2016 Fonseca Process Os

AUTARQUIA ASSOCIADA UNIVERSIDADE DE SO PAULO
Processos de obteno e caracterizao fsico-qumica de quitinas e quitosanas

extradas dos rejeitos da indstria pesqueira da regio de Canania - SP
Ana Carolina Moreira Fonseca
Dissertao apresentada como parte dos

requisitos para obteno do Grau de
Mestre em Cincias na rea
de Tecnologia Nuclear - Materiais
Orientador:
Prof. Dr. Nelson Batista de Lima
So Paulo
2016
INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGTICAS E NUCLEARES
Autarquia associada Universidade de So Paulo
Processos de obteno e caracterizao fsico-qumica de quitinas e quitosanas

extradas dos rejeitos da indstria pesqueira da regio de Canania - SP
Dissertao apresentada como parte dos

requisitos para obteno do Grau de
Mestre em Cincias na rea
de Tecnologia Nuclear - Materiais
Orientador:
Prof. Dr. Nelson Batista de Lima
Verso Corrigida
Verso Original disponvel no IPEN
So Paulo
2016
Dedico esse trabalho
Fora divina que nos rege.
Aos meus pais Lena e Luiz, por tudo que representam para mim e pelos
ensinamentos, sem os quais eu no poderia existir.
Aos meus queridos irmos Celso e Jonathan.
s minhas avs Ana e Maria
Ao meu amado sobrinho e filho por Deus, Guilherme.

AGRADECIMENTOS
Ao querido Eng Antnio Bettega pela amizade, apoio e pela proposta de

estudar quitina e quitosana.
Ao meu orientador Prof. Dr. Nelson Batista de Lima pela oportunidade de

executar esse trabalho.
Ao IPEN pela oportunidade e infraestrutura concedidas para o

desenvolvimento desse trabalho.
Fundao Ptria pelo apoio financeiro.
Trade Solues em Resduos Ltda. pelas cascas de camaro e ao Nilton

pela ateno.
Ao CCTM e colegas por todo apoio.
Aos professores e mestres do IPEN pelos ensinamentos.
Ao Prof. Dr. Ademar Benvolo Lugo e aos colegas do CQMA pelo apoio e
disponibilidade dos seus laboratrios e infraestrutura.
Ao Dr. Francisco Braga pelo apoio e espao cedido para a execuo da parte
prtica do trabalho.
Prof. Dra. Olga Zazuco Higa pelos ensinamentos e pelo exemplo de

pesquisadora.
Ao Dr. Valter Ussui pelo apoio e pelas ideias valiosas.
Ao Prof. Dr. Antnio Augusto Couto pelos ensinamentos e apoio.
Prof. Dra. Dolores Ribeiro Ricci Lazar pelos ensinamentos, pelo apoio e
por toda gentileza.
Ao Dr. Marcos Antnio Scapin pela disponibilidade e pelas anlises de FRX.
Ao Olandir pela disponibilidade.
Ana Cludia Martinelli Feher pela disponibilidade e pacincia em resolver

meus problemas com burocracia.
Aos colegas do laboratrio de DRX Ren, Carolline e Glaicy pelo apoio e
amizade.
Aos colegas do laboratrio de Biomateriais do CQMA pelo apoio e amizade.
Prof. Dr. Zlia Ludwig pelos ensinamentos e pelo incentivo em fazer o

mestrado no IPEN.
Aos meus queridos alunos que contriburam muito para meu aprendizado
enquanto eu tentava os ensinar.
Eng. Luiza Morikawa, ao Sr. Francisco Canto e aos colegas de trabalho

pela convivncia e apoio durante este perodo.
Aos meus familiares e amigos pelo apoio.
Ao meu querido e amado Jorge Gabriel dos Santos Batista pelas suas
contribuies, pacincia, cumplicidade, apoio e carinho.
A todos que passaram pelo meu caminho e de alguma maneira contriburam

para a execuo desse trabalho o meu muito obrigada!
No existe nenhum caminho lgico para o descobrimento das leis
elementares. O nico caminho o da intuio.
Albert Einstein
Amai ao prximo como a si mesmo.
Jesus Cristo
Perceber que copiar a Natureza muito mais difcil do que parece me faz ser
reverente a ela e no a um deus.
Janine Benyus
O que fica atrs de ns e o que jaz nossa frente tm muito pouca importncia
comparado ao que h dentro de ns.
Ralph Emerson
Foi tentando fugir de mim mesma que acabei me encontrando.
Ana C.
PROCESSOS DE OBTENO E CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DE
QUITINA E QUITOSANAS EXTRADAS DOS REJEITOS DA INDSTRIA
PESQUEIRA DA REGIO DE CANANIA-SP
RESUMO
A quitina o principal produto obtido do processamento das cascas de

crustceos. Esse biopolmero e o seu derivado, quitosana, tm despertado grande
interesse comercial em virtude das possibilidades de aplicaes que possuem. O
gerenciamento desses resduos e dos subprodutos gerados nas etapas no
processo de obteno pode ser considerado um modelo de biorrefinaria. A
implementao de plantas para extrao de quitina e quitosana um desafio, uma
vez que a demanda produtiva deve ser atendida sem causar danos ao meio
ambiente. Uma grande variedade de quitosanas com diferentes propriedades fsico-
qumicas podem ser obtidas variando-se as condies de reao. Essas
propriedades dependem da origem da matria-prima, do seu grau mdio de
desacetilao, distribuio mdia dos grupos acetil ao longo da cadeia principal e
da sua massa molecular mdia. Os fornecedores de quitosana comercial
geralmente no mencionam a procedncia da matria-prima e pouca ou nenhuma
informao fornecida acerca do seu processamento. Sendo assim, as
caractersticas e a reatividade do produto final podem variar gerando resultados
no reprodutveis. No presente estudo, foi utilizada a biomassa oriunda de rejeitos
da indstria pesqueira de camaro da regio de Canania SP. As amostras de -
quitina foram obtidas por dois procedimentos diferentes: no primeiro, P1, as cascas
de camaro aps passar pelo pr-tratamento (lavagem, secagem e moagem) foram
desproteinizadas para retirada das protenas em hidrxido de sdio (NaOH) diludo
nas concentraes 2%, 5% e 10% e desmineralizadas em cido clordrico (HCl) a
20% (v/v) para retirada dos carbonatos; no segundo procedimento, P2, essas
etapas foram invertidas. A biomassa resultante foi desacetilada com hidrxido de
sdio concentrado a 30%, 40% e 50% em tempos que variaram de 2 a 6 horas. As
principais propriedades fsico-qumicas das amostras de quitosanas obtidas foram
determinadas utilizando a espectroscopia na regio do infravermelho com
transformada de Fourier (FT-IR) para a determinao do grau mdio de acetilao,
, e a tcnica de titulao cido-base mensurada por condutimetria foi utilizada

para comparar os resultados; a viscosimetria capilar para a determinao da massa
molar mdia viscosimtrica,
, e a difrao de raios X (DRX) para avaliar o grau
mdio de cristalinidade, . Alm disso, foram empregadas as tcnicas de
microscopia eletrnica de varredura (MEV) para anlises morfolgicas dos
materiais obtidos e a espectrometria de fluorescncia de raios X por disperso de
comprimento de onda (WDXRF) para anlise qumica das quitosanas. O
e o
das amostras diminuram medida em que o tratamento se tornou mais vigoroso,
enquanto a
aumentou. O procedimento 2 foi o mais vivel por eliminar a etapa
de despigmentao, pois originou amostras com tonalidade mais clara e fceis de
pulverizar.
Palavras-chave: Quitina, quitosana, processos de obteno, caracterizao fsico-

qumica.
OBTAINING PROCESSES AND PHYSICOCHEMICAL CHARACTERIZATION
OF CHITIN AND CHITOSAN EXTRACTED OF THE FISHING INDUSTRY
WASTE OF CANANEIA-SP REGION
ABSTRACT
Chitin is the main product obtained from the processing of crustacean shells. This
biopolymer and its derivative, chitosan, have aroused great commercial interest
because of the possibilities of applications they have. The management of these
wastes and by-products generated in the steps of obtaining processes can be
considered a biorefinery model. The implementation of plants for chitin and chitosan
extraction is a challenge, since the production demand must be met without causing
harm to the environment. A wide variety of chitosan with different physico-chemical
properties can be obtained by varying the reaction conditions. These properties
depend on the origin of the raw material, its average degree of deacetylation
average distribution of the acetyl groups along the backbone and its average
molecular weight. Chitosan commercial providers generally do not mention the
origin of the raw material and few or no information is provided about the processing.
Therefore, the characteristics and reactivity of the final product may vary generating
non-reproducible results. The biomass coming from the fishing industry tailings
shrimp Canania - SP region was used in the present study. Samples of -chitin
were obtained by two different procedures: the first, P1, the shrimp shells after
passing through the pretreatment (rinsing, drying and grinding) were deproteinized
for removal of proteins in diluted sodium hydroxide (NaOH) in concentrations 2%,
5% and 10% and demineralized in hydrochloric acid (HCl) to 20% (v/v) to remove
carbonates; in the second procedure, P2, these steps were reversed. The resulting
biomass was deacetylated with sodium hydroxide concentrated at 30%, 40% and
50% in times ranging from 2 to 6 hours. The main physicochemical properties of
chitosan samples obtained were determined using Fourier transform infrared
spectroscopy (FT-IR) to determine the average degree of acetylation,
, and the
acid-base titration technique measured by conductimetry was used to compare the
results of chitosan; capillary viscometry to determine the viscosimetric average
molecular weight,
, and X-ray diffraction (XRD) to evaluate the average degree
of crystallinity, . In addition, scanning electron microscopy (SEM) were employed
for morphological analyzes of the obtained materials and wavelength dispersion X-
and of the
ray fluorescence (WDXRF) for chemical analysis of chitosan. The
samples decreased as the treatment became stronger, while
increased.
Procedure 2 was the most feasible to eliminate the depigmentation step because
gave clearer and easier samples spraying.
Key-words: Chitin, chitosan, obtaining processes, physicochemical

characterization.
Sumrio
RESUMO ................................................................................................................ 5
ABSTRACT ............................................................................................................. 7
LISTA DE TABELAS ............................................................................................. 11
LISTA DE FIGURAS ............................................................................................. 13
LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS ................................................................ 16
LISTA DE UNIDADES ........................................................................................... 18
1 INTRODUO ............................................................................................... 19
2 OBJETIVO ..................................................................................................... 24
3 REVISO DA LITERATURA E ESTADO DA ARTE ...................................... 25
3.1 Quitina .................................................................................... 25
3.2 Quitosana ............................................................................... 28
3.3 Aplicaes .............................................................................. 30
3.4 Principais propriedades da quitina e quitosanas .................... 34
3.4.1 Grau Mdio de Cristalinidade () .................................... 35
3.4.1.1 Estrutura cristalina da quitina.36
3.4.1.2 Estrutura cristalina da quitosana39
3.4.1.3 Difrao de raios X..42
3.4.2 Grau Mdio de Desacetilao () ................................. 44
3.4.2.1 Espectroscopia na regio do infravermelho (IV).48
3.4.2.2 Mtodo de titulao cido-base.54
3.4.3 Massa Molecular Mdia () ............................................ 55
4 MATERIAIS E MTODOS ............................................................................. 61
4.1 Fluxograma de Trabalho ..................................................... 61
4.2 Materiais ............................................................................. 62
4.3 Obteno das amostras de quitina ..................................... 62
4.4 Obteno das amostras de quitosanas ............................... 65
4.5 Caracterizao das amostras de -quitina e quitosanas .... 67
4.5.1 Anlise morfolgica por Microscopia Eletrnica de
Varredura .. 67
4.5.2 Percentual de material insolvel nas amostras de
quitosanas .............................................................................................. 67
4.5.3 Determinao do grau mdio de cristalinidade por difrao
de raios X ........ ...................................................................................... 68
4.5.4 Determinao do grau mdio de acetilao por
espectroscopia na regio do infravermelho ........................................... 68
4.5.5 Determinao do grau mdio de desacetilao das
amostras de quitosanas por titulao condutimtrica ............................ 68
4.5.6 Determinao da massa molecular mdia das amostras de
quitosanas por viscosimetria capilar ...................................................... 69
4.5.7 Anlise qumica das amostras de quitosanas por
Espectroscopia de Fluorescncia de raios X por disperso de
comprimento de onda ............................................................................ 69
4.5.8 Anlise estatstica ............................................................72
5 RESULTADOS E DISCUSSES ................................................................... 71
6 CONCLUSES ............................................................................................ 107
7 REFERNCIAS ............................................................................................ 109
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 - Dados referente a pesca de camaro no municpio de Canania-SP no

perodo de 01/2010 a 01/2015. (Instituto de Pesca: Banco de Dados. Acesso em:
30 out. 2015) ..........................................................................................................23
TABELA 2 - Possveis mercados consumidores de quitosana e sua respectiva
aplicabilidade em cada segmento. ........................................................................ 33
TABELA 3 - Principais tcnicas utilizadas na determinao do grau mdio de
) e suas respectivas referncias (apud Hussain et al., 2013).. . 47
desacetilao (GA
TABELA 4 - Identificao das amostras utilizadas por Brugnerotto et al. (2001) e
seus respectivos
GA determinados por de tcnicas absolutas.. ............................ 53
TABELA 5 - Definies das viscosidades utilizadas (Michel, 2015). .................... 60
TABELA 6 - Ensaio de granulometria das cascas de camaro modas utilizadas no
processo de obteno da quitina e quitosanas analisadas no presente
estudo.....................................................................................................................65
TABELA 7 - Obteno das amostras de quitina em funo da concentrao de
NaOH na etapa de desproteinizao e do tempo de reao das cascas em HCl na
etapa de desmineralizao. .................................................................................. 66
TABELA 8 - Obteno das amostras de quitosanas em funo da concentrao de
NaOH e do tempo de reao na etapa de desacetilao. ..................................... 67
TABELA 9 - Valores percentuais do rendimento do processo de obteno das
amostras de quitosanas e de material insolvel de cada amostra aps a
secagem................................................................................................................ 75
TABELA 10 - Resultados obtidos para os parmetros das amostras de quitina
) ..... 90
) e grau mdio de acetilao (GA
analisadas: grau mdio de cristalinidade (X
TABELA 11 - Resultados obtidos para os parmetros das amostras de quitosanas
) ..... 90
) e grau mdio de acetilao (GA
analisadas: grau mdio de cristalinidade (X
TABELA 12 - Tabela de ANOVA dos valores obtidos para o grau mdio de
cristalinidade das amostras de quitina e quitosanas determinados por difrao de
raios X ................................................................................................................... 91
acetilao das amostras de quitina e quitosanas analisadas determinados por
espectroscopia no IV por Transformada de Fourier .............................................. 91
TABELA 14 - Resultados obtidos pelo Teste Tukey para os tratamentos que
apresentaram diferenas significativas entre si quanto ao grau mdio de
) das amostras de quitina e quitosanas ....................................... 93
cristalinidade (X
apresentaram diferenas significativas entre si quanto ao grau mdio de acetilao
) das amostras de quitina e quitosanas ........................................................... 96
(GA
), sendo
TABELA 16 - Resultados obtidos para o percentual de grupos amino (GD
) seu inverso ...................................................... 98
o grau mdio de acetilao (GA
acetilao das amostras de quitosanas determinados por titulao
condutimtrica ....................................................................................................... 98
apresentaram diferenas significativas entre si quanto ao grau mdio de acetilao
) das amostras de quitosanas ......................................................................... 99
(GA
TABELA 19 - Resultados obtidos para a viscosidade intrnseca, [], e para a massa
v ) das amostras de quitosanas ..................... 103
molecular mdia viscosimtrica (M
TABELA 20 - Tabela de ANOVA dos valores obtidos para a massa molecular mdia
das amostras de quitosanas determinados por viscosimetria capilar ................. 103
apresentaram diferenas significativas entre si quanto massa molecular mdia
v ) das amostras de quitosanas ............................................... 105
viscosimtrica (M
TABELA 22 - Teor (mg kg-1) dos elementos sdio, magnsio, alumnio, silcio,
fsforo, enxofre, cloro, potssio, clcio, ferro, nquel, cobre e zinco nas amostras
obtidas pelo tratamentos 5, 6, 7, 8 e 9 por meio dos procedimentos 1 e 2. ........ 106
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 - Principais categorias de pescado e a produo pesqueira em Canania

no perodo de 2009-2013 (Instituto de Pesca: A Pesca em So Paulo, Acesso em:
30 out. 2015). ........................................................................................................ 22
FIGURA 2 - Anatomia externa do camaro (Slide Share. Acesso em 17 jun.
2014). .................................................................................................................... 24
FIGURA 3 - Segmento de estrutura molecular da quitina...................................... 26
FIGURA 4 - Segmento de estrutura molecular da celulose. ................................. 27
FIGURA 5 - Segmento de estrutura molecular da quitosana. ............................... 29
FIGURA 6 - Nmero de publicaes classificadas por relevncia nas ltimas trs
dcadas (1983-2014), pesquisadas utilizando o termo chitosan como palavra-
chave em <https://scholar.google.com.br> (Adaptado de Se-Kwon, 2013)............32
FIGURA 7 - Estrutura proposta para a -quitina: (a) projeo bc; (b) projeo ab
(Urigami e Tokura, 2006). ..................................................................................... 37
FIGURA 8 - Estruturas propostas para a -quitina (projeo nos eixos ab) (Urigami
e Tokura, 2006). .................................................................................................... 38
FIGURA 9 - Orientaes das cadeias polimricas nas diferentes formas de quitina
(Roberts, 1992). .................................................................................................... 39
FIGURA 10 - Empacotamento da estrutura do tendo polimorfo (hidratado). (a)
projeo bc; (b) projeo ab (Urigami e Tokura, 2006). ........................................ 40
FIGURA 11 - Estrutura cristalina do polimorfo anidro da quitosana nas projees
ab e bc (Urigami e Tokura, 2006).......................................................................... 41
FIGURA 12 - Modelo esquemtico de um difratmetro de raios X (Laboratrio de
Fsica Moderna, acesso em 24 jul. 2015).............................................................. 42
FIGURA 13 - Ilustrao do mtodo para determinao do grau de cristalinidade de
quitina (Ioelovich, 2014). ....................................................................................... 44
quitosana (Ioelovich, 2014). .................................................................................. 44
FIGURA 15 - Reao de desacetilao de quitina em quitosana (Shukla et al.,
2013). .................................................................................................................... 46
FIGURA 16 - Modelo esquemtico de um espectro com transformada de Fourier
(Solomons e Fryhle, 2005). ................................................................................... 48
FIGURA 17 - Espectro de IV da N-acetil-D-glucosamina e representao das linhas
de base adotadas (Brugnerotto et al., 2001). ........................................................ 50
FIGURA 18 - Espectro de IV da D-glucosamina (a) na forma cloridrato; (b) na
forma amina (Brugnerotto et al., 2001). ................................................................ 51
FIGURA 19 - Representao das diferentes linhas de base testadas e mencionadas
por Brugnerotto et al. (2001). ................................................................................ 52
FIGURA 20 - Curva de titulao condutimtrica obtida experimentalmente para uma
amostra de quitosana comercial ........................................................................... 55
FIGURA 21 - Variao de uma determinada propriedade do polmero em funo
de sua massa molecular (Canevarolo Jnior, 2006). ............................................ 56
FIGURA 22 - Curva tpica de distribuio de massa molecular de uma amostra
polimrica para os quatro valores mdios principais, em que Mn = massa molecular
mdia numrica; Mv = massa molecular mdio viscosimtrica; Mw = massa
molecular mdia ponderal e Mz = massa molecular Z-mdia (Lucas et al.,
2001). .................................................................................................................... 58
FIGURA 23 - Fluxograma de trabalho................................................................... 62
FIGURA 24 - Fluxograma do processo de obteno das quitina. ......................... 64
FIGURA 25 - Amostras de quitosanas obtidas por: (a) procedimento 1; (b)
procedimento 2. .................................................................................................... 72
FIGURA 26 - Micrografias das amostras de quitina e quitosanas obtidas pelo
tratamento 9 por ambos os procedimentos ........................................................... 74
FIGURA 27 - Avaliao da solubilidade das amostras das quitosanas obtidas pelo
procedimento 1. (a) material obtido aps a secagem em estufa a 50 C por 24 horas;
(b) Frao solvel em cido actico 1% (da esquerda para direita de 1 a 9)........ 76
procedimento 2. (a) material obtido aps a secagem em estufa a 50 C por 24 horas;
(b) Frao solvel em cido actico 1% (da esquerda para direita de 1 a 9)........ 77
FIGURA 29 - Difratograma de raios X da amostra de quitosana utilizada como
padro analtico. .................................................................................................... 78
FIGURA 30 - Difratogramas de raios X das amostras de quitina preparadas pelo
procedimento 1 ..................................................................................................... 79
FIGURA 31 - Difratogramas de raios X das amostras de quitina preparadas pelo
procedimento 2. ...................................................................................................... 80
FIGURA 32 - Difratogramas de raios X das amostras de quitosanas preparadas
pelo procedimento 1 .............................................................................................. 81
FIGURA 33 - Difratogramas de raios X das amostras de quitosanas preparadas
pelo procedimento 2 .............................................................................................. 82
FIGURA 34 - Espectro de absoro na regio do infravermelho da amostra de
quitosana utilizada como padro analtico. ........................................................... 84
FIGURA 35 - Espectros de absoro na regio do infravermelho das amostras de
quitina preparadas pelo procedimento 1 ............................................................... 85
quitina preparadas pelo procedimento 2 ............................................................... 86
quitosanas preparadas pelo procedimento 1. ....................................................... 87
quitosanas preparadas pelo procedimento 2 ........................................................ 88
FIGURA 39 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH da amostra
de quitosana utilizada como padro analtico ............................................................ 95
FIGURA 40 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH das amostras
de quitosanas obtidas pelo procedimento 1 .......................................................... 96
FIGURA 41 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH das amostras
de quitosanas obtidas pelo procedimento 2 .......................................................... 97
FIGURA 42 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao da amostra de
quitosana como padro analtico ........................................................................ 100
FIGURA 43 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao das amostras
de quitosanas preparadas pelo procedimento 1 ................................................. 101
FIGURA 44 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao das amostras
de quitosanas preparadas pelo procedimento 2 ................................................. 102
LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS
CG Cromatografia Gasosa
Grau Mdio de Desacetilao
DA Desacetilao
DM Desmineralizao
DP Desproteinizao
DRX Difrao de Raios X
FRX Fluorescncia de Raios X
FT-IR Espectroscopia na regio do Infravermelho por Transformada de Fourier
Fam rea do espalhamento amorfo

FCr rea do espalhamento cristalino
GlcN D-glucosamina
GlcNAc N-acetil-D-glucosamina
Iam Intensidade do espalhamento amorfo
ICr Intensidade do espalhamento cristalino
Io Intensidade total do difratograma
IV Espectroscopia na regio do Infravermelho
Massa Molecular Mdia
MM Massa Molecular
Massa Molecular Mdia Numrica
Massa Molecular Mdia Ponderal
Massa Molecular Mdia Viscosimtrica
Massa Molecular Z-Mdia
MEV Microscpia Eletrnica de Varredura

Qn Quitina obtidas pelo procedimento 1
Qn Quitina obtidas pelo procedimento 2
Qtn Quitosanas obtidas pelo procedimento 1
Qtn Quitosanas obtidas pelo procedimento 2
TPL Titulao Potenciomtrica Linear
UV Ultravioleta
Grau Mdio de Cristalinidade
WDXRF Espectroscopia de fluorescncia de raios X por disperso de

comprimento de onda
LISTA DE UNIDADES
cm centmetro
C grau Celsius
Da Dalton
kg quilograma
L litro
mg miligrama
mL mililitro
nm nanmetro
% porcentagem
20
1 INTRODUO
Nas ltimas dcadas, as atenes tm se voltado em substituir os

materiais oriundos da indstria petroqumica por produtos obtidos de fontes
renovveis. Os polmeros naturais e seus derivados, tais como celulose, amido,
colgeno, gelatina, alginato e quitina, tm sido usados para aplicaes em diversas
reas de atuao, sendo de grande importncia nos avanos cientficos graas s
vantagens que apresentam, como serem obtidos de fontes renovveis,
biocompatveis e biodegradveis em sua maioria (Kumar, 2000; Croisier e Jrme,
2013).
A decomposio natural de produtos obtidos a partir de biopolmeros
pode levar produo de metano, cuja absoro pelo meio ambiente mais lenta,
podendo causar problemas ambientais se produzido em excesso. Entretanto, o
gerenciamento adequado desse subproduto, como por exemplo sua canalizao
em aterros sanitrios transformando-o em fonte de energia (biogs), garante que
os biopolmeros integrem uma nova classe de materiais que so considerados
melhores para meio ambiente, os chamados ecofriendly (Matsui, 2007; Mottin et al.,
2011; Bof et al., 2015).
Neste contexto, as biorrefinarias tornam-se uma alternativa para a
indstria qumica, pois compreendem instalaes e processos pelos quais
matrias-primas renovveis e seus resduos so transformados em
biocombustveis, produtos qumicos de alto valor agregado, alm de energia,
insumos e alimentos. O objetivo de uma biorrefinaria otimizar o uso de recursos
e minimizar os efluentes, maximizando os lucros (Vaz Jnior, 2013).
A quitina o principal produto obtido pelo processamento das cascas de
crustceos. Esse biopolmero e seu derivado, quitosana, tm despertado grande
interesse comercial em virtude das possibilidades de aplicaes que possuem. A
versatilidade dessas substncias tem sido avaliada por mais de um sculo por
pesquisadores das mais diversas reas, gerando um amplo banco de dados na
literatura atual (Rinaudo, 2006; Pillai et al., 2009).
A proposta de se estudar quitina e quitosana est relacionada no s
com o potencial de aplicaes para seu uso em escala industrial, mas tambm pela
abundncia das carapaas de crustceos (suas principais fontes de obteno)
21
rejeitados pela indstria pesqueira em consequncia da alta produtividade nacional.

A elevada produo de camaro na faixa litornea do Brasil tem gerado grandes
quantidades de resduos slidos, tendo em vista que a cabea e a casca do animal
correspondem a aproximadamente 40% do seu peso total, contribuindo com a
poluio ambiental (Silva et al., 2006).
O Brasil est dentre os maiores produtores mundiais de camaro, no
s pelo extenso litoral que possui, mas tambm por desenvolver nas ltimas
dcadas a carcinicultura, cultivo de camares em cativeiro, sendo esta uma prtica
muito criticada em razo dos grandes impactos ambientais que causam em vrios
aspectos. Esta atividade utiliza uma infinidade de recursos como terra, gua,
energia, rao, mo de obra, equipamentos, fertilizantes, antibiticos, que devem
ser usados de forma consciente para que a atividade seja lucrativa e de maneira
que o impacto no meio ambiente seja reduzido ao mnimo, uma vez que
impossvel produzir sem provocar alteraes ambientais. Em contrapartida, a
criao de camaro em cativeiro tem permitido a reduo do extrativismo e da
pesca predatria (Damasceno et al., 2009; Notori, 2011).
No presente trabalho foi utilizada a biomassa oriunda da indstria
pesqueira da regio de Canania, localizada no Sul do Estado de So Paulo com
uma costa de aproximadamente 39 km. A atividade pesqueira a sua principal
fonte econmica, com uma variedade de peixes, crustceos e moluscos gerando
uma diversificao quanto s artes pesqueiras, abrangendo cerca de cinco mil
pescadores, residentes nos municpios de Iguape, Canania e Ilha Comprida
(Mendona, 2007).
A atividade pesqueira na regio dividida em pesca artesanal e pesca
industrial. A primeira utiliza tcnicas rudimentares, pouco alteradas ao longo da
histria e empregadas na captura de uma variedade de espcies; j a segunda,
prioriza espcies com alto valor de mercado, empregando tecnologia voltada para
a maximizao da captura, sem se preocupar com a conservao do estoque e
gerando um elevado volume de rejeito pesqueiro (Mendona, 2007).
Considerando a produo de pescados descarregada no perodo de
2009 a 2013, Canania respondeu por cerca de 12% do total de pescados, o que
fez dela o segundo municpio que mais contribuiu com a produo desse setor em
So Paulo. No grfico da FIG. 1 esto representadas as principais categorias de
pescados descarregados no municpio durante o perodo mencionado.
22
FIGURA 1 - Principais categorias de pescado e a produo pesqueira em Canania no

perodo de 2009-2013 (Instituto de Pesca: A Pesca em So Paulo, Acesso em: 30 out.
2015).
O camaro sete-barbas (Xiphopenaeus kroyeri) representa a maior

parcela na quantidade de camares pescados na regio. Na TAB. 1 so
apresentados os dados referentes s quantidades e a receita obtida somente com
a pesca de camaro em Canania no perodo de janeiro de 2010 a janeiro de 2015.
possvel observar que a pesca extrativista e sem fiscalizao adequada tem
refletido diretamente na diminuio do total de pescados ao longo desses ltimos
cinco anos, o que tem tornado o produto mais caro.
23
TABELA 1 - Dados referente a pesca de camaro no municpio de Canania-SP

no perodo de 01/2010 a 01/2015. (Instituto de Pesca: Banco de
Dados. Acesso em: 30 out. 2015).
N DE
PERODO ESPCIE QUANTIDADE (kg) RECEITA
DESCRGAS
Camaro legtimo 16.886,38 1.694 R$ 251.894,81
Camaro rosa 11.028,35 255 R$ 253.920,23
2010-2011
Camaro sete-barbas 955.253,00 2.197 R$ 992.306,41
TOTAL 983.167,73 4.146 R$ 1.498.121,45
Camaro legtimo 17.141,05 1.644 R$ 352.065,26
Camaro rosa 6.631,68 229 R$ 244.278,70
2011-2012
Camaro sete-barbas 653.594,40 2.756 R$ 2.269.457,20
TOTAL 677.367,13 4.629 R$ 2.865.801,16
Camaro legtimo 16.744,01 1.499 R$ 260.192,89
Camaro rosa 17.385,69 270 R$ 518.123,92
2012-2013
TOTAL 672.818,20 4.013 R$ 2.954.238,40
Camaro legtimo 16.751,13 1.450 R$ 393.316,83
Camaro rosa 19.952,50 300 R$ 467.183,35
2013-2014
TOTAL 462.736,43 3.607 R$ 2.724.967,63
Camaro legtimo 16.823,78 1.174 R$ 365.725,20
Camaro rosa 19.691,80 303 R$ 496.110,95
2014-2015
TOTAL 392.776,05 3.268 R$ 2.487.777,61
O resduo da produo de camares (casca e cabea FIG. 2) contm

de 15 a 20% de quitina, 25 a 40% de protenas e 40 a 55% de carbonato de clcio,
dependendo da espcie. Em crustceos, a quitina encontra-se associada s
protenas, carbonatos, pigmentos e lipdeos. Por esse motivo, so necessrias trs
etapas para se isolar esse polmero: desproteinizao, desmineralizao e
despigmentao (Domard e Rinaudo, 1982; Assis et al., 2008). O mtodo de
extrao comumente utilizado para obteno de quitina e quitosanas comerciais
possui como desvantagem o uso de grandes quantidades de reagentes qumicos,
que se no tratados de maneira correta, causam problemas mais srios ao meio
ambiente do que os resduos produzidos pela indstria pesqueira.
24
FIGURA 2 - Anatomia externa do camaro (Slide Share. Acesso em 17 jun. 2014).
Por se tratarem de biopolmeros, qualquer variao na origem da

matria-prima ou nas condies de obteno altera as propriedades do produto
final, o que muitas vezes tornam os resultados no reprodutveis. Suas
propriedades dependem da distribuio das unidades de 2-acetoamido-2-desoxi-
D-glicopiranose e 2-amino-2-desoxi-D-glicopiranose ao longo da cadeia, do grau
, e da massa molar mdia,
mdio de acetilao, . Vrias tcnicas e modelos
matemticos foram propostos na literatura para a determinao desses parmetros,
o que leva a confuses nas interpretaes dos dados gerando a necessidade de se
criar normas, protocolos de ensaios e de anlise desses dados.
O gerenciamento desses resduos e dos subprodutos gerados nas
etapas dos processos de obteno representam um desafio para a implementao
de plantas para extrao de quitina e quitosana. Estas devem atender a demanda
produtiva sem causar danos ao meio ambiente. Para tanto, faz-se necessrio toda
uma adaptao do processo produtivo no sentido da sustentabilidade, de maneira
que todo o conjunto de produtos obtidos possam compensar os custos e a demanda
de mercado.
25
2 OBJETIVO
Determinar por meio de tcnicas simples, que possam ser usadas em

escala industrial, os principais parmetros fsico-qumicos de quitosanas obtidas de
quitina extrada dos rejeitos de cascas de camaro produzidos pela indstria
pesqueira da regio de Canania SP, em variadas condies de reao.
26
3 REVISO DA LITERATURA E ESTADO DA ARTE
3.1 Quitina
Quitina um polissacardeo de cadeia linear constitudo por resduos de

2-acetoamido-2-desoxi-D-glicopiranose (N-acetil-D-glucosamina GlcNAc), unidos
por ligaes (14) e possui massas moleculares variveis, cuja a estrutura est
representada na FIG. 3.
FIGURA 3 - Segmento de estrutura molecular da quitina.
Quitina o componente estrutural encontrado nos exoesqueletos de

muitos artrpodes, incluindo insetos e crustceos; tambm encontrado na parede
celular de fungos, sendo o segundo biopolmero mais abundante na natureza, com
a vantagem de apresentar uma taxa de reposio duas vezes maior que a da
celulose, primeiro em abundncia. Sua estrutura qumica muito similar da
celulose (FIG. 4), na qual a nica diferena a substituio do grupo hidroxila no
carbono C-2 do anel piranosdico por um grupo acetamido. Esta similaridade nas
estruturas refletida no papel de ambos os polmeros na natureza, agindo como
materiais estruturais e de defesa, quase sempre associados s protenas. (Roberts,
1992; Kumar, 2000; Urigami e Tokura, 2006).
27
FIGURA 4 - Segmento de estrutura molecular da celulose.
A quitina usada comercialmente extrada de cascas de caranguejos e

camares. Estas tm como principais componentes a quitina, sais de clcio
(carbonatos e fosfatos em menor quantidade) e protenas, alm de pigmentos e
lipdeos em pequenas quantidades (Lima et al., 2006; Battisti e Campana Filho,
2008).
3.1.1 Breve Histrico
A quitina foi originalmente chamada de fungina quando descoberta em

cogumelos pelo professor francs H. Braconnot, em 1811. Com base em algumas
anlises, o material obtido mostrou ser impuro, provavelmente contendo outros
polissacardeos. Braconnot tambm relatou a formao de cido actico a partir da
fungina, chegando a concluso de que se tratava de uma nova e distinta substncia,
diferente da encontrada na madeira.
Em 1823, A. Odier isolou uma substncia insolvel contida na carapaa
de insetos utilizando solues de KOH a quente e lhe deu o nome de quitina, termo
derivado da palavra grega chiton, que significa carapaa. Ele falhou ao detectar a
presena de nitrognio, associando a substncia animal mesma encontrada nos
vegetais. No ano seguinte, J. G. Children publicou uma traduo em ingls do artigo
de Odier com alguns dados adicionais acerca de seus estudos com quitina que
mencionavam a presena de nitrognio em sua estrutura.
Mediante a descrio dos processos de obteno, provvel que
ambos, Odier e Children, tenham obtido quitosana ao invs de quitina. Dados de
anlise elementar deram como resultado uma frmula emprica de
aproximadamente C11H17O7N2, na qual consideravelmente mais prxima da
28
frmula para a unidade repetitiva do dissacardeo de quitosana (C 12H22O8N2) do

que para a da quitina (C16H26O10N2).
No entanto, a quitosana foi reconhecida e descrita em 1859 pelo
professor C. Rouget ao submeter uma amostra de quitina ao tratamento com lcali,
no qual resultou em uma substncia que se dissolvia em cidos, diferentemente da
prpria quitina. O termo quitosana foi dado ao composto desacetilado de quitina por
Hoppe-Seyler, em 1894.
As concluses de Odier a respeito da similaridade do biopolmero
estrutural das plantas e do exoesqueletos de insetos levaram a confuses entre
celulose, quitina e quitosana. Em 1891, E. Schulze props que o nome celulose
seria atribudo ao constituinte da parede celular que no se dissolvesse em
solues de cidos minerais. Em 1894, E. Winterstein publicou dois artigos
definindo como celulose fngica o material contendo nitrognio obtido por ele a
partir de vrios tipos de fungos com KOH a 180C. Embora a hidrlise tenha dado
o mesmo monossacardeo, assim como a quitina, Winterstein no concluiu que a
celulose fngica e a quitina se tratassem da mesma substncia, pelo fato da
primeira ser solvel em soluo diluda de HCl.
E. Gilson observou a presena de quitina em fungos e sua converso
em quitosana. Ele notou sua insolubilidade em meio alcalino e sua composio
elementar estava de acordo com as anlises previamente relatadas para quitina
animal. Ele sugeriu que a quitina dos cogumelos tivesse o mesmo papel estrutural
que a celulose nos vegetais.
Em 1897, C. Tarret isolou a fungina do Aspergillus niger e confirmou
que se tratava de quitina por hidrlise com HCl e pela reao com KOH. Embora
resultados semelhantes tenham sido obtidos com outros fungos, somente no caso
do A. niger a quitina obtida foi to pura quanto do caranguejo. Em 1929, P. Carrer
e colaboradores avaliaram os extratos de uma quitina de origem animal (caracol) e
fngica, e encontraram comportamentos similares para ambos. Eles confirmaram
que os extratos tinham a mesma estrutura geral com base nos padres de difrao
de raios X de crustceos, fungos e insetos e pelos espectros de infravermelho
idnticos para a quitina de insetos e fungos. Logo, a quitina obtida de ambas as
fontes, animal ou fngica, predominantemente a poli[-(14)2-acetoamido-2-
desoxi-D-glicopiranose], em que a frao molar e a distribuio de alguns resduos
de D-glucosamina presentes vai depender da fonte.
29
Investigaes paralelas por outros autores durante esse perodo

determinaram quatro fatores a fim de se obter a estrutura qumica da quitina e da
quitosana: o resduo de monossacardeo; se o anel piranose ou furanose; a
posio da ligao glicosdica entre as unidades de monossacardeos e a
estereoqumica da ligao glicosdica (Roberts, 1992; Urigami e Tokura, 2006).
3.2 Quitosana
Quitosana um copolmero, derivado da quitina, constitudo de unidades

2-amino-2-desoxi-D-glicopiranose (D-glucosamina GlcN) e 2-acetoamido-2-
desoxi-D-glicopiranose (N-acetil-D-glucosamina GlcNAc) tambm interligadas por
, ou desacetilao,
ligaes (14) com diferentes graus mdios de acetilao,
, e massas moleculares variadas. Portanto, o termo quitosana usualmente se

refere a famlia de derivados de quitina obtidas pelo processo de desacetilao pela
hidrlise dos grupos acetamido das unidades GlcNAc. O carter bsico da
quitosana atribudo presena do grupo amina em sua estrutura apresentada na
de 60 - 99%, (Moore e Roberts, 1979; Bof et al., 2015).
FIG. 5, variando o
FIGURA 5 - Segmento de estrutura molecular da quitosana.

30
A quitosana possui quatro tipos de grupos funcionais reativos: os grupos

amino e/ou acetamido na posio C2 do anel piranosdico e hidroxilas primria e
secundria nas posies C6 e C3, respectivamente. Quando o
maior que 60%,
o biopolmero solvel em meio cido em consequncia da protonao do grupo
NH2, o que faz da quitosana um polissacardeo natural de carter catinico.
Entretanto, a extenso da solubilidade da quitosana dependente do
, da
concentrao, do tipo de cido, da massa molar e do pH do meio (Xia et al., 2011;
Hussain et al., 2013; Bof et al., 2015).
Uma grande variedade de quitosanas podem ser obtidas variando-se as
seguintes condies de reao: fonte de obteno da quitina; temperatura e tempo
de reao; concentrao da soluo de lcali e adio de diluente (lcoois ou
cetonas de cadeias curtas); razo quitina/lcali; tamanho das partculas de quitina;
atmosfera da reao; N-desacetilao heterognea/homognea e presena de
reagentes que evitem a despolimerizao. Essas condies influenciam
principalmente nas propriedades fsico-qumicas, sendo essas dependentes do
grau de desacetilao e da distribuio mdia dos grupos acetamido
remanescentes ao longo da cadeia polimrica e da sua massa molecular.
Preparaes de quitosanas obtidas por N-desacetilao sob condies
heterogneas exibem um padro de distribuio em blocos e so insolveis em
gua (Muzzarelli, 1977; Dumitriu,2001; Hwang et al., 2002; Kumar et al., 2004;
Azevedo et al., 2007) (Kumirska et al., 2008).
As preparaes disponveis comercialmente possuem
que variam de
70 a 95% e massa molecular entre 104 a 106 g mol-1 . No entanto, os fornecedores
de quitina e quitosana comercial geralmente no mencionam a procedncia da
matria-prima e quais as partes do exoesqueleto dos crustceos foram
empregadas. Pouca ou nenhuma informao detalhada fornecida aos
processamentos das matrias-primas, sequncia de etapas e condies
empregadas em cada uma delas. Sendo assim, as caractersticas e a reatividade
da quitina comercial podem variar gerando resultados no reprodutveis e, portanto,
existe a necessidade de padronizar e otimizar os processos de obteno (Domard,
1987; Battisti e Campana Filho, 2008; Se-Kwon, 2010; Bof et al., 2015).
31
3.3 Aplicaes
A grande preocupao mundial em desenvolver produtos naturais mais

eficientes, biodegradveis e ambientalmente seguros retomou e intensificou as
pesquisas com quitina e quitosana, expresso pelo crescimento exponencial de
artigos publicados nas ltimas dcadas, como apresentado no grfico da FIG. 6.
Este aumento considervel pode ser atribudo s pesquisas no uso de quitina,
quitosana e seus derivados. A modificao qumica desses biopolmeros fornece a
eles novas propriedades funcionais para aplicaes nas mais diversas reas,
dentre elas a biomdica, indstria alimentar, cosmtica e qumica (Roberts, 1992;
Williams, 2001; Kumar et al., 2004; Silva et al., 2006; Azevedo et al., 2007, Pillai,
2009).
Atualmente, a quitosana aprovada na Itlia, Finlndia, Polnia, Estados
Unidos, Japo, China, Coria e em muitos outros pases asiticos em aplicaes
como cura de ferimentos, produtos para perda de peso e cosmticos. Produtos
base de quitosana esto disponveis em vrias formas: lquidos, ps, esferas,
filmes, tabletes, cpsulas, microesferas, micropartculas, esponjas, fibras e nano
fibras, compsitos inorgnicos e hidrogis. Em cada tipo de formulao as cadeias
de quitosana interagem de maneiras diferentes em consequncia das associaes
fsicas ou qumicas dos componentes. Na TAB. 2 apresentado um resumo de
alguns possveis mercados e a respectiva funo da quitosana (Kumar, 2000;
Kumar, 2004; Rinaudo, 2006; Denkbas e Ottenbrite, 2006; Kumirska et al., 2008;
Yao et al., 2012; Se-Kwon, 2013; Ioelovich, 2014).
32
35000
NMERO DE PUBLICAES 30000
25000
20000
15000
10000
5000
0
1988
2005
2010
1983
1984
1985
1986
1987
1989
1990
1991
1992
1993
1994
1995
1996
1997
1998
1999
2000
2001
2002
2003
2004
2006
2007
2008
2009
2011
2012
2013
2014
ANO
FIGURA 6 - Nmero de publicaes classificadas por relevncia nas ltimas trs dcadas
(1983-2014), pesquisadas utilizando o termo chitosan como palavra-chave em
<https://scholar.google.com.br> (Adaptado de Se-Kwon, 2013).
33
TABELA 2 - Possveis mercados consumidores de quitosana e sua respectiva

aplicabilidade em cada segmento.
POSSVEIS MERCADOS FUNO

Proteo de frutas e legumes;
Agricultura tratamento de sementes; rao animal;
indutor de auto resistncia.
Clarificao; fibras dietticas;
Alimentos recuperao de protenas; remoo de
taninos.
Auxiliar de fixao; revestimentos;
Papel e tecidos
tingibilidade.
Controle do colesterol; bandagem;
protetor ocular; pele artificial;
Medicina desintoxicao; dentifrcios; suturas;
sistemas de liberao controlada de
frmacos e molculas.
Emulsificante; umidificante; antiesttico;
Cosmticos emoliente; hidratante; espessante;
formadores de filme; encapsulante.
Imobilizao de enzimas e de clulas;
Biotecnologia encapsulao; auxiliar de filtrao;
revestimento de protenas.
Agente quelante ou complexante na
Tratamento de gua
remoo de corantes, lipdeos e metais.
34
A quitina possui uma baixa solubilidade na maioria dos solventes, o que

dificulta a sua aplicabilidade. J a quitosana possui o grupo amino suscetvel de
protonao em sua estrutura, o que proporciona um grande nmero de
modificaes qumicas por meio de rotas sintticas, tornando-a um material verstil.
(Kumar et al., 2004; Lima et al., 2006; Barros et al., 2006).
Na agricultura pode ser usada para estimular o crescimento de
microrganismos produtores de quitinases (famlia de enzimas que degradam a
quitina) que destroem nematdeos patgenos e seus ovos, alm de estimular o
crescimento de plantas (Silva et al., 2006).
A aplicao de revestimentos de quitosana na conservao ps-colheita
de vegetais e frutos frescos tem sido alvo de estudos de alguns autores. Os
pesquisadores avaliaram o efeito da quitosana no aumento do tempo de prateleira
e na inibio de fungos que promovem a deteriorao desses alimentos, sendo
estes responsveis por grande parte das perdas de frutas e hortalias. Esse
controle biolgico torna a quitosana um promissor substituto dos fungicidas
utilizados como mtodo de controle desses patgenos. A interao entre a
quitosana positivamente carregada e resduos ou superfcies microbianas
negativamente carregadas fundamental para uma ao inibitria do crescimento
de microrganismos, portanto, quanto maior for o percentual de desacetilao da
quitosana maior a sua atividade antimicrobiana (Assis e Leoni, 2003; Assis et al.,
2008).
A quitosana proporciona a reduo dos nveis de lipdios e triglicerdeos
graas ao seu carter catinico, o que permite a interao entre esses compostos
de carter aninico, reduzindo a absoro intestinal desses lipdeos. Alm disso,
oligmeros de quitina e quitosana apresentam importante papel em atividades
antitumorais, antimicrobianas, anti-inflamatrias, antioxidante, hipocolesterolmica
e podem acelerar a absoro de clcio e ferro (Pillai et al., 2009; Xia et.al., 2011).
A quitosana se comporta como uma base fraca, apresentando um pKa
de grupos amino variando entre 6,2 e 7,3, o qual influenciado pelo
e pela
densidade de carga. Os grupos animo quando protonados em pH abaixo de 5,5
proporcionam um carter catinico, o que possibilita a interao com superfcies ou
componentes aninicos, tais como a superfcie da pele e do cabelo, sendo este um
fator crucial para a utilizao da quitosana como um bioadesivo em formulaes
cosmticas com aplicaes destinadas a estes locais. A quitosana promove a
35
estabilizao de emulses em consequncia da sua estrutura possuir carter

anfiflico, na qual as interaes hidrofbicas ocorrem nos grupos acetamido,
enquanto os grupos amino e a hidroxila so os responsveis pelas interaes
hidroflicas. Alm disso, quitosanas de alta massa molecular promovem aumento
de viscosidade em meio cido, podendo fazer parte da composio de pastas de
dente, shampoos, cremes para mos e corpo (Roberts, 1992; Silva et al., 2006).
Como biomaterial, quitosanas so os mais promissores polissacardeos,
com grande potencial para o desenvolvimento de materiais reabsorvveis,
biologicamente ativos e implantes. Tais aplicaes incluem: carreador de frmacos,
cura de feridas, pele artificial, excipientes farmacuticos, suplementos dietticos,
dentre outros (Dumitriu, 2001; Williams, 2001; Xia et al., 2011).
3.4 Principais propriedades da quitina e quitosanas
Quitina e quitosanas podem ser obtidas com diferentes propriedades,

tornando-se um material verstil na confeco de produtos que atendam s
necessidades especficas de diversas reas, tais como medicina, cosmtica,
tratamento de gua e agricultura. Essas propriedades dependem basicamente do
grau de desacetilao e da massa molecular. Entretanto, necessrio que haja
uma caracterizao estrutural e qumica de modo a indicar o material adequado
para o desenvolvimento em questo. A proposta de se obter um modelo conciso
para analisar os principais parmetros fsico-qumicos dos materiais obtidos tornou-
se uma tarefa desafiadora mediante as exigncias de mercado (Shukla et al., 2013;
Ioelovich, 2014).
No existem padres definitivos para anlises de quitina e quitosanas
por se tratarem de materiais de origem natural. Inmeras publicaes propem
mtodos de caracterizao de quitina, quitosanas e seus derivados, mas os
modelos utilizados no fornecem dados conclusivos sobre a estrutura e
propriedades qumicas dos biopolmeros. Nesse sentido, o presente trabalho visou
a aplicao de tcnicas convencionais e simples de serem aplicadas com base nos
modelos e mtodos mais citados na literatura para caracterizar os materiais quanto
36
s suas principais propriedades: grau mdio de cristalinidade, ; grau mdio de

desacetilao,
e massa molar mdia viscosimtrica,
.
)
3.4.1 Grau mdio de cristalinidade (
A conformao molecular da quitina e da quitosana foi analisada por

difrao de raios X. Numerosos estudos de cristalografia de quitina e quitosana
foram importantes na determinao de suas estruturas. As conformaes
moleculares da quitina foram analisadas por Blackwell et al. na dcada de 1970.
Embora o primeiro padro de raios X para a quitosana tenha sido publicado em
1930, sua anlise completa foi concluda somente em 1990 (Urigami e Tokura,
2006).
3.4.1.1 Estrutura cristalina da quitina
Quanto a orientao das cadeias de quitina, foram encontrados trs

polimorfos: a -quitina, que possui cadeias antiparalelas encontrada em
estruturas rgidas como as carapaas de caranguejos e camares; a -quitina, que
possui cadeias paralelas, sendo mais maleveis e mais resistentes, fazendo parte
do esqueleto de alguns animais marinhos que necessitam de certa flexibilidade e a
-quitina que possui cadeias paralelas e antiparalelas, ainda no muito conhecida
e pode ser encontrada nos insetos (Battisti e Campana Filho, 2008; Ioelovich,
2014).
A -quitina a forma mais abundante; os polimorfos e -quitina so
convertidos em -quitina por tratamentos apropriados e irreversveis, o que indica
que a forma termodinamicamente mais estvel. O primeiro estudo de difrao
de raios X foi publicado por H. A. Gonell em 1926. Minke e Blackwell (1978)
analisaram a estrutura cristalina da -quitina obtida do tendo de lagosta. Na FIG.
7 representada sua clula unitria com os parmetros a = 0,474 nm; b = 1,886
nm e c (eixo da fibra) = 1,032, nm, = 90 (Rinaudo, 2006).
37
(a)
(b)
FIGURA 7 - Estrutura proposta para a -quitina: (a) projeo bc; (b) projeo ab (Urigami
e Tokura, 2006).
A clula contm duas sees de dissacardeos passando pelo centro e

pelo vrtice da projeo ab, na qual as cadeias de quitina leva a uma conformao
helicoidal duplo estendida, isto , a uma estrutura de ziguezague. As molculas de
quitina esto arranjadas em um modelo antiparalelo, ou seja, a direo das cadeias
do centro e do vrtice da clula unitria so opostas ao longo do eixo c. Cadeias
paralelas ao longo do eixo a formam estruturas lamelares por ligaes de
hidrognio intermolecular. As camadas formadas entre as cadeias do vrtice e do
centro da clula unitria so tambm ligadas por ligaes de hidrognio, originando
a estrutura rgida, caracterstica da -quitina (Urigami e Tokura, 2006, Rinaudo,
2006).
A forma encontrada nas penas de lulas, nos espinhos de
diatomceas, dentre outros. O estudo conformacional desse polimorfo foi iniciado
38
em 1950 por W. Lotmer e L. Picken, seguidos por N. Dweltz. A estrutura cristalina

mais detalhada foi analisada por K. Gardner e J. Blackwell em 1975. A clula
unitria da -quitina monoclnica com os parmetros a = 0,485 nm; b = 0,926 nm
e c (eixo da fibra) = 1,038 nm e = 97,5, representada na FIG. 8 (Urigami e Tokura,
2006, Rinaudo, 2006).
.
FIGURA 8 - Estruturas propostas para a -quitina (projeo nos eixos ab) (Urigami e
Tokura, 2006).
A conformao da cadeia da -quitina uma dupla hlice estendida,

similar da -quitina, porm as molculas se organizam em um modelo paralelo,
contendo somente uma sesso de dissacardeo na clula unitria. As cadeias
formam estruturas lamelares por ligaes de hidrognio ao longo do eixo a, mas
estas no esto presentes entre as cadeias ao longo do eixo b. A capacidade de
intumescimento da -quitina pode ser explicada pela incluso de molculas
pequenas entre suas camadas.
O terceiro polimorfo, a -quitina, foi encontrada no revestimento espesso
do estmago de Loligo sp. O arranjo das cadeias de quitina nessa estrutura foi
39
previsto como sendo nas direes baixo, baixo, cima, sendo considerada uma
mistura dos polimorfos e - quitina. Na FIG. 9 apresentado esquematicamente
o arranjo dos trs polimorfos de quitina (Urigami e Tokura, 2006).
FIGURA 9 - Orientaes das cadeias polimricas nas diferentes formas de quitina

(Roberts, 1992).
3.4.1.2 Estrutura cristalina da quitosana
Quatro polimorfos de quitosana foram encontrados por meio de medidas

de difrao de raios X: trs formas hidratadas e uma forma anidra. O primeiro
padro de raios X de quitosana com base no tendo de lagosta por N-desacetilao
foi determinado em 1936, por G. Clarck e A. Smith e chamado de polimorfo
tendo. Foi analisado 60 anos mais tarde, por Okuyama et al., em 1997. As cadeias
de quitosana e oito molculas de gua esto empacotadas em uma clula unitria
ortorrmbica com os parmetros a = 0,895 nm; b = 1,697 nm e c (eixo da fibra) =
1,034 nm. Cada cadeia de quitosana possui uma conformao de dupla hlice
estendida, formando uma estrutura de ziguezague, como encontrado para a -
quitina. As cadeias de quitosana esto empacotadas em modelo antiparalelo ao
longo do eixo c, ligadas por ligaes de hidrognio ao longo do eixo b, formando
estruturas lamelares ao longo do eixo a. As molculas de gua presentes entre
essas camadas estabilizam a estrutura cristalina, sendo este o polimorfo mais
abundante da quitosana, representado pela FIG. 10 (Urigami e Tokura, 2006,
Rinaudo, 2006).
40
(a)
(b)
FIGURA 10 - Empacotamento da estrutura do tendo polimorfo (hidratado). (a) projeo

bc; (b) projeo ab (Urigami e Tokura, 2006).
Os outros dois polimorfos hidratados foram chamados de Form II e L-2,

sendo a conformao desse ltimo similar do polimorfo tendo. O cristal do Form
II no foi analisado, mas acredita-se que ele seja semelhante aos outros dois
polimorfos.
A clula unitria do polimorfo anidro ortorrmbica, cujos parmetros
so a = 0,828 nm; b = 0,863 nm e c (eixo da fibra) = 1,043 nm. A direo da cadeia
ao longo do eixo c antiparalela, com conformao similar do polimorfo tendo.
41
Entretanto, ao contrrio das formas hidratadas, as cadeias ao longo do eixo c so

paralelas e ligadas por ligaes de hidrognio s cadeias vizinhas ao longo do eixo
b, formando estruturas lamelares ao longo do eixo a. Na FIG. 11 apresentada a
projeo da estrutura cristalina desse polimorfo (Urigami e Tokura, 2006).
FIGURA 11 - Estrutura cristalina do polimorfo anidro da quitosana nas projees ab e bc

(Urigami e Tokura, 2006).
42
3.4.1.3 Difrao de raios X
A principal aplicao da difrao de raios X refere-se identificao de

domnios cristalinos e dois tipos de informaes estruturais podem ser obtidos:
estrutura eletrnica e estrutura geomtrica. Os planos de difrao e suas
respectivas distncias interplanares, bem como as densidades de tomos ao longo
de cada plano cristalino, so caractersticas especficas e nicas de cada
substncia, assim como o padro difratomtrico por ela gerado. No caso dos
polmeros, a presena de ramificaes ou grupos substituintes nas cadeias afeta
seu empacotamento gerando domnios no-cristalinos. A anlise dos difratogramas
permite identificar as amostras com base na diminuio das intensidades e
alargamento dos sinais. Na FIG. 12 mostrado um modelo esquemtico de um
difratmetro de raios X.
FIGURA 12 - Modelo esquemtico de um difratmetro de raios X (Laboratrio de Fsica

Moderna (UNICAMP), acesso em 24 jul. 2015).
Ioelovich (2014) sugere que a avaliao das caractersticas estruturais

de quitina e quitosana, em termos de contedo da fase cristalina ou grau mdio de
cristalinidade (), inconclusiva ou limitada. Muitos estudos avaliaram o ndice de
cristalinidade (ICr), que se baseia no clculo da razo da altura dos picos, dado por:
ICr = (Io Iam)/Io, no qual Io a altura do pico cristalino e Iam a altura do
espalhamento amorfo. Este parmetro pode indicar o quo alta ou baixa a
cristalinidade do material, mas no est de acordo com o conceito de grau de
cristalinidade, que se refere ao peso da frao cristalina no polmero. Estudos
mostraram diversas maneiras para a execuo dos clculos usando a altura dos
43
picos de difrao dos planos cristalinos (110) e (020) e as alturas do espalhamento

amorfo em 2 = 12, 12,5 ou 16 com ou sem a subtrao do background. Outras
formas de se calcular o ICr baseou-se na diviso da rea total do difratograma pela
soma das reas cristalina e background. Para uma mesma amostra de quitosana,
por exemplo, os valores encontrados para o ICr variaram de 0,4 a 0,8 utilizando
diferentes mtodos, mostrando resultados inconclusivos sobre a cristalinidade de
quitina e quitosana (Ioelovich, 2014).
Algumas condies para se analisar quantitativamente o de
difratogramas de raios X so enumeradas a seguir e demonstradas nas FIG. 13 e
14 (Ioelovich, 2014):
A amostra deve estar na forma de p no texturizado;
O background deve ser subtrado;
O difratograma experimental deve ser corrigido;
As reas de espalhamento relacionadas aos domnios cristalinos e
amorfo devem ser separados do difratograma corrigido;
A intensidade integrada (rea) do espalhamento cristalino e amorfo
deve ser usada para calcular o grau de cristalinidade, pela Equao 1.
X = Icr d / Io d = Fcr/(Fcr + Fam) (1)
onde Io a intensidade total do difratograma corrigido depois da subtrao do

background; Icr a intensidade do espalhamento cristalino; Fcr a rea do
espalhamento cristalino; Fam a rea do espalhamento amorfo (Ioelovich, 2014).
44
FIGURA 13 - Ilustrao do mtodo para determinao do grau de cristalinidade de quitina

(Ioelovich, 2014).

quitosana (Ioelovich, 2014).
45
)
3.4.2 Grau mdio de desacetilao (
A quantidade de grupos amino das quitosanas a principal razo para

as diferenas entre suas estruturas, propriedades fsico-qumicas, biolgicas e
funes quelante e floculante. O grau mdio de desacetilao,
, indica o nmero
mdio de unidades GlcN livres distribudos ao longo das cadeias polimricas;
calculado pela razo da quantidade de GlcN pela soma da quantidade de GlcN e
GlcNAc. considerado o mais importante parmetro na caracterizao de quitina
e quitosanas, bem como na diferenciao dos dois biopolmeros (Xia et al., 2011;
Croisier e Jrme, 2013; Hussain et al., 2013).
A versatilidade da quitosana est relacionada no somente ao contedo
de grupos amino, mas no padro de substituio do componente em menor
quantidade (GlcN em quitina e GlcNAc em quitosana). Existem muitos mtodos de
aumentar ou diminuir o
das quitosanas. Na prtica, quitosanas so obtidas pelo
processo de desacetilao com hidrxido de sdio quente (FIG. 15). Neste caso,
o controle das condies de reao (temperatura e concentrao dos reagentes)
poderia ser um mtodo indicado para se obter o material com o
desejado.
Quitosanas comerciais so fornecidas com
que variam de 70-90%. Quitosanas
> 95% podem ser preparadas submetendo o material a mais uma etapa de
com
desacetilao, no qual frequentemente acarreta na sua despolimerizao, alm de
aumentar os custos do processo (Roberts; 1992; Hussain et al., 2013).
46
FIGURA 15 - Reao de desacetilao de quitina em quitosana (Shukla et al., 2013).
Muitos mtodos tm sido usados para a determinao do

(TAB. 3).
Alguns desses mtodos so demorados, caros e destrutivos da amostra, alm de
no apresentarem correlaes entre si. Os mtodos so geralmente escolhidos
conforme a disponibilidade de infraestrutura e de insumos.
47
TABELA 3 - Principais tcnicas utilizadas na determinao do grau mdio de

, e suas respectivas referncias (apud Hussain et
desacetilao,
al., 2013).
MTODO REFERNCIA
Domszy e Roberts, 1985; Sabnis e Block, 1997;

Espectrocpia no Infravermelho (IV)
Brugnerotto et al. 2001
Espectroscopia de Dicrosmo Circular Domard, 1987
Espectroscopia no Ultravioleta (UV) Muzzarelli, 1985; Tan et al., 1998
Espectroscopia de Ressonncia Shigemasa et al., 1996; Lavertu et al., 2003;

Magntica Nuclear (RMN) Zhang et al., 2005
Titulao Potenciomtrica Linear Ke e Chen, 1990; Jiang et al., 2003; Balzs e
(TPL) Sipos, 2007
Teste com Ninidrina Curotto e Aros, 1993
Determinao Enzimtica Nanjo et al., 1991
Shigehiro et al., 1981; Kasaai et al., 2000; Gong

Anlise Elementar
et al., 2003; Gupta e Jabrail, 2006
Cromatografia Gasosa (CG) Aiba, 1986
Titulao cido-base Domszy e Roberts, 1985; Baxter et al., 1992

48
3.4.2.1 Espectroscopia na regio do infravermelho (IV)
A espectroscopia na regio do infravermelho (IV), como todas as outas

tcnicas espectroscpicas, depende da interao das molculas ou tomos com a
radiao eletromagntica. A radiao no infravermelho faz com que os tomos dos
compostos vibrem com amplitude aumentada ao redor das ligaes covalentes que
os unem. Uma vez que os grupos funcionais das molculas orgnicas incluem um
arranjo especfico de tomos ligados, a absoro da energia no IV ocorre de
maneira caracterstica para cada molcula. Por isso, considerada uma tcnica
importante na anlise de compostos orgnicos (Solomons e Fryhle, 2005).
O espectrmetro (FIG. 16) registra o resultado na forma de uma banda
de absoro, reproduzidos em um grfico de tempo contra a intensidade do sinal
denominado de interferograma. Existe uma relao entre o interferograma e os
valores de seno e cosseno das ondas eletromagnticas que o origina. A converso
para espectro envolve o tratamento matemtico do interferograma por uma srie de
equaes complexas, denominadas Transformadas de Fourier, desenvolvidas pelo
matemtico Jean-Baptiste Fourier (17681830). O computador separa o
interferograma em seus componentes, analisa cada um, recompe e o transforma
em espectro.
FIGURA 16 - Modelo esquemtico de um espectro com transformada de Fourier

(Solomons e Fryhle, 2005).
49
O uso da espectroscopia no IV possui como principais vantagens:

anlise relativamente rpida; o aparato instrumental encontrado na maioria dos
laboratrios acadmicos e de pesquisa e desenvolvimento e, desde que seja
estabelecido um padro de referncia interna para que seja corrigida a variao de
material no feixe, a pureza da amostra no precisa ser determinada
separadamente. O padro de referncia tambm necessrio para compensar a
espessura no caso de se utilizar filmes ou a concentrao no caso de amostras na
forma de p nas pastilhas de KBr, sendo este ltimo o mais utilizado por permitir
que o mtodo seja aplicado em amostras insolveis (Moore e Roberts, 1980;
Roberts, 1992).
de quitina e quitosanas, duas bandas de absoro
Para determinar o
devem ser selecionadas: uma banda caracterstica, representando a amida do
grupo N-acetil-D-glucosamina e a banda de referncia que representa um grupo
presente em ambos os monmeros N-acetil-D-glucosamina e D-glucosamina. A
rea dessas bandas delimitada por segmentos obtidos no espectro de IV,
denominados linhas de base. Uma relao linear pode ser determinada mediante a
relao entre a razo dessas reas em funo do
(Dimzon e Knneper, 2015).
Roberts (1992) cita que foram propostas quatro razes de banda de
absoro para anlises de quitina e quitosanas, A1655/A3450; A1550/A2878; A1655/A2867 e
A1554/A897, diferindo entre si tanto na banda selecionada para determinar a
concentrao do grupo N-acetil (numerador) quanto na de referncia
(denominador). Entretanto, a primeira razo possui uma srie de vantagens perante
as outras: a concentrao de grupos N-acetil pode ser determinada pela
absorbncia da banda de amida I em 1655 cm -1 referente ao estiramento de C=O
de grupos amida; a banda em 3450 cm-1 proeminente e relativamente isolada,
sendo estes dois atributos importantes na escolha da banda de referncia. O uso
da banda em 2878 cm-1 ou 2867 cm-1 como banda de referncia complicado em
razo da interferncia da banda de absoro de estiramento de O-H, que ocorre
em frequncias em torno de 3450 cm-1. Alm disso, a banda de referncia interna
no depende do contedo de grupos N-acetil, o que descarta o uso das bandas em
2878 cm-1 ou 2867 cm-1, uma vez que as vibraes de estiramento C-H ocorrem na
faixa de frequncia de 2853-2962 cm-1, podendo a intensidade dessas bandas
variar por causa do
. A ltima razo proposta tambm pode ser descartada, pois
50
ambas as bandas em 1554 cm-1 e 897 cm1 so referentes deformao angular de

N-H de grupos amina (Roberts, 1992; Solomons e Fryhle, 2005).
Apesar de ser a tcnica mais discutida na literatura, a espectroscopia no
IV necessita de calibrao, o que geralmente feito utilizando-se tcnica absoluta,
como por exemplo, titulao, RMN e CG. No trabalho realizado por Brugnerotto et
al. (2001), foi discutido o uso da espectroscopia no IV para determinao do
de
quitina e quitosanas. Primeiramente, os autores construram um modelo de anlise
comparando os espectros das unidades monomricas dos biopolmeros, GlcNAc e
GlcN apresentados nas FIG. 17 e 18. Os autores compararam a glucosamina e a
sua forma cloridrato e no foi observada nenhuma modificao significativa no
espectro, portanto, o grau de protonao da amostra no influencia.
FIGURA 17 - Espectro de IV da N-acetil-D-glucosamina e representao das linhas de

base adotadas (Brugnerotto et al., 2001).
51
FIGURA 18 - Espectro de IV da D-glucosamina (a) na forma cloridrato; (b) na forma

amina (Brugnerotto et al., 2001).
Uma banda especfica em 1320 cm-1 apareceu para GlcNAc e a banda

em 1650 cm-1, frequentemente citada na literatura como banda especfica,
apareceu para ambos os monmeros; a banda em torno de 2900 cm-1 no pode
ser distinguida no espectro da GlcN, o que corrobora a no utilizao de bandas
nessa regio como referncia. Para tal, foram avaliadas duas possibilidades: uma
banda larga centrada em 3350 cm-1 (prxima da regio de 3450 cm-1) e outra em
1420 cm-1, ambas susceptveis aos dois monmeros. Uma curva de calibrao foi
construda em funo da composio dos dois monmeros e apresentou
concordncia entre os dados experimentais e os calculados por modelagem
computacional (Brugnerotto et al., 2001).
Os autores analisaram amostras de quitina e quitosanas de vrias
origens e caracterizadas quanto ao seu grau mdio de acetilao,
, utilizando
tcnicas absolutas, como mostrado na TAB. 4. Os espectros no IV das amostras
foram analisados utilizando os mesmos procedimentos e linhas de base,
apresentadas na FIG. 19. Duas relaes foram propostas, como mostram as
Equaes 2 e 3:
52
1320
= 0,00226 GA + 0,03146 r= 0,97 (2)
3450
1320
= 0,03133 GA + 0,3822 r= 0,99 (3)
1420
FIGURA 19 - Representao das diferentes linhas de base testadas e mencionadas por

Brugnerotto et al. (2001).
53
TABELA 4 - Identificao das amostras utilizadas por Brugnerotto et al. (2001) e

determinados por tcnicas absolutas.
seus respectivos
AMOSTRA FONTE (GA) TCNICA

1 Casca de caranguejo 0,5 RMN 1H lquido
3 Casca de caranguejo 2 RMN 1H lquido
4 Casca de camaro 3 RMN 1H lquido
5 Casca de camaro 6 RMN 1H lquido
7 Casca de camaro 8,3 RMN 1H lquido
9 Casca de camaro 9,6 RMN 13C CP/MAS estado slido
11 Casca de caranguejo 11,2 RMN 13C CP/MAS estado slido
13 Casca de camaro 13,2 RMN 1H lquido
14 Pena de lula 13,8 RMN 13C CP/MAS estado slido
15 Casca de lagosta 20,1 RMN 1H lquido
RMN 1H lquido e RMN 13C
16 Casca de caranguejo 21
CP/MAS estado slido
24 Casca de caranguejo 97 RMN 13C CP/MAS estado slido
54
3.4.2.2 Mtodo de titulao cido-base
A solubilidade de quitina e quitosanas tem sido amplamente investigada

uma vez que essa propriedade influencia no comportamento dos biopolmeros e
nas tcnicas utilizadas em suas caracterizaes. A solubilidade um parmetro
, da concentrao inica, do pH, da
difcil de controlar, uma vez que depende do
natureza do cido utilizado na protonao e na distribuio da unidades GlcNAc e
GlcN (Rinaudo, 2006).
A quitina altamente hidrofbica e, portanto, insolvel em gua e na
maioria dos solventes orgnicos em consequncia da sua rgida estrutura cristalina.
No entanto, h relatos da sua solubilidade em clorolcoois em conjugao com
solues aquosas de cidos minerais, tais como cido clordrico concentrado, cido
sulfrico concentrado, cido fosfrico (78-97%) e cido metano sulfnico, embora
a massa molecular da quitina comece a diminuir logo aps a dissoluo; N,N-
dimetilacetamida (DMAc) contendo 5% de cloreto de ltio, tetrxido de dinitrognio,
N,N-dimetilformamida (DMF), hexafluoroisopropanol e hexafluoroacetona
sesquiidratado foram considerados solventes moderados para a quitina. O cloreto
de clcio diidratado saturado com metanol ou etanol, um dos solventes do Nylon 6-
6, incluindo o cido frmico, foi tambm considerado um bom solvente para a
quitina (Kumar, 2000; Urigami e Tokura, 2006).
A quitosana insolvel em gua, mas solvel em solues aquosas
de cidos diludos, formando sais com os contra ons. Esse fato permite determinar
o contedo de grupos animo utilizando o mtodo de titulao cido-base, no qual
uma amostra de quitosana dissolvida em excesso de cido e titulada com NaOH
de concentrao conhecida (Roberts, 1992).
A tcnica de titulao condutimtrica para determinao da
concentrao de grupos amino em quitosanas foi proposta por Raymond et al.
(1993). A tcnica muito sensvel e baseia-se na adio de um eletrlito soluo
de outro eletrlito em condies que no provoquem aprecivel alterao do
volume, na qual a condutncia ser afetada pela ocorrncia ou no de reaes
inicas. A condutncia de uma soluo eletroltica em qualquer temperatura
depende somente dos ons presentes e de suas respectivas concentraes. Possui
como desvantagem o fato de qualquer espcie com carga eltrica presente na
55
soluo analisada contribuir para condutncia total, levando a falsos resultados

(Raymond et al., 1993; Haris, 2005).
A curva de titulao possui dois pontos de inflexo, na qual a diferena
entre eles ao longo da abscissa corresponde a quantidade de cido necessria para
protonar os grupos anino, como mostrado na FIG. 20, e sua concentrao pode ser
determinada pela Equao 4 (Roberts, 1992; Santos et al., 2003).
16,1 . [] . (2 1 )

= (4)

onde V1 o volume de base utilizado para a neutralizao de HCl em excesso; V 2

V1 o volume de base usado para a neutralizao dos grupos amino protonados
da quitosana, [base] a concentrao de base usada e m a massa da amostra
de quitosana .
4,0
Condutividade (mS cm )
-1
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
0 1 2 3 4 5 6
Volume de NaOH (mL)
FIGURA 20 - Curva de titulao condutimtrica obtida experimentalmente para uma

amostra de quitosana comercial.
56
)
3.4.3 Massa molecular mdia (
Os materiais polimricos se diferenciam dos demais por possurem

longas cadeias, isto , possuem alta massa molecular (MM), o que influencia nas
suas propriedades fsico-qumicas de modo que o seu conhecimento e controle so
de fundamental importncia. Essa influncia ocorre de maneira assinttica, na qual
as variaes de MM provocam maiores alteraes nas propriedades quando
ocorrem em molculas de baixa MM, comparadas com as de alta MM, como
mostrado na FIG. 21. Cadeias so consideradas polimricas quando a MM
superior a 10.000 Daltons ou g mL-1. Valores abaixo deste e no menores que 1.000
Daltons so considerados oligmeros, e cadeias polimricas com MM acima de
250.000 Daltons so consideradas de alta MM (Canevarolo Jnior, 2006).
FIGURA 21 - Variao de uma determinada propriedade do polmero em funo de sua

massa molecular (Canevarolo Jnior, 2006).
A MM de um polmero no pode ser calculada como normalmente feito

com compostos puros de baixa massa molecular, tornando-o um parmetro difcil
de ser determinado. necessrio encontrar um meio para definir a MM e a sua
distribuio. O valor encontrado vai depender do mtodo escolhido e, dependendo
das consideraes feitas no transcorrer da deduo matemtica, pode-se obter
57
vrios tipos de massas moleculares mdias tais como (Lucas et al., 2001;
Canevarolo Jnior, 2006):
a) Massa molecular mdia numrica (
): obtida dividindo-se as
cadeias em sries de faixas de tamanhos (i) e determinando a frao numrica de
cadeias de cada faixa de tamanho, definida como sendo o nmero de molculas
(Ni) do polmero de massa molar (Mi), dividido pelo nmero total de cadeias
(Equao 5). As principais tcnicas utilizadas para determinao da
so anlise
de fins de cadeia (por titulao, espectroscopia no infravermelho ou ultravioleta),
propriedades coligativas (osmometria, ebuliometria, crioscopia) e cromatografia por
escluso de tamanho.

= = (5)

b) Massa molecular mdia ponderal (

): baseada na frao de
massa (wi) de molculas dentro das vrias faixas de tamanho, contribuindo de
maneira ponderada para o clculo da mdia (Equao 6). Pode ser determinada
por espalhamento de luz, ultracentrifugao e por cromatografia por excluso de
tamanho.

= (6)

c) Massa molecular mdia viscosimtrica (

): a viscosidade de
solues diludas em funo do volume hidrodinmico do soluto na soluo, ou
seja, quanto maior sua massa molecular mais viscosa a soluo. Medidas da
viscosidade de solues polimricas diludas permitem o clculo de uma massa

molar viscosimtrica mdia e os valores esto mais prximos de do que para
para um polmero polidisperso (Equao 7).
1/
( )1+

= ( ) (7)

onde a uma constante que depende do polmero, do solvente e da temperatura.

58
d) Massa molecular Z-mdia (

): leva em considerao a massa
molecular de cada frao do polmero, sendo mais sensvel s fraes de mais alta
massa molecular do que s mdias inferiores. Essa mdia pode ser determinada
com base na aplicao dos dados obtidos por ultracentrifugao na Equao 8.
( )3
=
(8)
2
( )
A curva apresentada na FIG. 22 uma distribuio ponderal das vrias

massas moleculares existentes, conhecida por Curva de Distribuio de Massa
Molecular.
FIGURA 22 - Curva tpica de distribuio de massa molecular de uma amostra polimrica

para os quatro valores mdios principais, em que = massa molecular mdia numrica
mdio;
= massa molecular mdia viscosimtrica mdio;
= massa molecular mdia

ponderal e = massa molecular Z-mdia (Lucas et al., 2001).
3.4.3.1 Viscosimetria
Como visto, diferentes tcnicas para se determinar a massa molecular

de um polmero podem ser empregadas. Entretanto, a determinao da massa
molecular por medidas de viscosidade intrnseca um mtodo simples e barato
para a caracterizao de quitosanas, apesar de no ser um mtodo absoluto e
59
exigir a determinao de constantes mediante a correlao de nmeros de

viscosidade limite (viscosidade intrnseca) e massas moleculares determinados por
um mtodo absoluto (Roberts e Domszy, 1982; Canevarolo Jnior, 2006).
A viscosidade um termo comumente conhecido que descreve as
propriedades de escoamento de um fluido, ou seja, o atrito das camadas internas
dentro do fluido que impe resistncia a fluir. A fluidez de uma soluo polimrica
pode ser afetada por qualquer condio que controle as dimenses das cadeias
polimricas, tais como, extenso das cadeias (massa molecular); rigidez das
cadeias; interao polmero-solvente; tipo de solvente; densidade do meio;
concentrao; temperatura; vazo da soluo, dentre outras.
Medidas de viscosidade de solues so normalmente feitas pela
comparao entre o tempo de escoamento, t, requerido para que um dado volume
de soluo polimrica passe atravs de um tubo capilar, e o tempo requerido para
o escoamento do solvente puro, to. A viscosidade da soluo polimrica, , maior
que a do solvente puro, o. A concentrao das solues no deve ser muito alta,
pois dificulta a extrapolao para dissoluo infinita. Tem-se observado que se
deve escolher a concentrao de modo que /o, recaia numa faixa de 1,1 a 1,5,
sendo esta considerada uma regio de linearidade do fenmeno (Canevarolo
Jnior, 2006).
Na TAB. 5 so apresentadas as definies das viscosidades utilizadas,
obtidas por vrias medidas do tempo de escoamento, t, das solues polimricas
em diferentes concentraes e do solvente puro (to), usadas para o clculo de
.
60
TABELA 5 - Definies das viscosidades utilizadas (Michel, 2015).
NOME
SMBOLO UNIDADE
COMUM DEFINIO
Mede o quanto a viscosidade
Viscosidade
rel = t/to adimensional da soluo maior do que a
Relativa
viscosidade do solvente puro.
Mede o quanto a diferena
de viscosidade entre a
Viscosidade sp = rel 1 = (-o)/o =
adimensional soluo e o solvente maior
Especfica (t-to)/to
do que a viscosidade do
solvente puro.
Indica o ganho de
Viscosidade viscosidade promovido por
red = sp/c [c-1] = dL/g
Reduzida unidade de concentrao do
polmero.
Permite que tanto variaes
pequenas quanto variaes
muito grandes da viscosidade
Viscosidade
inh = [ln(rel)]/c [c-1] = dL/g da soluo, em relao do
Inerente
solvente, possam ser
expressas em um mesmo
eixo.
Indica o ganho de
viscosidade promovido por
unidade de concentrao do
Viscosidade [] = (sp/c)c0 = [ln polmero, na situao em que
[c-1] = dL/g
Intrnseca (rel)/c]c0 as molculas apresentam
comportamento
independente umas das
outras.
A equao de Mark-Houwink relaciona a viscosidade intrnseca de uma

soluo polimrica e a massa molecular do polmero (Equao 9):
)a
[] = k ( (9)
61
onde [] a viscosidade intrnseca, a a mesma constante da Equao 6 e est

relacionada com a conformao e k uma constante que depende do polmero, do
solvente e da temperatura.
Essas constantes so avaliadas experimentalmente por meio das
viscosidades intrnsecas de solues de polmeros para os quais a massa
molecular tenha sido determinada por um mtodo absoluto. Desde 1974, vrios
autores tm relatado valores para k e a para quitosanas em vrios sistemas de
solventes e temperaturas, o que causa confuses em aplicaes prticas. O

das amostras de quitosanas utilizadas uma das principais razes para as
diferenas encontradas. A densidade linear de carga na cadeia aumenta com o
aumento do grau de desacetilao e isso pode originar um aumento gradual na
viscosidade intrnseca em razo da expanso da cadeia enovelada. A quitosana
comporta-se como um polietrlito em solues aquosas de cido diludo. Por isso,
a escolha de um bom sistema de solvente para a caracterizao de quitosana deve
incluir um cido para a protonao e um sal no intuito de evitar a interao
eletrosttica e, cosequentemente, a formao de agregados, comum em solues
de polissacardeos (Roberts e Domszy, 1982; Wang et al., 1991; Knaul et al., 1998;
Rinaudo, 2006).
Roberts e Domszy (1982) determinaram valores de massa molecular por
espectroscopia de absoro pela tcnica de anlise de grupo terminal medindo a
concentrao desses grupos pela formao do derivado de fenilozazona de
quitosana por reao de reduo com fenilidrazina. Para determinao da [] dos
derivados foi utilizado o sistema de solventes cido actico 0,1 M / cloreto de sdio
0,2 M temperatura de 25C. As constantes viscosimtricas a e k foram
determinadas com base no grfico de log
versus log[]. O termo
foi
substitudo pelo
pelo fato de a ser adimensional e a amostra polidispersvel.
Aps o tratamento dos dados, a anlise de regresso linear forneceu como valores
para as constantes a = 0,93 e k = 1,81.10-3 cm3 g-1. Esses valores so bastante
citados na literatura pelo fato deles terem utilizado amostras preparadas com
valores de mdia a alta massa molecular, cada qual contendo uma estreita
distribuio (Roberts e Domszy, 1982; Kumar, 2000).
62
4 MATERIAIS E MTODOS
4.1 Fluxograma de trabalho
FIGURA 23 - Fluxograma de trabalho.

63
4.2 Materiais
Lista de Reagentes:
cido Actico P.A. 99% Vetec

cido Clordrico P.A. 37% Vetec
lcool Etlico Absoluto P.A. 99,7% Alphatec
Brometo de Potssio P.A. 99% Synth
Cloreto de Sdio P.A. 99% Casa Americana Ltda.
Hidrxido de Amnio P.A. 28% - Synth
Hidrxido de Sdio P.A. 99%- Alphatec
75-85% - Sigma-Aldrich
Quitosana de massa molecular mdia e
Resduos de cascas de camaro de espcies no identificadas
fornecidas pela Trade Solues em Resduo Ltda. - Canania, SP Brasil.
4.3 Obteno das amostras de quitina
As amostras de -quitina do presente estudo foram obtidas por dois

procedimentos diferentes, de acordo com o fluxograma apresentado na FIG. 24,
denominados procedimento 1 (P1) e procedimento 2 (P2), nas quais as etapas de
desproteinizao (DP) e desmineralizao (DM) foram invertidas (Battisti e
Campana Filho, 2008).
64
FIGURA 24 - Fluxograma do processo de obteno das amostras de -quitina.

65
As cascas de camaro utilizadas para obteno das amostras de -

quitina e quitosanas foram coletadas no segundo trimestre de 2013 e fornecidas
pela empresa Trade Solues em Resduo Ltda., localizada em Canania-SP,
Brasil. No pr-tratamento, as cascas foram lavadas com gua potvel para retirada
de areia e sujeiras, centrifugadas para eliminar o excesso de gua e submetidas
secagem em estufa com ventilao forada e temperatura de 60 C por 1 hora.
Aps a secagem, foram modas em moinho de facas, segundo informaes do
fornecedor. Na TAB. 6 apresentada a composio granulomtrica em termos da
distribuio percentual do tamanho de partcula da biomassa utilizada nos
procedimentos descritos a seguir.
Tabela 6 - Ensaio de granulometria das cascas de camaro modas utilizadas no

processo de obteno da quitina e quitosanas analisadas no presente
estudo.
Peneira (mm) 0,420 0,250 0,149 0,074 0,061 Fundo
Porcentagens
11 28 18 22 5 16
retidas (%)
Procedimento 1
Na etapa de desproteinizao (DP), 160 g de cascas secas e modas
foram suspensos em 1,0 L de soluo de NaOH nas concentraes apresentadas
na TAB. 7. O sistema foi mantido em banho-maria, no qual a temperatura de reao
foi de 80 3 C por 30 minutos, sob agitao mecnica. Aps esse tempo, a
amostra foi lavada com gua potvel at obteno da neutralidade e, em seguida,
uma vez com gua destilada. A amostra foi submetida mais duas vezes ao
tratamento alcalino nas mesmas condies.
Na etapa de desmineralizao (DM), a biomassa desproteinizada foi
adicionada a 1,0 L de soluo de HCl a 20% (v/v), temperatura ambiente
(aproximadamente 25 C), pelo perodo de tempo definido na TAB. 7. O material
slido resultante deste tratamento foi lavado com gua potvel at a obteno da
neutralidade e, em seguida, uma vez com gua destilada. Esse procedimento foi
realizado uma vez. O material obtido foi seco temperatura ambiente.
66
Procedimento 2
Similar ao P1, na etapa de DM, 160 g de cascas secas e modas foram
suspensos em 1,0 L de soluo de HCl a 20% (v/v), temperatura ambiente
(aproximadamente 25 C), pelo perodo de tempo definido na TAB. 7. O material
slido resultante deste tratamento foi lavado com gua potvel at a obteno da
neutralidade e, em seguida, uma vez com gua destilada. Esse procedimento foi
realizado uma vez.
Na etapa de DP, a biomassa desmineralizada foi adicionada a 1,0 L de
soluo de NaOH nas concentraes de acordo com a TAB. 7. O sistema foi
mantido em banho-maria, no qual a temperatura de reao foi de 80 3 C por 30
minutos, sob agitao mecnica. Aps esse tempo, a amostra foi lavada em gua
potvel at obteno da neutralidade e, em seguida, uma vez com gua destilada.
A amostra foi submetida mais duas vezes ao banho alcalino nas mesmas
condies. O material obtido foi seco temperatura ambiente.
As amostras de -quitina do P1 foram denominadas de Qn e as do P2 de

Qn, cujo n o nmero da amostra.
TABELA 7 - Obteno das amostras de -quitina em funo da concentrao de

NaOH na etapa de desproteinizao e do tempo de reao das
cascas em HCl na etapa de desmineralizao.
HCl (tempo, h) 4 8 12
NaOH (%)
2 Q1 Q2 Q3
5 Q4 Q5 Q6
10 Q7 Q8 Q9
4.4 Obteno das amostras de quitosanas
Para a obteno das amostras de quitosanas, aproximadamente 30 g

de cada amostra de -quitina obtida foram lavados com 500 mL de lcool etlico
99,7% por aproximadamente 2 horas em sistema Soxhlet para retirada dos
pigmentos. Aps a secagem temperatura ambiente, a amostra foi adicionada a
1,0 L de soluo de NaOH, em banho-maria, no qual a temperatura de reao foi
67
de 110 3 C, sob agitao mecnica. As concentraes de reagente e o tempo de

reao esto descritos na TAB. 8. A lavagem do produto final foi feita at a obteno
da neutralidade e, em seguida, uma vez com gua destilada. Esta etapa exigiu
muita cautela por causa das altas concentraes de NaOH utilizadas para
desacetilao (DA). Como feito para as amostras de -quitina, as amostras de
quitosana do P1 foram denominadas de Qtn e as do P2 de Qtn.
TABELA 8 - Obteno das amostras de quitosanas em funo da concentrao de

NaOH e do tempo de reao na etapa de desacetilao.
NaOH (tempo, h) 2 4 6
NaOH (%)
30 Qt1 Qt2 Qt3

40 Qt4 Qt5 Qt6
50 Qt7 Qt8 Qt9
68
4.5 Caracterizao das amostras de -quitina e quitosanas
Os principais parmetros fsico-qumicos avaliados das amostras obtidas

,
foram , e a morfologia e podem variar dependendo do mtodo de
purificao adotado, (Hattori e Ishihara, 2015). Sendo assim, para todos os ensaios
realizados, as amostras foram pulverizadas e analisadas sem passar por nenhum
processo de purificao a fim de avaliar as reais modificaes nos produtos finais
em consequncia do tratamento adotado. O software Origin Lab. 9.0 foi utilizado
para o tratamento dos dados e a anlise estatstica dos resultados. A quitosana da
Sigma-Aldrich foi utilizada como padro analtico para comparar os resultados das
,
amostras obtidas quanto aos parmetros , .
4.5.1 Anlise morfolgica por microscopia eletrnica de varredura
A microscopia eletrnica de varredura (MEV) foi a tcnica utilizada para

avaliar as caractersticas morfolgicas dos ps das amostras de -quitina e
quitosanas. As anlises foram realizadas, sem recobrimento no microscpio
eletrnico de varredura Tabletop Microscope modelo TM3000 localizado no
Laboratrio de Microscopia do Centro de Cincias e Tecnologia de Materiais
(CCTM) do IPEN/CNEN-SP.
4.5.2 Percentual de material insolvel nas amostras de quitosanas
O contedo de material insolvel nas amostras de quitosanas foi

determinado mediante a dissoluo de 5 g de cada amostra em 500 mL de soluo
de cido actico a 1% (v/v). O sistema foi mantido sob agitao constante em
agitador tipo shaker temperatura ambiente (25 5 C) por 24 horas. Aps, as
solues foram filtradas em filtro de papel de porosidade 0,3 m. O material retido
no filtro foi lavado e seco em estufa a 40 2 C e, posteriormente, pesado.
69
4.5.3 Determinao do grau mdio de cristalinidade por difrao de raios X
As amostras de -quitina e quitosanas obtidas foram comparadas por

difrao de raios X (DRX) quanto ao seu grau de cristalinidade, (Ioelovich, 2014).
As medidas de difrao de raios X foram realizadas em difratmetro da marca
Rigaku, modelo Multiflex, com radiao de CuK (=1,54 ) com voltagem de 40
kV, corrente de 20 mA, 2 = 2 a 50, ao passo de 1/min, localizado no CCTM -
IPEN/CNEN-SP.
O foi calculado utilizando a Equao 1 com base na determinao da
rea definida pelas linhas de base nos difratogramas das amostras, como mostrado
nas FIG. 13 e 14.
4.5.4 Determinao do grau mdio de acetilao por espectroscopia na

regio do infravermelho
As amostras de -quitina e quitosanas foram trituradas e

homogeneizadas em 100 mg de KBr na proporo de 1:10. As pastilhas foram
confeccionadas com auxlio de uma prensa hidrulica e armazenadas em
dessecador at o momento das anlises, realizadas em espectrofotmetro da
marca Thermo Scientific, modelo Nicolet 6700, no intervalo de varredura de 400-
4000 cm-1, na resoluo de 4 cm-1, localizado no Centro de Qumica e Meio
Ambiente (CQMA) do IPEN/CNEN-SP.
As alturas dos picos de absorbncia nas regies de 1320 cm-1 e 1420
por
cm-1 foram obtidas pelas linhas de base 6 e 9 (FIG. 19) para o clculo do
meio da Equao 3.
4.5.5 Determinao do grau mdio de desacetilao das amostras de

quitosanas por titulao condutimtrica
Foi adicionado 0,200 mg de amostra de quitosana a 100 mL de HCl 0,05

mol L-1. A soluo foi mantida sob agitao magntica por 2 horas temperatura
70
de 25 1 C. A titulao foi feita adicionando-se 0,1 mL de NaOH 0,4 mol L-1

soluo de quitosana no filtrada. O sistema foi mantido sob agitao constante
durante todo o procedimento. Aps a adio de cada alquota de base, os valores
de condutncia e pH foram mensurados utilizando o condutivmetro porttil da
marca MS TECNOPON Equipamentos Especiais LTDA. e o pHmetro da marca
Metter Toledo Seven Compact pH/ion S222. O
de cada amostra foi calculado
utilizando a Equao 4.
4.5.6 Determinao da massa molecular mdia das amostras de quitosanas

por viscosimetria capilar
Para determinao da viscosidade intrnseca, [], foi utilizado um

viscosmetro capilar do tipo Cannon-Fenske (tamanho 100). Foram adicionados
0,3img de amostra a 30 mL do sistema de solvente CH3COOH 0,1 mol L-1/NaCl
0,2imol L-1. As solues foram filtradas e as diluies preparadas de forma seriada,
tal que a viscosidade relativa, rel, fosse superior a 1,1 e inferior a 1,5. O tempo de
escoamento foi medido com auxlio de um cronmetro temperatura de 25 1 C.
Foram feitas cinco leituras para o clculo da mdia do tempo de escoamento do
sistema de solventes e das solues diludas. Os termos sobre viscosimetria capilar
e suas respectivas equaes esto relacionados de acordo com a TAB. 5 e, com
base neles, a viscosidade intrnseca de cada amostra foi determinada.
A massa molar viscosimtrica foi obtida utilizando a Equao 9, sendo
as constantes a e k utilizadas as mesmas obtidas por Roberts e Domszy (1982),
uma vez que foi utilizado o mesmo sistema de solventes e condio de temperatura
descritos pelos autores.
4.5.7 Anlise qumica das amostras de quitosanas por espectroscopia de

fluorescncia de raios X por disperso de comprimento de onda
A anlise por espectroscopia de fluorescncia de raios X por disperso

de comprimento de onda (WDXRF) permitiu a determinao semiquantitativa dos
71
elementos sdio, magnsio, alumnio, silcio, fsforo, enxofre, cloro, potssio,

clcio, ferro, nquel, cobre e zinco. Os espectros, com as linhas analticas
sobrepostas dos elementos qumicos analisados, foram obtidos no espectrmetro
WDXRF, da marca RIGAKU modelo RIX-3000, no Laboratrio de Fluorescncia de
Raios X do Centro de Lasers e Aplicaes (CLA) do IPEN/CNEN-SP. As amostras
foram analisadas sem nenhum tratamento prvio.
4.5.8 Anlise estatstica
Por meio da tcnica estatstica ANOVA (ANalysis Of VAriance) foi

possvel avaliar a influncia dos nove tratamentos para a obteno das amostras
de -quitina e suas respectivas quitosanas. Cada rota (P1 e P2) foi analisada
individualmente pelos valores mdios obtidos para os principais parmetros fsico-
qumicos estudados, gerando um total de quatro grupos analisados. Mediante a
anlise, foi verificada a existncia de diferenas significativas entre as mdias e as
condies empregadas em cada tratamento.
As hipteses testadas foram:
Hiptese nula: os valores mdios obtidos para os parmetros fsico-
qumicos das amostras analisadas no possuem diferenas significativas.
Hiptese alternativa: os valores mdios obtidos para os parmetros
fsico-qumicos so diferentes.
Se o valor F for maior ou igual ao valor p, rejeita-se a hiptese de
nulidade, ou seja, existem evidncias significativas em que pelo menos dois
tratamentos diferem entre si a um nvel de significncia de 0,05. Caso contrrio,
no se rejeita a hiptese nula.
A ANOVA diz se existe ou no diferena entre os tratamentos, mas no
diz quais tratamentos diferem. O Teste Tukey foi aplicado com base no desvio
padro dos valores calculados para cada parmetro analisado, a fim de testar o
contraste dos tratamentos par a par para cada procedimento individualmente.
72
5 RESULTADOS E DISCUSSES
As amostras de -quitina e quitosanas obtidas mediante as condies

descritas nas TAB. 7 e 8 apresentaram caractersticas visuais bem diferentes em
virtude do procedimento. No procedimento 1, ambas, -quitina e quitosana,
apresentaram-se em aspecto de p de colorao castanho mdio, enquanto no
procedimento 2, as amostras se apresentaram em aspecto de flocos com
tonalidades mais claras, como ilustrado na FIG. 25.
(a)
(b)
FIGURA 25 - Amostras de quitosanas obtidas: (a) procedimento 1; (b) procedimento 2.

73
O processo de despigmentao removeu grande quantidade de

pigmentos das amostras de quitina obtidas pelo P1 (fato este observado pela
colorao acastanhada do etanol utilizado no processo de lavagem); no entanto,
suas respectivas quitosanas apresentaram praticamente a mesma colorao dos
materiais de partida. O etanol recolhido aps a lavagem das amostras de quitina do
P2 no apresentou mudanas considerveis de colorao, o que indica que esta
rota tenha promovido a remoo dos pigmentos contidos na casca do camaro. A
desproteinizao realizada na segunda etapa do P2 permite encadear a
desacetilao (prxima etapa de ambos os procedimentos) por ocorrer em meio
alcalino. Esse fato poderia ser uma justificativa da eficincia desse procedimento
em remover os pigmentos. Portanto, a etapa de despigmentao poderia ser
eliminada minimizando o tempo e, consequentemente, os custos do processo.
Na FIG. 26 apresentada as micrografias das amostras de quitina e
quitosanas obtidas pelo tratamento 9 (mais vigoroso) por ambos procedimentos.
Battisti e Campana Filho (2008) relataram que as mudanas na morfologia das
amostras de quitosanas obtidas por eles foram em consequncia dos tratamentos
cido e alcalino. O ataque cido sendo realizado na primeira etapa (P2) seria mais
agressivo, degradando mais a superfcie. Este fato pode ser observado mediante a
formao de poros nas amostras de quitina obtidas por meio do P2 e, em menor
intensidade, para suas respectivas quitosanas. O mesmo no foi observado nas
amostras obtidas pelo P1.
FIGURA 26 - Micrografias das amostras de quitina e quitosanas obtidas pelo tratamento 9 por ambos os procedimentos.
74
75
O fato da quitosana ser solvel em meio cido tornou-se um mtodo

vivel para distinguir os dois biopolmeros (quitina e quitosana) e se as condies
de processo foram efetivas na obteno da quitosana. A solubilidade da quitosana
est relacionada quantidade de grupos amino susceptveis protonao em meio
. Quanto maior a quantidade desses grupos, maior a
cido, ou seja, ao seu
repulso eletrosttica entre as cadeias e, portanto, melhor a solvatao (SANTOS
et al., 2003). Chang et al. (1997) verificaram que o
da quitosana aumenta com
o aumento da concentrao de NaOH, da temperatura e do tempo de reao de N-
desacetilao, o que justifica o fato do teor de slidos ter diminudo medida em
que as condies da etapa de desacetilao se tornaram mais vigorosas,
observado nas FIG. 27 e 28. Na TAB. 9 so apresentados os valores percentuais
do rendimento do processo de obteno das amostras de quitosanas e de material
insolvel de cada amostra aps a secagem.
TABELA 9 - Valores percentuais do rendimento do processo de obteno das

amostras de quitosanas e de material insolvel de cada amostra aps
a secagem.
AMOSTRA Rendimento Teor de AMOSTRA Rendimento Teor de
P1 (%) slidos (%) P2 (%) slidos (%)
Q1 76 95 4 Q'1 76 98 2
Q2 76 92 2 Q'2 76 95 2
Q3 74 81 4 Q'3 73 84 8
Q4 73 84 5 Q'4 70 86 4
Q5 70 64 4 Q'5 70 66 7
Q6 67 52 6 Q'6 73 61 4
Q7 67 24 1 Q'7 71 39 7
Q8 72 39 7 Q'8 69 48 7
Q9 69 31 Q'9 67 21
76
(a)
(b)

procedimento 1. (a) material obtido aps a secagem em estufa a 50 C por 24 horas; (b)
Frao solvel em cido actico 1% (da esquerda para direita de 1 a 9).
77
(a)
(b)
procedimento 2. (a) material obtido aps a secagem em estufa a 50 C por 24 horas; (b)
Frao solvel em cido actico 1% (da esquerda para direita de 1 a 9).
78
O difratograma obtido para a amostra padro apresentado na FIG. 29

e os difratogramas das amostras de quitina e quitosanas so apresentados nas
FIG. 30 a 33.
1400 220
Sigma-Aldrich
1200
1000
Intensidade (u.a.)
800
29,4
600
400
200
0
5 10 15 20 25 30 35 40
FIGURA 29 - Difratograma de raios X da amostra de quitosana utilizada como padro

analtico.
2= 19,1
Q9
2= 9,2 Q8
2= 20,8 2= 26,5 2= 36,7
Q7
Q6
Q5
Q4
Q3
Q2
Q1
Intensidade (u.a.)
10 20 30 40
2
FIGURA 30 - Difratogramas de raios X das amostras de quitina preparadas pelo procedimento 1.
79
2= 19,3 2= 26,6 Q'9
2= 9,2 Q'8
2= 20,7
2= 27,6 Q'7
Q'6
Q'5
Q'4
Q'3
Q'2
Q'1
Intensidade (u.a.)
10 20 30 40
2
FIGURA 31 - Difratogramas de raios X das amostras de quitina preparadas pelo procedimento 2.
80
2= 19,4
Qt9
2= 9,4 Qt8
Qt7
Qt6
Qt5
Qt4
Qt3
Qt2
Qt1
2= 26,5
Intensidade (u.a.)
10 20 30 40
2
FIGURA 32 - Difratogramas de raios X das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 1.
81
Qt'9
2= 19,4 Qt'8
2= 9,4 Qt'7
Qt'6
Qt'5
Qt'4
Qt'3
Qt'2
Qt'1
Intensidade (u.a.)
10 20 30 40
2
FIGURA 33 - Difratogramas de raios X das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 2.
82
83
Os difratogramas das amostras de quitina esto de acordo com os

descritos por Ioelovich (2014), pois mostraram para todas as amostras de ambos
os procedimentos dois picos de difrao em 2 de 9-9,5 e 19-19,5. De acordo
com o autor, estes picos, tpicos do polimorfo , aparecem em consequncia da
difrao dos planos (020) e (110).
Os picos em 20,8; 26,6 e 36,5 nos difratogramas das amostras de
quitina correspondem a fase quartzo (SiO2) conforme ficha PDF n 461045. A
presena dessa fase pode ser atribuda a contaminaes ocorridas durante o
processo de desproteinizao (uso de base diluda) pelo fato de ter sido utilizado
becker de vidro nessa etapa. Uma vez que na etapa de desacetilao (uso de base
concentrada) foi utilizado becker de polipropileno, esses picos no foram
identificados nas amostras de quitosanas.
A anlise a seguir para as amostras de quitosanas vlida para ambos
os procedimentos. As amostras de 1 a 6 apresentaram os picos de difrao em 2
na mesma regio das amostras de quitina. Para as amostras de 7, 8 e 9 foi
observado um pico de difrao fraco em 2 de 10-10,5 e um mais intenso em 2
de 20-20,5, tambm causados pela difrao dos planos (020) e (110). Houve um
decrscimo na intensidade dos picos de difrao das amostras 7 e 9, o que indica
diminuio na cristalinidade do biopolmero. Os difratogramas dessas amostras so
semelhantes ao difratograma obtido para a amostra padro, apresentado na FIG.
29. Os valores obtidos para o grau de cristalinidade das amostras de quitina e
quitosanas so apresentados nas TAB. 10 e 11.
84
O espectro de absoro na regio do infravermelho obtido para a

amostra padro apresentado na FIG. 34 e os espectros para as amostras de
quitina e quitosanas so apresentados nas FIG. 35 a 38, respectivamente.
45
Sigma-Aldrich
40
35
Transmitncia (%)
30
1663 cm-1
25
1575 cm-1 1317cm-1
-1
1420 cm
20
3186 cm-1 2920 cm-1
15
10
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Nmero de onda (cm-1)
FIGURA 34 - Espectro de absoro na regio do infravermelho da amostra de quitosana

utilizada como padro analtico.
1420 cm-1
3102 cm-1 Q9
2925 cm-1
1620 cm-1 1318 cm-1 756 cm-1 Q8
1662 cm-1
1560 cm-1 1201 cm-1 Q7
Q6
Q5
Q4
Q3
Q2
Q1
Transmitncia (%)
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

FIGURA 35 - Espectros de absoro na regio do infravermelho das amostras de quitina preparadas pelo procedimento 1.
85
1420 cm-1 Q'9
-1
3102 cm 2925 cm-1
1621 cm-1 1318 cm-1 756 cm-1 Q'8
1661 cm-1 1560 cm-1 1201 cm-1
Q'7
Q'6
Q'5
Q'4
Q'3
Q'2
Q'1
Transmitncia (%)
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

FIGURA 36 - Espectros de absoro na regio do infravermelho das amostras de quitina preparadas pelo procedimento 2.
86
1420 cm-1
-1
Qt9
3102 cm 2921 cm-1
1621 cm-1 -1 753 cm-1 Qt8
1663 cm-1
1317 cm
1560 cm-1 Qt7
1201 cm-1
Qt6
Qt5
Qt4
Qt3
Qt2
Qt1
Transmitncia (%)
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

87
FIGURA 37 - Espectros de absoro na regio do infravermelho das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 1.
1420 cm-1
-1 Qt'9
3102 cm 2933 cm-1
1621 cm-1 -1 Qt'8
1665 cm-1 1317 cm 753 cm-1
1560 cm-1 1201 cm-1 Qt'7
Qt'6
Qt'5
Qt'4
Qt'3
Qt'2
Qt'1
Transmitncia (%)
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

FIGURA 38 - Espectros de absoro na regio do infravermelho das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 2.
88
89
As observaes feitas a seguir so vlidas para as amostras de quitina

e quitosanas obtidas por ambos os procedimentos. As amostras de quitina
apresentaram as bandas caractersticas nas mesmas regies descritas para o
monmero N-acetil-D-glucosamina (FIG. 17). A banda larga que aparece na regio
de 3500 a 3070 cm-1 corresponde aos estiramentos dos grupos O-H e N-H
caractersticos de lcoois, aminas e amidas presentes na estrutura do slido. A
banda, centrada na regio de 3100 cm-1, referente ao grupo N-H de amidas. Esta
banda aparece com intensidade forte para todas as amostras de quitina e para as
amostras de quitosanas esta banda perdeu intensidade da amostra 1 para 9.
A banda observada na regio de 2920 cm-1 referente ao estiramento
C-H de alcano e pode ser atribuda aos grupos CH2 dos anis piranosdicos e ao
CH3 dos grupos acetamido da quitina. Esta banda aparece com intensidade forte
para todas as amostras de quitina e para as amostras de quitosanas de 1 a 4,
enquanto nos espectros das amostras quitosanas de 5 a 9 foi possvel observar o
alargamento dessa banda at o seu desaparecimento medida em que as
condies de processamento se tornaram mais vigorosas, como consequncia da
desacetilao.
As bandas nas regies de 1660 e 1620 cm -1 (dublet) so atribudas a
deformao axial de C=O de grupo amida e aparecem para todas as amostras de
quitina. Como esperado, para as amostras de quitosana a intensidade dessas
bandas diminuiu medida em que os tratamentos se tornaram mais vigorosos. A
partir da amostra 5, foi possvel observar o alargamento da banda em 1660 cm -1 e
o desaparecimento da banda em 1620 cm-1, sendo esse fato tambm atribudo
eficcia do processo de desacetilao, principalmente para os tratamentos 7, 8 e 9.
A banda observada na regio de 1580 cm -1 atribuda deformao
angular de N-H de grupos amida ou amina secundrio e possui a mesma
intensidade em todos os espectros para todas as amostras de quitina e para as
amostras de quitosanas de 1 a 4. Uma vez que a quitosana contm grupos amino
primrio em sua estrutura, essa banda perde a intensidade medida em que o
processo de desacetilao se torna mais efetivo, fato esse observado pelo
alargamento dessa banda a partir da amostra 5.
A banda na regio de 1420 cm-1 foi considerada por Brugnerotto et al.
(2001) como banda de referncia para os biopolmeros quitina e quitosana. De fato,
essa banda apresenta praticamente a mesma intensidade para todos os espectros
90
de quitina e quitosanas. J a banda na regio de 1320 cm -1 foi considera pelos

autores como especfica para N-acetil-D-glucosamina. Essa banda apresentou o
mesmo perfil observado nas bandas em 2920 cm -1, o dublet em 1660 e 1620 cm-1
e em 1580 cm-1, e, portanto, a mesma anlise feita para essas bandas pode ser
empregada. As bandas na regio de 1200 a 800 cm-1 podem ser associadas s
vibraes das estruturas dos polissacardeos.
Os espectros das amostras de quitosanas 7, 8 e 9 so semelhantes ao
espectro obtido para a amostra padro (FIG. 34). Os resultados obtidos para o grau
de acetilao das amostras de quitina e quitosanas esto apresentados nas TAB.
10 e 11, respectivamente.
TABELA 10 - Resultados obtidos para os parmetros das amostras de quitina

analisadas: grau mdio de cristalinidade ( ) e grau mdio de
) por FT-IR.
acetilao (
AMOSTRA (%)

(%) AMOSTRA (%)

(%)
Q1 74 2 71 9 Q'1 78 1 82 10
Q2 72 2 75 8 Q'2 78 1 76 18
Q3 76 3 74 8 Q'3 80 2 77 18
Q4 74 2 81 12 Q'4 77 3 76 16
Q5 77 3 80 11 Q'5 78 2 83 7
Q6 78 3 72 14 Q'6 78 2 85 11
Q7 80 2 87 14 Q'7 83 1 77 8
Q8 71 3 83 16 Q'8 74 3 74 7
Q9 72 3 83 13 Q'9 75 1 80 9
TABELA 11 - Resultados obtidos para os parmetros das amostras de quitosanas

analisadas: grau mdio de cristalinidade ( ) e grau mdio de
) por FT-IR.
acetilao (
AMOSTRA (%)

(%) AMOSTRA (%)

(%)
Qt1 77 1 73 15 Qt'1 75 2 78 7
Qt2 74 2 76 13 Qt'2 72 2 82 5
Qt3 64 2 67 14 Qt'3 65 1 70 7
Qt4 72 3 69 10 Qt'4 61 2 68 4
Qt5 64 2 54 13 Qt'5 62 2 55 7
Qt6 65 2 52 8 Qt'6 58 3 52 7
Qt7 57 5 34 6 Qt'7 58 2 29 6
Qt8 60 4 41 5 Qt8 62 3 39 4
Qt9 52 4 12 6 Q't9 51 4 10 4
91
Nas TAB. 12 e 13 apresentado um resumo das informaes obtidas

pela anlise estatstica.

cristalinidade das amostras de quitina e quitosanas determinados
por difrao de raios X.
FONTE DA GRAUS DE SOMA DE QUADRADOS VALOR VALOR
GRUPOS
VARIABILIDADE LIBERDADE QUADRADOS MDIOS F P
Entre grupos 9 224,66667 24,96296 3,47845 0,01296
Quitina P1 Dentre grupos 17 122 7,17647
Total 26 346,66667
Entre grupos 8 164,66667 20,58333 5,97581 8,10E-04
Total 26 226,66667
Entre grupos 8 1074,66667 134,33333 14,5663 2,06E-06
Quitosanas
Dentre grupos 18 166 9,22222
P1
Total 26 1240,66667
Entre grupos 8 850,66667 106,33333 17,4 5,37E-07
Quitosanas
Dentre grupos 18 110 6,11111
P2
Total 26 960,66667

acetilao das amostras de quitina e quitosanas determinados por
espectroscopia no IV por Transformada de Fourier.

GRUPOS
Entre grupos 8 242,66667 30,33333 0,21146 0,98465
Total 26 2824,66667
Entre grupos 8 732 91,5 0,62528 0,74627
Total 26 3366
8 9826,66667 1228,33333 10,83824 1,74415E-
Entre grupos
Quitosanas 5
P1 Dentre grupos 18 2040 113,33333
Total 26 11866,66667
8 13806 1725,75 50,92377 8,51573E-
Entre grupos
Quitosanas 11
P2 Dentre grupos 18 610 33,88889
Total 26 14416
92
O grau de cristalinidade representa a frao cristalina presente no

biopolmero. As amostras de quitina obtida pelos tratamentos do P1 apresentaram
valores de menores do que os das amostras obtidas pelo P2. As protenas
contidas na casca do camaro geralmente esto associadas quitina. Sendo
assim, uma vez que no P1 a desproteinizao a primeira etapa, provvel que a
estrutura cristalina de origem tenha se desestruturado. O comportamento contrrio
foi observado para as amostras de quitosanas, exceto para as amostras 7 e 8, para
as quais os valores de seguiram a mesma tendncia das amostras de quitina de
ambos os procedimentos. Os valores obtidos para as amostras de quitosanas 1 e
2 de ambos os procedimentos foram bem prximos aos encontrados para a
respectiva quitina, o que se justifica pelo fato de terem sido obtidas por condies
de processo mais brandas. Para as demais amostras, os valores de diminuram
medida em que essas condies se tornaram mais vigorosas. Como observado
na anlise dos difratogramas, a amostra 8 apresentou o valor de maior que o da
amostra 7 para ambos os procedimentos.
O valor para o calculado para amostra padro de acordo com a
metodologia empregada foi 42 2%. Este valor inferior aos valores encontrados
para as amostras de quitosanas obtidas. Por se tratar de um padro analtico,
provvel que a quitosana tenha passado por processos de purificao, ao contrrio
das amostras do presente estudo. Os mtodos de purificao geralmente so feitos
a partir da dissoluo seguida de neutralizao por solubilizao, o que promove
uma diminuio significativa no percentual de cristalinidade devido a uma nova
organizao estrutural das cadeias, diferente daquela adotada pelo polmero no
purificado.
A anlise estatstica mostrou que os valores encontrados para o das
amostras de quitina obtidas pelos procedimentos 1 e 2 e de suas respectivas
quitosanas apresentaram diferenas significativas entre pelo menos dois
tratamentos. Na TAB. 14 esto apresentados os resultados obtidos pelo Teste
Tukey a respeito dos tratamentos que apresentaram diferenas entre si com base
no desvio padro, em um nvel de significncia de 0,05.
93

apresentaram diferenas significativas entre si quanto ao grau
mdio de cristalinidade () das amostras de quitina e quitosanas.
GRUPOS TESTE TUKEY
Todas as mdias diferem entre si em um nvel de

Quitina P1
significncia de 0,05.
Existem diferenas significativas entre os

Quitina P2
tratamentos 7 e 4; 8 e 3; 8 e 7; 9 e 7.

tratamentos 3 e 1; 5 e 1; 5 e 2; 6 e 1; 6 e 2; 7 e1; 7
Quitosanas P1
e 2; 7 e 3; 7 e 4; 8 e 1; 8 e 2; 8 e 4; 9 e 1; 9 e 2; 9
e 4.
Quitosanas P2 tratamentos 3 e 1; 4 e 1; 4 e 2; 5 e 1; 5 e 2; 6 e 1;
6 e 2; 7 e 1; 7 e 2; 8 e 1; 8 e 2; 9 e 1; 9 e 2.
Como a etapa de desproteinizao ocorreu em meio bsico (a mesma

condio da etapa de desacetilao), possvel que alguns grupos acetamido
tenham sido convertidos em grupos amino. As amostras de quitina obtidas pelo P1
apresentaram valores de
menores que os do P2, exceto para a amostra 7, o
que indica que a primeira rota contribuiu para a obteno de quitina mais
desacetilada. Este fato no influenciou nos valores de
das amostras de
quitosanas, pois as mdias se mantiveram prximas entre os pares, exceto para a
amostra 7.
As condies utilizadas na etapa de desacetilao para obteno das
quitosanas dos tratamentos 1, 2, 3 e 4 de ambos os procedimentos no foram
suficientes para promover a transformao dos grupos acetamido em grupos amino
pelo fato dos valores de
obtidos terem sido bem prximos ao da sua respectiva
foram diminuindo medida em
quitina. Da amostra 5 a amostra 9, os valores de
que as condies de processo se tornaram mais vigorosas. As amostras de
quitosanas 7, 8 e 9 do P1 apresentaram valores de
um pouco maiores que os
do P2, o que indica que esta rota seja a mais indicada quando a inteno for a de
obter amostras mais desacetiladas.
obtido
Para a amostra de quitosana utilizada como padro, o valor de
pela metodologia empregada foi 25 5%. Esse resultado est de acordo com a
94
faixa estabelecida no laudo do fornecedor. As amostras Qt7 e Qt7 foram as que

apresentaram valores mais prximo ao da quitosana Aldrich dentro do desvio
padro calculado, enquanto as amostras Qt9 e Qt9 apresentaram valores menores.
Este fato um indicativo de que os tratamentos empregados no processamento
dessas amostras foram satisfatrios na obteno de quitosana.
De acordo com a anlise estatstica, os valores mdios de
das
amostras de quitina no diferiram significativamente entre si, tanto para o P1 quanto
para P2. Isso sugere que os tratamentos de 1 a 9 no influenciaram esse
parmetro, independente da rota seguida. J as amostras de quitosanas
apresentaram diferenas significativas entre pelo menos dois tratamentos. Na TAB.
15 so apresentados os resultados obtidos pelo Teste Tukey a respeito dos
tratamentos que apresentaram diferenas entre si com base no desvio padro, em
um nvel de significncia de 0,05.

) das amostras de quitina e quitosanas.
mdio de acetilao (
GRUPOS TESTE TUKEY
Quitina P1 -
Quitina P2 -

Quitosanas P1
tratamentos 7 e 2; 8 e 1; 8 e 2; 9 e 1-7.
Quitosanas P2 tratamentos 5 e 1; 5 e 2; 6 e 1; 6 e 2; 6 e 3; 7
e 1-6; 8 e 1-4; 9 e 1-8.
95
As curvas de condutividade e pH em funo do volume de base

adicionado nas solues de quitosanas em cido clordrico diludo da amostra
padro e das amostras de quitosanas obtidas pelos procedimentos 1 e 2 esto
representadas nas FIG. 39, 40 e 41, respectivamente. De acordo com o volume de
base necessrio para neutralizar a quitosana, os valores para o grau de
desacetilao foram calculados pela Equao 4 e esto representados na TAB. 16.
Os resultados obtidos pela anlise estatstica so apresentados na TAB. 17. O valor
de
calculado para a amostra padro foi 74 1 (ou
26 1), o que est de
acordo com o valor encontrado por FT-IR.
12
Sigma-Aldrich
pH
Condutividade
10
Condutividade (mS.cm-2)
0 1 2 3 4 5 6
NaOH (mL)
FIGURA 39 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH da amostra de

quitosana utilizada como padro analtico.
96
12 12 12
Qt1 Qt2 Qt2
pH pH pH
Condutividade Condutividade Condutividade
10 10 10
8 8 8
6 6 6
4 4 4
2 2 2
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
NaOH (mL) NaOH (mL) NaOH (mL)
12 12 12
Qt4 Qt5 Qt2
pH pH pH
10 10 10
8 8 8
6 6 6
4 4 4
2 2 2
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6
12 12
Qt7 Qt8 Qt9
pH pH pH
10
10 10
8
8 8
6
6 6
4
4 4
2 2 2
0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
FIGURA 40 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH das amostras de

quitosanas obtidas pelo procedimento 1.
97
12 12 12
Qt'1 Qt'2 Qt'3
pH pH pH
10 10 10
8 8 8
6 6 6
4 4 4
2 2 2
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6
12 12 12
Qt'4 Qt'5 Qt'6
pH pH pH
10 10 10
8 8 8
6 6 6
4 4 4
2 2 2
0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6
12 12
Qt'7 Qt'8 Qt'9
pH pH pH
10
10 10
8
8
8
6 6
6
4
4
4
2
2 2
0
0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6 0 1 2 3 4 5 6 7
FIGURA 41 - Curvas de condutividade e pH versus volume de NaOH das amostras de

quitosanas obtidas pelo procedimento 2.
98
), sendo o grau
TABELA 16 - Resultados obtidos para o grau de desacetilao (
) seu inverso.
mdio de acetilao (

AMOSTRA (%) (%) AMOSTRA (%) (%)
Qt1 - - Qt'1 - -
Qt2 - - Qt'2 - -
Qt3 25 1 75 1 Qt'3 26 1 74 1
Qt4 28 1 72 1 Qt'4 34 2 66 2
Qt5 38 1 62 1 Qt'5 37 3 63 3
Qt6 50 2 50 2 Qt'6 51 4 49 4
Qt7 69 3 31 3 Qt'7 64 1 36 1
Qt8 54 6 46 6 Qt'8 60 1 40 1
Qt9 74 2 26 2 Qt'9 88 2 12 2

acetilao das amostras de quitosanas analisadas determinados
por titulao condutimtrica.
GRUPOS
Entre grupos 6 6556,28571 1092,71429 136,589 1,32E-11
Quitosanas
Dentre grupos 14 112 8
P1
Total 20 6668,28571
Entre grupos 6 8048,28571 1341,38095 281,69 8,96E-14
Quitosanas
Dentre grupos 14 66,66667 4,7619
P2
Total 20 8114,95238
A amostras 1 e 2, de ambos os procedimentos, possuem somente um

ponto de interseo (curva de condutividade) e inflexo (curva de pH), ou seja,
houve somente a neutralizao do cido pela base, o que confirma os valores
obtidos para o teor de material insolvel em meio cido (TAB. 9). Da amostra 3 a
amostra 9, observou-se trs regies, em que a primeira se refere a titulao do
cido em excesso (V0 a V1), a segunda a titulao da quitosana protonada (V1 a V2)
e a terceira ao excesso de base adicionada. De acordo com o esquema
apresentado nas FIG. 40 e 41, o volume de base para titular a quitosana protonada
aumentou entre as colunas e as linhas medida em que as condies do processo
se tornaram mais vigorosas, exceto para a amostra 8 de ambos os procedimentos.
A anlise estatstica mostrou que existem diferenas significativas entre
pelo menos dois tratamentos. De acordo com os resultados obtidos pelo Teste
Tukey, apresentados na TAB. 18, existem mais contrates entre as mdias de

99
obtidas por titulao condutimtrica do que por FT-IR, o que indica que a primeira
tcnica mais sensvel que a segunda na determinao do
em razo da menor
disperso dos dados.

) das amostras de quitosanas.
mdio de acetilao (
GRUPOS TESTE TUKEY

Quitosanas P1 significncia de 0,05, exceto os pares 4 e 3; 8 e 6;
9 e 7.

Quitosanas P2
significncia de 0,05, exceto os pares 5 e 4; 8 e 7.
A massa molecular de polmeros comumente determinada pela

viscosimetria. Neste trabalho, foi empregada a tcnica de viscosimetria capilar. Os
dados foram obtidos com base no tempo de escoamento do sistema de solventes
e das solues diludas das quitosanas analisadas, sendo este um mtodo relativo.
As curvas de viscosidade reduzida ([red]) em funo da concentrao das solues
da amostra padro e das amostras de quitosanas so apresentadas nas FIG. 42,
43 e 44, respectivamente. Por meio da extrapolao da regio de linearidade
diluio infinita a viscosidade intrnseca, [], foi determinada, satisfazendo a relao
de Mark-Houwink (Equao 3). Os resultados obtidos esto apresentados na TAB.
19, e como nos demais parmetros, na TAB. 20 so apresentados os resultados
obtidos pela anlise estatstica.
100
700
Sigma-Aldrich
650
Viscosidade reduzida (mL/g)
600
550
500
450
400
350 y = 60097,23243x + 353,10924

R2 = 0,97628
0,000 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005
Concentrao (g/mL)
FIGURA 42 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao da amostra de

quitosana utilizada como padro analtico.
65
8,5 Qt4 Qt5 Qt6
20
60
8,0
18 55
7,5
50
7,0 16
45
6,5
14
6,0 40
5,5 12 35

y = 303,16951x + 5,40975 y = 807,58792x + 11,13764 30 y = 2961,87759x + 31,508
5,0
R2 = 0,69323 R2 = 0,855375 R2 = 0,82375
10
0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010
Concentrao (g/mL) Concentrao (g/mL) Concentrao (g/mL)
210
Qt7 125 Qt8 750 Qt9
200
120 700
190
115 650
180
600
110
170
550
105
160
500
150 100
450
140 95
400

130 90
y = 13068,46365x + 131,86828 y = 2615,89867x + 88,95579 y = 72139,5031x + 332,09502
350
R2 = 0,85607 R2 = 0,89453 R2 = 0,99693
120 85
0,000 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005
FIGURA 43 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 1.
101
36 100
37 Qt'4 Qt'5 Qt'6
36 35 90
35
80
34
34
70
33 33
32 60
32
31
50
30 31

y = 798,9x + 29,29128 y = 545,81235x + 30,39898 40 y = 5683,65555x + 39,19371
29
R2 = 0,87158 R2 = 0,92714 R2 = 0,88804
30
0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010
84 1400
Qt'7 Qt'8 Qt'9
130 82
1300
80
125
78 1200
120 76 1100
74
115 1000
72
70 900
110
68
800
105

66
y = 2937,66867x + 98,43656 y = 2003,71191x + 62,20635 700 y = 273350,48767x + 644,63453
64 R2 = 0,98341
R2 = 0,92605 R2 = 0,99342
100
0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010 0,0000 0,0005 0,0010 0,0015 0,0020 0,0025
FIGURA 44 - Curvas de viscosidade reduzida versus concentrao das amostras de quitosanas preparadas pelo procedimento 2.
102
103
TABELA 19 - Resultados obtidos para a viscosidade intrnseca, [], e para a massa

molecular mdia viscosimtrica ( ) das amostras de quitosanas.
AMOSTRA []
. 103(g.mL) AMOSTRA []
. 103(g.mL)
Qt1 - - Qt'1 - -
Qt2 - - Qt'2 - -
Qt3 - - Qt'3 - -
Qt4 5,4 0,2 5,5 Qt'4 29,3 0,1 33,6
Qt5 11,1 0,2 11,8 Qt'5 30,3 0,1 34,8
Qt6 31,5 0,2 36,3 Qt'6 39,1 0,3 45,8
Qt7 131,9 0,2 169,3 Qt'7 98,4 0,1 123,5
Qt8 89,0 0,1 110,9 Qt'8 62,2 0,1 75,4
Qt9 332,1 0,3 456,9 Qt'9 644,6 0,2 932,1
TABELA 20 - Tabela de ANOVA dos valores obtidos para a massa molecular mdia
das amostras de quitosanas analisadas determinados por
viscosimetria capilar.
GRUPOS
Entre grupos 5 4,41E+11 8,82E+10 2,04E+6 0
Quitosanas
Dentre grupos 12 520000 43333,33333
P1
Total 17 4,41E+11
Entre grupos 5 1,91E+12 3,81E+11 1,35E+7 0
Quitosanas
Dentre grupos 12 340000 28333,33333
P2
Total 17 1,91E+12
A viscosidade intrnseca das amostras 1, 2 e 3 de ambos os

procedimentos no pde ser determinada, pois o tempo de eluio da soluo mais
concentrada foi igual ao do sistema de solventes, o que confirma que as condies
empregadas nesses tratamentos no foram suficientes para formar quitosana.
El-Hefian et al. (2008) mostraram que o tempo de armazenamento
temperatura ambiente influencia diretamente na viscosidade das solues cidas
de quitosana. Sendo assim, as curvas de viscosimetria do presente estudo foram
obtidas imediatamente aps as amostras serem solubilizadas.
Ao contrrio do que se esperava, medida em que as condies de
processo foram se tornando mais vigorosas, as amostras de quitosanas
apresentaram valores de massa molecular maiores do que as obtidas por
104
condies mais brandas, para ambos os procedimentos. Este fato est relacionado
aos valores de
das amostras, como discutido no incio deste captulo.
A linearidade das curvas de viscosidade reduzida em funo da
concentrao da amostra analisada foi proporcional ao aumento no rigor das
condies de tratamento. As amostras 4, 5, 6 e 9 do P1 apresentaram valores de
[] e, consequentemente de
, menores que os das amostras correspondentes
obtidas pelo P2, enquanto as amostras 7 e 8 apresentaram comportamento
contrrio.
A amostra 4 do P1 pode ser considerada oligmero. Em relao s
amostras 5, 6, 7 e 8 do P1 e 4, 5, 6, 7 e 8 do P2 houve a formao de cadeias
polimricas com massa molecular variando de aproximadamente 11000 a 170000
para o P1 e 33000 a 124000 para o P2. J as amostras 9 de ambos os
procedimentos se caracterizam como biopolmeros de massa molecular elevada,
sendo a MM da amostra do P2 quase o dobro da amostra do P1.
A amostra padro apresentou o valor de
de aproximadamente
482000 g mL-1. A massa molecular viscosimtrica informada pelo fornecedor est
na faixa de 190000-310000. Este resultado mostrou que os valores encontrados
para as
das quitosanas obtidas no presente trabalho podem estar
superestimadas. De fato, Rinaudo (2006) relatou em seu artigo de reviso que o
sistema de solventes adotado por Roberts e Domszy (1982) promove a agregao
do biopolmero, o que pode superestimar os valores de massa molecular
calculados. O autor props o uso do sistema de solventes CH3COOH 0,3 M/
CH3COONa 0,2 M por no haver evidncias de formao de agregados nessa
mistura (Rinaudo et al., 1993).
A anlise estatstica mostrou que existem diferenas significativas entre
pelo menos dois tratamentos e de acordo com os resultados obtidos pelo Teste
Tukey, apresentados na TAB. 21, todas as mdias diferiram entre si em um nvel
de significncia de 0,05 para ambos os procedimentos. Diante disso, pode-se dizer
que as condies empregadas nos tratamentos exercem grande influncia na
massa molecular do biopolmero resultante.
105

apresentaram diferenas significativas entre si quanto massa
) das amostras de quitosanas.
molecular mdia viscosimtrica (
GRUPOS TESTE TUKEY

Quitosanas P1

Quitosanas P2
Mediante a variabilidade nos valores dos parmetros e de acordo com

observaes feitas no decorrer desse estudo, as amostras 5 a 9 de ambas os
procedimentos apresentaram potencial para possveis desenvolvimentos nos
segmentos citados na TAB. 2. Tais aplicaes exigem que seja feita uma anlise
qumica, em especial quanto ao teor de metais. A TAB. 22 fornece os resultados
obtidos por WDX RF.
106
107
A anlise por fluorescncia de raios X (FRX) se baseia na medio das

intensidades dos raios X caractersticos emitidos pelos elementos que constituem
a amostra quando excitada por partculas como eltrons, prtons ou ons
produzidos em aceleradores de partculas, ondas eletromagnticas ou por tubos de
raios X. Essa tcnica bastante verstil podendo ser utilizada em aplicaes
industriais que necessitam de rotinas analticas rpidas para controle de qualidade
sem destruir a amostra. Alm disso, possui como vantagens o baixo custo
operacional e mnimo ou nenhum preparo da amostra. No entanto, a determinao
de elementos com nmero atmico baixo por FRX mais difcil, pois estes
apresentam baixa sensibilidade e baixo valor de energia de emisso, sendo essa
sua principal desvantagem (Salvador, 2005).
A anlise qumica mostrou baixssimos teores dos metais nquel, cobre
e zinco. As amostras apresentaram elevado teor de silcio cuja a sua remoo pelo
P1 foi mais efetiva nos tratamentos 7 e 9 e o P2 nos tratamentos 5, 6 e 8. O P1 foi
melhor na remoo dos elementos sdio e enxofre, ao passo que o P2 foi mais
eficaz na remoo do magnsio, fsforo e cloro. Para os elementos alumnio,
potssio e ferro o P2 foi mais efetivo nos tratamentos 5 e 6 e P1 nos tratamentos 7,
8 e 9.
O clcio foi o elemento analisado que apresentou o teor mais
pronunciado. O P2 foi muito mais eficiente na remoo desse elemento em
consequncia do ataque cido realizado na primeira etapa. Isso pode estar
relacionado ao fato das amostras obtidas por esse procedimento terem
apresentado tonalidades mais claras. Segundo Battisti e Campana Filho (2008), as
diferenas nos teores de clcio nas amostras obtidas pelos dois procedimentos
podem ser atribudas s modificaes morfolgicas provocadas pelo ataque
alcalino na primeira etapa do P1.
108
6 CONCLUSES
A sequncia das etapas de obteno de quitina e quitosanas a partir das

cascas de camaro influenciou diretamente nas caractersticas visuais das
amostras. A desmineralizao seguida de desproteinizao (P2) promoveu
amostras mais despigmentadas e fceis de pulverizar, o que as tornam mais
interessantes do ponto de vista comercial, no s pelo aspecto fsico, mas por
otimizar o processo ao se eliminar a etapa de despigmentao.
Os tratamentos 1, 2, 3 e 4 no foram eficientes na obteno da
quitosana, enquanto os tratamentos 5, 6, 7, 8 e 9 geraram materiais com os
e
parmetros , variados para ambos os procedimentos. O conhecimento
desses parmetros de suma importncia nas aplicaes de quitina e, sobretudo,
quitosana, uma vez que estes influenciam diretamente nas propriedades do produto
final.
As tcnicas utilizadas no presente estudo se mostraram satisfatrias em
avaliar as condies de processamento, proporcionando uma alternativa para
determinar esses parmetros fsico-qumicos e a eficincia dos processos de
obteno dos bioplmeros, podendo ser utilizadas na indstria e em laboratrios de
pesquisa, a fim de garantir o controle de qualidade em linhas de produo, bem
como tornar reprodutveis as pesquisas com esses materiais. Para isso, as
metodologias utilizadas nos processos de extrao e caracterizao desses
biopolmeros deveriam ser padronizadas a fim de se obter maior confiabilidade e
credibilidade no desenvolvimento de novos produtos.
Apesar de todo o apelo sustentvel intrnseco em todo o processo de
produo de quitosana, trabalhar com a extrao desse material por meio de
cascas de camaro oriundas dos rejeitos pesqueiro dentro dos conceitos de
biorrefinaria ainda um desafio graas s inmeras adaptaes que devem ser
feitas, elevando os custos do processo. No entanto, foi possvel observar o
potencial dos materiais obtidos em diversas aplicaes mediante a variabilidade
dos parmetros analisados. Isso deixa como perspectivas futuras a possibilidade
de utilizar esses materiais no desenvolvimento de embalagens biodegradveis,
cobertura protetora de alimentos, sistemas de liberao de frmacos, curativos e
cosmticos.
109
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AUTARQUIA ASSOCIADA UNIVERSIDADE DE SO PAULO

Processos de obteno e caracterizao fsico-qumica de quitinas e quitosanas

Ana Carolina Moreira Fonseca

Dissertao apresentada como parte dos

Processos de obteno e caracterizao fsico-qumica de quitinas e quitosanas

Ana Carolina Moreira Fonseca

Dissertao apresentada como parte dos

Fora divina que nos rege.

Aos meus queridos irmos Celso e Jonathan.

s minhas avs Ana e Maria

Ao meu amado sobrinho e filho por Deus, Guilherme.

Ao querido Eng Antnio Bettega pela amizade, apoio e pela proposta de

Ao meu orientador Prof. Dr. Nelson Batista de Lima pela oportunidade de

Ao IPEN pela oportunidade e infraestrutura concedidas para o

Fundao Ptria pelo apoio financeiro.

Trade Solues em Resduos Ltda. pelas cascas de camaro e ao Nilton

Ao CCTM e colegas por todo apoio.

Aos professores e mestres do IPEN pelos ensinamentos.

Prof. Dra. Olga Zazuco Higa pelos ensinamentos e pelo exemplo de

Ao Dr. Valter Ussui pelo apoio e pelas ideias valiosas.

Ao Prof. Dr. Antnio Augusto Couto pelos ensinamentos e apoio.

Ao Dr. Marcos Antnio Scapin pela disponibilidade e pelas anlises de FRX.

Ao Olandir pela disponibilidade.

Ana Cludia Martinelli Feher pela disponibilidade e pacincia em resolver

Aos colegas do laboratrio de Biomateriais do CQMA pelo apoio e amizade.

Prof. Dr. Zlia Ludwig pelos ensinamentos e pelo incentivo em fazer o

Eng. Luiza Morikawa, ao Sr. Francisco Canto e aos colegas de trabalho

Aos meus familiares e amigos pelo apoio.

A todos que passaram pelo meu caminho e de alguma maneira contriburam

Amai ao prximo como a si mesmo.

Foi tentando fugir de mim mesma que acabei me encontrando.

Ana Carolina Moreira Fonseca

A quitina o principal produto obtido do processamento das cascas de

, e a tcnica de titulao cido-base mensurada por condutimetria foi utilizada

Palavras-chave: Quitina, quitosana, processos de obteno, caracterizao fsico-

Ana Carolina Moreira Fonseca

Key-words: Chitin, chitosan, obtaining processes, physicochemical

TABELA 1 - Dados referente a pesca de camaro no municpio de Canania-SP no

FIGURA 1 - Principais categorias de pescado e a produo pesqueira em Canania

Grau Mdio de Desacetilao

DRX Difrao de Raios X

FRX Fluorescncia de Raios X

FT-IR Espectroscopia na regio do Infravermelho por Transformada de Fourier

Fam rea do espalhamento amorfo

Iam Intensidade do espalhamento amorfo

ICr Intensidade do espalhamento cristalino

Io Intensidade total do difratograma

IV Espectroscopia na regio do Infravermelho

Massa Molecular Mdia

Massa Molecular Mdia Numrica

Massa Molecular Mdia Ponderal

Massa Molecular Mdia Viscosimtrica

Massa Molecular Z-Mdia

MEV Microscpia Eletrnica de Varredura

Qn Quitina obtidas pelo procedimento 2

Qtn Quitosanas obtidas pelo procedimento 1

Qtn Quitosanas obtidas pelo procedimento 2

TPL Titulao Potenciomtrica Linear

Grau Mdio de Cristalinidade

WDXRF Espectroscopia de fluorescncia de raios X por disperso de

Nas ltimas dcadas, as atenes tm se voltado em substituir os

rejeitados pela indstria pesqueira em consequncia da alta produtividade nacional.

FIGURA 1 - Principais categorias de pescado e a produo pesqueira em Canania no

O camaro sete-barbas (Xiphopenaeus kroyeri) representa a maior