UNIVERSIDAD DE LOS ANDES

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOANLISIS

CATEDRA DE INMUNOLOGA

Introduccin al Inmunodiagnstico.

Csar Prez-Maldonado,PhD.
2009.
 INMUNIDAD

Mecanismos de Defensa
(Especficos / Inespecficos)

HUMORALES
CELULARES
Linfocitos T Sntesis de Anticuerpos. Linfocitos B.

Destruccin / Inactivacin de agentes extraos

(no-propio)

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 INFECCIN

Respuesta

DETECCION CUANTIFICACION
Antgenos / Anticuerpos
(liquidos biolgicos)

Inmunodiagnstico

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 RESPUESTA INMUNE A LA INFECCIN

Los linfocitos B sintetizan anticuerpos clase IgG,

IgG IgM,
IgM e IgA
en respuesta a la mayora de las infecciones.
IgE en reacciones alrgicas.

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 DEFINICIN
Tcnicas basadas en la reaccin antgeno-anticuerpo.

De utilidad en la deteccin de antgenos o anticuerpos en diferentes

muestras biolgicas (suero, saliva, lquidos biolgicos, tejidos, etc.)

Permite evidenciar infecciones, respuestas inmunes y componentes

biolgicos.

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 ASPECTOS PRCTICOS

La sensibilidad su capacidad para detectar los analitos en los

casos estudiados.

La especificidad permite asegurar que el resultado positivo de una

prueba indica con precisin la presencia del analito en cuestin.

Anticuerpos Monoclonales - Protenas Recombinantes

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 APLICACIN DEL INMUNODIAGNSTICO.

Estudios del Sistema Inmune:

- Salud.
- Enfermedad.

Aspectos a evaluar:

- Evaluacin del Sistema Inmune

- Deteccin de Enfermedades Infecciosas.

- Anlisis General en el Laboratorio.

Hormonas, Drogas, Medicamentos, etc.

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* Desarrollo de Mtodos Diagnsticos.

Aplicacin en otras reas especialidades.

Bioanlisis
Medicina
Veterinaria
Industria Farmacutica.

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 MTODOS DIAGNSTICOS

Mtodos directos

Ponen de manifiesto la presencia del antgeno

- Visualizacin directa
- Deteccin de ciertos componentes

Mtodos indirectos

Permiten detectar la presencia de ciertos productos derivados

de la infeccin (Anticuerpos).

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 MTODOS DIAGNSTICOS

Enfermedades infecciosas:

Diagnstico directo: deteccin de antgenos.

a) En enfermedades infecciosas: VHB.
b) Para identificar microorganismos en el laboratorio.

Diagnstico indirecto: deteccin de anticuerpos.

a) Enfermedades infecciosas: VIH, VHC, CMV,sfilis.
b) Determinacin del estado inmunitario de individuos y
poblaciones. Conocer el porcentaje de personas de una poblacin
expuesta a infecciones. (Herramienta epidemiolgica) .

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 APLICACIONES

Como pruebas de tamizaje (cribado):

En estudios poblacionales donde se desea investigar la existencia de probables
infecciones (aguda o crnica) mediante la deteccin de anticuerpos. Las mas
utilizadas en la actualidad son las tcnicas inmunoenzimticas.

Determinacin del antgeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg)

Bsqueda de anticuerpos contra el virus de la hepatitis C (VHC) en bancos de
sangre.
Deteccin de anticuerpos contra el virus de la rubeola en mujeres no vacunadas.

En el diagnstico clnico:

Se utilizan como complemento de las pruebas de tamizaje. Cuando se sospecha

de una determinada enfermedad infecciosa.
Deben ser muy sensibles y especficas:
aglutinacin con ltex, hemaglutinacin, inmunofluorescencia e
inmunoenzimticas.

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 Pruebas Serolgicas.

FACIL REALIZACION.

EVITAN PROCEDIMIENTOS INVASIVOS.

PERMITEN DETECTAR ANTIGENOS Y ANTICUERPOS

PERMITEN LA REALIZACION DE ESTUDIOS EPIDEMIOLGICOS DE

MANERA MS EFECTIVA.

SON ALTAMENTE ESPECFICAS Y SENSIBLES.

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 DIAGNSTICO INMUNOLGICO

La clase IgM se producen nicamente en la respuesta primaria.

(fase aguda)
aguda

Su presencia se interpreta como exposicin-infeccin reciente,

reciente o
activa.
activa

Las IgM, no atraviesan la placente humana.

Importantes en diagnstico de recin nacidos (infeccin fetal)
fetal

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 Diagnstico Serolgico.

Las clase IgG pueden permanecer -incluso a tasas elevadas- mucho

tiempo (aos) despus de que la infeccin est resuelta.

Contactos posteriores con Antgenos producen una respuesta de Acs clase

IgG (Respuesta Secundaria).

En el caso de microorganismos intracelulares puede persistir toda la vida.

(Toxoplasmosis, Herpesvirus etc..).

Memoria Inmunolgica : Respuesta ms inmediata y con mayor intensidad

(RESPUESTA ANAMNESICA).

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Cnetica - IgG e IgM

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 Produccin de Anticuerpos Monoclonales

Inmunizacin de un ratn para

estimular la produccin de
anticuerpos

Clulas tumorales crecen

Linfocitos B en cultivos tisulares
aisladas de Bazo

Linfocitos B se fusionan
con clulas tumorales
cultivadas
HIBRIDOMA

Produccin de anticuerpos
por los hibridomas
Separacin de clones de hibridoma
Obtencin de anticuerpos
productoras de anticuerpo
monoclonales.

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 Pruebas Serolgicas.
Fijacin del Complemento

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 Aglutinacin
Prticulas de Ltex Sensibilizadas con Anticuerpos

Prticulas de Ltex Sensibilizadas - Muestra Aglutinaci

n.

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 Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Aglutinacin.

Clulas completas
- Bacterias
- Protozoos
- Eritrocitos
Partculas inertes
- Ltex
- Bentonita
- Gelatina

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 Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Hemaglutinacin.

Clulas completas
- Eritrocitos

Antgeno
Antcuerpo

Eritrocitos
Fase Slida Muestra

Mallas de Aglutinacin

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 Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Hemaglutinacin.

Clulas completas
- Eritrocitos

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 Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Precipitacin.

Medio Semisolido
- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio

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 Pruebas Serolgicas.
Reaccin de Precipitacin.

Medio Semisolido
- Antgeno o Anticuerpo difundido en medio
Precipitado formado

Zona de exceso Zona de equivalencia Zona de exceso

de Ac-Ag de Ac-Ag

Concentracin creciente de antigeno

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 Pruebas Serolgicas.
Inmunofluorescencia.

Conjugado Fluorescente
- Antgeno o Anticuerpo marcado con Fluorocromo

Directa Indirecta

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 Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

Conjugado Enzimtico
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

S
S
S
S
S
S

E E E E E E E E E E E E

Antigeno
E
Enzima acoplada con un anti-Ig
Buffer de bloqueo
S

Anticuerpo Substrato

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 Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.

Conjugado Enzimtico
- Anticuerpo o Antiglobulina marcada con Enzima

S
S
S
S
S
S

E E E E E E E E E E E E

Antigeno E
Enzima acoplada con un anticuerpo
Buffer de bloqueo
Anticuerpo Substrato
S

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 Pruebas Serolgicas.
Inmunoensayo Enzimtico ELISA.
(Auro-Dex Helicobacter pylori MultiTest)

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G racias por su
atencin