R$ 5,00 ano II nmero 10 setembro/outubro de 1999

ESPECIAL

Escape Gnico
Tuberculose
Uso da biotecnologia para o desenvolvimento de uma vacina de DNA que previne e cura a doena

Uvas sem sementes

Biodegradao de Herbicidas
Metablitos Secundrios
Biotecnologia e Resistncia a Patgenos

www.biotecnologia.com.br
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 BIOTECNOLOGIA/KL3

2 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

BIOTECNOLOGIA/KL3

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 3

 Cooperativa desenvolve
ENTREVISTA
transgnicos no Paran Entrevista concedida a
Lucas Tadeu Ferreira

Parceria vetor de desenvolvimento dos OGMs

O Sistema de Cooperativismo do Paran decidiu investir em pesquisa agrcola, em

1974, quando a Organizao das Cooperativas do Estado do Paran - OCEPAR criou o
Departamento de Pesquisa que tinha como objetivo desenvolver tecnologias
agropecurias para as suas associadas.
Esse Departamento foi sendo reestruturado paulatinamente, conforme as demandas e
necessidades dos associados, e, em pouco tempo, adquiriu status de instituio de pes-
quisa perante comunidade cientfica e aos rgos oficiais do setor, por ter contribudo
de forma significativa com a agricultura do Paran, atravs da gerao de novas cultivares
de trigo, soja e milho e de outras tecnologias que tiveram grande impacto em imensas
reas agrcolas da regio.
A partir de 1995, a Assemblia Geral da OCEPAR decidiu transformar esse Departa-
mento de Pesquisa numa Cooperativa Central Agropecuria, quando surgiu ento a Coo-
perativa Central Agropecuria de Desenvolvimento Tecnolgico e Econmico Ltda -
COODETEC. A COODETEC foi fundada por trinta e oito cooperativas agropecurias do
estado do Paran e de acordo com o seu Estatuto pode ter associados em todo o Pas.
Quando da sua criao, a COODETEC recebeu da OCEPAR, por transferncia, a sua
estrutura fsica de laboratrios, instalaes e os recursos humanos que constituam o De-
partamento de Pesquisa. No houve, portanto, interrupo das atividades que vinham
sendo conduzidas com pleno xito pela OCEPAR.
Hoje, a COODETEC, que tem sua sede na aprazvel e prspera cidade de Cascavel,
PR, teve sua misso reformulada para atender ao seu crescimento, que Gerar e
comercializar tecnologias inovadoras, voltadas ao agronegcio, preservando o ambiente e
satisfazendo as pessoas. Ela uma cooperativa central que congrega 34 cooperativas
associadas, sendo 32 do Paran, uma de Santa Catarina e uma de Gois e representa mais
de 100.000 filiados em todo o Pas.
Para falar um pouco mais dos trabalhos de pesquisa da COODETEC, inclusive das
parcerias bem sucedidas que esto sendo realizadas para o desenvolvimento de produtos
transgnicos, de biossegurana e demais assuntos correlacionados, o seu Diretor-Execu-
tivo, Ivo Marcos Carraro, concedeu esta entrevista revista Biotecnologia, Cincia &
Desenvolvimento, no dia 4-9-99, na cidade de Cascavel-PR. Carraro engenheiro agr-
nomo e mestre em fitotecnia pela Universidade Federal de Viosa - UFV, trabalha h mais
de 20 anos na COODETEC, onde acumulou muita experincia como melhorista de plantas
e dirigente de pesquisa. Ivo Carraro ainda presidente da Associao Brasileira dos
Obtentores Vegetais - BRASPOV, funo que ele enfatiza ter muito orgulho de ocupar.

4 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

BC&D - O que a Coodetec, quando ela
foi criada e quantos filiados tem no
Pas?
Ivo Carraro - A Coodetec uma coopera-
tiva central, criada em 1995, composta por
outras cooperativas. importante explicar
que ela originria do desmembramento
do departamento de pesquisa da OCEPAR,
que existia desde 1974, e que constituiu a
base de formao da Coodetec. Toda a
infra-estrutura fsica de instalaes, labora-
trios, recursos humanos e material gen-
tico (germoplasma) foi repassada para a
Coodetec, que apesar de ter cinco anos de
existncia, na prtica, acumula experin-
cia de mais de vinte e cinco. A Coodetec
tem, hoje, trinta e quatro cooperativas
agropecurias associadas, e essas coope-
rativas mais de cem mil agricultores filiados
no Pas.
BC&D - Em quais estados ela est pre-
sente e qual a sua misso principal?
Ivo Carraro - Do ponto de vista de asso-
ciao de cooperativas, pelo seu estatuto,
a Coodetec pode ter associadas em qual-
quer estado brasileiro. Como ela nasceu
no Paran, a maioria dessas trinta e quatro
cooperativas so deste estado. Mas j te-
mos scios em Santa Catarina, Gois, e
estamos recebendo proposta de associa-
o de cooperativas do Rio Grande do Sul,
Mato Grosso do Sul e So Paulo. Em termos
de mercado, a Coodetec est presente, de
forma significativa, com seus produtos, no
Rio Grande do Sul, So Paulo, Paran,
Santa Catarina, Mato Grosso do Sul, Mato
Grosso, Gois e Minas Gerais. Nossa mis-
so pesquisar, gerar e colocar no merca-
do tecnologias competitivas, em forma de
novas cultivares, j que trabalhamos basi-
camente no setor de melhoramento gen-
tico de plantas.
BC&D - Quais os principais produtos
que a Coodetec pesquisa?
Ivo Carraro - Ns trabalhamos com qua-
tro espcies de plantas, dentro dessa tica
de criao de novas cultivares: trigo, soja,
milho e algodo. A Coodetec procura ser
bem pontual com essas quatro espcies,
sempre tendo como foco de atuao o
melhoramento gentico e a criao de
novas cultivares, se preocupando tambm
com o estabelecimento de um adequado
sistema de cultivo para cada material..
BC&D - Como se d a transferncia do
conhecimento que a Cooperativa gera
para as suas associadas ?
Ivo Carraro - A prioridade de transfern-
cia do conhecimento gerado direcionada
para as cooperativas associadas, atravs
das sementes bsicas, ou de outras classes
de sementes que colocamos disposio
da nossa clientela. Atravs das sementes,
transferimos tambm outros conhecimen-
tos gerados em torno das variedades, para
que elas tenham recomendao adequada
de poca de plantio, correo de solos etc.
Produzimos um pacote tecnolgico de
cada variedade para proporcionar a
competitividade no mercado. Entretanto, a
Coodetec no transfere tecnologia s para
seus associados. Ela vai tambm ao merca-
do que no cooperativado. Dessa forma,
outras empresas tambm tm acesso s
nossas tecnologias. E, assim, j tivemos a
oportunidade de enviar nossos produtos
para o exterior, registr-los e proteg-los,
no Paraguai e Bolvia. E estamos trabalhan-
do no momento com a possibilidade de
fazer o mesmo na Argentina. A Coodetec
j rompeu as fronteiras brasileiras e est
presente no Mercosul.
BC&D - A Coodetec desenvolve alguma
atividade com controle biolgico?
Ivo Carraro - Sim, trabalhamos em parce-
ria com a Embrapa Soja, localizada em
Londrina - PR, h muito tempo, desde que
a Coodetec era OCEPAR, com o Baculovirus
anticarsia, que um inseticida biolgico
de controle da lagarta da soja. No incio do
lanamento do Baculovrus, a Coodetec
auxiliava muito a Embrapa no processo de
difuso dessa tecnologia. Quando o pro-
duto passou a ser explorado comercial-
mente pela Embrapa, de forma industriali-
zada, a Coodetec foi a primeira empresa a
assinar um contrato para ser multiplicadora
em escala comercial, utilizando toda a sua
estrutura de venda nos estados. E, hoje,
somos a empresa que tem o maior volume
de Baculovrus no mercado, com o nome
comercial Coopervirus p.m. . Neste ano
de 1999, estamos atingindo cerca de 700.000
ha de rea plantada de soja com o
Baculovrus produzido pela Coodetec, com
base em contrato firmado com a Embrapa.
Este um produto que temos muito inte-
resse, porque ele tem ligao direta com o
cultivo da soja no combate de uma de suas
piores pragas. O Coopervirus tem acompa-
nhado a expanso da nossa cooperativa
em outros estados e regies.
BC&D - E a Coodetec pesquisa algum
produto transgnico?
Ivo Carraro - O forte da Coodetec o
germoplasma. E no poderia ser diferente.
Durante vinte e cinco anos, a Cooperativa
desenvolveu o germoplasma convencio-
nal, sem pensar em transgnico. Comea-
mos a pensar nos transgnicos, nos lti-
mos quatro anos, quando esses produtos
foram lanados no mercado externo. As-
sim, os transgnicos para a Coodetec so
agregadores de valor s culturas. No
temos a pesquisa bsica de transgnicos e
nem pretendemos investir, a mdio prazo,
em laboratrio de transformao e
prospeco de genes. A Coodetec oferece
o seu germoplasma como vetor para que
os genes cheguem ao campo. O gene
transgnico sozinho pode ter um grande
valor agregado para os produtos, mas se
no estiver acoplado a este vetor, que
uma variedade adaptada com potencial de
difuso para utilizao em grandes reas,
no vai produzir os efeitos econmicos
desejados. A Coodetec possui o vetor e
coloca esse vetor disposio de possveis
parceiros. Pode ser a Embrapa, universida-
des, empresas multinacionais etc., enfim,
algum que tenha algum gene e queira
utilizar o vetor que a Coodetec oferece,
pode ser nosso parceiro. Estaro dispo-
sio nossas cultivares mais todo o nosso
potencial, estrutura de parceiros,
multiplicadores, mercados e difuso junto
s cooperativas. O que a gente oferece aos
parceiros todo esse pacote de facilida-
des. importante acrescentar que a
Coodetec est capacitada para fazer a
introgresso de genes - em plantas - em
todo o seu material gentico, atravs de
projetos especficos. Por exemplo, se fizer-
mos um convnio especfico com a
Monsanto, definimos um grupo de linha-
gens para trabalhar e metas de lanamen-
tos de variedades com esses novos genes.
Este exemplo vale para qualquer institui-
o que queira trabalhar em parceria com
a Coodetec no desenvolvimento de
transgnicos.
BC&D - Concretamente, hoje, a
Coodetec est trabalhando na
introgresso de genes em algum pro-
duto?
Ivo Carraro - Hoje, estamos trabalhando
com soja resistente ao herbicida Roundup
Ready (RR), em parceria com a Monsanto.
E estamos iniciando um outro trabalho de
parceria com a Agrevo, de soja resistente
ao herbicida glufosinato de amnio (Liberty-
Link), alm de estarmos em negociao
com outras empresas. A inteno ter um
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 5
 portflio de produtos com o mximo pos-
svel de opes, j que as cooperativas,
pela sua natureza, sempre trabalharam
com diversos fornecedores. E essa filosofia
se aplica Coodetec. A Coodetec jamais
vai poder ser uma empresa exclusiva de A,
B ou C; ela sempre vai procurar adminis-
trar parcerias, do mesmo jeito que suas
associadas atuam, para proporcionar o
atendimento dos anseios de cada produtor
filiado. Se existe um grupo de produtores
que prefere determinado tipo de produto,
obrigao da cooperativa ir buscar esse
produto no mercado. Estamos ainda traba-
lhando com o algodo transgnico, em
cooperao com o CIRAD (Instituto de
pesquisa da Frana), que nosso parceiro
desde o incio do programa do algodo,
em 1990, visando introduo de genes de
resistncia a insetos. Ainda estamos no
incio deste trabalho. Trabalhar com tole-
rncia a inseto um pouco mais complica-
do, pois requer uma estrutura de criatrio
de insetos, que ainda est sendo prepara-
da, para dar suporte a esta atividade de
pesquisa, que poder ser para combater o
bicudo e algumas lagartas do algodo. A
Coodetec est buscando ainda mais algu-
mas parcerias para o algodo. Contudo, o
produto transgnico que est mais avana-
do em termos de parceria a soja; o
algodo vem em segundo lugar, depois o
milho; por ltimo o trigo. No existe muito
interesse pelo mercado de trigo transgnico
no Brasil. Existe trigo transgnico no mun-
do, mas o mercado brasileiro muito
pequeno, e as empresas que tm esses
genes no se interessam pelo mercado do
nosso Pas. Se surgir alguma alternativa de
trigo transgnico dentro do Brasil, as nego-
ciaes ficaro mais fceis.
BC&D - Quais so as vantagens compa-
rativas da utilizao de material
transgnico na agricultura em relao
ao convencional?
Ivo Carraro - A biotecnologia abriu um
novo horizonte para o melhoramento ge-
ntico de plantas. Em algumas espcies, j
estvamos quase chegando no limite da
explorao da variabilidade gentica, com
dificuldades de ganhos. Com a
biotecnologia demos um grande salto nas
possibilidades de interao entre diferen-
tes espcies de caractersticas que antes
no estavam disponveis para serem traba-
lhadas no melhoramento gentico. o
caso da soja transgnica resistente a
herbicida, por exemplo. Para o melhora-
mento gentico, os transgnicos abrem um
grande campo de explorao em reas que
antes sequer eram imaginadas como pos-
sveis, tanto na parte de resistncia a doen-
as e pragas, principalmente insetos, e
com a possibilidade muito grande de redu-
zir o emprego dos produtos qumicos. Na
6 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
parte de manejo da cultura, podemos tra-
balhar certas caractersticas que so de-
mandadas pelos agricultores, como tole-
rncia a geadas e secas, a estresses
ambientais, que tanto prejuzos causam s
lavouras. Assim, acredito que a
biotecnologia vai fornecer as ferramentas
necessrias para a soluo destes proble-
mas. Por enquanto, estamos s no comeo
com alguns produtos tolerantes a insetos e
herbicidas, o que facilita o manejo da
cultura. De um modo geral, a expectativa
do produtor rural muito grande em
relao aos transgnicos, no s pela parte
financeira, mas, principalmente pela faci-
lidade do manejo da cultura, e tambm
pela expectativa da reduo da aplicao
de defensivos, j que o agricultor est
muito consciente dos riscos de aplicao
de veneno no campo, com os conseqen-
tes custos financeiro e ambiental. Assim, os
agricultores tm visto os produtos
transgnicos, que hoje esto na berlinda,
"Para o melhoramento
gentico, os transgnicos
abrem um grande campo de
explorao em reas que
antes sequer eram
imaginadas como possveis,
tanto na parte de resistncia a
doenas e pragas, quanto na
possibilidade de reduzir
produtos qumicos"
como uma ferramenta muito boa para
reduzir os custos financeiros e os riscos
sade - deles e dos seus funcionrios - e
ao meio ambiente.
BC&D - A Argentina, terceiro produtor
mundial de soja depois dos EUA e Bra-
sil, j vem cultivando soja transgnica
desde 94/95. Como o senhor avalia a
questo do nosso Pas estar demoran-
do um pouco mais para liberar o culti-
vo de transgnicos, em relao ao seu
maior concorrente no Mercosul?
Ivo Carraro - O Brasil, tradicionalmente,
sempre foi muito conservador em relao
entrada de novas tecnologias e, mais
ainda, recentemente com os transgnicos.
Nossa legislao sempre veio na esteira da
legislao de outros pases, como o caso
da biossegurana, patentes e proteo de
cultivares. Mas sempre recebemos um cas-
tigo por essa demora. A competitividade
brasileira acaba ficando prejudicada. Nos-
sa soja se tornou muito competitiva, prin-
cipalmente depois que ela foi para a regio
dos cerrados, que tem produtividade mai-
or, e permitiu competio na entressafra
americana. Produzimos soja no Hemisf-
rio Sul, como a Argentina, mas ela pode
perder essa competitividade, se no tiver o
mesmo nvel tecnolgico dos principais
concorrentes. E com os transgnicos esse
hiato tecnolgico aumentou. Na Argenti-
na, eles tm a vantagem do custo menor de
produo, fertilidade melhor, o embarque
nos portos mais barato que o nosso, e
temos ainda todo o chamado custo Brasil
embutido: transporte dispendioso, estra-
das ruins, juros altos, custo elevado de
embarque nos portos etc. E agora vamos
ter que suportar uma diferena do custo de
produo da soja, se comparado com o
alto percentual de cultivo da transgnica
nos EUA e na Argentina, nossos dois
principais competidores. Podemos ter uma
diferena de custo de produo que gira
em torno de 10 a 12%, o que d entre US$
30 a US$ 40 dlares por hectare. Assim,
vamos ter que compensar essa diferena
vendendo soja no-transgnica mais cara,
ou reduzindo custos em outros itens, se-
no no vamos ser competitivos. Essa a
minha preocupao principal, j que os
argentinos foram mais rpidos que ns,
pois fizeram uma Lei de Biossegurana
mais simples e foram mais geis na intro-
duo da tecnologia. Prefiro a nossa lei de
biossegurana que mais complexa, e
espero que ela seja respeitada integral-
mente por todos; porm defendo uma
maior agilidade aps o parecer favorvel
da CTNBio.
BC&D - A imprensa tem denunciado o
cultivo ilegal de soja transgnica, no
Sul do Pas, trazida da Argentina. Como
o senhor analisa esta questo?
Ivo Carraro - Esta mais uma questo de
desobedincia civil. O Brasil tem muitas
leis, mas poucas so obedecidas. A soja
transgnica clandestina vinda da Argenti-
na fere, no mnimo a lei de biossegurana,
proteo de cultivares e fitossanidade. H
trs anos, quando foram introduzidas clan-
destinamente as primeiras sementes de
variedades argentinas, no Rio Grande do
Sul, a ABRASEM e a BRASPOV denuncia-
ram veementemente CTNBio, ao Minis-
trio da Agricultura, o que acabou at na
Polcia Federal e na imprensa. Infelizmen-
te, apesar de todos os esforos, no houve
interrupo desse processo clandestino
at hoje. A importao e o comrcio ilegal
de sementes transgnicas compromete a
qualidade dos produtos, alm de possibi-
litar a entrada de patgenos no existentes
no Pas, e fere tambm a questo da
biossegurana. Podemos at dizer que a
soja transgnica j vem sendo cultivada
ilegalmente h trs safras. Recentemente
ela obteve parecer favorvel da CTNBio
para seu cultivo em escala comercial no
Brasil, o que indica que no oferece riscos.
Mas acontece que o cultivo ilegal vem
sendo feito e esse cultivo prejudicial ao
Brasil. Prejudica quem est investindo
em pesquisa de transgnico, os produto-
res de sementes, que vo deixar de
comercializar as suas sementes, porque
as sementes clandestinas vo ocupar o
seu lugar, e uma srie de problemas que
tambm podem prejudicar a nossa
competitividade e pem em questo a
nossa capacidade de fiscalizao, j que
o Rio Grande do Sul deve plantar cerca
de 700.000 a 1.000.000 de ha de soja
transgnica ilegal na prxima safra de
1999/2000. fcil estimar esse nmero, a
partir da venda do herbicida (glifosato)
na regio, que tem uma correlao direta
com a rea de cultivo da soja. Estamos
tendo um Brasil paralelo - ilegal - e isso
no positivo. Afinal, quem est
pesquisando e desenvolvendo
transgnicos quer que a produo seja
feita dentro das leis vigentes.
BC&D - Ainda no contexto da
biossegurana, o senhor v a possibi-
lidade de algum risco dos
transgnicos em relao sade hu-
mana e ao meio ambiente?
Ivo Carraro - Quem pode dizer isso, no
sou eu, a CTNBio que est preparada e
tem competncia para a avaliao dos
riscos dos diferentes eventos transgnicos
a ela submetidos . Ela tem tanto compe-
tncia tcnico-cientfica como legal, por-
que o rgo do Ministrio da Cincia e
Tecnologia, criado pela Lei 8.974/95, de
Biossegurana, para proceder s anlises
de risco, atravs de parecer tcnico de
especialistas das reas de sade, agricul-
tura e meio ambiente. Se a CTNBio
produz um parecer ao final das anlises,
a populao precisa acreditar nesse pare-
cer. Precisamos ter um rgo competen-
te e confivel para dar esse parecer e a
CTNBio tem essa competncia, em nvel
mundial, pois conta com pesquisadores,
cientistas e representantes de outros se-
tores altamente qualificados, que anali-
sam os processos com iseno e neutra-
lidade. A CTNBio analisa cada evento
individualmente, tanto na fase do pero-
do de pesquisa em conteno , quanto
depois do pedido de liberao comercial
- desregulamentao do produto -, que
a passagem para o mercado, depois de
analisados todos os quesitos de
biossegurna. A Coodetec confia nos
pareceres e liberaes da CTNBio.
BC&D - Como o senhor analisa a ques-
to da moratria dos transgnicos
que reivindicada por determinados
segmentos da sociedade?
Ivo Carraro O conhecimento humano
formado por pequenos avanos que so
agregados. Uma cincia comea s ve-
zes na cabea de um cientista com um
experimento de laboratrio, atravs do
qual ele chega a concluses, comprova
hipteses e publica trabalhos. Depois
vem outro pesquisador l os trabalhos,
tem uma idia adicional, testa de novo,
e assim, vamos formando a nossa cons-
cincia e o cabedal cientfico de qual-
quer rea do conhecimento. No existe
uma pessoa que tenha desenvolvido
sozinha toda uma tecnologia; sempre
existe uma soma de conhecimentos. E
esse conhecimento nunca se apaga. Se
esse conhecimento bom ou ruim, se
vai ser usado para o bem ou para o mal,
uma questo de conscincia humana. gentica de plantas com quadros de
O que a proposta da moratria: parar
de trabalhar com os transgnicos - a
mais radical -, durante cinco anos. Se
pararmos por cinco anos, ficaremos
cinco anos mais atrasados, enquanto os
"Se pararmos por cinco anos,
ficaremos cinco anos mais
atrasados, enquanto os
outros vo ficar esse tempo
frente. Se decretarmos a
moratria, de forma genri-
ca, para os produtos
transgnicos, estaremos dosos. Mas a postura radical contrria,
cometendo um grande erro."
outros vo ficar esse tempo frente. Se
decretarmos a moratria, seja ela de
dois, trs ou cinco anos, de forma
genrica, para os produtos transgnicos,
estaremos cometendo um grande erro.
Cada produto transgnico tem um mo-
mento em que concebido, um pero-
do de pesquisa agregador de conheci-
mentos cientficos, testes de segurana,
busca de motivao comercial e de
utilidade para o ser humano, principal-
mente. Este para mim j o perodo de
moratria para este evento. Se pegar-
mos como exemplo um produto no
primeiro ano da moratria de cinco,
que j tenha cinco anos de pesquisa,
talvez mais um ano de pesquisa seja
suficiente para ele ir para o mercado.
Agora, se considerarmos um produto
que comea a surgir no quarto ano da
moratria, mais um ano s no sufici-
ente. A tese que eu defendo a de que
a moratria j existe. O que a morat-
ria hoje? o perodo em que o produto
fica na fase de pesquisa e conteno
definidos pela CTNBio, para que ele
receba parecer conclusivo para libera-
o. Isso j uma moratria por evento.
O processo muito semelhante ao lan-
amento de uma variedade comum, que
pode levar at dez anos para chegar ao
mercado.
BC&D - A que o senhor atribui ento
essa polmica em relao aos
transgnicos?
Ivo Carraro - Eu acho muito interessan-
te esse debate dos transgnicos. com-
preensvel. Existe um medo natural das
pessoas quando se fala em modificao
gentica. A televiso brasileira, h al-
guns anos, satirizava a transformao
humor como o Dr. Sardinha.. Mas, ago-
ra, estamos diante da realidade do cres-
cimento da biologia como cincia, nos
ltimos vinte anos, principalmente quan-
do se descobriu a possibilidade concreta
de manipular o DNA das clulas. O que
faltou foi debater com a sociedade, de
maneira mais cuidadosa, no incio desse
processo, os conceitos da biossegurana.
O que est sendo feito, na verdade,
uma atividade muito intensa dos grupos
ambientalistas, que de forma ideolgica,
se posicionaram rapidamente contrrios
aos transgnicos, aumentando esse medo
na populao. No que no deva existir
esse cuidado. Eu acho at que o movi-
mento contrrio aos transgnicos tem
tido um efeito positivo, no sentido de
que os cientistas devam ser mais cuida-
colocando um medo sem sentido na
populao, condenvel. Isso no leva
a nada. preciso informar corretamente
a sociedade. At porque existem mi-
lhes de pessoas que j esto se alimen-
tando com produtos transgnicos libera-
dos em seus pases, h anos. Os primei-
ros surgiram nos EUA h dez anos, e at
agora no se tem registro de nenhum
malefcio que tenha sido causado. So
afirmativas emocionais, sem base cient-
fica, e em cincia, tudo tem que ser
comprovado. Vamos supor que daqui a
cinco anos se chegue concluso de
que a soja transgnica (RR) por exem-
plo, totalmente segura e que o Brasil
ficou parado, os europeus esto aceitan-
do normalmente, e no existe mais dife-
rena de preo em relao convenci-
onal. Onde estaramos, ns, com a nossa
produo de soja? Estaramos com um
custo que nos tiraria do mercado. E
quem vai pagar esse prejuzo e se res-
ponsabilizar pela retirada do Brasil do
mercado? Ns temos que oferecer para
o agricultor e consumidores,opes, e
deix-los bem informados para decidir.
O mercado que vai definir se vamos
consumir transgnicos, desde que cada
produto tenha parecer favorvel da
CTNBio
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 7
 Carta ao Leitor

Nessa edio, a Revista Biotecnologia Cincia & Desenvolvi-

mento traz um artigo sobre o desenvolvimento de uma vacina gnica
contra a Tuberculose, do Prof. Clio Lopes Silva, pesquisador e
estudioso de uma das doenas que mais matam no mundo, e um eterno
problema tambm aqui no Brasil. As vacinas chamadas de 1 gerao
(BCG) no ofereceram a proteo desejada, assim como tambm as
BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento
vacinas preparadas com antgenos purificados ( de 2 gerao). Grande
KL3 Comunicao
sucesso tem obtido o professor na investigao de uma vacina que, sem
Fundador perder sua caracterstica profiltica, cura a infeco e cura a doena
Henrique da Silva Castro
estabelecida resolvendo casos de tuberculose com bacilos altamente
Diretora de Pesquisa e Edio
resistentes aos produtos usados atualmente no combate doena. Essa
Ana Lcia de Almeida
doena, infelizmente, no tem tido o devido apoio nem o investimento
Diretor Executivo
Mrcio Brasil suficiente perante a gravidade do quadro em que se encontra principal-
mente o terceiro mundo. Para piorar, tambm no h interesse no
Diretor de Arte
Henrique S. Castro F investimento de pesquisa por parte dos grandes laboratrios. Nos resta
ao menos aplaudir, no apenas pela competncia de nosso pesquisa-
Departamento Comercial,
dor, mas pela insistncia de todos aqueles que, mesmo na adversidade
Redao e Edio:
de todo tipo, continuam contribuindo verdadeiramente para a sade
pblica.
SRTV/Sul - Quadra 701
Outro destaque o artigo Escape Gnico, motivo de discusses
Ed. Palcio do Rdio II
Sala 215 - CEP 70340-902 acaloradas, muitas vezes apenas no mbito das possibilidades, sem o
Braslia - DF embasamento cientfico necessrio a um julgamento mais preciso.
Tel.: (061) 225-1512 (061) 225-0976
Esperamos que a importante contribuio do Prof. Alusio Borm venha
Fax: (061) 224-2830
no s ajudar a esclarecer, como tambm a favorecer a ampliao do
Projeto Grfico
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ISSN 1414-4522

8 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Conselho Cientfico
Dr. Aluzio Borm - Gentica e Melhoramento Vegetal
Dr. Henrique da Silva Castro - Sade; Colaboraram nesta edio:
Dra. Johanna Dbereiner - Microbiologia de Solos;
Dr. Maao Tadano - Agricultura; Adriane Leite do Amaral, Alim da Costa
Dr. Naftale Katz - Sade; Bicalho, Alusio Borm, Anselmo Ortega
Dr. Pedro Juberg - Cincias;
Dr. Srgio Costa Oliveira - Imunologia e Vacinas;
Boschi, Antnio Luiz Cerdeira, Elen de
Dr. Vasco Ariston de Carvalho Azevedo - Gentica de Microorganismos; Lima Aguiar Menezes, Eliana Cristina da
Dr. William Gerson Matias - Toxicologia Ambiental. Silva Rigo, Eurpedes B. Menezes, Ilda
Kazumi Shuhama, Ivo Marcos Carraro,
Conselho Brasileiro de Fitossanidade - Cobrafi Julieta Ueta, Lus Alberto dos Santos,
Dr. Ivan Rud de Moraes - Toxicologia; Marcelo Maraschin, Maria Cristina R.
Dr. Lus Carlos Bhering Nasser - Filopatologia Cordeiro, Maria de Ftima Grossi de S,
Newton Lindolfo Pereira, Paulo Ricardo
Conselho Federal de Biologia
Dr. Joo de Deus Medeiros
Dias de Oliveira, Rul Garcia
Carradeguas, Robert Verpoorte, Sussette
Fundao Dalmo Catauli Giacometti Padilla Mondjar, Umberto Almeida
Dr. Eugen Silvano Gander - Engenharia Gentica; Camargo.
Dr. Jos Manuel Cabral de Sousa Dias - Controle Biolgico;
Dra. Marisa de Goes - Recursos Genticos

Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN

Dr. Jos Roberto Rogero

Novas TTecnologias
ecnologias
Cimentos de Fosfatos de Clcio - pg 30

Agricultura
Escape Gnico - Encarte Especial
Uvas sem sementes - Encarte Especial

Sade
Tuberculose - pg 42

Entrevista
Cooperativa desenvolve transgnicos no Paran - Ivo Marcos Carraro - pg 04

Pesquisa
Cupins - pg 16
Engenharia do Metabolismo Secundrio - pg 24
Biotecnologia e resistncia a Patgenos - pg 34

Meio -Ambiente
Meio-Ambiente
Biodegradao de Herbicidas e Biorremediao - pg 10

Reportagem
A Seringueira no Brasil - pg 20

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 9

 Biodegradao de
Herbicidas e Biorremediao
MEIO-AMBIENTE
s sistemas biolgicos tm
a habilidade de crescer e
multiplicar com maior ou
menor intensidade de-
pendendo das suas ca-
ractersticas inerentes e
das condies impostas pelo ambiente. A
produo de alimentos se d por meio da
prtica da agricultura e da pecuria e o
rendimento desta produo enfrenta a
concorrncia de outros sistemas biolgi-
cos vegetais, animais, microbianos ou
parasitrios. Desta forma, o processo de
modernizaco da agricultura, nos anos
60, introduziu o emprego de novas vari-
edades mais produtivas e dependentes
de adubos qumicos, uso intensivo de
herbicidas, bactericidas, fungicidas, aca-
ricidas, parasiticidas, inseticidas, enfim
pesticidas e mquinas agrcolas a fim de
se aumentar os ndices de produtividade.
O emprego destes agentes qumicos re-
sultou em aumento da produtividade,
mas por outro lado trouxe conseqncias
adversas ao homem, visto serem estes
agentes nocivos ao homem e ao ambien-
te.
O mercado mundial de agroqumicos
movimenta atualmente US$ 30 bilhes e
Figura 1- Microbacia do
Espraiado- as cores definem os
diferentes tipos de solo
10 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Julieta Ueta
Newton Lindolfo Pereira
Ilda Kazumi Shuhama
Depto. Cincias Farmacuticas da Faculdade de Cincias
Farmacuticas de Ribeiro Preto USP.
Microrganismos degradadores do herbicida Atrazina Antonio Luiz Cerdeira
CNPMA/EMBRAPA, Jaguarina, SP.
Fotos cedidas pelos autores
de fertilizantes US$ 50
bilhes. O Brasil o 5
maior consumidor de
pesticidas e movimenta
US$ 2,5 bilhes. Os her-
bicidas representam a
maior parcela tanto em
mbito mundial como no
Brasil. Calcula-se que so-
mente cerca de 0.1% atin-
ge o alvo especfico en-
quanto os restantes 99.9%
da aplicao tem poten-
cial para se mover em
diferentes compartimen-
tos ambientais tais como
o solo e guas residuais e
subterrneas.
A prtica mundial do
uso de agroqumicos por
longos perodos, muitas
vezes indiscriminada e
abusiva, vem trazendo
preocupaes autori-
dades pblicas e aos
envolvidos com sade
pblica e sustentabilida-
de dos recursos naturais,
em conseqncia da con-
taminao ambiental. O
Brasil tem uma diversi-
Figura 2- Aqfero Botucatu ou
dade imensa de sistemas
Guarani
ecolgicos nicos e sensveis, alguns
dos quais submetidos agricultura in-
tensiva.
Os resultados de inmeros traba- levou contaminao dos solos onde
lhos tm revelado a presena de nveis ndices acima de 5000 ppm de atrazina,
alarmantes de agroqumicos e seus pro- 3000 ppm de clorpirifos, 3900 ppm de
dutos de degradao em solos e guas diuron, e 1900ppm de parathion foram
superficiais e subterrneas. Os relatos descritos na literatura (WINTERLIN et al,
iniciaram-se nos anos 70 e desde ento, 1989.).
com o aprimoramento das tcnicas ana- A deteco de contaminao ambi-
lticas com maior acuidade e sensibili- ental por agroqumicos exige o estabe-
dade, mostraram por exemplo que em lecimento de polticas ambientais seve-
1988, mais da metade dos estados ame- ras que controlem o uso indiscriminado
ricanos possuam guas subterrneas e abusivo destes agentes, o desenvolvi-
contaminadas (PARSONS & WITT, 1989). mento de tcnicas de descontaminao
O uso indiscriminado de agroqumicos dos stios contaminados e o emprego de
tcnicas alternativas de plantio.

O HERBICIDA
ATRAZINA

Os herbicidas triaznicos vem

sendo empregados na agricultura
para o controle de ervas daninhas,
devido a capacidade destes com-
postos orgnicos em inibir a fotos-
sntese. Dentre eles destacam-se a
atrazina, simazina, propazina e
ametrina. A atrazina em uso h
mais de 30 anos, representa 12%
(mais de 40 000 toneladas/ano) de
todos os pesticidas empregados
nos Estados Unidos em culturas de
milho, sorgo, cana e abacaxi, como
tambm largamente empregada
nos Estados centrais e moderada-
mente em Estados do leste. O Bra-
sil, com as culturas da cana e milho
na liderana, emprega tambm ele-
vadas quantidades de herbicidas
triaznicos. Das 150.000 toneladas/
ano dos pesticidas consumidos,
cerca de 33%, so herbicidas; so-
mente a cultura de cana de acar,
vem consumindo acima de 20.000
toneladas, que representa em tor-
no de 13% do total de pesticidas.
A atrazina um contaminante
potencial da gua em virtude de
suas caractersticas: alto potencial
de escoamento, elevada persistn-
cia em solos, hidrlise lenta, baixa
presso de vapor, solubilidade
Figura 3- Biodegradao
baixa para moderada em gua,
da atrazina
absoro moderada matria or-
gnica e argila. De fato, a presena
de atrazina em guas subterrneas
americanas cerca de 10 a 20 vezes
mais freqente do que o contaminante pando uma extenso de 1 150.000 km2 regies onde o aqfero mais vulner-
segundo na lista (HALLBERG, G.R. - 1989). (figura 2). A maior parte encontra-se em vel. O mau uso destas terras pode, em
No Canad, os estudos constataram a territrio brasileiro (840.000 km2), no longo prazo, comprometer a qualidade
presena de atrazina em poos, sendo entanto uma considervel poro locali- do recurso natural mais precioso para a
que alguns apresentam ndices da ordem za-se na Argentina, Paraguai e Uruguai. O humanidade, a gua.
de 10 ug/L de atrazina e um produto de aqfero, que possui gua de excelente
degradao, tambm fitotxico ( BELLU- qualidade e extrada de poos semi- A BIODEGRADAO DE ATRAZINA
CK et al,1991). artesianos, abastece centenas de cidades
de pequeno e mdio porte, atingindo A maioria dos compostos orgnicos,
A MICROBACIA DO ESPRAIADO E O 60% das cidades urbanas do Estado de xenobiticos, tais como agroqumicos
AQFERO BOTUCATU So Paulo. Na regio de Ribeiro Preto, em geral, no se perpetuam no ambiente
OU GUARANI com mais de 2 milhes de habitantes, pois podem ser biodegradados pela ao
praticamente 100% das cidades so abas- de organismos vivos presentes na nature-
Estudos geolgicos coordenados pela tecidas exclusivamente com gua subter- za, que atacam a estrutura molecular
EMBRAPA/CNPMA revelaram uma rea rnea. destes compostos orgnicos. Os micror-
na regio de Ribeiro Preto, SP, com As reas de recarga (150.000 km2) se ganismos, pela sua capacidade degrada-
cerca de 4.000 hectares, definida como localizam nas bordas leste e oeste do dora, participam de forma significativa na
microbacia do Espraiado, com alto risco aqfero em faixas alongadas do pacote eliminao ou reduo acentuada dos
de contaminao por agroqumicos (fi- sedimentar que afloram superfcie. Nes- nveis de pesticidas empregados na agro-
gura 1). Esta regio est localizada em tas reas, as guas de chuva alimentam o pecuria. No entanto, dependendo da
uma rea de recarga do aqfero Botuca- aqfero, confluindo para a calha da natureza qualitativa e quantitativa do com-
tu ou Guarani. Este aqfero est abriga- bacia. posto empregado e das caractersticas
do na bacia sedimentar do Paran, ocu- As reas de recarga se constituem nas gerais do solo, ocorre o acmulo a ndi-

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 11


Figura 4 - Populao microbiana
de amostra de solo incubada com
atrazina (1,66 g/L) por 14 dias
ces considerados txicos.
A molcula de atrazina, formada por
um anel aromtico heterocclico clorado
e N-alquilado, no facilmente biodegra-
dada. Alguns microrganismos tem de-
monstrado habilidade de biodegradar par-
cial ou totalmente a molcula, levando a
formao de NH3 e CO2 (figura 3).
A degradao parcial da molcula de
atrazina por fungos tais como Aspergillus
fumigatus e Rhizopus stolonifer foram
relatados, embora a maioria das aes
microbianas relatadas, recaem sobre bac-
trias do gnero Rhodococcus, Nocardia,
Bacillus e principalmente Pseudomonas,
um gnero bastante verstil tambm com
habilidade para degradar 2,4-D (BEHKI &
KHAN, 1986; BEHKI et al, 1993; LEVA-
NON, 1993). A mineralizao completa
da atrazina por um nico microrganismo
no comum, mas consrcios empre-
gando 2 ou mais espcies diferentes so
capazes de mineralizar atrazina (RASO-
DEVICH et al, 1995). Os achados de
KORPRADITSKUL et al, 1993, mostraram
que amostras de solos do Japo e da
Tailndia contm uma populao eleva-
da de degradadores de atrazina. Esta
populao no foi capaz de, no solo,
degradar com eficincia a atrazina pre-
sente. Pode-se concluir que, espcies do
mesmo gnero e mesmo subespcies,
podem apresentar capacidade metabli-
ca distinta que traduzem em habilidade
de degradar compostos orgnicos dos
mais diversos. Os isolamentos a partir de
amostras de solo de locais diferentes, tem
12 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
nica fonte de carbono ou carbono e
nitrognio, a atrazina na concentrao de
10ug/mL. Aps um perodo de incubao
variado, as amostras foram analisadas em
seu contedo residual de atrazina por
CLAE (cromatografia lquida de alta efici-
ncia). A figura 5 ilustra a biodegradao
do herbicida com os cromatogramas de 2
amostras designadas 4 e 5, onde pode-se
observar a degradao parcial (amostra
4) e total (amostra 5) de atrazina aps 26
dias de incubao.
BIORREMEDIAO
A descontaminao de stios j sujei-
tos contaminao podem ser obtidos
por tcnicas de remediao e restaura-
o. Usualmente, estas tcnicas conso-
mem montantes astronmicos, como os 7
bilhes gastos devido contaminao
por metais pesados. Tecnologias avana-
conduzido diversidade de isolados, das tais como o uso de sistemas biolgi-
resultados, s vezes, concordantes e, ou- cos de tratamento, para reduzir ou des-
tras, discordantes, embora sempre resul- truir resduos perigosos, so vistas como
tados que acrescentam aos achados ante- uma opo para a tecnologia de descon-
riores. taminao. Um dos campos mais promis-
sores da biotecnologia que visa o empre-
SELEO DE
MICRORGANISMOS
BIODEGRADADORES
DE ATRAZINA
O isolamento e seleo de
linhagens microbianas capazes
de biodegradar atrazina, um
trabalho bastante atraente e de
interesse nacional quando se
utiliza solos tropicais submeti-
dos agricultura intensiva.
Em nossos trabalhos micro-
biolgicos, decidimos trabalhar
com amostras de solo coletadas
da regio da microbacia do Es-
praiado. Os pontos de coleta
das amostras foram definidos
atravs da superposio de di-
versos mapas geolgicos e de
acordo com as caractersticas e
propriedades do solo da re-
gio, com cobertura de cana de
acar (CERDEIRA et al, 1998).
Partindo de 9 pontos, as amostras foram
coletadas a 2 profundidades diferentes: Figura 5 - Cromatograma de CLAE
0-20 e 80-90 cm. e submetendo estas (Cromatografia lquida de Alta
amostras ao tratamento com atrazina Eficincia) de amostra de solo: coluna
(1mg/mL em suspenso de solo). Aps RP-18 (250x4,6 mm); fase mvel -
tratamento, as suspenses foram plaque- MeOH:H2O (70:30, v/v); detector UV -
adas revelando populaes diversas de 220 nm; fluxo 1mL/min.
microrganismos como as da figura 4. Os
microrganismos isolados foram testados A - Amostra 4 - 0h
em sua habilidade para metabolizar atra- B - Amostra 4 - 26 dias de incubao
zina. Para monitorar a degradao de C - Amostra 5 - 0h
atrazina, os microrganismos foram incu- D - Amostra 5 - 26 dias de incubao
bados em meio lquido, contendo como

Figura 6 - Fotomicrografia de partcula do processo de microencapsulao
go dos microrganismos, direciona-se
para a remediao de locais contamina-
dos devido ao uso de agroqumicos.
Uma vez que microrganismos presentes
em solos so capazes de degradar e
mineralizar pesticidas, pode-se desen-
volver remediao biolgica ou biorre-
mediao de stios contaminados, em-
pregando-se microrganismos selecio-
nados. A biorremediao tem por obje-
tivo inocular o solo com microrganis-
mos com capacidade de metabolizar os
resduos txicos presentes no ambien-
te. A biorremediao vem sendo desen-
volvida com o objetivo de explorar a
diversidade gentica e a versatilidade
metablica microbiana para a transfor-
mao de contaminantes em produtos
menos txicos, que podem ser integra-
dos nos ciclos biogeoqumicos naturais.
Estudos baseados no uso de microrga-
nismos para degradar compostos qu-
micos so descritos freqentemente na
literatura, bem como a degradao total
ou parcial de pesticidas por populaes
microbianas naturais presentes em so-
los.
Isolamento, caracterizao e identi-
ficao dos microrganismos com habi-
lidade ou atividade enzimtica metabo-
lizadora dos materiais qumicos poten-
cialmente txicos, essencial para uti-
liz-los em biorremediao como medi-
da mitigadora nos problemas decorren-
tes do uso irracional de agroqumicos.
Tentativas para se aplicar processos
de biorremediao em solos contami-
nados, por simples adio destes ao
solo, por meio de um processo conhe-
cido como bioaumento ou bioamplia-
o, no vem alcanando o sucesso
esperado. A incorporao de nutrientes
ao solo ou outra manipulao da rea
denominada de bioestimulao, para
promover o crescimento microbiano,
tem resultado em sucesso limitado (US
Geological Survey).
O enfoque que estamos utilizando
desenvolver um sistema de liberao de
microrganismos como os empregados
para a liberao de frmacos em medi-
camentos, como um modelo para ser
aplicado em processos de biorremedia-
o. Por meio do emprego de conheci-
mentos de tecnologia farmacutica, pre-
tende-se incorporar os microrganismos
de interesse aos sistemas de liberao,
que podem liberar microrganismos para
biorremediar solos. Sistemas de libera-
o controlada ou sustentada podem
ser desenhados para uso no solo. Neste
sentido, microcpsulas, uso de matrizes
polimricas como derivados de algina-
to, amido ou celulose, esto sendo
adaptados.
A figura 6 mostra a fotomicrografia
de partculas desenvolvidas pelo nosso
grupo de pesquisa para a microencap-
sulao de microrganismos. As micro-
cpsulas sero empregadas em experi-
mentos de campo para se avaliar e
otimizar a mineralizao de atrazina.
As microcpsulas podero ento ser
lanadas a stios contaminados permi-
tindo a biorremediao do solo e
consequente proteo dos aq-
feros.
REFERNCIAS
BIBLIOGRFICAS
BEHKI, R. M.; KHAN, S. U.
(1986) - Degradation of atrazine
by Pseudomonas: N-dealkylation
and dehalogenation of atrazine
and its metabolites. J.Agric.Food
Chem. 34: 746-749.
BEHKI,R.M.;TOPP, E.;
DICK,W.; GERMON,P.(1993) Me-
tabolism of the herbicide atrazine
by Rhodococcus strains. Appl.
Environ.Microbiol. 59: 1955-1959.
BELLUCK, D.A.; BENJAMIN,
S.L.,and DAWSON, T. (1991) -
Groundwater contamination by
atrazine and its metabolites: Risk
assessment, policy, and legal im-
plications. In L. Somasundaram
and J.R. Coats (eds.) Pesticide Transfor-
mation Products: Fate and Significance
in the Environment. American Chemical
Society, Washington, DC.
CERDEIRA, A L , LANCHOTE, VL;
GOMES, MA; BONATO, P; PESSOA, M;
SHUHAMA,IK; UETA, J (1998) - Herbicide
residue in soil and water from sugarcane
area in Brazil. In Congrs Mondial de
Science du Sol, 16 Anais 1-7
HALLBERG, G.R.(1989) - Agr. Ecosys.
Environ. 26: 299-367
KORPRADITSKUL, R.; KATAYAMA,
A.; KUWATSUKA, S. (1993) Degradati-
on of atrazine by soil bacteria in statio-
nary phase. J. Pesticide Sci 18: 293-298
LEVANON, D. (1993) - Roles of
fungi and bacteria in the mineralization
of the pesticides atrazine, alachlor,
malathion and carbofuran in soil. Soil
Biol. Biochem. 25(8): 1097- 1105.
PARSONS, B. & WITT, J.M. (1989) -
Pesticides in groundwater in the USA. A
report of a 1988 survey of US States. EM
8406; Oregon State University Extension
Service .
RASODEVICH, M; TRAINA, S; HAO,
Y; TUOVINEN, O H (1995) - Degradati-
on and mineralization of atrazine by soil
bacterium isolate Appl Environ Microbi-
ology 61:297-302
WINTERLIN ET AL (1989) Arch En-
viron Contam Toxicol . 18: 734-747.
Participantes do trabalho: Ps-gra-
duandos, graduandos estagirios e tc-
nicos especializados dos laboratrios
de Tecnologia das Fermentaes, Con-
trole de Qualidade e Tecnologia Farma-
cutica da FCFRP-USP.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 13
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14 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

BAYER

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 15


CUPINS:
TRIPLA MARCAO E RECAPTURA
PESQUISA
PESQUISA BSICA PARA ESTUDO DE COMPORTAMENTO DE CUPINS SUBTERRNEOS
Cupins ou Trmitas
Trata-se de uma Ordem de insetos
tipicamente social, onde existe uma per-
feita diviso de trabalho entre as castas.
Reconhece-se indivduos frteis, o rei e a
rainha, e os indivduos estreis, que so
os machos e as fmeas, conhecidos como
operrias. Essas atacam todo e qualquer
material de origem vegetal, principal-
mente madeira, morta ou viva, em virtu-
de do seu alimento principal ser a celu-
lose. Essa substncia proporciona aos
cupins, energia necessria ao seu meta-
bolismo. Alm disso, fornece tambm as
protenas e os sais minerais essenciais ao
desenvolvimento do inseto. Desse modo,
madeiras inteiras ou at mesmo pedaos
encontrados no solo, proporcionam aos
cupins, alimento suficiente para manter
sua colnia por vrios anos, favorecendo
seu aumento populacional. Algumas es-
pcies alimentam-se tambm de tecido
vegetal vivo, atacando por exemplo: ra-
zes, troncos, galhos, como tambm ou-
tras partes da planta viva.
Os cupins subterrneos, na ausncia
de alimento no subsolo prximo col-
nia, sai em busca deste em reas mais
distantes. Esse comportamento peculiar
permite, que as operrias construam t-
neis ou galerias em locais diversos, no
interior de casas e prdios. Os tneis so
construdos em baixo dos pisos, no inte-
rior das paredes, atrs do rodaps, azule-
jos e lambris, nas juntas de dilatao, nas
colunas, nas aberturas de condutores
hidrulicos e at mesmo no interior dos
condutes de cabos eltricos e fios telef-
nicos. importante salientar que esses
tneis, so raramente expostos e, sempre
que for possvel, sero construdos de
maneira sutil e de difcil acesso. A busca
16 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
de alimento o objetivo principal da
colnia, no importando onde quer que
ele esteja. As operrias so capazes de
atravessar todo e qualquer material resis-
tente, at mesmo concreto.
Geralmente, o ninho, vulgarmente
conhecido como termiteiro ou cupin-
zeiro, encontrado no interior do subso-
lo; todavia, podem ocorrer excees.
possvel que, esse tipo de moradia venha
a ser construda no madeiramento do
telhado ou em caixes abandonados das
edificaes.
Operrias e soldados de Coptotermes
formosanus criados em laboratrio
na Universidade da Flrida - Fort
Lauderdale (FL)
Segundo Cancello et al. (1998), os
termos usados para definir os diferentes
indivduos que fazem parte de uma casta,
fogem regra da terminologia usada na
Entomologia. Segundo os autores, os
termos larvas e ninfas foram consa-
grados entre os termitlogos. Assim sen-
do, larva um termo usado para desig- construo de novos ninhos. As revoadas
nar os imaturos que alm de no serem
Alim da Costa Bicalho
Eng. Agr., Ps-Graduado em
Entomologia - UFLA. Lavras (MG)
Eurpedes B. Menezes
Eng. Agr. - Prof. Titular da UFRRJ.
PhD. em Entomologia. Seropdica (RJ)
Elen de Lima Aguiar Menezes
Eng. Agr., MSc. em Entomologia. -
Pesquisadora da
EMBRAPA AGROBIOLOGIA. Seropdica (RJ)
Fotos cedidas pelos autores
pigmentados, no possuem tecas alares e
no tm caracterstica de soldado. O
termo ninfa ou ninfa de alado usado
para designar imaturos sem caractersti-
cas de soldado, que apresentam tecas
alares e que sejam pouco pigmentados.
Pr-soldados ou soldados brancos
referem-se aos imaturos pouco pigmen-
tados e esclerotizados; todavia, j com
caractersticas de soldado.
Os soldados, castas morfologicamen-
te bem diferentes das operrias, so res-
ponsveis pela defesa da colnia. Os
soldados, alm da defesa
da mesma, no tm capa-
cidade de alimentao
prpria, cabendo s ope-
rrias, essa tarefa.
As operrias (ou ope-
rrios) so de morfologia
bastante uniforme dentro
de cada grupo e, como o
prprio nome indica, so
responsveis por todo o
trabalho da colnia.
Cabe-nos ressaltar que
o termo larva em outras
Ordens de Insetos, refere-
se aos grupos que possu-
em metamorfose comple-
ta (Diptera, Hymenopte-
ra, Coleoptera, etc.), e o
termo ninfa aos grupos
que possuem metamorfo-
se incompleta (Orthoptera, Hemiptera,
Mantodea, Blattaria, etc.).
Periodicamente, as formas aladas
(machos e fmeas) que so frteis e
sexualmente ativas, executam revoadas
com o objetivo de acasalamento e funda-
o de novas colnias, que resultaro na
costumam acontecer nos perodos mais
quentes e chuvosos do ano. Neste
perodo,os alados voam, atrados pela luz
(so fototrpicos positivos), em quanti-
dades surpreendentes. So vulgarmente
conhecidos por aleluias ou siriris.
Faz parte da ordem ISOPTERA, a
famlia Rhinotermitidae, cujas espcies
so consideradas inferiores, uma vez que
para obter os nutrientes da celulose,
utilizam-se da simbiose com protozori-
os. Atualmente, duas espcies destacam-
se como pragas dos grandes centros
urbanos:
Coptotermes formosanus - Embo-
ra essencialmente tropical, essa espcie
tida como adaptada s regies de climas
frios e mesmo sendo de origem asitica,
encontra-se estabelecida, em quase todas
as regies do planeta. Sua presena j foi
detectada na frica do Sul, Estados Uni-
dos da Amrica, Japo, sudeste da China,
Ceilo, Ilhas do Pacfico, Sudeste da fri-
ca e Hava.
Coptotermes havilandi - de ori-
gem asitica e, pouco se sabe a respeito
do comportamento e biologia dessa es-
pcie tido como extica na Ilhas Maur-
cius, Ilhas Marquesas, Ilhas Reunion, Ilhas
Barbados, Jamaica e Brasil.
Segundo Menezes et al. (1991), essa
praga ataca cabos de alta e baixa tenso
quando estes so predispostos mesma.
De acordo com Arajo (1958), Costa
Lima foi um dos primeiros entomologis-
tas a identific-la em nosso pas; todavia,
como Coptotermes vastator; entretanto,
estudos mais recentes, demonstram que
a mesma j tinha sido introduzida em
nosso pas muito antes de 1936. Possivel-
mente, a introduo desta praga extica
ocorreu na cidade do Rio de Janeiro e na
cidade de Santos (SP), ainda nas dcadas
de 20/30.
Os prejuzos causados por C. havi-
landi, nunca foram mensurados, sequer
cogitados e, muito menos avaliados; en-
tretanto, depois da destruio de um
cabo de alta tenso no Aeroporto Interna-
cional do Rio de Janeiro, em 1985, fez
com que tcnicos do CEPEL (Centro de
Pesquisa da Eletrobrs) entrassem em
contato com pesquisadores da UFRRJ
(Menezes e Sens, 1989).
Aps a introduo de C. formosanus
em Miami em 1982, Dr. Nan-Yao Su,
pesquisador da Universidade da Flrida,
intensificou os estudos de biologia, com-
portamento e controle dessa praga. (ver
Su et al., 1996). Recentemente constatou-
se que C. havilandi tambm tinha sido
introduzido em North Miami, no Sul da
Flrida (Su et al., 1997). No Brasil, vrios
trabalhos, conduzidos por Menezes e
colaboradores, tm permitido saber mais
a respeito do controle de C. havilandi
(Bicalho et al., 1998; Xavier et al. 1998;
Ferreira et al. 1998; Soares et al. 1998;
Lage et al., 1998; Arajo et al. 1998; Rojas-
Cortz, et al., 1998; Jacintho et al., 1998;
Baeta Neves et al., 1998). Atualmente,
encontra-se em andamento na UFRRJ
uma pesquisa de ps-graduao que tem
como objetivo, estudar o comportamento
dessa praga e o tamanho de sua rea de
forrageamento.
Desenvolvendo mensuraes:
Estudando o comportamento de cu-
pins, pesquisadores desenvolveram ao
longo dos anos, a tecnologia de iscas
atrativas (La Fage at al., 1973; Tamashiro
et al., 1973). Essas tm tambm auxiliado
no monitoramento e controle das popu-
laes de cupins. No entanto, um dos
obstculos encontrados para o desenvol-
vimento do sistema de iscas tem sido a
incapacidade de se determinar a mortali-
dade dos indivduos. Usando-se barreiras
qumicas no solo, o controle medido
em funo do nmero de anos, em que os
blocos de madeiras, usados nos testes,
permanecem no danificados. Todavia,
como demonstrar que o sistema de con-
trole por iscas foi letal colnia? Sabe-
se que os cupins podem deixar a isca
sozinha e, forragear outros pontos. Isso
nos fornece uma interpretao dbia
quanto a eficcia da isca; ser que a
mesma funcionou apenas como repelen-
te, ou como uma fonte de alimento
inadequado? Medir mortalidade de cu-
pins subterrneos extremamente com-
plicado porque no podem ser observa-
dos diretamente, sem que suas colnias,
venham a ser perturbadas.
A soluo foi usar as chamadas esta-
es de monitoramento e a tcnica de
marcao e recaptura, as quais determi-
nam o territrio da colnia, o tamanho de
sua populao, como tambm medem a
atividade e os padres de alimentao
(Su & Scheffrahn, 1986). A estao de
monitoramento utilizada em testes na
Universidade da Flrida a verso mais
moderna do mtodo preconizado por
Tamashiro et al. (1973). Se a rea de
alimentao da colnia pode ser defini-
da, por meio do uso de estaes de de forrageamento de uma colnia. Se-
monitoramento e de indivduos marca-
dos, ento, o decrscimo em nmero de
atividade dessa colnia, certamente po-
der ser medido. Todavia, medir o terri-
trio de forrageamento de uma colnia e
sua atividade diria, no nada fcil!
Os cupins so bem apropriados para
se determinar a estimativa de sua popu-
lao por meio da marcao e recaptura,
j que cada colnia uma unidade fecha-
da, no tendo indivduos que mudam ou
movem-se entre colnias. Alm disso, as
populaes no aumentam, nem decres-
cem rapidamente. Outro fato importante
que as populaes de algumas colni-
as, so grandes e proporcionam estimati-
vas desafiantes. Para aumentar a exatido
de uma estimativa populacional, a tcni-
ca de marcao-recaptura tripla proposta
por Begon (1979), foi usada por Su et al.
(1991) trabalhando com uma isca para o
controle de cupins. Essa tcnica envolve
captura, marcao, contagem e liberao
de um nmero considervel de operrias
de cupins, durante trs ciclos em um local
determinado. O segundo e o terceiro
grupo, constitudo de indivduos marca-
dos e recapturados e de indivduos no-
marcados, serviro para se obter a esti-
mativa populacional.
A tripla marcao e recaptura desen-
volvida em outros pases (Begon,1979;
Su et al.,1991) um dos objetivos da tese
de mestrado do primeiro autor deste
artigo.
O procedimento de captura dos indi-
vduos de uma determinada colnia no
campo, requer mais conhecimentos da
mesma e, isto feito por meio do proces-
so de estaqueamento de determinados
pontos. Em seguida, estaes de moni-
toramento (tubos de PVC com 25 cm de
dimetro) contendo isca apropriada, subs-
tituem as estacas que foram atacadas
pelas operrias daquela colnia em estu-
do. Depois de algum tempo, as iscas
infestadas so transferidas para o labora-
trio, onde se procede a triagem e limpe-
za do material coletado (operrias, solda-
dos, imaturos). Aps esse procedimento,
a populao obtida acondicionada em
recipiente prprio e alimentada com o
material desejado (papel de filtro conten-
do o marcador escolhido; isto , azul do
Nilo, vermelho Sudo 7B, Preto Sudo B,
fuchsina, bengal rosa, etc.). Depois de
alguns dias, a populao devidamente
alimentada com o marcador especfico
devolvida ao seu local de origem. A
presena de indivduos marcados em
estaes vizinhas, sugere que sejam per-
tencentes a uma mesma colnia.
Um outro objetivo da tcnica de tripla
marcao e recaptura determinar a rea
gundo Su et al. (1991), em um complexo
de apartamentos estudado, seis colnias
(individuais) de cupins subterrneos, es-
tavam ativas e aumentando suas popula-
es. Para se fazer estudos com iscas,
necessrio conhecer profundamente a
rea de forrageamento de uma colnia de
modo que, a reduo de sua atividade
(em virtude da metodologia empregada),
possa ser medida com exatido. A tcnica
tripla de marcao-recaptura permite
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 17
 definir com preciso o territrio de
forrageamento de cada colnia, obser-
vando-se cupins corados ou marcados,
nas estaes de monitoramento.
A teoria da marcao e recaptura
fantstica, porque nos permite estimar,
estatisticamente, o tamanho de uma po-
pulao. A tcnica consiste em marcar
um nmero conhecido de indivduos
coletados aleatoriamente, e liber-lo, de
volta, na mesma populao. A posteriori,
recaptura-se outro grupo, constituindo
uma segunda amostra aleatria, onde
verificado o nmero de indivduos mar-
cados e no-marcados na mesma. A partir
dessa amostra, obtemos a proporo en-
tre o nmero de indivduos marcados-
recapturados e o nmero total de indiv-
duos marcados, o qual constituiu a pri-
meira amostra. Baseando-se nessa pro-
poro e no nmero de indivduos da
segunda amostra, podemos estimar, com
exatido, por meio de clculos estatsti-
cos, a populao total.
Para ajudar a entender como isto
funciona, suponhamos que se queira
descobrir quantos funcionrios existem
em uma construo, durante os seus dois
turnos. Primeiro colocaramos uma bar-
reira na hora da sada, e aleatoriamente
pararamos 50 operrios. Em seguida,
colocaramos, em cada cinqenta, capa-
cetes amarelos e os deixaramos partir.
Uma semana mais tarde, pararamos ale-
atoriamente, mais um grupo de operri-
os; digamos 150, e constatamos que 10
dos 150 operrios esto com capacete
amarelo. Desta maneira, podemos esti-
mar o nmero total de operrios que
trabalham na construo, baseando-nos
na proporo de que os dez operrios de
capacete amarelo recapturados repre-
sentam 1/5 dos 50 inicialmente marca-
dos. Dessa forma, estatisticamente, as
chances da amostra de 150 operrios
corresponder tambm a aproximadamen-
te 1/5 do nmero total de operrios na
construo sero boas; e assim, ao multi-
plicarmos 5 por 150, podemos estimar
que h, no total, 750 operrios trabalhan-
Indivduos estreis (operrias) de Coptotermes formosanus aps inges-
to de papel de filtro embebido em Azul do Nilo - Universidade da
Flrida - Fort Lauderdale (FL)
18 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
do na construo.
Naturalmente este exemplo simpli-
ficado, e exigiria que a amostragem ale-
atria fosse feita de acordo com o proto-
colo de amostragem cientfica, porm a
idia a mesma.
BIBLIOGRAFIA
Arajo, G. T.; Assuno, E. D.; Me-
nezes, E. B.; Bicalho, A. C.; Aguiar-
Menezes, E. L. & Peralta, R. C. G. 1998.
Ataque de Coptotermes havilandi ao ma-
deiramento de telhado do prdio de
pesquisa da EMBRAPA-Agrobilogia, em
Seropdica, RJ. In Resumos do 17o Con-
gr. Bras. de Entomol., Rio de Janeiro,
RJ. p. 1020.
Arajo, R. L. 1958. Contribuio
biogeografia dos trmitas de So Paulo,
Brasil., Arq. Inst. Biol., So Paulo, v.25,
p. 185-217.
Baeta Neves, A. M.; Menezes, E. B.;
Bicalho, A. C.; Assuno, E. D.; Aguiar-
Menezes, E. L. & Rojas-Cortz, M. G.
1998. Nidificao secundria, danos e
controle do cupim subterrneo Coptoter-
mes havilandi em apartamento de cober-
tura, em Ipanema, Rio de Janeiro, RJ. In
Resumos do 17o Congr. Bras. de Ento-
mol., Rio de Janeiro, RJ. p. 1018.
Begon, M. Investigation Animal Abun-
dance: Caprture-Recapture for Biologists.
University Park, Baltimore, 1979. 97p.
Bicalho, A. C.; Menezes, E. B.; Agui-
ar-Menezes, E. L.; Rojas-Cortz, M. J. &
Jacintho, E. L. 1998. Ataque de Copto-
termes havilandi rvore viva de angico-
branco (Anadenanthera columbina) em
Seropdica, RJ. In Resumos do 17o Con-
gr. Bras. de Entomol., Rio de Janeiro,
RJ. p.1024.
Cancello, E. M. et al. 1998. Bioeco-
logia e Sistemtica. In Cupins: Pragas
em reas Urbanas. Zarzenon. F. J. e
Potenza. M. R., coord. Bol. Tcn. Inst.
Biol., So Paulo, n.10, p.5-40, mai., 1998.
Ferreira, I.T.; Menezes, E. B.; Agui-
ar-Menezes, E. L.; Bicalho, A. C. &
Peralta, R. C. G. 1998. Armadilha para
controle do cupim subterrneo Coptotermes
havilandi, em focos reincidentes em Maca,
RJ. Resumos do 17o Congresso Bras. de
Entomol. Rio de Janeiro,RJ. p.1019.
Jacintho, E. L.; Menezes, E. B.; Bica-
lho, A. C.; Assuno, E. D. & Aguiar-
Menezes, E.L. 1998. Ataque do cupim sub-
terrneo Coptotermes havilandi a fibras de
sisal (Agave sisalana) de teto rebaixado de
gesso e seu controle. In Resumos do 17o
Congr. Bras. de Entomol., Rio de Janei-
ro, RJ. p. 1027.
Lage, M. C. G.; Menezes, E. B.; Bica-
lho, A. C.; Rojas-Cortz, M. G.; Marchio-
ri, C. L. & Aguiar-Menezes, E.L. 1998.
Ocorrncia do cupim subterrneo, Copto-
termes havilandi, atacando edificaes resi-
denciais e razes de plantas ornamentais na
Barra da Tijuca, Rio de Janeiro (RJ). In
Resumos do 17o Congr. Bras. de Ento-
mol., Rio de Janeiro, RJ. p. 1031.
La Fage, J. P.; Nutting, W. L.; Haverty,
M. I. Desert subterranean termites: a me-
thod for studiing foraging behaviour. Envi-
ron. Entomol., v.2. p.954-956, 1973.
Menezes, E. B.; Bicalho, A. C.; Aguiar-
Menezes, E. L. & Ferreira, I. T. 1998.
Avaliao dos danos e controle de cupins
atacando a pra ferroviria do Porto Tuba-
ro, Vitria, ES. In Resumos do 17o Congr.
Bras. de Entomol., Rio de Janeiro,RJ. p.
1026
Rojas-Cortz, M. J.; Menezes, E. B.;
Bicalho, A. C.; Aguiar-Menezes, E.L. &
Lage, M. C. G. 1998. Aspectos da comple-
xidade do controle de cupim subterrneo
em conjunto residencial urbano.In Resu-
mos do 17o Congr. Bras. de Entomol.,
Rio de Janeiro, RJ. p. 1021.
Soares, R. G. M.; Menezes, E. B.; As-
suno, E. D.; Bicalho, A. C. & Baeta
Neves, A. M. 1998. Prejuzos causados pelo
cupim subterrneo, Coptotermes havilandi,
em edificao com parede de adobe, Rio de
Janeiro, RJ. In Resumos do 17o Congr.
Bras. de Entomol., R. Janeiro, RJ. p.
1014.
Su, N. Y.; P. M.; Scheffrahn, R. H.
Evaluation of twelve dye marker for popu-
lation studies of the formosan termites (Isop-
tera: Rhinotermitidae). Sociobiology, v.19,
n.2, p.349-362, 1991.
Tamashiro, M.; Fujii, J. K.; Lai, P. Y. A
simples method to observe, trap, andprepa-
re large numbers of subterranean termites
for laboratory and field experiments. Envi-
ron. Entomol., v.2, p.721-722, 1973.
Xavier, R. B. L.; Menezes, E. B.; Pinto,
L. S.; Ribeiro, N. H.; Assuno, E.D. &
Aguiar-Menezes, E. L. 1998. Levantamen-
to de trmitas subterrneos no ?Campus? da
Universidade Federal Rural do Rio de Janei-
ro e em bairros adjacentes. In Res. do 17o
Congr. Bras. de Entomol., R. Janeiro, RJ.
p. 1013.
AGREVO

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 19

 A SERINGUEIRA
REPORTAGEM
NO BRASIL
Artefato pr-colombiano
Antes de Cristvo Colombo chegar
Amrica, em 1492, a borracha j era utiliza-
da pelos povos indgenas deste novo con-
tinente, h muitos anos. Eles realizavam a
sangria nas rvores de seringueiras e seca-
vam o ltex no calor das fogueiras. Presu-
me-se que Colombo e seus auxiliares foram
os primeiros europeus a conhe-
cerem a borracha, quando en-
contraram nativos do Haiti brin-
cando com bolas de borracha e
levaram amostras para a Euro-
pa.
Dois sculos e meio mais
tarde, o cientista francs Fran-
ois Fresnau fabricou um par de
botas de borracha para Frederi-
co o Grande, que era pegajoso
no calor e quebradio no frio. A
borracha utilizada por Fresnau
foi obtida de ltex de Hevea da
Guiana Francesa, a primeira des-
crita pelos exploradores.
Ainda nesse perodo, o ci-
entista Joseph Priestley, famoso
qumico ingls, produziu a pri-
meira borracha para apagar ris-
cos de lpis no papel. Em 1772,
cubos de borracha eram vendi-
dos em Londres como apagado-
res para estudantes. Em 1823,
foi feito o primeiro tecido a
prova dgua, sendo patentea- Seringueira na fase de sangria
do pelo escocs Macintosh, que
colocou uma camada de borra-
cha entre duas de tecido. Em
Glasgow fundada a primeira
fbrica que usava borracha como matria
prima em tecidos impermeveis. No mesmo
ano, foi inventada a tira elstica pelo fabri- e o ltex da seringueira se consolida na
cante de carruagens londrino Thomas Han-
cock.
Entre 1839-1842, o americano Charles
Goodyear e o ingls Thomas Hancock des-
cobriram que o enxofre e o calor poderiam
fazer com que a borracha no alterasse seu
estado com a variao da temperatura,
desenvolvendo a tcnica da vulcanizao.
Outra inveno importante foi o emprego
da borracha como isolante eltrico. Em
20 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
A SERINGUEIRA NO BRASIL E O CONTROLE BIOLGICO DO Microcyclus ulei
1846, tiras de borracha slidas foram empre-
gadas por Hancock na carruagem da Rainha
Vitria.
Em 1888, o escocs John Dunlop pro-
duziu o primeiro pneu de borracha, na
Inglaterra, inaugurando a era dos pneum-
ticos para bicicletas, carruagens e veculos
automotores. A inveno foi patenteada em
1888, e, em 1890, em parceria com W. H. Du
A - Colnia
B - Colnia
pulvinata
Cros, comeou a produo comercial. A
partir de 1920, chega a era dos automveis
fabricao de pneus no mundo moderno.
Biopirataria
A expanso do extrativismo do ltex da
seringueira na regio amaznica, no final do
sculo XIX, se deu em decorrncia do
lucrativo ciclo econmico da borracha, e
tornou Manaus - capital do estado do Ama-
zonas - conhecida como a Paris dos Trpi-
Lucas Tadeu Ferreira
Fotos:
Sueli Corra Marques de Mello e
Embrapa Rondnia
cos, pois ela era o principal centro comer-
cial do pas na poca e ocupava lugar de
destaque na economia mundial. O teatro de
Manaus uma das construes-smbolo
dessa poca do apogeu econmico e cultu-
ral da Regio Norte.
Mas, nesse perodo, quando a produo
de borracha da Amaznia atingia o seu
esplendor em termos de produo e gera-
o de renda para o pas, o
ingls Henry Wickhan, em 1876,
contrabandeou, o que atual-
mente se chamaria biopirata-
ria, para os jardins reais de
Kew, em Londres, mais de 70
mil sementes de seringueira.
Passados 30 anos, o cultivo da
seringueira se expandiu nos
pases do sudeste Asitico, pa-
trocinado pelos ingleses, e hou-
ve a quebra do monoplio da
produo da Amaznia.
Com a elevada produo e
produtividade da borracha cul-
tivada, no Sudeste Asitico, o
extrativismo da Amaznia en-
tra em declnio, em razo desse
ato de biopirataria de material
gentico brasileiro, que se tor-
nou histrico, e que ainda sub-
siste at hoje com vrios outros
recursos genticos brasileiros.
No incio da dcada de 20,
os seringais do Oriente produ-
de M. ulei ziam mais de 1,5 milho de
de D. toneladas, enquanto que a
Amaznia apenas 20 mil tone-
ladas. Por volta de 1962, o Bra-
sil comeava a importar do Su-
deste Asitico espcies de seringueira gene-
ticamente melhoradas e mais produtivas, e
a produo da seringueira cultivada se
expandiu por vrios estados brasileiros.
Produo e mercado
O Brasil produz hoje pouco mais de
60.000 t/ano de borracha natural e consome
por volta de 160.000 t/ano, ou seja, a
produo interna atende a aproximada-
mente um tero do consumo. Em nvel
mundial, a produo de borracha natural
chega a mais de 6.000.000 t/ano. Os princi-
pais produtores so os pases do Sudeste
Asitico. No incio da dcada de 70, no Brasil,
um quilo de borracha natural valia o equiva-
lente a R$ 3,50, e hoje vale em torno de R$
1,00. No mercado internacional o preo pode
chegar a mais de R$ 1,20.
Hoje, a rea tradicional de cultivo da
seringueira no Brasil abrange a Amaznia
Tropical mida, Mato Grosso e Bahia. Em
reas no-tradicionais, a seringueira cultiva-
da nos estados de Gois, Mato Grosso do Sul,
Pernambuco, Maranho, Esprito Santo, Rio
de Janeiro, Paran, So Paulo e Minas Gerais.
No Tringulo Mineiro e Alto Paranaba esto
concentradas as maiores plantaes do esta-
do de Minas Gerais, alcanando produtivida-
de de aproximadamente 1.500 kg de borra-
cha seca/ha/ano.
Do ponto de vista social, a heveicultura
muito importante, principalmente na fixao
do homem no campo, tanto em seringal
nativo quanto em cultivado, pois produz o
ano todo. Em contrapartida, o extrativismo do
ltex da Regio Amaznica tem pouca ex-
presso hoje, considerando o volume total de
borracha natural produzido no pas e no
exterior. Em seringal nativo, na Regio Ama-
znica, um homem obtm, por ano, de 500 a
600kg de ltex; e, em seringal cultivado a
produo pode passar de 20 t/ano. Como se
v, a preferncia dos produtores pelas reas
de escape e por seringais cultivados bvia.
Uma rvore de seringueira, durante a sua vida
til, que pode chegar a 30 anos, produz cerca
de 100kg de ltex, com uma mdia de 3,5kg/
ano.
Setenta por cento da borracha natural
consumida no mundo hoje so empregados
na fabricao de pneus para grandes cami-
nhes e avies, os quais precisam de elastici-
dade para suportar o imenso peso das cargas,
e do impacto das aeronaves durante pousos
e decolagens, alm de inmeras outras apli-
caes industriais do ltex, como na produ-
o de preservativos e luvas mdicas, por
exemplo.
Mal-das-folhas
A seringueira suscetvel vrias doen-
as. A mais grave, sem dvida, o mal-das-
folhas, causada pelo fungo Microcyclus ulei,
que provoca a queima das folhas e pode levar
as plantas morte. O M. ulei originrio da
Amaznia e s ocorre no continente america-
no, no havendo registro de sua presena no
Oriente e Sudeste Asitico. Este fungo causa
prejuzos somente a espcies do gnero He-
vea, sendo as mais resistentes a H. nitida, a H.
pauciflora, a H. benthamiana, a H. guianen-
sis e a H. spruceana, que devem ser preferen-
cialmente utilizadas como controle preventi-
vo.
Um eficiente mtodo de controle do mal-
das-folhas o chamado cultivo em reas de
escape. Geralmente, uma rea de escape
caracterizada por possuir condies ambien-
tais adversas das que o fungo (patgeno)
necessita para manter o seu ciclo de vida.
Contudo, ela tem que ser necessariamente
apropriada ao cultivo da seringueira. Para o
caso do controle do M. ulei, o tempo
mnimo que o fololo deve permanecer
molhado para causar infeco de oito
horas. Numa regio em que esse perodo for
inferior a esse tempo permitir o convvio
endmico da planta com a doena, sem
danos cultura e sem prejudicar a produo
do ltex. Mesmo cultivando a seringueira
nas chamadas reas de escape aconselh-
vel selecionar material gentico que apre-
sente maior resistncia e tolerncia ao pat-
geno. Outras doenas de menor expresso
que atacam a seringueira so a Mancha-
areolada, a Podrido-do-caule na regio de
enxertia e a Antracnose.
Contudo, o Mal-das-folhas da seringuei-
ra a mais grave patologia desta cultura,
alm de ser o pior fator limitante da produ-
Leses de Microcyclus ulei
colonizadas pelo Dicyma pulvinata
o do ltex natural e da expanso da
heveicultura no Brasil, e em outros pases
latino-americanos tambm. Esta doena lgico esto sendo desenvolvidas na Embrapa
ainda um dos principais fatores que vem
prejudicando o mercado de borracha natu-
ral no Brasil.
O Microcyclus ulei ataca preferencial-
mente as folhas com at 15 dias de idade,
provocando-lhes um fenmeno parecido
com a queima das folhas e a sua conseqen-
te queda, o que prejudica totalmente o
processo de fotossntese e provoca perdas
que podem inviabilizar o cultivo. Nos vivei-
ros e estufas, em condies climticas favo-
rveis, este fungo pode ocasionar perdas de
at 100% nas mudas de seringueiras susce-
tveis, atravs de infeces, reinfeces e mente nas instalaes da Embrapa Recursos
desfolhamentos sucessivos.
Alm disso, em plantas adultas, o fungo
provoca o secamento dos galhos, deixando
a planta totalmente debilitada e vulnervel
vrias outras doenas secundrias, o que pre-
judica sobremaneira a produo de ltex. Para
se ter uma idia, no nosso Pas, essa doena
apontada como a principal responsvel pelo
fracasso dos projetos de fomento da seringuei-
ra executados nas dcadas de 70 e 80, nos
municpios de Belterra e Fordlndia, no estado
Par, atravs dos Programas de Desenvolvi-
mento da Borracha, do Governo Federal (Pro-
bor I, II e III), os quais atingiram quase 100.000
ha de plantio e no lograram xito.
Ainda hoje, o acervo dos conhecimentos
cientficos e tecnolgicos disponveis tem sido
insuficiente para eliminar ou mesmo controlar
essa doena, devido principalmente ao porte
elevado das seringueiras, alta variabilidade
gentica do patgeno causador da doena e a
inexistncia, at o momento, de clones gene-
ticamente resistentes e de alta produtividade.
Felizmente, o M. ulei no chegou ainda ao
Sudeste Asitico, pois se tal fato ocorrer haver
um verdadeiro colapso na produo de pneus
para avies e caminhes, em nvel mundial
Controle biolgico
Assim, no momento, entre as medidas de
fitossanidade que representam maior potenci-
al de combate ao mal-das-folhas destaca-se o
controle biolgico, atravs do emprego de
inimigos naturais, como caso do fungo
Dicyma pulvinata (Berk & M.A. Curtis) Arx
(syn. Hansfordia pulvinata) que antagnico
ao M. ulei. Colonizando as leses de M. ulei,
D. pulvinata impede a esporulao, ou seja, a
reproduo do patgeno, por mecanismos
ainda desconhecidos, reduzindo assim o des-
folhamento das plantas e a taxa de contamina-
o e reinfeces.
Nos ltimos anos, seringalistas da regio
de So Jos do Rio Claro, MT, vm utilizando
este fungo antagnico para controle do Mal-
das-folhas com relativo sucesso. Entretanto, o
processo de produo e utilizao ainda
artesanal e incipiente, o que torna necessrio
a realizao de estudos bsicos da biologia,
epidemiologia, diversidade gentica e meca-
nismos envolvidos na interao entre a doen-
a e o seu agente de biocontrole.
Neste sentido, pesquisas de controle bio-
Recursos Genticos e Biotecnologia, localiza-
da em Braslia, sob a responsabilidade da
pesquisadora Sueli Corra Marques de Mello,
atravs de um projeto financiado pelo Fundo
Nacional do Meio Ambiente FNMA. A fina-
lidade destas pesquisas a de obter todos os
subsdios necessrios identificao de isola-
dos de fungos antagnicos com alta virulncia
e adaptados s principais regies produtoras
de borracha do pas, alm de estabelecer um
sistema de produo em quantidade adequa-
da desses micoparasitas antagnicos.
O projeto est sendo conduzido principal-
Genticos e Biotecnologia e conta com o
apoio de outros Centros da Embrapa, como a
Embrapa Cerrados - localizada em Braslia
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 21
 (DF), a Embrapa Acre - localizada em Rio
Branco (AC), a Embrapa Rondnia - locali-
zada em Porto Velho (RO), a Embrapa
Amaznia Ocidental - localizada em Ma-
naus (AM), e a Embrapa Amaznia Oriental
- localizada em Belm (PA), alm da Comis-
so Executiva do Plano da Lavoura Cacau-
eira - CEPLAC - localizada em Itabuna - BA,
e da empresa MICHELIN, localizada em
Ituber (BA) e Rondonpolis (MT).
Para tanto, j foram realizadas viagens
s principais regies produtoras de serin-
gueira nos estados do Par, Amazonas,
Acre, Rondnia, Mato Grosso, Bahia e Esp-
rito Santo, onde foram coletadas folhas de
seringueira contendo M. ulei parasitados
com D. pulvinata, e para obteno dos
isolados de M. ulei, visando determinao
da virulncia em populaes do micopara-
sita, foram tambm coletadas folhas jovens
contendo a fase inicial de reproduo do
patgeno, que so os condios.
De acordo com a pesquisadora Sueli
Corra, os trabalhos de pesquisa da Embra-
pa Recursos Genticos e Biotecnologia pros-
seguem normalmente; vrias estirpes dos
fungos D. pulvinata e M. ulei foram isola-
das, identificadas e preservadas, atravs de
tcnicas especficas. A caracterizao mor- casa de vegetao, onde
folgica, molecular e patognica dos isola-
dos de D. pulvinata est em andamento, e
permitir, dentro de pouco tempo, conhe-
cer a variabilidade do fungo na natureza,
tornando possvel a seleo de isolados
adequados para as regies geogrficas dis-
tintas.
Para estudar os mecanismos de intera-
o entre D. pulvinata e M. ulei por micros-
copia eletrnica de varredura, foram prepa-
rados fragmentos de tecidos das folhas
oriundos de amostras do patgeno coloni-
zado pelo seu fungo antagonista coletado
no campo. Outros sistemas esto sendo
avaliados para estudar o modo de ao do
antagonista sobre o patgeno. Deste modo,
atravs de pareamento - inoculando-se os
dois lado a lado -, e de sobreposio -
inoculando-se o antagonista sobre o pat-
geno - de culturas em meios apropriados,
Leses de
Microcyclus
ulei
infectadas
pelo Dicyma
pulvinata, em
folhas de
seringueira
22 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Segundo a pesquisadora, a despeito des-
te fungo causador do Mal-das-folhas de-
monstrar alta agressividade com a cultura da
seringueira, ele extremamente exigente de
umidade, temperatura, concentrao de in-
culo etc., para desenvolver a doena em casa
de vegetao. Tambm sua produo em
laboratrio bastante difcil e dependente
dos isolados. Raramente um isolado muito
infectivo desenvolve-se em meios artificiais,
exigindo sua produo in vivo.
Entretanto, essas dificuldades foram su-
peradas, j que o patgeno encontra-se bem
Planta jovem de seringueira atacada estabelecido em casa de vegetao na Em-
pelo Microcyclus ulei brapa Recursos Genticos e Biotecnologia, e
vrias plantas de seringueira vm apresen-
tando nveis adequados de doena, condi-
est sendo investigado o envolvimento de o indispensvel para a realizao das
enzimas degradadoras da clula do patge- pesquisas, conclui Sueli.
no e a produo de substncias txicas que Assim, em breve, espera-se que este
inibem o crescimento do M. ulei. Conhecer projeto comece a apresentar os primeiros
estes mecanismos muito importante, pois resultados viveis do controle biolgico do
permite intervir no processo de antagonis- Mal-das-folhas e que ele contribua, pelo
mo, aumentando sua eficincia. menos, para atenuar este mal terrvel da
Quanto avaliao da virulncia e da seringueira em nosso pas.
agressividade dos isolados
de D. Pulvinata, bioensaios
esto sendo instalados em
plantas de seringueira en-
contram-se estabelecidas.
Preparaes contendo es-
poros de cada isolado so
aplicadas diretamente so-
bre leses foliares conten-
do estromas (estruturas que
contm a fase sexual do M.
ulei) ou condios de M. ulei
desenvolvidas a partir de
inoculaes artificiais das
plantas com o patgeno. A
etapa seguinte do projeto ser o desenvol- Placa 1 - Colnia de Microcyclus ulei
vimento de tcnicas de produo de incu- Placa 2 - Colnia de Microcyclus ulei
los - como se fossem sementes - do fungo colonizada por Dicyma pulvinata
antagnico para produo em larga escala.
Na fase mais avanada da doena so
produzidos os esporos sexuais, que alm de
possibilitarem maior variabilidade gentica
do fungo, so mais resistentes s adversida-
des do ambiente, como temperatura e umi-
dade. Os condios, ao contrrio, so estru-
turas multiplicativas de origem no sexual,
produzidas sem recombinao gentica, por
isso, detendo pouca variabilidade - menor
variabilidade, menor capacidade de adapta-
o e de sobrevivncia do organismo. As-
sim, conclui-se que qualquer medida de
controle do M. ulei deve, preferencialmen-
te, impedir a formao dos esporos sexuais,
para com isso impedir o processo reprodu-
tivo e o ciclo de vida do patgeno.
Contudo, somente a partir da obteno
dos clones de seringueira adequados por
meio de tcnicas de enxertia e do estabele-
cimento do Mal-das-folhas em casa de vege-
tao foi possvel realizar bioensaios com os Aspecto de estroma de Microcyclus ulei
fungos. A maior dificuldade enfrentada pelo
colonizado por Dicyma pulvinata em
projeto at o momento foi o estabelecimen- tecido de seringueira, observado por
to do M. ulei em plantas, sob condies
Microscopia Eletrnica de Varredura
controladas, ressalta Sueli.
NOVARTIS

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 23


Engenharia do
PESQUISA METABOLISMO SECUNDRIO
Otimizao da produo de metablitos secundrios em culturas de clulas vegetais
esde os tempos antigos as
plantas vm sendo utiliza-
das nas sociedades huma-
nas com propsitos tera-
puticos, sendo que suas
propriedades txicas ou curativas foram
descobertas pelo homem principalmen-
te enquanto este buscava por alimento.
De fato, o conhecimento etnobotnico-
farmacolgico acumulado ao longo de
geraes tem servido como base para o
desenvolvimento de frmacos
de grande importncia, tais
como : digoxina, quinina, mor-
fina, hiosciamina, cido salic-
lico e artemisina. Neste con-
texto, os metablitos secund-
rios vegetais apresentam um
grande valor do ponto de vista
social e econmico e, como
exemplo, na dcada de 80 fo-
ram identificados 121 compos-
tos de origem vegetal, prove-
nientes de 95 espcies, os quais
tm sido usualmente emprega-
dos como teraputicos nos pa-
ses ocidentais. Alm disso, do
total de medicamentos aprova-
dos no perodo 1983-1994, 6%
so obtidos diretamente de es-
pcies vegetais, sendo deno- Figura 1: Estrutura molecular de metablitos secund-
minados produtos naturais, 24% rios vegetais utilizados como biofrmacos
so compostos derivados e 9%
foram desenvolvidos a partir de com-
postos vegetais cuja estrutura molecular
serviu como unidade precursora em
processos de sntese.
Do ponto de vista econmico, pode-
se mencionar os alcalides indlicos
terpenodicos vincristina (utilizado no
tratamento de leucemia) e vinblastina
(usado na terapia de corio-carcinomas e
na doena de Hodgkins) de Catharan-
thus roseus, os quais tm seus valores de
mercado estimados em US$ 6.000 e
24 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
12.000/g, respectivamente. Todavia, alm
do alto valor agregado que algumas
drogas de origem vegetal apresentam,
esta rea demonstra um grande potenci-
al no que concerne ao desenvolvimento
de novos medicamentos, uma vez que a
diversidade qumica associada diversi-
dade biolgica encontrada em ecossiste-
mas terrestres e aquticos, um impor-
tante aspecto a ser considerado em
processos e diretrizes de desenvolvi-
Ajmalicina Quinina
Morfina Taxol
mento de novos biofrmacos. Como
estimativa, cerca de 110.000 compostos
tm sido identificados at o presente,
sendo que deste total, os terpenides
constituem o maior grupo [~ 33.000
compostos], seguidos pelos alcalides
[~16.000 compostos] (1). Anualmente,
4000 novos compostos de origem vege-
tal tm sido relatados, com uma tendn-
cia de crescimento para este valor. Como
caracterstica geral, tais compostos mos-
tram um padro de ocorrncia restrito a
Marcelo Maraschin
Laboratrio de Morfognese e Bioqumica Vegetal,
Departamento de Fitotecnia, Universidade Federal de Santa
Catarina Florianpolis/SC.
m2@cca.ufsc.br
Robert Verpoorte
Division of Pharmacognosy, Leiden/Amsterdam Center for
Drug Research, Leiden University, Leiden, The Netherlands.
verpoort@lacdr.leidenuniv.nl
Foto cedida pelos autores
alguns grupos taxonmicos, no sendo
considerados essenciais ao metabolismo
basal da clula vegetal, donde surge a
denominao metablitos secundrios.
No mbito da interao planta/ambiente
(efeito atrativo/repulsivo a microrganis-
mos, insetos, vertebrados, plantas, etc.),
desempenham um importante papel,
garantindo a sobrevivncia das espcies
no ecossistema. Adicionalmente, meta-
blitos secundrios so utilizados em
escala industrial para a pro-
duo de inseticidas, coran-
tes, flavorizantes, aromatizan-
tes e medicamentos. Exem-
plos de metablitos secund-
rios de grande importncia
na indstria farmacutica so
mostrados na Figura 1. A des-
peito do alto valor econmi-
co de alguns destes biofrma-
cos, baixos nveis de produti-
vidade tm sido usualmente
encontrados nos sistemas de
produo agrcola convenci-
onais, decorrentes de uma
srie de motivos. Tal fato gera
a necessidade de desenvol-
ver sistemas alternativos de
produo e, neste contexto, o
cultivo de clulas e tecidos
vegetais tem sido considera-
do como um sistema de alto
potencial para a superao desse pro-
blema, embora algumas dificuldades con-
cernentes sua viabilidade econmica
ainda no tenham sido superadas.
Em funo disso, diversas estratgias
tm sido empregadas objetivando au-
mentar os valores de produtividade de
compostos bioativos em sistemas de
cultura de clulas e tecidos vegetais,
incluindo a manipulao epigentica, a
elucidao de vias biossintticas e a
aplicao de tcnicas de biologia mole-
cular, segundo uma abordagem de en-
genharia de vias metablicas. O presen-
te artigo enfoca algumas estratgias fre-
quentemente adotadas quando se busca
a otimizao da produo de metabli-
tos secundrios em sistemas de culturas
de clulas vegetais.
Manipulao epigentica
Provavelmente, a primeira estratgia
utilizada para otimizar a produo de
metablitos secundrios em cultivos ce-
lulares vegetais foi a manipulao epige-
ntica. Tal estratgia considera a identi-
ficao e seleo de linhagens celulares
de maior potencial produtivo, otimiza-
o do meio de cultura, manipulao de
fatores de ambiente (intensidade lumi-
nosa, fotoperodo, temperatura, CO ,
2
O , e.g.), a influncia do nvel de dife-
2
renciao celular, a adio de inibidores
ou precursores ao meio de cultura e a
elicitao.
Identificao, seleo clonal e otimi-
zao do meio de cultura: Ao longo das
ltimas dcadas, vrios relatos tm sido
feitos na literatura mostrando incremen-
tos na produo de metablitos secun-
drios atravs da identificao e seleo
de linhagens celulares com maior poten-
cial de biossntese/acmulo de metab-
litos secundrios. A seleo de clones
celulares pode ser feita atravs da adio
de compostos txicos (cido nicotnico,
e.g.) ou seletivos ao meio de cultura, os
quais atuam de modo a permitir apenas
a sobrevivncia de clulas com maior
capacidade de metabolizao do inter-
medirio, ou ainda atravs de alteraes
nos fatores ambientais. Todavia, com
relativa frequncia e de modo espont-
neo, observa-se a expresso de variao
gentica em linhagens selecionadas, de
modo que o potencial de biossntese
do(s) composto(s) de interesse uma
caracterstica instvel. As razes que
determinam tal fato no so claramente
conhecidas at o presente momento. A
hiptese baseada na variao gentica e
seleo celular (2) tem sido proposta
com o intuito de explicar a heterogenei-
dade/instabilidade observada em cultu-
ras de clulas vegetais quanto produ-
o de metablitos secundrios. Bus-
cando superar tal problema, a identifica-
o de clones de maior produtividade
tem sido feita atravs do cultivo de
protoplastos (single cell), ou de peque-
nos agregados celulares (cell nursery
culture) em programas de longa dura-
o. Os resultados indicam que para
algumas espcies esta abordagem possi-
(A)
(B)
Figura 2. Estruturas de fitoanticipi-
nas constitutivas encontradas em
clulas de (a) Sorghum bicolor e (b)
Cicer arietinum. As antocianinas
pelargonidina e cianidina tm ao
protetora contra radiao UV, en-
quanto as isoflavonas formononetina
(FGM) e biochanina A (BGM) so
inibidores de infeco fngica (Lo &
Nicholson, 1998 e Barz & Macken-
brock, 1994)
bilitou a obteno de linhagens com alto
potencial produtivo e estveis, como no
caso de berberina e antocianina em
cultivos celulares de Coptis, Thalictrum
e Euphorbia, respectivamente. A supe-
rao da instabilidade neste sistema
atribuda reduo da heterogeneidade
gentica nos cultivos ao longo dos su-
cessivos subcultivos. A otimizao da
composio do meio de cultura se mos-
tra como uma estratgia efetiva para a
obteno de incrementos de produtivi-
dade de metablitos secundrios in vi-
tro. A literatura disponvel ilustra este
aspecto enfocando a utilizao de cons-
tituintes de natureza orgnica ou inorg-
nica. Contudo, um meio de cultura que
oferea condies timas ao incremento
da biomassa celular , via de regra,
antagnico sntese do(s) composto(s)
de interesse. Em funo disto, o estabe-
lecimento de um meio de cultura ade-
quado simultaneamente ao crescimento
celular e produo bastante difcil.
Um sistema de produo envolvendo
dois estgios tem sido proposto (3)
como estratgia para superar a condio
de antagonismo entre o crescimento
celular/biossntese metablitos secun-
drios. Este sistema consiste no cultivo
celular em meio de
crescimento,inicialmente, de modo a fa-
vorecer o mximo acmulo de biomas-
sa, seguido pela transferncia para o
meio de produo, onde a biossntese
do(s) metablito(s) de interesse favo-
recida. Incrementos de produtividade
de 84% e 47% para o triterpenide
velutinol A e seu derivado glicosilado
MV8612 foram obtidos em cultivos celu-
lares de Mandevilla velutina (4) com a
utilizao deste sistema. Entretanto, como
regra geral, esta abordagem somente
funciona se um nvel basal do composto
de interesse estiver presente no cultivo
celular. Se as clulas no sintetizam o
composto, como no caso de morfina,
hiosciamina e vinblastina, tal estratgia,
de fato, no poder ser utilizada.
Adio de precursores : Em diversos
cultivos celulares a produo de meta-
blitos secundrios pode ser positiva-
mente afetada pela adio de intermedi-
rios da via biossinttica. Como exem-
plo disto, culturas de clulas de Catha-
ranthus roseus suplementadas com se-
cologanina mostraram elevao nos teo-
res de estrictosidina, o precursor comum
na biossntese de alcalides indlicos
monoterpenodicos (5). Resultados si-
milares foram encontrados com a adio
de L-Triptofano, com uma resposta tem-
po-dependente, enquanto a produo
de ajmalicina no foi afetada. interes-
sante mencionar trs aspectos bsicos
ao se considerar esta metodologia como
estratgia para a obteno de incremen-
(A) Brassilexina
(B) Orizalexina A
(C) Micosinol
Figura 3. Estrutura qumica de fito-
alexinas produzidas por clulas de
(a) Brassica, (b) Oryza e (c) Cole-
ostephus como resposta infeco
por microrganismos (Keen, 1990).
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 25
 tos de produtividade de metablitos de
interesse: a) a concentrao do substra-
to; b) o metablito de interesse (ou
no) um produto final da via biossint-
tica; c) a capacidade celular de acmulo
do composto. No primeiro caso, a adi-
o de precursor(es) pode induzir au-
mentos de produo do composto bio-
ativo, na medida em que permite supe-
rar a pequena disponibilidade de subs-
trato no meio de reao, especialmente
quando a arquitetura da via biossinttica
linear, como no caso da maioria das
vias de biossntese de metablitos se-
cundrios conhecidas. Em segundo lu-
gar, se o metablito alvo no um
produto final da via biossinttica, a taxa
de seu catabolismo pode tornar inefetiva
a adio de precursor(es). Neste contex-
to, tem sido demonstrado que a taxa de
sntese e de degradao de ajmalicina
so similares em culturas celulares de
Catharanthus roseus, de modo que no
foi observado acmulo deste alcalide
em cultivos suplementados com precur-
sor. A curta meia-vida de compostos na
planta, como observado para nicotina
(22 horas) e morfina (7,5 horas) refora
a importncia deste aspecto. A capacida-
de celular de acmulo de metablitos
secundrios no tem sido estudada em
profundidade at o presente momento.
Contudo, esperado haver um limite de
acmulo destes compostos, o que influ-
encia a produtividade dos cultivos. Como
exemplo, a produo de antocianinas
em cultivos celulares de Catharanthus
roseus dependente da percentagem de
clulas produtoras, quando todas as c-
lulas tm similar contedo daquele com-
posto.
Clulas diferenciadas: Como regra
geral, em plantas h uma grande corre-
lao entre citodiferenciao e metabo-
lismo secundrio, Um aumento de 4-6
vezes no teor de alcalides (voafilina,
aparicina, and 3S-hidroxi-voacangina),
concomitante a um incremento no nvel
de diferenciao celular foi observado
em culturas celulares de Tabernaemon-
tana pandacaqui (6). A ocorrncia de
estruturas compacto-globulares (agre-
gados celulares exibindo um alto grau
de diferenciao) foi observada em cul-
tivos de Tabernaemontana and Cincho-
na, os quais produziram quantidades
bastante superiores dos alcalides aspi-
dospermatanos valesamina e O-acetilva-
lesamina e de quinina, respectivamente,
em relao ao controle. Ao longo da
ltima dcada, o cultivo de meristemas e
razes recebeu grande ateno quanto
ao seu potencial como sistema produtor
26 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Figura 4. Estrutura de oligossaca-
rdeos elicitores isolados de pare-
de celular de (a) plantas e fungos
(b, c, e d). O grau de polimeriza-
o (n) varia de 11 a 14 (Hahn et
al., 1992)
de compostos bioativos. Os resultados
tm demonstrado valores de produtivi-
dade nos cultivos semelhantes aqueles
observados na planta ex vitro, ou mesmo
valores mais elevados, via manipulao
epigentica. Uma metodologia que tem
despertado grande interesse neste con-
texto a transformao gentica de
(A)
(B)
Figura 5. Aspectos estruturais de
molculas sinalizadoras em clulas
vegetais: [A] ergosterol e [B] cido
jasmnico (R = H), ou seu metil
ster (metil jasmonato, R = CH3)
plantas com Agrobacterium rhizogenes,
uma bactria de solo capaz de infectar
clulas vegetais, causando a prolifera-
o do crescimento radicular (hairy roots).
O cultivo de razes (ou plos radicula-
res) transformados pode ser realizado
em meio de cultura desprovido de regu-
ladores de crescimento, apresentando
estabilidade gentica e bioqumica, e
produo similar quela observada em
razes no-transformadas (3). No entan-
to, este sistema requer a utilizao de
biorreatores com caractersticas especfi-
cas (biorreatores com nebulizao, e.g.),
dificultando a produo de biomassa em
larga escala, com um consequente au-
mento nos custos de produo.
Elicitao : Elicitores biticos so
compostos que induzem respostas de
defesa em clulas vegetais contra infec-
es microbianas, em particular a pro-
duo de fitoalexinas, ou ainda induzem
aumentos no nvel de fitoanticipinas
constitutivas (Fig. 2) Fitoalexinas so
compostos com atividade antibitica, de
baixo peso molecular, formados e acu-
mulados em clulas vegetais em respos-
ta infeces por microrganismos (Fig.
3). Elicitores de natureza abitica (radi-
ao UV e ons de metais pesados)
tambm tm sido utilizados neste con-
texto. Este princpio tem sido aplicado
em estudos de biossntese de fitoalexi-
nas, como tambm para aumentar a
produtividade de metablitos secund-
rios em cultivos celulares vegetais. Em
geral, a elicitao de uma cultura celular
resulta na sntese de novo de compostos,
algumas vezes no encontrados na plan-
ta intacta (dihidropiranocumarina, e.g.),
ou no aumento da produo de metab-
litos secundrios nos cultivos in vitro
(antraquinonas, e.g.). Todavia, a eficin-
cia do tratamento com um dado elicitor,
no que concerne induo de produti-
vidade de um composto, depende de
vrios fatores, sendo a resposta de indu-
o restrita a certas vias biossintticas.
Em funo disto, a escolha correta do
elicitor fundamental, no havendo
regras indicadoras de uma combinao
adequada para o sistema clula/elicitor.
Alm disto, a concentrao do elicitor, a
densidade de inculo, o momento de
adio do elicitor, o perodo de contato
entre as clulas e o agente de elicitao
e o teor de nutrientes do meio de cultura
so fatores importantes a se considerar,
quando se busca a otimizao da produ-
o de biofrmacos atravs desta abor-
dagem. Na prtica, poli/oligossacarde-
os (oligossacarinas Fig. 4) de parede
celular de plantas ou microrganismos,
enzimas (celulases, hemicelulases e pec-
tinases, e.g.), peptdeos, glicopeptdeos
e lipdios tm sido usados como elicito-
res. Da mesma forma, compostos sinali-
zadores envolvidos em vias de transdu-
o, como o cido jasmnico e seu metil
ster, ou ainda o ergosterol (Fig. 5)
podem induzir respostas de estresse
celular, levando ao aumento da sntese/
acmulo de metablitos secundrios.
Provavelmente, cada espcie vegetal tem
uma classe de compostos que so sinte-
tizados aps o estmulo causado pelo
elicitor, os quais no so
encontrados na planta na
ausncia deste estmulo. As-
sim, muitos compostos de
interesse, constitutivamen-
te formados na planta, no
so passveis de induo
por elicitores em cultivos
celulares, como observado
para quinina, morfina e vin-
blastina. Por outro lado,
compostos outros como Velutinol A [(15R, 16R, 20S)-14,16:15,20:16,21-triepoxi-15-16-
cidos fenlicos (Catharan- seco-14,17-pregn-5-ene-3,15-diol] (Bento et al., 1995).
thus roseus), triterpenos
(Tabernaemontana divari-
cata), velutinol A e seu
derivado glicosilado (Man-
devilla velutina Fig. 6)
tiveram suas concentraes
aumentadas em culturas de
clulas. Metablitos cuja bi-
ossntese induzida so
usualmente produzidos em
altos nveis, podendo al-
canar valores de 3 a 10%,
com base em peso seco. A
utilizao desta estratgia
possibilita a induo de in-
cremento de produtivida-
de em momento especfico
do processo produtivo. No
entanto, o maior problema verificado at
o presente momento reside no nmero
limitado de compostos que tem sua
biossntese aumentada, os quais, em
alguns casos, no so o produto final de
interesse.
Engenharia Metablica
A introduo de genes em plantas ou
clulas vegetais atravs de tcnicas de
engenharia gentica (sistema Agrobac-
terium e o bombardeamento com part-
culas metlicas coloidais, e.g.) permite a de genes clonados, bem como um maior
alterao da expresso de genes envol-
vidos em vias biossintticas de interesse
e assim modificar a produo de meta-
blitos secundrios. Agrobacterium tu-
mefaciens tem sido amplamente utiliza-
da para a transformao de plantas,
apresentando como maior restrio o
nmero limitado de hospedeiros, princi-
palmente dicotiledneas, ainda que nem
todas as espcies deste grupo. O bom-
bardeamento com partculas , em prin-
cpio, aplicvel a qualquer espcie, mas
ainda que a transformao seja vivel, a
regenerao da planta a partir da clula
transformada tem se mostrado uma tare-
fa difcil. Alm disso, a reduzida disponi- so (anti-sense), ou ainda pelo uso de
bilidade de genes e promotores espec-
ficos ao objetivo em tela, o pouco co-
nhecimento sobre a estabilidade genti-
Figura 6. Mandevilla velutina
(Apocynaceae), planta nativa de
ecossistemas de restinga e
cerrado no Brasil, fonte de
velutinol A, um antagonista de
bradicinina (BK)
ca de clulas transformadas e tambm
sobre os mecanismos de regulao de
vias biossintticas de metablitos secun- xa de etapas (terpenides, e.g.), a pos-
drios so fatores limitantes nesta abor- sibilidade de manipulao no contexto
dagem. Entretanto, os progressos que
tm sido alcanados na tecnologia gni-
ca permitiro um aumento no nmero
entendimento das vias biossintticas em
seus aspectos estruturais e regulatrios, ossntese de triptofano em culturas de
de modo que perspectivas interessantes
de aplicao da engenharia metablica
surgem no que se refere otimizao da
produo de compostos de interesse.
Num contexto mais amplo, a engenharia
metablica objetiva o incremento do
fluxo de carbono em direo ao produto
final de interesse. Neste sentido, diver- biossntese de metablitos secundrios,
sas estratgias tm sido utilizadas bus-
cando superar o(s) evento(s) limitante(s), final e/ou de intermedirios da via bios-
bloqueando vias metablicas competiti-
vas ou do catabolismo pela utilizao de
genes com transcrio no sentido inver-
anticorpos. O aumento da atividade de
uma determinada enzima poder ser
conseguido com a clonagem de seu(s)
gene(s), o(s) qual(is)
poder(o) ser oriundo(s)
da planta em si, de outra
espcie vegetal, ou ainda
de outro organismo (bact-
ria, e.g.). Independente do
objetivo, a engenharia me-
tablica tem como pressu-
posto bsico o conhecimen-
to de todos os passos cons-
tituintes da via biossinttica
do metablito de interesse,
aspecto que limita a aplica-
o desta abordagem, visto
que a maioria destas vias
so conhecidas apenas a
nvel de seus intermediri-
os. Com o conhecimento
da via biossinttica a nvel
dos intermedirios envolvi-
dos, o passo seguinte a
identificao das enzimas
envolvidas e a determina-
o de quais destas apre-
sentam funo regulatria.
Alm disto, importante
considerar outros aspectos
intrnsecos ao processo de
sntese, como a arquitetura
da via biossinttica, a exis-
tncia de etapas regulatri-
as, o transporte do produto final e a
compartimentalizao. A arquitetura da
via biossinttica poder ser linear, ou
mesmo apresentar-se como uma rede
complexa. No primeiro caso, a situao
mais simples no que concerne sua
manipulao, contudo, em sendo o per-
fil da via biossinttica uma rede comple-
da engenharia metablica tarefa que
encontrar maior grau de dificuldade. A
existncia de mecanismos de regulao
a nvel enzimtico bastante comum
(retro-inibio), como observado na bi-
clulas de C. roseus. Nesta via, a super-
expresso da antranilato sintetase (AS)
no apresentou efeito positivo, porque a
mesma inibida pelo produto final da
via biossinttica (7). Adicionalmente,
importante considerar o efeito que a
compartimentalizao exerce sobre a
indicando que o transporte do produto
sinttica atuam como agentes de regula-
o desta. A biossntese de alcalides
indlicos terpenodicos requer no mni-
mo trs compartimentos : os plastdios
[produo de triptofano e a poro ter-
penodica do produto final], o citosol
[descarboxilao do triptofano] e o va-
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 27
 colo [ligao entre triptamina e secolo-
ganina] (8). A clonagem de genes de
plantas relacionados vias biossintticas
foi primeiramente realizada, em escala
comercial, com o intuito de alterar a
colorao de flores. Outra aplicao diz
respeito introduo do gene tdc (trip-
tamina descarboxilase) em plantas de
tabaco, resultando no aumento da pro-
duo de triptamina em nveis que atin-
gem 1% com base em peso seco. No
entanto, a instabilidade dos cultivos ce-
lulares transgnicos em relao produ-
o de metablitos secundrios tm sido
mais recentemente observada, ainda que
estes apresentem nveis superiores de
expresso do produto gnico (enzima).
Por outro lado, alguns estudos tm de-
monstrado que a despeito da expresso
de estabilidade de clones celulares
transgnicos, o fluxo total atravs da
via biossinttica de alcalides indli-
cos apresenta um comportamento
de instabilidade, como observado
em linhagens selvagens de C. roseus.
Outra importante e bvia concluso
refere-se ao fato de que a superao
de uma etapa limitante da via bios-
sinttica remete, automaticamente,
ao encontro da prxima etapa com
esta caracterstica.
Concluses
Muitos metablitos secund-
rios de grande importncia econmi-
ca so produzidos em quantidades
muito baixas, ou ainda no so pro-
duzidos (e.g. morfina, vinblastina,
vincristina) em cultivos de clulas
vegetais at o presente momento.
Em decorrncia disto, somente uns
poucos produtos gerados a partir
desta tecnologia alcanaram uma
escala comercial (e.g. chiconina e
misturas de polissacardeos). A produ-
o industrial de biofrmacos a partir da
biotecnologia vegetal sugere anlise
duas questes bsicas : a) a viabilidade
da tecnologia disponvel b) a competiti-
vidade econmica desta tecnologia em
relao aos mtodos de produo exis-
tentes. Em muitos casos, a tecnologia
disponvel se mostra vivel, ainda que
clculos do custo de produo indiquem
a necessidade de incrementos de produ-
tividade, para que tais processos sejam
adequados do ponto de vista econmi-
co. As razes que concorrem para este
quadro so o alto investimento necess-
rio, principalmente devido ao custo de
depreciao do biorreator e tambm a
baixa produtividade de metablitos se-
cundrios dos cultivos celulares, como
28 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
discutido anteriormente. Na tentativa de
superar essas dificuldades, estratgias
para otimizar a produo in vitro de
compostos bioativos tm sido continua-
mente desenvolvidas e revistas, com
resultados promissores, sendo que para
o atual momento, maior ateno vem
sendo dada utilizao combinada das
abordagens anteriormente discutidas. Os
avanos em estudos de engenharia me-
tablica permitiro incrementos de pro-
dutividade de metablitos secundrios
nos cultivos in vitro, contribuindo para a
reduo dos custos de produo, ou Technology, The Netherlands.
mesmo viabilizando a produo de no-
vos compostos. importante considerar
que nos casos em que a produo de um
biofrmaco no possvel por mtodos
agrcolas convencionais ou qumicos, ou
Figura 7. Exemplos de mecanismos
de regulao de vias biossintticas
considerados na engenharia de
metabolismo secundrio. A concen-
trao do produto final (PF) de-
pendente de alguns fatores: a) nvel
de inibio da atividade enzimtica
pelo produto (retro-inibio rides elicitors: structures and recogniti-
AE1); b) disponibilidade do subs-
trato (B) em via no linear; c) trans-
porte e compartimentalizao. A
engenharia metablica requer a
identificao de todos os constituin-
tes da via biossinttica (intermedi-
rios e enzimas - E1E7)
mesmo quando sua demanda no
totalmente suprida, a biotecnologia ve-
getal poder ser o sistema final de pro-
duo.
Referncias Bibliogrficas
1) Hegnauer, R.; Hegnauer M. (1992).
Chemotaxonomie der Pflanzen. Ge-
neralregister, Birkhuser Verlag, Ba-
sel.
2) Ohta, S.; Verpoorte, R. (1992).
Ann. Rep. Nat. Sci. Home Econ., 32:9-
23.
3) Schlatmann, JE. (1995). Ajmalici-
ne production by Catharanthus ro-
seus. Process operation and mode-
lling. Ph.D thesis, Delft University of
4) Maraschin, M. (1998). Variao
somaclonal, metabolismo de carbono
e caracterizao bioqumica e imuno-
lgica nos cultivos celulares de Man-
devilla velutina (MART) WOODSON
(Apocynaceae). Tese de Doutora-
do, Departamento de Bioqumica/
UFPR.
5) Contin, A.; Collu, G.; van der
Heijden, R.; Verpoorte, R. (1999).
Plant Physiol. Biochem., 37:139-
144.
6) Sierra, MI.; van der Heijden, R.;
Schripsema, J.; Verpoorte, R. (1991)
Planta Medica, 57:543-547.
7) Bongaerts, RJM. (1998). The cho-
rismate branching point in Catha-
ranthus roseus. Aspects of anthrani-
late synthase regulation in relation
to indole alkaloid biosynthesis. Ph.
D. thesis, Leiden University, The
Netherlands.
8) Verpoorte, R.; van der Heijden,
R.; Gulik, WM.; Hoopen, HJG.(1997).
The Alkaloids, 40:1-187.
9) Lo, SCC.; Nicholson, RL. (1998).
Plant Physiology, 116:979-989.
10) Barz, W.; Mackenbrock, U.
(1994). Plant Cell, Tissue and Organ
Culture, 38:199-211.
11) Keen, NT. (1990). Phytoalexins
and Their Elicitors. In : Chemistry and
Biochemistry of Microbial-Plant Interac-
tions, Hoagland, RE, (ed.). ACS Sympo-
sium Series, Stoneville.
12) Hahn, MG.; Cheong, JJ.; Alba, R.;
Enkerli, J.; Cte, F. (1992). Oligosaccha-
on. In : Mechanisms of Plant Defense
Response, Fritig, B; Legrand, M. (ed.).
Kluwer Academic Publ. Dordrecht.
13) Bento, E. S.; Calixto, J. B.; Hawkes,
G. E.; Pizzolatti, M. G.; SantAna, A. E. G.
& Yunes, R, A. The structure of velutinol
A is (15R, 16R, 20S)-14,16:15,20:16,21-
triepoxy-15-16-seco-14b,17a-pregn-5-
ene-3b,15-diol. A combined quantitative
Overhauser effect and molecular mode-
lling study. J. Chem. Soc., Perkin Trans.,
2:1359-1366, 1996.
ROUNDUP TRANSBORD

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 29

 CIMENTOS DE
Novas Tecnologias FOSFATOS DE CLCIO
Rul Garca Carrodeguas
Chefe do Departamento de Cermicas e
Compsitos, Centro de Biomateriais da Univer-
sidade de Havana, Cuba.
Sussette Padilla Mondjar
Pesquisadora do Departamento de Cermicas e
Compsitos, Centro de Biomateriais da Univer-
sidade de Havana, Cuba.
Lus Alberto dos Santos
Doutorando do Departamento de Engenharia
de Materiais da Faculdade de Engenharia
Mecnica, UNICAMP, Brasil.
Eliana Cristina da Silva Rigo
Doutoranda do Departamento de Engenharia
de Materiais da Universidade Federal de So
Carlos, Brasil.
Anselmo Ortega Boschi
Professor Adjunto do Departamento de Enge-
nharia de Materiais da Universidade Federal
de So Carlos, Brasil
daob@power.ufscar.br
Foto cedida pelos autores
esde seu surgimento no mer-
cado, no incio dos anos 80,
as cermicas de fosfato de
clcio, especialmente a hi-
droxiapatita, foram conside-
radas os materiais por excelncia para a
remodelao e reconstruo de defeitos vrios fosfatos de clcio, outros sais de
sseos. Essa preferncia se deve princi-
palmente por suas inigualveis proprie-
dades de biocompatibilidade, bioativida-
de e osteocondutividade, o que significa
que ao serem implantadas no stio sseo,
no induzem resposta imunolgica; so
capazes de ligar-se diretamente ao tecido
sseo e permitem o crescimento do osso
ao longo de sua superfcie (LeGeros,
1991).
Aps duas dcadas do incio de sua
aplicao clnica, surgiram registros de
algumas desvantagens das cermicas de
fosfato de clcio. Elas podem ser encon-
tradas nas formas de blocos ou granula-
dos; os blocos so fabricados com formas
pr determinadas e normalizadas, os gra-
30 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Uma nova alternativa para remodelao e reconstruo ssea
nulados apresentam o risco de migrarem
alm do stio de implantao podendo
alcanar o tecido mole e provocar reaes
granulomatosas e at mesmo sua expul-
so para fora do organismo (Driessens et
al., 1997).
Essas desvantagens estariam ausentes
se um material tivesse composio similar
a das cermicas de fosfato de clcio, e
portanto, exibissem propriedades de bio-
compatibilidade, bioatividade e osteo-
condutividade, e que por sua vez fosse
moldvel na forma e dimenses do defei-
to sseo que se pretendesse corrigir. Estas
possibilidades e outras de interesse so
apresentadas nos Cimentos de Fosfatos
de Clcio (CFC), recentemente apresenta-
do no mercado especializado.
O que so os CFC?
Os CFC so materiais constitudos por
um p e um lquido, os quais, ao serem
misturados formam uma pasta que endu-
rece espontaneamente temperatura am-
biente ou corporal como resultado da
precipitao de um ou vrios fosfatos de
clcio (Driessens et al., 1998).
O p pode estar composto por um ou
clcio e certos aditivos orgnicos. Por sua
vez, o lquido pode ser gua ou solues
aquosas de compostos de clcio ou fosfa-
to, que tambm podem conter certos
aditivos orgnicos (Chow, 1998).
Ao obter a mistura dos componentes
slido e lquido de um CFC, inicia-se a
dissoluo dos compostos presentes no
p e a precipitao de novos compostos.
Esse novo precipitado composto por cris-
tais microscpicos forma um emaranhado
que proporciona resistncia mecnica ao
sistema. Na figura 1 pode-se observar a
foto obtida por microscopia eletrnica de
varredura mostrando a disposio crista-
lina de um CFC baseado no sistema -
fosfato triclcico/hidrogeno fosfato de
sdio/gua, cujo produto de reao
hidroxiapatita (Carrodeguas et al., 1999).
Conceitualmente, os CFC foram apre-
sentados pela primeira vez como poss-
veis materiais de restaurao dentria em
1982 (LeGeros et al., 1982), mas apenas
em 1987 foi desenvolvido o primeiro CFC
baseado em fosfato tetraclcico (TTCP) e
fosfato diclcico dihidratado ou anidro
(DCPD, DCPA) (Brown and Chow, 1987).
Desde ento, existem mais de 130 artigos
cientficos publicados sobre CFC e siste-
mas relacionados, e um nmero ainda
maior de resumos apresentados em con-
gressos especializados (Chow, 1998).
As caractersticas que determinam os
CFC em biomateriais atrativos para a re-
construo ou remodelao ssea so:
facilidade de manipulao e moldagem,
sem ter que dar forma prvia ao implante,
adaptando-se totalmente forma da cavi-
dade ssea obtendo um ntimo contato
entre o osso e o cimento desde os primei-
ros estgios da implantao, alm disso os
CFC diferenciam-se dos outros cimentos
sseos no aquecendo durante o proces-
so de endurecimento, evitando assim a
necrose tecidual no stio de implantao
(Driessens et al., 1997).
Principais tipos de CFC
So sete os diferentes tipos de CFC, de
acordo com a quantidade de fosfatos de
clcio precipitados conforme o sistema
ternrio Ca(OH)2-H3PO4-H2O (Driessens
et al., 1997).
Do ponto de vista clnico existem
certos requisitos que um cimento sseo
deve cumprir, o que reduz ainda mais os
tipos de CFC de interesse clnico. Esses
requisitos so: curar e endurecer in vivo
em um tempo razovel, possuir uma
resistncia mecnica apropriada durante
o perodo requerido, pH neutro (6,5-8,5)
durante e depois da cura para evitar
efeitos citotxicos, fcil manipulao, au-
sncia de toxicidade, perfeita adeso ao
tecido sseo e ausncia de caractersticas
alergnicas e cancergenas (Lemaitre et
al., 1987; Driessens et al., 1997).
Os CFC desenvolvidos at o momento
e que por sua vez cumprem os requisitos
anteriores podem se classificar de acordo
com o composto formado durante a cura
em cimentos de hidroxiapatita e ci-
mentos de fosfato diclcico dihidrata-
do. A seguir, ser dada uma breve discus-
so dos resultados encontrados em litera-
tura para estes tipos de CFC.
CFC de hidroxiapatita
Esse tipo de cimento foi desenvolvido
por Brown e Chow na metade da dcada
de 80 (Brown and Chow, 1985). Misturas
de fosfato tetraclcico (TTCP) e hidroge-
no fosfato de clcio, dihidratado e anidro
(DCPD e DCPA, respectivamente), em
proporo molar 1:1, reagem ao adicio-
nar-se gua para formar hidroxiapatita
(HA), como um nico produto da reao.
Esse cimento endurece em torno de 30
min., seu pH varia de 7,5 a 8,5 e desenvol-
ve uma resistncia a compresso de 60MPa
em 24 horas (Chow et al., 1991).
Estudos posteriores tm melhorado
consideravelmente as propriedades des-
tes cimentos e facilitado o seu uso clnico.
A adio de Na2HPO4 parte lquida do
cimento provoca a diminuio do tempo
necessrio para o seu endurecimento para
5 min. contra os 30 min. necessrios no
cimento convencional (Chow et al., 1994).
A adio de aproximada-
mente 2% de hidroxipro-
pil metilcelulose, alginato
de sdio e outros agentes
gelificantes parte lquida
melhora a coeso da pasta
tornando-a mais resisten-
te desintegrao em meio
aquoso ou corpreo no
stio de implantao ime-
diatamente aps a mistu-
ra. Alguns destes aditivos
aumentam o tempo de
cura, o que pode ser com-
pensado mediante o uso
de uma soluo de fosfato
como parte do lquido
(Cherng et al., 1995; Ishi-
kawa et al., 1995).
Outros cimentos cujo
produto de cura seja hi-
droxiapatita (HA), so os
que tm como componente principal -
fosfato triclcico (-TCP). Entre eles des-
tacam-se o cimento desenvolvido por
Ginebra (Ginebra et al., 1997), constitu-
do por -TCP e -TCP (17%), HA (2%) e
uma dissoluo de Na2HPO4 a 2,5% ,
outro constitudo por -TCP, DCPA, CaCO3
(CC) e HA (Driessen et al., 1997),este
cimento endurece aos 17 min. e apresenta
uma resistncia a compresso de 35 Mpa.
Ambos os cimentos obtiveram bons resul-
tados nas avaliaes in vivo (Driessen et
al., 1997; Ginebra et al., 1995).
Um outro cimento de -TCP desen-
volvido o constitudo por -TCP, CC e
dihidrogeno fosfato de clcio monohidra-
tado (MCPM) (Morgan et al., 1997). Este
cimento aps 24 horas desenvolve uma
resistncia a compresso de 55 MPa.
Constantz e colaboradores (Constantz
et al., 1991) desenvolveram um cimento
de HA misturando quantidades apropria-
das de H3PO4 ou MCPM com TTCP. O
tempo de cura ficou na faixa de 6 a 11
minutos e a resistncia mecnica entre 15
e 92 MPa.
Mirtchi e colaboradores (Mirtchi et al.,
1990) prepararam um cimento de HA a
partir do sistema formado por -TCP,
DCPD e CC com gua como lquido de
mistura. A cura deste sistema foi muito
lenta, o que tentaram diminuir por meio
da adio de pequenas quantidades de
HA e a utilizao de uma dissoluo de
HA e DCPD a qual ainda adicionou-se
NaF e MCPM (Mirtchi et al., 1991).
Cimentos de fosfato
diclcico dihidratado
Dentro deste grupo encontram-se dois
tipos de cimentos. O primeiro formado
pelo sistema -TCP, MCPM e gua como
parte lquida (Mirtchi et al., 1989). Este
Figura 1: Microscopia eletrnica
de varredura (MEV) da superfcie
de fratura de um CFC do sistema
-fosfato triclcico/ hidrogeno
fosfato de sdio/gua, cujo
produto de reao hidroxiapatita
(aps 24 horas em fludo
plasmtico simulado a 37oC)
cimento tem uma cura relativamente rpi-
da, porm com a adio de sulfato de
clcio hemihidratado (SCH) e pirofosfato
de clcio pode-se aumentar o tempo de
cura para at 10 min, assim como a
resistncia mecnica do cimento, sendo
que, a resistncia a trao diametral de
3MPa (Mirtchi et al., 1989a).
Um segundo sistema constitudo por
-TCP e uma soluo de H3PO4 como
lquido, apresenta melhores proprieda-
des fsico-mecnicas que o sistema ante-
riormente citado (Bohner and Lemaitre,
1993). Este sistema tambm endurece
rapidamente. Com estudos posteriores
observou-se que, o tempo de cura e a
resistncia mecnica do cimento poderi-
am ser ajustadas adicionando-se peque-
nas quantidades de ons sulfato, citrato e
pirofosfato no lquido de mistura (Bohner
et al., 1996).
CFC comerciais
At o momento conhecido no mer-
cado trs marcas de CFC comerciais, todas
recentemente lanadas: Norian Skeletal
Repair System (Norian Corp., Cupertino,
CA, USA), Cementek (Teknimed S.A., Vic
en Bigorre, Frana) e Biocement D (Merck
Biomaterial, Darmstadt, Alemania). Em
estudos comparativos recentes de algu-
mas propriedades desses cimentos, ob-
serva-se que, o Biocement D tem propri-
edades superiores (ver Tabela 1), seguido
do Norian SRS e pelo Cementek, nessa
ordem (Driessens et al., 1998).
Comportamento in vivo
O comportamento bio-
lgico in vivo dos CFC tem
sido exaustivamente estuda-
do em diversos modelos
animais (Fujikawa et al., 1995;
Yoshimine et al., 1993; Hori-
oglu et al., 1995; Lemaitre et
al., 1992; Ohura et al., 1996;
Munting et al., 1993).
Genericamente, os CFC
comportam-se in vivo de
maneira semelhante as bio-
cermicas de -fosfato tricl-
cico, ou seja, so reabsorvi-
dos devido a atividade oste-
oclstica, formando ao mes-
mo tempo novo tecido s-
seo na interface osso-implan-
te. Desta forma os CFC no
atuam como substitutos permanentes do
osso, apenas temporrios, sendo lenta-
mente substitudos por tecido sseo de
nova formao. Este comportamento tpi-
co tem sido denominado de osteotrans-
dutividade. A velocidade em que esse
fenmeno ocorre depende fortemente do
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 31
 tipo de CFC, do stio de implantao e da
idade do indivduo receptor, entre outros
fatores (Driessens et al., 1998).
Aplicaes clnicas
A experincia clnica com o uso dos
CFC ainda relativamente escassa, devido
a sua recente apario. Na Tabela 2 esto
listados os diferentes usos clnicos dos CFC
(Driessens, 1998).
Tendncias futuras
O emprego dos CFC como matrizes
portadoras para liberao in situ de diver-
sos princpios ativos uma das perspecti-
vas para experimentao clnica nos prxi-
mos anos. Tem sido desenhado e estudado
in vitro e em modelos animais sistemas
baseados em CFC para a liberao in situ
de protena ssea morfogentica (Kamegai
et al., 1994), agentes anticancergenos (Ot-
suka et al., 1994; Otsuka et al., 1995),
antibiticos (Otsuka et al., 1990; Yu et al.,
1992; Tung, 1995; Bohner et al., 1997),
polipeptdios (Otsuka et al., 1994a) e anti-
inflamatrios (Otsuka et al., 1994b; Ot-
suka et al., 1994c).
O desenvolvimento de CFC com ele-
vada resistncia mecnica outro campo
de investigao no qual deve-se obter
resultados interessantes nos prximos
anos. A otimizao da microestrutura (Ishi-
kawa and Asaoka, 1995; Fernndez et al.,
1998), reforo com fibras (Santos et al.,
1999) e os CFC de dupla pega (Santos et
al., 1999a; Carrodguas et al., 1999) so
vias que esto sendo recentemente explo-
radas para atingir esse objetivo.
Comentrios finais
Nos ltimos tempos os CFC comea-
ram a competir no mercado de biomateri-
ais para remodelao ou reconstruo
ssea em decorrncia de certas vantagens
por eles apresentados com relao aos
biomateriais tradicionais. Alm da facili-
dade de manipulao, injetabilidade e
adaptao ao defeito sseo, alguns dos
CFC desenvolvem resistncias compres-
so similares ou at mesmo superiores ao
do osso esponjoso (~30MPa). Seu com-
portamento in vivo pode ser descrito com
um termo de recente criao: osteotrans-
dutividade. A osteotransduo implica
em biodegradao e substituio por novo
osso, de forma simultnea. A velocidade
da osteotransduo dos CFC fortemente
influenciada pelo local de implantao,
idade do indivduo receptor e o tipo de
CFC.
Espera-se para um futuro prximo o
aumento do uso clnico dos cimentos
comerciais j existentes e o surgimento de
novos CFC com melhores propriedades e
novas aplicaes.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem a FAPESP pe-
los Projetos 98/11691-2 e 98/00563-3, ao
Projeto TWAS JRP18/95 e ao Projeto
CYTED VIII.6 Obteno e Caracterizao
de Materiais Compostos com Carga de
Hidroxiapatita.
A referncia completa pode ser encontra-
da na Internet no endereo da revista:
www.biotecnologia.com.br

Tabela 1: Algumas propriedades de CFC comerciais (Driessens et al., 1998)

CFC Composio do p Composio aps a cura I(%) tI20 tF20 tI37 tF37 C
(min) (min) (min) (min) (MPa)
Biocement D -TCP, DCPA, CaCO3, HA HA, DCPA, CaCO3 94 9,5 19 2,75 7,5 48
Norian SRS -TCP, CaCO3 HA, CaCO3 83 22 37 6,5 8,5 33
Cementek TTCP, -TCP HA 81 36 64 9,5 17 8
-TCP: -fosfato triclcico; DCPA: hidrogeno fosfato de clcio anidro; HA: hidroxiapatita; TTCP: fosfato tetraclcico; I:
injetabilidade; tI: tempo de cura inicial; tF :tempo de cura final

Tabela 2: Aplicaes clnicas dos CFC

Especialidade clnica Aplicao E C

Traumatologia Fraturas +
Ortopedia Fixao de endoprteses metlicas +
Fixao de parafusos sseos +
Preenchimento de cavidades csticas e tumorais +
Cirurgia plstica Correo do plato +
Correo de defeitos crnio-faciais +
Reparao de fraturas do arco zigomtico +
Ortodontia Fechamento do canal apical +
Parodontologia Preenchimento de defeitos periodontais +
Implantologia oral Fixao de implantes orais +
Odontologia prottica Preenchimento de cavidades alveolares +
Remodelao do rebordo alveolar +
E: fase experimental em modelos animais; C: fase clnica em humanos
32 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
CARGILL

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 33

 BIOTECNOL
BIOTECNOL OGIA E RESISTNCIA A
TECNOLOGIA
PATGENOS
PESQUISA
Interao planta-patgeno e o uso da biotecnologia na obteno de plantas resistentes
estresse em plantas
uma situao fisiolgica
induzida quando ocor-
re intensa ou constante
variao do meio ambi-
ente, alterando o padro
fisiolgico e adaptativo normal da plan-
ta. Como exemplo de modificaes do
meio que induzem estresse em plantas,
podemos citar as variaes de
temperatura, umidade, teor aquo-
so, salino, pH do solo, radiaes,
poluentes como metais pesados e
leses mecnicas (Margis-Pinhei-
ro et al, 1999). Todas estas modi-
ficaes do meio produzem rea-
es fisiolgicas em suas clulas.
Estas reaes podem ser de ori-
gem citoplasmtica ou gentica
(Bowles, 1990).
Alm de fatores fsico-qumi-
cos que podem ocasionar estresse
nas clulas vegetais, existem os
fatores de origem biolgica. A
ao predatria de insetos, parasi-
tria de nematides e as infeces
por microrganismos patognicos
(vrus, fungos, bactrias), so apre-
sentadas aqui como exemplos de
fatores de origem biolgica, que
desencadeiam alteraes fisiol-
gicas nas clulas vegetais, caracte-
rizadas por estresse (Dangl, 1998).
As alteraes que constituem
a resposta de defesa das plantas,
por causa do estresse causado por
patgenos, tm sido intensamente
estudadas com o objetivo do me-
lhoramento vegetal (Kombrink, & Soms-
sich, 1995; Dempsey et al, 1998; Ga-
tehouse & Gatehouse, 1998).
O mecanismo de ao predatria de
insetos, no ainda bem conhecido a
nvel molecular/gentico. A este nvel,
sabe-se que h induo de genes na
planta semelhantes queles relaciona-
dos com o mecanismo de defesa
leses mecnicas. Porm, parecem exis-
34 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
tir loci gnicos em plantas, que podem
estar relacionados com a resistncia de
plantas insetos (Smith, 1989). Em nema-
tides j foram identificados genes de
resistncia (vide Tabela II) e outros genes
relacionados com defesa vegetal, que so
induzidos nesta interao. Esta situao
apresenta, por isso, analogia ao que ocorre
com os vrus, fungos e bactrias. Em al-
Leses localizadas em Chenopo-
dium quinoa, produzida pelo
vrus mosqueado da alface
Foto: Dra. Vera Lcia A. Marinho
guns casos, parece haver tambm uma
resposta de hipersensibilidade durante a
interao planta-nematide (Williamson &
Hussey, 1996). Porm, existem diferenas
Maria Cristina R. Cordeiro,
PhD, Pesquisadora Embrapa/CPAC
(cristina@cpac.embrapa.br)
Maria de Ftima Grossi de S,
PhD, Pesquisadora Embrapa/Cenargen
(fatimasa@cenargen.embrapa.br)
devido complexa relao destes organis-
mos com as plantas. Neste artigo, daremos
nfase s interaes com patgenos, pois
os mecanismos destas interaes j esto
bastante conhecidos.
A interao entre a planta e o patgeno
pode ser dividida em dois tipos bsicos : a
interao compatvel e a interao incom-
patvel (Tabela I). Na interao compatvel
o patgeno invade o tecido vege-
tal, se multiplica e provoca doena
na planta. Na interao incompat-
vel, o patgeno, ao penetrar no
tecido vegetal, encontra as defesas
da planta. Estas so rapidamente
ativadas, impedindo sua multipli-
cao e produzindo resistncia.
A interao planta/patgeno
pode ser estudada em suas distin-
tas fases. As principais so :
1 - Reconhecimento gentico en-
tre a planta e o patgeno;
2 - Processo de transduo de
sinal;
3 - Ativao de genes;
4 - Ativao do mecanismo de
resistncia.
A transduo de sinal e a ativa-
o de genes so includos na
resposta local da planta. A ativa-
o do mecanismo de resistncia
tem origem local e leva a planta
uma resposta sistmica (Esquema
I). A resposta local divide-se em
dois tipos de eventos: eventos pre-
coces (tambm chamado de fase
oxidativa) e eventos de velocidade rpida
intermediria. A resposta local tambm
chamada de resposta de defesa primria,
enquanto a resposta sistmica constitui
uma resposta de defesa secundria da
planta. Neste caso, a velocidade de ativa-
o mais tardia que a resposta local.
Quanto mais rpida for a ativao do
mecanismo da resposta sistmica, maior
ser o efeito de proteo da planta frente
a patgenos. Na interao in-
compatvel, a velocidade de
ativao da resposta local e
sistmica, maior do que na
interao compatvel. Dessa
maneira, a eficincia na pro-
duo da resposta de resistn-
cia no primeiro caso, supe-
rior ao segundo caso.
1 - Reconhecimento
gentico entre a planta
e o patgeno
A diferena bsica entre a
interao compatvel e incom-
patvel, est relacionada pre-
sena ou ausncia de um gene
de resistncia na planta e de
um gene de avirulncia no
patgeno (Tabela I). Na inte-
rao incompatvel, fundamental uma
interao gene a gene entre a planta e o
patgeno (Flor, 1947), para ocorrer ativa-
o rpida do mecanismo de defesa e
resistncia da planta. Este mecanismo
especfico, o que significa dizer que, uma
mesma planta pode reconhecer um deter-
minado patgeno A e no reconhecer o
patgeno B. Existe especificidade entre
diferentes gneros, espcies, subespcies,
cepas e raas de patgenos. Porm, tam-
bm pode ocorrer que, o mesmo produto
do gene de resistncia reconhea diferen-
tes protenas de aviru-
lncia (Grant et al,
1995). Os patgenos so
classificados em dois ti-
pos: patgenos virulen-
tos e avirulentos. Os pa-
tgenos virulentos no
possuem gene avr, cujo
produto gnico reco-
nhecido por uma prote-
na de resistncia da
planta. Desta forma, o
patgeno esquiva-se da
ativao rpida do me-
canismo de defesa, po-
dendo se multiplicar e
produzir doena. J os
patgenos avirulentos,
possuem gene avr, cujo
produto reconhecido
por uma protena de re-
sistncia da planta. Este
reconhecimento permi-
te a ativao rpida do
processo de defesa. A
especificidade e a com-
plexidade gentica deste mecanismo
grande, e j foi relacionada com quela do
complexo maior de histocompatibilidade
(MHC) nos animais (Dangl, 1992).
A ativao do mecanismo de defesa
semelhante em todos os sistemas vegetais.
Esquema I Principais passos da
resposta de defesa de plantas
patgenos (baseado em Mourgues
et al, 1998 e Dangl, 1998). PV
patgeno virulento e PA - patgeno
avirulento
Na interao incompatvel, a ativao do
mecanismo de defesa e resistncia propi-
cia a planta uma imunidade temporria a
outros patgenos, no relacionados aque-
le que desencadeou o processo. Esta resis-
Esquema II Desenho esquemtico
mostrando os principais mecanis-
mos da transduo de sinal em
plantas aps o estmulo da invaso
do patgeno (baseado em Somssich
& Hahlbrock, 1998)
tncia chamada de resis-
tncia sistmica adquirida
(SAR) (Chester, 1933; Ward
et al, 1991; Ryals et al, 1994;
Staskawicz et al, 1995; Ryals
et al, 1996). O estudo dos
mecanismos, que so indu-
zidos nesta situao, nos re-
porta ao mecanismo de de-
fesa vegetal como um siste-
ma imunolgico. Este meca-
nismo diferente do encon-
trado em animais, mas sua
existncia demonstra a rele-
vncia de um sistema de
proteo a agentes patog-
nicos para a sobrevivncia
dos seres vivos (Kuc, 1982).
O produto do gene de
avirulncia (protena Avr),
pode ser um indutor direto e
especfico, que vai interagir com o produto
do gene de resistncia (protena R). Este
ainda, pode ser modificado no metabolis-
mo bacteriano e/ou vegetal. O produto
desta modificao (indutor indireto) que
ir interagir com a protena de resistncia.
O mecanismo de induo e amplificao
da resposta de defesa em plantas, chama-
do de eliciao. As molculas que indu-
zem, ou amplificam, so chamadas de
eliciadoras, e podem ser de origem proti-
ca, lipdica ou polissacardica (Anderson,
1988). O estudo destas molculas utiliza-
do, atualmente, como uma
das ferramentas para au-
mentar a resistncia de
plantas (Mourgues et al,
1998).
Atualmente, cerca de
30 genes avr j foram ca-
racterizados. O produto do
gene avr est relaciona-
do, no s ao mecanismo
de ativao da resistncia,
como tambm a especifi-
cidade por uma cultivar.
Apesar dos genes caracte-
rizados, nada se sabe a
respeito de sua funo no
mecanismo de ao, in-
duzindo resposta de defe-
sa. Os genes caracteriza-
dos codificam protenas
hidroflicas de 20-100 kDa
de peso molecular (Lum-
merzheim, 1996).
Alm do produto do
gene avr, os patgenos
avirulentos, tambm sin-
tetizam produtos a partir de genes chama-
dos hrp, que esto relacionados com a
hipersensibilidade e patogenicidade. Exis-
tem genes altamente conservados entre
patgenos de animais e vegetais. As prote-
nas Hrp estudadas, esto relacionadas
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 35
 Tabela I - Possveis interaes entre planta e patgeno (Baseado em Staskavicz et al, 1995).
TIPO DE PLANTAS/
TIPO DE PATGENOS
Plantas COM gene de RESISTNCIA
Plantas SEM gene de RESISTNCIA
com quimiotaxia, transporte de molculas
da planta para a bactria, sntese e expor-
tao de fatores de virulncia, eliciao e
sistema de secreo tipo III de bactrias
fitopatognicas (Van Gijsegem et al, 1993,
1995; Alfano, & Collmer, 1996; Baker et al,
1997).
Um dos objetivos do estudo da intera-
o planta-patgeno, visa a compreenso
do mecanismo especfico de reconheci-
mento gentico, entre a planta e o patge-
no e suas consequncias. Tendo em vista
esta abordagem, vrios genes de resistn-
cia foram isolados e caracterizados, corres-
pondentes a genes avr em patgenos
(Godiard et al, 1994; Dangl, 1995; Kunkel
et al, 1993; Baker et al, 1997). Os principais
genes de resistncia clonados e caracteri-
zados, com seus respectivos genes avr,
esto resumidos na Tabela II. A maior parte
apresenta um domnio do tipo repeties
ricas em leucina (LRR) em sua estrutura,
podendo conter outros domnios comuns
tais como: o zper de leucina (LZ), o
domnio de reconhecimento protena-pro-
tena homlogo ao encontrado nas prote-
nas Toll de Drosophila e no receptor de
interleucina 1 (IL-1) (TIR), o transmembra-
na (DT), o stio de acoplamento membra-
na (N-miristilao), o stio de ligao
nucleotdeo (NBS) ou o domnio com
funo cataltica (CAT - quinase).
Como mostrado na Tabela II, os genes
de resistncia possuem domnios comuns
na estrutura da protena codificada. Dessa
maneira, possvel classificar estes genes
em classes. A primeira corresponde quela
dos genes cujas protenas codificadas, pos-
suem os domnios do tipo LRR e NBS com
ou sem LZ (L6, N, M, I2 RPP5, Mi, Prf, Rpm1,
Rps2, Rps 5, pib). Estas protenas parecem
ter funo citoplasmtica, pois no apre-
sentam domnio transmembrana. Porm,
foi observado que o gene de resistncia
Rpm1, de A. thaliana constitui uma prote-
na de membrana plasmtica, apesar de
no apresentar o domnio transmembrana
(Boyes et al, 1998). Os genes L6, N, M,
RPP5, apresentam tambm um domnio
36 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
PATGENOS VIRULENTOS
(ausncia do gene avr)
Ativao lenta do mecanismo de defesa
DOENA (Interao Compatvel)
Ativao lenta do mecanismo de defesa
DOENA
(Interao Compatvel)
relacionado com o reconhecimento prote-
na-protena, homlogo a protena Toll de
Drosophila e ao receptor da interleucina 1
(IL-1). Na segunda classe, incluem-se os
genes que codificam as protenas CF9, CF2
e o produto do gene HSppro1. Estas prote-
nas apresentam o domnio transmembra-
na, possibilitando sua localizao. O gene
Hm1, que codifica a protena HM1 de
milho, pertence a terceira classe. Dentre
todas, esta diferencia-se das demais pois
constituda de uma enzima chamada toxi-
na redutase. E finalmente, a ltima seria a
das protenas codificadas pelos genes Pto,
Xa21, Fen, as quais apresentam um stio
cataltico (quinase) na poro C-terminal.
Este stio, possivelmente est envolvido na
fosforilao de protenas durante a trans-
duo de sinal do meio extracelular para o
meio intracelular. O gene Xa21, um
representante de uma famlia gnica que
possui domnio LRR. Modificaes neste
domnio, produzem especificidade dife-
rentes patgenos (Song et al, 1997; Wang
et al, 1998). A protena codificada pelo
gene Fen, apesar de no ser uma protena
de resistncia a patgeno, propicia resis-
tncia a inseticida e extremamente ho-
mloga protena codificada pelo gene
Pto (Ying-Tsu et al, 1995).
As protenas de resistncia, que apre-
sentam capacidade de ligao membra-
na plasmtica, fortalecem a hiptese, ain-
da em vigor, de que os genes de resistncia
codificam para protenas receptoras. Estas
seriam responsveis pela especificidade
do mecanismo de reconhecimento entre a
planta e o patgeno, gerando a transduo
de sinal inicial e induzindo a resposta de
defesa e resistncia sistmica. Estas prote-
nas, caracterizadas at o momento, guar-
dam similaridade com protenas recepto-
ras do tipo quinase (RPK), encontradas em
plantas e animais. As protenas RPK em
animais, so reconhecidas como tendo
funo relacionada com a intercomunica-
o celular presentes nos eventos de dife-
renciao e ao de hormnios. Nestas
protenas receptoras, trs domnios princi-
PATGENOS AVIRULENTOS
(presena do gene avr)
Ativao RPIDA do mecanismo de defesa
SOBREVIVNCIA DA PLANTA
(Interao Incompatvel)
Ativao lenta do mecanismo de defesa
DOENA
(Interao Compatvel)
pais podem ser distinguidos: o domnio
extracelular (caracterizado LRR, LZ, entre
outros), relacionado com a funo de
reconhecimento ou interao protena-pro-
tena; o domnio transmembrana (de natu-
reza hidrofbica), relacionado com a liga-
o membrana plasmtica e finalmente,
o domnio intracelular, que caracterizado
por ter funo cataltica (quinsica). Em
plantas, protenas relacionadas com o sis-
tema de reconhecimento do plen em
flores (protenas receptoras tipo quinases -
RLK) (Walker, 1990, 1993, 1994), possuem
as mesmas caractersticas das protenas
RPK. Os genes de resistncia , Pto e Fen,
so os que possuem maior semelhana
funcional com estas protenas, pois tam-
bm apresentam os domnios de reconhe-
cimento, transmembrana e cataltico.
2 - Processo de transduo de sinal
A transduo de sinal ocorre nos pri-
meiros momentos da interao do patge-
no com a planta. Esta fase representa a fase
oxidativa da resposta local, caracterizada
por evento precoce.
As protenas RPK, em animais, sofrem
um processo de autofosforilao aps a
ligao da molcula eliciadora em seu
domnio extracelular. Uma dimerizao na
molcula originada ocorrendo assim o
incio da cascata de transduo de sinal
(Heldin, 1995). Em plantas, j foi demons-
trado que ocorre interao dos genes de
resistncia Pto e Prf, sendo a fosforilao
o processo bsico da transduo de sinal
que ocorre neste caso (Zhou et al, 1995;
Rathjen et al, 1999) (Esquema II).
A transduo de sinal caracteriza-se,
inicialmente, por um influxo de ons, alm
de um processo oxidativo. Este, envolve o
acmulo citoplasmtico de perxido de
hidrognio (H2O2) (Mehdy, 1994; Levine
et al, 1994; Shirasu et al, 1996), que tem
sido apontado como fator importante no
mecanismo de transduo de sinal. A trans-
duo de sinal, alm de aumentar a perme-
abilidade a ons tais como H+ e clcio,
aumenta tambm a concentrao de radi-
cais livres e intermedirios reativos do
oxignio, como superxido, um dos pri-
meiros compostos que se formam, e xido
ntrico (NO). A enzima xido ntrico sinta-
se ativada em plantas resistentes e a sua
atividade no foi observada em plantas
susceptveis (Dangl, 1998). A reao oxi-
dativa gerada na primeira fase da resposta
de defesa da planta, por meio da NADP
(nicotinamida adenina dinucleotdeo fos-
fato) oxidase, permite uma reao cruzada
na parede celular, antes de serem ativadas
defesas dependentes de transcrio (Lamb
& Dixon, 1997). A transduo de sinal
progride at a ativao de genes, sntese de
protenas novas e tambm, envolve o
processo de fosforilao e defosforilao
de protenas. Protenas, tais como fosfoli-
pases, so induzidas permitindo a forma-
o de cido linolnico a partir da quebra
de cidos graxos no saturados da mem-
brana. Este, por sua vez, precursor do
cido jasmnico e metil jasmonato. O
cido jasmnico um regulador de cresci-
mento vegetal, relacionado com a induo
de resposta de sistmica. O incio da sina-
lizao para a biossntese do cido jasm-
nico, realizado por meio da ligao de
um peptdeo de 18 aminocidos chamado
sistemina, a um receptor na membrana
plasmtica (Ryan & Pearce, 1998). Esta,
alm de estar envolvida na sntese de cido
jasmnico, tambm um dos sinalizadores
da resposta sistmica (Creelman & Mullet,
1997). Alm do cido jasmnico, dois
outros reguladores de crescimento vegetal
esto envolvidos na resposta de defesa : o
cido saliclico e o etileno. O estmulo para
a biossntese de ambos, ocorre tambm na
etapa da transduo de sinal.
Embora o mecanismo da transduo
de sinal em plantas ainda esteja pouco
conhecido, sabemos que j existem vrios
tipos de protenas quinases descritos. Po-
demos citar por exemplo: protena G,
protenas AMPc (adenosina monofosfato
cclico) ou GMPc (guanidina monofosfato
cclico) dependentes, protena quinase C,
++
protenas quinases Ca /calmodulina de-
pendentes, protenas do tipo MAP (prote-
nas de ativao mitognica) quinases,
entre outras (Stone & Walker, 1995). Estas
diferentes quinases, possivelmente esto
envolvidas no mecanismo de defesa de
plantas.
3 - Ativao de genes
A ativao de genes o processo que
ocorre aps a transduo de sinal. Dois
grupos de genes podem estar envolvidos
nesta fase da interao da planta com o
patgeno: os genes que so ativados pre-
cocemente e os ativados tardiamente. Por
exemplo, os genes que codificam para as
enzimas fenilalanina amnia liase (PAL),
chalcona sintase (CHS), oxigenase, centri-
na e protena quinase (Ap4.3A), so genes
precocemente ativados na resposta de
defesa (Lawton & Lamb, 1987; Fritzemeier
et al, 1987; Sanz et al, 1998; Cordeiro et al,
1998). Existe a hiptese de que, genes
ativados precocemente, possam estar rela-
cionados com a regulao e atividade dos
genes ativados de forma tardia. Se esta
hiptese verdadeira, o conhecimento
destes genes importante, podendo ser
uma via para aumentar o conhecimento do
mecanismo de SAR e a manipulao a
nvel gentico da resposta de defesa de
plantas. Em ltima anlise, a manipulao volvem, impreterivelmente, dois proces-
gentica dos genes reguladores da respos-
ta de defesa, permitiria maiores esclareci-
mentos sobre os mecanismos da resistn-
cia. Contudo, ainda no foram caracteriza-
dos genes com tal atividade.
As enzimas PAL e CHS, so relaciona-
das com a sntese de compostos secund-
rios. A induo dos compostos secundri-
Reao de hipersensibilidade em
folhas de Arabidopsis thaliana
induzida pela bactria Xanthomonas
campestris pv. campestris (Cepa
147)
os, por exemplo as fitoalexinas, rpida
conduzindo ao processo de defesa relaci-
onado com a inibio do patgeno, j que
as fitoalexinas tm propriedades antimi-
crobianas (Dixon, 1986). Estes compostos
tm sido alvos de vrios estudos sobre
mecanismo de defesa de plantas (Somssi-
ck & Hahlbrock, 1998).
Entre os genes que so ativados tardi-
amente, podemos citar os genes que codi-
ficam para produtos j bem conhecidos e
que esto relacionados com os mecanis-
mos de defesa vegetal. Estes produtos so:
lignina e calose (Ride et al, 1983; Kauss,
1987), que so depositadas na parede
celular fortalecendo-a e evitando a pene-
trao de outros patgenos; enzimas hi-
drolticas, tais como leucina aminopepti-
dases, quitinases e glucanases (Bowles,
1990; Paulot et al, 1993; Collinge et al,
1993). Estas neutralizam peptdeos pato-
gnicos ativos; sntese de protenas relaci-
onadas com infeco de patgenos (PR)
(Linthorst, 1991), tais como, as GRPs (pro-
tenas ricas em glicina), PRPs (protenas
ricas em prolina), HRGPs (glicoprotenas
ricas em hidroxiprolina), algumas destas
com funes ainda desconhecidas.
Entre outros genes ativados, destaca-
mos tambm aqueles que codificam para
os inibidores de proteinases e as tioninas
(Bowles, 1990).
4 - Ativao dos mecanismos
de resistncia.
Os mecanismos de resistncia relacio-
nados com a interao incompatvel en-
sos:
A) Resposta de
hipersensibilidade (HR):
A HR geralmente definida como uma
resposta rpida, induzida no vegetal onde
ocorre morte celular, localizada na rea de
infeco do patgeno avirulento. Desta
maneira, acredita-se que a planta impede
a multiplicao do patgeno nas clulas
infestadas, limitando e interrompendo o
processo da disseminao da infeco.
Morfologicamente, a resposta de hi-
persensibilidade reconhecida como uma
clorose localizada, que aparece 24h aps
a infeco, progredindo para uma leso
necrtica. O mecanismo da ativao da HR
em plantas, comparvel ao mecanismo
da morte celular programada nas clulas
animais (Wang et al, 1996).
Existem estudos, relacionando genes
envolvidos no mecanismo de morte celu-
lar programada e na resposta de hipersen-
sibilidade, por exemplo genes acd1, acd2
(Greenberg & Ausubel, 1993; Greenberg,
et al, 1994). O mecanismo de morte celular
programada ocorre em diferentes proces-
sos, durante o desenvolvimento, senes-
cncia ou durante a HR. Os mecanismos
regulatrios deste processo no so total-
mente conhecidos. A peroxidao lipdi-
ca, o acmulo de oxignio ativo e o influxo
citoplasmtico de clcio, parecem estar
presentes nas etapas iniciais deste proces-
so. A degradao do DNA tambm, uma
caracterstica marcante. Diferentes mode-
los, como mutantes que produzem leses
espontneas, similares resposta de hiper-
sensibilidade, vm sendo estudados na
tentativa de melhor compreender este pro-
cesso (Wang et al, 1996; Levine et al,
1996).
Alm dos mutantes acd, tambm fo-
ram caracterizados genes chamados de
lsd. Existem, pelo menos, quatro loci gni-
cos para este gene e seis tipos de mutantes
foram estudados. Produo de leses es-
pontneas do tipo HR, tambm observa-
da nestes mutantes (Dietrich et al, 1994).
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 37
 Tabela II Genes de resistncia, isolados de diferentes plantas, com especificidade a diferentes patgenos. As protenas de avirulncia
correspondentes e os domnios estruturais encontrados nas protenas codificadas so mostrados. LRR - Repeties ricas em leucina; TIR - domnio de
reconhecimento protena-protena homlogo ao encontrado nas protenas Toll de Drosophila e receptor de interleucina 1 (IL-1); LZ - zper de leucina;
NBS - Stio de ligao a nucleotdeo; CAT - Domnio cataltico; DT - domnio transmembrana e N-mir. - Stio de N-miristilao.

GENES DE PLANTA RESISTNCIA A DOMNIOS GENE avr REFERNCIAS

RESISTNCIA CORRESPONDENTE
Hm1 Milho Bactria (C.carbonum) Toxina Redutase Nenhum Johal & Briggs, 1992
N gene Tabaco Vrus (TMV) TIR/LRR/NBS Replicase (?) Whitham et al, 1994
L6 Linho Fungo (M.lini) TIR/LRR/NBS AL6 Lawrence et al, 1995
M Linho Fungo (M.lini) TIR/LRR/NBS AM Anderson et al, 1997
RPP5 A. thaliana Fungo TIR/LRR/NBS AvrRpp5 Parker et al, 1997
Mi Tomate Nematide/Inseto LRR/NBS Desconhecido Milligan et al, 1998; Rossi et al, 1998
I2 Tomate Fusarium oxysporum LRR/NBS Desconhecido Ori et al, 1997
Prf Tomate Bactria (P.syr.tomato) LRR/NBS/LZ AvrPto Salmeron et al, 1996
Rpm1 A. thaliana Bactria (P.syr. macul) LRR/NBS/LZ AvrB/AvrRpm1 Grant et al, 1995
Rps2 A. thaliana Bactria (P.syr.tomato) LRR/NBS/LZ AvrRpt2 Bent et al, 1994
Rps5 A. thaliana Bactria (P.syr.tomato) LRR/NBS AvrPph3/AvrPphB Simonech & Innes, 1995;
Speulman et al, 1998; Warren et al, 1999
Pib Arroz Fungo (Magnaporthe grisia) LRR/NBS Desconhecido Wang et al, 1999
Cf9 Tomate Fungo (C. fulvum) LRR/DT Avr9 Jones et al, 1994
Cf2 Tomate Fungo (C. fulvum) LRR/DT Avr2 Dixon et al, 1996
HS1pro1 Cana Nematide LRR/DT Desconhecido Cai et al, 1997
Pto Tomate Bactria (P.syr.tomato) LRR/Nmir/CAT AvrPto Martin et al, 1993
Xa21 Arroz Bactria (X.camp.oryzae) LRR/DT/CAT Desconhecido Song et al, 1995
Fen Tomate Inseticida LRR/Nmir/CAT Nenhum Martin et al, 1994

B) Resistncia sistmica adquirida: formados na via de sntese dos fenil propa-

O fenmeno observado na planta aps
a transduo de sinal e a ativao local de
genes relacionados com defesa vegetal,
denominado de resistncia sistmica ad-
quirida (SAR) (Esquema I). Esta resposta
consiste na produo de um estado de
imunizao temporria da planta uma
subseqente infeco patognica. Esta re-
sistncia est relacionada com uma ativa-
o coordenada de genes de defesa (genes
SAR), em stios distantes do local da infec-
o. Em tabaco, estes genes constituem
uma famlia de vrios genes, que codifi-
cam para as protenas 1-3 glucanases, as
quitinases em suas formas cidas e bsicas,
e as peroxidases e outras de funo desco-
nhecida como PR1 e SAR 8.2 (Ward et al,
1991; Yalpani et al, 1991).
Um dos compostos relacionados com
a induo da resposta sistmica, no pro-
cesso de defesa das plantas, o cido
saliclico (SA) (Vernooij et al, 1994; Ryals et
al, 1994; Horvath & Nam-Hai Chua, 1994;
Mur et al, 1996). O perxido de hidrognio
possui atividade como molcula oxidativa,
nas etapas iniciais da resposta da planta.
H um acmulo relacionado com a sntese
Sintomas e sinais de ferrugem, doen-
a causada pelo fungo Uromyces
appendiculatus em folhas de feijo.
O halo necrtico nas leses (em
torno das pstulas de ferrugem),
evidenciam uma reao de hipersen-
sibilidade no ponto da infeco .
Foto: Dr. Carlos Castro
inicial de SA. Este mecanismo ainda no
est bem esclarecido (Neuenschwander,
1995; Summermatter et al, 1995; Len,
1995 ). O SA sintetizado a partir da
converso do cido benzico pela enzima
cido benzico 2 hidroxilase. O cido
benzico formado a partir do cido trans-
cinmico. Este dos primeiros compostos
nides.
Foi tambm observado que o SA
capaz de inibir a enzima catalase. Esta
enzima aquela responsvel pela conver-
so da H2O2 (perxido de hidrognio) em
H2O + O2 (Vernooij et al, 1994). A inibio
da catalase favorece o aumento da taxa de
perxido de hidrognio citoplasmtico. O
perxido de hidrognio formado nas
etapas iniciais da resposta de defesa, co-
nhecida como fase oxidativa (evento pre-
coce resposta local, Esquema I). Por isso,
acredita-se que esta etapa seja crucial para
a induo do SA e a resposta de defesa
sistmica da planta.
O SA no o nico fator relacionado
com a induo de SAR. O etileno e o cido
jasmnico tambm so dois reguladores
de crescimento vegetal relacionados com
funes de desenvolvimento, crescimen-
to, senescncia da planta e induo de
resistncia sistmica. J foi demonstrado
que o etileno capaz de induzir a sntese
de protenas tais como: as quitinases, as
1-3 glucanases e a chalcona sintase (Ecker,
1995). O cido jasmnico induz a expres-
so de tioninas (Epple et al, 1995) e inibi-
dores de proteinases (Farmer et al, 1992).

38 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Etileno e cido jasmnico tm ao siner-
gstica na expresso de genes PR por
eliciao (Xu et al, 1994). Ambos esto
implicados na ativao de defensinas
(Penninckx et al, 1996) e enzimas da
sntese de fitoalexinas (Ecker & Davis,
1987; Gundlack et al, 1992). Recentemen-
te, Pieterse et al (1998) demonstraram
que o etileno e o cido jasmnico, esto
envolvidos em uma via independente de
induo de resistncia sistmica, diferen-
te da via de induo de SAR por SA. Assim
estes reguladores de crescimento, poten-
ciam a atividade do cido saliclico na
induo de SAR.
Perspectivas para a obteno
de plantas resistentes
patgenos e pragas
O objetivo principal da biotecnolo-
gia, para o desenvolvimento de plantas
resistentes a patgenos e pragas, dispo-
nibilizar, comercialmente, culturas de im-
portncia econmica que, por apresenta-
rem graves problemas fitossanitrios, com-
prometem sua alta produo ou a sanida-
de do meio ambiente (utilizao de agro-
txicos). Este objetivo possvel atravs
da ao de duas estratgias combinadas:
o isolamento de novos genes relaciona-
dos com os mais variados mecanismos de
defesa em plantas e a transformao
gentica.
O isolamento de novos genes, envol-
vidos na resistncia a patgenos e pragas,
um desafio que abre novas perspectivas
na obteno de plantas resistentes. Mui-
tos grupos de pesquisa, atravs de dife-
rentes estratgias utilizadas, vm atuando
com este objetivo.
Tcnicas de marcadores moleculares
tais como, RFLP, microsatlites, RAPD e
AFLP, so capazes de identificar loci de
resistncia. Estes estudos permitiram a
identificao de genes de resistncia em
diferentes culturas. Para o melhorista,
de grande importncia o mapeamento
gentico de caractersticas de herana
quantitativas (QTLs), associados a obten-
o da resistncia horizontal, uma vez
que a resistncia a patgenos poligni-
ca. Estes estudos tambm possibilitam a
identificao de novos genes.
A tcnica de reao de polimerase em
cadeia (PCR) tem sido enormemente uti-
lizada na identificao e isolamento de
novos genes de resistncia, onde frag-
mentos de DNA podem ser amplificados
utilizando-se oligos degenerados, corres-
pondentes as regies de domnios co-
muns tais como, LRR e NBS, presentes nas
protenas de resistncia conhecidas. Esta
estratgia j se mostrou eficiente na de-
teco de genes potencialmente envolvi-
dos na resistncia de plantas (Kanazin et
al, 1996; Shen et al, 1998). Outro dom-
nio protico, que tem sido alvo potenci-
al para este tipo de seleo gnica, e parasitas como fitonematides, os genes
aquele correspondente ao encontrado
na protena Toll de Drosophila e no
receptor de interleucina 1 (IL-1). Este
domnio est presente nos genes de
resistncia N, L6, M e RPP5.
Alm destas tcnicas, ainda so uti- digestivas (proteinases e amilases) (Shade
lizadas as de hibridizao diferencial,
hibridizao subtrativa, differential dis- 1998), as substncias txicas como lectinas
play, clonagem de genes via PCR (RT-
PCR e RACE-PCR), clonagem baseada
em perda de funo por insero (trans- 1997; Nayak et al, 1997; Dempesey et al,
poson tagging) e o chromosome
walking, entre outras.
Entre os genes potencialmente inte-
ressantes para a obteno de resistncia
em plantas, podemos citar aqueles que
codificam para as protenas de resistn-
cia; as correspondentes a genes induzi-
dos durante a reao de hipersensibili-
dade ou durante a resposta de defesa da
planta em geral; para protenas anti-
bacterianas, como por exemplo, a cicro-
pina e seus anlogos sintticos, como
Shiva-1 e SB37; as atacinas; as lisozimas;
as lactoferrinas; os fatores de virulncia
como toxinas; as enzimas pcticas; os
exopolissacardeos, os inibidores de
enzimas digestivas (proteinases e amila-
ses); hormnios; anticorpos, anti-prote-
nas txicas e as opsinas (Mourgues et al,
1998).
No caso especfico da interao plan-
ta-nematide, tambm pode ser utiliza-
da a estratgia de produo de anticor-
pos em plantas contra protenas impor-
tantes, relacionadas com a penetrao
do nematide. Estas protenas podem
ser, proteinases presentes na secreo
produzida pela glndula esofageal ou
anticorpos contra a cutcula (constituda
por colgeno) ou o sistema sensor pre-
sente em uma regio da cabea do
animal (Fenoll et al, 1997).
A transformao de plantas, com
genes de defesa, tm sido alvo de muitos
estudos nos ltimos anos. Diferentes
genes, que fazem parte do mecanismo
de defesa, foram clonados e introduzi-
dos em plantas. Estratgias tais como a
superexpresso ou supresso de um
gene, permitiram a obteno com suces-
so de plantas transgnicas resistentes
diferentes patgenos. Como exemplo
de plantas transgnicas resistentes, po-
demos citar aquelas modificadas com
genes que codificam para as protenas:
CF9 (protena de resistncia ao fungo
Cladosporium fulvum em tomate), qui-
tinases e glucanases, enzimas hidrolti-
cas, e as enzimas que participam do
metabolismo secundrio (biossntese de
fenil propanides) (Dixon et al, 1996;
Hammond-Kosack et al, 1998; Dempsey
et al, 1998; Gatehouse & Gatehouse, 1998).
No que diz respeito a resistncia a insetos
de grande potencial inseticida e/ou nema-
ticida, esto envolvidos com a manuten-
o e o desenvolvimento destas pragas.
Assim, as protenas alvo que vm sendo
estudadas, so os inibidores de enzimas
et al, 1994; Urwin et al, 1997; Urwin et al,
(glicoprotenas) ou protenas txicas de
Bacillus thuringiensis (Singsit Chong et al,
1998), entre outras.
As tcnicas utilizadas para desenvol-
ver plantas transgnicas resistentes mais
eficiente se feita por meio de um promo-
tor stio especfico (que somente se ex-
presse no local da resposta). Assim sen-
do, tem-se como estratgia selecionar
promotores ativos somente no local de
infeco. Genes que codificam para pro-
tenas de defesa, controlados por promo-
tores stio especfico, amplificam a possi-
bilidade de obteno de plantas resisten-
tes. No caso especfico da interao plan-
ta-nematide, esta questo ainda mais
importante. Assim, neste estudo, muitos
grupos tm investido no conhecimento
de genes induzidos e promotores ativos
no stio de alimentao do nematide
(Favery et al, 1998).
A obteno de plantas transgnicas
resistentes pragas e patgenos, ainda
um desafio para a comunidade cientfica
em todo o mundo. Desde a liberao
comercial da primeira cultura transgni-
ca, em 1996 (algodo transgnico resis-
tente ao Bacillus thuringiensis (Bt)), ques-
tionou-se o sucesso devido ao apareci-
mento da quebra de resistncia. Entre-
tanto, atravs do uso de estratgias
cuidadosas de cultivo, tais como, o culti-
vo combinado de culturas resistentes e
no resistentes no campo, pode-se pro-
longar a durabilidade da resistncia des-
sas plantas engenheiradas (Dempsey et
al, 1998).
O sucesso no isolamento de novos
genes e na transformao gentica de
culturas importantes, podem contribuir
enormemente para a obteno de culti-
vares de interesse econmico, com ca-
ractersticas genticas melhoradas, em
cerca da metade do tempo que com as
tcnicas tradicionais. Cultivares classica-
mente melhoradas, podero fornecer ain-
da maior produo agrcola, uma vez
que seja minimizada sua perda, em fun-
o das principais pragas que as acome-
tem.
A referncia completa pode ser encon-
trada na Internet no endereo da revis-
ta: www.biotecnologia.com.br
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 39
 FUNDAO GIACOMETTI

40 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

EMBRAPA

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 41

 TUBERCULOSE
SADE

Uso da biotecnologia para o desenvolvimento de uma vacina de DNA que previne e cura a doena

a sua marcha desafiado- zada, sua eficcia permanece controver-

Clio Lopes Silva
Professor Titular de Imunologia
Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto
Universidade de So Paulo
Clsilva@fmrp.usp.br
ra a tuberculose atingiu,
nos tempos atuais, 10 mi-
lhes de casos novos e 3
milhes de mortes por
ano, sendo 18,5% de to-
das as mortes em adultos entre 15/59
anos - a fase mais produtiva da popula-
o mundial. Cerca de metade dos do-
entes nunca tiveram tratamento. Segun-
do a Organizao Mundial da Sade
(OMS), 32% da populao mundial est
infectada com o bacilo de Koch (Myco-
bacterium tuberculosis) e, portanto, com
maior risco de adoecer por reativao e,
tambm, por infeco exgena. Entre cada vez mais comum. Por todos os
1850 e 1950 um bilho de pessoas
morreram de tuberculose. Na corrente
dcada, 1990-1999, 300 milhes de no-
vas pessoas esto sendo infectadas, 90
milhes de novos casos da doena esto
aparecendo e 30 milhes morrendo.
Mais pessoas morreram de tuberculose
em 1996 do que em qualquer ano da
histria.
Devido gravidade da situao e a
facilidade da proliferao, j que o baci-
lo contamina pelo ar, a OMS decretou,
em abril de 1993, Emergncia Global
contra a Tuberculose, e desde ento
vem desenvolvendo polticas para con-
ter o crescimento de casos. De acordo
com o relatrio publicado, que tambm
criticou a falta de estratgias para o
controle da doena, mais da metade dos
novos casos registrados em 1997 ocor-
reu em pases do sul da sia, frica e
Amrica Latina.
Apesar de haver drogas eficientes
para o combate tuberculose, a vacina-
o representa ainda a melhor alternati-
va para a proteo dos indivduos contra
essa doena. A vacina BCG (Bacilo Cal-
mette-Gurin), uma vacina viva baseada
em Mycobacterium bovis atenuada foi
introduzida para uso humano em 1921.
Embora venha sendo amplamente utili-
sa. Tem sido demonstrado, por meio de
estudos clnicos, que o nvel de proteo
alcanado em diferentes populaes va-
ria de 0 a 75%; alm disso, a utilizao de
uma importante ferramenta de diagnsti-
co, o teste de hipersensibilidade cutnea,
dificultado em indivduos que foram
vacinados com BCG. No que concerne
segurana do BCG existe uma preocupa-
o crescente do uso de organismos
vivos em indivduos imunocomprometi-
dos, fato especialmente agravante se con-
siderarmos que no caso da tuberculose a
co-infeco pelo HIV tm se tornado
motivos acima expostos, a procura por
uma alternativa de imunizao mais se-
gura e eficaz tm nos levado a investir no
desenvolvimento de nova vacina contra
tuberculose
Felizmente, na ltima dcada, os avan-
os na tecnologia de desenvolvimento de
vacinas permitiu a introduo de novas
estratgias para a obteno e produo
de antgenos, assim como foram otimiza-
das novas maneiras de se administrar e
apresentar esses antgenos para as clu-
las do sistema imunolgico. Estas estrat-
gias abriram caminho para inovaes,
particularmente no contexto do desen-
volvimento de vacinas mais seguras, efi-
cazes e polivalentes. Entre estas esto as
vacinas gnicas ou de DNA, consideradas
de terceira gerao (Silva 1997, Silva
1998, Silva e Lima 1998).
A vacina de DNA, que est revoluci-
onando o campo, baseada num pedao
do cdigo gentico do agente causador
da doena. Aplicado por meio de injeo
intramuscular, esse DNA cria condies
para a produo da protena antignica
pelas prprias clulas do indivduo vaci-
nado. Essa vacina hoje a maior esperan-
a para o combate a doenas infecciosas
para as quais ainda no se tem preveno
segura, como herpes, Aids, malria, he-

42 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

patite, esquistossomose, Vantagens da vacina gnica infeco, os traba-
dengue e a tuberculose. lhos foram direcio-
Os genes que so Previne o estabelecimento da infeco e da doena nados visando o
responsveis pelo cdi- uso dessa mesma
Elimina a infeco causada pelo bacilo da tuberculose
go gentico para sntese vacina no combate
das protenas antigni- Cura casos crnicos e doena disseminada direto infeco j
cas hsp65, hsp70, Resolve casos de tuberculose causada por bactrias altamente estabelecida, como
MPT83, ESAT6, ML36, resistentes aos medicamentos usados no combate doena se fosse um agente
MT38 e ML10, do bacilo Impede a reativao da doena quando os animais so teraputico ou uma
da tuberculose foram submetidos a uma imunodepresso pelo tratamento com drogas droga antimicobac-
clonados e ligados a imunossupressoras teriana. Este novo
outros fragmentos de Permite que o perodo de tratamento efetivo contra a tuberculose enfoque surgiu das
DNA denominados plas- seja encurtado de 8 para 2 meses pela administrao concomitante dificuldades acima
mdeos (Lowrie et al, apresentadas e do
de medicamentos e aplicao da vacina
1994). Os plasmdeos fato de que entre
usados em vacinas gni- um tero e metade
cas possuem outras sequncias de DNA de um trabalho extremamente delicado e da populao mundial j estar infectada
que so necessrias para: (I) seleo e que leva de seis a oito meses para o teste com o bacilo da tuberculose. Em torno de
replicao em bactrias; (II) promotores de cada antgeno. 5 a 10 % desses indivduos desenvolvem
especiais para processos de transcrio e Do ponto de vista cientfico, a revela- a doena. Nessas condies, o uso de
traduo; (III) genes que conferem resis- o dos resultados no encontro de 1994 uma vacina no como preventiva da
tncia a antibiticos; e (IV) sequncias representou um enorme xito. O prxi- infeco mas que tenha atividade tera-
especficas que permitem a expresso mo passo agora seria experimentar a putica contra indivduos infectados se-
gnica em clulas de mamferos ou ou- vacina em outros modelos animais, como ria a soluo.
tras bactrias. Os plasmdeos, contendo cobaias, coelhos e macacos. Depois des- Os resultados mostraram que a admi-
separadamente cada um dos genes clo- ses experimentos a vacina poderia ser nistrao da vacina gnica em animais
nados, foram introduzidos em uma bac- testada em humanos em trs fases distin- previamente infectados com M. tubercu-
tria hospedeira denominada Escheri- tas. Na fase 1 (utilizando mais ou menos losis virulenta previne o desenvolvimen-
chia coli, por um processo denominado 50 indivduos) seria verificada a toxicida- to da doena e elimina a infeco (figura
de transformao bacteriana. A nova bac- de; na fase dois (em torno de 300) seriam 2) (Lowrie et al, 1999). Alm disso, quan-
tria passou a produzir os plasmdeos em observados os efeitos imunolgicos; e na do a vacina administrada em estados
larga escala e aps um processo de fase 3 (com cerca de pelo menos 150.000 mais avanados da doena, ou mesmo
purificao a vacina de DNA estava pron- pessoas) seria verificada a eficincia da quando ela est disseminada por todo o
ta para ser usada (Silva 1997). vacina numa determinada populao sob organismo do animal, ela tambm tem a
Os primeiros resultados positivos da risco de tuberculose, e acompanhada por propriedade de cur-los. A infeco por
vacina gnica brasileira contra tuberculo- pelo menos 12 anos. Ao todo esse pro- M. tuberculosis faz com que o sistema
se foram apresentados em 1994, em Ge- cesso poderia levar at 20 anos e os imunolgico dos animais passem a no
nebra, numa reunio da OMS especfica custos para a realizao de todos os testes responder contra o agente agressor e
sobre tuberculose (Lowrie et al., 1994), e, seriam muito elevados. permite o crescimento acelerado dos
desde ento, os ex- bacilos e o estabele-
perimentos foram cimento da doena.
ampliados. De acor- Nessas condies a
do com os dados da administrao da va-
poca, camundon- cina de DNA permi-
gos foram vacinados te uma mudana ra-
durante 3 meses com dical da resposta
quatro doses de 50 imunolgica criando
microgramas de condies de com-
DNA por via intra- bater os bacilos e
muscular. Aps duas curar a doena, mes-
semanas da ltima mo sem a adminis-
imunizao, foram trao de quimiote-
infectados com o rpicos antimicobac-
agente etiolgico da terianos.
doena, o Mycobac- Um dos proble-
terium tuberculosis. mas mais srios rela-
O grupo que no cionados com o con-
estava vacinado re- trole da tuberculose
gistrou a presena de o aparecimento de
cerca de 1.200.000 bacilos que apresen-
bactrias por grama de tecido, enquanto Apesar dos bons resultados obtidos, tam resistncia a vrios dos medicamen-
o vacinado oscilou de zero a 100 ou 1.000 as dificuldades acima apresentadas fize- tos utilizados no tratamento como a iso-
bactrias um nmero considerado ex- ram com que o grupo mudasse o seu alvo niazida, pirazinamida, estreptomicina e
celente. A vacina que deu melhor resul- para o combate a tuberculose. Em vez de rifampicina entre outros. J foram isola-
tado foi o DNA hsp65 (figura 1). Trata-se usar a vacina de DNA como preventiva da dos bacilos que so resistentes no s

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 43

 contra um desses medicamentos como comuns de imunossupresso associados mentais que foram vacinados com a
tambm contra combinaes de dois, com a tuberculose esto os indivduos vacina de DNA, no foram observadas
trs e mesmo contra todos ao mesmo com AIDS, estressados, que tomam dro- reativaes e desenvolvimento da do-
tempo. Esses pacientes, denominados gas imunossupressoras, alcolatras e des- ena, principalmente quando foram ad-
multi-droga resistentes, contam com pou- nutridos entre outros. ministradas 3 doses da vacina. A elimi-
cas alternativas de tratamento e s vezes O problema do estado de latncia ou nao das bactrias dormentes pela
com nenhuma. O desenvolvimento dos dormncia das micobactrias que podem vacina de DNA pode trazer benefcios
trabalhos mos- significativos para
trou que ani- o controle da tu-
mais infecta- berculose e mes-
dos com baci- mo at a sua erra-
los resistentes dicao.
a essas drogas O tratamento
tambm so da tuberculose
curados pela feito com drogas
administrao antimicobacteria-
da vacina g- nas de longa du-
nica (Lowrie et rao - demora
al, 1999). pelo menos 6
Outro pro- meses. O uso con-
blema associa- tnuo dessas dro-
do ao alto ndi- gas, que normal-
ce de indivdu- mente so txicas
os infectados para os pacientes,
se correlaciona leva a uma alta
com o alto grau taxa de abando-
de adaptao no de tratamento
dos bacilos ao e tem reflexos im-
homem. A in- portantes no con-
feco normal- trole da doena e
mente se estabelece aps inalao dos sofrer uma reativao e manifestar a aparecimento de bacilos resistentes. O
bacilos e entrada dos mesmos para doena em estados de imunossupresso uso concomitante da vacina de DNA
dentro das clulas de defesa do organis- tambm foi analisado pelo tratamento juntamente com drogas antibacterianas
mo. Dentro dos macrfagos, que so com vacina de DNA. Foi desenvolvido permitiu uma reduo significativa do
clulas com alto potencial microbicida, um modelo experimental em camundon- perodo de tratamento dos animais in-
os bacilos tem a habilidade de desativar gos que mimetiza as condies observa- fectados com M. tuberculosis. Isto tam-
os sistemas de defesa dessas clulas e das no desenvolvimento da doena hu- bm poder trazer ganhos significati-
conseguem sobreviver e se multiplicar mana em imunodeprimidos (figura 3) vos, tanto no bem estar social dos
no seu interior. O sistema de defesa (Lowrie et al., 1999). Nos grupos de doentes e infectados tanto quanto nos
imunitrio do homem toma conheci- animais controles, ou seja, que foram aspectos econmicos envolvidos no
mento da presena dos bacilos e estabe- nesta ordem: infectados, tratados com controle da tuberculose.
lece uma resposta contra os mesmos, drogas antibacterianas para estabelecer A vacina gnica foi utilizada no
caracterizada tratamento da do-
por uma reao ena, conceito di-
inflamatria ferente em relao
crnica deno- s vacinas conven-
minada granu- cionais, que so
loma e que tem utilizadas somen-
a finalidade de te como preven-
circunscrever e o instalao da
delimitar a in- doena. Essa vaci-
feco. Nestas na de DNA cura a
condies os infeco, cura a
bacilos podem doena estabeleci-
sobreviver por da e impede que
anos em estado ocorra a reativao
de latncia ou da doena, e sem
dormncia e o perder a sua ca-
indivduo infec- racterstica profil-
tado pode no tica (Lowrie et al.,
manifestar a doena. A doena se mani- um estado de latncia; administrado cor- 1999). Os benefcios prticos e estrat-
festa quando h um desequilbrio dessa ticosteride para causar imunossupres- gicos resultantes do desenvolvimento
relao mtua e frequentemente est so e que no foram vacinados, obser- dessa vacina com atividade teraputica
associada com estados de depresso da vou-se reativao da infeco e estabele- contra a tuberculose so inmeros. Ela
resposta imunolgica. Os casos mais cimento da doena. Nos grupos experi- segura, eficaz, pode ser dada numa

44 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

nica dose, estimula amplamente a res-
posta imunolgica, tem efeito protetor
duradouro e pode contribuir significati-
vamente para a diminuio da incidn-
cia da tuberculose. Alm disso, o custo
de produo em larga escala baixo e
so estveis tempe-
ratura ambiente. To-
dos esses fatores faci-
litam o transporte, a
distribuio e o esta-
belecimento de am-
plos programas de
imunizaes em regi-
es de difcil acesso e
absolutamente dese-
jveis no mbito da
realidade brasileira.
A vacina de DNA,
administrada por via
intramuscular, leva a
mensagem gentica
para o interior da c-
lula, e l dentro ocor-
re a sntese do antge-
no como se fossem
protenas virais. Os antgenos sintetiza-
dos dentro das clulas so processados
por vrias enzimas e os fragmentos
resultantes, normalmente pedaos de
protenas com 9 a 15 aminocidos, so
levados para a superfcie dessas clulas,
denominadas apre-
sentadoras de antge-
nos, para serem reco-
nhecidos por linfci-
tos T CD4, T CD8 e
linfcitos B. Portanto,
a vacina de DNA pode
estimular tanto a res-
posta imunolgica ce-
lular (linfcitos T), que
tem a propriedade de
eliminar os patgenos
intracelulares, quanto
a humoral (linfcitos
B) para a produo de
anticorpos (figura 4)
(Silva 1995). Os linf-
citos T so fundamen-
tais para o controle da
tuberculose.
As anlises imunolgicas mostraram
que, dentre todas as clulas estimuladas
pela vacina de DNA, os linfcitos T CD8
exercem papel preponderante no con-
trole da infeco (Bonato et al., 1998).
Esses linfcitos T CD8 estimulados pela
vacina gnica, so preferencialmente
do tipo citotxicos, isto , tm tanto a
capacidade de destruir as clulas que
albergam o bacilo da tuberculose em
seu interior, como secretam grnulos
enzimticos que ajudam na eliminao
dos mesmos (figura 5). Alm disso,
tanto os linfcitos T CD8 como os T CD4
secretam, em altas concentraes, as subs-
tncias estimuladoras do sistema imuno-
lgico (interleucinas), como a IL-2, IL-12
e interferon gama. As interleucinas aju-
dam a manter ativados os sistemas micro-
bicidas dos macrfagos, que tambm so
usados para matar as micobactrias. Alm
disso, a imunidade adquirida pela inocu-
lao da vacina de DNA persiste por
longo perodo de tempo, devido tanto
constante produo do antgeno dentro
da clula hospedeira como capacidade
destes estimularem linfcitos de mem-
ria imunolgica e, com isso, sendo des-
necessrias as revacinaes (Silva et
al.,1999).
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Bonato V.L.D., Lima V.M.F., Tascon
R.E., Lowrie D.B., Silva C.L. Identification
and characteriazation of protective T ce-
lls in hsp65 DNA-vaccinated and Myco-
bacterium tuberculosis-infected mice.
Infection and Immunity. 66(1):169-175,
1998.
2. Lowrie DB, Tascon RE, Colston MJ,
Silva CL. Towards a DNA vaccine against
tuberculosis. Vaccine 12: 1537-1540, 1994.
3.Lowrie DB, Tascon RE, Silva CL. Vacci-
nation against Tubercu-
losis. International Ar-
chives of Allergy and Im-
munology 108: 309-312,
1995.
4.Lowrie DB, Silva CL,
Colston MJ, Ragno S,
Tascon RE. Protection
against tuberculosis by
plasmid DNA. Vaccine
15: 834-838, 1997.
5.Lowrie DB, Silva CL,
Tascon RE.
Genetic vaccination
against tuberculosis.
Springer Seminars in
Immunopathology 19:
161-173, 1997.
6. Lowrie DB, Silva CL,
Tascon RE. DNA vacci-
nes against tuberculosis. Immunology and
Cell Biology 75: 591-594, 1997.
7. Lowrie DB, MJ Colston, RE Tascon and
CL Silva. DNA encoding individual myco-
bacterial antigens protects mice against
tuberculosis. In: Brown F, Burton D,
Doherty P, Mekalanos J,
Norrby E (eds). Vacci-
nes 97: Molecular Ap-
proaches to the control
of infectious Diseases.
Cold Spring Harbor:
Cold Spring Harbor La-
boratory Press, 163-166,
1997.
8. Lowrie DB, RE Tas-
con, VLD Bonato, VMF
Lima, LH Faccioli e CL
Silva. Therapy of tuber-
culosis in mice by DNA
vaccination. Nature 400:
269-271, 1999.
9. Silva, C.L. Imuniza-
es gnicas. Imuniza-
es 2: 123-129, 1998.
10. Silva, C.L.. Vacinas
gnicas. Biotecnologia - Cincia e Desen-
volvimento 3: 32-34, 1997.
11. Silva, C.L. New vaccines against tuber-
culosis. Brazilian Journal of Medical and
Biological Research 28 :843-851, 1995.
12. Silva CL e KM Lima. Vacinas gnicas.
Mdicos 6:32-41, 1999.
13. Silva CL, VLD Bonato, VMF lima, LH
Faccioli e SC Leo. Characterization of the
memory/activated T-cells that mediate
the long-lived host res[ponse against tu-
berculosis after BCG or DNA vaccination.
Immunology 97: 573-581, 1999
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 45
 SEO DE CARTAS
Para entrar em contato com Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento voc pode enviar sua corres-
pondncia via Internet, fax ou carta para esta seo. A critrio do editor, as mensagens podero ser
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Home-page: http://www.biotecnologia.com.br Email: kl3@biotecnologia.com.br

Recebi e agradeo os nmeros 7 e 8 de
Biotecnologia. Parabns pela excelncia
do material cientfico divulgado e pelo
alto padro grfico.
Francisco M. Salzano
UFRGS - Universidade Federal do Rio
Grande do Sul
zzzz
Sou estudante do Curso Tcnico em
Biotecnologia da Escola Tcnica da Uni-
versidade Federal do Rio Grande do Sul
e gostaria de expor que as empresas
privadas no do apoio nenhum aos
estudantes deste curso, pois no aceitam
e nem se interessam por estagirios.
Garanto que a Universidade est prepa-
rando muito bem para o mercado de
trabalho, assim como para qualquer rea,
ento solicito revista uma divulgao
dos estudantes tcnicos de Biotecnologia
em todo o Brasil, at mesmo para inte-
resse de outros estudantes, sendo estes
atualmente poucos no Brasil.
Muito Obrigado,
Laize Fraga Espindula Porto Alegre.
Prezada Laize,
No temos espao para todos os nomes,
no entanto, estamos publicando sua
mensagem para conhecimento geral.
zzzz
Visitei a home-page da Revista
Biotecnologia Cincia & Desenvolvi-
mento para encontrar a referncia bibli-
ogrfica (volume, nmero, ano) de um
artigo que esta revista publicou sobre
Bactrias Lcticas. Gostaria de identifi-
car de que volume, nmero, etc era a
revista. Vocs poderiam me ajudar?
Obrigada pela ateno.
Irene Cmera Bibliotecria
Embrapa Suinos e Aves
Prezada Irene,
O artigo Bactrias Lcticas do ano II,
edio n8, maio/junho de 1999.
zzzz
Caros amigos, hoje tambm fiquei sa-
bendo que algumas pessoas que esto
na lista de cadastros que enviei a vocs,
j receberam tambm a confirmao da Infelizmente a edio que deseja est es-
assinatura via e-mail. Esperamos que as
edies cheguem o mais rpido possvel,
para que possamos desfrutar de tantas
informaes valiosas para nosso curso.
Novamente, agradeo em nome de todos
da minha turma que fizeram o pedido.
Muito obrigado.
Lus Gustavo Rampazo
Agradecemos o e-mail, esperamos que a
publicao venha a ser uma valiosa
fonte de pesquisa.
zzzz
Sou aluno da ESALQ/USP na qual inte-
gro o grupo PET/CAPES-Biotecnologia
Agricola. Entre inmeras atividades, re-
alizamos anualmente o CAB-Curso de
Atualizao em Biotecnologia, este ser
nosso oitavo CAB que contar com
vrios palestrantes discorrendo sobre
Vacinas Gnicas, Projeto Genoma,
Biodiversidade e outros assuntos que
envolvem a Biotecnologia.
Gostaria de saber da possibilidade de
divulgao do evento, que se realizar
dia 05 de novembro de 1999, pela
Revista Biotecnologia, reconhecendo
sua grande expresso no meio. Agra-
decido.
Rodrigo Mendes
Pet-Biotecnologia Agrcola
Prezado Rodrigo,
Envie pequeno trecho sobre o evento
contendo: data, tel. e e-mail para infor-
maes, para que pblico destinado e
um trecho pequeno contendo informa-
es gerais. Envie tudo para o mesmo e-
mail e A/C da Seo de Eventos.
zzzz
Estou fazendo um trabalho sobre
biotecnologia, e achei uma matria mui-
to interessante sobre Transgene Ani-
mal, na revista n 4, onde posso achar
essa revista?, teria como eu compr-la
pela internet? Por favor me respondam
o mais rpido possvel, pois tenho pres-
sa.
Obrigada
J nome e endereo completo com o cep.
gotada, estando disponvel apenas em
nossa home-page
www.biotecnologia.com.br
zzzz
Bem...sou aluno de graduao do curso de
Medicina Veterinria na UFPR e tenho uma
linha de pesquisa concernente ao artigo
publicado no encarte especial desta revis-
ta e foi assinada pelos Drs. Osvaldo Vilela
Filho e Cludio F. Corra, UFG e USP,
respectivamente. A minha pesquisa
anestesia atravs de ondas cerebrais e
gostaria de permutar conhecimentos, en-
to, caso seja possvel poderem informar
os e-mails ou o modo pelo qual eu poderia
contat-los, ficaria agradecido!
Luiz Fernando Sabadine
Enviamos o endereo eletrnico para seu
e mail.
zzzz
Sou leitor da Revista Biotecnologia e pre-
tendo assinar a revista, mas, como minha
rea de maior interesse a de assuntos
relacionados tecnologia farmacutica,
gostaria de sugerir um maior nmero de
artigos nessa rea.
Cordialmente,
Daniel Diniz de Carvalho.
Prezado Daniel,
Sua sugesto foi encaminhada.
zzzz
Prezados Srs.,
Como poderamos adquirir os vdeos Mos-
ca-Branca e Biotecnologia, temos inte-
resse principalmente no ltimo, bem como
gostaramos de assinar a revista. Como
fazer?
Mrcia Andrade
Prezada Mrcia,
O vdeo sobre a praga da Mosca Branca
acompanhou a edio n4 da Revista,
mas infelizmente j est esgotada. O vdeo
Biotecnologia acompanhou a edio
n9. Para assinar a revista basta enviar

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AGROCERES

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 MONSOY

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