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PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA
CARRERA DE BIOQUIMICA CLINICA

Alumno: JAIME DANILO JACOME


Grupo 2
Fecha de entrega: 29/NOVIEMBRE/2016
Practica #4
Extraccin de ADN mediante kit
Resumen:
En esta prctica de laboratorio se explic y se lleg a comprender la
tcnica para la extraccin de ADN mediante la utilizacin de kit DNAzol, y
siguiendo un procedimiento adecuado con la ayuda de soluciones de
Etanol e hidrxido de sodio una vez obtenido El ADN purificado por medio
de este proceso, est listo para ser utilizado en diferentes aplicaciones, las
cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestin, etc.
Objetivos:

Identificar las etapas indispensables en los protocolos de


extraccin de ADN.
Realizar un procedimiento modelo para la obtencin de ADN.

Introduccin:
La estructura de un determinado ADN est definida por la secuencia de
las bases nitrogenadas en la cadena de nucletidos, residiendo
precisamente en esta secuencia de bases la informacin gentica del ADN.
El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena en el
ADN es, por tanto, crtico para la clula, ya que este orden es el que
constituye las instrucciones del programa gentico de los organismos.
Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a
descifrar su mensaje gentico.

DNAzol es un reactivo especficamente formulado para el aislamiento de


DNA genmico de plantas. El procedimiento est basado en el uso de una
solucin de lisado conteniendo detergente y guanidina que hidroliza y
promueve la precipitacin selectiva del DNA del lisado. El protocolo es
rpido y permite el aislamiento eficiente de DNA de una variedad de tejidos
de plantas. En el procedimiento del DNAzol, las muestras son pulverizadas
en nitrgeno lquido y el DNA genmico es solubilizado en DNAzol ES. Luego
de una breve incubacin, las muestras son extradas con cloroformo y
centrifugadas. La fase acuosa resultante es recolectada y el DNA es
precipitado con etanol. El pellet es resuspendido y lavado con una solucin
de lavado DNAzol etanol seguido por un lavado con etanol y la solubilizaran
del DNA. DNA aislado puede ser usado para Southern, hibridizacin dot blot,
clonado molecular, PCR y otras aplicaciones de biologa molecular.

Procedimiento y materiales
Materiales
-Micro centrifuga
-Micropipetas
-Erlenmeyer
Reactivos
-Solucion de Dnazol
-Tae IX
-Agua destilada
-Etanol
Procedimiento

Preparar la solucin de Etanol


Preparar la suspensin de NaOH 8mM
Transferir 500uL de una supension bacteriana a un tubo eppendorf
Anadir 500 Ul de la solucin de DNAzol
Pipetear repetidamente varias ocasiones para mezclar las
suspensiones y lisar las clulas
Centrifugar
Recuperar el sobrenadante y transferirlo a un nuevo tubo eppendorf
Aadir etanol al 100 %
Incubar a temperatura ambiente por 3 minutos
Se formara una capa superior que contiene al ADN utilizar una punta
pasteur para recuperarlo.
Transferir a un tubo que contiene 1 mL de etanol al 75 %
Invertir varias veces y dejar reposar el tubo durante un minuto
Eliminar el etanol mediante pipeteo
Resuspender el sedimiento con solucin de NaOH
Mezclar suavemente para disolver el ADN mediante pipeteo
Centrifugar por 10 minutos
Transferir a un tubo eppendorf
Congelar a 20 oc

Resultados
Se realiz extraccin simple de una suspensin bacteriana mediante la
utilizacin de un kit llamada DNAzol y una vez extrado se procedi a
congelar a 20 oC para un futuro anlisis.
Conclusiones
Se pudo extraer el ADN de solucin bacteriana para su respectivo anlisis
mediante la utilizacin de un kit.
Cuestionario:
1. Cul es la funcin del DNAzol?
Es un reactivo listo para usar para el aislamiento de DNA genmico o
viral de muestras slidas y lquidas de origen humano, animal y
vegetal. El procedimiento esta basado en el uso de una solucin de
lisado conteniendo detergente y guanidina que hidroliza y promueve
la precipitacin selectiva del DNA del lisado celular.
2. Cul es la funcin del etanol?
El etanol se utiliza para precipitar la solucin del ADN, eliminar
impurezas orgnicas en este proceso, el etanol hace que el ADN se
deshidrate, es decir, pierda contacto con las molculas de agua que
lo rodean, y lo aisla de la solucin acuosa para dejarlo libre de
impurezas.
3. Es mejor el uso del etanol a una temperatura especifica?
porque?

La temperatura debe ser normal o baja, debido a que esto produce


que el ADN precipite con mayor facilidad al centrifugar y que exista
inconvenientes en la precipitacin.

4. Porque se resuspende en NaOH y no en agua el ADN?

Para a la eliminacin de material organico y alguna contaminacin


que podra ocasionar. Adems ayuda a resuspender el sedimento .

Bibliografa
Karp (2011) Biologa Celular y Molecular, conceptos y experimentos. 6ta
Edicin.
Granada, U. d. (2004). http://www.ugr.es. Obtenido de http://www.ugr.es:
http://www.ugr.es/~quiored/espec/ir.htm
Genbotech (2015). recuperado el 29 de novimbre del 2016 de Adnzol
reactivo del siguiente link: http://www.genbiotech.com.ar/index.php?
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