Instituto Politcnico Nacional

Centro de Estudios Cientficos y Tecnolgicos No.

6
Miguel Othn de Mendizbal

BACTERIOLOGIA
COPROCULTIVO
Profesor: Miguel ngel Morales Gil
Integrantes:
lvarez Bonifacio Yeredid
Bello Reyes Sal Joshafat
Garca Salinas Karen
Martnez Hernndez Daniel
Mayen Bernal Viridiana
Quintero Andrs Fabiola Janet
Rosales Hernndez Diana Carolina
Sandoval Rosas Eduardo

Equipos: 4-A y 4-B

Fecha: 09 Mayo 2012
G: 4101C
 COPROCULTIVO

Importancia clnica

El mdico, frente a un paciente que acude por presentar un cuadro diarreico, debe decidir
cul es la posible etiologa y qu tipo de tratamiento debe dar, por lo que recurre al
laboratorio a fin de obtener un diagnstico microbiolgico que permita realizar un abordaje
racional de la enfermedad.

Infecciones gastrointestinales [Coprocultivo]

[Anexo 1]

[Anexo 2]

[Anexo 3]

Afecciones gastrointestinales

La ingestin de patgenos causa muchas afecciones, que pueden quedar delimitadas al

tracto gastrointestinal o comenzar en el intestino para diseminarse despus hacia otras
partes del organismo. Los trminos utilizados ms comnmente para describir las
enfermedades del tracto gastrointestinal son:

Diarrea: eliminacin fecal anormal caracterizada por heces frecuentes y/o liquidas,
habitualmente se debe a enfermedad del intestino delgado, e implica un aumento de la
perdida de lquidos y electrolitos.

Disentera: Trastorno inflamatorio del tracto gastrointestinal asociado frecuentemente a

presencia de sangre y pus en las heces y acompaado por sntomas de dolor, fiebre y
calambres; de modo habitual se debe a enfermedad del intestino grueso.

AGENTES ETIOLOGICOS DE DIVERSOS SINDROMES DIARREICOS

SINDROMES CARACTERISTICAS AGENTES ETIOLOGICOS.

Diarrea aguda Mecanismo no Rotavirus

liquida inflamatorio, medido por Escherichia coli enterotoxigenica
enterotoxinas. (ETEC)
E. coli enteropatognica (EPEC)
Salmonella spp.
Cryptosporidium.
Vibrio cholerae.
Clostridium perfringens.
Bacillus cereus.
Staphylococcus aureus.
 Vibrio parahemoyiticus.
Giardia lamlbia
Virus Norkwalk.
Adenovirus 40, 41.
Campylobacter jejuni.
Acampylobacter coli.

Diarrea con Mecanismo inflamatorio Shigella spp.

sangre por invasin del epitelio Entamoeba histolytica.
intestinal, denominado E. coli enterohemorragica (EHEC)
usualmente como E. coli neteroinvasiva (EIEC)
disentera. Tambin hay Campylobacter jejuni
presencia de moco y Salmonella (S. enteritidis, S.
leucocitos en las heces. choleraesuis, S. parathypi)
Vibrio parahemolyticus.
Yersinia enterocolitica.
Trichinellaspiralis.
Schistosoma japonicum
Balantidium coli.
Clostridium difficile
Diarrea crnica/ Interferencia del agente Giardia lamblia.
Mal absorcin. infeccioso con la Ascaris lumbricoides.
actividad normal del Necatos americanus
tracto gastrointestinal, Strongyloides stercoralis
pero sin un dao Trichuris trichura.
aparente en pacientes no Cryptosporidium
inmunodeficientes. Isopora belli
Enterocytozoon bieneusi
Fiebre enterica. Mecanismo invasivo con Salmonella typhi
penetracin a travs de Yersinia enterocolitica
la mucosa intestinal y Campylobavter fetus subsp. Fetus
diseminacin Salmonella paratyphi A y B
hematgena a todo el Salmonella choleraesuis.
organismo. Yersinia pseudotuberculosis
Gastritis o atrofia Colonizacin del epitelio Helicobacter Pylory
gstrica. gstrico con ulceracin.

Adaptado de: Valdespino JL y Col., 1994 (36)

Qu es coprocultivo?

El coprocultivo o cultivo de heces

Es un estudio cuyo propsito es buscar bacterias patgenas que causan afecciones

gastrointestinales.
 Mecanismos que causan diarrea o disentera

La fisiopatologa de los sndromes diarreicos o disentricos afecta 3 mecanismos diferentes:

1. Toxinas (Entero toxinas)

Algunas bateras como el Vibrio cholerae y ciertas cepas de Escherichia coli despus de
adherirse a las epiteliales mucosas del intestino delgado producen entero toxinas que activan
la adenilsiclasa (AMP cclico). El AMP cclico es un nucletido cclico presente en las
membranas celulares que amplifica la accin de las hormonas y otros compuestos
biolgicamente activos en diversas clulas blanco. La actividad por entero toxinas del AMP
cclico en las clulas epiteliales mucosas del intestino delgado causa un bloqueo de la
absorcin de sodio lo que lleva a una diarrea acuosa hipertnica profusa. No existe
inflamacin mucosa y no se observan leucocitos en la materia fecal.

2. Invasin

Causado por invasin bacteriana directa de la mucosa intestinal que produce inflamacin y
leucocitosis. Especies de Shigella algunas cepas de E. coli muchas cepas no S. typhi de
Salmonella, Campylobacter jejuni invaden directamente la mucosa y submucosa por
produccin de entero toxinas que poseen mecanismos diferentes a los del V. cholerae. Se
halla gran nmero de neutrofilos segmentados, mucina y algunas veces sangre en la materia
fecal.

3. Penetracin de la pared celular

Comprende la penetracin profunda de la pared intestinal por parte de los microorganismos

como Salmonella typhi , Yersina enferilitica y Campylobacter fetusi. Habitualmente esto da
como resultado una leve inflamacin mucosa intestinal. Sin embargo un aspecto puede ser
una intensa inflamacin necrotizante en ganglios linfticos mesentricos regionales.

Sintomatologa de las enfermedades gastrointestinales

Algunos sntomas que los pacientes con enfermedades infecciosas a menudo experimentan
son:

Fiebre: Es el aumento temporal en la temperatura del cuerpo en respuesta a alguna

enfermedad o padecimiento.

Un nio tiene fiebre cuando su temperatura est en o por encima de 37.2 C.

Un adulto probablemente tiene fiebre cuando la temperatura est por encima de 37.2 - 37.5
C, dependiendo de la hora del da.

Deshidratacin: Significa que el cuerpo no tiene tanta agua y lquidos como debiera.

Boca pegajosa o reseca.

Letargo o coma (con deshidratacin severa)

 Ausencia o disminucin del gasto urinario; la orina aparece de color amarillo oscuro.

Ausencia de lgrimas.

Ojos hundidos.

Fontanelas hundidas (el punto blando en la parte superior de la cabeza) en el beb

Se clasifica en leve, moderada o severa sobre la base del porcentaje de lquido corporal que
se ha perdido o que no se ha repuesto. La deshidratacin severa es una situacin de
emergencia potencialmente mortal.

Letargo: Es una sensacin de falta de energa, de agotamiento o de cansancio. Que se

caracteriza por un estado de somnolencia profunda y prolongada. Torpeza, insensibilidad,
enajenamiento del nimo relacionado a dicho estado como comportamientos asociados ya
que nuestro organismo relaja todo nuestro cuerpo.

Toma de muestra

Para efectuar un coprocultivo pueden utilizarse las siguientes muestras:

Heces frescas

Hisopo rectal

Indicaciones para el paciente:

No es necesario el ayuno.
No se requiere dieta especial.
No estar bajo tratamiento con antibiticos o tener ms de 72 hrs de haber concluido el
tratamiento. En caso de no ser posible ninguna de estas dos opciones, eespecificar en la
solicitud del estudio que antibitico se estn tomando y cuantos das lleva hacindolo.

Indicaciones para la toma y condiciones de la muestra

La toma de muestra se deber realizar lo antes posible luego del comienzo de la

enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros das).
La recoleccin se efecta en un recipiente de boca ancha estril y con tapa de rosca.
Las muestras de consistencia formada debern ser de 4-6 gramos (tamao de una
nuez), en caso de ser liquidas entre 5 y 1O ml.
Debe evitarse la contaminacin con orina.
Si no se pueden enviar las muestras de manera inmediata se pueden refrigerar sin
exceder 4 hrs. ya que a medida que la muestra fecal se enfra, la cada de pH llega a ser
suficiente para inhibir el crecimiento de muchas especies Shigella y algunas de Salmonella.
Las muestras deben examinarse y cultivarse lo antes posible despus de la recoleccin,
si el cultivo se hace dentro de las dos horas despus de tomada la muestra, no se requiere
 medio de transporte, pasado este periodo se recomienda usar el medio de transporte Cary &
Blair, caldo selenito o Tioglicolato.
En general no se recomienda el uso de hisopados rectales pero pueden ser necesarios
para obtener muestras fecales de neonatos o adultos mayores.
El hisopo rectal debe insertarse exactamente ms all del esfnter rectal, evitando el
contacto directo con materia fecal en el recto. Estos hisopados deben inocularse de
inmediato en medios de cultivo o colocarse en un sistema de transporte adecuado para
impedir el desecamiento.
En pacientes en edad peditrica que usan paales las muestras deben ser tomadas
preferentemente de sus glteos y no del paal seleccionando las partes mucosas, purulentas
y/o sanguinolentas y colocarlas en frasco estril.

Examen macroscpico

Una vez llegadas las heces al laboratorio, es primordial efectuar un examen macroscpico de
las mismas, ya que esta puede proporcionarnos una orientacin. En este se observa:

Consistencia (solidas, diarreicas, liquidas); este puede indicar los estados de

protozoarios presentes. Normalmente la deposicin debe de ser solida
Color; indica la abundancia y la calidad del flujo biliar. Normalmente y con dieta mixta la
deposicin es de color pardo o marrn, oscurecindose a medida que pasa el tiempo
expuesto al aire, las heces de las personas que sufren estreimiento son ms oscuras y
duras.
Presencia de sangre, pus, moco; puede envolver a todo o una parte del bolo fecal, o
bien, estar ntimamente mezclado con esta masa. La aparicin del moco suele ser
reconocible macroscpicamente.
Fragmentos de tejidos o restos alimenticios sin digerir
Olor

Bacterias causantes de diarrea

ESCHERICHIA

E. coli es la especie de bacteria recuperada con mayor frecuencia en los laboratorios clnicos
y ha sido incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido y
sistema orgnico humano.

Ciertas cepas de E. coli pueden producir enteritis o gastroenteritis por 6 mecanismos

distintos que conducen a 6 sndromes clnicos diferentes.

Estas cepas incluyen E. coli enterotoxigenica (ETEC), E. coli enteropatogena (EPEC), E. coli
enteroinvasiva (EIEC), E. coli enterohemorragica (EHEC), E. coli enteroagregante(EAEC) y
E. coli difusamente adherente (DAEC).

Los aislados de EPEC, EAEC y DAEC, se caracterizan por sus distintos patrones de
adherencia a las clulas epiteliales in vitro.
Las cepas EPEC se unen a las clulas husped en un patrn denominado adherencia local,
en el cual se forman microcolonias sobre las superficies de las clulas.

Las cepas DAEC estn definidas por un patrn de adherencia difusa en el cual las bacterias
cubren difusamente la totalidad de la superficie celular.

En la mayora de los casos no es necesario identificar un patgeno especifico de E. coli en

un paciente particular. En casi todos los pacientes con gastroenteritis debido a E. coli la
diarrea se resuelve antes de buscar atencin mdica o luego del tratamiento con antibiticos
empricos administrados para otras diarreas bacterianas.

La Identificacin de especies patgenas de E. coli se realiza con antisueros.

CARACTERSTICAS CLAVES DE E. COLI DIARREICOGNICA

termino abreviatur Fenotipo patgeno Signos y sntomas

a
E. coli enterotoxigenica ETEC Elaboracin de Asociado con los
enterotoxinas sindromas clnicos
termolbiles y/o diarrea del destete y
termoestables diarrea del viajero.
secretoras que no Tienen inicio brusco
daan el epitelio tpico, casi siempre sin
mucoso sangre, moco ni pus. La
deshidratacin y vmitos
ocurren en algunos
casos.
e. coli enteropatgena EPEC Se adhieren a las Habitualmente ocurre en
clulas epiteliales lactantes, se caracteriza
intestinales en por fiebre, vmitos,
microcolonias diarrea acuosa con gran
localizadas que cantidad de moco y en
producen lesiones algunas ocasiones se
histopatolgicas observan leucocitos en
caractersticas las heces.
conocidas como
lesiones de fijacin y
desprendimiento
E. coli enteroinvasiva EIEC La mayora de las Se presenta
cepas son inmviles, principalmente como
fermentadoras tardias o diarrea acuosa, se tiene
no fermentadoras de la necesidad imperiosa de
lactosa y anaerogenas. defecar, presencia de
moco, sangre y muchos
leucocitos en las heces.
E. coli EHEC Elaboracin de toxinas Diarrea sanguinolenta sin
enterohemorrgica shiga leucocitos, dolor
 abdominal frecuente.
E.coli enteroagregante EAEC Se adhieren a las Diarrea con moco, fiebre
clulas epiteliales y leve y poco o nada de
producen una toxina vomito.
(EASTI)
E.coli difusamente DAEC Se adhieren a las Diarrea en la mayora de
adherente clulas epiteliales en un las veces sin presencia
patrn difuso de sangre ni leucocitos

Agar EMB [Eosina Azul de Metileno]

Fundamento

Por la combinacin de estos dos colorantes y los dos hidratos de carbono se pueden
distinguir algunos gneros.
Las bacterias lactosa-negativas y sacarosa negativas (Salmonella y Shigella) dan colonias
incoloras, mientras que las lactosa y/o sacarosa-positivas dan colonias prpura-violeta
negruzco con/sin un centro oscuro y quedan rodeadas de una zona incolora.
Por el efecto de estos mismos colorantes tambin queda inhibido el crecimiento de la
microflora acompaante, sobre todo la Gram-positiva.

Este medio se siembra en la superficie del medio. Incubar entre 35 y 37C de 18 a 24

horas.

En la siguiente imagen se muestra el desarrollo se Escherichia coli

(Colonias Prpura-violeta con brillo verde metlico)

Agar MacConkey:

Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las
bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de
 fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas
o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar.
Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras.

Para aislar las colonias Sembrar la muestra por estra en la superficie de la placa
preenriquecida en MacConkey, Caldo. Incubar a 35-37 C de
18 a 72 horas.

En la siguiente imagen se muestra el desarrollo de E. coli

[Color Rosa-rojo (precip. biliar)]

SHIGELLA

Caractersticas microbiolgicas. Taxonoma.

Shigella es un bacilo Gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae,

que se encuentra estrechamente relacionada con el gnero Escherichia, por sus
propiedades bioqumicas, serolgicas y por similitudes genticas.

Se caracteriza por no fermentar la lactosa, ser inmvil, no produce lisina

decarboxilasa y raramente produce gas a partir de hidratos de carbono. Su
identificacin se basa en caractersticas bioqumicas y antignicas. En base a ello
se describen cuatro especies (cuadro 1), todas ellas pueden causar disentera,
aunque con diferente gravedad.

AGAR SS
Fundamento

Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la

inhibicin de las bacterias Gram-positivas. Por el mismo citrato conjuntamente
con el tiosulfato se frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que
podran acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan la
lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la fermentan hacen virar el
rojo neutro por la produccin de cido y quedan claramente diferenciadas.
Tambin se diferencian los microorganismos productores de Hidrgeno Sulfuro
que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de
la colonia. La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos suficientes para
estas especies patgenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se
desarrollen lentamente.

Las colonias sospechosas de Shigella crecidas en AgarSalmonella-Shigella son

transparentes, translcidas u opacas y suelen ser lisas. En este medio las colonias
de otros microorganismos que fermentan la lactosa (coliformes) son colonias
rojizas y en muchos casos mucoides.

AGAR SULFITO BISMUTO

Fundamento

El Bismuto Sulfito y el Verde Brillante inhiben conjuntamente a las bacterias Gram-

positivas y Coliformes, no restringiendo en absoluto el crecimiento de las
Salmonellas. A su vez por la presencia de azufre en el medio, los microorganismos
capaces de producir Hidrgeno Sulfuro precipitan Hierro(II) Sulfuro, que da lugar a
tonalidades marrones ms o menos oscuras e incluso negras. Tambin se puede
reducir el bismuto a metal dando un brillo metlico alrededor de las colonias
correspondientes. Es recomendable hacer un enriquecimiento previo en caldo.

Sembrar por estra el material objeto de estudio o el procedente del caldo de

enriquecimiento en este caso con caldo tetrationato. Incubar a 352C de 24 a 48
horas.

Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento (Nulo-escaso) Color ( Marrn)

 SALMONELLA

Nos enfocaremos a la identificacin de Salmonella y Shigella en los siguientes medios:

Agar McDonnell
Agar SS
Agar Vede Brillante
Agar EMB

Estos dos ltimos enriquecidos con caldo tetrationato para favorecer su crecimiento...

Casi todas las especies de Salmonella crecen bien en presencia de sales biliares. Las
especies de Salmonella y Shigella son mucho menos inhibidas, entran en una fase de
crecimiento logartmico y son ms fciles de aislar en las muestras fecales.

AGAR McCONKEY:

-Sembrar la muestra por estra cruzada.

-Incubar a 37 24 horas.
- Este agar contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram
positivos.
-Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar
rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH
por la fermentacin de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S.
tipi, S. paratyphi y S. disentera) permanecen incoloras. (Lado derecho)

AGAR SS:
- Medio altamente selectivo, la lactosa es el nico hidrato de carbono y el rojo neutro es el
indicador para la deteccin de acido.
- Siembra por el mtodo de estra cruzada para obtener colonias aisladas.
- Incubar las placas a 35-37 C durante 24 a 48 horas y examinar el crecimiento.
- Las enteras bacterias pueden ser diferenciadas en base a su capacidad de fermentar la
lactosa. Las especies de Salmonella y Shigella son no fermentadoras de la lactosa y
forman colonias incoloras. Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de
hidrgeno desarrollan colonias con centro obscuro.

AGAR VERDE BRILLANTE:

- Sembrar por el mtodo de estra cruzada.

- Incubar las placas a 35C durante un lapso de 18 24 horas
- En este medias las peptonas y el extracto de levadura proporcionan la fuente de nitrgeno,
vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los carbohidratos fermentables. El rojo de
fenol es un indicador de las variaciones de pH y cambia el color del medio a amarillo en
presencia del cido derivado de la fermentacin de los carbohidratos. El verde brillante acta
como inhibidor de bacterias Gram positivas y de la mayora de bacterias Gram negativas.
- Las colonias tpicas de Salmonella aparecen como colonias de color rosa a blanco,
opacas rodeadas por el rojo brillante del medio. Los pocos microrganismos que crecen en
este medio que son fermentadores de lactosa o sacarosa, son fcilmente identificables
debido a la formacin de colonias amarillas- verdes rodeadas de una intensa zona de color
amarilla-verdosa.
- Este medio no es adecuado para el aislamiento de S. Tipi ni de Shigella, sin embargo
algunas cepas de S. Tipi pueden desarrollar dando colonias rojas.

AGAR EMB:

- Sembrar por el mtodo de estra cruzada.

- Incubar las placas 35- 37C durante 18 a 24 horas.
- El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciacin de las colonias
fermentadoras de lactosa.
- Adems de diferenciar a Salmonella nos permitir identificar otros organismos lactosa
negativos de organismos doliformes.
- Las peptonas proveen la fuente de nitrgeno, la eosina y el azul de metileno son colorantes
que se combinan para formar un precipitado a pH cido. Los colorantes actan como
inhibidores e indicadores. Los carbohidratos proporcionan la fuente de energa, los fosfatos
actan como buffer.
- Las colonias de Salmonella y Shigella son translcidas, de color mbar o incoloras.

VIBRIO

Vibrio Cholerae

Es un bacilo Gram (-) curvo que posee un flagelo polar produce oxidasa y
fermenta glucosa.

Las cepas de esta bacteria a su vez se pueden clasificar de diversas maneras:

Caractersticas de Vibrio cholerae

Mtodo de Asociados con No asociados con epidemias
clasificacin epidemias

Serogrupos 1 No 01 (serogrupos 02-0138)

Biotipos Clsico, El Tor Biotipos no aplicables a cepas no
01
Serotipos Inaba, ogawa,Hikojima Estos 3 serotipos no son
aplicables a cepas No 01
Toxina Producen la toxina del Habitualmente no producen la
Clera toxina de clera; a veces
producen otras toxinas
Aislamiento en el Laboratorio Clinico

Ya que V. Cholerae necesita tener un medio especfico para poder crecer, es

necesario que antes de sembrar nuestros medios de cultivo se enriquezca nuestra
muestra.

Enriquecimiento de la muestra:

Agua peptonada Alcalina, pH 9.0, de 6-8 horas a 37 C

AGUA PEPTONADA ALCALINA

Uso: Para el enriquecimiento de Vibrio cholerae y otros Vibrios a partir de diversas

muestras.

Fundamento: El medio contiene peptona de gelatina, proporciona los nutrientes

para la supervivencia y crecimiento abundante. El cloruro de sodio mantiene el
equilibrio osmtico del medio. El pH elevado, favorece el desarrollo de
microorganismos que tienen la capacidad de crecer en este medio, inhibiendo a la
flora acompaante.

Sembrado:

Medio de cultivo TCBS, mantener a 37C y revisar entre las 18-24 horas.
Seleccionar colonias de color amarillo para Vibrio Cholerae.

AGAR TCBS

Uso: Medio selectivo para el crecimiento de Vibrio cholerae, Vibrio

parahaemolitycus y otras especies patgenas a partir de diversas muestras.
Fundamento: El contenido de peptonas y extracto de levadura proporcionan al
medio la fuente de nutrientes necesarios para el desarrollo de los
microorganismos; el contenido de sales biliares y el colato de sodio inhiben el
desarrollo de Gram positivos sobre todo a los enterococos. La alta concentracin
de tiosulfato de sodio y citrato, as como el elevado pH, inhiben notablemente a las
enterobacterias. La sacarosa es el carbohidrato fermentable, utilizando como
indicador de la variacin de pH, el azul de bromotimol y el azul de timol, se
 presenta un vire amarillo por la produccin de cido incluso en un medio altamente
alcalino como el Agar TCBS.

Vibrios no colericos:

o V. Parahemolyticus
o V. Mimicus
o V. Metschnikovil
o V. Hollisae
o V. Furnisae
o V. Fluviales

YERSINIA

La especie Yersinia corresponde a la familia Enterobacteriaceae, las bacterias se

ven pequeas y con forma cocobacilar.

Las colonias pueden ser pequeas y puntiformes en agar MacConkey, en

particular con ciertas cepas de Y. pestis y Y. pseudotuberculosis. Las colonias
tienden a ser puntiformes despus de 24 horas de incubacin en agar-sangre.

El crecimiento ptimo ocurre en temperaturas entre los 25 a 32 C. Esta familia de

bacterias son las responsables de gastroenteritis, diarrea y linfadenitis
mesentrica.

En la familia Yersinia se encuentran dos principales bacterias, la principal es la Y.

enterocolitica, y la segunda y no tan frecuente es la Y. pseudotuberculosis.

Y. enterocolitica:

Se siembra en MacConkey Agar.

Esta presenta sndromes caractersticos como la diarrea con sangre.

La mayora de las cepas de Y. enterocolitica creccen en agares entricos

selectivos y se presentan como pequeas colonias lactosa negativas en agar
McConkey y agar SS en 48 horas.

La Y. enterocolitica en particular puede recuperarse de muestras fecales que se

incuban a 25C. Ya que lo que se busca es obtener colonias aisladas, su mtodo
de siembra es por estra cruzada.

No se recomienda el uso de EMB porque Y. enterocoltica es sacarosa positiva y

aparase como un coliforme en este medio.
 Y. enterocolitica en Agar MacConkey

CAMPILOBACTER

Morfologa y caractersticas fisiolgicas:

Se trata de bacterias gram negativas, pequeas (0.3-0.6 m de dimetro, 0.5-5 m

de ancho), no esporuladas, con una forma distintiva curva o en espiral, con
aspecto de vibrio, cuando se observan a partir de cultivos jvenes; con ms de 48
horas de incubacin o tras prolongada exposicin al aire adoptan una forma
cocoide.

Casi todas las especies son sensibles al oxgeno y slo pueden desarrollar en
condiciones de reduccin de oxgeno, habitualmente en atmsfera microaerfila(5-
10% de oxgeno).

Todas las especies son capaces de desarrollar a 37C, pero C.jejuni tiene una
temperatura ptima de crecimiento de 42C, por lo que es prctica habitual en el
laboratorio la incubacin a esta temperatura con el fin de facilitar el aislamiento
selectivo del principal patgeno humano del gnero.
Su velocidad de desarrollo es ms lenta que la de las bacterias de la flora normal
entrica, por lo que para su aislamiento a partir de materias fecales se requieren
medios de cultivo selectivos que inhiban esta flora.

Aislamiento e identificacin:

Para el aislamiento a partir de materias fecales, los medios de cultivo selectivos

ms comunes se basan en agar sangre y antibiticos; los ms usados son
Skirrow, Butzler y Campy-BAP.

Las colonias pueden apreciarse en las placas en 24-48 horas, aunque a veces
pueden ser necesarias 72-96 horas.
 En este medio la bacteria Campylobacter jejuni crece presentando colonias grises
con posible propagacin.

Campylobacter jejuni en Medio Butzler

IDENTIFICACION HASTA ESPECIE

La identificacin hasta especie se realiza a partir de pruebas bioqumicas.

Para las bacterias que se encuentran en el coprocultivo normalmente estas pruebas se

realizan con los siguientes medios de cultivo:
TSI
LIA
MIO
Citrato de sodio
Urea
Agar Hierro de Kligler

(La lectura e interpretacin de las mismas se explican en los anexos correspondientes.)

Anexo [4]
Anexo [5]

IDENTIFICACION FINAL

[La deteccin directa de antgenos de rotavirus en materia fecal es particularmente til

porque el virus no puede recuperarse en cultivo].

En un laboratorio diagnostico, la combinacin de la historia clnica y el efecto citoptico

(CPE) produce informacin suficiente para identificar algunos virus o bacterias.

La identificacin completa de los aislamientos, incluyendo la serotipificacin, requiere la

caracterizacin inmunolgica de los antgenos virales o bacterianos.
El mtodo tradicional para preparar antisueros ah sido inyectar el antgeno en un animal
(cordero, conejo, caballo, cuyo, cabras, etc). El animal genera entonces anticuerpos
policlonales a una variedad de determinantes (eptopes) del antgeno.

Aunque los eptopes con los que reaccionan los reactivos monoclonales estn
estrechamente definidos, puede haber reacciones cruzadas si el eptope es compartido por
otros antgenos. Si los reactivos monoclonales estn estrechamente definidos, pueden no
detectar todos los aislamientos.

La identificacin de un aislamiento viral o bacteriano desconocido se lleva a cabo mediante el

anlisis del grado en el cual los antisueros de reactividad conocida previenen la infeccin
viral o bacteriana de las clulas de cultivos celulares, huevos o animales.
Para caracterizar un aislamiento viral o bacteriano se utiliza un suero de referencia conocida.

Tipos de reacciones inmunolgicas:

PRIMARIAS: Interaccin directa entre antgeno y anticuerpo.

SECUNDARIAS: Hay reacciones observables, como precipitacin, aglutinacin o fijacin del
complemento.
TERCIARIAS: se refieren a ciertos efectos biolgicos como opsonizacion, fagositosis y
quimiotaxis.

Se dispone de varias tcnicas de laboratorio para medir cada uno de los 3 tipos de
interacciones inmunolgicas.

Los antisueros se inyectan a los animales para que estos se pongan en contacto con
las bacterias y se generen anticuerpos (especficos para las bacterias que se
inocularon en los animales). Posteriormente estos anticuerpos se extraen de la sangre
de los animales para ser utilizadas en la identificacin de bacterias aisladas de
muestras biologas. Cuando hay formacin de precipitados da positivo a la bacteria en
particular.

En el caso de E.coli hay 6 antisueros diferentes.

En el caso de Shigella son 4 (A,B,C y D).
Para Salmonella hay 6 (A, B, C1,C2,D y E).
Para Vibrio cholerae hay 1 (01)

ANTIBIOGRAMA

El antibiograma es aquel estudio que se le realiza a una cepa, siempre y cuando

sea identificada como patgena, para saber su sensibilidad a diversos antibiticos,
y as conocer con cual y que dosis se va a combatir a dicho patgeno.

En coprocultivo ocuparemos el siguiente mtodo:

Mtodo de Bauer-Kirby
 Consiste en realizar el antibiograma en una placa de medio Mueller Hinton, el cual es
un medio enriquecido, es decir en l crecen tanto Gram (-) como Gram(+) donde por
medio de estra masiva se sembrara la colonia o cepa a la cual se le har el anlisis.

Una vez realizada la siembra se deja secar el medio e inmediatamente se colocan

sobre el medio, los Multidisco, los cuales son una serie de papeles filtro
impregnados con diferentes antibiticos.

Los medios se incuban a 37 C durante 24 horas de pues de ello es hora de leer

los resultados del antibiograma, lo cual se hace midiendo el dimetro del alo que
se forme alrededor de los papeles filtro con antibitico.

Dependiendo del tamao del alo se podr decir que la bacteria tal es resistente
para equis antibiticos.

Se hace el reporte correspondiente y se desechan los medios ocupados.

El antibiograma en coprocultivo, solo se realizara a los gneros de:

Escherichia
Salmonella
Shigella
Yersinia

GLOSARIO

Antisueros: Suero que contiene anticuerpos (inmunoglobulinas) especficos frente

a un determinado antgeno o a varios o Suero animal o humano que contiene
anticuerpos contra una enfermedad especfica, que se utilizan para proporcionar
inmunidad pasiva frente a dicha enfermedad. Los antisueros no dan lugar a la
produccin de anticuerpos.

Anticuerpo: Molcula de inmunoglobulina especfica de antgeno, producida por

un clon de linfocitos B en respuesta a su estimulacin por dicho antgeno concreto.
Antgeno:

1. Es una sustancia que se combinar con un anticuerpo a raves de sitios de

unin especficos.

2. Sustancia capaz de reaccionar con las molculas especficas propias de

una respuesta inmunitaria, es decir, anticuerpos y receptores de linfocitos T.

Agente Etiolgico: Entidad biolgica, fsica o qumica capaz de causar

enfermedad.

Afeccin - Enfermedad o dolencia de determinada parte del organismo.

Constipacin - Es la retencin exagerada de materia fecal o el retardo mas all

del tiempo fisiolgico de evacuacin de hasta 48 hs. Tambin demostrada por la
retencin de forma tal de evacuar menos de tres veces por semana.

Determinante antignico: porcin de la molecula de antgeno responsable de la

interaccion con molculas de anticuerpo tipo-especificas.

Efecto citoptico (CPE): Dao celular causado por la infeccin de un virus o

Dao inducido por los virus en las monocapas.

Epitope: porcin molcular mas pequea de un determinante antignico que

reaccionar con un anticuerpo monoclonal.

Etiologa: Causa de una enfermedad.

Fontanelas: son las separaciones existentes entre los huecos del crneo del
beb, son importantes ya que facilitan que la cabecita pueda amoldarse y
atravesar el canal del parto.

Fisiopatologa: Estudio de los cambios funcionales que se asocian con la

enfermedad o lesin.

Inmunologa: Ciencia biolgica que estudia todos los mecanismos fisiolgicos de

defensa de la integridad biolgica del organismo. Dichos mecanismos consisten
esencialmente en la identificacin de lo extrao y su destruccin. La inmunologa
tambin estudia los factores inespecficos que coadyuvan a los anteriores en sus
efectos finales.

Infeccin Penetracin y desarrollo en el organismo de grmenes patgenos.

Sndrome: Es el conjunto de sntomas que caracterizan una enfermedad o el

conjunto de fenmenos caractersticos de una situacin determinada.

Serotipo: Es la clasificacin de un determinado agente infeccioso basada en

mtodos inmunolgicos, empleando generalmente suero de animales vacunados o
 naturalmente infectados, para hacerlos reaccionar con cepas especficas de
campo o del laboratorio para su identificacin.

Serotipificacin: Determinaciones que constituyen una ayuda para comprobar la

virulencia potencial, la invasividad, la susceptibilidad antimicrobiana y la
constitucin gentica de varias cepas.

Suero: Algunos tipos de lquidos con caractersticas y usos especficos o

Sustancia acuosa rica en protenas y sales que se separa de la parte coagulada
de algunos lquidos orgnicos, como la sangre, la linfa o la leche.

Tipificar: Representar una persona o cosa el tipo de la especie o clase a que

pertenece.

Tipificacin: Ajuste o adaptacin de varias cosas semejantes al patrn de un

modelo o norma comn o Encarnacin del modelo de una especie o clase en un
representante concreto.

REFERENCIAS:

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Editorial Panamericana, Tercera edicin, Mxico, D.F, 1998, pp: 129, 136-138,
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Garca del Valle Araceli [et al]. Manual de microbiologa medica. UNAM 1998. Pp
83.

Romero Cabello Raul, "Microbiologia y Parasitologia Humana Bases etiologicas

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http://www.ictsl.net/downloads/microbiologia.pdf

http://www.scielo.cl/pdf/rci/v21s1/art07.pdf

http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20EOSINA%20Y%20AZUL%20DE
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http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003090.htm

http://www.umm.edu/esp_ency/article/000982.htm#ixzz1uEoVsQwc

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 http://www.scielo.org.pe/pdf/rins/v28n1/a18v28n1.pdf

http://es.scribd.com/doc/6617222/Manual-de-Bacteriologia

http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap1.htm

http://www.chopo.com.mx/promociones/detalle/coprocultivo/distrito-federal