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LABORATORIO DE BIOQUMICA 502504

QUA 3. POLISACRIDOS

I. EL PROBLEMA

Identificar por medio de reacciones cualitativas los carbohidratos obtenidos por


hidrlisis de polisacridos.

II. FUNDAMENTO TERICO.

Los polisacridos son constituyentes importantes de los seres vivos,


qumicamente estn formados por la unin de unidades de monosacridos con
enlaces glucosdicos.

Estas molculas se descomponen por hidrlisis cida en residuos ms


pequeos, que se puede identificar mediante reacciones de azcares simples o
disacridos.

Fundamento qumico de los ensayos

Hidrlisis cida:

Es la ruptura del enlace glicosdico, para liberar monosacridos o disacridos del


polisacrido como se ilustra en la figura 1, requiere un cido fuerte, pero tambin
se puede hidrolizar con enzimas especficas, por ejemplo el almidn y el
glucgeno se pueden hidrolizar por las enzimas -amilasa (14) y glucosidasas
(16)

Ensayo con Lugol:

El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer
polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azul-
violeta intensa. Este color se debe a la absorcin de yodo dentro de los espacios
abiertos de las hlices de amilosa que constituyen el 20% del almidn. Las
amilopectinas forman un color rojo a prpura, y el glicgeno y las dextrinas se
caracterizan por la formacin de coloracin roja.

Ensayo de Benedict

Permite el reconocimiento de carbohidratos reductores, contiene ion cprico (Cu 2+)


en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso (Cu 2O rojo) en presencia de
azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre.

Ensayo de Barfoed

Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores,


tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente
con los monosacridos que con los disacridos.

Ensayo de Bial

El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de


coloracin slo con las pentosas, las cuales rpidamente se deshidratan para
convertirse en furfural.
El furfural reacciona adems con orcinol y cloruro frrico para formar una solucin
azul-verdosa, caracterstica de las pentosas.
III. MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales

20 tubos de ensayo 1 vasos de 400 mL


1 gradilla 1 microesptula
1 placa con depresiones

Reactivos

Suspensin de todas soluciones al 1% : Papel indicador


Almidn Lugol
glucgeno Reactivo de Benedict
carragenina Reactivo de Barfoed
xilano Reactivo de Bial
alginato Glucosa al 1%
celulosa Arabinosa al 1%
pectina Maltosa al 2%
HCl 4M
NaOH al 20%

IV. PROCEDIMIENTO

Experimento 1

Prepare un tubo de ensayo con aproximadamente 10 mL de la muestra del


polisacrido asignado y adicione 2 mL HCl 4M, mezcle, marque este tiempo como
tiempo cero, agite fuertemente y lleve el tubo a una bao mara a ebullicin.

Cada treinta minutos tome dos muestras de aproximadamente 1 mL del tubo que
est a ebullicin y transfiralas a otros tubos, adicinele NaOH al 20% gota a
gota hasta que la muestra est neutra, verifique con un papel indicador. Adicione
1 mL agua destilada. Finalmente realice los ensayos de Benedict y lugol para
cada muestra.

Realice este ensayo por lo menos durante media hora.

Compare los resultados obtenidos

Ensayo de Benedict

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue


0.1 mL del reactivo de Benedict, caliente al bao mara. La formacin de un
precipitado amarillo o rojizo, es prueba positiva para carbohidratos reductores.

Si tiene dudas sobre el resultado del ensayo use como patrn una solucin de
glucosa.
Ensayo de lugol

Mezcle una gotas de la solucin de lugol con la muestra proveniente de la


hidrlisis una coloracin azul le indica la presencia de un polisacrido.

Puede usar almidn y glucgeno como patrones para confirmar la formacin del
complejo coloreado.

Experimento 2.

Prepare dos tubos de ensayo en el primero coloque 3 mL de la muestra del


polisacrido asignado y en el segundo 3 mL de xilano; adicione 3.5 mL HCl 4.0 M
a cada tubo mezcle, agite fuertemente y coloque el tubo en una bao mara a
ebullicin, tape el tubo con papel aluminio.

Luego de media hora divida la solucin en dos tubos, neutralice con NaOH al
20% y realice los ensayos de Barfoed y Bial.

Ensayo de Barfoed

Coloque en un tubo de ensayo aproximadamente 1.0 mL de la solucin del


carbohidrato y agregue 2 mL del reactivo de Barfoed, caliente en bao mara a
ebullicin. La formacin de un precipitado rojo-ladrillo entre 5 y 10 minutos, es
prueba positiva para MONOSACRIDOS REDUCTORES. Si el precipitado se
forma entre 15 y 20 minutos, la prueba es positiva para DISACRIDOS
REDUCTORES. Puede usar glucosa y maltosa como patrones

Ensayo de Bial

Coloque en un tubo de ensayo aproximadamente 1.0 mL de la solucin del


carbohidrato y agregue 3 mL del reactivo de Bial, caliente en bao mara a
ebullicin y observe. La formacin de una coloracin verdosa es prueba positiva
para pentosas. Puede utilizar arabinosa como patrn de pentosas.

V. BIBLIOGRAFA

CAREY, Francis A. Qumica Orgnica. 3 ed. Espaa: Mc Graw Hill, 2000.

CLEIN, David. Qumica Orgnica. 2 ed. Mxico: Mdica Panamericana, 2014.

HART H., Craine L. y HART. D. Qumica Orgnica. 9 ed. Espaa: McGraw Hill,
1997.

MCMURRY, J. Qumica Orgnica. 5 ed. Mxico: Thomson 4ditors, 2000.

The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals. Budavari S.


Guide for safety in the Chemical Laboratory.
PREINFORME

Complete el siguiente cuadro:

Polisacrido Monosacridos Tipo de Obtencin Usos


constituyentes enlace industriales
glucosdico

Celulosa Glucosa

-1,4

Almidn

Pectina

Goma de xantan

Carragenina
Alginato

Xilano

Quitosn

cido hialurnico

Condroitn sulfato

Amilosa

Glucgeno
Hemicelulosa

De acuerdo con las muestras que usar en la prctica escriba los resultados
esperados correspondientes

EXPERIMENTO 1
Resultados esperados ____________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________

Diagrama de flujo: (utilice las hojas que sean necesarias)

Complete la secuencia que represente el proceso que va a llevar cabo en el


laboratorio.
TUBO DE ENSAYO

10 ml de almidn
2ml de HCl 4M

Mezclar

Agitar
Dos muestras
de 1 ml de
muestra cada
Calentar treinta
minutos

Tomar muestra

Gotas de NaOH al
20%
1 ml de agua

TUBO DE

BENEDICT Lugol

1 ml de reactivo de Gotas de lugol


benedict
Calentar

Observar
EXPERIMENTO 2

Resultados esperados:

TUBO DE

3 ml de carragenina
3.5 ml de HCl 4.0M 3 ml de xilano
3.5 ml de HCl
4.0M
Mezclar Mezclar

Luego de
Calentar Luego de
media hora,
Calenta media
en 2 tubos
hora, en 2
Dividir la tubos

Dividir la solucin
Gotas de Gotas de
NaOH NaOH
Barfoed Bial
2 ml de Gotas
3 ml de
reactivo de de
reactivo
barfoed Barfoe NaOH Bial
de bial

2 ml de 3 ml de
Calentar reactiv reactivo
Calentar
o de ba de bial

Observa Calenta Calenta


r

Observar
Fichas tcnicas

Propiedades de los reactivos a usar en el laboratorio

Nombre Frmula Aspecto Peligrosidad* Forma de desechar

*Indique la peligrosidad con el smbolo correspondiente: explosivo (E), comburente (O), inflamable
(F), extremadamente inflamable (F+), txico (T), muy txico (T+), corrosivo (C), nocivo (Xn),
irritante (Xi) y/o peligroso para el medio ambiente (N). Pictogramas SGA

GUA PARA LA PRESENTACIN DEL INFORME

RESUMEN (150 palabras). Incluye: objetivo general, resultado general y


conclusin general.
Palabras clave (5)
Abstract
Key words
Marco terico o introduccin (2 hojas arial 12 espacio sencillo). Debe estar
relacionado con el tema y con base en la directriz de la gua. Debe haber
interrelacin entre los prrafos. Citar en el texto. Normas APA. Mnimo 3 autores
de los cuales debe haber 1 libro en fsico.
Metodologa (diagrama de flujo)
Tabla de datos. Completa y pertinente. Si hay fotos y diagramas debidamente
marcados e identificados. En las tablas la numeracin va arriba, en las grficas y
fotos en la parte inferior. Ecuaciones de las reacciones si las hay
Resultados asociados a la tabla de datos
Anlisis de resultados (relacin de la teora con la prctica)
Conclusiones relacionadas con cada uno de experimentos del laboratorio.
Oraciones positivas o negativas.
Bibliografa. Adecuado manejo de referencias bibliogrficas. Normas APA