CLASE 2: Genetica vegetal

La transcripcin en eucariontes
Qu es un genoma?
Toda la informacin gentica (ADN o ARN) que posee un organismo, tanto
codificante como no codificante.

Qu es un gen?
Un segmento de un cromosoma que codifica para una protena o una molcula de
ARN, es decir que los genes requieren ser transcritos desde una cadena de ADN (o
ARN)

Dogma central de la biologa molecular

Estructura y expresin de un gen

Promotor va a regular lo que viene abajo del genoma
Luego va a ser transcripta quedando un pre-mRNA con la RNA
polimerasa
Ocurre Splicing, eliminacin de intrones, y modificaciones para darle
estabilidad, capping, poliadenilacin
Spliceosoma corta
Codn de inicio AUG metionina

Capping Inicia con la adicin al extremo 5' de la estructura denominada

caperuza (CAP), que es un nucletido modificado de guanina, la 7-metilguanosina
trifosfato, que se aade al extremo 5' de la cadena del ARNm transcrito primario
(ubicado an en el ncleo celular) mediante un enlace enlace trifosfato 5'-5', en
lugar del enlace 3',5'-fosfodister habitual. Esta caperuza es necesaria para el
proceso normal de traduccin del ARN y para mantener su estabilidad; esto es
fundamental para el reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma.
Poliadenilacin Es la adicin al extremo 3' de una cola poli-A, una
secuencia larga de poliadenilato, es decir, un tramo de ARN cuyas bases son
todas adenina. Su adicin est mediada por una secuencia o seal de
poliadenilacin (AAUAAA), situada unos 11-30 nucletidos antes del extremo 3'
original (Figura 2). Esta cola protege al ARNm frente a la degradacin, y aumenta su
vida media en el citosol, de modo que se puede sintetizar mayor cantidad de
protena.

La regin codificante (CDS) se traduce formando la protena al entrar

en el ribosoma

Regulacin gnica eucarionte: Promotor

Es una regin de ADN que controla la iniciacin de la transcripcin de una
determinada porcin del ARN. Un promotor por lo tanto, promueve la transcripcin
de un gen. La regin promotora est compuesta por una secuencia especfica de
ADN localizada justo donde se
encuentra el punto de inicio de la
transcripcin del ADN y contiene la
informacin necesaria para activar o
desactivar el gen que regula.
Los promotores tienen secuencias de
nucletidos definidas, como la cajas
"TATA" y "TTGACA". Los promotores
se localizan en los extremos 5'-
terminales de los genes. La ARN
polimerasa se une a las secuencias
de dichos promotores iniciando el
proceso de la transcripcin.
 Factores de transcripcin (FDT)
Protenas encargadas de regular la transcripcin de genes
Son responsables de los patrones de expresin (tejido, estadio de
desarrollo y estmulos)
Usualmente poseen dominios de unin a ADN y interaccin protena-
protena
No forman parte de la maquinaria basal (Holoenzima RNA pol)
Los FDT son externos al RNA

Promotor plantas

*ACC oxidasa Aminociclopentanocarboxilato oxidasa

Silenciamiento postranscripcional de genes (PTGS)

Corta o se une al mensajero inhibiendo la transcripcin, regulando la
transcripcin del gen.
MicroRNAs (miRNAs) son ARN pequeos de ~21 nt en plantas
Regulan los niveles de transcrito y su traduccin
Son procesados por la protena DICERlike (DCL) y cargados en
cargados en la protena ARGONAUTA (AGO)
El miRNA unido a la protena AGO regula la expresin de genes
Complementariedad con microRNAs como gua y argonauta (AGO)
junto con esto forma el complejo que lo corta

Dicer-like (DCL) componente clave en la biognesis de ARN pequeo en

plantas, ribonucleasa. Dicer cataliza el primer paso del mecanismo de RNAi:
corta ARN doble banda y pre-microARN (pre-miARN) en fragmentos de ARN de
interferencia pequeos llamados ARNip (siRNAs y miRNAs) de 20-25 nucletidos

Argonauta (AGO) es una familia de protenas que desempea un papel central

en el proceso de silenciamiento de RNA , en el que las protenas de esta familia
funcin como componentes catalticos del ncleo del complejo de silenciamiento
inducido por ARN complejo (RISC). El RISC es responsable del fenmeno de
silenciamiento de ARN llamado interferencia de ARN (RNAi). Las protenas
argonutas se unen a las diferentes clases de pequeos ARN no codificantes , tales
como microRNAs (miRNAs), pequeos RNAs de interferencia (siRNAs). ARN
pequeos guan Argonauta a sus objetivos a travs de complementariedad de
secuencia (apareamiento de bases), que luego produce la escisin de ARN
mensajero o la inhibicin de la traduccin .

MicroRNA (miRNA) es un ARN monocatenario, de una longitud de entre

21 y 25 nucletidos, y que tiene la capacidad de regular la expresin de
otros genes mediante diversos procesos, utilizando para ello la ruta de
ribointerferencia Los miRNA son molculas de ARN transcritas a partir de genes
de ADN, pero no son traducidas a protenas. Muchos miRNA estn bien
conservados entre especies, y muchos componentes de la maquinaria de los miRNA
se han encontrado incluso en Archaea y eubacterias, lo que revela que su origen es
muy antiguo. La secuencia de ADN que codifica para un gen de miRNA tiene una
longitud que supera al tamao final del propio miRNA e incluye la regin miRNA y
una regin que es complementaria a la anterior, lo que permite su apareamiento.
Esto conlleva que, durante la transcripcin de esta secuencia de ADN, se forman
regiones que tienen la capacidad de formar una horquilla y generar un ARN
bicatenario primario largo conocido como pri-miRNA. Posteriormente, una enzima
nuclear llamada drosha corta las bases de la horquilla, formando lo que se
denomina pre-miRNA. Este pre-miRNA es transportado desde el ncleo al
citoplasma por la exportina 5. Una vez que el pre-miRNA est en el citoplasma es
fragmentado por la enzima dicer, que lo corta hasta la longitud final de 20-25
nucletidos.
La funcin de los miRNA est relacionada con la regulacin de la expresin gnica.
De esta forma un miRNA es complementario de una parte de uno o ms ARN
mensajeros (ARNm). Los miRNA de plantas suelen mostrar complementariedad
perfecta con regiones codificantes e inducen el corte y la posterior degradacin del
ARNm diana (como ocurre con los siRNAs en animales)

siRNA son las siglas en ingls de small interfering RNA, en espaol ARN
pequeo de interferencia o ARN de silenciamiento es una clase de ARN
bicatenario. Es un tipo de ARN interferente con una longitud de 20 a 25 nucletidos
que es altamente especfico para la secuencia de nucletidos de su ARN mensajero
diana, interfiriendo por ello con la expresin del gen respectivo. Adems, los siRNAs
tambin actan en otras rutas relacionadas con el RNAi, como en la defensa
antiviral o en la organizacin de la estructura de la cromatina en un genoma.
 Mediante la unin del miRNA con el mRNA por complementariedad de
bases AGO es capaz de reprimir la traduccin o llevar el RNA mediante su
actividad nucleasa

Niveles de control de la expresin de genes: ncleo

Pueden ser a nivel de:
Genoma
Amplificacion de genes (raro)
Arreglo de DNA (raro)
Descondensacin de la cromatina
Metilaciones del DNA
Transcripcin
RNA Polimerasa
Procesamiento del RNA y traduccin
Capping, Poliadenizacin, Splicing,
Turnover (degradacin)
Transporte del RNA a traves de la envoltura
nuclear
Traduccin
Traduccin
Marcadores en el RE
Post-traduccional
Ensamblaje de las proteinas
Modificaciones
Llevada a otros organelos
Degradacion de la protena

Estudio de genomas vegetales

Cmo elegimos qu planta estudiar? Qu informacin podemos obtener?

Dato el trigo comn del pan (Triticum aestivum) evolucion como una especie de
hexaploide posterior hace aproximadamente 2000 aos, despus del cruce natural
de Triticum turgidum y Aegilops taushii.

Arabidopsis thaliana: The Golden Boy

Modelo de estudio al ser primer genoma en ser secuenciado, tener un genoma
pequeo, mapeado, ciclo de vida rpido (6 semanas), fcil manejo y reproduccin,
varios ecotipos y lneas mutantes

Estrategias para el estudio funcional de genes

Gentica Directa: Qu fenotipo est asociado al gen?
Gentica Reversa: Qu gen es responsable del fenotipo?

Obtencin de lneas mutantes

 Origen espontneo
Ecotipos Lineas silvestres
Accesiones Lineas ABRC
Origen desarrolladas
Qumicas Etilmetilsulfonato
Transgenia Agrobacterium
thumefaciens
dicin genica CRISPR (en ingls:
clustered regularly interspaced short palindromic
repeats, en espaol repeticiones palindrmicas cortas
agrupadas y regularmente interespaciadas) son loci de
ADN que contienen repeticiones cortas de secuencias de
bases. Tras cada repeticin siguen segmentos cortos de
"ADN espaciador" proveniente de exposiciones previas a
un virus

Generacin de plantas mutantes para un gen

Etilmetanosulfonato (EMS) agente alquilante de la guanina,
que acta al azar, que al momento de la replicacin la DNA
polimerasa en lugar de poner una guanina introduce una adenina,
volvindose complementaria la hebra a una timina, genera un
codn de trmino temprano, puede producir protenas truncadas.
Disminuye los enlaces triples del DNA
Agrobactherium thumefaciens patgeno que se usa como
herramienta gentica, normalmente tiene genes de Virulencia en un
plsmido entre ellos la citoquininas y auxinas que producen tumor,
adems posee opinas que es el alimento del metabolismo de
Agrobactherium.
Patgeno que genera lesiones similares a tumores mediante la insercin de
una secuencia de ADN (T-DNA) en el genoma de la planta hospedera. Esta
secuencia altera la sntesis de las hormonas auxinas y citoquininas que
promueven la proliferacin del tejido.

Estructura de un plsmido Ti. La regin de T-DNA

se encuentra entre el borde derecho y borde
izquierdo, que son dos secuencias que permiten
detectar dnde empieza y acaba el T-DNA. En el
resto del plsmido encontramos la regin de
virulencia, otra zona donde se encuentran los
genes que permiten a Agrobacterium utilizar las
opinas como alimento y un origen de replicacin
que permite la replicacin del plsmido en
Agrobacterium.
T-DNA es un fragmento del plsmido que es transferido de A.
tumefaciens a las clulas de la propia planta. Por lo tanto, todos los
genes que se encuentren en esta zona van a formar parte del
genoma de las clulas vegetales infectadas. En esta regin
encontramos genes que promueven la divisin celular (provocando
la aparicin de tumores en plantas) y genes de sntesis de opinas
(biomolculas utilizadas como alimento por Agrobacterium).
Agrobacterium es un parsito: consigue, mediante la transferencia de genes,
que la planta que inicialmente no sintetizaba opinas, ahora sea capaz de
sintetizar para que ella (la bacteria) pueda alimentarse con esas opinas.
Adems, transfiere genes que provocan un aumento de la divisin de las
clulas de las plantas infectadas, para garantizarse una buena produccin de
opinas.
 Cuando en la planta sufre una pequea herida, libera ciertas sustancias que
pueden atraer a Agrobacterium hacia ella. Una vez la bacteria reconoce a la
planta, pone en marcha un mecanismo muy complejo: corta el fragmento de
T-DNA de sus plsmidos Ti, y, mediante un poro que abre en la clula vegetal
con su jeringuilla, se lo pasa. El T-DNA est preparado para introducirse en
el ADN de la clula infectada, porque est unido a ciertas protenas de
Agrobacterium que tienen la funcin de llevarlo hasta el ncleo e integrarlo en
un cromosoma. El sitio donde se incluye el fragmento de T-DNA no es
determinado, sino ms bien al azar.

Una vez el T-DNA se inserta en el genoma de la clula de la planta, sta

empezar a expresar los genes que contiene y a dividirse incontroladamente.
Entonces estas clulas empezarn a producir opinas que sern utilizadas por
Agrobacterium para crecer. Adems, todas las clulas que provengan de la
clula infectada, las cuales han formado el tumor debido a su crecimiento
desmesurado, tendrn el T-DNA tambin, por lo que producirn ms opinas y
Agrobacterium podr crecer sin problemas.

Proceso:
A. Tenemos una planta que queremos modificar
genticamente.
B. La sumergimos en el cultivo de Agrobacterium
modificado genticamente.
C. Recogemos las semillas y las sembramos.
D. Las semillas brotan y darn lugar a plantas
modificadas genticamente.

Vector binario Genes para que la planta lo replique y clone, pero

tambin para que crezca.

Construccin Regin que se inserta en el genoma, este debe

tener un marcador de seleccin, gen de resistencia antibitico, para
saber si el gen que insertamos est alli.

Elementos cis donde se unen los FDT

Southern Blot

1. Extraccin de ADN
2. Corte con enzima de restriccin
3. Electroforesis en gel
4. Blotting: transferencia a membrana de
nylon
5. Hibridacin con sonda radioactiva
6. Autoradiografa

Close
Herramientas de estudio
Herramientas ingeniera gentica
1. Evaluacin de actividad del promotor
2. Evaluacin de la localizacin subcelular
3. Complementacin de lneas mutante
4. Silenciamiento gnico

Genes reporteros Evaluan la actividad del promotor, al reportarla con

luz. Entre estos esta GUS (uidA) y luciferasa
GUS (uidA) Beta Glucuronidasa de origen bacteriano, cataliza la
hidrlisis del enlace D-glicosdico que genera un precipitado azul
Luciferasa Gen de las lucirnagas, la cual produce una reaccin con
la luciferina para producir luz.
Evaluacin de la localizacin subcelular protena de fusin unida al gen
GFP De color verde, proviene de la medusa, al ser excitada con
luz uv emite un color verde (509 nm)

Para insertar las protenas de inters se debe juntar las regiones codificantes de mi
protena de inters y GFP al juntar debemos quitar el codn de trmino de mi
protena de inters, para que codifique para ambas protenas.
Clorofilas tambin da seales hay que tener cuidado.

Complementacin de lneas mutante

Complementar Corresponde a la transformacin con un gen ortlogo y/o

parlogo que poseen la misma funcin, tanto a nivel molecular cmo a
nivel biolgico con el fin de revertir el fenotipo mutante
Gen ortlogo gen que codifica para la misma funcin en otra especie.
Gen paralogo gen que codifica para la misma funcin en la misma
especie (es redundante)

imagen diapo 37

Silenciamiento gnico: supresin de la expresin

Silenciamiento: corresponde al uso de la maquinaria de PTGS para disminuir el
nmero de transcritos disponibles para la traduccin y as poder estudiar el fenotipo
que se produce en su ausencia

Evaluacin de la expresin de un gen: RT-qPCR

Tcnica que permite cuantificar los niveles de transcritos. Mediante la amplificacin
exponencial y emisin de fluorescencia del fluorforo SYBR green en cada ciclo, el
cual emite luminiscencia al unirse a la doble hebra de ADN. El nmero de transcritos
ser proporcional a la emisin del complejo SYBR-DNA.
qPCR Asociado a transcripcin reversa, es un tipo de PCR cuantitativo
mide en cada ciclo como va aumentando lo transcrito con SYBR green

Expresin absoluta debera empezar con la misma cantidad de muestra

en la muestra, lo cual en la prctica es difcil que ocurra
Expresin relativa Se mide con Housekeeping (HK) que es un gen constitutivo
que se expresa en igual proporcin y no varia producto de las condiciones
experimentales. Se compara con el gen de expresin de inters y se mide en veces
de cambio

Veces de cambio (Fold change) corresponde al nmero de veces que se

expresa respecto del HK utilizado u otra condicin establecida como
normalizadora. Cuando la expresin de un gen es mayor en una condicin
hablamos de INDUCCIN (up-regulated) y cuando es menor nos referimos
a REPRESIN (down-regulated) siempre comparando el mismo

Evaluacin de la expresin global de genes:Microarreglos (dos condiciones)

Compara controles con otro RNAm se obtiene por transcripcin reversa cDNA con
fluorforo rojo
Ocurre en una superficie slida a la cual se une una coleccin de fragmentos de
ADN. Las superficies empleadas para fijar el ADN son muy variables y pueden ser
de vidrio, plstico e incluso de silicona. Los chips de ADN se usan para analizar la
expresin diferencial de genes, y se monitorean de manera simultnea los niveles
de miles de ellos. Su funcionamiento consiste, bsicamente, en medir el nivel de
hibridacin entre la sonda especfica (probe, en ingls), y la molcula diana (target),
y se indican generalmente mediante fluorescencia y a travs de un anlisis de
imagen, lo cual indica el nivel de expresin del gen.
Suelen utilizarse para identificar genes con una expresin diferencial en condiciones
distintas. Por ejemplo, para detectar genes que producen ciertas enfermedades
mediante la comparacin de los niveles de expresin entre clulas sanas y clulas
que estn desarrollando ciertos tipos de enfermedades.

Evaluacin de la expresin global de genes: Affymetrix (una condicin)

Usa RNA complementario que hbrido con DNA y se lava realizando la lectura
estimando cunto se expresa en el chip la condicin mutante
 RNA-seq: secuenciacin por sntesis
Secuenciar todo el RNA, se realiza extraccin de mRNA
Permite realizar anlisis de todos los transcritos (transcriptoma)
Mayor precisin en la medicin de transcritos (directa)
Identificacin de genes desconocidos
Alto nivel de resolucin, una base
RNA-Seq se utiliza para analizar celularmente cuanto cambia continuamente el
transcriptoma
RNA-Seq facilita la capacidad de mirar las transcripciones de genes empalmados
alternativa , las modificaciones post-transcripcional , la fusin de genes , mutaciones
/ SNPs y los cambios en la expresin gnica en el tiempo, o las diferencias en la
expresin de genes en diferentes grupos o tratamientos. ARN-Seq tambin se
puede utilizar para determinar el exn / intrn lmites y verificar o modificar
previamente anotados '5 y 3' lmites de genes.

Diapo 47 y 48
 Deteccin de protenas: Western blot
Permite identificar la presencia de una protena cualitativa o
semicuantitativa
Utiliza anticuerpos para reconocer a las protenas
Se detectan las protenas mediante reacciones enzimticas

Cuantificacin de protenas: ELISA

Permite cuantificar protenas y identificar su presencia
Utiliza anticuerpos para reconocer a las protenas
Se detectan las protenas mediante reacciones enzimticas
El mtodo ELISA, se basa en el uso de Antgenos o Anticuerpos marcados con una
enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunolgica como enzimtica. Al estar uno de los componentes (Antigeno o
Anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o pocillo
(inmunoabsorbente) la reaccin Antgeno-Anticuerpo quedar inmovilizada y, por
tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especfico que al
actuar, la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable
mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro.

RESUMEN CLASE 2
DNA
PCR:detectar la presencia de un gen
Southern blot: determinar nmero de copias o de inserciones de T-
DNA
RNA
Northern blot
RT-PCR y qRT-PCR
Microarrays, RNA-seq: anlisis a gran escala.
Cuantificar la expresin, comparar tejidos, tratamientos, estados de
desarrollo, etc, de un gen o mltiples genes en forma simultnea
Proteinas
Localizacin subcelular
Actividades enzimticas
Western blot , ELISA,: detectar presencia de una protena, basadas en
reconocimiento especfico de la proteina mediante anticuerpos
Protemica: anlisis de protenas a gran escala

Sobre expresin: Promotor fuerte/constitutivo (35S) : gen de inters.

Estudio de la funcin
Mutacin : insercin de T-DNA , silenciamiento . Estudio de la funcin
Protenas de fusin con un reportero: localizacion subcelular
Promotor del gen de inters con un reportero: localizacin en tejidos,
estados de desarrollo,induccin por factores externos, hormonas, etc

___________________________________________________________________
 CLASE 3: Hormonas

Reguladores del crecimiento

Grupos bsicos de reguladores del crecimiento:
Auxinas
Citoquininas
Giberelinas
Acido abscsico
Etileno

Generalidades:
Actan a bajas concentraciones
Interactan unos con otros (los resultados estn
determinados por las concentraciones relativas entre las diferentes
fitohormonas). Pueden ser sinrgicas potenciar su efecto o
antagnicas, inhibir el efecto.
Los reguladores endgenos del crecimiento estn
presentes en la planta durante todo su ciclo de vida pero su
concentracin flucta. Su concentracin relativa vara en funcin del
estado fisiolgico de la planta y en cada uno de los rganos de sta.
Estn involucrados en numerosos procesos fisiolgicos.
Responden a estmulos biticos y abiticos, parsitos,
microorganismos, etc.
Organismo ssil adherido a su sustrato entonces debe
adaptarse a este

Auxinas
promotoras de la proliferacin celular y la induccin de la morfognesis
(formacin de rganos)
cido indol actico (AIA) (auxina endgena) es el nombre de su
principal compuesto
Participa en el alargamiento cell, luego de la formacin de pequeas
cells.Esto se produce por la fomentacin del crecimiento de la vacuola, junto
con un aumento en la cantidad de agua que almacena que es inducida por el
ingreso de sales a la vacuola. Esta vacuola genera una presin turgente
sobre la pared celular lo que produce el alargamiento.
Est principalmente en meristemas apical (crecimiento vertical
preferentemente por sobre el lateral) Estrategia para la bsqueda de luz.
Sntesis en el meristema apical, axial y radicular
Movimiento basipetalmente del pice (arriba) hacia la base (abajo)
Para podar las plantas se corta arriba (meristema apical) as la auxina
ya no va a estar arriba y comenzar el crecimiento lateral
Movimiento en races es acropetal (de la punta de la raz hacia arriba)
Auxinas sintticas tienen accin herbicida mediante inhibicin de la
sntesis de aa o impedimento en la realizacin de la fotosntesis
Estimula la produccin de etileno (maduracin de la fruta)
Su concentracin es de 0,001 y 0,1 mg/Kg
Se sintetizan en las yemas, hojas jvenes, frutos y en el embrin
Su transporte es polar
Auxinas sintticas:
 cido indol butrico (IBA)
cido naftalen actico (ANA)
2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D)
Nota: A diferencia de las auxinas endgenas que se degradan con mecanismos
propios de la planta, las auxinas sintticas no lo hacen. Adems tienen numerosos
usos en la orticultura. Proliferacin de races
2,4-D y ANA son auxinas sintticas,usadas como reguladores del crecimiento a
bajas concentraciones y como herbicidas a altas dosis.

Requerimientos estructurales bsicos para la actividad auxnica:

Presencia de una carga negativa en el grupo carboxilo de la cadena
lateral separada por una distancia de 0.5 nm de una carga residual positiva
Anillo indlico no es esencial para la actividad auxnica, aunque un
anillo aromtico est presente en la gran mayora de los compuestos
auxnicos

Sntesis Dos vas

1. A travs de triptofano 90% de la sntesis
Ruta del ac. Indolpirvico ms comn
Ruta de la triptamina
Ruta de la ndole acetaldoxima

2. Independiente de triptfano precursor el indol-3-glicerol

fosfato.
Descubierto en maz mutante (orp), presente en
Arabidopsis (trp2 y trp3)
Son plantas que presentan una reducida sntesis de
triptfano

La mayora del IAA en la planta est en forma conjugada, esta forma ejerce
funciones de Almacenamiento, Transporte, Proteccin contra degradacin oxidativa.
Adems cabe decir que est hormonalmente inactiva

Las auxinas son transportadas desde el meristema apical de las hojas (muchos
metros) se conjuga con otras clulas para disolverse y moverse ms rpido.

Las auxinas se pueden oxidar (descarboxilacin) para frenar su efecto de div celular,
esto es producto de la AIAoxidasa la cual tiene como funcin hacer que el
crecimiento de las hojas sea favorecido hacia el lado luminoso (para que efecten
mayor fotosntesis)

Tropismo movimiento de la planta creciendo hacia la fase luminosa

Nasta mov. de orientacin

Transporte Via polar (en tejidos no vasculares), sino es a travs del

floema por medio de plasmodesmos (va 100 veces ms rpida)
Basipetal en tallos, acropetal en races.

plasmodesmos Se llama plasmodesmos a cada una de las unidades continuas

de citoplasma que pueden atravesar las paredes celulares, manteniendo
interconectadas las clulas continuas en organismos pluricelulares en los que existe
pared celular, como las plantas o los hongos.

Hay molculas que bloquean el transporte polar de auxinas bloquean

el eflujo de auxinas y no el influjo (inhibidos por falta de O2 e inhibidores
metablicos),
Transporte por ATPasas ocurre acidificacin del pH de la pared, donde
son pH es de 5 y el intracelular es de 7

Entonces el transporte de auxinas de forma polar ocurre partiendo de la cell ms

arriba en el pice, la auxina est disuelta en el citoplasma en su forma desprotonada
(AIA-) atraviesa la membrana por difusin facilitada hacia la zona de la pared
celular. Por
otra parte,
haciendo uso
de transporte
activo los
protones salen
hacia la pared
celular dando
un pH ms
cido. AIA- se
protona en
este medio en
un equilibrio e
ingresa a la
siguiente cell,
mas cercana a
la base de la
planta por
medio de
difusin
simple donde
AIAH se
desprotona y
el H+ sale
hacia la pared
acidificando
haciendo uso
de ATP,
nuevamente
sale AIA- por
medio de un
transportador
de axina
anin. Ocurre
clulas
situadas en un
pice del coleptilo.
Coleoptilo primera hoja modificada de tal modo que forma una caperuza cerrada
sobre las hojas siguientes

Mutantes del transporte auxnico

AUX1: auxin resistant 1 (Arabidopsis) candidato para el
carrier de influjo auxnico
codifica protena de membrana similar a permeasa
(funcionan como H+-symporters)
mutacin en este gen confiere resistencia a auxinas y
etileno pero tambin afecta el gravitropismo radicular
PIN1, PIN2 pin-formed (Arabidopsis)
familia de genes que codifican prot. de membrana con
similitud a los transportadores procariotas y eucariota
malformaciones florales y reduccin del transporte polar
auxnico en la inflorescencia (pin1)
fenotipo agravitrpico e insensibilidad a auxinas (pin2)
PIN2=AGR1=EIR1 es esencial para el gravitropismo
radicular y modificara un componente del carrier de eflujo auxnico,
predominantemente expresado en races

Efectos fisiolgicos
Auxinas afectan el ciclo celular actan entre la mitosis e interfase,
induce ciclinas para que haya mayor divisin celular, esto tambin lo hace la
citoquinina
En invierno se inhibe la div. cell.
Auxinas promueven la elongacin celular en tallos y coleoptiles pero lo
inhiben en races
Participacin en respuestas trpicas: fototropismo gravitropismo
modelo Cholodny-Went basado en la redistribucin lateral de auxina y el
subsecuente crec. diferencial
Regulacin de la dominancia apical
Efecto promotor en la formacin de races laterales y adventicias
mutante superroot de Arabidopsis: mayor sntesis de auxina estimula una
formacin excesiva de races laterales (fenotipo letal)
Regulacin del desarrollo floral ( mutantes pin)
Induccin de cuajado de frutos y partenocarpia
Induccin de diferenciacin de tejidos vasculares

Auxinas incrementan la extensibilidad de la pared celular

Hiptesis del crecimiento cido: basada en la extrusin protones
inducida por auxina, a travs de H +- ATPasas de membrana, que acidifican
el apoplasto activando enzimas que ablandan la pared celular
 expansinas: prot. de pared celular que alteran la extensibilidad de la
pared en respuesta a pH cido

Rol de las Auxinas en la Produccin de

Giberelinas

El receptor de auxina
en la membrana se llama TIR1,
que cuando se une a Aux/IAA
que est en el citoplasma
(inhibidor de la auxina), este lo
enva al proteosoma y lo
degrada.

Las auxinas remueven

Aux/IAA dejando a ARF libre (es
un homodmero y un FDT) este
se une a la regin promotora de
genes de auxina. Zona
especfica de 5,6 o 7
nucletidos.
 Luego genes de respuesta tempranas auxinas se activan .

Auxina tiene aproximadamente 4 receptores

Genes de respuesta a auxina (entre ellos las ciclinas tipo D) poseen en

su promotor AuxREs, sitio de unin de factores de transcripcin ARF

La activacin transcripcional de estos genes involucra la protena

TIR1, parte del complejo E3 ubiquitina ligasa SCFTIR1.
Tir1 y sus homlogos AFB1, 2 y 3 seran receptores nucleares de
auxina. La unin de la hormona induce el reconocimiento y unin a los
represores Aux/IAA

Citoquininas
Actan junto a las auxinas en la divisin cell
Agrobacterium thumefaciens produce auxinas y citoquininas y por ello
produce tumores
Producen brotes junto a las auxinas
Cuando la concentracin de auxinas y citoquininas es igual produce
tumores llamados callos
auxinas/citoquininas > 1 crecimiento de races
auxinas/citoquininas < 1 crecimiento de brotes
Retardo de la senescencia (envejecimiento cell) vejez cell se produce
por ac abscsico
Ruptura de la dominancia apical, promueven la formacin de yemas
axilares.
concentracin de 0,1 y 500 ug/Kg
transporte no polar
Se sintetizan en el embrin y las races; se encuentran en todos los
tejidos

Endogenas
Zeatina (Zea)
Isopenteniladenina (2iP)

Sintticas
 Kinetina (Kin)
Benziladenina (BAP)

Modelo de la sealizacin de citoquininas

1. La citoquinina se une a CRE1, que probablemente se encuentra como

dmero. La citoquinina se une a la parte extracelular de CRE1 llamada
dominio CHASE. Dos sensores quinasa hibridos (AHK2 y AHK3) que
contienen un dominio CHASE tambin pueden actuar probablemente como
receptores de quinasa en
Arabidopsis.
2. La unin de la
citoquinina a estos
receptores activa su
actividad histidina quinasa.
El fosfato es transferido a
un residuo de aspartato
(D) en los dominios
receptores fusionados.
3. Entonces el
fosfato es transferido a
una histidina conservada
presente en una protena
AHP.
4. La fosforilacin
hace que la protena AHP
se mueva hacia el ncleo,
donde transfiere el fosfato
a un residuo de aspartato
localizado en el dominio
receptor de ARR tipo B.
5. La fosforilacin
del ARR tipo B activa el
dominio de salida e induce
la transcripcin de genes
que codifican ARRs tipo A.

Etileno
Hormona que es un gas
acta a concentraciones bajas
actua en individuos adyacentes
maduracin de frutos
 participa en la senescencia y en absicin (muerte programada para
eliminar hojas)
afecta el transporte de auxinas
Participa en iniciacin de elongacin del tallo y desarrollo de yemas.
Concentracin en partes por milln
Se sintetiza a partir de metionina en el ciclo de yang que posee
enzimas entremedio del ciclo que inhiben su sntesis as inhiben maduracin
de fruto pero mantiene el ciclo de crecimiento activo

No todo el ACC que se encuentra en el tejido se convierte en etileno, tambin puede

convertirse a la forma conjugada N-malonil ACC que no se hidroliza y puede
acumularse en el tejido, y una segunda forma es el GACC.

Sntesis de metionina ocupa la enzima SAM sintetasa, luego la acc sintasa y acc
oxidasa

Callo no hay sntesis de etileno pero si estn sus receptores activos

El Receptor de etileno (ETR1) Al unir etileno el receptor dimeriza e inicia la

transmisin de la seal por autofosforilacin y transferencia de fosfato

Giberelina
participa en el proceso de fecundacin decidiendo el tamao del fruto
 descubierta en hongo de gibberella
c giberilico (GA3) 1ra identificada
50 tipos
Crecimiento de yemas latentes
Germinacin de semillas en dormicin, semillas que no germina.
Inhibe
Induce floracin
Transporte no polar
Se sintetiza a partir de isopentil pirofosfato

Invierno mucho c absilico (ABA) y poca giberelina

Giberelinas activas son la GA1, GA3, GA4 y GA7

crecimiento de tallo
transicin entre fase juvenil y el adulte
Induce sexo en las plantas (meln)
Su sntesis requiere cloroplastos y RE, citoplasma
GA2ox y GA3 ox son determinantes para hacer giberelinas activas e
inactivas
estimula mitosis division cell
GA3ox produce Giberelina activa
GA2 ox degradacin de Giberelina

Aplicaciones Giberelinas
Uvas

Germinacin de las semillas

1. Embeberse (ingresa agua) cuando aumenta 3 veces su peso est apta
para germinar
2. Nucela tiene inhibidores a la germinacin (para germinar no deben
tener de estos) Hay semillas con testas impermeables para que no germinen
3. Libera giberelinas viaja por endospora y llega a la capa de aleurona
donde tienen receptores de giberelinas. Interactan con genes

Biosntesis y Metabolismo de las Giberelinas:

Son sintetizados como una ramificacin de la ruta terpenoide. Las giberelinas son
diterpenos tetracclicos formados por 4 unidades de isopreno.

La unidad bsica del isopreno es el isopentenil difosfato (IPP). Luego se aaden

intermediarios de 10, 15 y 20 carbonos (geranilgeranil difosfato). El GGPP es un
precursor de muchos compuestos terpenoides, incluidos carotenoides y slo
despus de la biosntesis del GGPP la ruta se convierte en especfica de las
giberelinas.

La biosntesis se puede dividir en 3 etapas:

1ra Las reacciones de ciclacin convierten el GGPP en ent-kaureno.

2da Un grupo metilo del ent-kaureno se oxida a cido carboxlico, convirtindose en
GA 12 o a GA 53 dependiendo de si la GA es oxidada en el C13 (ms comn).

3ra GA 12 o GA 53 son convertidas en las diferentes Gas. Producidas por una serie
de oxidaciones en el C20. En la ruta de la hidroxilacin del C13 se genera GA 20 ,
esta es oxidada a giberelina activa GA 1 , por una reaccin del 3-hidroxilacin.
Finalmente, las hidroxilaciones en el C2 convierten GA 1 , en las formas inactivas
GA 29 y GA 8 .

1. GA 20-oxidasa: cataliza reacciones en etapas de oxidacin del carbono 20 entre

GA 53 y GA 20 .

2. GA 3-oxidasa: aade un grupo hidroxilo al C3 para formar GA 1 .

3. GA 2-oxidasa: inactiva GA 1 al catalizar la adicin de un grupo hidroxilo al C2.

Las Giberelinas pueden estar unidas covalentemente a azcares:

Las giberelinas activas estn libres, aunque se conoce una gran variedad de
glucsidos formados por la unin covalente de una giberelina y un azcar. Estas
predominan sobretodo en algunas semillas. El azcar es generalmente glucosa.

La GA 1 es la giberelina biolgicamente activa en el control del crecimiento del tallo:

En la actualidad sabemos que las plantas de guisantes contiene ms GA 1 que las

plantas enanas. Los niveles endgenos de GA 1 estn correlacionados con la altura.

Las auxinas promueven la biosntesis de gibereleinas:

Hoy sabemos que las giberelinas pueden inducir la biosntesis de auxinas y que las
auxinas pueden inducir la biosntesis de las giberelinas. Si se decapitan plantas, se
induce el cese de la elongacin del tallo y no slo se reduce el nivel de auxinas al
eliminar su fuente, sino que el nivel de GA 1 en la parte superior del tallo tambin
cae drsticamente. Si se restaura la yema (auxinas) se recupera el nivel de GA 1 .
La presencia de auxinas promueve la transcripcin de GA3ox y reprime la
transcripcin de GA2ox.

Los mecanismos fisiolgicos del crecimiento inducido por Giberelinas:

Las giberelinas aumentan tanto la divisin celular como la elongacin

celular debido a un aumento en el nmero de clulas y en la longitud de las
clulas en respuesta a la aplicaciones exgenas.

Las giberelinas aumenta la extensibilidad de la pared celular sin acidificarla:

Un anlisis mostr que las giberelinas reducan la fuerza mnima que causara la
extensin de la pared. As tanto las giberelinas y las auxinas parecen ejercer
efectos similares. En el caso de las auxinas, parece estar mediada en parte por la
acidificacin. Sin embargo, este no parece ser el mecanismo de la giberelina. Las
giberelinas no estn nunca presentes en los tejidos en ausencia total de auxinas y
los efectos de las giberelinas pueden depender de la acidificacin de la pared
inducida por auxinas.

La Transduccin de la seal en Giberelinas: la capa de aulerona de los cereales

Los granos de cereal pueden dividirse en 3 partes: el embrin diploide, el

endospermo triploide y la fusin testa-pericarpo (cobertura de la semilla-pared del
fruto). El embrin cuenta con un rgano de absorcin especializado, el escutelo, que
absorbe las reservas alimenticias solubilizadas en el endospermo y las transmite al
embrin. En endospermo est formado por 2 tejidos: el endospermo amilceo y la
capa de aleurona.

Este proceso consta de 5 etapas:

1. Las giberelinas son sintetizadas por el embrin y liberadas al

endospermo de reserva a travs del escutelo.
2. Las giberelinas difunden a la capa de aleurona.
3. Las clulas de la capa de aleurona son inducidas a sintetizar y
secretar la -amilasa y otras hidrolasas al endospermo.
4. El almidn y otras molculas se rompen en molculas ms pequeas.
5. Los solutos del endospermo son absorbidos por el escutelo y
transportados al embrin en crecimiento.
El cido giberlico aumenta la transcripcin del mRNA de la -amilasa.