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Introduccin a la Gentica Molecular y

Genmica.
La gentica "proyecto original" que garantice la
continuidad de la vida de padres a hijos se codifica
en una molcula comn a todos los organismos
vivos: ADN. Cada molcula de ADN se subdivide en
genes que, cuando se transcribe y traduce,
producen las protenas necesarias para la vida.
Cromosoma humano de cuatro, que se muestra
aqu, contiene aproximadamente 2000 genes. Las
nuevas tecnologas, como la del ADN de
microarrays o "chip" -Oferta investigadores los
medios para leer mapas genticos. [Chip de ADN
cortesa de Jeffrey P. Townsend, Duccio Cavalieri, y
el Centro de Harvard de Investigacin Genmica.]

Cada especie de organismo vivo tiene un singular conjunto de caractersticas hereditarias que lo
hace diferente de otras especies. Cada especie tiene su propio plan de desarrollar mentales - a
menudo descrito como una especie de "plan maestro" para la construccin del organismo - que
est codificada en las molculas de ADN presentes en sus clulas. Este plan de desarrollo
determina las caractersticas que se encuentran en heredada. Dado que los organismos de la
misma especie comparten el mismo plan de desarrollo, organismos que son miembros de la
misma especie por lo general parecen entre s, a pesar de algunas excepciones notables son por lo
general las diferencias entre machos y hembras. Por ejemplo, es fcil de distinguir un ser humano
a partir de un chimpanc o un gorila. Un ser humano se encuentra habitualmente en posicin
vertical y tiene piernas largas, relativamente poco vello corporal, un cerebro grande, y una cara
plana con una prominente nariz, la barbilla, los labios se adentra distintas, y pequeos dientes.
Todos estos rasgos son parte inherente- de nuestro plan de desarrollo - y nos identifican como el
Homo sapiens.

Pero los seres humanos son de ninguna manera idntica. Y el hombre, rasgos o caractersticas
observables, difieren de una persona a otra. Hay una gran cantidad de variacin en el color del
pelo, color de ojos, color de piel, estatura, peso, rasgos de personalidad y otras caractersticas.
Algunos rasgos humanos se transmiten biolgicamente, otros culturalmente. El color de nuestros
ojos el resultado de la herencia biolgica, pero la lengua materna que aprendi de nio resulta de
la herencia cultural. Muchos rasgos son influenciados en forma conjunta por la herencia biolgica
y los factores ambientales. Por ejemplo, el peso se determina en parte por herencia, sino tambin,
en parte, por el medio ambiente: la cantidad de alimentos que comemos, su contenido
nutricional, nuestro rgimen de ejercicio, y as sucesivamente. La gentica es el estudio de los
rasgos heredados biolgicamente, incluyendo rasgos que son influenciados en parte por el medio
ambiente.
El concepto fundamental de la gentica es ese:

Los rasgos hereditarios son determinados por los elementos de la herencia que se transmiten de
padres a hijos en la reproduccin; estos elementos de la herencia se llaman genes.

La existencia de los genes y las normas que rigen su transmisin de generacin en generacin se
articula por primera vez por Gregor Mendel en 1866 (Captulo 3). Formulacin de la herencia de
Mendel fue en trminos de las reglas abstractas por el cual (los llam "factores") se transmiten
elementos hereditarias de padres a hijos. Sus objetos de estudio fueron los guisantes de jardn,
con rasgos variables como el color de guisante y altura de la planta. En un momento gentico
podran ser estudiados slo a travs de la progenie producida a partir de apareamientos. Las
diferencias genticas entre las especies eran imposibles de definir, porque los organismos de
diferentes especies por lo general no se aparean, o que producen progenie hbrida que mueren o
son estriles. Esta aproximacin al estudio de la gentica se refiere a menudo como la gentica
clsica, o la gentica organicistas o morfolgicas. Teniendo en cuenta los avances de la gentica
molecular, o modernos, es posible estudiar las diferencias entre especies a travs de la
comparacin y el anlisis del ADN en s. No hay una distincin fundamental entre la gentica
clsica y molecular. Son formas diferentes y complementarias de estudiar lo mismo: la funcin del
material gentico. En este libro se incluyen muchos ejemplos que muestran cmo la gentica
molecular y clsicas se pueden utilizar en combinacin para mejorar el poder de anlisis gentico.

El fundamento de la gentica como ciencia molecular se remonta a 1869, slo tres aos despus
de Mendel inform de sus experimentos. Fue en 1869 que Friedrich Miescher descubri un nuevo
tipo de cido dbil, abundante en los ncleos de las clulas blancas de la sangre. cido dbil de
Miescher result ser la sustancia qumica que ahora llamamos el ADN (cido desoxirribonucleico).
Durante muchos aos se desconoca la funcin biolgica de ADN, y ningn papel en la herencia fue
atribuido a la misma. Esta primera seccin se muestra cmo el ADN fue finalmente aislado e
identificado como el material de que estn hechos los genes.

1.1 ADN: el material gentico

Que el ncleo de la clula juega un papel clave en la herencia fue reconocido en 1870 por la
observacin de que los ncleos de las clulas masculinas y femeninas se someten a la fusin
reproductiva en el proceso de fertilizacin. Poco despus, los cromosomas se observaron por
primera vez dentro del ncleo como objetos filiformes que se hacen visibles en el microscopio de
luz cuando la clula se tie con ciertos tintes. Los cromosomas se encontraron a exhibir un
comportamiento caracterstico "divisin" en la que cada clula hija formado por la divisin celular
recibe un complemento idnticas de los cromosomas (Captulo 4). Otra prueba de la importancia
de los cromosomas fue proporcionada por la observacin de que, mientras que el nmero de
cromosomas en cada clula puede diferir entre especies biolgicas, el nmero de cromosomas es
casi siempre constante con en las clulas de una especie en particular. Estas caractersticas de los
cromosomas fueron bien entendidos por sobre f900, y lo hicieron parece probable que los
cromosomas eran los portadores de los genes.

Por la dcada de 1920, varias lneas de evidencia indirecta comenzaron a sugerir una estrecha
relacin entre los cromosomas y el ADN. Los estudios microscpicos con tinciones especiales
demostraron que el ADN est presente en los cromosomas. Los cromosomas tambin contienen
varios tipos de protenas, pero la cantidad y tipos de protenas cromosmicas son muy diferentes
de un tipo de clula a otro, mientras que la cantidad de ADN por clula es constante. Adems, casi
todo el ADN presente en las clulas de organismos superiores est presente en los cromosomas.
Estos argumentos a favor de ADN como material gentico no fueron convincentes, cmo nunca,
porque qumica crudo anlisis haba sugerido (errneamente, como se vio despus) que el ADN
carece de la necesaria diversidad qumica de una sustancia gentica. El candidato preferido para
el material gentico fue la protena, ya que las protenas eran conocidas por ser una coleccin
muy diversa de molculas.

Las protenas, por tanto, a ser ampliamente aceptadas como material gentico, y el ADN se
supone que funcione simplemente como el trabajo del marco estructural de los cromosomas. Los
experimentos descritos a continuacin, finalmente, demostraron que el ADN es el material
gentico.

Prueba experimental de la funcin gentica de DNA

Un primer paso importante fue tomado por Frederick Griffith en 1928 cuando demostr que un
rasgo fsico se puede pasar de una clula a otra. l estaba trabajando con dos cepas de la
bacteria Streptococcus pneumoniae identificada como arena R. Cuando una clula bacteriana se
cultiva en un medio slido, se somete a repetirse divisiones celulares para formar un grupo
visible de clulas llamada colonia. El tipo S de S. pneumoniae sintetiza una cpsula gelatinosa
compuesta de hidratos de carbono complejos (polisacridos) .La cpsula envolvente hace que
cada colonia grande y le da un brillante o (S) aspecto liso. Esta cpsula tambin permite a la
bacteria que causa la neumona protegerse de los mecanismos de defensa de los animales en
una durabilidad. Las cepas R de 5. Pneumoniae son incapaces de sintetizar el polisacrido
capsular; forman pequeas colonias que tienen una superficie rugosa (R) (Figura 1.1) .Este cepa
de la bacteria no causa neumona, ya que con la cpsula de las bacterias se inactivan por el
sistema inmune del husped.

Figura 1.1. Las colonias de cepas de Streptococcus pneumoniae en bruto (R, las pequeas colonias) y suave (S, las
grandes colonias). Las colonias S son ms grandes debido a la cpsula gelatinosa en las clulas S. [Fotografa de O. T.
Avery, C. M. MacLeod, y M. McCarty. Reproducido de la revista Journal of Experimental Medicine, 1944, vol. 79, p. 1
37 con autorizacin de derechos de autor de la Universidad Rockefeller Press.]
Figura 1.2. El experimento de Griffith que demuestra la transformacin bacteriana. Un ratn se mantiene saludable si
se inyecta, ya sea con la cepa no virulenta R de S. pneumoniae o fragmentos de clulas muertas por calor de la cepa S
normalmente virulenta. Clulas R en la presencia de clulas S muertas por calor se transforman en la cepa S virulento,
causando neumona en el ratn.

Ambos tipos de bacterias "raza true" en el sentido de que la progenie formada por la divisin celular tienen
el tipo capsular de los padres, ya sea S o R. Los ratones inyectados con clulas S de vida reciben neumona.
Los ratones en los proyectada, ya sea con clulas R vivas o con calor mat a las clulas S siguen siendo
sanos. Aqu es importante hallazgo de Griffith: los ratones inyectados con una mezcla de clulas vivas y R
calor mataron clulas S contraen la enfermedad - que a menudo mueren de neumona (Figura 1.2). Las
bacterias aisladas a partir de muestras de sangre de estos ratones muertos producen cultivos de S con una
cpsula tpica de las clulas inyectadas S, a pesar de que las clulas inyectadas S haban muerto por el calor.
Evidentemente, el material inyectado desde las clulas muertas de S incluye una sustancia que se puede
transferir a las clulas que viven R y confiere la capacidad de resistir el sistema inmunolgico del ratn y
causar neumona. En otras palabras, las bacterias R puede ser cambiado - o sufren una transformacin -en
a las bacterias S. Ms an, las nuevas caractersticas son heredadas por los descendientes de las bacterias
transformadas.

La transformacin en Streptococcus fue descubierto originalmente en 1928, pero no fue hasta 1944 que se
identific la sustancia qumica responsable de cambiar las clulas de R a S clulas. En un experimento de
hito, Oswald Avery, Colin MacLeod, y McCarty Maclyn mostraron que la sustancia que causa la
transformacin de clulas R en clulas S era el ADN. Al hacer estos experimentos, primero tuvieron que
desarrollar procedimientos qumicos para el aislamiento de ADN a partir de clulas casi puro, que nunca se
haba hecho antes. Cuando agregaron ADN aislado de clulas S de crecimiento de cultivos de clulas R,
observaron la transformacin:

Se produjeron Unas pocas clulas de clulas de tipo S. Aunque las preparaciones de ADN contenan rastros
de protenas y de ARN (cido ribonucleico, una abundante molcula macro celular qumicamente
relacionada con el ADN), la actividad de transformacin no fue alterada por tratamientos que destruyeron
las protenas o ARN. Sin embargo, los tratamientos que destruyen el ADN eliminaron la actividad
transformadora (Figura 1.3). Estos experimentos implicaban que la sustancia responsable de la
transformacin gentica era el ADN de la clula por lo tanto, que el ADN es el material gentico.
(A) La actividad de transformacin en clulas S no se destruye por el calor.

(B) La actividad de transformacin no se destruye por cualquiera de proteasa y RNasa.

(C) La actividad transformadora se destruye por DNasa.

Figura 1.3. Un diagrama del experimento Avery-MacLeod-McCarty que demostr que el ADN es el material activo en
la transformacin bacteriana. (A) El ADN purificado extrado de clulas S muertas por calor puede convertir algunas
clulas vivas R en clulas S, pero el material todava pueden contener trazas indetectables de protena y / o ARN. (B)
La actividad de transformacin no se destruye por cualquiera de proteasa o RNasa. (C) La actividad transformadora es
destruido por DNasa y por lo que probablemente se compone de ADN.
Figura 1.4. (A)
Dibujo de E. colfagos T2, que muestra varios componentes. El ADN se limita a la interior de la cabeza. (B)
una micrografa electrnica de fago T4, un fago estrechamente relacionado. [Micrografa del electrn de
cortesa Robley Williams.]

Papel gentico de ADN en bacterifagos.

Un segundo hallazgo fundamental fue reportado por Alfred Hershey y Martha Chase en 1952.
Estudiaron clulas de la bacteria intestinal Escherichia coli despus de la infeccin por el virus de
T2. Un virus que ataca a las clulas bacterianas se llama un bacterifago, un trmino a menudo
abreviado como fago. Bacterifago significa "devorador de bacterias." La estructura de una
partcula de bacterifago T2 se ilustra en la Figura 1.4. Es excesivamente pequeo, sin embargo,
tiene una estructura compleja compuesta de cabeza (que contiene el ADN del fago), cuello, cola,
y fibras de la cola. (La cabeza de un espermatozoide humano es aproximadamente 30 -50 veces
ms grande en longitud y anchura que la cabeza de T2.) Hershey y Chase ya haba una cermica
que la infeccin tiene lugar a travs T2 adjuntar el medio de una partcula de fago por la punta
de su cola a la pared celular bacteriana, la entrada de material de fago en la clula, la
multiplicacin de este material para formar un fago cien o ms progenie, y la liberacin del fago
de la progenie por ruptura (lisis) de la clula husped bacteriana. Tambin saban que las
partculas T2 se componen de ADN y protenas en cantidades aproximadamente iguales.

Ya que el ADN contiene fsforo pero no azufre, en donde como la mayora de las protenas
contienen azufre, pero no de fsforo, es posible marcar el ADN y las protenas diferencialmente
mediante el uso de istopos radiactivos de los dos elementos .Hershey y Chase producen
partculas que contienen DNA radiactivo mediante la infeccin de clulas de E. coli que se haba
cultivado durante varias generaciones en un medio que inclua 32P (un istopo radiactivo de
fsforo) y luego recogiendo la progenie de fagos. Otras partculas que contienen protenas
marcadas se obtuvieron de la misma manera, mediante el uso de medio que inclua 35S (un
istopo radiactivo de azufre).

En los experimentos resumidos en la Figura 1.5, las clulas de E. coli no radiactivos se infectaron
con el fago marcado ya sea con 32P (parte A) o 35S (parte B) con el fin de seguir el ADN y las
protenas de manera individual. Las clulas infectadas se separan de las partculas de fago no
unidas por centrifugacin, se resuspendieron en medio fresco, y luego se arremolinaron
violentamente en un mezclador de cocina para cizallar el material de fago unido de las superficies
celulares. Se encontr que este tratamiento no tener ningn efecto en el curso posterior de la
infeccin, lo que implica que el material gentico del fago debe entrar en las clulas infectadas
muy pronto despus de la unin del fago. La batidora de cocina result ser la pieza fundamental
del equipo. Otros mtodos se han tratado de romper las cabezas de fagos de la superficie de la
clula bacteriana, pero nada haba funcionado de forma fiable. Hershey explic ms tarde,
"Tratamos diversos arreglos de molienda, con resultados que no eran muy alentadores. Cuando
Margaret McDonald nos prest su batidora de cocina, el experimento tuvo xito rpidamente."

Despus de que las cabezas de fagos se eliminaron mediante el tratamiento licuadora, se


examinaron las bacterias infectadas. La mayor parte de la radiactividad de fago marcado con 32P
fue encontrada para ser asociado con la bacteria, mientras que slo una pequea fraccin de la
radiactividad 35S estaba presente en las clulas infectadas. La retencin de la mayor parte del
ADN marcado, en contraste con la prdida de la mayor parte de la protena marcada, da a
entender que a T2 transfiere del fago la mayor parte de su ADN, pero muy poco de su protena,
a la clula que infecta. El hallazgo crtico (Figura 1.5) era que alrededor del 50 por ciento de la 32P
transferido marcado con ADN, pero menos del 1 por ciento de la protena marcada con 35S
transferido, fue heredado por las partculas de la progenie de fagos. Hershey y Chase interpretan
este resultado en el sentido de que el material gentico en T2 fago es ADN. Los experimentos de
Avery, MacLeod y McCarty y los de Hershey y Chase son considerados como clsicos en la
demostracin de que los genes se componen de ADN. En la actualidad, el equivalente del
experimento de transformacin se lleva a cabo diariamente en muchos laboratorios de
investigacin en todo el mundo, por lo general con bacterias, levaduras, o clulas animales o
vegetales que crecen en cultivo. Estos experimentos indican que el ADN es el material gentico
de estos organismos, as como en el fago T2. Aunque no hay excepciones conocidas a la
generalizacin de que el ADN es el material gentico de todos los organismos celulares y muchos
virus, en algunos tipos de virus del material gentico se compone de ARN.

Figura 1.5. (En la pgina opuesta) El experimento Hershey-Chase ("batidora") que demuestra que
el ADN, las protenas no son responsable de dirigir la reproduccin de fago T2 en clulas de E.
coli infectadas. (A) ADN radiactivo se transmite a la progenie de fagos en cantidades sustanciales.
(B) protena radiactiva se transmite a la progenie de fagos en cantidades insignificantes.
Conclusin; ADN de un fago parental infectante se hereda en la progenie de fagos

Alfred D. Hershey y Martha Chase 1952

Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, Nueva York funciones independientes de
protena viral y cido nucleico en crecimiento del bacterifago.
Un total de ocho aos publicado despus de la de papel de Avery, MacLeod y McCarty, los
experimentos de Hershey y Chase se igualan facturacin. Por qu? Algunos historiadores de la
ciencia indican que el Avery et al. Experimentos fueron "por delante de su tiempo". Otros
sugieren que Hershey tena una posicin especial porque l era un miembro de los "en el grupo"
de los genetistas moleculares de fagos. Max Delbrck reconocido como el lder de este grupo, con
Salvador Luria cerca. (Delbrck, Luria, y Hershey compartieron el Premio Nobel 1969). Otra
posible razn es que mientras que los experimentos de Avery et al. Eran demostraciones de
fuerza en bioqumica, los de Hershey y Chase eran la quintaesencia gentica. Qu
macromolcula entre en la accin hereditaria, y que no lo hace? Enterrado en el medio de este
documento, y se retiene en el extracto, es una sentencia admitiendo que una publicacin anterior
por los investigadores fue una mala interpretacin de sus resultados preliminares. Esto
demuestra que incluso los cientficos de primer nivel, entonces y ahora, a veces son engaados
por sus datos preliminares. Hershey explic ms tarde, "Tratamos diversos arreglos de molienda,
con resultados que no eran muy alentadores. Cuando Margaret McDonald nos prest su cocina
batidora el experimento tuvo xito con prontitud.

El trabajo [de otros] ha demostrado que los bacterifagos T2, T3 y T4 se multiplican en la clula
bacteriana en una forma no infecciosa [inmadura]. Poco ms se sabe acerca de la fase vegetativa
[crecimiento] de estos virus. Los experimentos presentados en este documento muestran que
uno de los primeros pasos en el crecimiento de T2 es la liberacin de su capa de protena del cido
nucleico de la partcula de virus, despus de lo cual la mayor parte de la protena que contienen
azufre no tiene ninguna funcin adicional. . . . Anderson ha obtenido micrografas electrnicas
que indican que el fago T2 se une a las bacterias por su cola. . . . Debera ser un asunto sencillo
para romper las capas de fagos vacas frente a las bacterias infectadas, dejando el ADN del fago
dentro de las clulas. . . . Cuando una suspensin de clulas con 35S-o fago marcado con 32P se
hizo girar en una mezcladora en 1 0.000 revoluciones por minuto,. . . 75 a 80 por ciento del azufre
del fago puede ser despojado de las clulas infectadas. . . . Estos hechos demuestran que la mayor
parte del azufre del fago se mantiene en la superficie celular durante la infeccin. . . . Poco o nada
de 35S est contenido en la progenie del fago maduro. . . . Experimentos idnticos que empiezan
con el fago marcado con 32P muestran que el fsforo se transfiere de los padres a la progenie de
fagos en rendimientos de aproximadamente 30 fagos por bacteria infectada. . . . [La separacin
incompleta de las cabezas de fagos] explica un informe preliminar errneo de la transferencia de
35S de los padres a la progenie de fagos. . . . Las siguientes preguntas siguen sin respuesta. (L)
Alguna fago libre de azufre material distinto al ADN entre en la clula? (2) Si es as, es
transferido a la progenie del fago? (3) Es la transferencia de fsforo a la progenie directa o
indirecta ?. . . Nuestros experimentos muestran claramente que una separacin fsica del fago T2
en partes genticos y no genticos es posible. La identificacin qumica de la parte gentica debe
esperar hasta que alguna de las preguntas anteriores han sido contestadas. . . . La protena que
contiene azufre de partculas de fago de descanso se limita a una capa protectora que es
responsable de la adsorcin a las bacterias, y funciona como un instrumento para la inyeccin del
ADN del fago en la clula. Esta protena probablemente no tiene ninguna funcin en el
crecimiento del fago intracelular. El ADN tiene alguna funcin. Otras inferencias qumicas no
deben extraerse de los experimentos presentados.
Nuestros experimentos muestran claramente que una separacin fsica del fago T2 en partes
genticos y no genticos es posible.

1.2. Estructura del ADN: La doble hlice

La inferencia de que el ADN es el material gentico an queda muchas preguntas sin respuesta.
Cmo es el ADN en un gen duplicado cuando una clula se divide? Cmo funciona el ADN en
un gen controlar un rasgo hereditario? Qu ocurre con el ADN cuando una mutacin (un cambio
en el ADN) se lleva a cabo en un gen? A principios de la dcada de 1950, una serie de
investigadores comenz a tratar de comprender la estructura molecular detallada de ADN con la
esperanza de que la estructura solo sugerira respuestas a estas preguntas. En 1953 James Watson
y Francis Crick propusieron en la Universidad de Cambridge la primera estructura tridimensional
esencialmente correcta de la molcula de ADN. La estructura era deslumbrante en su elegancia y
revolucionario en el que sugiere la forma de ADN se duplica, los controles de los caracteres
hereditarios, y se somete a mutacin. Incluso mientras que su modelo de estao y el alambre de
la molcula de ADN eran an incompleta, Crick visito a su pblico favorito y exclamo "hemos
descubierto el secreto de la vida."

En la estructura de Watson-Crick, el ADN se compone de dos cadenas largas de subunidades, cada


una ronda sometidas a torsin la otra para formar una hlice de doble cadena. La doble hlice es
diestro, lo que significa que a medida que se mira a lo largo del barril, cada cadena sigue un
camino agujas del reloj a medida que avanza. Puede visualizar el bobinado diestro en la parte A
de la Figura 1.6. Si uno se imagina a s mismo mirando hacia arriba en la estructura de la parte
inferior. Las esferas oscuras describen la "columna vertebral" de cada individuo en la cadena, y
se enrollan en un sentido de las agujas del reloj. Las subunidades de cada hebra son nucletidos,
cada uno de los cuales contiene uno cualquiera de los cuatro constituyentes qumicos llamados
bases unidas a una molcula fosforilada del azcar desoxirribosa 5-carbono. Las cuatro bases del
ADN son: Adenina (A) Guanina (G) Timina (T) Citosina (C)

Las estructuras qumicas de los nucletidos y bases no tienen por qu interesarnos en este
momento. Se examinan en el captulo 2. Un punto clave para nuestros propsitos actuales es que
las bases de la doble hlice estn emparejados como se muestra en la Figura 1.6B. Es decir:

En cualquier posicin de las hebras apareadas de una molcula de ADN, si una de las cadenas
tiene una A, en la hebra pareja tiene una T; y si una de las cadenas tiene una G, entonces la hebra
pareja tiene una C.

El emparejamiento entre A y T y entre G y C se dice que es complementario; el complemento de


A es T, y el complemento de G es C. El emparejamiento complementario significa que cada base
a lo largo de una hebra de ADN se corresponde con una base en la posicin opuesta en la otra
hebra. Adems:

Nada restringe la secuencia de bases en una sola hebra, de modo que cualquier secuencia podra
estar presente a lo largo de una hebra.

Este principio explica cmo slo cuatro bases en el ADN pueden codificar para la enorme cantidad
de informacin necesaria para hacer un organismo. Eso es la secuencia de bases a lo largo del
ADN que codifica la informacin gentica, y la secuencia es completamente sin restricciones. El
apareamiento complementario tambin se llama Watson -Crick emparejamiento.

Figura 1.6. Estructura molecular de la doble hlice de ADN en la norma "forma B". (A) Un modelo
de relleno de espacio, en el que cada tomo se representa como aesfera. (B) Un diagrama
destacando los filamentos helicoidales alrededor del exterior de la molcula y la A - T y G -C pares
de bases en el interior.

En la estructura de tres dimensiones en la Figura 1.6A, los pares de bases estn representadas
por las esferas ms ligeros que llenan el interior de la doble hlice. Los pares de bases se
encuentran casi plana, apilados uno encima del otro perpendicular al eje largo de la doble hlice,
como monedas en un rollo. Cuando se habla de una molcula de ADN, los bilogos se refieren
con frecuencia a las hebras individuales de ADN como -cables individual y a la doble hlice de
ADN como -cables doble o dplex de ADN.

Cada hebra de ADN tiene apolaridad, o direccionalidad, como una cadena de elefantes de circo
vinculados tronco hasta la cola. En esta analoga, cada elefante corresponde a un nucletido
mucho la cadena de ADN. La polaridad se determina por la direccin en la que los nucletidos
estn sealando. El final "tronco" de la cadena se llama 'de la hebra, y el fin "cola" se llama el
extremo 5' del extremo 3. En el ADN de doble cadena, las hebras apareadas estn orientados en
direcciones opuestas, el extremo 5 'de una hebra alineado con el extremo 3' de la otra. La base
molecular de la polaridad, y la razn de la orientacin opuesta de las hebras de ADN de doble
hlice, se explica en el Captulo 2. Al ilustrar las molculas de ADN en este libro, utilizamos una
cinta estrecha como para representar la columna vertebral, y usamos las pestaas que sobresalen
fuera de la cinta para representar los nucletidos. La polaridad de una cadena de ADN se indica
por la direccin de la flecha de la cinta -como. La cola de la flecha representa el extremo de la
cadena de ADN, la cabeza 3 '5 al final.

Ms all de las esperanzas ms optimistas, el conocimiento de la estructura del ADN


inmediatamente dio pistas sobre su funcin:

1. La secuencia de bases en el ADN podra ser copiada mediante el uso de cada una de las hebras
"asociadas" separadas como un patrn para la creacin de una nueva hebra pareja con una
secuencia complementaria de bases.

2. El ADN podra contener informacin gentica en forma codificada en la secuencia de bases, de


forma anloga a las cartas impresas en una tira de papel.

3. Los cambios en la informacin gentica (mutaciones) podran ser el resultado de errores en la


copia en la que la secuencia de bases del ADN se hizo alterado.

En el resto de este captulo, se discuten algunas de las implicaciones de estas pistas.

1.3. Una visin general de la replicacin del ADN

Watson y Crick observaron que la estructura del ADN en s sugiri un mecanismo para su
replicacin, "No se nos escapa", escribieron, "que el apareamiento de bases especfico que hemos
postulado sugiere inmediatamente un mecanismo de copia." El proceso de copia en el que una
sola molcula de ADN se convierte en dos molculas idnticas se llama replicacin. El mecanismo
de replicacin que Watson y Crick tuvieron en cuenta se ilustra en la Figura 1.7.

Como se muestra en la parte A de la figura 1.7, los hilos de la original (padre) dplex
independiente, y cada hebra individual sirve como un patrn o plantilla, para la sntesis de una
nueva hebra (rplica). Las hebras de rplica se sintetizan por la adicin de nucletidos sucesivos
de tal distancia que cada base en la rplica es complementaria (en el sentido de emparejamiento
Watson-Crick) a la base a travs de la forma en la cadena molde (Figura 1.7b). A unque el
mecanismo en la Figura 1.7 es simple en principio, es un proceso complejo que est plagada de
problemas geomtricos y requiere una variedad de enzimas y otras protenas. Los detalles se
examinan en el captulo 6. El resultado final de la replicacin es que una sola molcula de doble
cadena se reproduzca en dos copias con secuencias idnticas:
Aqu las bases en las cadenas recin sintetizadas se muestran en rojo. En el dplex a la izquierda,
la cadena superior es la plantilla de la molcula parental y la cadena inferior se sintetiza
recientemente; en el dplex a la derecha, la cadena inferior es la plantilla de la molcula parental
y la cadena superior est recin sintetizado. Tenga en cuenta que en la figura 1.7b en la sntesis
de cada nuevo captulo, los nuevos nucletidos se aaden solamente al extremo 3 'de la cadena
en crecimiento:

El alargamiento obligatorio de una cadena de ADN solamente en el extremo 3 'es una


caracterstica esencial de la replicacin del ADN.

A B molcula original de ADN

Figura 1.7 La replicacin del ADN. (A) La replicacin de un dplex de ADN segn lo previsto
originalmente por Watson y Crick. A medida que las cadenas parentales se separan, cada hebra
parental sirve como molde para la formacin de una nueva hebra hija por medio de .A -T y G -C
apareamiento de bases. Detalle (B) Mayor mostrando cmo cada una de las cadenas parentales
sirve como un molde para la produccin de una hebra complementaria hija, que crece en longitud
por la adicin sucesiva de nucletidos individuales con el extremo 3.

1.4 Genes y Protenas


Ahora que tenemos una comprensin bsica de la composicin estructural de la huella gentica,
cmo este plan de desarrollo se convierta en un organismo vivo complejo? Si el cdigo est
pensado como una serie de letras en una hoja de papel, a continuacin, los genes se componen
de palabras distintas que forman frases y prrafos que dan sentido al patrn de letras. Lo que se
crea a partir de los cdigos de ADN complejas y diversas es la protena, una clase de molculas
de macro que lleva a cabo la mayor parte de las actividades en la celda. Las clulas se hacen en
gran parte de las protenas: las protenas estructurales que dan la rigidez de clulas y la movilidad,
protenas que forman poros en la membrana de la clula para controlar el trfico de pequeas
molculas dentro y fuera de la clula, y protenas receptoras que regulan las actividades celulares
en respuesta a seales moleculares del medio de cultivo o de otras clulas.

Las protenas tambin son responsables de la mayor parte de las actividades metablicas de las
clulas. Son esenciales para la sntesis y descomposicin de molculas orgnicas y para la
generacin de la energa qumica necesaria para las actividades celulares. En 1878 la enzima
trmino fue introducido para referirse a los catalizadores biolgicos que aceleran las reacciones
bioqumicas en las clulas. Para el ao 1900, en gran parte gracias a la labor del bioqumico
alemn Emil Fischer, enzimas mostraron ser protenas. Como sucede a menudo en la ciencia,
"errores" de la naturaleza proporcionan pistas sobre cmo funcionan las cosas. Tal fue el caso en
el establecimiento de una relacin entre los genes y la enfermedad, debido a un "error" en un
gen (una mutacin) puede dar lugar a un "error" (falta de funcin) en la protena
correspondiente. Esto proporcion una fructfera un lugar de investigacin para el estudio de la
gentica.

Errores innatos del metabolismo como una causa de enfermedad hereditaria

Fue a finales del siglo XX que el mdico britnico Archibald Garrod se dio cuenta de que ciertas
enfermedades hereditarias siguen las reglas de transmisin que Mendel haba descrito por sus
guisantes. Garrod en 1908 dio una serie de conferencias en el que propuso una hiptesis
fundamental acerca de la relacin entre la herencia, enzimas, y la enfermedad:

Cualquier enfermedad hereditaria en la que el metabolismo celular es resultados anormales de


un defecto hereditario en una enzima.

Entre estas enfermedades se hicieron conocidos como errores en el metabolismo de nacidos, un


trmino todava en uso hoy en da.

Garrod estudi una serie de errores en nacidos de metabolismo en el cual los pacientes excretan
sustancias anormales en la orina. Una de ellas fue la alcaptonuria. En este caso, la sustancia
anormal excretada es el cido homogentsico:

Un nombre temprano para el cido homogentsico era alkapton, por lo tanto los alcaptonuria de
nombres para la enfermedad. A pesar de que la alcaptonuria es poco frecuente, con una
incidencia de uno de cada 200.000 personas, era bien sabido incluso antes de Garrod estudi. La
enfermedad en s es relativamente suave, pero tiene un sntoma notable: La orina del paciente
se vuelve negro debido a la oxidacin del cido homogentsico (Figura 1.8). Esta es la razn por la
alcaptonuria tambin se llama enfermedad de la orina negro. Un caso anterior fue descrito en el
ao 1649:

Figura 1.8 La orina de una persona con alcaptonuria se vuelve de color negro debido a la oxidacin
del cido homogentsico que contiene. [Cortesa de Daniel De Aguiar.]

El paciente era un nio que pasa la orina negro y que, a la edad de catorce aos, fue sometido a
un curso drstica de tratamiento que tena por objeto el sometimiento del calor de fuego de sus
vsceras, que se supona iba a llevar a la condicin de que se trate por la carbonizacin y el
ennegrecimiento de la bilis. Entre las medidas prescritas fueron sangrados, purgacin, baos, una
dieta fra y acuosa, y las drogas en abundancia. Ninguno de ellos tena ningn efecto evidente, y,
finalmente, el paciente, que cansado de la terapia intil y superflua, resolvi dejar que las cosas
sigan su curso natural. Ninguno de los males pronosticados se produjo. Se cas, engendr una
gran familia, y vivi una vida larga y saludable, siempre que pasa la orina negro como la tinta.
(Contado por Garrod, 1908.)

Garrod estaba interesado principalmente en la bioqumica de la alcaptonuria, pero tom nota de


los estudios familiares que indicaban que la enfermedad estaba en heredada como si se tratara
de un dueto un defecto en un solo gen. En cuanto a la bioqumica, dedujo que el problema en la
alcaptonuria fue la incapacidad de los pacientes para romper el anillo de fenilo de seis tomos de
carbono que est presente en el cido homogenetsico. De dnde viene este anillo viene? La
mayora de los animales obtenerla de los alimentos en su dieta. Garrod propuso que el cido
homogentsico se origina como producto de descomposicin de dos aminocidos, fenilalanina y
tirosina, que tambin contiene un anillo de fenilo. Un aminocido es uno de los "bloques de
construccin" de la que estn hechas las protenas. La fenilalanina y la tirosina son constituyentes
de las protenas normales. El esquema que ilustra la relacin entre las molculas se muestra en
la Figura 1.9. Cualquier secuencia de reacciones bioqumicas se llama una forma de ruta
bioqumica o una ruta metablica. Cada flecha en la forma de ruta que representa un solo paso
que representa la transicin de la molcula de "entrada" o sustrato, que se muestra en la punta
de la flecha, a la molcula de "salida" o producto, que se muestra en la punta. Vas bioqumicas
son generalmente orientados en forma vertical con las flechas apuntando hacia abajo, como en
la figura 1.9, u horizontalmente, con las flechas apuntando de izquierda a derecha. Garrod no
conoca todos los detalles de la va en la figura 1.9, pero se entenda que el paso clave en la
descomposicin del cido homogentsico es la ruptura abierta del anillo de fenilo y que el anillo
de fenilo en cido homogentsico proviene de la ingesta de fenilalanina y tirosina.

Lo que permite a cada paso en una ruta bioqumica que se produzca? Garrod conjetur
correctamente que cada paso requiere una enzima especfica para catalizar la reaccin para la
transformacin qumica. Las personas con un error innato del metabolismo, alcaptonuria como
los, tienen un defecto en un solo paso de una va metablica porque carecen de una enzima
funcional para ese paso. Cuando una enzima en una va es defectuoso, se dice que la va a tener
un bloque en ese pas. Un resultado frecuente de una va bloqueada es que el sustrato de la
enzima defectuosa se acumula. Al observar la acumulacin de cido homogentsico en pacientes
con alcaptonuria, Garrod propuso que no debe enzima frijol cuya funcin es abrir el anillo de
fenilo de cido homogentsico y que esta enzima est ausente en estos pacientes. El aislamiento
de la enzima que abre el anillo de fenilo de cido homogentsico En realidad no se logra hasta 50
aos despus de las conferencias de Garrod. En las personas normales, se encuentra en las clulas
del hgado, y al igual que Garrod haba predicho, la enzima es defectuosa pacientes hospitalizados
con alcaptonuria.

cido homogentsico (anteriormente conocido como alkapton)


Figura 1.9 va metablica para la degradacin de la fenilalanina y la tirosina. Cada paso en la va,
representado por un estrecho, requiere una enzima especfica para catalizar la reaccin. El paso
clave en la descomposicin del cido homogentsico es la abierta ruptura del anillo de fenilo.

La enfermedad de la orina Negro.

Archibald E. Garrod 1908

El Hospital de San Bartolom, Londres, Inglaterra errores innatos del metabolismo

A pesar de que era un distinguido mdico, conferencias de Carrod sobre la relacin entre la
herencia y defectos congnitos en el metabolismo no tuvieron un impacto cuando fueron
entregados. El concepto importante que un gen corresponde a una enzima (la "un gen-una
enzima hiptesis") fue desarrollado de manera independiente en los 7940s por George W. Beadle
y Edward L.Tatum, quien utiliz el moho del pan Neurospora crassa como su organismo
experimental. Cuando Beadle, finalmente se dio cuenta de los errores innatos del metabolismo,
fue generoso en la alabanza l. Este extracto muestra Garrod en su mejor momento,
entretejiendo la historia, la medicina clnica, la herencia y la bioqumica en su relato de la
alcaptonuria. El extracto tambin ilustra cmo la gravedad de una enfermedad gentica depende
de su contexto social. Garrod escribe como si alcaptonuria eran una curiosidad inofensiva. Este
es de hecho cierto en gran medida cuando la esperanza de vida es corta. Con mayor esperanza
de vida de hoy en da, la alcaptonuria hace que los pacientes acumulen el pigmento oscuro en
sus cartlagos y articulaciones y, finalmente, desarrollar artritis severa.

Para los estudiantes de la herencia de los errores innatos del metabolismo ofrecen una
investigacin de campo o prometedora. . . . Se seal [por otros] que el modo de incidencia de
alcaptonuria encuentra una explicacin listo si la anomala ser considerado como un carcter
recesivo poco frecuente en el sentido mendeliana. . . . De los casos de alcaptonuria una
proporcin muy grande haber estado en los hijos de matrimonios entre primos hermanos. . . . Es
tambin digno de mencin que, si se toman las familias con cinco o ms hijos [con ambos padres
normal y al menos un hijo afectado con alcaptonuria], los totales trabajan a cabo en estricta
conformidad con la ley de Mendel, es decir, 57 [nios normales]: 19 [nios afectados] en las
proporciones 3: 1... . . De errores en el metabolismo de nacidos, alcaptonuria es aquello de lo que
ms conocemos. En s mismo es un asunto trivial, inconveniente ms que perjudicial. . . . Las
indicaciones de la anomala se pueden detectar en los escritos mdicos tempranos, como que en
1584 de un escolar que, a pesar de que gozaba de buena salud, excreta la orina continuamente
negro; y que en 1609 de un monje que exhibi una peculiaridad similar y afirm que lo haba
hecho toda su vida. . . . No hay motivos suficientes para dudar de que [la sustancia en la orina
ennegrecimiento originalmente llamado alkapton] es el cido homogentsico, la excrecin de los
cuales es la caracterstica esencial de la alcaptonuria.... cido Homogentisia es un producto del
metabolismo normal. . . . Las fuentes ms probables del anillo de fenilo en cido homogentsico
son fenilalanina y tirosina, [porque cuando estos aminocidos se administran a un alcaptonuria]
de que causen un incremento muy notable en la produccin de cido homogentsico. . . . Cuando
la alcaptonuria difiere del individuo normal est en que no tiene poder de destruccin de cido
homogentsico, cuando se forman en otras palabras de romper el anillo de fenilo de ese
compuesto. . . . Podemos concebir, adems, que la divisin del anillo de fenilo en el metabolismo
normal es el trabajo de una enzima especial y que en la alcaptonuria congnita esta enzima es
querer.

Fuente: Publicado originalmente en Londres, Inglaterra, por la Oxford University Press. Extractos
de la edicin reimpresa en Harry Harris. 1963. Los errores congnitos del metabolismo. Carrod
Londres, Inglaterra: Oxford University Press

La va para la descomposicin de fenilalanina y tirosina, ya que se puso de bajo hoy en da, se


muestra en la Figura 1.10. En esta figura, el nfasis est en las enzimas ms que en las estructuras
de los metabolitos, o molculas pequeas, en las que las enzimas actan. Cada paso en la va
requiere la presencia de una enzima particular que cataliza ese paso. Aunque Garrod conoca slo
de alcaptonuria, en el que la enzima defectuosa es cido homogentsico 1, 2 dioxigenasa, ahora
sabemos que las consecuencias clnicas de defectos en las otras enzimas. A diferencia de la
alcaptonuria, que es una enfermedad hereditaria relativamente benigna, los otros son muy
graves. La condicin conocida como fenilcetonuria (PKU) resultados de d e la ausencia de (o un
defecto en) la enzima fenilalanina hidroxilasa (PAH). Cuando este paso en la va se bloquea, la
fenilalanina se acumula. El exceso de fenilalanina se descompone en metabolitos dainos que
causan defectos en la formacin de mielina que daan el sistema nervioso en desarrollo de un
nio y conducen a retraso mental grave.

Sin embargo, si la PKU se diagnostica en nios muy pronto despus de su nacimiento, que pueden
ser colocados en una dieta baja en fenilalanina especialmente formulado. El nio se permite slo
la cantidad de fenilalanina como se puede utilizar en la sntesis de protenas, por lo que el exceso
de fenilalanina no se acumula. La dieta especial es muy estricta. Se excluyen las carnes, aves,
pescado, huevos, leche y productos lcteos, legumbres, frutos secos y productos de panadera
fabricados con harina regular.

Estos alimentos son reemplazados por una frmula sinttica cara. Con la dieta especial, sin
embargo, los efectos perjudiciales del exceso de fenilalanina en el desarrollo mental en gran
medida pueden ser evitados, aunque en mujeres adultas con PKU que estn embarazadas, el feto
est en riesgo. En muchos pases, incluyendo los Estados Unidos, todos los bebs recin nacidos
tienen anlisis de sangre para detectar signos qumicos de PKU. La deteccin de rutina es rentable
debido a la FCU es relativamente comn. En los Estados Unidos, la incidencia es de 1 en 8000
nacimientos entre los caucsicos. La enfermedad es menos comn en otros grupos tnicos.

En la va metablica en la Figura 1 .1 0, los defectos en la descomposicin de tirosina o de 4-


hidroxi plomo-cido fenilpirvico a los tipos de tirosinemia. Estos tambin son enfermedades
graves. Tipo II se asocia con lesiones de la piel y retraso mental. Tipo III con disfuncin heptica
severa.

Los genes mutantes y protenas defectuosas

Se desprende de la obra de Garrod de que una enzima defectuosa causa de un gen mutante, pero
cmo? Garrod no especul. Por lo que saba, los genes son enzimas. Esto habra sido una
hiptesis lgica en el momento. Ahora sabemos que la relacin entre los genes y enzimas es lo
que algunos indirecta. Con unas pocas excepciones, cada enzima est codificada en una secuencia
particular de nucletidos presentes en una regin del ADN. La regin de ADN que codifica para la
enzima, as como las regiones adyacentes que regulan cuando y en el que las clulas se produce
la enzima, conforman el "gen" que codifica la enzima.

Todos se han identificado los genes para las enzimas en la va bioqumica en la figura 1.10 y la
secuencia de nucletidos del ADN determinada. En la siguiente lista, ya lo largo de este libro, se
utiliza el estndar de las convenciones tipogrficas que los genes estn escritos en letra cursiva,
en tanto que los productos gnicos no se imprimen en cursiva. Esta convencin es conveniente,
ya que significa que el producto proteico de un gen puede ser representado con el mismo smbolo
que el propio gen, pero donde como el smbolo de genes est en cursiva, el smbolo de protena
no es.

La concentracin de PAH en el brazo largo del cromosoma 1 2 codifica la fenilalanina hidroxilasa


(PAH).

El TAT gen en el brazo largo del cromosoma 16 codifica la tirosina aminotransferasa (TAT).

El HPD gen en el brazo largo del cromosoma 12 codifica 4-hidroxi cido fenilpirvico dioxigenasa
(HPD).

El DAG gen en el brazo largo del cromosoma 3 codifica homogentsico cido 1,2 dioxigenasa
(DAG).
Figura 1. 10. Los errores congnitos del metabolismo que afectan a la ruptura de fenilalanina y
tirosina. Una enfermedad heredada cuando cualquiera de las enzimas falta o es defectuosa.
Alcaptonuria resultados de un mutante homogentsico cido 1,2 dioxigenasa; resultados
fenilcetonuria de una fenilalanina hidroxilasa mutante.

A continuacin pasamos a la cuestin de cmo los genes codifican enzimas y otras protenas.

1.5. Expresin gnica: El dogma central

Watson y Crick eran correctas en proponer que la informacin gentica en el ADN est contenida
en la secuencia de bases de una manera anloga a las cartas impresas en una tira de papel. En una
regin de ADN que dirige la sntesis de una protena, el cdigo gentico de la protena est
contenida en una sola hebra, y se descodifica en un orden lineal. Una protena tpica est
compuesta de una o ms cadenas de poli pptidos; cada cadena poli peptdica consiste en una
secuencia lineal de aminocidos de extremo a extremo conectada. Por ejemplo, la enzima PAH
consiste en cuatro cadenas poli peptdicas idnticas, cada 452 aminocidos de longitud. En la
decodificacin de ADN, cada sucesiva "palabra de cdigo" en el ADN especifica el siguiente
aminocido a ser aadido a la cadena de poli pptido, ya que se est haciendo. Por consiguiente,
la cantidad de ADN necesaria para codificar la cadena de poli pptido de HAP es 452 x 3 = 1356
pares de nucletidos. El gen entero es mucho ms largo alrededor de 90.000 pares de nucletidos.
Slo 1,5 por ciento del gen est dedicado a la codificacin para los aminocidos. La parte no
codificante incluye algunas secuencias que controlan la actividad del gen, pero no se sabe qu
cantidad de gen est implicado en la regulacin.

Hay 20 aminocidos diferentes. Cdigo Slo cuatro bases para estos 20 aminocidos, con cada
"palabra" en el cdigo gentico que consiste en tres bases adyacentes. Por ejemplo, la secuencia
de bases ATG especifica el aminocido metionina (Met), TCC especifica serina (Ser), ACT especifica
treonina (Thr), y GCG especifica alanina (Ala). Hay 64 posibles combinaciones de tres bases, pero
slo 20 aminocidos debido a que algunas combinaciones de cdigo para el mismo aminocido.
Por ejemplo, TCT, TCC, TCA, TCG, AGT y A G C todo el cdigo de serina (Ser), y CTT, CTC, CTA, CTG,
TTA, TTG y todo el cdigo de leucina (Leu). Un ejemplo de la relacin entre la secuencia de bases
en un dplex de ADN y la secuencia de aminocidos de la protena correspondiente se muestra
en la Figura 1.11. Este dplex de ADN particular es la secuencia humana que codifica para los
primeros siete aminocidos en la cadena poli peptdica de la HAP.

El esquema esbozado en la Figura 1.11 indica que los cdigos de ADN para la protena no
directamente, sino indirectamente a travs de los procesos de transcripcin y traduccin. La ruta
indirecta de transferencia de informacin, se conoce como el dogma central de la gentica
molecular. El trmino dogma significa "conjunto de creencias"; que data de la poca la idea fue
propuesta por primera vez como una teora Desde entonces, el "dogma" ha sido confirmado
experimentalmente, pero el trmino persiste. El dogma central se muestra en la Figura 1.12. El
concepto principal en el dogma central es que el ADN no codifica para la protena directamente,
sino ms bien acta a travs de una molcula de intermediario de cido ribonucleico (ARN). La
estructura del RNA es similar a, pero no idntica, a la del ADN. Hay una diferencia en el azcar
(ARN contiene el azcar ribosa en lugar de desoxirribosa), el ARN es generalmente de cadena
sencilla (no un dplex), y el ARN contiene la base uracilo (U) en lugar de timina (T), que est
presente en el ADN. En realidad tres tipos de ARN participan en la sntesis de protenas:

D N A > R N A Proteina

Una molcula de ARN mensajero (ARNm) que lleva la informacin gentica del ADN y se
utiliza como una plantilla para la sntesis de polipptidos. En la mayora de las molculas
de ARNm, hay una alta proporcin de nucletidos que realmente cdigo para los
aminocidos. Por ejemplo, el ARNm para la HAP es de 2400 nucletidos de longitud y
codifica un polipptido de 452 aminocidos; en este caso, ms de 50 por ciento de la
longitud de los cdigos de ARNm para los aminocidos.

Existen varios tipos de RNA ribosomal (rRNA), que son los principales constituyentes de las
partculas celulares llamadas ribosomas en el que la sntesis de polipptidos se lleva a cabo.
Un conjunto de molculas de ARN de transferencia (ARNt), cada uno de los cuales lleva un
aminocido particular, as como una regin de reconocimiento de tres bases que pares de bases
con un grupo de tres bases adyacentes en el mRNA. A medida que cada tRNA participa en la
traduccin, su aminocido se convierte en el terminal de la subunidad aadido a la longitud de la
cadena poli peptdica en crecimiento. El tRNA que lleva metionina se denota tRNAMcl, lo que lleva
serina se denota tRNASer, y as sucesivamente.

Teniendo en cuenta un proceso como conceptualmente simple como el ADN que codifica la
protena, lo que podra dar cuenta de la complejidad adicional de los intermediarios de ARN? Una
posible razn es que un ARN intermedio da otro nivel de control, por ejemplo, mediante la
degradacin del ARNm para una protena que no sea necesarios. Otra posible razn puede ser
histrica. La estructura del ARN es el nico que tiene tanto un contenido informativo presente en
su secuencia de bases y un complejo de estructura tridimensional plegada, que dota a algunas
molculas de ARN con actividad cataltica. Muchos cientficos creen que en las primeras formas
de vida, el ARN sirve tanto para la informacin gentica y la catlisis. A medida que la evolucin
procedi, el papel informativo fue transferido al ADN y la funcin cataltica de la protena. Sin
embargo, el ARN se convirti bloqueado en su ubicacin central hace que entre en los procesos
de transferencia de informacin y la sntesis de protenas. Esta hiptesis implica que la
participacin de ARN en la sntesis de protenas es un vestigio de las etapas ms tempranas de
Evolucin- un "fsil molecular". La hiptesis es apoyada por una gran variedad de observaciones.
Por ejemplo, (1) la replicacin del ADN requiere una molcula de ARN con el fin de empezar
(captulo 6), (2) una molcula de ARN es esencial en la sntesis de las puntas de los cromosomas
(captulo 8), y (3) un poco de ARN molculas actan para catalizar reacciones clave en la sntesis
de protenas (Captulo 11).

Figura 1.12. El "dogma central" de la gentica molecular: el ADN codifica ARN y ARN cdigos para
las protenas. El ADN - ARN paso es la transcripcin, y el ARN - * paso de protenas es la
traduccin.

Transcripcin
La manera en que la informacin gentica se transfiere de ADN a ARN se muestra en la Figura
1.13. El ADN se abre, y una de las cadenas se utiliza como plantilla para la sntesis de una cadena
complementaria de ARN. (Cmo la cadena molde se elige se discute en el captulo 11.) El proceso
de hacer una cadena de ARN a partir de una plantilla de ADN es la transcripcin, y la molcula de
ARN que se hace es la transcripcin. La secuencia de bases en el ARN es complementaria (en el
sentido de emparejamiento Watson-Crick) a la de la plantilla de ADN, excepto que U (que pares
con A) est presente en el ARN en lugar de T. Las reglas de apareamiento de bases entre el ADN y
el ARN se resumen en la Figura 1.14. Cada cadena de ARN tiene una polaridad - un "extremo 3' y
un final 5' - y, como en la sntesis de ADN, los nucletidos se aaden solamente con el extremo 3'
de una creciente cadena de ARN. Por lo tanto el extremo 5 'del transcrito de ARN se sintetiza
primero, y de la transcripcin procede a lo largo de la cadena de ADN plantilla en el 3' a 5. Cada
gen incluye secuencias de nucletidos que inician y terminar la transcripcin. El transcrito de ARN
a partir de cualquier gen comienza en el sitio de iniciacin en la cadena molde, que se encuentra
"aguas arriba" de la regin de aminocidos de codificacin, y termina en el sitio de terminacin,
que se encuentra "corriente abajo" del aminocido de codificacin regin. Para cualquier gen, la
longitud del transcrito de ARN es mucho ms pequea que la longitud del ADN en el cromosoma.
Por ejemplo, la transcripcin del gen PAH en la fenilalanina hidroxilasa es de aproximadamente
90.000 nucletidos de longitud, pero el ADN en el cromosoma 12 es de alrededor de 130 millones
de pares de nucletidos. En este caso, la longitud de la transcripcin HAP es de menos de 0,1 por
ciento de la longitud del ADN en el cromosoma. Un gen diferente en el cromosoma 12 se
transcribe a partir de una regin diferente de la molcula de ADN en el cromosoma 12, y tal vez
de la cadena opuesta, pero la regin transcrita volvera a ser pequea en comparacin con la
longitud total del DNA en el cromosoma.
Figura 1.13 La transcripcin es la produccin de una cadena de ARN que es complementario en
secuencia de bases a una cadena de ADN. En este ejemplo, la cadena de ADN en la parte inferior
se transcribe en una cadena de ARN. Tenga en cuenta que en una molcula de ARN, la base U
(uracilo) juega el papel de T (timina) en que pares con A (adenina). Cada par A-U est marcado.

Traduccin

La sntesis de un polipptido bajo la direccin de una molcula de ARNm que se conoce como
traduccin. Aunque la secuencia de bases en los cdigos de ARNm para la secuencia de
aminocidos en un polipptido, las molculas que realmente hacen la "traduccin" son las
molculas de ARNt. La molcula de ARNm se traduce en grupos no solapados de tres bases
llamados codones. Para cada codn en el ARNm que especifica un aminocido, hay una molcula
de tRNA que contiene un grupo complementario de tres bases adyacentes que pueden
emparejarse con los de ese codn .El aminocido correcto est unido al otro extremo de la tRNA,
y cuando el tRNA entra en lnea, el aminocido al que est unido se convierte en la ms reciente
adicin al extremo en crecimiento de la cadena poli peptdica.

El papel de la traduccin tRNA se ilustra en la figura 1.15 y se puede describir como sigue:
El ARNm se lee codn por codn. Cada codn que especifica un aminocido coincide con un grupo
complementario de tres bases adyacentes en una nica molcula de ARNt. Un extremo de la tRNA
se une al aminocido correcto, por lo que el aminocido correcto se pone en lnea.

Las molculas de ARNt utilizados en la traduccin no se alinean a lo largo del ARNm al mismo
tiempo, como se muestra en la Figura 1.15. El proceso de traduccin se lleva a cabo en un
ribosoma, que se combina con un nico mRNA y se mueve a lo largo de un extremo al otro en los
pasos, tres nucletidos a la vez (codn por codn). A medida que cada nuevo codn entra en su
lugar, el siguiente tRNA se une con el ribosoma. A continuacin, el extremo en crecimiento de la
cadena de polipptido se une a la de aminocidos en el tRNA. De esta manera, cada tRNA a su vez
sirve para mantener temporalmente la cadena de polipptido a medida que se sintetiza. A medida
que la cadena poli peptdica se transfiere de cada tRNA a la siguiente en la lnea, el tRNA que
anteriormente tena el polipptido se libera del ribosoma. La cadena poli peptdica se alarga un
aminocido en cada paso hasta que uno cualquiera de los tres codones particulares que especifica
"parada" es encontrado. En este punto, la sntesis de la cadena de aminocidos est terminado, y
la cadena de polipptido se libera del ribosoma. (Esta breve descripcin de la traduccin pasa por
alto muchos de los detalles que se presentan en el captulo 11.)

Figura 1.15 El papel de ARN mensajero en la traduccin es para llevar a la informacin contenida
en una secuencia de bases de ADN para un ribosoma, donde se traduce en una cadena poli
peptdica. La traduccin est mediada por molculas de ARN de transferencia (ARNt), cada uno
de los cuales pueden pares de bases con un grupo de tres bases adyacentes en el mRNA. Cada
tRNA tambin lleva un aminocido. A medida que cada tRNA, a su vez, se lleva a la ribosoma, la
creciente cadena de polipptido es alargada.

El cdigo gentico
Figura 1.15 indica que el mRNA codn AUG especifica metionina (Met) en la cadena de
polipptido, UCC especifica Ser (serina), ACU especifica Thr (treonina), y as sucesivamente. La
tabla de decodificacin completa se llama el cdigo gentico, y se muestra en la Tabla 1.1. Para
cualquier codn, la columna de la izquierda se corresponde con el primer nucletido en el codn
(leyendo desde el extremo 5 '), la fila de la parte superior corresponde a la segunda de
nucletidos, y la columna de la derecha corresponde al tercer nucletido. El codn completa se
da en el cuerpo de la mesa, junto con el aminocido (o traslacin "parada") que el codn
especifica. Cada aminocido se designar con su nombre completo y por una abreviatura de tres
letras, as como una abreviatura de una sola letra. Ambos tipos de abreviaturas se utilizan en la
gentica molecular. El cdigo en la Tabla 1.1 es el cdigo gentico "estndar" que se utiliza en la
traduccin en las clulas de casi todos los organismos. En Captulo 11 se examinan las
caractersticas generales del cdigo gentico estndar y las diferencias menores que se
encuentran en los cdigos genticos de ciertos organismos y orgnulos celulares. En este punto,
nos interesa principalmente en la comprensin de cmo se usa el cdigo gentico para traducir
los codones en el ARNm en los aminocidos en una cadena de polipptido.

Adems de los 61 codones que codifican slo para aminocidos, hay cuatro codones que tienen
funciones especializadas:

El codn AUG, que especifica Met (metionina), es tambin el "inicio" codn para la sntesis de
polipptidos. El posicionamiento de una tRNAMe 'unido a AUG est uno de los primeros pasos en
la iniciacin de la sntesis de polipptidos, por lo que todas las cadenas de polipptidos comienzan
con Met. (Muchos polipptidos tienen la Met inicial escinde despus de la traduccin es
completa.) En la mayora de los organismos, la tRNAMet utilizado para la iniciacin de la
traduccin es la misma tRNAMet utilizado para especificar la metionina en posiciones internas en
una cadena de polipptidos.

Los codones UAA, UAG y UGA son cada uno un "parada" que especifica la terminacin de la
traduccin y los resultados en la liberacin de la cadena polipeptdica completado del ribosoma.
Estos codones no tienen molculas de ARNt que los reconocen sino que son reconocidos por
factores proteicos que terminan la traduccin.

Cmo se utiliza la tabla de cdigo gentico para deducir la secuencia de aminocidos de una
cadena de polipptido se puede ilustrar mediante el uso de PAH de nuevo, en particular, la
secuencia de ADN que codifica los aminocidos 1 a 7. La secuencia de ADN es

Esta regin se transcribe a ARN en una direccin de izquierda a derecha, y porque RNA crece
mediante la adicin de nucletidos sucesivos al extremo 3 '(Figura 1.13), es la cadena inferior que
se transcribe. La secuencia de nucletidos del ARN es el de la cadena superior del DNA, excepto
que U sustituye a T, por lo que el ARNm para los aminocidos 1 a 7 es

Los codones se leen de izquierda a derecha de acuerdo con el cdigo gentico se muestra en la
Tabla 1.1. Cdigos de codn AUG para Met (metionina), cdigos de UCC para Ser (serina), y pronto.
En total, la secuencia de aminocidos de esta regin del polipptido es

O, en trminos de las abreviaturas de una sola letra,

La operacin de decodificacin completa de esta regin del gen PAH se muestra en la Figura 1.16.
En esta figura, el codn de iniciacin AUG est resaltado porque algunos pacientes con PKU tienen
una mutacin en este codn particular. Como era de esperar por el hecho de que la metionina es
el codn de iniciacin para la sntesis de polipptidos, las clulas en los pacientes con esta
mutacin particular no pueden producir cualquiera de los polipptido PAH. La mutacin y sus
consecuencias se consideran a continuacin.
Figura 1.16 El dogma central en la accin. El ADN que codifica PAH sirve como un molde para la
produccin de un ARN mensajero, y el ARNm sirve para especificar la secuencia de aminocidos
en la cadena polipeptdica PAH travs de interacciones con el ribosoma y molculas de ARNt.

1.6 mutacin

El trmino mutacin se refiere a cualquier cambio heredable en un gen (o, ms en general, en el


material gentico) o al proceso mediante el cual un cambio tal se lleva a cabo. Un tipo de mutacin
resulta en un cambio en la secuencia de bases en el ADN. El cambio puede ser PLE SIM, como la
sustitucin de un par de bases en una molcula dplex en un par diferente de bases. Por ejemplo,
un par C-G en una molcula dplex puede mutar para T -A, A -T, o G -C. El cambio en la secuencia
de bases puede ser tambin ms compleja, tales como la eliminacin o la adicin de pares de
bases. Estos y otros tipos de mutaciones se consideran en el captulo 7. Los genetistas tambin
utilizan el trmino mutante, que se refiere al resultado de una mutacin. Una mutacin produce
un gen mutante, que a su vez produce un ARNm mutante, una protena mutante, y finalmente un
organismo mutante que exhibe los efectos de la mutacin - por ejemplo, un error innato del
metabolismo.

ADN de pacientes de todo el mundo que tienen fenilcetonuria se ha estudiado para determinar
qu tipos de mutaciones son responsables del error innato. Hay una gran variedad de tipos de
mutantes. Ms de 400 mutaciones diferentes se han descrito en el gen de la PAH. En algunos casos
parte del gen no est presente, por lo que la informacin gentica para hacer una enzima
completa PAH est ausente. En otros casos el defecto gentico es ms sutil, pero el resultado sigue
siendo o bien el fallo para producir una protena HAP o la produccin de una protena PAH que es
inactivo. En la mutacin se muestra en la figura 1.17, la sustitucin de un par de bases G -C para
el par normal de base A -T en la primera posicin en la secuencia de codificacin cambia el codn
AUG normal (Met) utilizado para la iniciacin de la traduccin en el codn GUG, que normalmente
especifica valina (Val) y no se puede utilizar como un codn de "inicio". El resultado es que la
traduccin del ARNm PAH no puede ocurrir, y as no se hace ningn polipptido PAH. Este mutante
se dise ATED M1V porque el codn para M (metionina) en la posicin de aminocido 1 en el
polipptido PAH se ha cambiado a un codn para V (valina). Aunque el mutante M1V es bastante
raro en todo el mundo, es comn en algunas localidades, como Qubec Provincia en Canad.

Un mutante PAH que es bastante comn se designa R408W, lo que significa que el codn 408 en
la cadena de polipptido PAH se ha cambiado de una codificacin para la arginina (R) a una
codificacin para el triptfano (W). Esta mutacin es uno de los cuatro ms comunes entre Europa
una caucsicos con PKU. La base molecular de los mutantes se muestra en la Figura 1.18. En este
caso, la primera par de bases en el codn 408 se cambia de un par de bases C -G en un par de
bases T -A. El resultado es que el mRNA PAH tiene un codn mutante en la posicin 408; En
concreto, ha UGG en lugar de CGG. La traduccin se produce en este mutante, porque todo lo
dems en el mRNA es normal, pero el resultado es que el mutante PAH lleva un triptfano (Trp)
en lugar de una arginina (Arg) en la posicin 408 en la cadena de polipptido. La consecuencia de
la parece cambio vez ms menor de uno aminocido es muy drstico. Aunque el polipptido
R408W es completa, la enzima tiene menos de 3 por ciento de la actividad de la enzima normal.

Figura 1.17 El mutante M1V en el gen PAH El codn de metionina necesario para la iniciacin muta
en un codn para valina. La traduccin no puede ser iniciada, y no se produce el polipptido HAP.

Las mujeres en la fotografa de la boda son hermanas. Ambos tienen dos copias del mismo gen
mutante HAP. La novia es la ms joven de los dos. Ella fue diagnosticada tan slo tres das despus
del nacimiento y se puso la dieta PKU poco despus. Su hermana mayor, la dama de honor, fue
diagnosticado demasiado tarde para comenzar la dieta y el retraso mental. La vieja foto dos aos
en la foto de la derecha es la hija de la pareja casada. Ellos planearon el embarazo: control de la
dieta era estricto desde la concepcin hasta la entrega para evitar los peligros del exceso de
fenilalanina que daan al feto. Su hija ha pasado desarrollan todos los hitos mentales con
distincin. [Cortesa de Charles R. Scriver.J

Figure1.18. El mutante R408W en el gen PAH. Codn 408 por arginina (R) se muta en un codn
para triptfano (W). El resultado es que la posicin 408 en el polipptido mutante PAH est
ocupado por triptfano en lugar de arginina. La protena mutante no tiene actividad de la enzima
PAH

Plegamiento de protenas y Estabilidad

Plegamiento de protenas y Estabilidad

Ms de 400 mutaciones diferentes en el gen PAH se han identificado en pacientes con PKU a travs
del mundo. Muchas de las mutaciones afectan el nivel de expresin del gen o el procesamiento
del transcrito de ARN, y algunas mutaciones son deleciones en el que parte del gen estn. Pero
ms de 240 de las mutaciones son sustituciones de aminocidos simples resultantes de
sustituciones de un solo nucletido en el ADN. Sorprendentemente, slo una minora de las
sustituciones de aminocidos da lugar a una normal de una protena monte de la HAP que estn
producido actividad de la enzima. Como resultado de la mayora de las mutaciones de la montura
de PAH se reduce, algunas veces drsticamente, y en algunas otras mutaciones de la actividad
enzimtica de la protena PAH que queda es prcticamente normal. Sin embargo, en todos estos
casos el nivel de expresin del gen, y la cantidad de ARNm, estn con en el rango normal.