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Revista CENIC Ciencias Biolgicas, Vol. 38, No. 3, 2007.

RESEA ANALTICA

Aspectos generales de los estudios toxicolgicos


preclnicos ms empleados

Rafael Gmez y Rosa Ms.


Centro de Productos Naturales, Centro Nacional de Investigaciones Cientficas, Calle 198 e/ 19 y 21, Atabey, Playa, Ciudad
de la Habana. Telfono: 2714225, Correo electrnico: cpn@cnic.edu.cu

Recibido: 24 de agosto de 2006. Aceptado: 6 de febrero de 2007.

Palabras clave: Toxicologa aguda, Toxicologa dosis repetidas, citotoxicidad, genotoxicidad, teratognesis, carcinognesis.
Key words: Acute toxicology, doses repeated toxicology, citotoxicity, genotoxicity, teratogenesis, carcinogenesis.

RESUMEN. El desarrollo de nuevos medicamentos impone la necesidad de INTRODUCCION


evaluar su potencial txico en modelos experimentales. Esto es posible a travs
En la evaluacin toxicolgica
de la realizacin de un conjunto de estudios toxicolgicos en diferentes especies
de nuevas sustancias se emplean
de animales que permiten identificar la toxicidad intrnseca, as como los rga-
nos y tejidos diana de la toxicidad relacionada con el compuesto en evaluacin.
bateras de ensayos en diferentes
El tipo y diseo de estos estudios estar en dependencia de las caractersticas y especies animales, que comprenden
destino final del producto, pero en la generalidad de los casos, el objetivo debe modelos experimentales in vitro e in
ser la demostracin de las potencialidades txicas por administracin nica vivo. Las mismas abarcan diferentes
(toxicologa aguda), administraciones repetidas (subcrnica y crnica) y estu- dianas de toxicidad, que van desde la
dios especiales de genotoxicidad, toxicologa de la reproduccin y la fertilidad, toxicidad intrnseca de la sustancia
llegando incluso en muchos casos a ser necesario la evaluacin de su potencial evaluada en los ensayos de toxicidad
carcinognico. Esta evaluacin constituye un aspecto esencial de la valoracin aguda, hasta la evaluacin de sus
de la razn riesgo/beneficio que la entidad reguladora de medicamentos tiene posibles efectos txicos en los dife-
en cuenta antes de autorizar el desarrollo de estudios clnicos en humanos, y rentes sistemas y rganos mediante
posteriormente para la aprobacin de su uso en el mercado, en funcin de la la conduccin de ensayos denomi-
indicacin propuesta. En general, solo la interpretacin de los resultados de los nados de toxicologa especial, como
estudios realizados, en armnica integracin, permite llegar a conclusiones ms son los estudios de genotoxicidad,
abarcadoras sobre el potencial txico de la sustancia evaluada. Con el presente de teratognesis y carcinognesis.1-7
trabajo se pretende detallar los aspectos ms importantes de los estudios ms
La valoracin armnica de los re-
utilizados en la batera de ensayos toxicolgicos preclnicos exigidos por las
sultados de estos estudios permite
Entidades Reguladoras de Medicamentos.
llegar a un criterio ms integral de
ABSTRACT. The evaluation of new drugs involves the evaluation of the toxicity
la toxicidad de la sustancia evaluada
associated with their use in experimental models. In that way, preclinical toxi- y sus posibles consecuencias para el
cological studies in different animal models are necessary for the preliminary ser humano.
determination of intrinsic toxicity and target organs and tissues. The design of Con el objetivo de garantizar la
these studies depends on characteristics and proposed use for the product un- adecuada conduccin e interpre-
der research, but the objective must be the demonstration of the toxicity after tacin de los estudios toxicolgicos
single (acute toxicity) and repeated administration (subchronical and chronical y armonizar internacionalmente los
administration) and special studies of genotoxicity, developmental and fertil- requisitos de registro sanitario, se
ity toxicity and carcinogenicity. This evaluation is important for Regulatory han desarrollado Conferencias Inter-
Authorities who must consider benefits/risks ratio in order to approve clinical nacionales de Armonizacin (ICH),
studies and/or the use of a new drug. Taking into account this background some donde se han definido criterios para
preclinical toxicological studies are established as obligatory and its integral ser considerados en el diseo de los
interpretation contributes to avoid erroneous conclusions about the potential diferentes estudios toxicolgicos,
risk of the compound researched. The aim of this work is to describe the most con base en la evidencia aportada
important aspects related to the conduction of these studies.
por aos de investigacin en el cam-
po de la toxicologa, de forma tal que
se garanticen resultados confiables
y reproducibles.1-4
Desde la pasada dcada, como
resultado de los avances cientficos
y por razones ticas y prcticas, se
han introducido cada vez ms los
denominados mtodos alternativos
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en la evaluacin toxicolgica, con fruto de una iniciativa americana.15 tinuada, con diseos subagudos,
el objetivo de reducir el nmero de A partir de entonces, los pases que subcrnicos y crnicos.
animales empleados en cada ensayo integran la OECD no aceptan los
y refinar procedimientos existentes estudios agudos clsicos como parte Estudios Subagudos
para disminuir el estrs y el sufri- de la documentacin para el registro Los estudios subagudos se de-
miento de los mismos.5, 8, 9 de medicamentos. En Cuba su em- finen como los efectos txicos que se
El animal de experimentacin pleo no est oficialmente derogado, manifiestan tras la administracin
constituye la unidad experimental aunque no constituye un requisito repetida de una sustancia durante
en los estudios toxicolgicos in vivo, indispensable presentar la DL50. Es un corto perodo de tiempo, ge-
y su empleo est regido por regu- suficiente demostrar que las dosis neralmente entre 14 y 30 d . Este
laciones con vistas a un adecuado empleadas son lo adecuadamente ensayo tiene como objetivo obtener
uso, segn los requerimientos del altas con relacin a la dosis mnima informacin para la seleccin de
estudio y tomando en cuenta prin- con actividad farmacolgica en esa los niveles de dosis que sern em-
cipios ticos.9-12 especie,7 siendo la letalidad slo uno pleados en los estudios subcrnicos
El empleo de animales de experi- de los indicadores de la toxicidad y crnicos, as como la identificacin
mentacin ha de estar respaldado aguda de la sustancia que se evala, de los efectos txicos que pudieran
por un protocolo de ensayo, que debe conjuntamente con los efectos aparecer bajo estas condiciones de
confeccionarse cumplimentando las txicos observados y su momento experimentacin. 17, 18
Buenas Prcticas de Laboratorio de aparicin. La letalidad permite
(BPL) no clnicas13 y los protocolos establecer la dosis con la cual se ob- Estudios Subcrnicos
especficos del estudio. serva toxicidad evidente, as como La toxicidad subcrnica, se de-
La seleccin de los diferentes definir la curva dosis-efecto.15,16 fine como los efectos adversos por
ensayos toxicolgicos a emplear, La seleccin de los niveles de toxicidad acumulativa de la sustan-
especies, tiempo y va de exposicin, dosis ha sufrido variaciones con la cia administrada o sus metabolitos,
as como de los niveles de dosis a introduccin de estos nuevos mto- los cuales ocurren por la admi-
emplear en los mismos, estarn en dos. La dosis de 5 000 mg/kg, nivel nistracin del agente durante un
dependencia de las caractersticas aceptado durante muchos aos como perodo de tiempo que representa,
propias de la sustancia a ensayar, as dosis mxima, desde diciembre de aproximadamente, el 10 % de la vida
como de los objetivos de su posible 2001 se ha reducido a 2 000 mg/ del animal. Esto propicia la detec-
uso en humanos. kg en el Mtodo de las Clases, el cin de los efectos aditivos debido
En el presente trabajo se rela- Test Lmite y el Mtodo Arriba y a la administracin del producto,
cionan los ensayos toxicolgicos Abajo, aunque sigue siendo la dosis y permite definir la mxima dosis
ms comnmente empleados en la mxima de eleccin en el Mtodo de con la que no se aprecia toxicidad
evaluacin del potencial txico de la Dosis Fijada.15,16 relacionada con la droga (NOEL),
los nuevos medicamentos, y sus La concepcin actual tuvo su as como la dosis mxima tolerada
caractersticas ms distintivas. Estos origen en el esfuerzo que la comu- (DMT).17-19
ensayos constituyen la base de los nidad cientfica ha realizado en aras El estudio subcrnico no es capaz
estudios exigidos por las entidades de reducir y optimizar el uso de las de detectar aquellos efectos que se
reguladoras.6, 7, 14 especies animales, y porque rara vez manifiestan tras un mayor perodo
los estudios de toxicidad por dosis de latencia; sin embargo, brinda una
ESTUDIOS DE DOSIS UNICAS nicas reflejan problemas que no valiosa informacin sobre los rga-
El estudio de la toxicidad aguda emanen de la toxicidad intrnseca nos dianas, y constituye la base para
evala la toxicidad inducida por la de la sustancia. la seleccin de los niveles de dosis a
droga sujeta a estudio como resul- evaluar en los estudios crnicos.
tado de la administracin de altas ESTUDIOS DE DOSIS REPETIDAS
dosis, ya sea por la administracin El tiempo de duracin mnima Estudios Crnicos
nica o repetida en un intervalo no de los estudios de toxicidad de Los ensayos crnicos se realizan
mayor de 24 horas,15,16 brindando administracin continuada se con el objetivo de determinar po-
informacin sobre la toxicidad in- define, dentro de los requisitos tencial toxicolgico de la sustancia
trnseca del producto y el posible para el registro de medicamentos luego de una prolongada y repetida
riesgo que conlleva su exposicin de nuestro pas,7 en funcin de la administracin. El tiempo de admi-
aguda. Adems, aporta valiosa in- duracin del tratamiento a emplear nistracin vara para especies roedo-
formacin para la seleccin de los en humanos para el producto en ras y no roedoras. As, en roedores es
niveles de dosis a emplear en los cuestin. Sin embargo, en la prc- entre 6 y 12 meses, y en no roedores
estudios subcrnicos.15 tica generalmente se aplican dis- de 9 y 12 meses, perodos suficientes
Durante muchos aos, la toxi- eos establecidos y armonizados, como para que se manifieste el
cologa aguda era sinnimo de en los cuales la informacin de los efecto txico de una sustancia por
bsqueda de la dosis letal media estudios precedentes constituye su uso crnico.17-19
(DL50), la cual causa la muerte del la informacin bsica necesaria El ensayo debe ser realizado en
50 % de los animales. Este mtodo para el diseo del nuevo estudio, al menos dos especies: una roedora,
dej de ser requisito para el registro fundamentalmente en cuanto a preferiblemente en ratas (al menos
de medicamentos a finales del 2002, la seleccin de la dosis y el refi- 20 animales/sexo/grupo); y una no
siendo reemplazado por tres mto- namiento de las observaciones y roedora, siendo los perros (al menos
dos alternativos: Mtodo de la Dosis determinaciones sobre rganos 4 animales/sexo/grupo) una de las
Fijada, Mtodo de las Clases de Toxi- diana en particular. De este modo, ms empleadas. El empleo de otras
cidad Aguda y Mtodo Arriba y Aba- a los resultados de los estudios de especies en estudios crnicos es poco
jo. Los dos primeros son producto de dosis nica le sigue la realizacin frecuente, y ha de realizarse teniendo
iniciativas europeas, y el tercero es de estudios de administracin con- en cuenta argumentos slidos que
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demuestren la necesidad del empleo las protenas. Estas afectaciones pleado como indicador de mutacin
de la misma. conllevan a una disminucin del en las clulas germinales, parte de
Su diseo se encamina a detec- crecimiento de las clulas, lo que la premisa de que un agente que
tar los efectos txicos generales, puede ser cuantificado emitiendo un induce formas anormales interfiere
incluidos los neurolgicos, fisiolgi- criterio de viabilidad celular. el proceso normal de diferenciacin
cos, bioqumicos, conductuales y de las clulas germinales, existiendo
patolgicos, como resultado de la Estudios genotoxicolgicos evidencias experimentales que ava-
prolongada accin y la incrementada El ensayo de incorporacin en lan su empleo como posible indica-
concentracin de la sustancia admi- placa con Salmonella typhimurium dor de dao genotxico, teniendo
nistrada o sus metabolitos. En estos o Test de Ames,24 es el ms comn- en cuenta la capacidad de muchos
estudios es conveniente poder deter- mente usado para el tamizaje de mutgenos de alterar la morfologa
minar la relacin dosis respuesta y nuevas sustancias, por su capacidad del espermatozoide.28
NOEL; los niveles de dosis a utilizar de deteccin de agentes genotxi- Defectos en la morfologa del
se seleccionan de acuerdo a toda la cos que producen mutaciones en el espermatozoide han sido correlacio-
informacin frmaco-toxicolgica genoma por sustitucin de bases o nados con anormalidades metabli-
precedente, y sta se analiza como un corrimiento del marco de lectura. Las cas, funcionales y estructurales
todo durante el diseo experimental, cepas, manipuladas genticamente en la descendencia.28 Este ensayo
debido a lo costoso que resulta este para aumentar su sensibilidad, generalmente se incluye dentro de
tipo de ensayo.17-19 tienen como rasgo ms significativo los estudios subcrnicos y crnicos,
La mxima dosis a emplear, la la auxotrofia para los aminocidos facilitando un uso ms ptimo de los
cual no debe exceder 1 000 mg/kg de histidina (His) y biotina (Bio). Al in- animales de experimentacin.
peso corporal por da, debe inducir ducirse una mutacin en este locus, El ensayo de Electroforesis Al-
signos de toxicidad sin que ponga la cepa revierte hacia la prototrofia calina en Clulas Individuales
en peligro la supervivencia de los y es capaz de crecer en un medio ca- (Ensayo Cometa), permite detectar
animales, para lo cual es necesario rente de His y Bio. De esta forma, se el dao al ADN en clulas indi-
basarse en los hallazgos indicativos posibilita cuantificar por el nmero viduales, detectando las rupturas
de toxicidad del estudio subcrnico de colonias revertantes el nivel de de cadena y sitios lbiles al lcali en
precedente. Por su parte, la dosis mutacin inducida por la sustancia a el ADN, al cuantificar la migracin
menor no debe inducir evidencias evaluar, en comparacin con lo expre- del ADN.29,30
de toxicidad, mientras que en la sado en los controles. A las distintas Conocido como ensayo cometa
dosis intermedia se debe manifestar cepas se les han realizado otras modi- por el patrn de migracin del
una disminucin de los sntomas y ficaciones genticas con el objetivo ADN que se produce en las clulas
signos indicativos de toxicidad ob- de incrementar la sensibilidad, de daadas en este ensayo, este test
servados en la dosis mayor. modo tal que se puedan detectar con deviene en un mtodo de inters
mayor facilidad los mutgenos.24,25 en los estudios de gentica toxi-
TOXICOLOGIA ESPECIAL La prueba de microncleos (MN) colgica, por su alto potencial de
Estudios de citotoxicidad en lneas en mdula sea es quizs el test deteccin de dao al ADN, espe-
celulares de genotoxicidad in vivo ms em- cficamente aquellos producidos
Dentro del tamizaje toxicolgico pleado, por ser un sistema simple y por las rupturas de cadena, la for-
inicial de los productos, tambin reproducible para determinar dao macin de sitios lbiles al lcali, y
pueden ser incluidos los ensayos cromosmico, a la vez que brinda cla- los entrecruzamientos ADN-ADN
in vitro que permitan detectar alte- ra informacin sobre la proliferacin y ADN-protenas en clulas euca-
raciones de las funciones celulares celular en mdula sea.25,26 riotas obtenidas tanto de estudios
bsicas, debido a la exposicin a un Los MN son el resultado de in vivo como in vitro.29,30
compuesto prueba que conlleve un fragmentos de cromosomas o cro-
dao celular. Estos ensayos emplean mosomas completos que quedan Toxicologa de la fertilidad y la
como modelos experimentales mi- atrapados dentro de membranas reproduccin
croorganismos, clulas y rganos nucleares, fcilmente distinguibles Estos estudios han de realizarse
aislados, cultivos primarios y lneas con tinsin de giensa o empleando de forma obligatoria para todo
celulares.20 tcnicas mas complejas, como es nuevo medicamento que pueda
Entre las pruebas de citotoxi- el uso de antgenos marcadores de ser empleado en pacientes en edad
cidad ms utilizadas para estos centrmero, o con tcnicas de fluo- reproductiva,7,31 y han de evaluar el
fines se encuentran: el ensayo de rescencia por hibridacin in situ, efecto de la sustancia ensayo sobre la
captacin del rojo neutro, el ensayo las cuales permiten discernir si el fertilidad, su potencial Teratognico
de enlazamiento al azul de kenacid, compuesto indujo un evento clasto- y su efecto peri-postnatal.
y el ensayo de reduccin del bro- gnico o aneugnico, determinado Cada uno de los estadios del
muro de dimetil-difenil-tetrazlico por la presencia o no de centrmeros desarrollo embrional posee una
(MTT).21-23 en los microncleos.27 vulnerabilidad caracterstica
Estos ensayos utilizan la via- El hecho que los eventos que compleja y variada. Una etapa
bilidad celular como un ndice de originan incremento de la frecuencia especialmente sensible es la or-
toxicidad celular. De manera ge- de MN han sido correlacionados con ganognesis, caracterizada por
neral, se basan en que un compuesto la formacin de tumores, hacen de transformaciones muy rpidas en
citotxico debe afectar al menos uno este ensayo un potente instrumento el embrin, siendo de gran impor-
o ms procesos implicados en la en el tamizaje de agentes genotxi- tancia en este momento para la
proliferacin celular, como son: la cos, con la ventaja de ser aplicable in diferenciacin de los rganos.
sntesis del ADN, el funcionamiento vivo a grandes poblaciones.27 El dao durante la organog-
de los organelos, la integridad de la El ensayo de la morfologa del nesis puede conducir a defectos
membrana celular o la sntesis de espermatozoide en ratones, em- estructurales de nacimiento, em-
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brioletalidad, o reparacin del modificados genticamente o mode- mida, y aquellos propiamente rela-
dao, siendo conocidos los com- los que estudian diferentes etapas o cionados con la sustancia ensayo,
puestos responsables de inducir mecanismos crticos en el desarrollo la dosis, o la ruta de administracin
malformaciones fetales como agen- de lesiones neoplsicas. El ensayo duracin del tratamiento.
tes teratognicos, que producen ms ampliamente empleado es el
sus efectos embriotxicos dentro tratamiento crnico en roedores, con CONCLUSIONES
de un rango de dosificacin no una duracin de 24 meses en ratas y Los estudios toxicolgicos pre-
txico para la madre.32 18 meses en ratones.17,18,34-35 clnicos deben ofrecer la mayor
En la actualidad, en la gua de Ratas y ratones son las especies evidencia experimental posible,
deteccin de la toxicidad de la de eleccin por su relativamente esclarecer rganos diana, definir
reproduccin asociada a produc- corto perodo de vida; por su uso los niveles de exposicin a partir de
tos medicinales se subdivide la frecuente en estudios toxicolgicos los cuales aparecen efectos txicos,
Toxicologa de la Reproduccin y farmacolgicos, lo que brinda una o establecer el mayor nivel de dosis
en tres segmentos: fertilidad y valiosa informacin sobre su fisio- al cual no se producen efectos adver-
desarrollo embrionario temprano, loga; por su susceptibilidad a la sos, con el objetivo de extrapolar los
desarrollo embrio-fetal, y desarrollo induccin de tumores, y a la vez, por resultados al ser humano, teniendo
prenatal y postnatal, incluyendo la contar en numerosas bases de datos en cuenta las diferencias cualitativas
funcin materna. 32 con informacin sobre frecuencia de y cuantitativas entre especies, as
La evaluacin del potencial tera- aparicin espontnea de diferentes como la imposibilidad de detectar
tognico de las drogas en desarrollo, tipos de tumores. Esta informacin ciertas formas de toxicidad, como
es uno de los objetivos recogidos en detallada se encuentra caracterizada las relacionadas con reacciones alr-
esta gua. La teratognesis evala la par las diferentes lneas de ratas y gicas e idiosincrticas.
toxicidad del desarrollo embriofetal ratones, siendo las ms empleadas Por lo general, se reconoce que
y se realiza generalmente en dos aquellas que presentan una menor la extrapolacin de los efectos de
especies: ratas y conejos, para lo frecuencia de lesiones neoplsicas las sustancias ingeridas por va
cual el producto es administrado al espontneas. As, las lneas de ratas oral se basan en la dosis determi-
animal preado durante el perodo ms empleadas en estudios carcino- nada como NOEL (mg/kg de peso
de la organognesis. gnicos de largo trmino son la Fis- corporal), dividida por un factor de
El perodo embrionario, durante cher y la Sprague Dawley; mientras 100, determinado al asumir un fac-
el cual ocurre la organognesis, tiene los ratones B6C3F1, CD-1 y OF-1 son tor de seguridad de 10 con relacin
lugar desde la tercera a la octava se- los ms empleados atendiendo a las a la extrapolacin entre especies
manas en humanos y desde el sexto mismas razones.35 (animales-hombre), y otro factor de
al decimoquinto das de gestacin en El estudio del potencial car- 10 asumiendo la variabilidad inter-
los roedores.32,33 Durante este pero- cinognico de una sustancia ha de individual en los humanos.
do de tiempo las transformaciones permitir clasificarlo en una de las Sin embargo, no siempre los
que ocurren en el embrin son muy siguientes categoras: estudios toxicolgicos permiten
rpidas, siendo de gran importancia Evidencia suficiente de carcino- establecer un claro margen de segu-
la diferenciacin de rganos. genicidad: Incremento de la frecuen- ridad del producto en estudio, lo cual
cia de tumores malignos, o la combi- no implica se pueda iniciar su evalu-
Carcinognesis nacin de malignos y benignos en al acin en ensayos clnico controlados,
Los estudios de carcinognesis menos dos especies, o al menos en comenzando por los de fase I, los
tienen por objeto determinar si la dos estudios independientes en la cuales fueron diseados especfica-
sustancia ensayo tiene un efecto misma especie. Si la frecuencia de mente para conocer de la seguridad
promotor de tumores, ya sea por lesiones malignas es elevada y no y tolerabilidad en voluntarios sanos.
afectar factores de crecimiento, o es comn el tipo de tumor, el tejido En muchos casos, la manifestacin
activar oncogenes como resultado afectado y el momento de aparicin, de efectos adversos solo se hace
de una prolongada accin e incre- solamente un estudio y hallazgos evidente en estudios de farmacovigi-
mento de la concentracin de la en un solo sexo son evidencia su- lancia post-comercializacin, en los
sustancia o sus metabolitos en teji- ficiente. cuales se han revelado lamentables
dos susceptibles. Esto se traduce en Limitada evidencia de carcino- evidencias del riesgo real del uso
la aparicin temprana de lesiones genicidad: Los resultados sugieren en humanos de determinados me-
neoplsicas (aumentando as la efecto carcinognico, pero ha sido dicamentos.
morbimortalidad), en el incremento observado en un solo ensayo, o se Una evaluacin toxicolgica in-
de la frecuencia de aparicin de un incrementa tan solo la frecuencia de tegral, donde tanto los mtodos de
tipo determinado de lesin tumoral, lesiones neoplsicas benignas. experimentacin animal ms con-
o por inducir la aparicin de lesiones Inadecuada evidencia de carci- vencionales y bien conocidos como
raras, no comunes en el modelo ani- nogenicidad: Insuficiente informa- los nuevos mtodos alternativos per-
mal empleado. cin o resultados contradictorios. manezcan en armnica integracin,
Este ensayo es necesario aco- Ausencia de carcinogenicidad: permitir ofrecer un mayor y ms
meterlo, fundamentalmente, para La evidencia sugiere ausencia de confiable margen de seguridad para
aquellos medicamentos que sern carcinogenicidad en roedores si se reducir al mnimo el riesgo potencial
empleados en humanos en trata- obtienen resultados negativos en y con la mayor certeza posible.
mientos crnicos, empleando en su dos especies.
evaluacin la misma va de adminis- Dentro de los factores que pue- BIBLIOGRAFIA
tracin que en la prctica mdica. den inducir la aparicin de lesiones 1. International Conference on Har-
La carcinogenicidad en modelos neoplsicas, est el factor especie- monisation of technical requirements
animales se realiza por ensayos con- lnea, la edad, el tipo de alimentacin for registration of pharmaceuticals
vencionales, empleando animales y la cantidad de alimentos consu- for human use. Note for guidance
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Revista CENIC Ciencias Biolgicas, Vol. 38, No. 3, 2007.

on toxicokinetics: the assessment of CECMED, 2005. Disponible en: www. basic issues in. Second Ed., United
systemic exposure in toxicity studies. cecmed.sld.su\pages\AmbReg-4.htm. States, Ed. By Anderson D. Eng-
Drug Inf. J., step 4, 1994. [Consultado: 2006]. land, 243-286, 1993.
2. International Conference on Har- 14. Georgina Velazco, Rosa Menndez. 26. Hayashi M., Tice R.R., MacGregor
monisation: Guideline on detection Registro de Medicamentos Herbarios. J.T., Anderson D. and Blakey D.H. In
of toxicity to reproduction for medical Rev. Cubana Plant. Med., 4, 1, 1999. vivo rodent erythrocyte micronucleus
products. Fed Reg. 59, 1995. 15. Auletta C.S. Acute Systemic Toxicity. assay. Mut. Res. 312, 293. 1994.
3. International Conference on Harmoni- in Product Safety: Evaluation Hand- 27. Bonassi S., Fenech M., O. Garca, et
sation of technical requirements for book. Ed. Gad, S.C. Marcel Dekker, al. Human Micronucleus Project:
registration of pharmaceuticals for Inc., United States, Second Edition, International Database. Comparison
human use. Guidance on specific 43-86, 1999. for Results with Cytokinesis-Block
aspects of regulatory genotoxicity 16. Putting C. Acute Oral Toxicity Testing Micronucleus Assay in Human Lym-
test for pharmaceuticals. Drug Inf. Guidelines into Practice. Workshop phocytes. I. Effect of Laboratory
J., step 4, 1995. organised by the Interagency Coordi- Protocol, Scoring Criteria, and Host
4. International Conference on Harmoni- nating Committee on the Validation Factors on the Frecuency of Micronu-
sation of technical requirements for of Alternative Methods (ICCVAM), in clei. Environmental and Molecular
registration of pharmaceuticals for partnership with the U.S. Environ- Mutagenesis, 37, 31-45, 2001.
human use. Dose selection for car- mental Protection Agency and the 28. Mitchell A.D.: Genetic Toxicol-
cinogenecity studies of pharmaceu- ILSI Risk Science Institute. 19-21, ogy Testing. In: Product Safety
ticals. Drug Inf. J., step 4, 1996. Bethesda, Maryland, 2002 Evaluation Handbook. Ed. Gad S.C.;
5. Garthoff B. Alternative testing in drug 17. Chhabra R.S., Huff J.E., Schwetz B.S. Marcel Dekker, Inc., United States,
research and development. Valida- and Selkirk J. A overview of precron- 167-200, 1999.
tion issue. Toxicology in Vitro, 9, ic and cronic toxicity/carcinogenicity 29. Tice R.R, Agurell E. and Anderson D.
789-93, 1995. experimental study designs and cri- Single cell gel/Comet assay: guide-
6. Remirez D. Update in Pre-Clinical teria used by the National Toxicology lines for in vitro and in vivo genetic
Regulatory Requirements for Phytro- Program, United States, 1990. toxicology testing. Environ. Mol.
medicines in Latin America. Journal 18. Piccirillo V.J. Repeated-Dose Toxicity Mutagen, 35, 206-22, 2000.
of Complemenatry and Integrative Studis. In: Product Safety Evalua- 30. Collins A.R., Dushinska M. Horvthova
Medicine, 3, No.1, Article 3. tion Handbook: Ed. Gad S.C.; Ed. E. and Munro E. Inter-individual differ-
7. Requisitos para las solicitudes de Ins- Marcel Dekker, Inc., United States, ences in repair of DNA base oxidation,
cripcin, Renovacin y Modificacin 201-222, 1999. measure in vitro with th comet assay.
en el Registro de Medicamentos de 19. Bucher J.P., Portier C.J., Goodman Mutagenesis. 16, 297-305, 2001.
uso Humano. CECMED, Cuba, 2006. J.I., Faustman E.M. and Lucier G.W. 31. Smith P.F. Third International Confer-
8. Chhabra R.S., Bucher J.R. and Stokes Worshop overview: National Toxicol- ence on Harmonization of technical
WS. National Program strategies for ogy Program Studies: Principles of requirements for registration of phar-
use of alternative test systems. Ani- dose selection and applications to maceuticals for human use- A toxi-
mal Alternative, Welfare and Ethics, mechanism based risk assessment. cologists perspective. Toxicologic
1, 607, 1997. Fundamental Applied Toxicolgy, Pathology, 24, 519-528, 1996.
9. Posicin de la autoridad regulatoria 31, 1-8, 1996. 32. Brent R.L. The application of the prin-
cubana en materia de medicamentos 20. Straughan D., Fentem J. and Balls ciples of toxicology and teratology in
sobre los estudios alternativos en M. Replacement alternative and evaluating the risks of new drugs for
toxicologa. Acta del I Taller Nacional complemaentary in vitro methods treatment of drug addition in women
Toxicologa Alternativa, CECMED, in pharmaceutical research. In: In of reproductive age. En Chiang C.N.
Cuba, 1996. vitro methods in pharmaceutical and Finnegan L.P. (eds.). Research
10. Resoluciones 3 y 4 de 1994 sobre la research, Ed. by Castell J.V. and Monograph Series 149: Medications
Acreditacin de Laboratorios (basa- Gmes-L echn M.J. New York, Development for the treatment of
das en el Anexo II del Artculo 5 de la Academic Press, Part I, Cap.1, pregnant addicts and their infants,
Directiva 86/609/CCC, documentos de 1-15, 1997. National Institute on Drug Abuse,
ICLAS y del Canadian Council of Ani- 21. INVITOX Protocol. The FRAME Rockville, Maryland, 130184, 1995.
mal Care). CECMED, Cuba, 1994. modified neutral red uptake cytotox- 33. Tyl R.W. Developmental Toxicology.
11. Zapatero Lorenzo J. Etica para el Uso icity test. No. 3a, 1990. In General and Applied Toxicology.
de Animales de Laboratorio (Confer- 22. INVITOX Protocol. The MTT assay. pp 1021-1046. Volumen 2. Stockton
encia). X Congreso Latinoamericano No. 17, 1990. Press, New York, 1993.
de Toxicologa, La Habana, 1998. 23. INVITOX Protocol. The FRAME 34. Expert Working Group (Safety) of
12. Primer Curso para especialistas en Ex- cytotoxicity test (Kenacid blue). No. the International Conference of
perimentacin Animal de la Sociedad 3b, 1992. Harmonization (ICH). Guideline for
Cubana para la Ciencia del Animal de 24. INVITTOX Protocol. The ARGATT/ Industry: The need for long-term
Laboratorio. BIOCEN, 2000. FRAME data bank of in vivo tech- rodent carcinogenicity studies for
13. Regulacin 39/04 Principios de las niques in toxicology. The Ames test. pharmaceuticals. ICH S1A, 1996.
Buenas practicas de Laboratorio No No. 30, 1990. 35.Gad S.C. and Chengelis C.P. Animals
Clnicos de seguridad sanitaria y 25. Anderson D. Genetic Toxicology. models in toxicology. Drug and Chemical
medio ambiental. Publicacin 00-35, In Experimental Toxicology. The Series, 8, Gad S.C. Eds., New York, 1995.

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