10 Recuento de plaquetas

RECUENTO DE PLAQUETAS 31
3 Volcar el contenido de la pipeta en el fluido diluyente y enjuagar la pipeta extrayendo la
sangre y volcndola dentro del tubo varias veces. Mezclar
durante al menos 10 minutos a mano o, de ser posible, con mezcladora mecnica.
4 Llenar el hemocitmetro, como se describe a continuacin.
5 Cubrir la cmara con una placa de Petri de 10 a 20 minutos para permitir que las
plaquetas se asienten. Dejar papel de fi ltro o algodn hmedo en la placa para evitar la
evaporacin.
6 Usando un microscopio, contar las plaquetas en los cuadrados grandes de 1 mm (= 0,1
l). Contar las plaquetas en todos los cuadrados que sean necesarios para llegar a contar
al menos 100. Las plaquetas se ven redondas u ovaladas y debido a su estructura
granular interna y su lustre prpura es posible distinguirlas de los residuos. En el fondo se
ven restos de glbulos rojos que han sido descompuestos por el oxalato de amonio. Si no
se dispone de contraste de fases, se puede utilizar un microscopio ptico corriente,
siempre que se baje el condensador para disminuir la intensidad de la luz.
7 Calcular la cantidad de plaquetas por litro de sangre de acuerdo con la frmula que
aparece ms abajo.
CLCULOS
La frmula para efectuar el recuento plaquetario es la siguiente:
Recuento (clulas/l) = N D/A 10 106
Donde N = cantidad total de clulas contadas
D = dilucin
A = rea total contada (en mm2)
10 = factor para calcular el volumen en l desde el rea
(En mm2) y la profundidad de la cmara (0,1 mm)
106 = factor para convertir el recuento/l en recuento/l
DIAGNSTICO DE LA HEMOFILIA Y OTROS TRASTORNOS DE LA COAGULACIN
3 mm
1 mm
3 mm
1 mm
1 mm
(a)
(b)
Figura 10.1. Cmara de recuento del hemocitmetro (a) Neubauer y (b)
Neubauer mejorado
RECUENTO DE PLAQUETAS 33
FUENTES DE ERROR EN EL
RECUENTO DE CLULAS
Cuando se utiliza sangre capilar,
se debe obtener una gota que
fluya libremente.
Cuando se utiliza sangre anti
coagulada, se debe mezclar el
espcimen cuidadosamente invirtiendo el
tubo de sangre al menos 20 veces antes de tomar la muestra. No sacudir el tubo, porque
al sacudirlo se produce espuma, que impedir usar la pipeta con exactitud. Inclinar el tubo
bien mezclado a un ngulo de 45 o apenas ms, y con la pipeta tomar la muestra desde
el borde del tubo, siguiendo los mismos procedimientos que para la sangre capilar.
Las pipetas para la toma de muestras de sangre deben estar limpias y secas.
Llenar la pipeta aspirando la sangre rpidamente y con exactitud, mediante un mecanismo
de succin que se sujeta a la pipeta, hasta alcanzar la lnea deseada. Si se sobrepasa
levemente la lnea, la sangre en exceso se puede eliminar apoyando el borde de la pipeta
sobre papel de filtro o papel tis suave. Si se sobrepasa mucho la lnea, usar una pipeta
limpia.
No debe haber burbujas de aire en la columna de sangre.
Se debe limpiar la parte externa de la pipeta para que no quede sangre (con cuidado de
que no caiga sangre del borde) antes de introducirla en el fluido diluyente.
Una vez que se ha descargado el contenido de la pipeta en el diluyente, se debe
succionar la mezcla a la pipeta varias veces, con succin pareja, para asegurarse de que
se ha descargado toda la sangre en el fluido. Sacudir ligeramente el tubo con la sangre
diluida durante al menos dos minutos a mano o, de ser posible, en un agitador mecnico.
Una vez que se ha agitado el tubo, se proceder de inmediato a llenar la cmara
mediante una pipeta Pasteur o un tubo capilar.
La cmara se llena por accin capilar, regulando el paso del fluido desde la pipeta o tubo
capilar de modo de lograr un llenado rpido y suave. Debe llenarse por completo, pero sin
que el fluido rebase y caiga en los fosos. Dejar asentar las clulas en el rea de recuento
de 10 a 20 minutos, y luego proceder a contarlas.
La cmara del hemocitmetro y el portaobjetos deben estar limpios y secos antes de
usarlos. Las marcas de huellas digitales o una pelcula grasosa pueden causar errores
importantes. Se debe contar una cantidad suficiente de clulas para reducir el margen de
error que puede producir una distribucin de clulas aleatoria. En la prctica, se deben
contar al menos 100 clulas. Al verificar otra vez la correcta distribucin de las clulas en
la cmara, la cantidad de clulas que se cuenta en cada rea (es decir, en los cuadrados
grandes) no debera diferir en ms del 10%.
DIAGNSTICO DE LA HEMOFILIA Y OTROS TRASTORNOS 34 DE LA COAGULACIN
CONTROLES
Se deben realizar dos diluciones y tomar la media de los dos recuentos; los dos recuentos
deben coincidir dentro del 10%.
FUENTES DE ERROR EN EL RECUENTO DE PLAQUETAS
Es preferible usar sangre obtenida mediante venopuncin que sangre capilar, porque las
plaquetas se adhieren a la herida y no siempre es posible reproducir las sucesivas
diluciones de sangre obtenida por digitopuncin.
Hasta aqu se describieron los errores generales en el uso de la pipeta y en
Hemocitometra. Tambin se debe prestar especial atencin a la cmara de recuento y
asegurarse de que est completamente limpia, ya que la suciedad y los residuos se
podran contar como plaquetas. Lavar la cmara con agua jabonosa, enjuagar con agua
destilada, dejar que desage completamente y secar con papel tis que no deje pelusa.
Asegurarse de que el portaobjetos est limpio antes de usarlo.
La presencia de cmulos de plaquetas impide que el recuento sea confiable. Si la muestra
contiene cmulos, se debe tomar una nueva muestra.
El oxalato de amonio que se usa como diluyente se debe mantener refrigerado y desechar
si hay evidencia de contaminacin bacteriolgica.
El espcimen se debe contar dentro de las tres horas de la extraccin.
Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin:

N de plaquetas x mm3 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos

altura x dilucin x rea

Reemplazando = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos

1/10 x 1/20 x 1/5

= plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos

1/1000

= plaquetas contadas x 1000

Valores de referencia

150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

Recuento en lmina

Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la

frmula convencional para recuento de plaquetas.

Valores de referencia

150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

Causas de aumento (trombocitosis)

La trombocitosis puede ser secundaria a un estmulo medular inespecfi-

co (posthemorrgica o tras una crisis hemoltica), paraneoplsica o posquirrgica. Es

especialmente importante la que se produce tras la esplenectoma.

La trombocitopenia esencial aislada es muy rara, pero puede aparecer

asociada a trastornos mieloproliferativos.