Mannheimia haemolytica

Hugo Barrios Garca

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
Universidad Autnoma de Tamaulipas

Resumen:
Mannheimia haemolytica antes llamada Pasteurella haemolytica, es un patgeno oportunista del
aparato respiratorio alto; es una bacteria Gramnegativa, encapsulada, no mvil, de forma cocobacilar
o de bacilo pequeo pleomrfico. Ha sido aislado de diferentes animales; se asla con frecuencia
tanto en bovinos clnicamente enfermos de neumona como en bovinos sanos, y forma parte del
complejo respiratorio bovino al interactuar con otras bacterias, virus y factores estresantes. Cuando
existen las condiciones medioambientales para la replicacin bacteriana, expresa factores de
virulencia dentro los que destacan una leucotoxina secretada, una sialoglicoproteasa, protenas de
membrana externa, protenas de enlace unidas a transferrina, adhesinas, cpsula y lipopolisacrido
(LPS). Para el diagnstico, el aislamiento bacteriolgico suele ser el mtodo ms sencillo para la
identificacin, sin embargo para llegar a subgrupos, las serotipificaciones suelen ser ms complicado
debido a que no todos los laboratorios cuentss con toda la batera de antisueros para tipificarla. El
tratamiento en el complejo respiratorio es difcil, ya que debe ir enfocado a combatir las diferentes
causas de la enfermedad; sin embargo, la terapia de antimicrobianos es el mtodo que se utiliza con
ms frecuencia.

Introduccin:

El gnero Mannheimia se introdujo en 1993 para incluir un nmero de microorganismos que

previamente pertenecan a la familia Pasteurellaceae. Antes de la introduccin de Mannheimia, los
miembros de la familia Pasteurellaceae consistan de Haemophilus, Actinobacillus y Pasteurella
(Pohl, 1981). Dentro del gnero Pasteurella, haba varias especies como los principales agentes
patgenos que son Pasteurella haemolytica y Pasteurella multocida.

Pasteurella haemolytica actualmente llamada Mannheimia haemolytica se subdividi en dos biotipos

y 17 serotipos. Los biotipos A y T se basan en la capacidad de fermentar L - arabinosa o trehalosa,
respectivamente. Los diferentes serotipos se establecieron basndose en la solubilidad de los
polisacridos extrables en pruebas de hemaglutinacin (Biberstein, 1960). Los serotipos 1, 2, 5 - 9,
11 y 12 pertenecan al biotipo A, mientras que los serotipos 3, 4, 5, y 15 pertenecan al biotipo T; Sin
embargo, el uso sondas de hibridacin ADN - ADN, as como anlisis de la secuencia de ADNr, se
demostr que los dos biotipos slo tenan homologa de ADNentre 3% y 13%, indicando que eran
microorganismos distintos. Adems, tambin se demostr basndose en la homologa de ADN que
P. haemolytica y P. multocida eran muy diferentes y no debera ser colocados en el mismo gnero.
En 1999, toda el gnero P. haemolytica biotipo A serotipos 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13, 14, 15 y 16
fueron reclasificados en un nuevo gnero llamado Mannheimia y fueron nombrados M. haemolytica
(ngen, 1999). Los serotipos de P. haemolytica 3, 4, 10 (pertenecientes al biotipo T) fueron
reclasificados como Pasteurella trehalosi (actualmente llamada Bivesteinia threalosi). P. haemolytica
sereotipo 11 se coloc en un gnero separado como Mannheimia glucosida (Gyles, 2010)

Caractersticas de la bacteria:

Mannheimia haemolytica es una bacteria Gramnegativa, encapsulada, no mvil, de forma

cocobacilar o de bacilo pequeo pleomrfico (1 a 3 m de dimetro), mesoflica, aerobia y anaerobia
facultativa, oxidasa positiva e indolnegativa; fermenta glucosa y otros carbohidratos, produciendo
cido pero no gas y dbil hemoltico. Es negativa a las pruebas de rojo de metilo, gelatinasa,
VogesProskauer. Crece en agar MacConkey, en medios enriquecidos como agar chocolate o agar
sangre, formando colonias lisas de color blanco grisceo, con tamaos de 1 a 2 mm de dimetro
despus de 24 h de incubacin. La mayora de las cepas producen una -hemlisis cuando crecen
en agar con sangre de bovino. Es capaz de fermentar D-sorbitol, D-xilosa, maltosa y dextrina; no
fermentan arabinosa o glucsidos, y son negativas a la ornitina descarboxilasa y NPG
(glucosidasa), pero positivas a ONPF (-fucosidasa). Es la principal causa de neumonas fibrinosas
y necrotizantes y perineumonas del ganado bovino, que a menudo se conoce como fiebre de
embarque (Gyles, 2010; Angen, 1999; Boyce, 2004).

Mannheimia spp., han sido aislado de diferentes animales; el gnero: M. haemolytica ha aislado
de bovinos y ovino, esto incluye todo P. haemolytica biotipo A. Mannheimia glucosida ha sido
aislado de ovejas, previamente P. haemolytica A 11; Mannheimia granulomatis aislado de bovinos;
Mannheimia ruminalis aislado de ovejas; Mannheimia succiniciproducens aislado del rumen bovino y
Mannheimia varigena aislado de bovinos. La reclasificacin fue basan principalmente en estudios de
hibridacin de DNA y de RNA ribosomal 16s (Jaworski, 1998).

Los estudios realizados de M. haemolytica, provienen de aislamientos del patgeno asociado a

neumona bovina. Los animales saludables son portadores nasofarngeos de M. haemolytica de
diferentes serotipos, pero los cambios observados en una infeccin son asociados a slo a los
serotipos A1 y A6 aislados de pulmones neumnicos. M. haemolytica A1 es la causa principal de la
pasteurelosis neumnica bovina, tambin conocida como fiebre de embarque, una infeccin fibrino
purulenta y a veces bronconeumona necrtica en el ganado bovino. El serotipo A1 ha sido aislado
de aislado de bovinos que mueren de este tipo de enfermedad respiratoria aguda ( MURPHY GL 1993: LO
2001)

Factores de la virulencia bacteriana

Actualmente se tiene mayor conocimiento de los factores de virulencia de

M. haemolytica; est incluida una leucotoxina secretada, una sialoglicoproteasa, protenas de
membrana externa, protenas de enlace unidas a transferrina, adhesinas, cpsula y lipopolisacrido
(LPS). Adems, algunos de estos factores de virulencia se han utilizado como candidatos en el
desarrollo de vacunas para proteger el ganado de pasteurelosis neumnica bovina (Highlander
2001; Lo 2001).

Leucotoxina (LKT)

La leucotoxina es la principal protena secretada por M. haemolytica y desempea un papel

importante en la patognesis. Se observ inicialmente que la bacteria tiene una actividad citoltica
especfica contra leucocitos bovinos (Markhamy Wilkie, 1980; Shewen y Wilkie, 1982). Esta molcula
se obtuvo en el sobrenadante de cultivos bacterianos. Los genes que codifican para la leucotoxina
fueron clonaron y secuenciados (Lo, 1985; Highlander, 1989; Se identific que la leucotoxina (LktA)
de M. haemolytica es altamente homloga a la -hemolisina de Escherichia coli (Strathdee y Lo
1987).

La leucotoxina acta formado un poro de aproximadamente 0,9 nm de dimetro en las clulas

blanco (Clinkenbeard, 1989); favoreciendo el escape de iones de las clulas que conducen a un
desequilibrio osmtico y muerte celular. Tambin la leucotoxina induce fragmentacin del ADN,
llevando la clula a apoptosis (Sun, 1999; Atapattu y Czuprynski, 2005) e induciendo citotoxicidad
por provocar polimerizacin de actina (Atapattu y Czuprynski, 2007); tambin la leucotoxina se une a
la mitocondria, resultando en el dao su funcin y contribuye a la muerte de los neutrfilos (Aulik y
Czuprynski, 2008), el cual es uno de los factores que contribuyen a la patologa de los pulmones
neumnicos (Highlander,

2000). La Leucotoxina enlaza especficamente las clulas 2 integrinas en diana (Li, 1999;
Jeyaseelan, 2000) y solamente reconoce e interacta con las integrinas de origen bovinas
(Deshpande, 2002). Estudios adicionales basados en estas observaciones, mostraron que la cepas
que tienen especificidad contra otras especies de animales producen leucotoxinas que reconocen las
integrinas de esos anfitriones (Dassanayake, 200, 2008, 2009).
Protena de unin transferrina

Con la finalidad de sobrevivir y multiplicarse en los mamferos anfitrin, la bacteria invasora tiene
que asegurar hierro. La disponibilidad del hierro en un husped mamfero es limitada, debido a que
el hospedero ha desarrollado mecanismos para secuestrar el hierro de los patgenos invasores. Las
bacterias necesitan una concentracin de hierro entre 10 -6 y 10-8 M para poder crecer (Gonzales et
al., 2005) y de acuerdo al ambiente que colonizan, se tienen que enfrentar con bajas
concentraciones de este in metlico.

Las bacterias patgenas en el hospedero usan un mecanismo conservado para obtener hierro,
capturando del hospedador molculas cargadas con hierro tales como lactoferrina y transferrina, por
medio de receptores de superficie especficos (Ratledge et al., 2000; Benzaquen., 2010). El hierro
capturado es transferido al periplasma usando energa, que es suministrada por ATP a travs de un
complejo denominado TonB que involucra protenas de membrana interna. El hierro por lo general
est unido a protenas u otros ligandos para mantener su solubilidad y prevenir la formacin
accidental de radicales txicos (Chu et al., 2010).

Un mecanismo de captacin de hierro en diferentes microorganismos, es el de utilizacin de

protenas transportadoras de hierro del hospedador, el cual es mediado por la interaccin de
transferrinas con receptores especficos en la membrana externa de la clula bacteriana. El receptor
constituido por 2 protenas, llamadas TbpA (protena de unin a transferrina A) y TbpB (protena de
unin a transferrina B) (Gonzales, 2005). TbpA es una protena integral de membrana acta como un
canal por el cual se transporta el hierro que es desprovisto de la transferrina. La protena TbpA posee
una regin de 10 aminocidos altamente conservados, los cuales son proyectados hacia la
membrana externa y probablemente esta regin funcione como un dominio que le permita el paso al
hierro libre. Por otra parte la protena TbpB es una lipoprotena que contiene una secuencia que
expresa una seal para la peptidasa II, la cual se encuentra localizada en su extremo amino terminal.
La protena se encuentra expuesta en la superficie bacteriana y tiene la capacidad de distinguir entre
la transferrina cargada con hierro (holotransferrina) y la transferrina libre de hierro (apotransferrina),
mostrando alta afinidad por la holotransferrina (Shouldies, 2004). M. haemolytica posee este sistema
de captacin de hierro para para ser un patgeno y es altamente especfica al hospedero
(Ogunnariwo y Schryvers, 1990; Ogunnariwo, 1997).

Lipo poli sacrido (LPS):

 Es un componente de la superficie celular importante para la virulencia de M. haemolytica en el
hospedero. El LPS de M. haemolytica es estructuralmente similar al de una bacteria tpica
Gramnegativa; es pirognicas, activadora de macrfagos, inducctora del factor de tumoracin,
activadora de la coagulacin en cascada, induce la agregacin plaquetaria e induce choque
endotxico (2, 86).

En algunos estudios, se ha demostrado que el LPS de M. haemolytica tipo A1, fue capaz de causar
dao directo sobre las clulas del endotelio de las arterias pulmonares in vitro; demostrando la
funcin potencial de las endotoxinas en la patognesis de la lesin vascular ( POULSEN, 1989}). El LPS es
un mediador del aumento de citocinas proinflamatorias, lpidos mediadores, procoagulantes,
radicales de oxgeno y proteasas, generados por los monocitos y los macrfagos bovinos ( ZECCHINON
2005 ) tambin incrementa la actividad citoltica de la Lkt y aumenta la expresin factor de necrosis
tumoral alfa (TNF-) (LAFLEUR 1998, 2001 ). Es probable que in vivo, el LPS y la Lkt acten de manera
sinrgica causando dao a los tejidos e inflamacin (Highlander, 2001; Lacroix, 1993). La
proliferacin incontrolada de la bacteria en los pulmones, en ausencia de clulas fagocitas es debido
al efecto citotxico de lucotoxina y podra resultar en inflamacin asociado a LPS (Li y Clinkenbeard,
1999).

Cpsula:
Es un componente de la superficie celular importante para la supervivencia M. haemolytica en el
hospedero. Esta estructura se ha utilizado para clasificar los serogrupos de la bacteria; (Biberstein.;
ANGEN, 1999; Scalan 1991 ) desarrollaron en 1960, un sistema de serotipificacin basado en la
hemoaglutinacin indirecta (HAI) de antgenos capsulares solubles, y, en 1962, Biberstein y Gills
informaron sobre una asociacin consistente entre los serotipos y los biotipos que establece una
serotipificacin capsular (Angen, 1999, Gyles 2010). La cpsula de M. haemolytica favorece la
supervivencia en el hospedero (Brogden, 1989; Chae, 1990) y tambin parece modular la actividad
antibacteriana de neutrfilos bovinos (Czuprynski, 1989; Adlam, 1984). La presencia de cpsula con
propiedades de superficie antifagocticas la hacen parcialmente resistente a fagocitosis (Angen,
1999, Boyce 2004).

Proteinas de membrana externa:

Se han caracterizado diferentes protenas de membrana externa de M. haemolytica (Crave, 1991;
Nardini 1998). El papel de las PME como factor de virulencia radica en favorecer la adherencia a la
clula del hospedero, adems como transportadora de material a travs de la membrana; por otro
lado es inmunognica y potencializa la respuesta de anticuerpos en la proteccin antibacteriana
(SQUIRE 1984; Iovane 1998; Lo y Mellors,1996). Se ha comprobado que las PME aisladas de M.
haemolytica son poderosas moduladoras de la actividad de los leucocitos polimorfonucleados de
bovinos e inducen alteraciones en su actividad biolgica. Se cree que es posible que pequeas
cantidades de PME estimulen la quimiotaxis y la adherencia de los neutrfilos, favoreciendo la
aglomeracin en el punto inflamatorio (Iovane, 1998).

Sialoglicoproteasa (Gcp):
Otulakowski (1983) observo que el sobrenadante del cultivo de M. haemolytica contiene una
actividad enzimtica de la Sialoglicoprotease; Esta actividad tambin fue mostrada por Abdullah
(1992). La Gcp es una metaloproteasa neutra, con actividad de endopeptidasa y neuroaminidasa,
que tiene la capacidad de fraccionar glicoprotena A tipo mucina en diferentes sitios (Abdullah, 1992;
Lee, 1994; Lee 1996; Jaramillo, 2000). Aunque no est de todo claro, se cree que las
sialoglicoprotenas presentes en la superficie de las clulas de la superficie de la mucosa,
macrfagos alveolares y neutrfilos alveolares son degradadas por las Gcp.18.; y aunque tampoco
se con precisin la accin de las Gcp en la patogenia de la enfermedad, podran interferir con la
adherencia de los neutrfilos por una escisin de la O-sialoglicloprotena de las molculas de
adhesin celular; alternativamente, la Gcp puede interferir con la respuesta inmune del husped por
una escisin de las molculas de la IgG sricas o quiz contribuya en la colonizacin bacteriana
(Boyce 2004; , Conlon 1991, Gyles 2010). Neuraminidasa:

Se ha demostrado que la actividad protectora de la secrecin salivar se reduce cuando se remueven

los residuos de cido silico de las glicoprotenas salivares; es posible que la neuraminidasa ejerza
un efecto patognico mediante la remocin de los residuos de cido silico de las glicoprotenas del
husped, y de esta manera reduce el efecto protector del moco, incrementando la adherencia de Mh
al epitelio de la mucosa, particularmente en el tracto respiratorio superior.

(CONFER 1986, JARAMILLO 1999, Jaramillo-Arango 2009).

Adherencia y colonizacin:
Posterior de la inhalacin de las bacterias dentro de los alveolos, ellas deben de mantenerse aun en
contra de los mecanismos de la respuesta inmune inespecfica; la continua exhalacin de aire
remueve las bacterias que no estn firmemente unidas a la superficie celular, adems las presencia
de moco y movimientos ciliares tambin reducen la capacidad de la bacteria para permanecer en los
tejidos del hospedero. Las bacterias, para permanecer en el alveolo poseen mecanismos que
favorecen la adherencia y colonizacin en el hospedero. Estructuras como fimbrias han sido
observadas por microscopia electrnica en la superficie celular de Pasteurella haemolityca Potter
(1987). Jaramillo (2000) describi la purificacin de adhesinas de M. haemolytica, usando G1cNAc y
NeuAc y sugiri que estas molculas son los receptores de unin en las clulas del hospedero. La
adesina de 68 KDa fue llamada MhA (De la Mora, 2006) y el receptor subsecuentemente observado
es una glicoprotena de 165 KDa en neutrfilos (De la Mora, 2007). Tambin se ha observado la
habilidad de M. haemolytica para unirse a fribronectina (Lo y Sorensen, 2007). La fibronectina es
una de las estructuras principales de protenas de la matrix extracelular en eucariotes (Signas, 1989;
Sperandio, 1995).

Adhesinas trimricas TAA):

M. haemolytica poseen estructuras que les permiten adherirse a las clulas del hospedero; algunas
molculas responsables de esta accin se denominan adhesinas. Gracias a una investigacin
reciente se ha descubierto en bacterias Gram negativas una nueva familia de estas protenas,
denominadas adhesinas autotransportadoras trimricas (TAA). Las TAA son protenas
autotrasportadoras secretadas por las bacterias (Henderson, 2004). Todos los autotrasportadores
trimricos, tienen funciones adhesivas; estas adhesinas trimricas, estn caracterizadas por
estructuras parecidas a espirales dispuestas en la superficie celular (Kim, 2006).

Patognesis y enfermedad.

Manhemia haemolytica existe como parte de la microflora nasofarngea comensal en animales

sanos. Los animales sanos tienen la capacidad de controlar la replicacin bacteriana en el tracto
nasofarngeo, posteriormente pequeas cantidades de bacterias inhaladas en gotas en aerosoles y
eliminadas por el sistema inmune del hospedero; en animales estresados, Mannheimia haemolytica
A1 puede proliferar y multiplicarse en el tracto nasofarngeo y traqueal, resultando en la inhalacin
de gran cantidad de bacterias y en la colonizacin en los pulmones (Lillie y Thomson, 1972). El
proceso que resulta en el incremento de M. haemolytica A1 en el tracto nasal, est asociados
agentes virales, estrs debido a hacinamiento lo que compromete el mecanismo de eliminacin en
los pulmones (Whiteley, 1992).

Las Mannheimiosis neumnica bovina o fiebre de embarque es la mayor causa de enfermedad y

muerte de la ganadera. Esta enfermedad est asociada con el stress generado por el embarque de
animales (Thomson, 1869). Cuando los animales de diferentes orgenes son asinados en un amiente
cerrado, durante el transporte se estresan, lo cual provee un excelente condicin para la trasmisin
de agentes infecciosos. Esos animales pueden portar y arrojar varios virus respiratorios que pueden
ser trasferidos a otros animales. Virus respiratorios tales como, herpes virus bovina y diarrea viral
bovino que suelen comprometer al sistema inmune, conduciendo a una infeccin subsecuente y/o
colonizacin por bacterias como M. haemolytica presente el tracto nasofarngeo (Frank, 1987). Como
resultado de la infeccin primaria viral, los animales no pueden eliminar la bacteria que han
colonizado los pulmones (Wilkie y Shewen, 1983). Esta bacteria evade la respuesta inmune
colonizando los alveolos y produciendo dao ene l tejido del hospedero induciendo a una neumona
(Jensen, 1976). M. haemolytica tambin puede causar enfermedad neumnica en ovejas; de hecho,
estudios efectuados por Dassanayake (2009), mostraron que la leucotoxina del serotipo A1 tiene
especificidad a leucocitos de oveja.

Diagnstico:

Para la deteccin e identificacin de M. haemolytica se cuenta con diversas tcnicas de laboratorio

que incluyen: aislamiento y fenotipificacin, serotipificacin y genotipificacin. Para el aislamiento y
fenotipificacin se utiliza el cultivo in vitro en medios a base de agar sangre, adems de pruebas
bioqumicas, todo lo cual permite determinar la morfologa de las colonias, la produccin de
hemlisis, as como su comportamiento bioqumico para efectos de su identificacin y biotipificacin
(Angen, 1999). Para la serotipificacin se emplean tcnicas de hemoaglutinacin mediante la
utilizacin de antisueros de referencia especficos para los 12 serotipos reconocidos (Jaramillo
2009).

La variabilidad y complejidad de las caractersticas fenotpicas y genotpicas del gnero Mannheimia

dificultan en gran medida la clasificacin de los aislamientos a travs de las tcnicas de laboratorio
rutinarias, basadas en criterios descriptivos convencionales, que hacen imposible la clasificacin
taxonmica precisa. Las tcnicas clsicas para la identificacin de bacterias, tales como la
biotipificacin, serotipificacin, determinacin de patrones de susceptibilidad a antibiticos y
fagotipificacin, se basan en diferencias fenotpicas, no obstante estas tcnicas se ven limitadas por
la capacidad de las bacterias de alterar, de manera impredecible, la expresin de algunas de sus
caractersticas, de tal manera que aislamientos de una misma cepa pueden variar fenotpicamente;
adicionalmente, algunos de estos mtodos se ven limitados por la gran cantidad de cepas que son
fenotpicamente nulas, es decir, no tipificables (Jaramillo 2009) Resistencia a antibiticos:

El tratamiento en el complejo respiratorio es difcil, ya que debe ir enfocado a combatir las diferentes
causas de la enfermedad; sin embargo, la terapia de antimicrobianos es el mtodo que se utiliza con
ms frecuencia. Adems, en la mayora de los casos de neumona se comienza con un tratamiento
antes de tomar y enviar muestras a un laboratorio de diagnstico donde se pueda guiar al mdico
veterinario acerca de cul es el antimicrobiano ms eficaz, al administrar un tratamiento errneo no
se garantiza la eliminacin del patgeno deseado, lo que trae como consecuencia un incremento en
la resistencia a antimicrobianos en cepas de M. haemolytica y otros microorganismos (PIJOAN 2000; , WATTS
. Hay estudios donde M. haemolytica tiene resistencia a estreptomycin (81.6%) and gentamicina
1994)

(24.4%) (Samaniego 2011); En otros estudios ha presentado resistencia ampicilina enrofloxacina,

ofloxacina, penicilina (paolichi); debido a que se ha encontrado multidrogoresistencia a diversos
compuestos, para un tratamiento lo ms recomendable es realizar el aislamiento bacteriolgico y
realizar la prueba de susceptibilidad a agentes quimioteraputicos para dar un tratamiento eficaz.

Fuente:
http://siproduce.sifupro.org.mx/seguimiento/archivero/19/2013/demostrativos/docu
mentos/doc_1349-4-2014-05-8.pdf