obtenus sont valides.

5.3.1.1. Evaluation de l'exactitude

L'exactitude est L'accord entre la meilleure valeur estime de la

quantit mesure et la valeur vraie (valeur obtenue avec une technique de
rfrence). L'exactitude a t value en procdant au dosage du mme
srum de contrle 20 fois successivement . La valeur moyenne des rsultats
obtenus a t compare la valeur vraie L'aide du test t de Student au
risque a=5% et au ddl=19.

5.3.1.2. Evaluation de la prcision

La prcision correspond L'accord ou la similitude entre des mesures

rptes sur un mme chantillon. Elle caractrise la dispersion des valeurs
obtenues lors des mesures rptes de ce mme chantillon. La prcision est
caractrise par la rptabilit et la reproductibilit. La prcision est
quantifie par le coefficient de variation (CV) intrasriel et intersriel.
Matriel et mthodes 58

5.3.1.2.1. La rptabilit

La rptabilit correspond aux erreurs inhrentes la mthode c'est

d'ire la dispersion minimale obtenue en rptant les essais dans des
conditions rigoureusement identiques. Dans notre tude , pour confirmer la
rptabilit de nos mthodes , nous avons dos 20 fois le srum de contrle
dans la mme srie de dosage . Ensuite nous avons dtermin le coefficient
de variation intrasriel dont la formule est: CV=S/X x1 00.
S reprsente l'cart-type et X la moyenne des vingt (20) valeurs obtenues
dans la mme srie de dosage.

5.3.1.2.2. La reproductibilit

La reproductibilit correspond aux erreurs provenant de faibles

variations dans l'application de la mthode. Le dosage s'tant droul
pendant 20 jours , nous avons inclus dans la srie de dosage quotidien le
srum de contrle afin d'valuer la reproductibilit de nos mthodes
utilises.
Afin d'apprcier l degr de prcision, le coefficient de variation
intersriel a t calcul selon la formule CV=S/m x 100
m ici reprsente la moyenne des valeurs obtenues pendant les v'ingt (20)
jours de dosage.

NB: Les mthodes de dosage par spectrophotomtrie ne sont prcises que

lorsque le coefficient de variation est infrieur 2% .
Matriel et mthodes 59

5.3.2. Principe des mthodes de mesure de l'activit des enzymes

tudies

Ces mthodes sont rsumes dans le tableau ci-aprs:

Tableau IV : Paramtres mesurs et mthodes analytiques utilises

Produit Paramtre Mthode analytique utilise

biologique mesur
Mesure spectrophotomtrique de ~DO en
Srum ASAT cintique dans l'UV en prsence de NADH
(3rC)
=340nm
Mesure spectrophotomtrique de ~DO en
cintique dans l'UV en prsence de NADH
Srum ALAT (37C)
=340nm
Mthode de SZASZ modifi
Srum yGT =40Snm

Enzyline PAL optimis avec tampon DEA

Srum PAL (Mthode DGKC)
=40Snm
Mthode utilisant le 2 chloro
nitrophnylmaltotrioside (CNPG) comme
Srum Amylase substrat
=40Snm
Matriel et mthodes 60

5.3.2.1. Principe de la mthode de dtermination cintique de

l'activit de IASAT

L'ASAT prsent dans l'chantillon de srum est dos selon le schma

ractionnel suivant: ASAT
L-aspartate + actogl~tarate ... oxaloactate + L-glutamate

MDH
Oxaloactate + NADH + H+ .... L-malate + NAD+
On mesure la diminution de l'absorbance du NADH 340 nm qui est
proportionnelle l'activit catalytique de l'ASAT.
Les ractifs utiliss sont mentionns dans le tableau ci-dessous.

Tableau V : Ractifs utiliss dans la dterm'ination cintique de l'activit de

l'ASAT et leurs concentrations

Ractifs Concentrations

Ractif 1 Tampon tris pH 7,8 80 mmol/l

Acide aspartique L-aspartate 200 mmol/l
actoglutarate 12 mmolll

NADH 0,18 mmol/l

Ractif 2 MDH ~500 U/l
Coenzyme 1 Enzymes LDH ~ 1200U/l

Solution de travaH : Reprendre le ractif 2 par le contenu du ractif 1

Stabilit: sept (7) jours 20-25C
un(1) mois2-8C
Matriel et mthodes 61

5.3.2.2. Principe de la mthode de dtermination cintique de

l'activit de l'ALAT
L'ALAT prsent dans l'chantillon de srum est dos selon le schma
ractionnel suivant: ALAT
L-alanine + actoglutarate <Ill. pyruvate + L-glutamate
LDH
pyruvate + NADH + H+ ---. L-lactate + NAD+
.-
On mesure la diminution de l'absorbance du NADH 340 nm est
proportionnelle l'activit catalytique de l'ALAT.

Les ractifs utiliss sont mentionns dans le tableau suivant:

Tableau VI : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de l'activit de

l'ALAT et leurs concentrations

Ractifs Concentrations

Ractif 1 Tampon tris pH 7,5 100 mmol/l

L-alanine L-alanine 500 mmol/l
actoglutarate 15 mmol/l

Ractif 2 NADH 0,18 mmol/l

Coenzyme / Enzymes LDH ~1200 U/l

Solution de travail: Reprendre le ractif 2 par le contenu du ractif 1

Stabilit: cinq (5) jours entre 20-25 C
un(1) mois entre 2-8C
Matriel et mthodes 62

5.3.2.3. Principe de la mthode de dtermination cintique

de l'activit de la yGT

La yGT prsente dans l'chantillon de srum est dose selon le schma

ractionnel suivant: yGT
L-yglutamyl p.nitranilide. ~ L-yglutamyl -glycylglycine
+glycylglycine +p. nitraniline

La vitesse de formation de la p. nitraniline qui est proportionnelle

l'activit de la yGT est dtermine en mesurant l'augmentation d'absorbance
405nm.
.
Les ractifs utiliss sont mentionns dans le tableau ci-aprs:

Tableau VII : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de l'activit de

la yGT et leurs concentrations
Ractifs Concentrations

Ractif 1
Tampon Tampon tris pH 8 100 mmol/l

Ractif 2 L-yglutamyl - 3,4 mmol/l

Substrat glycylglycine
p. nitranilide 85 mmolll

Solution de travail : Reprendre le ractif 2 par le contenu du ractif 1

Stabilit: cinq (5) jours entre 20-25(
trois(3) semaines entre 2-8(
Matriel et mthodes 63

5.3.2.4. Principe de la mthode de dtermination cintique

de l'activit des PAL

La PAL prsente dans L'chantillon de srum est dose selon le schma

ractionnel suivant:
PAL
Nitro-4 phnylphosphate -----. Nitro-4 phnol + phosphate
La raction est effectue en tampon dithanolamine pH 9,8

On mesure l'augmentation de L'absorbance 40Snm.

Les ractifs utiliss sont mentionns dans le tableau ci dessous:

Tableau VIII: Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de L'activit

des PAL et leurs concentrations

Ractifs Concentrations
Ractif 1 tampon dithanolamine pH9,8 1 mmol
Tampon Sulfate de magnsium 0,5 mmol
Azoture de sodium 1 g/l
Ractif 2
Substrat Nitro-4 phnylphosphate 10 mmol/l
Ractif 3
Solvant de reprise Azoture de sod'ium O,9g/l

Solution de travail: Reprendre le ractif 2 par 10ml du ractif 3

Mlanger 10 volumes de ractif 1 avec 1 volume
de substrat (R1 +R3)
Stabilit: trois (3) jours entre 20-25C
deux(2) mois entre 2-8 oC
Matriel et mthodes 64

5.3.2.5 Principe de la mthode de dtermination cintique

de l'activit de l'alpha amylase

Lors de la dtermination cintique en colorimtrie de l'a amylase, le

substrat 2-chloro-4-nitrophnyl maLtotrioside (CNPG 3 ) est hydroLys par l'a
amylase en produisant directement du 2-chloro-4-nitrophnol(CNP).
La vitesse d'apparition du 2-chloro-4-nitrophnol, mesure par la variation
de densit optique par minute, est proportionnelle l'activit de l'a
amylase.

a amylase
5 CNPG 3 ~ 3CNP+3 MALTRIOSE+2 CNPG 2+2 glucose

CNPG 2 =2-chloro-4-nitrophnyl maltoside

On mesure l'augmentation de l'absorbance 405nm.

Tableau IX : Ractifs utiliss dans la dtermination cintique de l'activit

amylasique et leurs concentrations

Tampon MES pH 6,0 50 mmol/l

NaCI 50 mmol/l
Ca(CH3COO)2 5 mmol/l
KSCN 0,4 mmol/l
0,8 mmol/l
3 mmol/l

Solution de travail : Le ractif est prt l'emploi

Stabilit: vingt et un (21) jours entre 20-25 C
deux(2) mois entre 2-8C
Matriel et mthodes 65

5.4. Traitement statistique des rsultats obtenus

L'analyse statistique de nos rsultats a t effectue sur micro-ordinateur

l'aide du logiciel Epi Info version 6.04. A partir des rsultats analytiques
obtenus, nous avons dtermin les principaux paramtres statistiques
savo'ir la moyenne(m), l' cart-type(S) et les intervalles de rfrence (IR) au
risque 0.=5%.
Pour dterminer les IR nous avons utilis la mthode paramtrique de
.
GAUSS au risque u=5% (IR= m :t 1,96 S ).
Le test de t Student a t utilis pour comparer les valeurs moyennes des
rsultats obtenus pour chaque paramtre en fonction du sexe au risque
u=5%.
La mise en vidence de l'homognit de la population s'est faite au
moyen du test de Fisher SNECDECOR.
L'analyse de variance a t utilis pour comparer les valeurs moyennes des
rsultats obtenus pour chaque paramtre en fonction des tranches d'ge.
Pour l'ensemble des rsultats le seuil de significativit a t fix p<0,05.
Matriel et mthodes 66

6. Problme d'thique

Au cours de L'tude, avant tout recrutement, un entretien pralabLe

visant faire comprendre aux sujets, les objectifs de L'tude, les actes que
nous serions amens poser, Les rsultats escompts et leur utilit
ventuelle, a t ralis afin d'obtenir de leur part un consentement clair.
Aprs cette dmarche prliminaire, si le sujet marque son accord, nous
procdions au remplissage de nos fiches d'enqute et au prlvement de
sang pour les diffrentes analyses biochimiques. Aprs quoi nous leur
remettions les rsultats et en cas de pathologies, nous les orientions vers les
services cliniques spcialiss du CHN-YO.
Rsultats 67

Il. RESULTATS DE L'ETUDE

1. Caractristiques dmographiques de la population d'tude

1.1. Population d'tude

Nous avons retenu au total 269 hommes soit 48,12% et 290 femmes soit
51,88%.

Tableau X : Rpartition de la population d'tude selon le sexe

Sexe Effectif Pourcentage(%)

Masculin 269 48,12

Fminin 290 51,88

Total 559 100

1.2. Age des individus de la population d'tude

Trois classes d'ge ont t constitues: 15-25 ans, 26-36 ans, 37-50 ans.

1.2.1. Rpartition de la population d'tude

Nous avons obtenu 184 sujets gs de 15 25 ans soit 32,91 % , 174 sujets
gs de 26 36 ans soit 31,13% et 201 sujets gs de 37 50 ans soit 35,96%.
Rsultats 68

I-~-------~---

1 36%
.. i 350/0
Q) 340/0
S 330;() 31,13%
5; 32%
~ 31%
~
o 30%
Q.
29%-
28%--!"'-------,--------r-------------r
15-25 ans 26-36 ans 37-SO ans
Tranche d'ge
~----------------------

Figure 3 : Distribution de la population en fonction de l'ge

1.2.2. Rpartition de la population d'tude en fonction du sexe et

selon la classe d'ge

Nous avons obtenu pour la premire classe d'ge 91 hommes (33,07%) et

93 femmes (33,83%), pour la deuxime classe d'ge 84 hommes (31,03%) et
90 femmes (31,23%) et enfin pour la dernire classe d'ge 94 hommes
(34,94%) et 107 femmes (36,90%).
Rsultats 69

26-36 ans 37-50 ans

Tranche d'ge

Figure 4: Distribution de la population en fonction du sexe selon la

tranche d'ge

1.3. Homognit de la population d'tude

Les rsultats montrant l'homognit de la population ont t consigns

dans les tableaux XI, XII, XIII.

Tableau XI: Homognit du poids et de la taille de la population d'tude

masculin Fminin
mes) mes) valeur P

Poids(Kg) 66,28(9,08) 65,38(11,23) 0,08

Taille(Cm) 169(8,5) 168(9,1 ) 0,095

m=moyenne s cart-type
Rsultats 70

Tableau XII: Homognit du poids et de la taille de la population masculine

selon la classe d'ge

15-25 ans 26-36 ans 36-50 ans valeur P

m(s) m(s) m(s)
Poids (Kg) 63,6 (8,65) 66,91 (9,16) 68,82 (9,43) 0,65

Taille (Cm) 171 (8,60) 169 (8,5) 167 (8,40) 0,06

Tableau XIII: Homognit du poids et de la taille de la population fminine

selon la classe d'ge

15-25 ans 26-36 ans 36-50 ans valeur P

m(s) m(s) m(s)
Poids (Kg) 64,28 (11,04) 65,47 (11,24) 65,39 (11,40) 0,09

Taille (Cm) 168 (9,1) 170 (9,21) 166 (8,99) 0,24

Ces trois tableaux montrent qu'il n'y a pas de diffrence significative au

risque a=5% au niveau du poids et de la taille entre les hommes et les
femmes au sein de la population globale ainsi qu' l'intrieur des groupes
masculin et fminin. Cela confirme que notre population d'tude est
homogne.
 Rsultats 71

2. Fiabilit des mthodes analytiques utilises

Les rsultats obtenus pour confirmer l'exactitude et la prcision des

diffrentes mthodes utilises sont consigns dans le tableau ci-dessous.

Tableau XIV: Valeurs statistiques de la fiabilit des mthodes analytiques

utilises

Enzymes EXACTITUDE (n=20) PRECISION

Mthodes
Valeur
analytiques vraie du Valeur Test de CV CV
utilises srum de moyenne student te intrasriel intersriel
contrle m (n=20) (n=20)
Xo
Mthode de
Se GGT SZASZ modifi 82 81,8 1,42 0,82 1,80
Mesure spectro
Se ASAT photomtrique 133 134,5 1,92 0,94 1,21
de DO en
cintique dans
l'UV en prsence
de NADH(3rC)
Mesure spectro
Se ALAT photomtrique 163 163,9 1,63 1,70 1,92
de DO en
cintique dans
l'UV en prsence
de NADH(3rC)
Enzyl.ine PAL
Se PAL optimis avec 123 118,5 1,94 1,80 1,90
tampon DEA
( Mthode DGKC)
Mthode
Se amylase utilisant 129 127,8 0,93 1,33 1,46
le 2 chloro
nitrophnylmalt
otrioside (CNPG)
,
comme substrat

ta =2,094 au risque a=5% et au ddl=19 , te = t calcul au risque a=5%

Rsultats 72

Ce tableau montre que notre valeur moyenne pour chaque paramtre est
assez proche de la valeur vraie. La comparaison l'aide du test t de Student
a fait apparaltre qu'il n'y a pas de diffrence significative entre la valeur
vraie du srum et notre valeur moyenne obtenue au risque a=5%. Les
coefficients de variation intra et interseriels ont t trouvs infrieurs 2%,
ce qui confirme la prcision des mthodes.

3. Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes dans la population

d'tude

Les valeurs de rfrence des enzymes tudies chez l'adulte sont

consignes dans le tableau ci-aprs.

Tableau XV: Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes tudies

chez l'adulte

Enzymes (37C) m(s) Intervalle de rfrence

ASAT (UI/I) 19,47(4,81 ) 10-29

ALAT(L1I/I) 17,81 (5,23) 8-28

GGT(UI/I) 20,43(5,96) 9-32

PAL(UI/I) 158,62(33,34) 93-224

Amylase(UI/I) 48,83( 16, 3) 17-81

j

m= moyenne
s= cart-type
Rsultats 73

4.Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes en fonction du sexe

Tableau XVI: Rpartition des valeurs de rfrence de l'activit des enzymes

tudies en fonction du sexe

Masculin Fminin
Enzymes(UI/I) Valeur P
37C
m(s) IR m(s) IR

A5AT 20,30(5,07) 1O-3O 18,58(4,35) 10-27 3 10.5 ",

ALAT 1'8,10(5,49) 7-28 17,49(4,93) 8-27 0,32

GGT 21,66(6,16) 10-34 19,15(5,48) 8-30 10'6 '"

PAL 160,28(34,72) 92-229 155,07(31,48) 93-217 0,07

Amylase 41,99(17,18) 8-76 39,48(17,97) 10-69 0,38

"'(p<0,05)=diffrence significative
IR= Intervalle de rfrence
Il ressort de l'analyse de ces rsultats les observations suivantes:
)0- les valeurs moyennes chez les hommes sont suprieures celles des
femmes pour les diffrentes enzymes;
)0- une diffrence significative au risque a=5% a t note entre les
hommes et les femmes concernant l'A5AT et les GGT par contre il n'y a pas
de diffrence significative pour l'ALAT, la PAL et l'amylase.
Rsultats 74

5. Valeurs de rfrence de l'activit des enzymes en fonction de la classe

d'ge

Tableau XVII: Rpartition des valeurs de rfrence de l'activit des enzymes

tudies en fonction de la classe d'ge

15-25 ans 26-35 ans 36-50 ans

Valeur
m(s) IR m(s) IR m(s) IR P

ASAT 18,93 9-28 19,48 10-29 19,92 11-29 0,11

(UIII) (4,83) (4,76) (4,81 )

ALAT 15,71 8-23 18,21 7-29 19,38 9-30 10-6 *

(L1I1I) (3,97) (5,64) (5,27)

GGT 18,11 8-28 20,91 9-33 22,15 11-34 10-6 *

(L1I1I (5,00) (6,18) (5,94)

PAL 151,07 60-242 158,83 113-204 163,09 118-209 10.6 *

(Ul!l) (46,49) (23,21 ) (23,21)

Amylase 45,66 7-85 46,90 11-83 48,66 10-88 10.6 *

(Ul!l) (19,91) (18,18) (19,91)
i j

* (p<O, 05) =diffrence significative

IR= Intervalle de rfrence
m= moyenne
s= cart-type
Au niveau du tableau XVII il ressort que :
;;.. les valeurs moyennes augmentent avec l'ge;
Rsultats 75

., il n'y a pas de diffrence significative au risque a=5% quelque soit l'ge

pour l'ASAT mais il y a une diffrence significative pour le reste des
enzymes entre les trois classes d'ge.

6. Rapport ASAT1ALAT

Tableau XVIII: Valeur du rapport ASAT/ALAT en fonction du sexe

Masculin Fminin Valeur P

ASAT/ALAT 1,12 1,06 0,35

Le rapport ASAT/ALAT chez l'homme est proche de celui de la femme.

Tableau XIX: Valeur du rapport ASAT 1ALAT en fonction de la classe d'ge

15-25 ans 26-35 ans 36-50 ans

Valeur P

ASAT/ALAT 1,20 1,06 1,02 0,42

Le rapport ASAT 1ALAT entre les trois tranches d'ge ne varie pas de faon
significative au risque a=5% (p> 0,05).
Discuss;on 76

III. DISCUSSION

1. LIMITES DE L'ETUDE

1.1. Cadre de l'tude

Notre tude s'est droule au CHNYO pour faciliter le traitement de nos

chantillons. Cependant ce choix a pu influencer nos rsultats tant donn
Que toutes les couches sociales ne sont pas reprsentes au sein de l'hpital.

1.2. Population d'tude

Ndus avons recrut des sujets gs de 15 50 ans dans la mesure o il

nous a t difficile de trouver des individus de plus de 50 ans respectant nos
critres de slection. En effet, les sujets Que nous avons retenus rpondent
tous les critres de slection a priori. Ces critres sont tablis sur la base de
facteurs connus pour tre la source de variations des constituants
biologiques tudis. Cependant des facteurs dont nous ignorons encore
l'action ont pu influencer l'tablissement de nos valeurs de rfrence. De
plus, les fiches d'enqute ont t remplies en fonction des informations
donnes par les individus slectionns. Cela a pu constituer un biais dans la
mesure o certains critres de slection ne sont pas maltrisables,
notamment la prise d'alcool, la prise de mdicaments, la consommation de
cigarettes.

1.3. Les mthodes d'analyse

Les contraintes relatives aux moyens financiers disponibles ont limit

notre travail la dtermination des valeurs de rfrence de l'activit de cinq
enzymes dans le srum. Cependant la mesure de l'activit d'autres enzymes
dans les urines nous aurait permis de mieux apprcier l'tat fonctionnel de
certains organes.
Discussion 77

Dans un souci de standardisation, la Commission des Enzymes de l'Union

Internationale de Biochimie prconise de mesurer les activits enzymatiques
+30 C [30,56]. Mais il n'a pas t exclu que les dosages puissent s'effectuer
0

+25 C ou +37 C tout en ayant l'esprit que les valeurs seront diffrentes.
0 0

Dans notre tude, la temprature de mesure de l'activit des enzymes a

t de +37 C. Il faut signaler que l'effet de la temprature sur la cintique
0

enzymatique dpend non seulement de l'enzyme mais galement du systme

analytique employ ( ractif et qualit de l'appareillage). C'est pourquoi, les
variations analytiques doivent tre les plus rduites possible pour obtenir des
rsultats fiables. A ce titre, dans notre travail, nous avons valu la fiabilit
des diffrentes mthodes d'analyses employes. Les rsultats obtenus ont
montr que les mthodes sont exactes et prcises. En effet, la comparaison
l'aide du test t de Student entre la valeur vraie du srum de contrle et
notre valeur moyenne obtenue lors des dosages n'a pas rvl de diffrence
significative au risque a=5% .
De plus, les coefficients de variation intra- et intersriels reprsentant
respectivement la reproductibilit et la rptabilit sont infrieurs 2%. Ces
rsultats sont confirms par divers auteurs [23,51]. En effet, nous avons
vrifi avant toute srie de dosage la qualit des ractifs sur le plan de la
puret et de la conservation afin de prserver la spcificit et la
reproductibilit des mesures.
Le contrle quotidien des mthodes d'analyse servirait surveiller les
appareils et le matriel, dceler une erreur et connaltre tout moment
l'imprcision de l'analyse par le calcul du CV . Le contrle permettrait
galement de vrifier la qualit du laboratoire, et de faire une exploration
gnrale des variations d'une mthode dans un grand nombre de laboratoires
pour pouvoir ainsi juger de ses qual1ts.
Discussion 78

2. LES RESULTATS

L'interprtation des rsultats d'un test biologique en vue du diagnostic

d'un tat pathologique, repose sur leur comparaison avec des valeurs dites
de rfrence ou intervalles de rfrence. Ces valeurs dpendent d'une part
de la mthode analytique utilise et d'autre part de la population laquelle
elles s'appliquent ( population de rfrence).

2.1. Les transaminases

2.1.1. Aspartate amine transfrase

La valeur moyenne de l'activit de l'A5AT observe chez les adultes a t

de 19,47 UI/l avec un intervalle de rfrence de 10-29 UI/l. Nos rsultats
sont proches de ceux des europens. Une tude mene en Cte d'Ivoire par
Yapo et coll. [51,58,59] a rapport une valeur plus basse que la ntre. Ces
valeurs diffrentes pourraient s'expliquer par les conditions de temprature
de dosage:+30C dans l'tude ivoirienne[51 ,58,59] et +37C dans la ntre. Il
est effectivement bien connu que la temprature est un des facteurs qui
influencent de l'activit enzymatique[1 ,30,55,56].
Par contre d'autres tudes menes au Cameroun [9,49] et au Congo [1]
rapportent des valeurs suprieures notre valeur moyenne.
Nous pensons que certains facteurs pranalytiques, analytiques et
physiologiques pourraient influencer l'activit de l'A5AT, tels que le temps de
pose du garrot qui doit tre le plus court possible <2 minutes) pour viter
une augmentation de l'activit de l'A5AT[53,54] et/ou le prlvement en
position allonge qui donne des valeurs infrieures celui en position assise
[53,54].
L'augmentation de l'activit de l'A5AT pourrait tre due galement un
rgime riche en sucrose[53,54]. Un cycle biologique pourrait aussi
l'influencer avec un maximum d'amplitude entre 7 heures et 11 heures, le pic
Discussion 79

de l'activit enzymatique se situant 9 heures [53,54]. L'exercice

musculaire, selon Vincent-Viry [53,54] mme modr contribue la
modification de l'activit de l'ASAT de faon significative chez les sujets
sains.
Les valeurs moyennes et les intervalles de rfrence obtenus chez les
hommes sont relativement plus levs que chez les femmes et rappellent
cet gard les rsultats rapports par diffrents auteurs [4,45,46]. Les
diffrences observes entre les hommes et les femmes seraient dues
l'expression d'un mode de vie socialement moins actif chez la majorit
des femmes, donc plus sain.
Nous avons aussi relev une 'influence de l'ge. Ces rsultats sont en
accord avec ceux de Vincent-Viry et coll. [53,54]. Ce dernier a montr que
l'activit augmente rgulirement jusqu' 50 ans chez l'homme et 66 ans
chez la femme. Les rsultats de Laudahn rapports par Vincent-Viry [53.54]
mettent en vidence une augmentation de l'activit de l'ASAT en fonction de
l'ge avec un maximum vers 45 ans pour les hommes et 65 ans pour les
femmes.

2.1.2. L'Alanine Amino Transfrase

La valeur moyenne de l'activit de l'ALAT observe chez les adultes a t

de 17,81UI/l avec un intervalle de rfrence de 8-28 UI/l.
Les valeurs de notre tude sont infrieures celles des congolais[1], des
camerounais[9,49] et des occidentaux[52,55] contrairement celles des
ivoiriens[51 ,58,59] o nous notons une valeur suprieure.
Les valeurs de rfrence peuvent diffrer d'un laboratoire un autre du
fait de la technique de dosage, mais aussi de la taille de l'chantillon de la
population de rfrence ou du fait de variations dmographiques ou
gographiques[51,58,59]. En effet, notre tude a port sur 559 individus,
l'tude ivoirienne sur 174 [4,5], l'tude congolaise[1] sur 130. Quant aux
D;scuss;on 80

occidentaux, leur tude a port sur plus de 1500 individus[52,55]. Cela

pourrait avoir une influence sur les rsultats obtenus.
En pratique quotidienne, certaines situations au moment du prlvement
ou lies l'chantillon peuvent influencer le plus souvent modrment les
rsultats du dosage savoir : l'exercice physique, la position assise ou
debout, la stase veineuse ou l'hmolyse[52,55]. C'est ainsi, que Vincent-Viry
[52,55]rapporte les propos de Stanland selon lesquels le temps de pose
influerait sur les rsultats des activits enzymatiques ainsi que la posture
dans laquelle le sujet se trouve au moment du prlvement. Il affirme qu'il y
aurait une augmentation de l'ALAT de 14,5% si le sujet est prlev en
position assise aU lieu d'tre allong. Il dit aussi que l'ALAT augmente de
1,5% si le temps de pose du garrot est de 3 m'inutes au lieu d'une minute.
Par ailleurs bien que la valeur moyenne de l'homme soit suprieure
celle de la femme, la comparaison l'aide du test de Student au risque a=5%
n' a pas rvl de diffrence significative. Ces rsultats sont en accord avec
les propos de Vincent-Viry [52,55].
La fragilisation de l'hpatocyte par les agressions multiples infectieuses et
parasitaires, pourtant courantes en zone intertropicale comme le Burkina,
peut entra7ner une augmentation des transam'inases. Par ailleurs comme
nous l'avons indiqu prcdemment pour l'ASAT, chez l'homme, un effort
physique modr se traduit plus souvent par une augmentation de plus +
2,5% de l'activit de l'ALAT [52,55].
En plus du sexe , les valeurs sont influences par l'ge. Vincent- Viry dans
son tude[52,55] a not une variation de l'activit de l'ALAT en fonction de
l'ge chez l'homme et chez la femme.
La complexit de toutes ces 'influences que subissent les transaminases, et
l'obligation de leur prise en compte dans l'interprtation des rsultats
justifient tout l'intrt d'tablir en ce qui concerne ces paramtres
biochimiques, des valeurs de rfrence propres aux burkinab.
Discussion 81

2.2. La Gamma Glutamyl Transpeptidase

L'activit srique moyenne de La GGT observe chez les adultes a t de

20,43 UI/l avec un intervalle de rfrence de 9-32 UI/l. Nos rsultats se
rapprochent de ceux rapports par les occidentaux. Par contre, des tudes
menes au Cameroun [9,49] a'insi qu'au Congo [1] ont montr des valeurs plus
leves que les ntres.
D'autres travaux antrieurs ont mis en vidence l'influence des facteurs
environnementaux et nutritionnels [4,9,26]. En effet, l'accumulation isole
de graisse dans le foie ( statose) est responsable d'une augmentation de
l'activit srique aussi bien des transaminases que des GGT[42,57].
L'incidence du sexe sur la valeur moyenne de la GGT a montr que la
valeur moyenne de l'homme est significativement plus leve par rapport
celle de la femme. Notons que, la GGT est une enzyme dont les variations
intra et inter individuelles sont importantes [42,57]. Des tudes ralises par
Siest [19] ont prouv qu'au del de 14 ans, l'activit de la GGT est toujours
plus leve chez l'homme que la femme.
L'analyse de nos rsultats montre une troite corrlation avec ceux des
travaux dj publis, notamment en ce qui concerne l'influence du sexe et
de l'ge[42,57].
Par ailleurs, l'importante stimulation de l'activit de la GGT srique chez
les consommateurs d'alcool est bien connue, ce test tant un des meilleurs
marqueurs biochimiques de confirmation.

2.3. Les Phosphatases Alcalines

La valeur moyenne de l'activit des PAL observe chez les adultes a t

de 158,62 UI/l avec un intervalle de rfrence de 93-224 UI/l.
La phosphatasmie alcaline moyenne de l'adulte burkinab est suprieure
celle des occidentaux[8, 19]. Ces rsultats sont confirms par Shiele[19]
pour qui l'activit des PAL des africains serait plus leve que celle des
Discussion 82

occidentaux en raison d'un plus grand dveloppement du squelette chez

l'africain.
Nos rsultats sont galement suprieurs ceux des camerounais[9,49],
des ivoiriens [4,5]et des congolais[1].
Les variations de la phosphatasmie alcaline seraient lies des variations
pranalytiques, analytiques, nutritionnelles[4,31 ,60]. Shiele[19] a rapport
que l'activit phosphatasique est significativement plus leve (5,5%) si le
sujet est debout pendant 30 minutes avant le prlvement au lieu d'tre
assis ( au repos). Par ailleurs, Shiele[19] a galement not l'influence d'un
repas riche en lipides et en carbohydrate sur l'activit phosphatasique.
En ce qui concerne les hommes et les femmes, nos valeurs moyennes et
interValles de rfrence obtenus chez l'homme ne sont pas significativement
plus levs que chez la femme comme l'ont constat diffrents
auteurs[8,19,58,59].
La comparaison de nos valeurs entre les diffrentes tranches d'ge a
rvl une diffrence significative au risque a=5%. A propos de ces rsultats,
Il convient de noter qu'ils confirment ceux tablis par Artur[8].

2.4. L'alpha amylase

Dans notre tude, l'amylasmie moyenne observe chez les adultes a t

de 48,83 UI/l avec un intervalle de rfrence de 17-81 UI/l.
Nos rsultats sont inclus dans l'intervalle de rfrence des
occidentaux[6,14] ainsi que des congolais[1]. Par contre la l'imite suprieure
de notre intervalle est suprieure celle des camerounais[9 ,49].
Les valeurs de rfrence d'un laboratoire se rapportent non seulement
une technique analytique donne mais dpendent galement des
caractristiques de la population qu'elles caractrisent[33]. Les facteurs
environnementaux, anthropomtriques et alimentaire ainsi que les variations
pranalytiques et analytiques influenceraient les valeurs de
Discussion 83

rfrence[2, 10,12,35]. Les rsultats que nous avons obtenus pourraient tre
attribus ces facteurs.
Dans notre tude, l'amylasmie semble augmenter avec l'ge. En effet le
test de comparaison des valeurs moyennes de l'amylasmie par tranche d'ge
nous a rvl une diffrence significative au risque ex. = 5 %.
L'amylasmie chez l'homme est suprieure celle de la femme mais la
comparaison n'a pas rvl de diffrence significative entre ces deux
groupes. Ces rsultats rejoignent ceux proposs par diffrents auteurs
[1,6,9,49].

2.5. Rapport ASAT/ALAT

Le rapport A5AT/ALAT chez le burkinab prsum sain varie entre 1,06 et

1,12. Les normes internationales donnent un rapport qui varie entre 0,86 et
0,91[54,55]. La valeur du rapport A5AT/ALAT chez le burkinab est proche
de celle des europens.
Le rapport A5AT1ALAT oriente sur le type de pathologie en cause. En
effet, dans les atteintes hpatiques , ce rapport est infrieur ou gal 1
sauf en cas d'hpatite aigu alcoolique o il est suprieur 2. Un rapport
suprieur 1 peut se voir dans les pathologies cardiaques et galement dans
la cirrhose. Ce rapport lev pourrait rsulter d'un dficit d'un mtabolite de
la vitamine 86 (le pyridoxyl-5'-phosphate) coenzyme des deux transaminases.
L'ALAT tant plus sensible une carence en vitamine 86 que l'A5AT, son
activit diminuerait donc plus que celle de l'A5AT.
Le rapport A5AT1ALAT pourrait donc aider dterminer qu'une atteinte
hpatique soit due l'alcool mais, en cas d'lvation, une ~utre cause
devrait tre voque.
Conclusion 84

Les normes utilises jusqu' maintenant au Burkina Faso en bioch'imie ont

t tablies partir des populations occidentles .
Il devenait donc ncessa'ire pour nous de mener cette tude afin d'tablir
pour l'avenir des normes spcifiques un groupe de notre population et
constituer ainsi un recueil de normes propres la population burkinab.
Compte tenu de l'opportunit qui nous a t donne, le choix s'est port sur
les individus frquentant le CHNYO. Pour permettre une meilleure
comprhension de la dmarche mthodologique, nous avons fait un bref
rappel du concept de valeurs de rfrence, les conditions de sa production
et sa prsentation sous forme d'intervalle permettant d'affirmer l'existence
ou non d'un tat pathologique. Nous avons aussi rappel les diffrentes
mthodes de dosage et la mthode retenue pour la mesure de l'activit de
chaque enzyme tudie aprs avoir prcis le cadre de notre tude et le
mode de slection de notre population.
Ainsi notre tude a port sur un effectif de 559 individus gs de 15 50
ans; l'enqute s'est droule au CHNYO .

Les intervalles de rfrence issus de la dtermination des valeurs de

rfrence des enzymes courantes, s'accordent avec les observations
quotidiennes de nombreux praticiens exerant au sein de la population
burk'inab.
La comparaison des rsultats obtenus entre l'homme et la femme de
mme tranche d'ge n'a pas rvl de diffrence significative pour la
majorit des constituants explors. Par contre, pour certains paramtres,
des diffrences notables lies des facteurs multiples ont t observes
entre le burkinab et l'occidental adulte sa'in, le camerounais ainsi que le
congolais.
Ce travail prliminaire permet d'envisager une tude plus grande
chelle qui aurait pour objectif l'tablissement d'un profil biochimique
complet de la population burkinab.
Recommandations 86

Nos recommandations s'adressent:

Aux autorits sanitaires du Burkina Faso:

-Favoriser la ralisation de ce type d'tude par un soutien financier

accru aux chercheurs.
-Favoriser la synergie entre les services cliniques et biologiques
-Amliorer les capacits analytiques des laboratoires d'analyses mdicales du
Centre Hospitalier National Yalgado Oudraogo afin de rpondre aux
situations d'urgence.
-Inclure le dosage des enzymes cardiaques (troponine, cratine
phosphokinase) pour amliprer les diagnostics prcoces de l'infarctus du
myocarde.

Aux chercheurs :

-Etendre ce type d'tudes l'ensemble de la population burkinab.

-Elargir le champ d'tude toutes les villes du Burkina Faso pour une
exploration par catgorie gographique.

Aux cliniciens et au personnel des laboratoires d'analyses mdicales:

- Etablir une meilleure collaboration pOlir une prise en charge amliore des
patients.
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aminotransfrase) Variations biologiques et valeur de rfrence. Dans :
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Mdecine: np.
 ANNEXE 1

Fiche d'enqute
Numro de la fiche:

Age:

Sexe:

Rsidence:

Profession:

Tension artrielle(cmHg):

Poids (Kg):

Taille(cm) :

Consommation d'alcool: Non

Oui quantit /jour

Consommation de tabac: Non

Oui quantit/jour

Consommation de cola: Non

OJli quantit/jour
Examens biologiques
i

ASAT:

ALAT:

GGT:

PAL:

Alpha Amylase:
 ANNEXE 2

Liste non exhaustive de facteurs de variations biologiques

prsents sous forme de mots cls

Activit physique Gographie Race

Age Grossesse Radiations
Agression Groupe ethnique Rapports sexuels
Alcool Groupe sanguin Rgime alimentaire
Aliment Hospitalisation Rgime amaigrissant
Altitude Hypothermie Rgime vgtarien
Allaitement Hypoxie Repas
Ambulatoire Immobilisation au lit Rythmes annuels
Apesanteur Jeun() Rythmes circadiens
Bruit Jene Rythmes hebdomadaires
Caf Lumire Rythmes saisonniers
Catgorie socio- Massage musculaire Sang artriel ,capillaire
professionnelle veineux
Chaleur Masse Sdentarit
Conditions de travail Mdicaments Sexe
Conduite auto Mnopause Solvants
Cycle menstruel Mtaux lourds Sommeil
Dficit en vitamine B6 Morphologie Surface
Eau d'alimentation Nutrition Tabac
Effort important Obsit Taille
Electrochoc Ovulation Temprature extrieur
moyenne
Entranement Oxyde de carbone Temprature de l'habitat
Environnement Pli cutan Traitement des cheveux
Exercice musculaire Ponction ( localisationVitamines
de la)
Fivre Position debout Viande
Froid: exposition Position couche
Froid: exposition au froid Pression artrielle
intense
Fumeur Profession palpation de
la prostate
Garrot Pubert
Gntique
 ANNEXE 3

Affections pouvant influencer l'tablissement des valeurs de

rference

y Affections cardiovasculaires

y Affections hmatologiques

y Affections neurologiques

y Affections rhumatismales

y Affections endocriniennes:

Diabtes sucrs

Troubles corl:icosurrnaliens

Troubles mdullosurrnaliens

Troubles thyrodiens

Troubles testiculaires

Troubles ovariens

y Drpanocytose

y Goutte

y Helminthiases

y Amibiase
UNIVERSITE DE OUAGADOUGOU

BURKINA FASO
Unit de Formation et de recherche en
Sciences de la sant (UFRlSDS) Unit Progrs Justice
---------------------------~-

03 BP 7021 OUAGDOUGOU 03

ArrESTATION DE CORRECTION

Nous soussign certifions avoir revu la thse cOrrigee de Mlle BOUABRE

Edwige Annick intitule: Contribution l'tablissement des valeurs de rfrence de
para~tres biologiques chez le Burkinab adulte :. Evaluation de cinq paramtres
reprsentatifs de l'activit enzymatique au service de chimie biologie du Centre
Hospitalier National Yalgado Oudraogo (C.H.N.Y.O.) Ouagadougou.

Les corrections apportes sont conformes aux recommandations des membres

du Jury.
Attestation dlivre pour s~rvir et valoir ce que de droit.

Ouagadougou le 3 Mars 2003

Le Prsident du Jury
, \

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,/ /. ..1 L/ ~'\\Y';;/ /~
PL I.Pier e GUISSOU Pro Odile NACOULMA
 RESUME

Les valeurs de rfrence de quelques enzymes d'intrt biomdical

dtermines l'aide de mthodes bien choisies ne sont pas
systmatiquement transposables d'un pays un autre. C'est pourquoi, celles
de cinq enzymes figurant parmi les plus couramment doses ont t tablies
sur 559 adultes burkinab au CHN-YO en vue d'une contribution
l'tablissement des valeurs de rfrence propres la population burk'inab.
Le traitement statistique l'aide de la mthode paramtrique de GAUSS
(au risque a=5%) des rsultats obtenus l'issue de cette tude nous a permis
de proposer des valeurs et intervalles de rfrence de cinq (5) enzymes
suivantes: ( il s'agit des valeurs moyennes 1,96 cart-type)
> ASAT:19,47 UI/l [10-29]
> ALAT:17,81 UI/l [8-28]
> GGT:20,43 UI/l [9-32]
> PAL: 158,62 UI/l [93-224]
> alpha Amylase:48,83 UI/l [17-81]
Il en rsulte que dans l'ensemble, les valeurs de rfrence sont plus
leves chez l'homme, comparativement la femme au Burkina Faso comme
ailleurs dans le monde.
Comparativement aux normes occidentales, il a t not des valeurs
quivalentes pour l'ASAT, l'ALAT et la GGT tandis que les valeurs de certaines
enzymes sont apparues plus leves (PAL) ou plus basses (alpha amylase)
chez les burkinab.
Les normes ainsi tablies vont permettre aux praticiens burkinab
d'interprter plus aisment les rsultats qui seront issus de l'exploration
biochimique de leurs patients.
Mots cls: Valeurs de rfrence / adulte burkinab ICHN-YOI ASATI ALATI
PAL/ GGT/ alpha amylase/ moyenne/ Intervalle de rfrence.