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INTRODUCCIN
La cromatografa es un mtodo analtico de purificacin y separacin de uno o varios
componentes de una solucin, especies qumicas en general de alta complejidad. al distribuirlos
entre dos fases no miscibles, una de las cuales se mueve excediendo de la segunda . En todo
proceso cromatogrfico se distingue una fase fija o estacionaria y otra que fluye o mvil
(disolvente).
La fase estacionaria no es un cuerpo totalmente inerte presenta cierta afinidad hacia la fase
mvil donde existen ciertas especies qumicos que se quedan y cuando ocurre esto se toman otros
mecanismos.
- La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido adsorbido sobre un material slido
para tornarlo esttico..
- La fase mvil puede ser un gas o un lquido lo cual se mantienen fijas en una superficie
slida.
En consecuencia, las mezclas de gases pueden separarse por cromatografa por gas y lquido y en
gas y slido, y las soluciones lquidas pueden separarse con las tcnicas de lquido en lquido y
lquido en slido
La cromatografa fue descubierta por el botnico ruso, de origen italiano, Mikhail Tswett
en 1906, pero su uso no se generaliz hasta la dcada de 1930. El trmino cromatografa fue
ideado por tswett en 1906 a partir de dos palabras griegas chroma que significa color y graphen
que significa escritura.
- Tswett invent la cromatografa en columna en la cual emple la tcnica para separar
varios pigmentos vegetales que dan color a las hojas permitiendo que una mezcla de
disolvente transportara los pigmentos descendiendo por una columna empacada con un
material insoluble, de la ndole de almina, slice, almidn o carbn. En la actualidad esta
tcnica se aplica tambin para compuestos incoloros.
Los primeros equipos de cromatografa de gases aparecieron en el mercado a mediados del siglo
XX. A su vez, la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) comenz a desarrollarse en los
aos 1960, aumentando su importancia en las dcadas siguientes, hasta convertirse en la tcnica
cromatogrfica ms empleada.
El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos,
medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.
Las tcnicas ms generales de la separacin (lquido lquido) se llevan a cabo sobre celulosa
o gl de slice hmeda, pudiendo realizarse en forma de tira de papel, capa fina o columna. El
medio en cada caso acta como soporte de agua, por lo que este tipo de cromatografa se
emplea fundamentalmente para separacin de sustancias solubles. Como ejemplo tpico
sealaremos la separacin de una mezcla de sustancias sobre una tira de papel filtro, como el
papel filtro posee fibras celulosas con un porcentaje de humedad, la separacin se lleva a cabo
al repartirse las sustancias entre la humedad de las celulosas y el flujo del disolvente sobre
ellos, el agua de las clulas permanece estacionaria, mientras que el disolvente circula sobre
ellos fase mvil..
Generalmente son empleados tres tipos de materiales para las separaciones de sustancias, las
zeolitas, resinas y geles de intercambio inico. La diferencia entre ellos se debe a su naturaleza de
los grupos y su micro estructura.
d) Cromatografa Exclusin (o por tamao).-
Se basa en la exclusin por tamaos. Como se aplica a la separacin de macromolculas
soluble en agua de importancia biolgica.
La tcnica se la conoce como cromatografa de filtracin en gel. El proceso al que nos
referimos aqu la distribucin de solutos entre la fase acuosa dentro de las partculas de gel y agua
exterior.
A primera vista podramos decir que no es precisamente un proceso el hecho de transferir un
soluto de una fase acuosa a otra pero la selectividad respecto a los diferentes solutos se alcanza en
base al tamao de sus poros. Una molcula del soluto es suficientemente pequea para entrar con
libertad a la fase gel.
3. CROMATOGRAFA EN PAPEL
Como su nombre lo indica es la separacin que se realiza sobre hojas de papel cromatogrfico en
al que vara el espesor y la velocidad del flujo. La cromatografa es una tcnica analtica y
cuantitativa que ha alcanzado un alto grado de desarrollo y modalidades en los laboratorios de
qumica y bioqumica en sus diversas aplicaciones, la cromatografa sirve para preparar
compuestos qumicos diferentes a partir de mezclas multidiferentes. Por ejemplo es capaz de
identificar y separar los 350 compuestos que dan su sabor y bouquet caracterstico al caf.
Las muestras elegidas se aplican sobre un papel en forma de solucin para los slidos y disuelve
en una pequea cantidad de disolvente adecuado.
Una vez elegido el tamao y la calidad de papel que se va a utilizar se dibuja con un lpiz una
lnea paralela al lado por el que va a comenzar la cromatografa, se marca un nmero de pequeas
cruces sobre la lnea a distancias iguales 2,5 a 3,0 cm. Las muestras se aplican sobre el papel
mediante un tubo capilar o hilo de platino en la posicin adecuada ( el punto de la muestra no
deber exceder ms de 5 milmetros de dimetro). Una vez que se han secado las manchas sobre el
papel estn listos para el desarrollo, nombre que se da al proceso en el que un disolvente fluye a
travs del papel produciendo una separacin.
Tenemos:
Hexano.
Tetracloruro de carbono.
Benceno.
Acetona.
Dicloro metano.
Cloroformo. Aumento del efecto eluente
ter etlico.
Acetona d etilo.
Isopropanol.
Etanol.
Metanol.
Agua.
TCNICA
La tcnica puede ser ascendente o descendente, todo desarrollo se lleva a cabo en un recipiente
hermticamente cerrado.
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
Los mtodos de cromatografa plana incluyen la cromatografa en capa fina (TLC), cromatografa
en papel (PC), y la eletrocromatografa (EC). Proporciona una tcnica rpida y conveniente para
reconocer la pureza de una sustancia o analizar mezclas.
La tcnica se basa en el diferente grado de retencin sobre un adsorbente (silica de gel,
almina, etc.)de distintas sustancias cuando estas se fraccionan entre el adsorbente y un solvente.
La distinta retencin (adsorcin) es manifestada en la diferente movilidad sobre la superficie del
adsorbente pasando a la fase lquida (solvente). Los compuestos con distinta movilidad aparecen
en distintos puntos del cromatograma como manchas separadas.
En trminos cuantitativos la movilidad de un compuesto es expresada por su valor de Rf:
Distancia recorrida por la sustancia
Rf = ----------------------------------------------
Distancia recorrida por el solvente
En todos los casos se emplea una capa horizontal y relativamente delgada de un material
que es a la vez soporte, o que se coloca sobre una superficie de vidrio, plstica o metlica, la fase
mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o
con un potencial elctrico.