Traduccin captulos de gentica

Captulo 1
Introduccin

Cada especie de organismo vivo tiene un conjunto nico de caractersticas

heredadas que lo hace diferente de otras especies. Cada especie tiene su
propio plan de desarrollo a menudo descrito como una especie de "modelo"
para la construccin del organismo, que est codificado en las molculas de
ADN presentes en sus clulas. Este plan de desarrollo determina las
caractersticas que se heredan. Debido a que los organismos de la misma
especie comparten el mismo plan de desarrollo, los organismos que son
miembros de la misma especie suelen parecerse unos a otros, aunque algunas
excepciones notables suelen ser las diferencias entre machos y hembras. Por
ejemplo, es fcil distinguir a un ser humano de un chimpanc o un gorila. Un
ser humano habitualmente est de pie y tiene piernas largas, relativamente
poco pelo de cuerpo, un cerebro grande, y una cara plana con una nariz
prominente, mentn que se eleva, labios distintos, y dientes pequeos. Todos
estos rasgos son heredados-parte de nuestro plan de desarrollo- y nos ayudan
a diferenciarnos como Homo sapiens.
Pero los seres humanos no son de ningn modo idnticos. Muchos rasgos, o
caractersticas observables, difieren de una persona a otra. Hay una gran
variacin en
El color del pelo, el color de los ojos, el color de la piel, la altura, el peso, los
rasgos de personalidad y otras caractersticas. Algunos rasgos humanos se
transmiten biolgicamente, otros culturalmente. El color de nuestros ojos
resulta de la herencia biolgica, pero el idioma nativo que aprendimos como un
nio resulta de la herencia cultural. Muchos rasgos son influenciados
conjuntamente por herencia biolgica y factores ambientales. Por ejemplo, el
peso est determinado en parte por la herencia, pero tambin en parte por el
medio ambiente: la cantidad de alimento que comemos, su contenido
nutricional, nuestro rgimen de ejercicios, etc. La gentica es el estudio de
rasgos biolgicamente heredados, incluyendo rasgos que son influenciados en
parte por el medio ambiente.
El concepto fundamental de la gentica es Ese:
Los rasgos hereditarios estn determinados por los elementos de la herencia
que se transmiten de los padres a los hijos en reproduccin; Estos elementos
de la herencia se llaman genes.
La existencia de genes y las reglas que gobiernan su transmisin de
generacin en generacin fueron articuladas primero por Gregor Mendel en
1866 (Captulo 3). La formulacin de Mendel de la herencia era en trminos de
las reglas abstractas por las cuales los elementos hereditarios (los llam los
"factores") se transmiten de padres a la descendencia. Sus objetos de estudio
eran guisantes, con rasgos variables como el color del guisante y la altura de la
planta. En un tiempo la gentica slo poda estudiarse a travs de la progenie
producida por los apareamientos. Las diferencias genticas entre las especies
eran imposibles de definir, porque los organismos de diferentes especies no
suelen aparearse, o producen progenie hbrida que mueren o son estriles.
Este acercamiento al estudio de la gentica se refiere a menudo como gentica
clsica, o gentica organismic o morfolgica. Dado los avances de la gentica
molecular, o moderna, es posible estudiar las diferencias entre especies a
travs de la comparacin y el anlisis del propio ADN. No existe una distincin
fundamental entre la gentica clsica y la gentica molecular. Son formas
diferentes y complementarias de estudiar lo mismo: la funcin del material
gentico. En este libro se incluyen muchos ejemplos que muestran cmo la
gentica molecular y clsica puede ser usada en combinacin para aumentar el
poder del anlisis gentico.

La fundacin de la gentica como ciencia molecular se remonta a 1869, apenas

tres aos despus de que Mendel inform de sus experimentos. Fue en 1869
que Friedrich Miescher descubri un nuevo tipo de cido dbil, abundante en
los ncleos de glbulos blancos. El cido dbil de Miescher result ser la
sustancia qumica que ahora llamamos ADN (cido desoxirribonucleico).
Durante muchos aos se desconoca la funcin biolgica del ADN y no se le
atribua ningn papel en la herencia. Esta primera seccin muestra cmo el
ADN se aisl y se identific como el material de que se hacen los genes.

1 ADN: El material gentico

Que el ncleo celular desempea un papel clave en la herencia fue reconocido

en la dcada de 1870 por la observacin de que los ncleos de las clulas
reproductoras masculinas y femeninas sufren fusin en el proceso de
fertilizacin. Poco despus, los cromosomas se observaron por primera vez
dentro del ncleo como objetos similares a hilos que se hacen visibles en el
microscopio de luz cuando la clula se tie con ciertos tintes. Se encontr que
los cromosomas presentan un comportamiento caracterstico de "divisin" en
el que cada clula hija formada por divisin celular recibe un complemento
idntico de cromosomas (Captulo 4). La observacin de que, mientras que el
nmero de cromosomas en cada clula puede diferir entre especies biolgicas,
el nmero de cromosomas es casi siempre constante dentro de las clulas de
cualquier especie en particular. Estas caractersticas de los cromosomas fueron
bien comprendidas por alrededor de 1900, y hicieron parecer probable que los
cromosomas eran los portadores de los genes.

En la dcada de 1920, varias lneas de evidencia indirecta comenzaron a

sugerir una estrecha relacin entre los cromosomas y el ADN. Los estudios
microscpicos con manchas especiales mostraron que el ADN est presente en
los cromosomas. Los cromosomas tambin contienen varios tipos de protenas,
pero la cantidad y tipos de protenas cromosmicas difieren mucho de un tipo
de clula a otro, mientras que la cantidad de ADN por clula es constante.
Adems, casi todos los ADN presentes en las clulas de organismos superiores
estn presentes en los cromosomas. Sin embargo, estos argumentos en favor
del ADN como material gentico no eran convincentes, ya que los anlisis
qumicos en bruto haban sugerido (errneamente, como result) que el ADN
carece de la diversidad qumica necesaria en una sustancia gentica. El
candidato favorito para el material gentico era la protena, porque se saba
que las protenas eran una coleccin extremadamente diversa de molculas.
Por lo tanto, las protenas se convirtieron ampliamente aceptadas como el
material gentico, y se supona que el ADN funcionaba simplemente como el
marco estructural de los cromosomas. Los experimentos descritos a
continuacin demuestran finalmente que el ADN es el material gentico.

Prueba experimental de la funcin gentica del ADN

Un primer paso importante fue tomado por Frederick Griffith en 1928 cuando
demostr que un rasgo fsico se puede pasar de una clula a otra. Estaba
trabajando con dos cepas de la bacteria Streptococcus pneumoniae
identificadas como S y R.

Cuando una clula bacteriana se cultiva en medio slido, experimenta

divisiones celulares repetidas para formar un grupo visible de clulas llamado
colonia. El tipo S. de S. pneumoniae sintetiza una cpsula gelatinosa
compuesta de carbohidrato complejo (polisacrido). La cpsula envolvente
hace que cada colonia sea grande y le da un aspecto brillante o liso (S). Esta
cpsula tambin permite que la bacteria cause neumona protegindola de los
mecanismos de defensa de un animal infectado. Las cepas R de S. pneumoniae
son incapaces de sintetizar el polisacrido capsular; Forman pequeas colonias
que tienen una superficie rugosa (R) (Figura 1.1). Esta cepa de la bacteria no
causa neumona, porque sin la cpsula las bacterias son inactivadas por el
sistema inmune del husped. Ambos tipos de bacterias "se reproducen" en el
sentido de que la progenie formada por divisin celular tiene el tipo capsular
del padre, ya sea S o R. Los ratones inyectados con clulas S vivas tienen
neumona. Los ratones inyectados con clulas R vivas o con clulas S muertas
por calor permanecen sanos. Aqu est el hallazgo crtico de Griffith: los
ratones inyectados con una mezcla de clulas R vivas y clulas S muertas por
calor contraen la enfermedad, a menudo mueren de neumona (Figura 1.2). Las
bacterias aisladas de muestras de sangre de estos ratones muertos producen
cultivos S con una cpsula tpica de las clulas S inyectadas, a pesar de que las
clulas S inyectadas haban sido destruidas por calor. Evidentemente, el
material inyectado de las clulas S muertas incluye una sustancia que puede
transferirse a clulas R vivas y confieren la capacidad de resistir el sistema
inmunolgico del ratn y causar neumona. En otras palabras, las bacterias R
pueden transformarse o transformarse en bacterias S. Adems, las nuevas
caractersticas son heredadas por los descendientes de las bacterias
transformadas.

La transformacin en Streptococcus fue descubierta originalmente en 1928,

pero no fue hasta 1944 que la sustancia qumica responsable de cambiar las
clulas R en clulas S fue identificada. En un experimento importante, Oswald
Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty demostraron que la sustancia que
causa la transformacin de las clulas R en clulas S fue el ADN. Al hacer estos
experimentos, primero tuvieron que desarrollar procedimientos qumicos para
aislar el ADN casi puro de las clulas, lo que nunca se haba hecho antes.
Cuando aadieron ADN aislado de clulas S a cultivos en crecimiento de clulas
R, observaron la transformacin: Se produjeron unas pocas clulas de clulas
tipo S. Aunque las preparaciones de ADN contenan rastros de protena y ARN
(cido ribonucleico, una macromolcula celular abundante qumicamente
relacionada con el ADN), la actividad transformadora no fue alterada por
tratamientos que destruyeran la protena o el ARN. Sin embargo, los
tratamientos que destruyeron el ADN eliminaron la actividad transformadora
(Figura 1.3). Estos experimentos implicaron que la sustancia responsable de la
transformacin gentica era el ADN de la clula, por lo que el ADN es el
material gentico.
Papel gentico del ADN en el bacterifago
Un segundo hallazgo fundamental fue reportado por Alfred Hershey y Martha
Chase en 1952. Ellos estudiaron las clulas de la bacteria intestinal Escherichia
coli despus de la infeccin por el virus T2. Un virus que ataca a las clulas
bacterianas se llama un bacterifago, un trmino a menudo acortado a fago.
Bacterifago significa "bactericida". La estructura de una partcula de
bacterifago T2 se ilustra en la Figura 1.4. Es excesivamente pequea, pero
tiene una estructura compleja compuesta por la cabeza (que contiene el ADN
del fago), el collar, la cola y las fibras de cola. (La cabeza de un
espermatozoide humano es aproximadamente 30-50 veces mayor en longitud
y anchura que la cabeza de T2). Hershey y Chase ya eran conscientes de que
la infeccin T2 procede a travs de la unin de una partcula de fago por la
punta de su cola La pared de la clula bacteriana, la entrada del material de
fago en la clula, la multiplicacin de este material para formar cien o ms
fagos de progenie y la liberacin del fago de la progenie por ruptura (lisis) de la
clula husped bacteriana. Tambin saban que las partculas T2 estaban
compuestas de ADN y protena en cantidades aproximadamente iguales.

Debido a que el ADN contiene fsforo pero no azufre, mientras que la mayora
de las protenas contienen azufre pero no hay fsforo, es posible etiquetar el
ADN y las protenas diferencialmente mediante el uso de istopos radiactivos
de los dos elementos. Hershey y Chase produjeron partculas que contenan
ADN radiactivo infectando clulas de E. coli que haban sido cultivadas durante
varias generaciones en un medio que inclua 32P (un istopo radiactivo de
fsforo) y luego recogiendo la progenie de fagos. Otras partculas que
contenan protenas marcadas se obtuvieron de la misma manera, utilizando
medio que inclua 35S (un istopo radiactivo de azufre).

En los experimentos resumidos en la Figura 1.5, se infectaron clulas de E. coli

no radiactivas con fagos marcados con 32P (parte A) o 35S (parte B) con el fin
de seguir el ADN y las protenas individualmente. Las clulas infectadas se
separaron de las partculas de fago no unidas mediante centrifugacin, se
resuspendieron en medio fresco y luego se arremolinaron violentamente en un
mezclador de cocina para cortar el material de fago unido a las superficies de
las clulas. Se encontr que este tratamiento no tiene efecto sobre el curso
subsiguiente de la infeccin, lo que implica que el material gentico del fago
debe entrar en las clulas infectadas muy poco despus de la fijacin del fago.
La licuadora de la cocina result ser la pieza crtica del equipo. Otros mtodos
se haban intentado rasgar las cabezas del fago de la superficie de la clula
bacteriana, pero nada haba trabajado confiablemente. Hershey explic ms
tarde: "Hemos probado varios arreglos de molienda, con resultados que no
fueron muy alentadores. Cuando Margaret McDonald nos prest su licuadora de
cocina, el experimento tuvo xito.

Despus de que las cabezas de fago se retiraron mediante el tratamiento con

mezclador, se examinaron las bacterias infectadas. Se encontr que la mayor
parte de la radiactividad del fago marcado con 32P estaba asociada con la
bacteria, mientras que slo una pequea fraccin de la radiactividad 35S
estaba presente en las clulas infectadas. La retencin de la mayor parte del
ADN marcado, en contraste con la prdida de la mayor parte de la protena
marcada, implicaba que un fago T2 transfiere la mayor parte de su ADN, pero
muy poco de su protena, a la clula que infecta. El hallazgo crtico (Figura 1.5)
fue que aproximadamente el 50 por ciento del ADN marcado con 32P
transferido, pero menos del 1 por ciento de la protena marcada con 35S
transferida, fue heredado por las partculas del fago de la progenie. Hershey y
Chase interpretaron este resultado para indicar que el material gentico en el
fago T2 es el ADN.

Los experimentos de Avery, MacLeod y McCarty y los de Hershey y Chase se

consideran clsicos en la demostracin de que los genes consisten en ADN. En
la actualidad, el equivalente del experimento de transformacin se realiza
diariamente en muchos laboratorios de investigacin en todo el mundo,
generalmente con bacterias, levaduras o
Animales o clulas vegetales cultivadas en cultivo. Estos experimentos indican
que el ADN es el material gentico en estos organismos, as como en el fago
T2. Aunque no hay excepciones conocidas a la generalizacin de que el ADN es
el material gentico en todos los organismos celulares y muchos virus, en
algunos tipos de virus el material gentico consiste en ARN.

1.2 Estructura de ADN: La doble hlice

La inferencia de que el ADN es el material gentico todava deja muchas

preguntas sin respuesta. Cmo se divide el ADN de un gen cuando se divide
una clula? Cmo el ADN de un gen controla un rasgo hereditario? Qu
sucede con el ADN cuando ocurre una mutacin (un cambio en el ADN) en un
gen? A principios de la dcada de 1950, varios investigadores comenzaron a
tratar de comprender la estructura molecular detallada del ADN con la
esperanza de que la estructura por s sola sugiriera respuestas a estas
preguntas. En 1953, James Watson y Francis Crick, de la Universidad de
Cambridge, propusieron la primera estructura tridimensional esencialmente
correcta de la molcula de ADN. La estructura era deslumbrante en su
elegancia y revolucionario al sugerir cmo el ADN se duplica a s mismo,
controla rasgos hereditarios y sufre mutacin. Incluso mientras su modelo de la
molcula de ADN todava estaba incompleto, Crick visitara su pub favorito y
exclamara: "hemos descubierto el secreto de la vida".

En la estructura de Watson-Crick, el ADN consta de dos largas cadenas de

subunidades, cada una de ellas retorcidas alrededor de la otra para formar una
hlice de doble hlice. La doble hlice es derecha, lo que significa que cuando
uno mira a lo largo del can, cada cadena sigue una trayectoria en el sentido
de las agujas del reloj a medida que avanza. Usted puede visualizar la bobina
derecha en la parte A de la Figura 1.6 si se imagina mirando hacia arriba en la
estructura desde abajo. Las esferas oscuras delinean la "columna vertebral" de
cada hebra individual, y enrollan en sentido horario. Las subunidades de cada
cadena son nucletidos, cada uno de los cuales contiene uno cualquiera de los
cuatro constituyentes qumicos llamados bases unidas a una molcula
fosforilada de la desoxirribosa de azcar de 5 carbonos. Las cuatro bases en el
ADN son:
Adenina (A) Guanina (G)
Timina (T) Citosina (C)
Las estructuras qumicas de los nucletidos y bases no necesitan preocuparnos
en este momento. Se examinan en el captulo 2. Un punto clave para nuestros
propsitos actuales es que las bases en la doble hlice se emparejan como se
muestra en la figura 1.6B. Es decir:
En cualquier posicin en las cadenas emparejadas de una molcula de ADN, si
una hebra tiene una A, entonces la hebra asociada tiene una T; Y si una hebra
tiene una G, entonces la hebra asociada tiene una C.
Se dice que el emparejamiento entre A y T y entre G y C es complementario; El
complemento de A es T y el complemento de G es C. El emparejamiento
complementario significa que cada base a lo largo de una hebra del ADN est
emparejada con una base en la posicin opuesta en la otra hebra. Adems:
Nada restringe la secuencia de bases en una sola hebra, por lo que cualquier
secuencia podra estar presente a lo largo de una hebra.
Este principio explica cmo slo cuatro bases en el ADN pueden codificar la
enorme cantidad de informacin necesaria para hacer un organismo. Es la
secuencia de bases a lo largo del ADN que codifica la informacin gentica, y la
secuencia es completamente irrestricta
El emparejamiento complementario tambin se llama emparejamiento de
Watson-Crick. En la estructura tridimensional de la figura 1.6A, los pares de
bases estn representados por las esferas ms claras que llenan el interior de
la doble hlice. Los pares de bases estn casi planos, apilados uno encima del
otro perpendicularmente al eje largo de la doble hlice, como peniques en un
rollo. Cuando se habla de una molcula de ADN, los bilogos se refieren
frecuentemente a las hebras individuales como ADN de una sola hebra ya la
doble hlice como ADN de doble cadena o ADN dplex.

Ms all de las esperanzas ms optimistas, el conocimiento de la estructura del

ADN dio inmediatamente pistas de su funcin:

1. La secuencia de bases en el ADN podra copiarse utilizando cada una de las

cadenas separadas de "pareja" como patrn para la creacin de una nueva
cadena de pareja con una secuencia complementaria de bases.

2. El ADN podra contener informacin gentica en forma codificada en la

secuencia de bases, anloga a las letras impresas en una tira de papel.

3. Los cambios en la informacin gentica (mutaciones) podran resultar de

errores en el copiado en los que la secuencia de base del ADN se alter.

En el resto de este captulo, discutiremos algunas de las implicaciones de estas

pistas.
1.3 Una visin general del ADN

Replicacin

Watson y Crick observaron que la estructura del propio ADN sugera un

mecanismo para su replicacin. "No ha escapado a nuestro conocimiento",
escribieron, "que el par de bases especfico que postulamos inmediatamente
sugiere un mecanismo de copia". El proceso de copiado en el que una sola
molcula de ADN se convierte en dos molculas idnticas se llama replicacin.
El mecanismo de replicacin que Watson y Crick tenan en mente se ilustra en
la Figura 1.7.

Como se muestra en la parte A de la Figura 1.7, los hilos del dplex original
(par) se separan, y cada hebra individual sirve como patrn, o plantilla, para la
sntesis de una nueva hebra (rplica). Las hebras de rplica se sintetizan
mediante la adicin de nucletidos sucesivos de tal manera que cada base en
la rplica es complementaria (en el sentido de emparejamiento de Watson-
Crick) a la base a travs del camino en la hebra de plantilla (Figura 1.7B).
Aunque el mecanismo de la Figura 1.7 es simple en principio, es un proceso
complejo que est plagado de problemas geomtricos y requiere una variedad
de enzimas y otras protenas. Los detalles se examinan en el captulo 6. El
resultado final de la replicacin es que una sola molcula bicatenaria se replica
en dos copias con secuencias idnticas:

Aqu las bases en las hebras recin sintetizadas se muestran en rojo. En el

dplex a la izquierda, la hebra superior es la plantilla de la molcula parental y
la hebra inferior se sintetiza nuevamente; En el dplex a la derecha, la hebra
inferior es la plantilla de la molcula parental y la hebra superior se sintetiza
nuevamente. Obsrvese en la Figura 1.7B que en la sntesis de cada nueva
hebra, se aaden nuevos nucletidos slo al extremo 3 'de la cadena en
crecimiento:
El alargamiento obligatorio de una cadena de ADN slo en el extremo 3 'es una
caracterstica esencial de la replicacin del ADN.

1.4 Genes y Protenas

Ahora que tenemos una comprensin bsica de la estructura de la estructura

gentica
Cmo se convierte este plan de desarrollo en un complejo organismo vivo? Si
el cdigo se piensa como una cadena de letras en una hoja de papel, entonces
los genes se componen de palabras distintas que forman frases y prrafos que
dan significado al patrn de letras. Lo que se crea a partir de los complejos y
diversos cdigos de ADN es la protena, una clase de macromolculas que
realiza la mayor parte de las actividades en la clula. Las clulas estn
formadas en su mayor parte por protenas: protenas estructurales que dan a la
clula rigidez y movilidad, protenas que forman poros en la membrana celular
para controlar el trfico de pequeas molculas dentro y fuera de la clula y
protenas receptoras que regulan las actividades celulares en respuesta a
Seales moleculares del medio de crecimiento o de otras clulas.

Las protenas tambin son responsables de la mayora de las actividades

metablicas de las clulas. Son esenciales para la sntesis y descomposicin de
molculas orgnicas y para generar la energa qumica necesaria para las
actividades celulares. En 1878 se introdujo el trmino enzima para referirse a
los catalizadores biolgicos que aceleran las reacciones bioqumicas en las
clulas. En 1900, gracias en gran parte al trabajo del bioqumico alemn Emil
Fischer, se demostr que las enzimas eran protenas. Como sucede a menudo
en la ciencia, los "errores" de la naturaleza proporcionan pistas sobre cmo
funcionan las cosas. Tal fue el caso en el establecimiento de una relacin entre
los genes y la enfermedad, porque un "error" en un gen (una mutacin) puede
resultar en un "error" (falta de funcin) en la protena correspondiente. Esto
proporcion una avenida fructfera de la investigacin para el estudio de la
gentica.

Errores innatos del metabolismo como causa de la enfermedad

hereditaria

Fue a finales del siglo XX cuando el mdico britnico Archibald Garrod Ciertas
enfermedades hereditarias siguieron las reglas de transmisin que Mendel
haba descrito para sus guisantes. En 1908 Garrod dio una serie de
conferencias en las que propuso una hiptesis fundamental sobre la relacin
entre la herencia, las enzimas y la enfermedad:
Cualquier enfermedad hereditaria en la cual el metabolismo celular es anormal
resulta de un defecto heredado en una enzima.

Tales enfermedades se conocieron como errores innatos del metabolismo, un

trmino todava en uso hoy en da.

Garrod estudi una serie de errores innatos de metabolismo en los que los
pacientes Excret sustancias anormales en la orina. Una de ellas fue la
alcaptonuria. En este caso, la sustancia anormal excretada es cido
homogentisico:

Un nombre temprano para el cido homogentisic era alkapton, de ah el

alkaptonuria conocido para la enfermedad. Aunque la alcaptonuria es rara, con
una incidencia de aproximadamente una de cada 200.000 personas, era bien
conocida antes incluso de que Garrod la estudiara. La enfermedad en s es
relativamente leve, pero tiene un sntoma sorprendente: La orina del paciente
se vuelve negra debido a la oxidacin del cido homogentisico (Figura 1.8).
Esta es la razn por la alcaptonuria tambin se llama enfermedad de orina
negro. Un caso temprano fue descrito en el ao 1649:

El paciente era un nio que pasaba orina negra y que, a los catorce aos de
edad, se someti a un tratamiento drstico que tena por objeto el
sometimiento del calor ardiente de sus vsceras, que supuestamente
provocaba la condicin En cuestin por carbonizar y ennegrecer su bilis. Entre
las medidas prescritas se encontraban hemorragias, purgacin, baos, una
dieta fra y acuosa, y abundancia de drogas. Ninguno de ellos tuvo un efecto
obvio, y finalmente el paciente, cansado de la ftil y superflua terapia, resolvi
dejar que las cosas siguieran su curso natural. Ninguno de los males previstos
se produjo. Se cas, engendr una familia grande, y vivi una vida larga y
sana, siempre pasando la orina negra como tinta. (Recuento de Garrod, 1908.)
Garrod estaba principalmente interesado en la bioqumica de la alcaptonuria,
pero tom nota de estudios de la familia que indicaron que la enfermedad se
hered como si se debiera a un defecto en un solo gen. En cuanto a la
bioqumica, dedujo que el problema en la alcaptonuria era la incapacidad de
los pacientes para romper el anillo de fenilo de seis carbonos que est presente
en el cido Homogentisico. De dnde viene este anillo? La mayora de los
animales lo obtienen de los alimentos en su dieta. Garrod propuso que el cido
homogentisic se origina como producto de descomposicin de dos
aminocidos, phenylalanine y tyrosine, que tambin contienen un anillo de
fenilo. Un aminocido es uno de los "bloques de construccin" de los cuales se
hacen las protenas. La fenilalanina y la tirosina son constituyentes de
protenas normales. El esquema que ilustra la relacin entre las molculas se
muestra en la Figura 1.9. Cualquier secuencia de reacciones bioqumicas se
denomina va bioqumica o va metablica. Cada flecha en el camino
representa una sola etapa que representa la transicin de la molcula de
"entrada" o de sustrato, mostrada en la cabeza de la flecha, a la molcula de
salida o producto, mostrada en la punta. Las vas bioqumicas se orientan
generalmente verticalmente con las flechas apuntando hacia abajo, como en la
Figura 1.9, u horizontalmente, con las flechas apuntando de izquierda a
derecha. Garrod no conoca todos los detalles de la ruta de la Figura 1.9, pero
comprendi que el paso clave en la descomposicin del cido homogentisico es
el rompimiento del anillo de fenilo y que el anillo de fenilo en el cido
homogentisico proviene de fenilalanina diettica y Tirosina.

Qu permite que cada paso en una va bioqumica ocurra? Garrod supuso

correctamente que cada paso requiere una enzima especfica para catalizar la
reaccin para la transformacin qumica. Las personas con un error innato de
metabolismo, como alcaptonuria, tienen un defecto en un solo paso de una va
metablica porque carecen de una enzima funcional para ese paso. Cuando
una enzima en una va es defectuosa, se dice que la va tiene un bloque en esa
etapa. Un resultado frecuente de una va bloqueada es que el sustrato de la
enzima defectuosa se acumula. Observando la acumulacin de cido
homogentisic en pacientes con alcaptonuria, Garrod propuso que debe haber
una enzima cuya funcin es abrir el anillo de fenilo del cido homogentisic y
que esta enzima falta en estos pacientes. El aislamiento de la enzima que abre
el anillo de fenilo del cido homogentisico no se consigui hasta 50 aos
despus de las conferencias de Garrod. En las personas normales se encuentra
en las clulas del hgado, y tal como Garrod haba predicho, la enzima es
defectuosa en pacientes con alcaptonuria.

El camino para la descomposicin de fenilalanina y tirosina, como se entiende

hoy, se muestra en la Figura 1.10. En esta figura se hace hincapi en las
enzimas y no en las estructuras de los metabolitos, o molculas pequeas,
sobre las que actan las enzimas. Cada paso en la va requiere la presencia de
una enzima particular que cataliza esa etapa. Aunque Garrod slo conoca la
alcaptonuria, en la que la enzima defectuosa es el cido homogentisico 1,2
dioxigenasa, ahora conocemos las consecuencias clnicas de los defectos en las
otras enzimas. A diferencia de la alcaptonuria, que es una enfermedad
hereditaria relativamente benigna, los otros son muy graves. La condicin
conocida como fenilcetonuria (PKU) es el resultado de la ausencia (o un defecto
en) de la enzima fenilalanina hidroxilasa (HAP). Cuando este paso en el camino
est bloqueado, la fenilalanina se acumula. El exceso de fenilalanina se
descompone en metabolitos dainos que causan defectos en la formacin de
mielina que daan el desarrollo del sistema nervioso del nio y conducen a un
retraso mental severo.
Sin embargo, si la PKU se diagnostica en los nios muy pronto despus del
nacimiento, se puede colocar en una dieta especialmente formulada baja en
fenilalanina. Al nio se le permite solamente la cantidad de fenilalanina que
puede usarse en la sntesis de protenas, por lo que el exceso de fenilalanina
no se acumula. La dieta especial es muy estricta. Excluye carne, aves,
pescado, huevos, leche y productos lcteos, legumbres, frutos secos y
productos de panadera fabricados con harina regular. Estos alimentos son
reemplazados por una costosa frmula sinttica. Con la dieta especial, sin
embargo, los efectos perjudiciales del exceso de fenilalanina en el desarrollo
mental pueden evitarse en gran medida, aunque en mujeres adultas con PKU
que estn embarazadas, el feto est en riesgo. En muchos pases, incluyendo
los Estados Unidos, todos los bebs recin nacidos son sometidos a anlisis de
sangre en busca de signos qumicos de PKU. La exploracin de rutina es
rentable porque la PKU es relativamente comn. En los Estados Unidos, la
incidencia es de 1 en 8000 entre los nacimientos caucsicos. La enfermedad es
menos comn en otros grupos tnicos.

En la va metablica de la figura 1.10, los defectos en la descomposicin de la

tirosina o del cido 4-hidroxifenilpirvico conducen a tipos de tirosinemia. Estas
son tambin enfermedades graves. El tipo II est asociado con lesiones
cutneas y retraso mental, tipo III con disfuncin heptica grave.

Genes Mutantes y Protenas Defectuosas

Se deduce del trabajo de Garrod que una enzima defectuosa es el resultado de

un gen mutante, pero cmo? Garrod no especul. Por lo que l saba, los
genes eran enzimas. Esto habra sido una hiptesis lgica en ese momento.
Ahora sabemos que la relacin entre genes y enzimas es algo indirecta. Con
pocas excepciones, cada enzima est codificada en una secuencia particular de
nucletidos presentes en una regin de ADN. La regin del ADN que codifica la
enzima, as como las regiones adyacentes que regulan cundo y en qu clulas
se produce la enzima, forman el "gen" que codifica la enzima.
Los genes para las enzimas en la va bioqumica en la Figura 1.10 han sido
identificados y se determin la secuencia de nucletidos del ADN. En la
siguiente lista ya lo largo de este libro usamos la convencin tipogrfica
estndar de que los genes estn escritos en cursiva, mientras que los
productos genticos no se imprimen en cursiva. Esta convencin es
conveniente, porque significa que el producto proteico de un gen puede ser
representado con el mismo smbolo que el propio gen, pero mientras que el
smbolo del gen est en cursiva, el smbolo de protena no lo es.

El gen PAH en el brazo largo del cromosoma 12 codifica la fenilalanina

hidroxilasa (HAP).

El gen TAT en el brazo largo del cromosoma 16 codifica la tirosina

aminotransferasa (TAT).

El gen HPD en el brazo largo del cromosoma 12 codifica la dioxigenasa de

cido 4-hidroxifenilpirvico (HPD).
El gen HGD en el brazo largo del cromosoma 3 codifica cido homogentisico
1,2 dioxigenasa (HGD).
A continuacin pasamos a la cuestin de cmo los genes codifican las enzimas
y otras protenas.

1.5 Expresin gnica: El dogma central

Watson y Crick estaban correctos al proponer que la informacin gentica en el
ADN est contenida en la secuencia de bases de una manera anloga a las
letras impresas en una tira de papel. En una regin de ADN que dirige la
sntesis de una protena, el cdigo gentico para la protena est contenido en
una sola hebra, y se decodifica en un orden lineal. Una protena tpica est
constituida por una o ms cadenas polipeptdicas; Cada cadena polipeptdica
consiste en una secuencia lineal de aminocidos conectados de extremo a
extremo. Por ejemplo, la enzima PAH consiste en cuatro cadenas polipeptdicas
idnticas, cada una de 452 aminocidos de longitud. En la decodificacin del
ADN, cada "palabra de cdigo" sucesiva en el ADN especifica el siguiente
aminocido que se aade a la cadena polipeptdica a medida que se hace. La
cantidad de ADN necesaria para codificar la cadena polipeptdica de PAH es por
lo tanto 452 X3 = 1356 pares de nucletidos. El gen entero es mucho ms
largo: unos 90.000 pares de nucletidos. Slo el 1,5 por ciento del gen se
dedica a la codificacin de los aminocidos. La parte no codificante incluye
algunas secuencias que controlan la actividad del gen, pero no se sabe cunto
del gen est involucrado en la regulacin.
Hay 20 aminocidos diferentes. Slo cuatro bases codifican estos 20
aminocidos, con cada "palabra" en el cdigo gentico que consta de tres
bases adyacentes. Por ejemplo, la secuencia de bases ATG especifica el
aminocido metionina (Met), TCC especifica serina (Ser), ACT especifica
treonina (Thr) y GCG especifica alanina (Ala). Hay 64 posibles combinaciones
de tres bases pero slo 20 aminocidos porque algunas combinaciones
codifican para el mismo aminocido. Por ejemplo, TCT, TCC, TCA, TCG, AGT y
AGC, todos codifican para la serina (Ser), y CTT, CTC, CTA, CTG, TTA y TTG, todo
el cdigo de leucina (Leu). Un ejemplo de la relacin entre la secuencia de
bases en un dplex de ADN y la secuencia de aminocidos de la protena
correspondiente se muestra en la Figura 1.11. Este dplex de ADN particular es
la secuencia humana que codifica los primeros siete aminocidos en la cadena
polipeptdica de HAP.
El esquema esbozado en la figura 1.11 indica que el ADN codifica la protena no
directamente sino indirectamente a travs de los procesos de transcripcin y
traduccin. La va indirecta de transferencia de informacin,

ADN --- ARN --- Protena

Es conocido como el dogma central de la gentica molecular. El trmino dogma

significa "conjunto de creencias"; Data desde el momento en que la idea fue
presentada primero como una teora. Desde entonces el "dogma" ha sido
confirmado experimentalmente, pero el trmino persiste. El dogma central se
muestra en la figura 1.12. El concepto principal en el dogma central es que el
ADN no codifica directamente la protena, sino que acta a travs de una
molcula intermedia del cido ribonucleico (ARN). La estructura del ARN es
similar, pero no idntica, a la del ADN. Hay una diferencia en el azcar (el ARN
contiene la azcar ribosa en lugar de la desoxirribosa), el ARN es generalmente
monocatenario (no un dplex), y el ARN contiene la base uracilo (U) en lugar de
la timina (T), que est presente en ADN. En realidad, tres tipos de ARN toman
parte en la sntesis de protenas:

Una molcula de ARN mensajero (ARNm), que lleva la informacin gentica

de
ADN y se utiliza como molde para la sntesis de polipptidos. En la mayora de
las molculas de ARNm,
Hay una alta proporcin de nucletidos que realmente codifican aminocidos.
Por ejemplo, el ARNm para la HAP es de 2400 nucletidos de longitud y codifica
un polipptido de 452 aminocidos; En este caso, ms del 50 por ciento de la
longitud del ARNm codifica aminocidos.

Varios tipos de ARN ribosmico (ARNr), que son constituyentes principales de

las partculas celulares llamadas ribosomas en las que tiene lugar la sntesis de
polipptidos.

Un conjunto de molculas de ARN de transferencia (ARNt), cada una de las

cuales lleva un aminocido particular as como una regin de reconocimiento
de tres bases que se une a pares de bases con un grupo de tres bases
adyacentes en el ARNm. A medida que cada ARNt participa en la traduccin, su
aminocido se convierte en la subunidad terminal aadida a la longitud de la
cadena polipeptdica en crecimiento. El tRNA que transporta metionina se
denomina tRNAMet, el que lleva serina se denomina tRNASer, y as
sucesivamente.

El dogma central es el principio fundamental de la gentica molecular porque

resume cmo la informacin gentica en el ADN se expresa en la secuencia de
aminocidos en una cadena polipeptdica:
La secuencia de nucletidos en un gen especifica la secuencia de nucletidos
en una molcula de ARN mensajero; A su vez, la secuencia de nucletidos en el
ARN mensajero especifica la secuencia de aminocidos en la cadena
polipeptdica.
Dado un proceso tan conceptualmente simple como el ADN que codifica la
protena, qu podra explicar la complejidad adicional de los intermediarios del
ARN? Una posible razn es que un ARN intermedio da otro nivel para el control,
por ejemplo, degradando el ARNm para una protena innecesaria. Otra posible
razn puede ser histrica. La estructura de ARN es nica en tener tanto un
contenido informativo presente en su secuencia de bases como una estructura
tridimensional plegada compleja que dota a algunas molculas de ARN con
actividades catalticas. Muchos cientficos creen que en las primeras formas de
vida, el ARN serva tanto para la informacin gentica como para la catlisis. A
medida que avanzaba la evolucin, el papel informativo se transfiri al ADN y
el papel cataltico a la protena. Sin embargo, el ARN qued bloqueado en su
ubicacin central como intermediario en los procesos de transferencia de
informacin y sntesis de protenas. Esta hiptesis implica que la participacin
del ARN en la sntesis de protenas es una reliquia de las etapas ms
tempranas de la evolucin-un "fsil molecular". La hiptesis es apoyada por
una variedad de observaciones. Por ejemplo, (1) la replicacin del ADN requiere
una molcula de ARN para comenzar (Captulo 6), (2) una molcula de ARN es
esencial en la sntesis de las puntas de los cromosomas (Captulo 8), y (3)
algn ARN Las molculas actan para catalizar reacciones clave en la sntesis
de protenas (Captulo 11).
Transcripcin

La forma en que la informacin gentica se transfiere de ADN a ARN se

muestra en
Figura 1.13. El ADN se abre y una de las hebras se utiliza como molde para la
sntesis de una cadena complementaria de ARN. El proceso de hacer una
cadena de ARN a partir de una plantilla de ADN es la transcripcin, y la
molcula de ARN que se hace es la transcripcin. La secuencia de bases en el
ARN es complementaria (en el sentido de apareamiento de Watson-Crick) a la
de la plantilla de ADN, excepto que U (que se une con A) est presente en el
ARN en lugar de T. Las reglas de apareamiento de bases entre ADN Y ARN se
resumen en la Figura 1.14. Cada hebra de ARN tiene una polaridad - un
extremo 5 'y un extremo 3' y, como en la sntesis de ADN, los nucletidos se
aaden solamente al extremo 3 'de una hebra de ARN en crecimiento. Por lo
tanto, el extremo 5 'del transcrito de ARN se sintetiza en primer lugar, y la
transcripcin contina a lo largo de la cadena de ADN molde en la direccin 3'
a 5 '. Cada gen incluye secuencias de nucletidos que inician y terminan la
transcripcin. El transcrito de ARN hecho de cualquier gen comienza en el sitio
de iniciacin en la cadena molde, que se localiza "aguas arriba" de la regin
codificadora de aminocidos, y termina en el sitio de terminacin, que est
situado "aguas abajo" de la codificacin de aminocidos regin. Para cualquier
gen, la longitud de la transcripcin de ARN es mucho menor que la longitud del
ADN en el cromosoma. Por ejemplo, la transcripcin del gen PAH para la
fenilalanina hidroxilasa tiene aproximadamente 90.000 nucletidos de longitud,
pero el ADN del cromosoma 12 es de aproximadamente 130.000.000 de pares
de nucletidos. En este caso, la longitud de la transcripcin de HAP es menos
del 0,1 por ciento de la longitud del ADN en el cromosoma. Un gen diferente en
el cromosoma 12 sera transcrito de una regin diferente de la molcula de
ADN en el cromosoma 12, y tal vez de la hebra opuesta, pero la regin
transcrita sera de nuevo pequea en comparacin con la longitud total del
ADN en el cromosoma.

Traduccin
La sntesis de un polipptido bajo la direccin de una molcula de ARNm se
conoce como traduccin. Aunque la secuencia de bases en el ARNm codifica la
secuencia de aminocidos en un polipptido, las molculas que realmente
hacen la "traduccin" son las molculas de ARNt. La molcula de mRNA se
traduce en grupos no superpuestos de tres bases llamadas codones. Para cada
codn en el ARNm que especifica un aminocido, hay una molcula de ARNt
que contiene un grupo complementario de tres bases adyacentes que pueden
emparejarse con aquellas en ese codn. El aminocido correcto se une al otro
extremo del ARNt, y cuando el ARNt entra en lnea, el aminocido al que est
unido se convierte en la adicin ms reciente al extremo en crecimiento de la
cadena polipeptdica.

El papel del ARNt en la traduccin se ilustra en la figura 1.15 y se puede

describir como sigue:

El ARNm es codn de lectura por codn. Cada codn que especifica un

aminocido coincide con un grupo complementario de tres bases adyacentes
en una sola molcula de ARNt. Un extremo del ARNt se une al aminocido
correcto, por lo que el aminocido correcto se pone en lnea. Las molculas de
ARNt utilizadas en la traduccin no se alinean a lo largo del mRNA
simultneamente, como se muestra en la Figura 1.15. El proceso de traduccin
tiene lugar en un ribosoma, que se combina con un nico mRNA y se mueve a
lo largo de l de un extremo a otro en pasos, tres nucletidos a la vez (codn
por codn). A medida que cada nuevo codn entra en su lugar, el siguiente
ARNt se une con el ribosoma. A continuacin, el extremo de crecimiento de la
cadena polipeptdica se une al aminocido del ARNt. De esta manera, cada
ARNt a su vez sirve temporalmente para mantener la cadena polipeptdica a
medida que se est sintetizando. A medida que la cadena polipeptdica se
transfiere de cada ARNt al siguiente en lnea, el ARNt que contena
previamente el polipptido se libera del ribosoma. La cadena polipeptdica
alarga un aminocido en cada etapa hasta que se encuentre cualquiera de los
tres codones particulares que especifican "stop". En este punto, se termina la
sntesis de la cadena de aminocidos y se libera la cadena polipeptdica del
ribosoma. (Esta breve descripcin de las glosas de traduccin sobre muchos de
los detalles que se presentan en el Captulo 11.)

El Cdigo Gentico
La Figura 1.15 indica que el codn AUG de mRNA especifica metionina (Met) en
la cadena polipeptdica, UCC especifica Ser (serina), ACU especifica Thr
(treonina), y as sucesivamente. La tabla de decodificacin completa se
denomina cdigo gentico, y se muestra en la Tabla 1.1. Para cualquier codn,
la columna de la izquierda corresponde al primer nucletido en el codn
(lectura desde el extremo 5 '), la fila a travs de la parte superior corresponde
al segundo nucletido y la columna de la derecha corresponde al tercer
nucletido. El codn completo se da en el cuerpo de la tabla, junto con el
aminocido (o "stop" de traduccin) que especifica el codn. Cada aminocido
se designa por su nombre completo y por una abreviatura de tres letras, as
como una abreviatura de una sola letra. Ambos tipos de abreviaturas se
utilizan en gentica molecular. El cdigo de la Tabla 1.1 es el cdigo gentico
"estndar" utilizado en la traduccin en las clulas de casi todos los
organismos. En el captulo 11 se examinan las caractersticas generales del
cdigo gentico estndar y las diferencias menores encontradas en los cdigos
genticos de ciertos organismos y organelos celulares. En este punto, estamos
interesados principalmente en la comprensin de cmo el cdigo gentico se
utiliza para traducir los codones en mRNA en los aminocidos en una cadena
polipeptdica.

Adems de los 61 codones que codifican slo para los aminocidos, hay cuatro
codones que tienen funciones especializadas:

El codn AUG, que especifica Met (metionina), es tambin el codn "inicio"

para la sntesis de polipptidos. El posicionamiento de un tRNAMet unido a AUG
es uno de los primeros pasos en la iniciacin de la sntesis de polipptidos, de
modo que todas las cadenas polipeptdicas comienzan con Met. En muchos
organismos, el tRNAMet usado para la iniciacin de la traduccin es el mismo
tRNAMet usado para especificar la metionina en las posiciones internas en una
cadena polipeptdica.

Los codones UAA, UAG y UGA son cada uno un "stop" que especifica la
terminacin de la traduccin y da como resultado la liberacin de la cadena
polipptida completada desde el ribosoma. Estos codones no tienen molculas
de ARNt que los reconocen, sino que son reconocidos por factores proteicos
que terminan la traduccin.

La forma en que se utiliza la tabla de cdigos genticos para inferir la

secuencia de aminocidos de una cadena polipeptdica puede ilustrarse
utilizando de nuevo PAH, en particular la secuencia de ADN que codifica los
aminocidos 1 a 7. La secuencia de ADN es

5'-ATGTCCACTGCGGTCCTGGAA-3'
3'-TACAGGTGACGCCAGGACCTT-5'

Esta regin se transcribe en ARN en una direccin de izquierda a derecha, y

debido a que el ARN crece por la adicin de nucletidos sucesivos al extremo 3
'(Figura 1.13), es la cadena inferior que se transcribe. La secuencia de
nucletidos del ARN es la de la cadena superior del ADN, excepto que U
reemplaza a T, por lo que el ARNm para los aminocidos 1 a 7 es

5'-AUGUCCACUGCGGUCCUGGAA-3 '
Los codones se leen de izquierda a derecha de acuerdo con el cdigo gentico
mostrado en la Tabla 1.1. Codon cdigos AUG para Met (metionina), cdigos
UCC para Ser (serina), y as sucesivamente. En conjunto, la secuencia de
aminocidos de esta regin del polipptido es:

O, en trminos de las abreviaturas de una sola letra,

1.6 Mutacin

El trmino mutacin se refiere a cualquier cambio heredable en un gen (o, ms

generalmente, en el material gentico) o al proceso por el cual ocurre tal
cambio. Un tipo de mutacin resulta en un cambio en la secuencia de bases en
el ADN. El cambio puede ser simple, tal como la sustitucin de un par de bases
en una molcula dplex por un par diferente de bases. Por ejemplo, un par C- G
en una molcula dplex puede mutar a T - A, A --- T o G - C. El cambio en la
secuencia de bases tambin puede ser ms complejo, tal como la delecin o
adicin de pares de bases. Estos y otros tipos de mutaciones se consideran en
el Captulo 7. Los genetistas tambin usan el trmino mutante, que se refiere al
resultado de una mutacin. Una mutacin produce un mutante, que a su vez
produce un ARNm mutante, una protena mutante y finalmente un organismo
mutante que exhibe los efectos de la mutacin, por ejemplo, un error innato
del metabolismo.
Se ha estudiado el ADN de pacientes de todo el mundo que tienen
fenilcetonuria para determinar qu tipos de mutaciones son responsables del
error innato. Hay una gran variedad de tipos mutantes. Ms de 400 mutaciones
diferentes se han descrito en el gen para la HAP. En algunos casos parte del
gen falta, por lo que la informacin gentica para hacer una enzima HAP
completa est ausente. En otros casos, el defecto gentico es ms sutil, pero el
resultado es todava la falta de produccin de una protena PAH o la produccin
de una protena PAH que es inactiva. En la mutacin mostrada en la Figura
1.17, la sustitucin de un par de bases G \ alpha C para el par de bases A \ beta
normal en la primera posicin de la secuencia codificante cambia el codn
normal AUG (Met) usado para el inicio de la traduccin en el codn GUG, que
normalmente especifica valina (Val) y no puede utilizarse como codn de
"inicio". El resultado es que la traduccin del ARNm de PAH no puede ocurrir, y
por lo tanto no se hace polipptido PAH. Este mutante se denomina M1V
porque el codn para M (metionina) en la posicin de aminocido 1 en el
polipptido PAH se ha cambiado a un codn para V (valina). Aunque el mutante
M1V es bastante raro en todo el mundo, es comn en algunas localidades,
como la provincia de Qubec en Canad.
Un mutante de PAH que es bastante comn se denomina R408W, lo que
significa que el codn 408 en la cadena de polipptido de PAH se ha cambiado
de una codificacin para arginina (R) a una que codifica para triptfano (W).
Esta mutacin es una de las cuatro ms comunes entre los europeos
caucsicos con PKU. La base molecular del mutante se muestra en la Figura
1.18. En este caso, el primer par de bases en el codn 408 se cambia de un par
de bases C---G en un par de bases T---A. El resultado es que el ARNm de PAH
tiene un codn mutante en la posicin 408; Especficamente, tiene UGG en
lugar de CGG. La traduccin ocurre en este mutante porque todo lo dems
sobre el ARNm es normal, pero el resultado es que la PAH mutante lleva un
triptfano (Trp) en lugar de una arginina (Arg) en la posicin 408 en la cadena
polipeptdica. La consecuencia del cambio aparentemente menor de un
aminocido es muy drstica. Aunque el polipptido R408W est completo, la
enzima tiene menos del 3 por ciento de la actividad de la enzima normal.
Plegado y Estabilidad de las Protenas
Se han identificado ms de 400 mutaciones diferentes en el gen PAH en
pacientes con PKU en todo el mundo. Muchas de las mutaciones afectan al
nivel de expresin del gen o procesamiento del transcrito de ARN, y algunas
mutaciones son deleciones en las que falta parte del gen. Sin embargo, ms de
240 de las mutaciones son simples reemplazos de aminocidos resultantes de
las sustituciones de un solo nucletido en el ADN. Sorprendentemente, slo
una minora de los reemplazos de aminocidos resulta en una cantidad normal
de protena PAH con una actividad enzimtica reducida. Como resultado de la
mayora de las mutaciones, la cantidad de HAP se reduce, a veces
drsticamente, y en algunas otras mutaciones la actividad enzimtica de la
protena PAH que permanece es prcticamente normal. Sin embargo, en todos
estos casos el nivel de expresin del gen y la cantidad de ARNm estn dentro
del intervalo normal.

La razn por la que muchos reemplazos de aminocidos reducen la cantidad de

protena es que causan problemas en el plegamiento de protenas, o en la
unin de las subunidades de protenas, o en la estabilidad de la protena
plegada. El plegamiento de protenas es el proceso complejo por el cual las
cadenas polipeptdicas alcanzan una estructura tridimensional estable a travs
de interacciones qumicas de corto alcance entre aminocidos cercanos e
interacciones de largo alcance entre aminocidos en diferentes partes de la
molcula. El plegamiento normalmente ocurre cuando el polipptido se est
sintetizando en el ribosoma, y el proceso es facilitado por una clase de
protenas conocidas como chaperones. Durante el proceso de plegado, la
cadena polipeptdica se tuerce y se dobla hasta conseguir un estado energtico
mnimo que maximiza la estabilidad de la estructura resultante, que se
denomina conformacin nativa. Por ejemplo, un aspecto del plegado de la
protena es que los aminocidos hidrfobos, que tienen baja afinidad por las
molculas de agua, tienden a moverse uno hacia el otro y formar un centro, o
ncleo, relativamente hidrfobo, en la conformacin nativa. Para un polipptido
de longitud realista, hay tantas interacciones de corto alcance y de largo
alcance, y tantas posibles conformaciones plegadas, que incluso las
computadoras ms rpidas no pueden calcular y comparar todos sus niveles de
energa. La simulacin por ordenador de plegamiento de protenas ha dado
algunas ideas, pero la prediccin fiable de plegamiento de protenas sigue
siendo un reto importante.
Las vas hipotticas de plegado de protenas en el caso de HAP se ilustran en
Figura 1.19. La va normal se muestra en la parte A, incluyendo algunos de los
De corta duracin) en el proceso de plegado. La conformacin nativa de un
nico polipptido PAH constituye el monmero PAH. Como muchos otros
polipptidos, el monmero de PAH contiene regiones cortas, denominadas
dominios de oligomerizacin (oligo significa "un nmero pequeo"), a travs de
las cuales los polipptidos de PAH se someten a unin estable entre s. En el
caso de HAP, la forma activa de la enzima PAH es un tetrmero, que consiste
en cuatro cadenas polipeptdicas idnticas unidas entre s por interacciones
entre los dominios de tetramerizacin. Obsrvese que los procesos de plegado
y tetramerizacin son reversibles, de modo que cualquier sustitucin de
aminocidos que disminuya la estabilidad del tetrmero o cualquiera de los
intermedios har que ms polipptidos de HAP se plieguen de acuerdo con la
va B.
La va B en la figura es una trayectoria de plegado errneo en la que los
monmeros plegados son propensos a experimentar una agregacin
irreversible entre s. Estos agregados estn dirigidos a la desintegracin
enzimtica en sus aminocidos constituyentes, primero unindose
covalentemente con un polipptido de 76 aminocidos denominado ubiquitina,
que est unido mediante la actividad de varias protenas, incluyendo una
enzima de conjugacin de ubiquitina. La protena etiquetada se degrada a
continuacin por el proteasoma, que es un complejo multiproteico grande que
contiene protenas con unin a ubiquitina, proteasa y otras actividades. La ruta
ubiquitina / proteasoma es necesaria para la degradacin de protenas
especficas durante el ciclo celular y su desarrollo y Tambin se utiliza para
degradar ciertas protenas que son intrnsecamente inestables o que se
desdoblan en respuesta al estrs. En el caso de HAP, muchos reemplazos de
aminocidos disminuyen la estabilidad de la protena hasta tal punto que la
protena se enruta a travs de la va de plegamiento errneo en la Figura 1.19B
y se enfoca en la degradacin. Un reemplazo de aminocidos desestabilizante
puede estar localizado en prcticamente cualquier posicin a lo largo de la
cadena polipeptdica.

1.7 Genes y Medio Ambiente

Los errores innatos del metabolismo ilustran el principio general de que los
genes codifican protenas y que los genes mutantes codifican protenas
mutantes. En casos como la PKU, las protenas mutantes causan un cambio
drstico en el metabolismo que produce un defecto gentico severo. Pero la
biologa no es necesariamente destino. Los organismos tambin son afectados
por el medio ambiente. La PKU sirve como un ejemplo de este principio, porque
los pacientes que se adhieren a una dieta restringida en la cantidad de
fenilalanina desarrollan capacidades mentales dentro del rango normal. Lo que
es cierto en este ejemplo es cierto en general. La mayora de los rasgos estn
determinados por la interaccin de los genes y el medio ambiente.
Tambin es cierto que la mayora de los rasgos se ven afectados por mltiples
genes. Nadie sabe cuntos genes estn implicados en el desarrollo y la
maduracin del cerebro y del sistema nervioso, pero el nmero debe estar en
los millares. Este nmero es adems de los genes que se requieren en todas
las clulas para llevar a cabo el metabolismo y otras funciones bsicas de la
vida. Es fcil perder de vista la multiplicidad de genes al considerar ejemplos
extremos, como la PKU, en la que una sola mutacin puede tener un efecto tan
drstico en el desarrollo mental. La situacin es la misma que con cualquier
mquina compleja. Un avin puede funcionar si miles de piezas estn
trabajando juntas en armona, pero slo una parte defectuosa, si esa parte
afecta a un sistema vital, puede reducirlo. Del mismo modo, el desarrollo y el
funcionamiento de cada rasgo requieren un gran nmero de genes que
trabajan en armona, pero en algunos casos un solo gen mutante puede tener
consecuencias catastrficas.

En otras palabras, la relacin entre un gen y un rasgo no es necesariamente

simple. La bioqumica de los organismos es una compleja red de ramificacin
en la que diferentes enzimas pueden compartir sustratos, producir los mismos
productos o responder a los mismos elementos reguladores. El resultado es
que la mayora de los rasgos visibles de los organismos son el resultado
absoluto de muchos genes que actan juntos y en combinacin con factores
ambientales. PKU ofrece ejemplos de cada uno de los tres principios que rigen
estas interacciones:
1. Un gen puede afectar ms de un rasgo. Los nios con formas extremas de
PKU suelen tener pelo rubio y pigmento corporal reducido. Esto se debe a que
la ausencia de HAP es un bloqueo metablico que evita la conversin de
fenilalanina en tirosina, que es el precursor del pigmento melanina. La relacin
entre el retraso mental severo y la pigmentacin disminuida en la PKU slo
tiene sentido si se conocen las conexiones metablicas entre la fenilalanina, la
tirosina y la melanina. Si estas conexiones no se conocieran, los rasgos
pareceran completamente no relacionados. PKU no es inusual en este sentido.
Muchos genes mutantes afectan mltiples rasgos a travs de sus efectos
secundarios o indirectos. Los diversos efectos, a veces aparentemente no
relacionados, de un gen mutante se llaman efectos pleiotrpicos, y el
fenmeno en s se conoce como pleiotropa. La figura 1.20 muestra un gato con
piel blanca y ojos azules, un patrn de pigmentacin que es a menudo
(aproximadamente el 40 por ciento del tiempo) asociado con la sordera. Por lo
tanto, la sordera puede ser considerada como un efecto pleiotrpico de la capa
blanca y el color de los ojos azules. La base de desarrollo de esta pleiotropa es
desconocida.
2. Cualquier rasgo puede verse afectado por ms de un gen. Hemos discutido
este principio antes en relacin con el gran nmero de genes que son
necesarios para el normal desarrollo y funcionamiento del cerebro y el sistema
nervioso. Entre stos se encuentran los genes que afectan la funcin de la
barrera hematoenceflica, que consiste en clulas gliales especializadas
envueltas alrededor de paredes capilares apretadas en el cerebro, formando un
impedimento al paso de la mayora de las molculas solubles en agua de la
sangre al cerebro. Por lo tanto, la barrera hematoenceflica afecta el grado en
que el exceso de fenilalanina libre en la sangre puede entrar en el cerebro
mismo. Debido a que la efectividad de la barrera hematoenceflica difiere
entre los individuos, los pacientes con PKU con niveles muy similares de
fenilalanina en sangre pueden tener niveles dramticamente diferentes de
desarrollo cognitivo. Esto tambin explica en parte por qu la adhesin a una
dieta controlada de fenilalanina es de importancia crtica en los nios, pero
menos en los adultos; La barrera hematoenceflica est menos desarrollada en
nios y por lo tanto es menos efectiva para bloquear el exceso de fenilalanina.

Varios genes afectan an ms simples rasgos metablicos. La descomposicin

y la excrecin de fenilalanina sirven como un ejemplo conveniente. La va
metablica se ilustra en la Figura 1.10. Se indican cuatro enzimas en la va,
pero an ms enzimas estn involucradas en la etapa denominada "avera
adicional". Debido a que las diferencias en la actividad de cualquiera de estas
enzimas pueden afectar la velocidad a la cual la fenilalanina puede ser
descomprimida y excretada, todas las enzimas Las enzimas en la va son
importantes para determinar la cantidad de fenilalanina en exceso en la sangre
de pacientes con PKU.

3. La mayora de los rasgos se ven afectados tanto por factores ambientales

como por genes. Aqu volvemos a la dieta baja en fenilalanina. Los nios con
PKU no estn condenados a una deficiencia mental grave. Sus capacidades
pueden ser llevadas al rango normal por el tratamiento diettico. PKU sirve
como un ejemplo de lo que motiva a los genetistas para tratar de descubrir las
bases moleculares de la enfermedad hereditaria. La esperanza es que conocer
la base metablica de la enfermedad finalmente har posible el desarrollo de
mtodos para la intervencin clnica a travs de la dieta, medicamentos u otros
tratamientos que mejoren la gravedad de la enfermedad.
1.8 Evolucin: De los genes a los genomas, de las protenas a los
proteomas
El camino para la descomposicin y la excrecin de fenilalanina no es de
ninguna manera nico para los seres humanos. Una de las generalizaciones
notables que han surgido de la gentica molecular es que los organismos que
son muy distintos -por ejemplo, plantas y animales- comparten muchas
caractersticas en su gentica y bioqumica. Estas similitudes indican una
"unidad de vida" fundamental:

Todas las criaturas de la Tierra comparten muchas caractersticas del aparato

gentico, incluyendo la informacin gentica codificada en la secuencia de
bases en el ADN, la transcripcin en el ARN y la traduccin en la protena de los
ribosomas con el uso de ARN de transferencia. Todas las criaturas tambin
comparten ciertas caractersticas en su bioqumica, incluyendo muchas
enzimas y otras protenas que son similares en la secuencia de aminocidos, la
estructura tridimensional y la funcin.
La totalidad del ADN en una sola clula se llama el genoma del organismo. En
los organismos sexuales, el genoma suele considerarse como el ADN presente
en una clula reproductiva. El genoma humano, que est contenido en los
cromosomas de un espermatozoide u vulo, incluye aproximadamente 3 mil
millones de pares de nucletidos de ADN. El conjunto completo de protenas
codificadas en el genoma se conoce como el proteoma. El estudio de los
genomas constituye la genmica; El estudio de los proteomas constituye la
protemica. La unidad fundamental de la vida se puede ver en la similitud de
las protenas en los proteomas de diversos tipos de organismos. Por ejemplo, el
proteoma de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster incluye 13601
protenas; Estos pueden agruparse en 8065 familias diferentes de protenas
que son similares en la secuencia de aminocidos. Para la comparacin, el
proteoma del nematodo gusano Caenorhabditis elegans contiene 18.424
protenas que se pueden agrupar en 9453 familias. Estos dos proteomas
comparten unas 5000 protenas que son suficientemente similares para ser
consideradas como teniendo una funcin comn. Entre las familias de
protenas que son comunes a moscas y gusanos, cerca de 3.000 tambin se
encuentran en el proteoma de la levadura Saccharomyces cerevisiae. Basado
en estos datos de estos tres genomas complejos completamente secuenciados,
parece probable que todos los organismos cuyas clulas tengan un ncleo y
cromosomas se convertirn en compartir varios miles de familias de protenas.
Adems, alrededor de un millar de estas familias de protenas se comparten
con organismos tan distantes como las bacterias.

La Unidad Molecular de la Vida

Por qu los organismos comparten un conjunto comn de genes y protenas

similares? Porque todas las criaturas comparten un origen comn. El proceso
de evolucin tiene lugar cuando una poblacin de organismos descendientes
de un antepasado comn cambia gradualmente en composicin gentica a
travs del tiempo. Desde una perspectiva evolutiva, la unidad de los procesos
moleculares fundamentales se deriva de la herencia de un antepasado comn
distante en el que los mecanismos moleculares ya estaban en su lugar. No slo
la unidad de la vida sino tambin muchas otras caractersticas de los
organismos vivos se hacen comprensibles desde una perspectiva evolutiva. Por
ejemplo, la interposicin de un ARN intermedio en el flujo bsico de
informacin gentica de ADN a ARN a protena tiene sentido si las formas ms
tempranas de vida usaban ARN tanto para informacin gentica como para
catlisis enzimtica. La importancia de la perspectiva evolutiva en aspectos
innecesarios de la biologa que parecen intiles o innecesariamente complejos
se resume en un aforismo famoso del telogo biolgico evolucionista
Theodosius Dobzhansky: "Nada en biologa tiene sentido excepto a la luz de la
evolucin".
Una indicacin de la ascendencia comn entre las criaturas de la Tierra se
ilustra en la Figura 1.21. El rbol de las relaciones se dedujo de similitudes en
la secuencia de nucletidos en una molcula de ARN que se encuentra en la
pequea subunidad del ribosoma. Se distinguen tres reinos principales de
organismos:
1. El reino Bacterias Este grupo incluye la mayora de las bacterias y
cianobacterias (antes llamadas algas azules-verdes). Las clulas de estos
organismos carecen de un ncleo limitado por membrana y mitocondrias, estn
rodeadas por una pared celular y se dividen por fisin binaria.

2. El reino Archaea Este grupo fue descubierto inicialmente entre los

microorganismos que producen gas metano o que viven en ambientes
extremos, tales como aguas termales O altas concentraciones de sal. Tambin
se distribuyen ampliamente en entornos ms normales. Al igual que las
bacterias, las clulas de las arqueas carecen de membranas internas. El
anlisis de secuencias de ADN indica que la maquinaria para la replicacin y
transcripcin del ADN en arqueas se asemeja a la de los eucarianos, mientras
que su metabolismo se asemeja mucho a la de las bacterias. Alrededor de la
mitad de los genes encontrados en el reino Archaea son nicos en este grupo.
3. El reino Eukarya Este grupo incluye todos los organismos cuyas clulas
contienen una elaborada red de membranas internas, un ncleo con
membrana y mitocondrias. Su ADN est organizado en cromosomas
verdaderos, y la divisin celular tiene lugar por medio de la mitosis (discutido
en el captulo 4). Los eucariotas incluyen plantas y animales, as como hongos
y muchos organismos unicelulares, tales como amebas y protozoos ciliados.
Los miembros de los reinos Bacteria y Archaea se agrupan a menudo en un
ensamblaje ms grande llamado prokaryotes, que literalmente significa "antes
[la evolucin del] ncleo". Esta terminologa es conveniente para designar
prokaryotes como grupo en contraste con eucariotas, que literalmente Significa
"buen ncleo [bien formado]".
Seleccin Natural y Diversidad
Aunque la figura 1.21 ilustra la unidad de vida, tambin ilustra la diversidad de
la vida. Las ranas son diferentes de los hongos, y los escarabajos son
diferentes de las bacterias. Como ser humano, es serio considerar que los
organismos multicelulares complejos son llegadas relativamente recientes a la
escena evolutiva de la vida en la Tierra. Los animales llegaron ms tarde y los
primates muy tarde. Qu hay de la evolucin humana? En la escala de tiempo
de la historia de la Tierra, la evolucin humana es una cuestin de unos pocos
millones de aos, apenas un chasquido de los dedos.
Si la ancestralidad comn es la fuente de la unidad de la vida, cul es la
fuente de su diversidad? Debido a que las diferencias entre las especies se
heredan, la fuente original de las diferencias debe ser la mutacin. Sin
embargo, las mutaciones por s solas no son suficientes para explicar por qu
los organismos estn adaptados a vivir en sus ambientes -porque los
mamferos del ocano tienen adaptaciones especiales para nadar y bucear- por
qu los mamferos desiertos tienen adaptaciones especiales que les permiten
sobrevivir con cantidades mnimas de agua. Las mutaciones son
acontecimientos fortuitos no dirigidos hacia ninguna meta adaptativa
particular, como la piel ms larga entre los mamferos que viven en el rtico. El
proceso que explica la adaptacin fue descrito por Charles Darwin en su libro
sobre el origen de las especies de 1859. Darwin propuso que la adaptacin es
el resultado de la seleccin natural: Los organismos individuales que llevan
mutaciones particulares o combinaciones de mutaciones que les permiten
sobrevivir o reproducirse ms eficazmente en el ambiente predominante, dejan
ms descendencia que otros organismos y contribuyen de manera
desproporcionada a sus generaciones favorables a generaciones futuras. Si
este proceso se repite a lo largo de muchas generaciones, toda la especie se
transforma genticamente, es decir, evoluciona, porque una proporcin cada
vez mayor de la poblacin hereda las mutaciones favorables. Mutacin,
seleccin natural, y otras caractersticas del campo de la gentica de la
poblacin (tambin llamada gentica evolutiva) se discuten en el captulo 17.

Resumen del captulo

Los organismos de la misma especie tienen algunos rasgos (caractersticas) en
comn, pero pueden diferir entre s en innumerables otros rasgos. Muchas de
las diferencias entre los organismos resultan de las diferencias genticas, los
efectos del medio ambiente, o ambos. La gentica es el estudio de rasgos
hereditarios, incluyendo aquellos influenciados en parte por el medio ambiente.
Los elementos de la herencia consisten en genes, que se transmiten de padres
a hijos en reproduccin. Aunque la clasificacin de genes en generaciones
sucesivas se expres por primera vez numricamente por Mendel, la base
qumica de los genes fue descubierto por Miescher en forma de un cido dbil,
cido desoxirribonucleico (ADN). Sin embargo, la prueba experimental de que
el ADN es el material gentico no lleg hasta mediados del siglo XX.
La primera evidencia convincente del papel del ADN en la herencia vino de los
experimentos de Avery, MacLeod y McCarty, quienes mostraron que las
caractersticas genticas en las bacterias podran ser alteradas de un tipo a
otro por el tratamiento con ADN purificado. En estudios de Streptococcus
pneumoniae, transformaron las clulas mutantes incapaces de causar
neumona en las clulas que podran hacerlo tratndolas con ADN puro de
formas que causan la enfermedad. Una segunda lnea importante de evidencia
fue el experimento de Hershey-Chase. Hershey y Chase demostraron que el
virus bacteriano T2 inyecta principalmente ADN en la bacteria husped
(Escherichia coli) y que una proporcin mucho mayor de ADN parental, en
comparacin con la protena parental, se encuentra entre el fago de la
progenie.
La estructura tridimensional del ADN, propuesta en 1953 por Watson y Crick,
dio muchas pistas sobre la forma en que el ADN funciona como el material
gentico. Una Molcula de ADN consiste en dos cadenas largas de subunidades
nucleotdicas retorcidas alrededor de s para formar una hlice diestra. Cada
subunidad de nucletidos contiene cualquiera de las cuatro bases: A (adenina),
T (timina), G (guanina), o C (citosina). Las bases se emparejan en las dos
cadenas de una molcula de ADN; Donde una hebra tiene una A, la hebra
asociada tiene una T, y dondequiera que una hebra tenga una G, la hebra
asociada tiene una C. La emparejamiento de la base significa que las dos
cadenas emparejadas en una molcula dplex de ADN tienen secuencias de
bases complementarias a lo largo de sus longitudes. La estructura de la
molcula de ADN sugiri que la informacin gentica podra ser codificada en
el ADN en la secuencia de bases. Las mutaciones-cambios en el material
gentico- resultan de cambios en la secuencia de bases, tales como la
sustitucin de un nucletido por otro o la insercin o delecin de uno o ms
nucletidos. La estructura del ADN tambin sugiri un modo de replicacin: Las
dos cadenas de la molcula de ADN parental se separan, y cada hebra
individual sirve como molde para la sntesis de una nueva hebra
complementaria.
La mayora de los genes codifican protenas. Ms precisamente, la mayora de
los genes especifican la secuencia de aminocidos en una cadena
polipeptdica. La transferencia de informacin gentica del ADN a la protena es
un proceso de varios pasos que incluye varios tipos de ARN (cido
ribonucleico). Estructuralmente, una hebra de ARN es similar a una hebra de
ADN excepto que la "columna vertebral" contiene un azcar diferente (ribosa
en lugar de desoxirribosa) y el ARN contiene la base uracilo (U) en lugar de
timina (T). Adems, el ARN est usualmente presente en las clulas en forma
de hebras solas no dopadas. El paso inicial en la expresin gnica es la
transcripcin, en la que se sintetiza una molcula de ARN que es
complementaria en la secuencia de bases a la hebra de ADN que se est
transcribiendo.
En la sntesis de polipptidos, que tiene lugar sobre un ribosoma, la secuencia
de bases en el transcrito de ARN se traduce en grupos de tres bases
adyacentes (codones). Los codones son reconocidos por diferentes tipos de
ARN de transferencia (ARNt) a travs del emparejamiento de bases.
Cada tipo de ARNt est unido a un aminocido particular, y cuando una base
de ARNt se une con el codn apropiado en el ribosoma, el extremo en
crecimiento de la cadena polipeptdica se transfiere al aminocido en el ARNt.
La tabla de todos los codones y los aminocidos que especifican se denomina
cdigo gentico. Los codones especiales especifican el inicio (AUG, Met) y
"stop" (UAA, UAG y UGA) de la sntesis de polipptidos. La razn por la cual los
varios tipos de ARN son una parte ntima de la transcripcin y de la traduccin
es probablemente que las formas ms tempranas de la vida utilizaron el ARN
para la informacin gentica y la catlisis de la enzima.
Una mutacin que altera uno o ms codones en un gen puede cambiar la
secuencia de aminocidos de la cadena polipeptdica resultante sintetizada en
la clula. A menudo, la protena alterada es funcionalmente defectuosa, por lo
que un error innato de los resultados del metabolismo. Uno de los primeros
errores innatos del metabolismo estudiado fue alcaptonuria; Resulta de la
ausencia de una enzima para escindir el cido homogentisico, que se acumula
y se excreta en la orina, ponindose negro sobre la oxidacin. Fenilcetonuria
(PKU) es un error innato de metabolismo que afecta a la misma va metablica.
El defecto enzimtico en la PKU da como resultado una incapacidad para
convertir fenilalanina en tirosina. La acumulacin de fenilalanina tiene efectos
catastrficos en el desarrollo del cerebro. Los nios con la enfermedad tienen
dficits mentales severos a menos que sean tratados con una dieta especial
baja en fenilalanina.
La mayora de los rasgos visibles de organismos resultan de muchos genes que
actan juntos en combinacin con factores ambientales. La relacin entre los
genes y los rasgos es a menudo compleja porque (1) cada gen afecta
potencialmente a muchos rasgos (pleiotropa), (2) cada rasgo est
potencialmente afectado por muchos genes, y (3) muchos rasgos son
afectados significativamente por factores ambientales as como Por los genes.
Todas las criaturas vivientes estn unidas compartiendo muchas caractersticas
del aparato gentico (por ejemplo, transcripcin y traduccin) y muchos
aspectos del metabolismo. Comparten muchos genes similares en el genoma y
muchas protenas similares en el proteoma. La unidad de vida resulta de toda
vida que es de ascendencia comn y proporciona evidencia para la evolucin.
Tambin hay gran diversidad entre las criaturas vivientes. Los tres reinos
principales de los organismos son los reinos Bacteria (cuyos miembros carecen
de un ncleo con membrana), Archaea (cuyos miembros comparten rasgos con
bacterias y eucarianos pero forman un grupo distinto) y Eukarya (que incluye
todos los organismos "superiores" cuyas clulas tienen Un ncleo limitado por
membrana que contiene ADN organizado en cromosomas discretos). Miembros
de los reinos Bacterias y Archaea son llamados colectivamente prokaryotes. La
ltima fuente de diversidad entre organismos es la mutacin, pero la seleccin
natural es el proceso mediante el cual se mantienen las mutaciones que
mejoran la supervivencia y la reproduccin y se eliminan las mutaciones que
son perjudiciales. La seleccin natural, propuesta por primera vez por Darwin,
es por lo tanto el principal mecanismo por el cual los organismos se adaptan
progresivamente mejor a sus ambientes.

Captulo 2 Estructura del ADN y Manipulacin del ADN

Genomas y diferencias genticas entre individuos

Los nmeros asociados con el genoma de incluso un organismo simple puede
ser intimidante. Los genomas secuenciados de D. melanogaster y C. elegans,
ambos aproximadamente 100 millones de pares de bases de longitud, codifican
13,601 protenas y 18,424 protenas, respectivamente. El genoma humano es
considerablemente mayor Como se encuentra en una clula reproductora
humana, el genoma humano consiste en 3 Billones de pares de bases
organizados en 23 cromosomas distintos (cada cromosoma contiene una sola
molcula de ADN dplex). Un cromosoma tpico puede contener varios cientos
o varios miles de genes, dispuestos en orden lineal a lo largo de la molcula de
ADN presente en el cromosoma. Las secuencias que componen la parte
codificante de la protena de estos genes en realidad representan slo el 4 por
ciento de todo el genoma. El otro 96 por ciento de las secuencias no codifican
las protenas. Algunas secuencias no codificantes son "paja" gentica que se
separa del "trigo" que proteina cuando los genes se transcriben y el transcrito
de ARN se procesa en ARN mensajero. Otras secuencias no codificantes son
secuencias relativamente cortas que se encuentran en cientos o miles de
copias dispersas a lo largo del genoma. Todava otras secuencias no
codificantes son restos de genes llamados pseudogenes. Como era de esperar,
la identificacin de los genes codificadores de protenas entre los grandes
antecedentes de ADN no codificante en el genoma humano es un reto en s
mismo.
Los genetistas a menudo hablan de la secuencia de nucletidos del "genoma
humano" porque 99,9 por ciento de las secuencias de ADN en dos individuos
son los mismos. Este es nuestro legado evolutivo; Contiene la informacin
gentica que nos hace seres humanos. En realidad, sin embargo, hay muchos
genomas humanos diferentes. Los genetistas tienen gran inters en el 0,1 por
ciento de la secuencia de ADN humano-3 millones de pares de bases-que
difiere de un genoma a otro, ya que estas diferencias incluyen las mutaciones
que son responsables de enfermedades genticas como la fenilcetonuria y
otros errores innatos del metabolismo, As como las mutaciones que aumentan
el riesgo de enfermedades ms complejas como las enfermedades cardacas, el
cncer de mama y la diabetes.
Afortunadamente, slo una pequea proporcin de todas las diferencias en la
secuencia del ADN estn asociadas con la enfermedad. Algunos de los otros
estn asociados con las diferencias heredadas en altura, peso, color de pelo,
color de ojos, rasgos faciales y otros rasgos. La mayora de las diferencias
genticas entre las personas son completamente inofensivas. Muchos no
tienen efectos detectables en la apariencia o la salud. Tales diferencias pueden
ser estudiadas solamente a travs del examen directo del propio ADN. Estas
diferencias inofensivas son sin embargo importantes, porque sirven como
marcadores genticos.

Marcadores de ADN como puntos de referencia en los cromosomas

En gentica, un marcador gentico es cualquier diferencia en el ADN, no

importa cmo se detecte, cuyo patrn de transmisin de generacin en
generacin puede ser rastreado. Cada individuo que lleva el marcador tambin
lleva una longitud de cromosoma a cada lado de ella, por lo que marca una
regin particular del genoma. Un gen mutante, o alguna porcin de un gen
mutante, puede servir como un marcador gentico. En el enfoque "clsico" de
la gentica, es la expresin externa de un gen (o falta de expresin) que
constituye la base del anlisis gentico. Por ejemplo, una mutacin que causa
guisantes arrugados es un marcador gentico, que puede ser identificado a
travs de sus efectos sobre la forma de guisante. En el anlisis gentico
moderno, cualquier diferencia en la secuencia de ADN entre dos individuos
puede servir como un marcador gentico. Y aunque estos marcadores
genticos son a menudo inofensivos en s mismos, permiten localizar las
posiciones de los genes de la enfermedad y su ADN aislado, identificado y
estudiado.
Los marcadores genticos que se detectan mediante el anlisis directo del ADN
a menudo se denominan marcadores de ADN. Los marcadores de ADN son
importantes en gentica porque sirven como puntos de referencia en largas
molculas de ADN, como las encontradas en los cromosomas, que permiten
que las diferencias genticas entre los individuos sean rastreadas. Son como
seales a lo largo de una carretera. Usando marcadores de ADN como puntos
de referencia, el genetista puede identificar las posiciones de genes normales,
genes mutantes, rompimientos en cromosomas y otras caractersticas
importantes en el anlisis gentico (Figura 2.2).
La deteccin de marcadores de ADN requiere generalmente que el ADN
genmico (el ADN total extrado de las clulas de un organismo) se fragmente
en trozos de tamao manejable (usualmente unos pocos miles de pares de
nucletidos) que pueden manipularse en experimentos de laboratorio. En las
secciones siguientes, examinamos algunas de las principales maneras en que
se manipula el ADN para revelar las diferencias genticas entre los individuos,
independientemente de que estas diferencias encuentren o no la expresin
externa. El uso de estos mtodos ampla el alcance de la gentica, haciendo
posible realizar anlisis genticos en cualquier organismo. Esto significa que el
anlisis gentico detallado ya no se limita a los seres humanos, animales
domesticados, plantas cultivadas, y el nmero relativamente pequeo de
organismos modelo favorable para los estudios genticos. El estudio directo del
ADN elimina la necesidad de una identificacin previa de las diferencias
genticas entre individuos; Incluso elimina la necesidad de cruces controlados.
Los mtodos de anlisis molecular discutido en este captulo han transformado
la gentica:
La manipulacin del ADN es la operacin experimental bsica en la gentica
moderna.
Estos mtodos son las principales tcnicas utilizadas en prcticamente todos
los modernos laboratorios de gentica.

2.2 La Estructura Molecular del ADN

Los mtodos experimentales modernos para la manipulacin y el anlisis del
ADN surgieron de una comprensin detallada de su estructura molecular y
replicacin. Por lo tanto, para entender estos mtodos, uno necesita saber algo
sobre la estructura molecular del ADN. Vimos en el captulo 1 que el ADN es
una hlice de dos cadenas complementarias, compuestas cada una por una
cadena ordenada de nucletidos, cada una de las cuales lleva una de las bases
A (adenina), T (timina), G (guanina) o citosina (c). El emparejamiento de la
base de Watson-Crick entre A y T y entre G y C en las hebras complementarias
sostiene los hilos juntos. Las cadenas complementarias tambin contienen la
clave para la replicacin, porque cada cadena puede servir como una plantilla
para la sntesis de una nueva hebra complementaria. Ahora examinaremos de
cerca la estructura del ADN y las caractersticas clave de su replicacin.

Cadenas Polinucleotdicas
En trminos de bioqumica, una cadena de ADN es un polmero, una molcula
grande construida a partir de unidades repetitivas. Las unidades en el ADN se
componen de 2'-desoxirribosa (un azcar de cinco carbonos), cido fosfrico y
las cuatro bases que contienen nitrgeno denotadas A, T, G y C. Las
estructuras qumicas de las bases se muestran en la Figura 2.3. Obsrvese que
dos de las bases tienen una estructura de doble anillo; Estos son llamados
purines. Las otras dos bases tienen una estructura de anillo nico; Estos se
llaman pirimidinas.
* Las bases purnicas son adenina (A) y guanina (G).
Las bases pirimidnicas son timina (T) y Citosina (C).
En el ADN, cada base est ligada qumicamente a una molcula de la
desoxirribosa del azcar, formando un compuesto llamado nuclesido. Cuando
un grupo fosfato tambin est unido al azcar, el nuclesido se convierte en un
nucletido (Figura 2.4). As, un nucletido es un nuclesido ms un fosfato. En
la numeracin convencional de los tomos de carbono en el azcar de la figura
2.4, el tomo de carbono al que est unida la base es el carbono 1'. (Los
tomos del azcar reciben nmeros cebados para distinguirlos de los tomos
en las bases). La nomenclatura de los nuclesidos y derivados de nucletidos
de las bases de ADN se resume en la Tabla 2.1. La mayora de estos trminos
no son necesarios en este libro; Se incluyen porque es probable que se
encuentren en la lectura adicional.
En los cidos nucleicos, tales como ADN y ARN, los nucletidos se unen para
formar una cadena polinucleotdica, en la que el fosfato unido al carbono 5 'de
un azcar est unido al grupo hidroxilo unido al carbono 3' del siguiente azcar
en (Figura 2.5). Los enlaces qumicos por los que los componentes de azcar de
los nucletidos adyacentes estn unidos a travs de los grupos fosfato se
denominan enlaces fosfodister.
La orientacin 5'-3'-5'-3 'de estos enlaces contina a lo largo de la cadena, que
tpicamente consiste en millones de nucletidos. Obsrvese que los grupos
terminales de cada cadena polinucleotdica son un grupo 5'-fosfato (5'-P) en un
extremo y un grupo 3'-hidroxilo (3'-OH) en el otro. La asimetra de los extremos
de una hebra de ADN implica que cada hebra tiene una polaridad determinada
por cuyo extremo lleva el fosfato 5' y cuyo extremo lleva el hidroxilo 3'.
Unos pocos aos antes de que Watson y Crick propusieran su estructura
tridimensional esencialmente correcta del ADN como una doble hlice, Erwin
Chargaff desarroll una tcnica qumica para medir la cantidad de cada base
presente en el ADN. Al describir esta tcnica, dejaremos que la concentracin
molar de cualquier base est representada por el smbolo de la base entre
corchetes; Por ejemplo, [A] denota la concentracin molar de adenina. Chargaff
us su tcnica para medir el contenido [A], [T], [G] y [C] del ADN de una
variedad de fuentes. Encontr que la composicin base del ADN, definida como
el porcentaje de G + C, difiere entre las especies, pero es constante en todas
las clulas de un organismo y dentro de una especie.
Se dan datos sobre la composicin base de ADN de una variedad de
organismos en la Tabla 2.2
Chargaff tambin observ ciertas relaciones regulares entre las
concentraciones molares de las diferentes bases. Estas relaciones se llaman
ahora las reglas de Chargaff:
La cantidad de adenina es igual a la de timina: [A] = [T].
La cantidad de guanina es igual a la de la citosina: [G] = [C].
La cantidad de bases de purina es igual a la de las bases de pirimidina:
[A] + [G] = [T] + [C].
Aunque la base qumica de estas observaciones no era conocida en ese
momento, una de las caractersticas atractivas de la estructura de Watson-
Crick de hebras complementarias apareadas era que explicaba las reglas de
Chargaff. Debido a que A est siempre emparejado con T en el ADN de doble
cadena, debe seguirse que [A] = [T]. Similarmente, como G est emparejado
con C, sabemos que [G]=[C]. La tercera regla sigue por la adicin de los otros
dos: [A] + [G] = [T] + [C]. En la siguiente seccin, examinaremos las bases
moleculares del emparejamiento de bases con ms detalle.

Emparejamiento de la base y apilamiento de la base

En la estructura tridimensional de la molcula de ADN propuesta por Watson y
Crick en 1953, la molcula consiste en dos cadenas polinucleotdicas retorcidas
entre s para formar una hlice bicatenaria en la que adenina y timina y
guanina y citosina se emparejan en (Figura 2.6). En la estructura estndar, que
se llama la forma B de ADN, cada cadena hace una vuelta completa cada 34 .
La hlice es diestra, lo que significa que a medida que uno mira hacia abajo el
can, cada cadena sigue un camino en el sentido de las agujas del reloj a
medida que avanza. Las bases estn espaciadas a 3,4 , por lo que hay diez
bases por vuelta helicoidal en cada hebra y diez pares de bases por vuelta de
la doble hlice.
Los hilos presentan apareamiento de bases, en el que cada base est
emparejada a una base complementaria en la otra hebra por enlaces de
hidrgeno. (Un enlace de hidrgeno es un enlace dbil en el que dos tomos
participantes comparten un tomo de hidrgeno entre ellos). Los enlaces de
hidrgeno proporcionan un tipo de fuerza que sostiene los hilos juntos. En el
emparejamiento de la base de Watson-Crick, la adenina (A) se une con pares
de timina (T) y guanina (G) con citosina (C). Los enlaces de hidrgeno que se
forman en el par de bases adenina-timina y en el par de citosina guanina se
ilustran en la Figura 2.7. Obsrvese que un par de A \ alpha T (Figura 2.7A y B)
tiene dos enlaces de hidrgeno y que un par de G \ alpha C (Figura 2.7C y D)
tiene tres enlaces de hidrgeno. Esto significa que el enlace de hidrgeno entre
G y C es ms fuerte en el sentido de que requiere ms energa para romperse;
Por ejemplo, la cantidad de calor requerida para separar los hilos emparejados
en un dplex de ADN aumenta con el porcentaje de G \ Debido a que nada
restringe la secuencia de bases en una sola hebra, cualquier secuencia podra
estar presente a lo largo de una hebra. Esto explica la observacin de Chargaff
de que el ADN de diferentes organismos puede diferir en la composicin de la
base. Sin embargo, debido a que las cadenas en el ADN dplex son
complementarias, las reglas de Chargaff de [A]- [T] y [G] - [C] son verdaderos
cualquiera que sea la composicin de la base.
En la forma B del ADN, las bases pareadas son planas, paralelas entre s y
perpendiculares al eje largo de la doble hlice. Esta caracterstica del ADN
bicatenario se conoce como apilamiento de bases. Las caras superior e inferior
de cada base nitrogenada son relativamente planas y no polares (sin carga). Se
dice que estas superficies son hidrfobas porque se unen mal a las molculas
de agua, que son muy polares. (La polaridad se refiere a la distribucin
asimtrica de carga a travs de la molcula de agua en forma de V, el oxgeno
en la base de la V tiende a ser bastante negativo, mientras que los hidrgenos
en las puntas son bastante positivos). Debido a su repulsin de molculas de
agua, las bases nitrogenadas emparejadas tienden a apilarse unas encima de
otras de tal manera que excluyen la cantidad mxima de agua del interior de la
doble hlice. Por lo tanto, una molcula de ADN de doble cadena tiene un
ncleo hidrofbico compuesto de bases apiladas, y es la energa de
apilamiento de bases que proporciona al ADN bicatenario gran parte de su
estabilidad qumica.
Cuando se habla de una molcula de ADN, los bilogos moleculares
frecuentemente se refieren a las hebras individuales como hebras sencillas o
como ADN monocatenario; Se refieren a la doble hlice como ADN bicatenario
o como molcula dplex. Las dos ranuras que giran en espiral a lo largo de la
doble hlice no son simtricas; Una ranura, llamada la ranura principal, es ms
grande que la otra, que se llama el surco menor. Las protenas que interactan
con el ADN de doble hebra a menudo tienen regiones que hacen contacto con
los pares de bases encajando en la ranura principal, en la ranura menor o en
ambas ranuras (Figura 2.6B).

Filamentos Antiparalelos
Cada columna vertebral en una doble hlice consiste en azcares de
desoxirribosa que alternan con grupos fosfato que unen el tomo de carbono 3
'de un azcar con el carbono 5' del siguiente en lnea (Figura 2.5). Las dos
cadenas polinucleotdicas de la doble hlice tienen polaridad opuesta en el
sentido de que el extremo 5 'de una hebra est emparejado con el extremo 3'
de la otra hebra. Se dice que los hilos con tal disposicin son antiparalelos. Una
implicacin de las cadenas antiparalelas en el ADN dplex es que en cada par
de bases, una base est unida a un azcar que se encuentra por encima del
plano de emparejamiento, y la otra base est unida a un azcar que se
encuentra por debajo del plano de emparejamiento. Otra implicacin es que
cada extremo de la doble hlice posee un grupo 5'-P (en una hebra) y un grupo
3'-OH (en la otra hebra), como se muestra en la Figura 2.8.
El diagrama del dplex de ADN de la Figura 2.6 es esttico y, por tanto,
engaoso. El ADN es una molcula dinmica, constantemente en movimiento.
En algunas regiones, los hilos se pueden separar brevemente y despus
reunirse nuevamente en la misma conformacin o en otra diferente. La hlice
doble derecha en la Figura 2.6 es la forma B estndar, pero dependiendo de las
condiciones, el ADN puede formar realmente ms de 20 variantes ligeramente
diferentes de una hlice diestra, y algunas regiones pueden incluso formar
hlices en las que las hebras se tuerzan hasta La izquierda (llamada forma Z
del ADN). Si hay tramos complementarios de nucletidos en la misma hebra,
entonces una sola hebra, separada de su pareja, puede plegarse sobre s
misma como una horquilla. Incluso las hlices triples que consisten en tres
hebras pueden formar en regiones de ADN que contienen secuencias de bases
adecuadas.
Estructura de ADN relacionada con la funcin En la estructura de la
molcula de ADN
Podemos ver cmo se cumplen tres requisitos esenciales de un
material gentico.
1. Cualquier material gentico debe ser capaz de ser replicado con precisin,
por lo que la informacin que contiene ser precisamente replicado y heredado
por las clulas hijas. La base para la duplicacin exacta de una molcula de
ADN es el emparejamiento de A con T y de G con C en las dos cadenas de
polinucletidos. El desenrollamiento y la separacin de las cadenas, con cada
cadena libre que se est copiando, da lugar a la formacin de dos hlices
dobles idnticas (vase la figura 1.6).
2. Un material gentico tambin debe tener la capacidad de llevar toda la
informacin necesaria para dirigir la organizacin y las actividades metablicas
de la clula. Como vimos en el captulo 1, el producto de la mayora de los
genes es una molcula de protena, un polmero compuesto de unidades
repetitivas de aminocidos. La secuencia de aminocidos en la protena
determina sus propiedades qumicas y fsicas. Un gen se expresa cuando su
producto proteico es sintetizado, y un requerimiento del material gentico es
que dirige el orden en el que se aaden unidades de aminocidos al extremo
de una molcula proteica en crecimiento. En el ADN, esto se hace mediante un
cdigo gentico en el que grupos de tres bases especifican aminocidos.
Debido a que las cuatro bases de una molcula de ADN se pueden disponer en
cualquier secuencia y debido a que la secuencia puede variar de una parte de
la molcula a otra y de un organismo a otro, el ADN puede contener muchas
regiones nicas, cada una de las cuales puede ser distinta gene. Una larga
cadena de ADN puede dirigir la sntesis de una variedad de molculas de
protenas diferentes.
3. Un material gentico tambin debe ser capaz de sufrir mutaciones
ocasionales en las que se altera la informacin que porta. Adems, para que
las mutaciones sean heredables, las molculas mutantes deben ser capaces de
replicarse tan fielmente como la molcula parental. Esta caracterstica es
necesaria para explicar la evolucin de diversos organismos a travs de la
lenta acumulacin de mutaciones favorables. Watson y Crick sugirieron que las
mutaciones hereditarias podran ser posibles en el ADN por el uso poco
frecuente de las bases, con el resultado de que un nucletido incorrecto se
incorpora en una cadena de ADN de replicacin.
La Separacin e Identificacin de Fragmentos de ADN Genmico
Las siguientes secciones muestran cmo una comprensin de la estructura del
ADN y la replicacin se ha puesto en prctica en el desarrollo de
procedimientos para la separacin e identificacin de fragmentos de ADN en
particular. Estos mtodos se utilizan principalmente para identificar marcadores
de ADN o para ayudar en el aislamiento de fragmentos de ADN particulares
que son de inters gentico. Por ejemplo, considere un pedigr de cncer de
mama familiar en el que un fragmento de ADN particular sirve como marcador
para un poco de cromosoma que tambin incluye el gen mutante responsable
del riesgo aumentado; Entonces la capacidad de identificar el fragmento es de
importancia crtica en la evaluacin del riesgo relativo para cada una de las
mujeres en el pedigr que podra llevar el gen mutante. Para tomar otro
ejemplo, supongamos que hay razones para creer que una mutacin que causa
una enfermedad gentica est presente en un fragmento de ADN particular;
Entonces es importante poder identificar este fragmento y aislarlo de los
individuos afectados para verificar si esta hiptesis es verdadera y, si es as,
para identificar la naturaleza de la mutacin.
La mayora de los procedimientos para la separacin e identificacin de
fragmentos de ADN se pueden agrupar en dos categoras generales:
1. Los que identifican un fragmento de ADN especfico presente en el ADN
genmico haciendo uso del hecho de que las secuencias de ADN de cadena
sencilla complementarias pueden, en las condiciones apropiadas, formar una
molcula dplex. Estos procedimientos se basan en la hibridacin de cidos
nucleicos.
2. Aquellos que utilizan el conocimiento previo de la secuencia en los extremos
de un fragmento de ADN para repetir especfica y repetidamente este
fragmento a partir del ADN genmico. Estos procedimientos se basan en la
replicacin selectiva del ADN (amplificacin) por medio de la reaccin en
cadena de la polimerasa.
La principal diferencia entre estos enfoques es que el primero (que depende de
la hibridacin de cidos nucleicos) identifica fragmentos que estn presentes
en el propio ADN genmico, mientras que el segundo (que depende de la
amplificacin del ADN) identifica rplicas fabricadas experimentalmente de
fragmentos cuyas plantillas originales Rplicas) estaban presentes en el ADN
genmico. Esta diferencia tiene implicaciones prcticas:
Los mtodos de hibridacin requieren una mayor cantidad de ADN genmico
para los procedimientos experimentales, pero pueden identificarse fragmentos
relativamente grandes y no es necesario ningn conocimiento previo de la
secuencia de ADN.
Los mtodos de amplificacin requieren cantidades extremadamente
pequeas de ADN genmico para los procedimientos experimentales, pero la
amplificacin suele estar restringida a fragmentos relativamente pequeos, y
es necesario algn conocimiento previo de la secuencia de ADN. Las siguientes
secciones tratan ambos tipos de enfoques y dan ejemplos de cmo se usan. En
los mtodos que utilizan la hibridacin de cido nucleico para identificar
fragmentos particulares presentes en el ADN genmico, el primer paso suele
cortar el ADN genmico en fragmentos de tamao manejable
experimentalmente. Este procedimiento se discute a continuacin.

Enzimas de restriccin y escisin de ADN especfica del sitio

Los procedimientos para el aislamiento qumico del ADN, como los
desarrollados por Avery, MacLeod y McCarty (Captulo 1), usualmente
conducen a la rotura aleatoria de molculas doblestranded en una longitud
promedio de aproximadamente 50.000 pares de bases. Esta longitud se
denomina 50 kb, donde kb representa kilobases (1 kb \ Delta 1000 pares de
bases). Una longitud de 50 kb est cerca de la longitud de doble cadena de
ADN presente en el bacterifago? Que infecta a E. coli. Los fragmentos de 50
kb pueden hacerse ms cortos por fuerzas de cizallamiento vigorosas, como
ocurre en un mezclador de cocina, pero uno de los problemas con romper
grandes molculas de ADN en fragmentos ms pequeos por cizallamiento
aleatorio es que los fragmentos que contienen un gen particular o parte de Un
gen, sern de diferentes tamaos. En otras palabras, con el cizallamiento
aleatorio, no es posible aislar e identificar un fragmento de ADN particular en
base a su tamao y contenido de secuencia, porque cada molcula cortada
aleatoriamente que contiene la secuencia deseada en algn lugar dentro de
ella difiere en tamao de todas las dems molculas Que contienen la
secuencia. En esta seccin describimos una importante tcnica enzimtica que
puede usarse para escindir molculas de ADN en sitios especficos. Este
mtodo asegura que todos los fragmentos de ADN que contienen una
secuencia particular tienen el mismo tamao; Adems, cada fragmento que
contiene la secuencia deseada tiene la secuencia localizada exactamente en la
misma posicin dentro del fragmento.
El mtodo de escisin utiliza una clase importante de enzimas que escinden el
ADN aisladas principalmente de bacterias. Las enzimas se denominan
endonucleasas de restriccin o enzimas de restriccin, y son capaces de
escindir molculas de ADN en las posiciones en las que estn presentes
secuencias cortas de bases. Estas enzimas de origen natural sirven para
proteger la clula bacteriana mediante la desactivacin del ADN de los
bacterifagos que lo atacan. Su descubrimiento le vali a Werner Arber de
Suiza el Premio Nobel en 1978. Tcnicamente, las enzimas son conocidas como
endonucleasas de restriccin de tipo II. La enzima de estrs BamHI es un
ejemplo; Reconoce la secuencia de doble cadena

5' GGATCC - 3
3 '- CCTAGG - 5'
Y escinde cada filamento entre los nucletidos G-portadores mostrados en rojo.
La Figura 2.9 muestra cmo las regiones que forman el sitio activo de BamHI
entran en contacto con el sitio de reconocimiento (azul) justo antes de la
escisin, y la reaccin de escisin se indica en la Figura 2.10.
La Tabla 2.3 enumera nueve de las varias enzimas de restriccin conocidas. La
mayora de las enzimas de restriccin reciben el nombre de la especie en la
que se encontraron. BamHI, por ejemplo, se aisl de la bacteria Bacillus
amyloliquefaciens cepa H, y es la primera (I) enzima de restriccin aislada de
este organismo. Debido a que las tres primeras letras en el nombre de cada
enzima de restriccin representan las especies bacterianas de origen, estas
letras se imprimen en cursiva; El resto de los smbolos del nombre no estn en
cursiva. La mayora de las enzimas de restriccin reconocen slo una secuencia
de base corta, usualmente cuatro o seis pares de nucletidos. La enzima se
une con el ADN en estos sitios y hace una rotura en cada cadena de la
molcula de ADN, produciendo grupos 3'-OH y 5'-P en cada posicin. La
secuencia de nucletidos reconocida para la escisin por una enzima de
restriccin se denomina sitio de restriccin de la enzima. Los ejemplos de la
Tabla 2.3 muestran que algunas enzimas de restriccin escinden su sitio de
restriccin asimtricamente (en diferentes sitios en las dos cadenas de ADN),
pero otras enzimas de restriccin se clavan simtricamente (en el mismo sitio
en ambas cadenas). Los primeros dejan finitos pegajosos porque cada extremo
del sitio escindido tiene un saliente pequeo, de una sola hebra, que es
complementario en la secuencia de bases al otro extremo (Figura 2.10). Por el
contrario, las enzimas que tienen sitios de corte simtricos producen
fragmentos de ADN que tienen extremos romos. En prcticamente todos los
casos, el sitio de restriccin de una enzima de restriccin lee lo mismo en
ambas cadenas, siempre que se tenga en cuenta la polaridad opuesta de los
filamentos; Por ejemplo, cada cadena en el sitio de restriccin de BamHI lee 5'-
GGATCC3 '(Figura 2.10). Una secuencia de ADN con este tipo de simetra se
llama palndromo. (En ingls ordinario, un palndromo es una palabra o frase
que dice lo mismo hacia adelante y hacia atrs, como "madam"). Las enzimas
de restriccin tienen las siguientes caractersticas importantes:
La mayora de las enzimas de restriccin reconocen un nico sitio de
restriccin.
El sitio de restriccin se reconoce sin tener en cuenta la fuente del ADN.
Debido a que la mayora de las enzimas de restriccin reconocen una
secuencia de sitio de restriccin nica, el nmero de cortes en el ADN de un
organismo particular se determina por el nmero de restriccin.

Electroforesis en gel
Los fragmentos de ADN producidos por una enzima de restriccin pueden
separarse por tamao utilizando el hecho de que el ADN est cargado
negativamente y se mueve en respuesta a un campo elctrico. Si los
terminales de una fuente de energa elctrica estn conectados a los extremos
opuestos de un tubo horizontal que contiene una solucin de ADN, entonces las
molculas de ADN se movern hacia el extremo positivo del tubo a una
velocidad que depende de la intensidad del campo elctrico y de la forma Y el
tamao de las molculas. El movimiento de molculas cargadas en un campo
elctrico se llama electroforesis. El tipo de electroforesis ms comnmente
utilizado en gentica es la electroforesis en gel. En la Figura 2.11 se muestra
una disposicin experimental para la electroforesis en gel del ADN. Se prepara
una delgada capa de gel, generalmente agarosa o acrilamida, que contiene
pequeas ranuras (denominadas pocillos) en las que se colocan las muestras.
Se aplica un campo elctrico, y las molculas de ADN cargadas negativamente
penetran y se mueven a travs del gel hacia el nodo (el electrodo con carga
positiva). Un gel es una compleja red molecular que contiene pasajes estrechos
y tortuosos, por lo que las molculas de ADN ms pequeas pasan ms
fcilmente; Por lo tanto, la velocidad de movimiento aumenta a medida que
disminuye el tamao del fragmento de ADN. La figura 2.12 muestra el
resultado de la electroforesis de un conjunto de molculas de ADN de doble
cadena en un gel de agarosa. Cada regin discreta que contiene ADN se
denomina banda. Las bandas pueden visualizarse bajo luz ultravioleta despus
de sumergir el gel en el tinte bromuro de etidio, las molculas de los cuales
intercalan entre las bases apiladas en ADN dplex y lo hacen fluorescente. En
la figura 2.12, cada banda en el gel resulta del hecho de que todos los
fragmentos de ADN de un tamao dado han migrado a la misma posicin en el
gel. Para producir una banda visible, un mnimo de aproximadamente 5 x10^-9
gramos de ADN, lo que para un fragmento de tamao 3 kb trabaja hasta
aproximadamente 109 molculas.
El punto es que un gran nmero de copias de cualquier fragmento de ADN
particular debe estar presente con el fin de producir una banda visible en un
gel de electroforesis. Un fragmento de ADN lineal bicatenario tiene una
movilidad electrofortica que disminuye en proporcin al logaritmo de su
longitud en pares de bases, cuanto ms largo es el fragmento, ms lento se
mueve, pero la constante de proporcionalidad depende de la concentracin de
agarosa, de la composicin de la solucin tampn, Y las condiciones
electroforticas. Esto significa que diferentes concentraciones de agarosa
permiten la separacin eficiente de diferentes rangos de tamaos de
fragmentos de ADN (vase la Figura 2.13). Se utilizan geles menos densos,
tales como 0,6 por ciento de agarosa, para separar fragmentos mayores;
Mientras que se utilizan geles ms densos, tales como 2 por ciento de agarosa,
para separar fragmentos ms pequeos. La insercin en la figura 2.13 muestra
la dependencia de la movilidad electrofortica en el logaritmo del tamao del
fragmento. Tambin indica que la relacin lineal se rompe para los fragmentos
ms grandes que se pueden resolver bajo un conjunto dado de condiciones.
Debido a la especificidad de secuencia de la escisin, una enzima de restriccin
particular produce un conjunto nico de fragmentos para una molcula de ADN
particular. Otra enzima producir un conjunto diferente de fragmentos de la
misma molcula de ADN. En la figura 2.14, este principio se ilustra para la
digestin del fago de E. coli ADN por EcoRI o BamHI (vase la parte B). Las
ubicaciones de los sitios de escisin para estas enzimas en landa ADN se
muestran en las Figuras 2.14A y C. Un diagrama que muestra los sitios de
escisin a lo largo de una molcula de ADN se denomina mapa de restriccin.
Pueden aislarse fragmentos de ADN particulares cortando la pequea regin
del gel que contiene el fragmento y retirando el ADN del gel. Un uso
importante de fragmentos de restriccin aislados emplea la enzima ADN ligasa
para insertarlos en molculas autorreplicables tales como bacterifagos,
plsmidos o incluso pequeos cromosomas artificiales (Figura 2.2). Estos
procedimientos constituyen la clonacin de ADN y son la base de una forma de
ingeniera gentica, discutida ms adelante en el Captulo 13.

Los fragmentos de ADN que se han clonado en organismos tales como E. coli
se usan ampliamente porque los fragmentos pueden aislarse en grandes
cantidades y purificarse con relativa facilidad. Entre los usos del ADN clonado
se encuentran:
Secuencia ADN. Todos los mtodos actuales de secuenciacin de ADN
requieren fragmentos de ADN clonados. Estos mtodos se tratan en el Captulo
6.
Hibridacin de cidos nucleicos. Como veremos ms adelante, una aplicacin
importante de fragmentos de ADN clonados implica la incorporacin de una
"etiqueta" radiactiva o emisora de luz, despus de lo cual el material marcado
se usa para "marcar" fragmentos de ADN que contienen secuencias similares.
Almacenamiento y distribucin. El ADN clonado puede almacenarse durante
largos perodos de tiempo sin riesgo de cambio y se puede distribuir fcilmente
a otros investigadores.

Hibridacin de cidos nucleicos

La mayora de los genomas son suficientemente grandes y complejos que la
digestin con una enzima de restriccin produce muchas bandas que son
iguales o de tamao similar. La identificacin de un fragmento de ADN
particular en un fondo de muchos otros fragmentos de tamao similar presenta
un problema de aguja en un pajar. Supongamos, por ejemplo, que estamos
interesados en un fragmento BamHI 3.0 especfico del genoma humano que
sirve como marcador que indica la presencia de un factor de riesgo gentico
hacia el cncer de mama entre los individuos de un pedigr particular. Este
fragmento de 3,0 kb es indistinguible, basndose nicamente en el tamao, de
fragmentos que varan de aproximadamente 2,9 a 3,1 kb. Cuntos fragmentos
en este rango de tamao se esperan? Cuando el ADN genmico humano se
escinde con BamHI, la longitud media de un fragmento de restriccin es 46 \
4096 pares de bases, y el nmero total esperado de fragmentos BamHI es
aproximadamente 730.000; En el intervalo de tamao 2,9-3,1 kb, el nmero
esperado de fragmentos es de aproximadamente 17.000. Lo que esto significa
es que a pesar de que sabemos que el fragmento que nos interesa es de 3 kb
de longitud, es slo uno de los 17.000 fragmentos que son tan similares en
tamao que el nuestro no se puede distinguir de los dems por la longitud solo.
Esta tarea de identificacin es en realidad ms difcil que encontrar una aguja
en un pajar, porque haystacks suelen estar secas. Una analoga ms exacta
sera buscar una aguja en un pajar que se haba lanzado en una piscina llena
de agua. Esta analoga es ms relevante porque los geles, aunque contienen
una matriz de soporte para hacerlos semislidos, estn compuestos
principalmente de agua, y cada molcula de ADN dentro de un gel est
rodeada enteramente por agua. Claramente, necesitamos algn mtodo por el
cual las molculas en un gel puedan ser inmovilizadas y nuestro fragmento
especfico identificado.
Los fragmentos de ADN en un gel se inmovilizan habitualmente transfirindolos
sobre una lmina de papel de filtro especial que consiste en nitrocelulosa, a la
que el ADN puede estar enlazado permanentemente (covalentemente). La
forma en que se hace esto se describe en la siguiente seccin. En esta seccin
examinamos cmo las dos hebras en una doble hlice pueden ser
"descomprimidas" para formar hebras simples y cmo, bajo las condiciones
apropiadas, dos hebras individuales que son complementarias o casi
complementarias en secuencia pueden ser "comprimidas" juntas para formar
una Diferente hlice doble. El "unzipping" se denomina desnaturalizacin, el
"zipping" renaturacin. Las aplicaciones prcticas de la denaturacin y la
renaturalizacin son muchas:
Una pequea parte de un fragmento de ADN puede ser "comprimida" con un
fragmento de ADN mucho ms grande. Este principio se utiliza para identificar
fragmentos de ADN especficos en una mezcla compleja, el marcador BamHI de
3 kb para el cncer de mama que hemos estado considerando. Las
aplicaciones de este tipo incluyen el seguimiento de marcadores genticos en
pedigres y el aislamiento de fragmentos que contienen un gen mutante
particular.
Un fragmento de ADN de un gen puede ser "comprimido" con fragmentos
similares de otros genes en el mismo genoma; Este principio se utiliza para
identificar diferentes miembros de familias de genes que son similares, pero no
idnticos, en secuencia y que tienen funciones relacionadas.
Un fragmento de ADN de una especie puede ser "comprimido" con
secuencias similares de otras especies. Esto permite el aislamiento de genes
que tienen las mismas funciones o funciones relacionadas en mltiples
especies. Se utiliza para estudiar aspectos de la evolucin molecular, tales
como las diferencias en la secuencia se correlacionan con las diferencias en la
funcin, y los patrones y las tasas de cambio en las secuencias de genes a
medida que evolucionan. Como vimos en la Seccin 2.2, la estructura helicoidal
de doble cadena del ADN se mantiene mediante apilamiento de bases y por
enlace de hidrgeno entre los pares de bases complementarias. Cuando las
soluciones que contienen fragmentos de ADN se elevan a temperaturas en el
intervalo de 85 100 C, o al pH alto de soluciones alcalinas fuertes, los hilos
emparejados comienzan a separarse, o "descomprimir". El desenrollamiento de
la hlice sucede en menos de unos pocos minutos (El tiempo depende de la
longitud de la molcula). Cuando la estructura helicoidal del ADN se
interrumpe, y los hilos se han descomprimido completamente, se dice que la
molcula est desnaturalizada. Una forma comn de detectar la
desnaturalizacin es midiendo la capacidad del ADN en solucin para absorber
luz ultravioleta de longitud de onda de 260 nm, debido a que la absorcin a
260 nm (A260) de una solucin de molculas monocatenarias es 37 por ciento
mayor que la absorcin de la Molculas bicatenarias en la misma
concentracin.
Como se muestra en la Figura 2.15, el progreso de la desnaturalizacin puede
ser seguido calentando lentamente una solucin de ADN de doble hebra y
registrando el valor de A260 a diversas temperaturas. La temperatura
requerida para la desnaturalizacin aumenta con el contenido de G + C, no
slo porque los pares de bases G - C tienen tres enlaces de hidrgeno y A - T
pares de bases dos, sino porque los pares de bases G-C consecutivos tienen un
apilamiento de bases ms fuerte.
Las cadenas de ADN desnaturalizadas pueden, bajo ciertas condiciones, formar
ADN de doble cadena con otras cadenas, con la condicin de que los filamentos
sean suficientemente complementarios en secuencia. Este proceso de
renaturalizacin se llama hibridacin de cido nucleico porque las molculas
bicatenarias son "hbridas" en que cada hebra proviene de una fuente
diferente. Para que las cadenas de ADN hibriden, se deben cumplir dos
requisitos:
1. La concentracin de sal debe ser alta (> 0,25 M) para neutralizar las cargas
negativas de los grupos fosfato, que de otro modo haran que las cadenas
complementarias se repelieran entre s.
2. La temperatura debe ser lo suficientemente alta como para interrumpir los
enlaces de hidrgeno que se forman entre las secuencias cortas de bases
dentro de la misma cadena, pero no tan altos que los pares de bases estables
entre las hebras complementarias se interrumpan.
La fase inicial de la renaturalizacin es un proceso lento porque la velocidad
est limitada por la probabilidad aleatoria de que una regin de dos hebras
complementarias se una para formar una secuencia corta de pares de bases
correctos. Este paso de apareamiento inicial es seguido por un apareamiento
rpido de las bases complementarias restantes y el rebobinado de la hlice. El
rebobinado se logra en cuestin de segundos, y su velocidad es independiente
de la concentracin de ADN porque los hilos complementarios ya se han
encontrado.
El ejemplo de hibridacin de cido nucleico en la Figura 2.16 nos permitir
entender algunos de los detalles moleculares y tambin ver cmo se usa la
hibridacin para "marcar" e identificar un fragmento de ADN particular.
En la parte A se muestra una solucin de ADN desnaturalizado, denominada
sonda, en la que cada molcula ha sido marcada con tomos radiactivos o
molculas emisoras de luz. El ADN de sonda se obtiene tpicamente de un clon
y la sonda marcada contiene usualmente formas desnaturalizadas de ambas
cadenas presentes en la molcula dplex original. (Esto ha conducido a una
terminologa confusa. Los genetistas dicen que el ADN sonda hibrida con
fragmentos de ADN que contienen secuencias que son similares a la sonda, en
lugar de complementarlos lo que realmente ocurre es que una hebra de la
sonda sufre hibridacin con una secuencia complementaria en el fragmento
Porque debido a que la sonda contiene habitualmente ambas cadenas, la
hibridacin tiene lugar con cualquier fragmento que contenga una secuencia
similar, estando cada hilo en la sonda sometido a hibridacin con la secuencia
complementaria en el fragmento.) La Parte B de la Figura 2.16 es un diagrama
de fragmentos de ADN genmico Que se han inmovilizado sobre un filtro de
nitrocelulosa. Cuando la sonda se mezcla con los fragmentos genmicos (parte
C), las colisiones aleatorias traen juntos cortes cortos y complementarios. Si la
regin de secuencia complementaria es Corta (parte D), entonces la colisin
aleatoria no puede iniciar la renaturalizacin porque las secuencias
flanqueantes no pueden emparejarse; En este caso la sonda se cae casi
inmediatamente. Si, sin embargo, una colisin trae secuencias cortas juntas en
el registro correcto (parte E), entonces esto inicia la renaturalizacin, porque el
emparejamiento procede de forma similar a la cremallera desde el contacto
inicial.
El punto principal es que los fragmentos de ADN son capaces de hibridar slo si
la longitud de la regin en la que pueden emparejarse es suficientemente
largo. Pueden tolerarse algunos desajustes en la regin emparejada. Cuntos
desajustes estn permitidos se determina por las condiciones del experimento:
Cuanto menor sea la temperatura a la que se lleva a cabo la hibridacin, y
cuanto mayor sea la concentracin de sal, mayor ser la proporcin de
desajustes tolerados.

La mancha del sur (The Southern Blot)

La capacidad de renaturalizar el ADN de la manera descrita en la figura 2.16
significa que la solucin que contiene un fragmento pequeo de ADN
desnaturalizado, si est marcada adecuadamente (por ejemplo con 32P
radiactivo), puede combinarse con una mezcla compleja de fragmentos de ADN
desnaturalizados y Tras la renaturalizacin, el fragmento pequeo "marcar"
con la radiactividad cualquier molcula en la mezcla compleja con la que
pueda hibridar. La etiqueta radiactiva permite identificar estas molculas.
Los mtodos de escisin de ADN, electroforesis, transferencia a nitrocelulosa, y
La hibridacin con una sonda se combinan en (The Southern Blot) llamada
as por su inventor Edward Southern. En este procedimiento, un gel en el que
las molculas de ADN han sido separadas por electroforesis se trata con lcali
para desnaturalizar el ADN y hacerlo de cadena sencilla (Figura 2.17). A
continuacin, el ADN se transfiere a una lmina de filtro de nitrocelulosa de tal
manera que se mantienen las posiciones relativas de los fragmentos de ADN.
La transferencia se lleva a cabo cubriendo la nitrocelulosa sobre el gel y
apilando muchas capas de papel absorbente encima; El papel absorbente
aspira las molculas de agua del gel ya travs de la nitrocelulosa, a la que se
adhieren los fragmentos de ADN. (Este paso es el componente de "mancha" de
la mancha Southern, partes A y B.) A continuacin, el filtro se trata de manera
que el ADN de una sola hebra se conecte permanentemente. El filtro tratado se
mezcla con una solucin que contiene una sonda desnaturalizada (ADN o ARN)
en condiciones que permiten que las hebras complementarias hibriden para
formar molculas dplex (parte C). La etiqueta radiactiva o de otra clase
presente en la sonda se une de forma estable al filtro y, por lo tanto, es
resistente a la eliminacin por lavado, slo en posiciones en las que ya estn
presentes secuencias de bases complementarias a la sonda en el filtro, de
modo que la sonda pueda formar molculas dplex. La etiqueta se ubica
colocando el papel en contacto con una pelcula de rayos X. Despus del
desarrollo de la pelcula, Las regiones ennegrecidas indican las posiciones de
las bandas que contienen la etiqueta radiactiva o emisora de luz (parte D).
El procedimiento de la figura 2.17 resuelve el problema del pajote hmedo
transfiriendo e inmovilizando los fragmentos de ADN genmico a un filtro e
identificando por hibridacin los que son de inters. Las aplicaciones prcticas
del centro de transferencia de Southern sobre la identificacin de fragmentos
de ADN que contienen secuencias similares al ADN o ARN de la sonda, donde la
proporcin de nucletidos desajustados permitidos est determinada por las
condiciones de hibridacin. Las ventajas de la transferencia de Southern son
comodidad y sensibilidad. La sensibilidad proviene del hecho de que tanto la
hibridacin con una sonda marcada como el uso de una pelcula fotogrfica
amplifican la seal; Bajo condiciones tpicas, se puede observar una banda en
la pelcula con slo 5 \ 10 - 12 gramos de ADN - mil veces menos ADN que la
cantidad requerida para producir una banda visible en el propio gel.

2.4 Replicacin Selectiva de Fragmentos de ADN Genmico

Aunque la hibridacin de cido nucleico permite identificar un fragmento de
ADN particular cuando est presente en una mezcla compleja de fragmentos,
no permite que el fragmento se separe de los otros y se purifique. La obtencin
del fragmento en forma purificada requiere la clonacin, que es sencilla pero
que requiere mucho tiempo. Sin embargo, si el fragmento de inters no es
demasiado largo, y si se conoce la secuencia de nucletidos en cada extremo,
entonces es posible obtener Grandes cantidades del fragmento meramente por
replicacin selectiva. Este proceso se llama amplificacin. Cmo se sabe la
secuencia de los extremos? Volvamos a nuestro ejemplo del fragmento BamHI
de 3,0 kb que sirve para marcar un factor de riesgo para el cncer de mama en
ciertos pedigres. Supongamos que este fragmento es clonado y secuenciado a
partir de un individuo afectado, y se encuentra que, con respecto a la
secuencia genmica normal en esta regin, el fragmento BamHI no tiene una
regin de 500 pares de bases. En este punto se conocen las secuencias en los
extremos del fragmento y tambin podemos inferir que la amplificacin de ADN
genmico de individuos con el factor de riesgo producir una banda de 3,0 kb,
mientras que la amplificacin a partir de ADN genmico de no portadores dar
una banda de 3,5 kb. Esta diferencia permite que cada persona en el pedigr
sea diagnosticada como portadora o no portadora simplemente por medio de
la amplificacin del ADN. Para entender cmo funciona la amplificacin,
primero es necesario examinar algunas caractersticas clave de la replicacin
del ADN.
Restricciones en la replicacin del ADN: cebadores y elongacin de la
cuerda de 5 'a 3'
Como con la mayora de las reacciones metablicas en clulas vivas, los cidos
nucleicos se sintetizan en reacciones qumicas controladas por enzimas. Una
enzima que forma el enlace azcar-fosfato (el enlace fosfodister) entre
nucletidos adyacentes en una cadena de cido nucleico se denomina ADN
polimerasa. Se ha purificado una diversidad de ADN polimerasas, y para la
amplificacin de un fragmento de ADN, la sntesis de ADN se lleva a cabo in
vitro combinando componentes celulares purificados en un tubo de ensayo en
condiciones definidas con precisin. (In vitro significa "sin participacin de
clulas vivas").
Para que la ADN polimerasa catalize la sntesis de una nueva hebra de ADN,
debe estar presente un ADN de cadena sencilla preexistente. Cada molcula de
ADN de cadena sencilla presente en la mezcla de reaccin puede servir como
una plantilla sobre la cual se crea una nueva cadena de unin mediante la ADN
polimerasa. Para que tenga lugar la replicacin del ADN, tambin deben estar
presentes los 5'-trifosfatos de los cuatro desoxinuclesidos. Este requisito es
bastante obvio, porque los nuclesidos trifosfatos son los precursores a partir
de los cuales se crean nuevas hebras de ADN. Los trifosfatos necesarios son los
compuestos indicados en la Tabla 2.1 como dATP, dGTP, dTTP y dCTP, que
contienen las bases adenina, guanina, timina y citosina, respectivamente. Los
detalles de las estructuras de dCTP y dGTP se muestran en la Figura 2.18, en la
que se indican los grupos fosfato escindidos durante la sntesis de ADN. La
sntesis de ADN requiere los cuatro nuclesidos 5'-trifosfatos y no tiene lugar si
alguno de ellos se omite.
Una caracterstica que se encuentra en todas las ADN polimerasas es que:
Una ADN polimerasa slo puede alargar una cadena de ADN. No es posible que
la ADN polimerasa inicie la sntesis de una nueva hebra, incluso cuando est
presente una molcula molde.
Una implicacin importante de este principio es que la sntesis de ADN requiere
un segmento preexistente de cido nucleico que est unido a hidrgeno a la
hebra molde. Este segmento se llama cebador. Debido a que la molcula de
cebador puede ser muy corta, es un oligonucletido, que literalmente significa
"pocos nucletidos". Como veremos en el captulo 6, en las clulas vivas el
cebador es un segmento corto de ARN, pero en la amplificacin de ADN in
vitro, Cebador empleado es usualmente ADN. Es el extremo 3 'del primer que
es esencial, porque, como se enfatiza en el Captulo 1:
La sntesis de ADN slo se produce mediante la adicin de nucletidos
sucesivos al extremo 3 'de la hebra en crecimiento. En otras palabras, el
alargamiento de la cadena siempre tiene lugar en la direccin 5 'a 3' (5 '-> 3').
La razn de la direccin 5 '-> 3' de la elongacin de la cadena se ilustra en la
Figura 2.19.
Es una consecuencia del hecho de que la reaccin catalizada por la ADN
polimerasa es la formacin de un enlace fosfodister entre el grupo 3'-OH libre
de la cadena que se extiende y el tomo de fsforo ms interno del nuclesido
trifosfato que se incorpora en el extremo 3' . El reconocimiento del nuclesido
trifosfato entrante apropiado en la replicacin depende del emparejamiento de
bases con el nucletido opuesto en la cadena molde. La ADN polimerasa
usualmente catalizar la reaccin de polimerizacin que incorpora el nuevo
nucletido en el trmino del cebador slo cuando est presente el par de bases
correcto. La misma polimerasa de ADN se usa para aadir cada uno de los
cuatro fosfatos de desoxinuclesido al extremo 3 '- OH de la hebra en
crecimiento.
La reaccin en cadena de la polimerasa
El requisito para un cebador de oligonucletido, y la restriccin de que el
alargamiento de la cadena debe siempre ocurrir en el extremo 5 '3 ', hacen
posible obtener grandes cantidades de una secuencia de ADN particular por
amplificacin selectiva in vitro. El mtodo para la amplificacin selectiva se
denomina reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Para su invencin, el
californiano Kary B. Mullis fue galardonado con un Premio Nobel en 1993. La
amplificacin por PCR utiliza ADN polimerasa y un par de cebadores
oligonucleotdicos sintticos cortos, normalmente 18-22 nucletidos de
longitud, que son complementarios en secuencia a los extremos de la
Secuencia de ADN a amplificar. La Figura 2.20 da un ejemplo en el que los
oligonucletidos cebadores (verde) son 9-mers. stos son demasiado cortos
para la mayora de los propsitos prcticos, pero servirn para la ilustracin. La
molcula dplex original (parte A) se muestra en azul. Este dplex se mezcla
con un gran exceso de molculas de cebador, ADN polimerasa, y los cuatro
nuclesidos trifosfatos. Cuando se eleva la temperatura, las hebras del dplex
se desnaturalizan y se separan.
Cuando la temperatura se baja de nuevo para permitir la renaturalizacin, los
cebadores, debido a que estn en gran exceso, se recolectan a las hebras de
plantilla separadas (parte B). Obsrvese que las secuencias de cebadores son
diferentes entre s pero complementarias a las secuencias presentes en hebras
opuestas del dplex original de ADN y la regin flanqueante a amplificar. Los
cebadores estn orientados con sus extremos 3 'apuntando en la direccin de
la regin a amplificar, porque cada hebra de ADN se alarga solamente en el
extremo 3'. Despus de que los cebadores se han endurecido, cada uno es
alargado por la ADN polimerasa usando la hebra original como plantilla, y las
hebras de ADN recin sintetizadas (rojas) crecen una hacia la otra a medida
que transcurre la sntesis (parte C). Tenga en cuenta que:
Una regin de ADN dplex presente en la mezcla de reaccin original puede ser
amplificada por PCR solamente si la regin est flanqueada por los
oligonucletidos cebadores.
Para iniciar un segundo ciclo de amplificacin por PCR, se eleva de nuevo la
temperatura para aumentar el ADN dplex. Al disminuir la temperatura, las
hebras parentales originales se recolectan con los cebadores y se replican
como se muestra en la Figura 2.20B y C. Las hebras derivadas producidas en el
primer espectro de amplificacin tambin se enderezan con cebadores y se
replican, como se muestra en la parte D. En este caso, aunque las molculas
dplex hija son idnticas en secuencia a la molcula parental original, ellas
consisten enteramente en oligonucletidos cebadores y ADN no parental que
se sintetiz en el primer o segundo ciclo de PCR. A medida que se producen
ciclos sucesivos de desnaturalizacin, recocido del cebador y elongacin, las
hebras parentales originales se diluyen por la proliferacin de nuevas hebras
hija hasta que finalmente, virtualmente cada molcula producida en la PCR
tiene la estructura mostrada en la parte D.
El poder de la amplificacin por PCR es que el nmero de copias de la hebra de
plantilla aumenta en la progresin exponencial: 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256,
512, 1024 y as sucesivamente, duplicndose con cada ciclo De replicacin.
Comenzando con una mezcla que contiene tan poco como una molcula del
fragmento de inters, las rondas repetidas de replicacin de ADN aumentan el
nmero de molculas amplificadas de manera potencialmente. Por ejemplo, a
partir de una sola molcula, 25 rondas de replicacin del ADN resultar en
2^25= 3,4x10^7 molculas. Este nmero de molculas del fragmento
amplificado es mucho mayor que el de las otras molculas no amplificadas en
la mezcla original que el ADN amplificado se puede usar a menudo sin
purificacin adicional. Por ejemplo, un nico fragmento de 3 kb en E. coli
representa slo el 0,06 por ciento del ADN en este organismo. Sin embargo, si
este nico fragmento se replicara a travs de 25 rondas de replicacin,
entonces 99,995 por ciento de la mezcla resultante consistira en la secuencia
amplificada. El fragmento 3-kb de ADN humano constituye slo el 0,0001 por
ciento del tamao total del genoma. La amplificacin de un fragmento de 3 kb
de ADN humano hasta una pureza de 99,995 por ciento requerira alrededor de
34 ciclos de PCR.
En la figura 2.21 se muestra una visin general de la reaccin en cadena de la
polimerasa. La secuencia de ADN a amplificar se muestra nuevamente en azul
y los cebadores oligonucleotdicos en verde. Los oligonucletidos se recolectan
a los extremos de la secuencia para amplificarse y se convierten en sustratos
para el alargamiento de la cadena mediante la ADN polimerasa. En el primer
ciclo de amplificacin por PCR, el ADN se desnaturaliza para separar los hilos.
La temperatura de desnaturalizacin es usualmente alrededor de 95 C. A
continuacin, se disminuye la temperatura para permitir un recocido en la
presencia de un gran exceso de los oligonucletidos primos. La temperatura de
recocido est tpicamente en el intervalo de 50 C-60 C, dependiendo en
gran medida de la G-C de los cebadores oligonucleotdicos. Para completar el
ciclo, la temperatura se eleva ligeramente, a aproximadamente 70 C, para el
alargamiento de cada cebador. Los pasos de desnaturalizacin,
renaturalizacin y replicacin se repiten de 20 a 30 veces, y en cada ciclo se
duplica el nmero de molculas de la secuencia amplificada. La
implementacin de la PCR con polimerasas de ADN convencionales no es
prctica, porque a la alta temperatura necesaria para la desnaturalizacin, la
polimerasa se desdobla irreversiblemente (desnaturalizada) y se vuelve
inactiva. Sin embargo, la polimerasa de ADN aislada de ciertos organismos es
estable al calor porque los organismos normalmente viven en aguas termales a
temperaturas muy por encima de 90 C, como las que se encuentran en el
Parque Nacional de Yellowstone. Se dice que tales organismos son termfilos.
La ADN polimerasa termoestable ms ampliamente utilizada se denomina
polimerasa Taq, ya que se aisl originalmente de la bacteria termoflica
Thermus aquaticus.
La amplificacin por PCR es muy til para generar grandes cantidades de una
secuencia de ADN especfica. La limitacin principal de la tcnica es que las
secuencias de ADN en los extremos de la regin a amplificar deben ser
conocidas para que los oligonucletidos cebadores puedan sintetizarse.
Adems, las secuencias ms largas que aproximadamente 5000 pares de bases
no pueden replicarse eficientemente mediante procedimientos de PCR
convencionales, aunque hay modificaciones de PCR que permiten amplificar
fragmentos ms largos. Por otro lado, muchas aplicaciones requieren la
amplificacin de fragmentos relativamente pequeos. La principal ventaja de la
amplificacin por PCR es que slo requiere trazas de ADN molde. Tericamente
slo se requiere una molcula plantilla, pero en la prctica la amplificacin de
una sola molcula puede fallar porque la molcula puede, por casualidad,
romperse o daarse. Pero la amplificacin es usualmente confiable con tan slo
10-100 molculas plantilla, lo que hace que la amplificacin por PCR sea
10,000-100,000 veces ms sensible que la deteccin va hibridacin de cido
nucleico. La sensibilidad exquisita de la amplificacin por PCR ha llevado a su
uso en la tipificacin de ADN para casos criminales en los que una pequea
cantidad de material biolgico ha sido dejada por el autor (clulas de la piel en
culata de acigarette o clulas de pelo en un solo cabello puede producir
suficiente ADN molde para la amplificacin). En la investigacin, la PCR es
ampliamente utilizada en el estudio de mutaciones independientes en un gen
cuya secuencia se conoce con el fin de identificar la base molecular de cada
mutacin, estudiar la variacin de la secuencia de ADN entre formas
alternativas de un gen que puede estar presente en poblaciones naturales, O
para examinar las diferencias entre los genes con la misma funcin en
diferentes especies. El procedimiento de PCR tambin ha sido ampliamente
utilizado en los laboratorios clnicos para el diagnstico. Para tomar slo un
ejemplo muy importante, la presencia del virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH), que causa el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
puede detectarse en cantidades de rastro en los bancos de sangre mediante
PCR usando cebadores complementarios a secuencias en la gentica viral
material. Estas y otras aplicaciones de PCR se facilitan por el hecho de que el
procedimiento se presta a la automatizacin mediante el uso de robots
mecnicos para configurar y ejecutar las reacciones.

Captulo 4 genes y cromosomas

La vida proviene de la vida, y las nuevas clulas de las clulas preexistentes,
Meiosis asegura que la informacin gentica codificada en los cromosomas de
los padres puede ser compartida con su progenie, Mitosis asegura una
distribucin igual de material gentico a cada clula hija recin formada. A
travs del crecimiento, divisin y diferenciacin de las clulas, nuevos
organismos se desarrollan y el ciclo contina. El huevo del avestruz, de
aproximadamente 3 pulgadas de dimetro, es la clula ms grande conocida.
El embrin humano de 2 clulas, mostrado a la izquierda, es aproximadamente
el tamao del perodo al final de esta oracin.

No lleg como una gran revelacin de que los genes se encuentran en los
cromosomas. El paralelismo entre sus propiedades lo hizo bastante obvio. Los
genes vienen en pares, los cromosomas vienen en parejas. Alelos de un gen se
segregan, cromosomas homlogos se segregan. Los genes no enlazados se
someten a un surtido independiente, los cromosomas no homlogos
experimentan un surtido independiente. Estos paralelos se sealaron por
primera vez en 1903, y despus de ese tiempo no haba duda de que los
cromosomas son los portadores celulares de los genes. Pero los paralelos no
constituyen una prueba cientfica, ni un amplio acuerdo entre los cientficos. En
este captulo vamos a examinar algunas de las pruebas experimentales que se
encontraban en ese momento -y todava son- consideradas suficientes como
para probar la teora cromosmica de la herencia.

4.1 La estabilidad de los complementos cromosmicos

El ncleo de la clula se descubri por primera vez en 1831, pero no hasta la
dcada de 1860 fue entendido que la divisin nuclear casi siempre acompaa a
la divisin celular. La importancia del ncleo en la herencia fue reforzada por el
descubrimiento casi simultneo de que los ncleos de dos gametas se fusionan
en el proceso de fertilizacin. El siguiente gran avance se produjo una dcada
ms tarde con el descubrimiento de los cromosomas, fcilmente visualizable
en el microscopio de luz con el uso de ciertos colorantes. Unos pocos aos ms
tarde, se descubri que los cromosomas se segregaban mediante un proceso
qumico en las clulas hijas formadas por la divisin celular, as como en los
gametos formados por la divisin de las clulas reproductoras. Se observaron
tres regularidades importantes sobre el cromosomecomplejo (conjunto
completo de cromosomas) de plantas y animales.
1. El ncleo de cada clula somtica (una clula del cuerpo, en contraste con
una clula germinal o gameto) contiene una cantidad fija de cromosomas
tpicos de las especies particulares. Este nmero vara enormemente entre las
especies, y el nmero de cromosomas tiene poca relacin con la complejidad
del organismo (Tabla 4.1).
2. Los cromosomas en los ncleos de las clulas somticas suelen estar
presentes en parejas. Por ejemplo, los 46 cromosomas de los seres humanos
constan de 23 pares (Figura 4.1). Las clulas con ncleos que contienen dos
conjuntos similares de cromosomas se llaman diploide. Un individuo diploide
lleva dos copias allicas de cada gen presente en cada par de cromosomas. Los
cromosomas ocurren en pares porque un cromosoma de cada par deriva del
padre materno y el otro del padre paterno del organismo.

3. Los gametos que se unen en la fecundacin para producir las clulas

somticas diploides tienen ncleos que contienen slo un conjunto de
cromosomas, constituido por un miembro de cada par. Los ncleos gamticos
son haploides.
En los organismos multicelulares que se desarrollan a partir de clulas
individuales, la presencia del nmero cromosmico diploide en clulas
somticas y en el nmero cromosmico haploide en clulas germinales indica
que hay dos procesos de divisin nuclear que difieren en su resultado. Una de
estas (mitosis) mantiene el nmero cromosmico; El otro (meiosis) reduce el
nmero a la mitad. Estos dos procesos se examinan en las siguientes
secciones.

4.2 Mitosis

La mitosis es un proceso de divisin nuclear que asegura que cada

una de las dos clulas hija recibe un complejo diploide de cromosomas
idntico al complemento diploide de la clula madre. La mitosis suele
acompaarse de la citocinesis, el proceso en el que la clula se divide
para producir dos clulas hijas. El proceso bsico de la mitosis es
arduamente uniforme en todos los organismos:

1. Cada cromosoma ya est presente como una estructura duplicada al

comienzo de la divisin nuclear. (La duplicacin de cada cromosoma
coincide con la replicacin de la molcula de ADN que contiene.)

2. Cada cromosoma se divide longitudinalmente en mitades idnticas que se

separan entre s.

3. Las mitades separadas del cromosoma se mueven en direcciones opuestas,

y cada uno se convierte en incluido en uno de los dos ncleos de la hija que se
forman.

En una clula que no experimenta mitosis, los cromosomas son invisibles con
un microscopio de luz. Cada uno consiste en un hilo alargado demasiado
delgado para ser visto. Esta etapa del ciclo celular se llama interfase. En
la preparacin para la mitosis, el ADN en los cromosomas es replicado durante
un perodo de interfase llamado S (Figura 4.2), que significa sntesis de ADN. La
replicacin del ADN se acompaa de una duplicacin cromosmica.
Antes y despus de S, hay perodos, denominados G1 y G2,
respectivamente, en los que la replicacin del ADN no tiene lugar. El
ciclo celular (el ciclo de vida de una clula) se describe comnmente en
trminos de estos tres periodos de interfase seguidos por mitosis, M. El orden
de sucesos es, por tanto, G1 -> S -> G2 -> M, como se muestra en Figura 4.2.
En esta representacin, el perodo M tambin incluye la divisin del
citoplasma (citoquinesis) en dos partes aproximadamente iguales, cada una
de las cuales contiene un ncleo hija. El tiempo necesario para un ciclo de vida
completo vara con el tipo de clula; Es de 18-24 horas para la mayora de
las clulas en eucariotas superiores. La duracin relativa de los
diferentes perodos del ciclo tambin vara considerablemente con el
tipo de clula. La mitosis suele ser el perodo ms corto, que requiere
de 0,5-2 horas.

El propio ciclo celular est controlado por mecanismos que son esencialmente
idnticos en todos los eucariotas. Las transiciones de G1 en S y de G2 en M se
llaman puntos de control porque las transiciones se retrasan a menos que los
procesos clave se hayan completado (Figura 4.2). Por ejemplo, en el punto de
control G1 / S, debe haber transcurrido suficiente tiempo desde la
mitosis anterior (en algunos tipos de clulas) o (en otros tipos de
clulas) la clula debe haber alcanzado el tamao suficiente para que
se inicie la replicacin del ADN. De forma similar, el punto de control
G2 / M requiere que la replicacin del ADN y la reparacin de cualquier
dao al ADN se complete para que comience la fase M. Ambos puntos de
control principales se regulan en una manera similar y el uso m ake de una
protena quinasa especializada (llamada la subunidad p34 quinasa en la Figura
4.2) que regula la actividad de las protenas diana mediante la unin de grupos
fosfato (fosforilacin). La p34 quinasa es uno de los numerosos tipos de
protenas quinasas que se utilizan para regular los procesos celulares. Las
formas mutantes de muchos de estos han sido implicadas en cnceres
hereditarios, como veremos en el captulo 15. Para activarse, la subunidad de
polipptido p34 debe combinarse con varias otras cadenas polipeptdicas
conocidas como ciclinas debido a que su abundancia est en fase con el ciclo
celular. En el punto de control G1 / S, un conjunto de ciclinas se combina con la
subunidad p34 para producir la quinasa activa que desencadena la replicacin
del ADN y otros eventos del perodo S. De forma similar, en el punto de control
G2 / M, un segundo conjunto de ciclinas se combina con la subunidad p34 para
producir la quinasa activa que inicia la condensacin de los cromosomas, la
desintegracin de la envolvente nuclear y la reorganizacin del citoesqueleto
en preparacin para la citocinesis.
En la figura 4.3 se ilustran las caractersticas esenciales del comportamiento
cromosmico en la mitosis. La mitosis se divide convencionalmente en cuatro
etapas: profase, metafase, anafase y telofase. (Si tiene problemas para
recordar la orden, puede hacer trocitos de memoria con "guisantes que hacen
horribles tartas".) Las etapas tienen las siguientes caractersticas:
 1. Profase: En la interfase, los cromosomas tienen la forma de filamentos
extendidos y no pueden ser vistos con un microscopio de luz como
cuerpos discretos. Excepto por la presencia de uno o ms cuerpos
oscuros conspicuos (nucleolos), el ncleo tiene un aspecto difuso y
granular. El comienzo de la profase est marcado por la
condensacin de los cromosomas para formar hilos visiblemente
distintos dentro del ncleo. Cada cromosoma ya es
longitudinalmente doble, consistente en dos subunidades
estrechamente asociadas llamadas cromtidas. La naturaleza
longitudinalmente bipartita de cada cromosoma se ve fcilmente ms
adelante en la profase. Cada par de cromtides es el producto de la
duplicacin de un cromosoma en el perodo S de interfase. Las
cromtides de un par se mantienen unidas en una regin especfica
del cromosoma llamada centrmero. A medida que progresa la
profase, los cromosomas se vuelven ms cortos y ms gruesos como
resultado del intrincado enrollamiento (Captulo 8). Al final de la
profase, los nuclolos desaparecen y la envoltura nuclear, una
membrana que rodea al ncleo, se desintegra abruptamente.
2. Metafase Al comienzo de la metafase, se forma el huso mittico. El
huso es una estructura bipolar que consiste en haces fibrosos de
microtbulos que se extienden a travs de la clula entre los polos del
husillo. Las fibras del huso se unen a cada cromosoma en la regin del
centrmero en una estructura tcnicamente conocida como el cinetocoro.
Despus de que los cromosomas se unen a las fibras del huso, se mueven
hacia el centro de la clula hasta que todos los cinetocoros se encuentran en
un plano imaginario equidistante de los polos del huso. Este plano imaginario
se llama placa metafsica. Alineados en la placa metafsica, los cromosomas
alcanzan su mxima contraccin y son ms fciles de contar y examinan las
diferencias de morfologa.
La alineacin cromosmica adecuada es un importante punto de control del
control del ciclo celular en metafase tanto en la mitosis como en la meiosis. En
una clula en la que un cromosoma est unido a un solo polo del huso, la
terminacin de la metafase se retrasa. Al agarrar tal cromosoma con una aguja
de micromanipulacin y tirando, se puede imitar la tensin que el cromosoma
experimentara si estuviera unido en ambos lados; La tensin mecnica
permite pasar el punto de control de metafase y la clula entra en la siguiente
etapa de divisin. La seal para la alineacin cromosmica proviene del
cinetocoro, y la naturaleza qumica de la seal parece ser la desfosforilacin de
ciertas protenas asociadas al cinetocoro. El papel del cinetocoro se demuestra
por el hallazgo de que la metafase no se retrasa por un cromosoma no unido
cuyo cinetocoro ha sido destruido por un rayo lser enfocado. El papel de la
desfosforilacin se demuestra mediante el uso de un anticuerpo que reacciona
especficamente con algunas protenas del cinetocoro slo cuando son
Fosforilados. Los kinetochores no unidos se combinan fuertemente con el
anticuerpo, pero la unin al huso debilita la reaccin. En los cromosomas que
se han separado Quirrgicamente del husillo, reaparece la reaccin de
anticuerpo con el cinetocoro. A travs del mecanismo de sealizacin, cuando
todos los cinetocoros estn bajo tensin y alineados en la placa metafsica, se
pasa el punto de control de metafase y la clula contina el proceso de
divisin.

3. Anafase: En la anafase, los centrmeros se dividen longitudinalmente, y las

dos cromtidas hermanas de cada cromosoma se mueven para alojar polos
opuestos del huso. Una vez que los centrmeros se dividen, cada cromtida de
la hermana se considera como un cromosoma separado por derecho propio. El
movimiento cromosmico resulta en parte del acortamiento progresivo de las
fibras del huso unidas a los centromeros, que empuja los cromosomas en
direcciones opuestas hacia los polos y (usualmente) en parte de un
alargamiento temporal de la celda divisoria en una direccin paralela al husillo.
Al completar la anafase, los cromosomas se encuentran en dos grupos cerca de
los polos opuestos del huso. Cada grupo contiene el mismo nmero de
cromosomas que estaba presente en el ncleo de interfase original.

4. Telfase: En la telfase, se forma una envoltura nuclear alrededor de cada

grupo compacto de cromosomas, se forman nucleolos y el huso desaparece.
Los cromosomas sufren una inversin de la condensacin hasta que ya no son
visibles como entidades discretas. Los dos ncleos secundarios asumen
lentamente una apariencia tpica de interfase, ya que el citoplasma de la clula
se divide en dos por medio de un surco que se profundiza gradualmente
alrededor de la periferia (en las plantas, una nueva pared celular se sintetiza
entre las clulas hijas y las separa).
Meiosis
La meiosis es el modo de divisin celular que da lugar a clulas hija haploides
que contienen slo un miembro de cada par de cromosomas. El proceso genera
diversidad gentica porque cada clula hija contiene un conjunto diferente de
alelos. Meiosis consiste en dos divisiones nucleares sucesivas. En la figura 4.4
se presenta una visin general del comportamiento cromosmico.
1. Antes de la primera divisin nuclear, los miembros de cada par de
cromosomas homlogos se asocian estrechamente a lo largo de su
longitud (Figura 4.4). Cada miembro del par ya est replicado y consta de
dos cromtides hermanas unidas en el centrmero. El emparejamiento de los
cromosomas homlogos, por lo tanto, produce una estructura de cuatro caras.
 2. En la primera divisin nuclear, los cromosomas homlogos estn
separados unos de otros, los miembros de cada par van a polos opuestos
del husillo (Figura 4.4B). Cada cromosoma hija consiste en dos
cromatides unidos a un centrmero comn (Figura 4.4C), por lo que
ambos de los dos ncleos que se forman contienen un conjunto haploide
de cromosomas. (Los cromosomas se enumeran contando el nmero de
centrmeros, no el nmero de cromtidas.)

3. La segunda divisin nuclear se asemeja a una divisin mittica, pero no hay

replicacin del ADN. En la metafase, los cromosomas se alinean en la placa
metafsica; Y en la anafase, las cromtidas de cada cromosoma se separan en
ncleos hija opuestos (Figura 4.4D). El efecto neto de las dos divisiones en la
meiosis es la creacin de cuatro ncleos hijos haploides, cada uno de los cuales
contiene el equivalente de una cromtida de una sola hermana de cada par de
cromosomas homlogos (Figura 4.4E).
La Figura 4.4 no muestra que los cromosomas homlogos pareados puedan
intercambiar genes. Los intercambios dan como resultado la formacin de
cromosomas que consisten en segmentos de un cromosoma homlogo
mezclado con segmentos del otro. En la figura 4.4, los cromosomas
intercambiados seran representados como segmentos de color alterno. El
proceso de intercambio es una de las caractersticas crticas de la meiosis, y
ser examinado en la siguiente seccin.

En los animales, la meiosis tiene lugar en clulas especficas llamadas

meicitos, un trmino general para los ovocitos primarios y los espermatocitos
en los tejidos formadores de gametos (Figura 4.5). Los ovocitos forman clulas
de huevo, y los espermatocitos forman clulas de esperma. Aunque el proceso
de meiosis es similar en todos los organismos sexualmente reproductores, en
la hembra de animales y plantas, slo uno de los cuatro productos se convierte
en una clula funcional mientras que los otros tres se desintegran. En los
animales, los productos de la meiosis forman esperma u huevos. En las
plantas, la situacin es un poco ms complicada:
1. Los productos de la meiosis tpicamente forman esporas, las cuales
experimentan una o ms divisiones mitticas para producir un
organismo haploide de gametofito. El gametofito produce gametos por
divisin mittica de un ncleo haploide (Figura 4,6).
2. La fusin de gametos haploides crea un zigoto diploide que se desarrolla en
la planta esporoftica, que experimenta meiosis para producir esporas y as
reinicia el ciclo.
La meiosis es un proceso ms complejo y considerablemente ms largo que la
mitosis y por lo general
Requiere das o incluso semanas. Todo el proceso de la meiosis se ilustra en su
contexto celular en la Figura 4.7. La esencia es que la meiosis consiste en dos
divisiones del ncleo, pero slo una duplicacin de los cromosomas. Las
divisiones nucleares -la primera divisin meitica y la segunda divisin
meitica- se pueden separar en una secuencia de etapas similares a las
utilizadas para describir la mitosis. Los eventos distintivos de este importante
proceso ocurren durante la primera divisin del ncleo. Estos eventos se
describen en la siguiente seccin.

La Primera Divisin Meitica: Reduccin

La primera divisin meitica (meiosis I) se denomina a veces divisin reductora
porque divide el nmero de cromosomas por la mitad. Por analoga con la
mitosis, la primera divisin meitica se puede dividir en cuatro etapas, que se
llaman prfase I, metafase I, anafase I y telfase I. Estas etapas son
generalmente ms complejas que sus contrapartes en la mitosis. Las etapas y
subescalas se pueden visualizar con referencia a las figuras 4.7 y 4.8.
1. Prophase I : Esta larga etapa dura varios das en la mayora de los
organismos superiores. Se divide comnmente en cinco subtemas: leptotene,
zygotene, pachytene, diplotene, y diakinesis. Estos trminos describen la
aparicin de los cromosomas en cada subescala.
En el leptoteno, que literalmente significa "hilo delgado", los
cromosomas primero se hacen visibles como estructuras largas, hiladas. Los
pares de cromtidas hermanas se pueden distinguir por microscopa
electrnica. En esta fase inicial de la condensacin cromosmica, numerosos
grnulos densos aparecen a intervalos irregulares a lo largo de su longitud.
Estas contracciones localizadas, llamadas crommeros, tienen un nmero,
tamao y posicin caractersticos en un cromosoma dado (Figura 4.8A).

El perodo zigotnico est marcado por el apareamiento lateral, o sinapsis,

de los cromosomas homlogos, comenzando en las puntas de los cromosomas.
(El trmino zygotene significa "hilos emparejados"). A medida que el
emparejamiento contina en forma de cremallera a lo largo de la longitud de
los cromosomas, da como resultado una asociacin precisa de crommero por
crommero (Figura 4.8B y F). Cada par de cromosomas homlogos sinapsis se
denomina bivalente.

A lo largo de pachytene (Figura 4.8C y D), que literalmente significa "hilo

grueso", los cromosomas continan acortando y engrosando (Figura 4.7). Por
pachiteno tardo, a veces se puede ver que cada bivalente (es decir, cada
conjunto de cromosomas pareados) consiste en realidad en una ttrada de
cuatro cromtidas, pero las dos cromtidas hermanas de cada cromosoma
suelen estar yuxtapuestas muy apretadamente. El intercambio gentico por
medio del cruce se produce durante el pachiteno, pero los intercambios no se
hacen evidentes en el microscopio hasta la transicin al diploteno. En la Figura
4.7, los sitios de intercambio estn indicados por los puntos en los que las
cromtidas de diferentes colores se cruzan entre s.

Al inicio del diploteno, los cromosomas sinapsos comienzan a separarse.

Diplotene significa "hilo doble", y los cromosomas diploteno son claramente
dobles (Figura 4.8E y F). Los cromosomas homlogos permanecen unidos a
intervalos por conexiones cruzadas resultantes del cruce. Cada conexin
cruzada se denomina chiasma (plural, chiasmata) y est formada por una
ruptura y re-unin entre cromtidas no hermanas. Como se muestra en el
cromosoma y el diagrama de la figura 4.9, un quiasma resulta del intercambio
fsico entre los cromtomos de los cromosomas homlogos. En la meiosis
normal, cada bivalente suele tener al menos un quiasma, y los bivalentes de
los cromosomas largos a menudo tienen tres o ms quiasmas.
El perodo final de la profase I es la diacinesis, en la que los cromosomas
homlogos parecen repeler unos a otros y los segmentos no conectados por
chiasmata se separan. (Diakinesis significa "apartarse"). Es en esta subescala
que los cromosomas alcanzan su mxima condensacin (Figura 4.8E). Los
cromosomas homlogos en cada bivalente permanecen conectados por al
menos un quiasma, el cual persiste hasta la primera anafase meitica. Cerca
del final de la diaquinesia, se inicia la formacin de un huso y se rompe la
envoltura nuclear.

2. Metafase I Cada bivalente se maniobra en una posicin a horcajadas de la

placa metafsica con los centromeres de los cromosomas homlogos
orientados en sentido opuesto
Polos del husillo (figura 4.10A). La orientacin de los centrmeros determina
qu miembro de cada bivalente se mover posteriormente a cada polo y si el
centro materno o paternal est orientado hacia un polo particular es
completamente una cuestin de azar. Como se muestra en la Figura 4.11, los
bivalentes formados a partir de pares no cromatmicos de cromosomas se
pueden orientar en la placa metafsica de cualquiera de dos maneras. Si cada
uno de los cromosomas no homlogos es heterocigtico para un par de alelos,
entonces un tipo de alineacin resulta en gamas A B y a b, mientras que el otro
tipo resulta en gamas A b y B (Figura 4.11). Debido a que la alineacin
metafsica tiene lugar al azar, los dos tipos de alineacin -y por lo tanto los
cuatro tipos de gametos- son igualmente frecuentes. La proporcin de los
cuatro tipos de gametos es de 1: 1: 1: 1, lo que significa que los pares de alelos
A, a y B, b se someten a un surtido independiente. Es decir, Los genes de
diferentes cromosomas se someten a un surtido independiente porque
los cromosomas no homlogos se alinean al azar en la placa
metafsica de la meiosis I.
3. Anafase I En esta etapa, los cromosomas homlogos, cada uno compuesto
de dos cromtides unidos en un centrmero no dividido, separados entre s y
se mueven a polos opuestos del eje (Figura 4.1 OB). La separacin
cromosmica en la anafase es la base celular de la segregacin de los alelos:
La separacin fsica de los cromosomas homlogos en la anafase es la base
fsica del principio de segregacin de Mendel.

Tenga en cuenta, sin embargo, que los centrmeros de las cromtidas

hermanas estn firmemente pegados y se comportan como una sola unidad.
Una protena especfica, que en la levadura en ciernes se llama la protena
Rec8, parece estar implicada en la cohesin de los centrmeros hermanos. Esta
protena aparece en los centrmeros y los brazos cromosmicos adyacentes
durante la fase S y persiste durante la meiosis I. Slo desaparece en la anafase
II, cuando se pierde la cohesin de la hermana y se separan los centrmeros de
la hermana.

4. Telfase I Al completarse la anafase I, un conjunto haploide de cromosomas

que consiste en un homlogo de cada bivalente est situado cerca de cada
polo del huso (Figura 4.6). En la telfase, el huso se rompe, y, dependiendo de
los especies, una envoltura nuclear brevemente se forma alrededor de cada
grupo de cromosomas o los cromosomas entran en la segunda divisin
meitica despus de slo un desenrollamiento limitado.

La Segunda Divisin Meitica: Ecuacin

La segunda divisin meitica (meiosis II) se denomina a veces divisin
ecuacional porque el nmero de cromosomas permanece igual en cada
clula antes y despus de la segunda divisin. En algunas especies, los
cromosomas pasan directamente de la telfase I a la profase II sin prdida de
condensacin; En otros, hay una breve pausa entre las dos divisiones meiticas
y los cromosomas pueden "decondensarse" un poco. La replicacin
cromosmica nunca tiene lugar entre las dos divisiones; Los cromosomas
presentes al principio de la segunda divisin son idnticos a los presentes al
final de la primera.
Despus de una profase corta (profase II) y la formacin de husos de
segunda divisin, los centrmeros de los cromosomas de cada ncleo se
alinean en el plano central del huso en la metafase II (Figura 4. COI). En
la anafase II, se observa la estrecha coherencia fsica de los
centrmeros de las cromtidas hermanas.
Como resultado, los centrmeros hermanos parecen partir longitudinalmente, y
las cromtidas de cada cromosoma se mueven a polos opuestos del eje (Figura
4.10D). Una vez que los centrmeros se dividieron en la anafase II, cada
cromtida se considera un cromosoma separado.

La telofase II (figura 4.10E) est marcada por una transicin a la condicin de

interfase de los cromosomas en los cuatro ncleos haploides, acompaada por
la divisin del citoplasma. As, la segunda divisin meitica se parece
superficialmente a una divisin mittica. Sin embargo, hay una diferencia
importante:
Las cromtidas de un cromosoma no suelen ser genticamente idnticas
hermanas a lo largo de toda su longitud a causa de cruzamiento asociado con
la formacin de chiasmata durante la profase de la primera divisin.

4.4 Cromosomas y Herencia

En los primeros aos de la gentica, la evidencia ms fuerte de que los genes
estn ubicados en los cromosomas proceda de los principios de Mendel de
segregacin y surtido independiente, que eran completamente coherentes con
el comportamiento de los cromosomas durante la meiosis. Pero la primera
prueba experimental rigurosa de que los genes son parte de cromosomas se
obtuvo en experimentos relacionados con el patrn de transmisin del sexo-
cromosoma, los cromosomas responsables de la determinacin de los sexos
separados en algunas plantas y en casi todos los animales. Examinaremos
estos resultados en esta seccin.
Determinacin cromosmica del sexo
Los cromosomas sexuales son una excepcin a la regla de que todos los
cromosomas de organismos diploides estn presentes en pares de homlogos
morfolgicamente similares. Tan pronto como 1891, el anlisis microscpico
haba demostrado que uno de los cromosomas en los machos de algunas
especies de insectos no tiene un homlogo. Este cromosoma no pareado se
llam cromosoma X, y estaba presente en todas las clulas somticas de los
machos, pero slo en la mitad de los espermatozoides. La significacin
biolgica de estas observaciones se hizo evidente cuando las hembras de la
misma especie se demostraron tener dos cromosomas X.
En otras especies en las que las hembras tienen dos cromosomas X, el macho
tiene un cromosoma X junto con un cromosoma morfolgicamente inigualable.
El cromosoma inigualable se conoce como cromosoma Y, y se empareja con el
cromosoma X durante la meiosis en los machos, generalmente a lo largo de
slo una parte de su longitud debido a Una regin limitada de homologa. La
diferencia en la constitucin cromosmica entre machos y hembras es un
mecanismo cromosmico para determinar el sexo en el momento de la
fertilizacin. Mientras que cada clula huevo contiene un cromosoma X, la
mitad de los espermatozoides contiene un cromosoma X y el resto contiene un
cromosoma Y. La fertilizacin de un vulo que lleva X por un espermatozoide X
lleva a un cigoto XX, que normalmente se desarrolla en una hembra; Y la
fertilizacin por un espermatozoide en Y da como resultado un cigoto XY, que
normalmente se desarrolla en un macho (Figura 4.12). El resultado es un
patrn cruzado de herencia del cromosoma X en el que un macho recibe su
cromosoma X de su madre y lo transmite slo a sus hijas.

El tipo XX-XY de hemoglobina cromosmica se encuentra en mamferos,

incluyendo seres humanos, en muchos insectos y en otros animales, as como
en algunas plantas con flores. La hembra se denomina sexo homogametic
porque slo se produce un tipo de gamete (X-bearing), y el macho se llama el
sexo heterogametic porque dos tipos diferentes de gametos (Xbearing y Y-
bearing) se producen. Cuando la unin de los gametos en la fecundacin es
aleatoria, se espera una proporcin de sexos en la fertilizacin de 1: 1 porque
los machos producen un nmero igual de espermatozoides portadores de X y
portadores de Y. Los cromosomas X e Y juntos constituyen los cromosomas
sexuales; Este trmino los distingue de otros pares de cromosomas, que son
llamados autosomas. Aunque los cromosomas sexuales controlan el cambio de
desarrollo que determina las etapas ms tempranas del desarrollo femenino o
masculino, el propio proceso de desarrollo requiere muchos genes dispersos a
travs del genoma, incluyendo genes en los autosomas. El cromosoma X
tambin contiene muchos genes con funciones no relacionadas con la
diferenciacin sexual, como veremos en la siguiente seccin. En la mayora de
los organismos, incluidos los seres humanos, el cromosoma Y lleva pocos genes
distintos de los relacionados con la determinacin masculina.
Herencia relacionada con X
La evidencia convincente de que los genes estn ubicados en los cromosomas
vino del estudio de un gen de Drosophila para los ojos blancos, que
demostraron estar presentes en el cromosoma X. Recordemos que en las
cruces de Mendel, no importa cul rasgo estaba presente en el progenitor
masculino y cul en el progenitor femenino. Los cruzamientos recprocos dieron
el mismo resultado. Una de las primeras excepciones a esta regla fue
encontrada por Thomas Hunt Morgan en 1910 en un estudio temprano de una
mosca de fruta mutante que tena ojos blancos. Aunque los ojos blancos
pueden resultar de ciertas combinaciones de genes autosmicos que eliminan
los pigmentos individualmente, la mutacin del ojo blanco que Morgan estudi
da como resultado un bloqueo metablico Que golpea hacia fuera ambos
pigmentos simultneamente. (El gen codifica un tipo de protena
transmembrana llamada transportador ABC que es necesario para transportar
los precursores del pigmento ocular en las clulas pigmentarias).

El estudio de Morgan comenz con un solo hombre de ojos blancos que

apareci en una poblacin de laboratorio de tipo salvaje que haba sido
mantenida por muchas generaciones. En un apareamiento de este macho con
hembras de tipo salvaje, todos los F, progenie de ambos sexos tenan ojos
rojos, lo que demostr que el alelo para los ojos blancos es recesivo. En la
progenie F2 del apareamiento de F [machos con hembras, Morgan observ
2459 hembras de ojos rojos, 1011 hombres redimidos y 782 hombres de ojos
blancos. Estaba claro que el fenotipo de ojos blancos estaba conectado de
alguna manera con el sexo, porque todas las moscas de ojos blancos eran
machos.
Por otro lado, los ojos blancos no estaban restringidos a los machos. Por
ejemplo, cuando las hembras F1 de ojos rojos de la cruz del tipo salvaje
(macho) X (hembra) blanco fueron retrocruzadas con sus padres de ojos
blancos, la progenie consista en hembras de ojos rojos y de ojos blancos y de
ojos rojos y de ojos blancos en aproximadamente Nmeros iguales.
Una observacin clave vino del apareamiento de hembras de ojos blancos con
machos de tipo salvaje. Toda la progenie femenina tena ojos de tipo salvaje,
pero toda la progenie masculina tena ojos blancos. Este es el recproco de la
cruz original de wildtype (mujer X blanco (hombre), que haba dado slo a las
hembras de tipo salvaje y machos de tipo salvaje, por lo que los cruzamientos
recprocos dieron resultados diferentes.
Morgan se dio cuenta de que los cruces recprocos daran resultados diferentes
si el alelo de los ojos blancos estuviera presente en el cromosoma X. Se dice
que un gen en el cromosoma X est unido a X. El complemento cromosmico
normal de Drosophila melanogaster se muestra en la Figura 4.14. Las hembras
tienen un complemento cromosmico XX, mientras que los machos son XY. La
hiptesis de Morgan fue que un cromosoma X contiene un alelo w + de tipo
salvaje o un alelo w mutante y que el cromosoma Y no contiene una
contraparte del gen blanco. Usando el alelo blanco presente en un cromosoma
X para representar todo el cromosoma X, podemos escribir el genotipo de un
macho de ojos blancos como wY y el de un macho de tipo salvaje como w + Y.
Debido a que el alelo w es recesivo, las hembras de ojos negros son de
genotipo w w y las hembras de tipo salvaje son heterocigotas w + w o
homocigotas w + w +. Las implicaciones de este modelo para los cruces
recprocos se muestran en la Figura 4.15. El cruzamiento de la especie X
(hombre) es Cross A, y el de la especie M. X wildtype H. es Cross B. El modo de
herencia X-linked da cuenta de las diferentes proporciones fenotpicas
observadas en la progenie Fi y F2 De las cruces. Las caractersticas de la
herencia ligada a X pueden resumirse de la siguiente manera:

1. Los cruzamientos recprocos que resultan en diferentes proporciones

fenotpicas en los sexos a menudo indican la herencia ligada al cromosoma X.
En el caso de los ojos blancos en Drosophila, el cruce de una hembra de ojos
rojos con un macho de ojos blancos rinde toda progenie redimida (Figura 4.15,
Cruz A), mientras que la cruz de una hembra de ojos blancos con una hembra
de ojos rojos El macho produce progenie hembra de ojos rojos y progenie
masculina de ojos blancos (Figura 4.15, Cruz B).

2. Las hembras heterocigticas transmiten cada alelo ligado a X a

aproximadamente la mitad de sus hijas y la mitad de sus hijos; Esto se ilustra
en la generacin F2 de la Cruz B en la Figura 4.15.

3. Los varones que heredan un alelo recesivo ligado a X presentan el rasgo

recesivo porque el cromosoma Y no contiene una contrapartida de tipo salvaje
del gen. Los varones afectados transmiten el alelo recesivo a todas sus hijas
pero ninguno de sus hijos; Este principio se ilustra en la F, generacin de la
Cruz A en la Figura 4.15. Cualquier varn que no est afectado debe llevar el
alelo de tipo salvaje en su cromosoma X.

La esencia de la herencia ligada a X se captura en el cuadrado de Punnett en la

figura 4.16; Un varn transmite su cromosoma X slo a sus hijas, mientras que
una hembra transmite un cromosoma X a una descendencia de ambos sexos.
Pedigr Caractersticas de la herencia humana ligada a X

Un ejemplo de un rasgo humano con un patrn de herencia ligado a X es la

hemofilia A, un trastorno grave de la coagulacin sangunea determinado por
un alelo recesivo. Las personas afectadas carecen de una protena de
coagulacin de la sangre llamada factor VIII que se necesita para la
coagulacin normal y sufren sangrado excesivo, a menudo mortal, despus de
la lesin. Un famoso pedigr de hemofilia comienza con la Reina Victoria de
Inglaterra (Figura 4.17). Uno de sus hijos, Leopold, era hemoflico y dos de sus
hijas eran portadoras heterocigticas del gen. Dos de las nietas de Victoria
tambin eran portadoras, y por el matrimonio introdujeron el gen en las
familias reales de Rusia y de Espaa. El heredero del trono ruso de los
Romanoff, Tsarevich Alexis, fue afligido con la condicin. Hered el gen de su
madre, la zarina Alexandra, una de las nietas de Victoria. El zar, la zarina,
Alexis y sus cuatro hermanas fueron ejecutados por los bolcheviques rusos en
la revolucin de 1918. Irnicamente, la actual familia real de Inglaterra es
descendiente de un hijo de Victoria y est libre de la enfermedad.

La herencia ligada al cromosoma X en los pedigrances humanos muestra varias

caractersticas que lo distinguen de otros modos de transmisin gentica.

1. Para cualquier rasgo raro debido a un alelo recesivo ligado a X, los individuos
afectados son
Exclusivamente o casi exclusivamente masculino. Hay un exceso de machos
porque las hembras portadoras de la rara recesiva ligada a X son casi
exclusivamente heterocigotos y por lo tanto no expresan el fenotipo mutante.

2. Los varones afectados que se reproducen tienen hijos normales. Esto se

deduce del hecho de que un varn transmite su cromosoma X slo a sus hijas.

3. Una mujer cuyo padre fue afectado tiene hijos normales e hijos afectados en
la proporcin 1: 1. Esto es cierto porque cualquier hija de un varn afectado
debe ser heterocigtica para el alelo recesivo.

Heterogametic Females
En algunos organismos, los sexos homogametic y heterogmicos son
invertidos; Es decir, los machos son XX y las hembras son XY. Este tipo de
determinacin del sexo se encuentra en aves, en algunos reptiles y peces, y en
polillas y mariposas. La reversin de XX y XY en los sexos resulta en un patrn
opuesto de herencia no recproca de genes ligados a X. Para distinguir la
determinacin del sexo en estos organismos del mecanismo habitual XX-XY, la
constitucin del cromosoma sexual en el sexo homogametic se designa WW y
que en el sexo heterogneo como WZ. Por lo tanto, en organismos con
hembras heterogneas, la constitucin cromosmica de las hembras se
denomina WZ y la del macho WW.

Un ejemplo especfico de herencia ligada a W en pollos se muestra n en la

Figura 4.18. Algunas razas de pollos tienen plumas con bandas transversales
alternas de color claro y oscuro, resultando en un fenotipo conocido como
barrado. En otras razas las plumas estn uniformemente coloreadas y no
barridas. Los cruzamientos recprocos entre razas autnticas y reproductoras
no barradas dan los resultados mostrados, que indican que el gen que
determina la restriccin debe ser dominante y debe ubicarse en el cromosoma
W.

La no disyuncin como prueba de la teora cromosmica de la herencia

El paralelismo entre la herencia de la mutacin blanca de Drosophila y la

transmisin gentica del cromosoma X apoy la teora cromosmica de la
herencia de que los genes son parte de los cromosomas. Otros experimentos
con Drosophila proporcionaron la prueba definitiva. Uno de los estudiantes de
Morgan, Calvin Bridges, descubri raras excepciones al patrn esperado de
herencia en cruces con varios genes ligados al cromosoma X. Por ejemplo,
cuando las hembras de Drosophila de ojos blancos estaban apareadas con
machos de ojos rojos, la mayor parte de la progenie consista en las esperadas
hembras de ojos rojos y machos de ojos blancos. Sin embargo, alrededor de 1
en cada 2000 F x moscas fue una excepcin, ya sea una hembra de ojos
blancos o un varn redeyed. Los puentes demostraron que estos raros
descendientes excepcionales resultaron del fallo ocasional de los dos
cromosomas X en la madre para separarse unos de otros durante el fenmeno
de la meiosis llamado no disyuncin. La consecuencia de la no disyuncin del
cromosoma X es la formacin de algunos vulos w con dos cromosomas X y
otros sin ninguno. Cuatro clases de cigotos se esperan de la fecundacin de
estos huevos anormales al (Figura 4.19). Los animales sin cromosoma X no se
detectan porque los embriones que carecen de una X no son viables; Del
mismo modo, la mayora de la progenie con tres cromosomas X mueren
tempranamente en el desarrollo. El examen microscpico de los cromosomas
de la progenie excepcional de la cruz blanca 5 X wildtype S demostr que las
hembras de ojos blancos excepcionales tenan dos cromosomas X ms un
cromosoma Y, y los excepcionales hombres de ojos rojos tenan un solo X pero
carecan de un Y .Estos ltimos, con una constitucin del cromosoma-sexo
denotada XO, eran machos estriles.

Estos y otros experimentos relacionados demostraron de manera concluyente

la validez de la teora cromosmica de la herencia.

Teora cromosmica de la herencia: Los genes se encuentran

fsicamente dentro de los cromosomas.
La evidencia de Bridges para la teora del cromosoma era que el
comportamiento excepcional por parte de los cromosomas es precisamente
paralelo por la herencia excepcional de sus genes. Esta prueba de la teora del
cromosoma figura entre los experimentos ms importantes y elegantes en
gentica.
Determinacin del sexo en Drosophila
En el mecanismo XX-XY de determinacin del sexo, el cromosoma Y est
asociado con el macho. En algunos organismos, incluyendo seres humanos,
esta asociacin se produce porque la presencia del cromosoma Y desencadena
eventos en el desarrollo embrionario que dan lugar a las caractersticas
sexuales masculinas. Drosophila es inusual entre los organismos con una
determinacin del tipo XX-XY de sexo porque el cromosoma de Y, aunque
asociado con la masculinidad, no es maledetermining. Esto se demuestra por el
hallazgo, mostrado en la Figura 4.20, que en Drosophila, los embriones XXY se
convierten en hembras frtiles morfolgicamente normales, mientras que los
embriones XO se desarrollan en machos morfolgicamente normales, pero
estriles. (El O est escrito en la frmula XO para enfatizar que falta un
cromosoma sexual). La esterilidad de los machos XO muestra que el
cromosoma Y, aunque no es necesario para el desarrollo masculino,
Es esencial para la fertilidad masculina; De hecho, el cromosoma Y Drosophila
contiene seis genes necesarios para la formacin de esperma normal.
La determinacin gentica del sexo en Drosophila depende del nmero de
cromosomas X presentes en una mosca individual en comparacin con el
nmero de conjuntos de autosomas. En Drosophila, un conjunto haploide de
auto somes consta de una copia de cada uno de los cromosomas 2, 3 y 4 (los
autosomas). Las moscas diploides normales tienen dos conjuntos haploides de
autosomas (un par homlogo cada uno de los cromosomas 2, 3 y 4) ms dos
cromosomas X (en una hembra) o uno X y un cromosoma Y (en un macho). Si
utilizamos A para representar un complemento haploide completo de
autosomas, entonces

A = crom osom e 2
+ Crom osom e 3
+ Cromosoma 4

En estos trminos, un macho normal tiene el complemento cromosmico XYAA,

y la relacin de cromosomas X a conjuntos de autosomas (la relacin X / A) es
igual a IX; 2A o 1: 2. Las hembras normales tienen el complemento
cromosmico XXAA, por lo que la relacin X / A femenina es 2X: 2A o 1: 1.
Mosca con relaciones X / A menores que 1: 2 (por ejemplo, XAAA, que Significa
un cromosoma X y tres conjuntos de autosomas) son machos; Aquellos con
relaciones X / A mayores de 1: 1 (por ejemplo, XXXAA, que implica tres
cromosomas X y dos conjuntos de autosomas) son mujeres. Las relaciones
intermedias X / A tales como 2: 3 (por ejemplo, XXAAA, con dos cromosomas X
y tres conjuntos de autosomas) se desarrollan como intersexes con algunas
caractersticas de cada sexo.
La diferenciacin sexual en Drosophila est controlada por un gen llamado Sex-
lethal (Sxl). El gen Sxl codifica dos protenas algo diferentes, dependiendo de si
se incluye una regin codificante especfica para el varn en el ARN mensajero.
Adems, la cantidad de protena Sxl presente en el embrin temprano regula la
expresin del gen Sxl mediante un mecanismo de retroalimentacin. A niveles
bajos de protena Sxl, se forma la forma masculina especfica de la protena y
se cierra la expresin adicional del gen. A niveles ms altos de la protena Sxl,
se forma la forma femenina especfica de la protena y el gen sigue
expresndose. De alguna manera desconocida, los productos de ciertos genes
son sensibles a la relacin X / A y determinan la cantidad de protena Sxl
disponible para regular el gen Sxl. Los genes para detectar el nmero de
cromosomas X se denominan genes numeradores porque determinan el
"numerador" de la relacin X / A y los genes para detectar el nmero de
conjuntos de autosomas son conocidos como genes denominadores porque
determinan el "denominador" En la relacin X / A. En los machos normales (X /
A = 1: 2), hay muy poca protena Sxl y el gen Sxl se cierra; En ausencia de la
expresin de Sxl, la diferenciacin sexual sigue la va masculina, que es la va
"predeterminada". En hembras normales (X / A = 1: 1), existe suficiente
protena Sxl que el gen Sxl contina expresndose. La expresin continua del
gen Sxl inicia una cascada de eventos genticos, cada uno de los genes de la
cascada que controla uno o ms de otros genes aguas abajo, y da como
resultado la expresin de productos gnicos especficos de la hembra y la
represin de productos gnicos especficos para el hombre. En situaciones
intermedias, en las que la relacin X / A est entre 1: 2 y 1: 1, se exprimen
algunos genes especficos de cada sexo, y el fenotipo sexual resultante es
ambiguo, un intersexo. La protena Sxl es una protena de unin al ARN que
determina el tipo de ARNm producido por algunos de los genes que determinan
el sexo. Un esquema del control gentico de la determinacin del sexo en
Drosophila se muestra en la Figura 4.20.

4.5 Probabilidad en la prediccin de las distribuciones de progenie

La transmisin gentica incluye un gran componente del azar. Un gameto

particular de un organismo Aa puede o no incluir el alelo A, dependiendo del
azar. Un gameto particular de un organismo Aa Bb puede incluir o no los alelos
A y B, dependiendo de la orientacin fortuita de los cromosomas en la placa de
metafase I. Las proporciones genticas resultan no slo del surtido casual de
genes en gametos, sino tambin de la combinacin casual de gametos en
zigotos. Aunque las predicciones exactas no son posibles para ningn evento
en particular, es posible determinar la probabilidad de que un evento particular
se realice, como vimos en el Captulo 3. En esta seccin, consideramos algunos
de los mtodos de probabilidad utilizados en la interpretacin de los datos
genticos.

Utilizacin de la distribucin binomial en gentica

La regla de la suma de la probabilidad se refiere a los resultados de una cruz

gentica que son mutuamente excluyentes. Los resultados son "mutuamente
excluyentes" si son incompatibles en el sentido de que no pueden ocurrir al
mismo tiempo. Por ejemplo, las posibles distribuciones de sexo entre tres nios
consisten en cuatro resultados mutuamente excluyentes: 0, 1, 2 o 3 nias.
Estos resultados tienen probabilidades 1/8, 3 8, 3 8 y 1/8, respectivamente. La
regla de suma establece que la probabilidad global de cualquier combinacin
de sucesos mutuamente excluyentes es igual a la suma de las probabilidades
de los sucesos tomados por separado. Por ejemplo, la probabilidad de que una
hermana de tamao tres contenga al menos una nia incluye los resultados 1,
2 y 3 nias, por lo que la probabilidad general de al menos una nia es igual a
3/8 + 3/8 + 1/8 = 7 8 .

La regla de multiplicacin de la probabilidad se refiere a los resultados de una

cruz gentica que son independientes. Cualquier dos posibles resultados son
independientes si el conocimiento de que un resultado se realiza realmente no
proporciona informacin acerca de si el otro se realiza tambin. Por ejemplo, en
una secuencia de nacimientos, el sexo de cualquier nio en particular no es
afectado por el sexo de ningn hermano nacido antes y no tiene influencia
alguna en la distribucin de los sexos de sus hermanos nacidos ms tarde.
Cada nacimiento sucesivo es independiente de todos los dems. Cuando los
resultados posibles son independientes, la regla de multiplicacin establece
que la probabilidad de que cualquier combinacin de resultados se realice es
igual al producto de las probabilidades de todos los resultados individuales
tomados por separado. Por ejemplo, la probabilidad de que una hermana de
tres hijos consista en tres nias es igual a 1 2 X 1 2 X 1 2, porque la
probabilidad de cada nacimiento que resulta en una nia es 1 2, y los
nacimientos sucesivos son independientes.

Los clculos de probabilidad en gentica usan frecuentemente las reglas de

adicin y multiplicacin juntas. Por ejemplo, la probabilidad de que los tres
hijos de una familia sean del mismo sexo utiliza tanto la adicin como la
multiplicacin de rifles. La probabilidad de que las tres sean las nias es (1/2)
(1/2) (1/2) = 1/8, y la probabilidad de que los tres sean chicos tambin es 1/8.
Debido a que estos resultados son mutuamente excluyentes (una hermana de
tamao tres no puede incluir tres nios y tres nias), la probabilidad de tres
nias o tres nios es el sumo, dos probabilidades, o 1/8 + 1/8 = 1/4. Los
resultados ms posibles para los hermanos de tamao tres son que dos de los
nios sern las nias y el otro un nio, y que dos sern los nios y el otro una
nia. Para cada uno de estos resultados, son posibles tres diiferentes rdenes
de nacimiento, por ejemplo, GGB, GBG y BGG, cada uno de los cuales tiene una
probabilidad de 1/2 X 1/2 X 1/2 = 1/8. La probabilidad de dos nias y un nio,
sin tener en cuenta el orden de nacimiento, es la suma de las probabilidades
de las tres rdenes posibles, o 3 8; De igual manera, la probabilidad de dos
nios y una nia es tambin 3 8, Por lo tanto, la distribucin de probabilidades
para la proporcin de sexos en las familias con tres hijos es

GGG GGB GBB BBB

GBG BGB
 BGG BBG

(1/2) 1 + 3 (1/2) 2 (1/2) + 3 (l / 2) (l / 2) 2 + (1/2)

1/8 + 3/8 + 3/8 + 1/8 = 1

La informacin de la razn de sexos en este despliegue se puede obtener ms

directamente expandiendo la expresin binomial (p + q) ^ n, en la que p es la
probabilidad del nacimiento de una nia (1 2), q es la probabilidad del
nacimiento de Un nio (1 2), y n es el nmero de hijos. En el presente ejemplo,

(P + q) ^ 3 = 1 p ^ 3 + 3p ^ 2q + 3pq ^ 2 + q ^ 3

En el que los nmeros rojos son el nmero posible de rdenes de nacimiento

para cada distribucin de sexo. Del mismo modo, la distribucin binomial de las
probabilidades de las relaciones sexuales en familias de cinco hijos es

(P + q) ^ 5 = 1 p ^ 5 + 5p ^ 4q + 10p ^ 3q 2 + 10 p ^ 2q ^ 3 + 5pq ^ 4 + q
5

Cada trmino nos dice la probabilidad de una combinacin particular. Por

ejemplo, el tercer trmino es la probabilidad de tres nias (p 3) y dos nios (q2)
en una familia que tiene cinco hijos:

10 (1/2) ^ 3 * (1/2) ^ 2 = 10/32 = 5/16

Hay n + 1 trminos en una expansin binomial a la potencia n. Los exponentes

de p disminuyen de n en el primer trmino a 0 en el ltimo trmino y los
exponentes de q aumentan de 0 en el primer trmino a n en el ltimo trmino.
Los coeficientes generados por los sucesivos valores de n se pueden organizar
en un tringulo regular conocido como tringulo de Pascal, mostrado para = 0
a 10 en la figura 4.21. Las filas horizontales del tringulo son simtricas; Cada
fila comienza y termina con un 1, y cada otra entrada se puede obtener como
la suma de los dos nmeros a cada lado de l en la fila arriba.

Para generalizar slo un poco, si la probabilidad del evento A es p, la del

evento B es q, y los dos eventos son independientes y mutuamente
excluyentes, entonces la probabilidad de que A se realice cuatro veces y B tw o
veces (en un Orden especificado) es, por la regla de multiplicacin, p ^ 4q ^ 2.
Normalmente estamos interesados en una combinacin de eventos
independientemente de su orden, como "cuatro A y dos B." En este caso,
multiplicamos la probabilidad de que la combinacin 4A: 2B se realice en
cualquier orden especificado por el nmero de rdenes posibles. El nmero de
combinaciones diferentes de seis eventos, cuatro de tipo A y dos de tipo B,
est dado por el coeficiente de p ^ 4q ^ 2 en la expansin de (p A + q B) ^ 6.
Este coeficiente se puede encontrar en la fila de n = 6 en el tringulo de
Pascal, como la quinta entrada de la izquierda. (Es el quinto porque las
entradas sucesivas son los coeficientes de p ^ 0q ^ 6, p ^ 1q ^ 5, p ^ 2q ^ 4,
p ^ q ^ 3, p ^ 4q ^ 2, p ^ 5q ^ Por lo tanto, la probabilidad general de cuatro
realizaciones de A y dos realizaciones de B en seis ensayos est dada por 15p
^ 4q ^ 2.

La regla general para los ensayos repetidos de eventos con

probabilidades constantes es la siguiente:

Si la probabilidad del evento A es p y la probabilidad del evento alternativo B

es q, la probabilidad de que, en n ensayos, el evento A se realice s veces y el
evento B se realiza t veces es:

En el que s + t = n y p + q = 1. El smbolo n \ se lee como "n factorial" y

representa el producto de todos los enteros positivos de 1 a n (es decir, n! = 1
X 2 Los valores n fatoriales de n = 0 a n = 15 se dan en la tabla 4.2 El valor 0!
= 1 se define arbitrariamente para generalizar su uso en frmulas matemticas
La magnitud de n \ aumenta muy Rpidamente: 15! Es ms de un billn.
La ecuacin (1) se aplica incluso cuando x o t es igual a 0 porque 0! = 1.
(Recuerde tambin que cualquier nmero elevado a la potencia cero es igual a
1.) Cualquier trmino individual en la expansin del binomio (p + q) n est
dado por la ecuacin (i) para los valores apropiados de s y t. En el tringulo de
Pascal, las entradas sucesivas en el wthrow son los valores de n! / (S! * T!) Para
s = 0, 1, 2,. . . N.

Vale la pena tomar unos minutos para justificar la parte factorial de la

expansin binomial en la Ecuacin (1), que es igual a n! /! (S! * T!). Como
hemos observado, esta relacin enumera todas las formas posibles en las que
x elementos de una clase y t elementos de otra clase pueden estar dispuestos
en orden, siempre que los elementos s y los elementos t no se distinguen entre
s. Un ejemplo especfico podra incluir s guisantes amarillos y t guisantes
verdes. Aunque los guisantes amarillos y los guisantes pueden ser distinguidos
entre s porque tienen diversos colores, los guisantes amarillos no se
distinguen el uno del otro (porque son todos amarillos), ni son los guisantes
verdes (porque son todos verdes).

El razonamiento detrs de la frmula factorial comienza con la observacin de

que el nmero total de elementos es x + t = n. Dado n elementos, cada uno
distinto del siguiente, el nmero de maneras diferentes en que se pueden
arreglar es

NX (n - 1) X (n - 2) X --- X3X2X1

Por qu? Debido a que el primer elemento se puede elegir de n maneras, y

una vez elegido, el siguiente puede ser elegido de n - 1 maneras (porque slo n
- 1 se dejan escoger), y una vez elegidos los dos primeros, el tercero Se puede
elegir de n - 2 maneras, y as sucesivamente. Finalmente, una vez elegidos los
n - 1 elementos, slo hay una opcin para elegir el ltimo elemento. Los
elementos s + t se pueden organizar en n! Siempre que los elementos se
distingan entre s. Sin embargo, aplicando de nuevo el argumento que
acabamos de utilizar, cada uno de los n! Arreglos particulares deben incluir s!
Diferentes arreglos de los elementos s y t! Diferentes disposiciones de los
elementos t, o s! X t! en total. Dividiendo n! Por s! X t! Por lo tanto, produce el
nmero exacto de formas en que los elementos s y los elementos t pueden ser
dispuestos cuando los elementos de cada tipo no se distinguen entre s. Consi