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DOGMA CENTRAL

DE LA BIOLOGIA
MOLECULAR

Karina Lpez Lpez (Ph.D)


Facultad de Ciencias Agrcolas
Universidad Nacional de Colombia
DOGMA CENTRAL DE LA
BIOLOGIA MOLECULAR

El DNA dirige su propia replicacin y


su transcripcin a RNA, el cul a su
vez dirige su propia traduccin a
protenas

Francis Crick, 1954


Replicacin
del DNA

Transcripcin

Traduccin

DOGMA CENTRAL
DE LA BIOLOGA
MOLECULAR
REPLICACIN O BIOSNTESIS DE DNA: Proceso de
duplicacin del DNA.

TRANSCRIPCIN O BIOSNTESIS DE RNA: Proceso


de formacin de molculas de RNA, las cules son
sintetizadas utilizando el DNA como templado.

TRADUCCIN O BIOSNTESIS DE PROTENAS:


Proceso en donde la secuencia de bases en la molcula
de RNA determina la secuencia de aminocidos de la
protena.
REPLICACIN
REPLICACIN

Es el proceso por el cul el material


gentico (DNA) se duplica, originando
una copia idntica de si misma.
CMO SE REPLICA EL DNA?
Replicacin
semiconservativa

Replicacin conservativa

Replicacin dispersiva
Experimento de
Meselson-Stahl (1958)
1. Crecimiento prolongado de E.coli en medio con
15NH Cl como nica fuente de nitrgeno, donde
4
15N es un isotopo pesado.

2. Las clulas de E.coli (15N) se crecieron en medio


con 14NH4Cl, donde N14 es un isotopo ligero o
normal.

3. Extraccin del DNA y anlisis con la tcnica de


centrifugado por gradiente de densidad.
La replicacin del DNA es SEMICONSERVATIVA

Prediccin para el Modelo Semiconservativo

Padre 1ra generacin 2da generacin

(ligero)

(Hbrido)

(Pesado)
LA REPLICACIN DEL DNA ES
BIDIRECCIONAL

Replicacin
Unidireccional

Replicacin
Bidireccional
Polimerizacin 5-3

3
LA REPLICACIN DEL DNA
ES SEMIDISCONTINUA

Cadena
lder

Direccin del movimiento


de horquilla de replicacin

Cadena
rezagada
FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Punto de Unin
Cadena rezagada
ija
h
A
N Fragmento de Okazaki
D
DNA padre
Cebador de RNA

Direccin del movimiento Cadena lder


de horquilla de replicacin
DNA POLIMERASAS

DNA FUENTE ACTIVIDAD ACTIVIDAD PAPEL


POLIMERASA 3-5 5-3
I Procariota S S Reparacin de huecos.
Eliminacin del cebador de
RNA.
II Procariota S No Reparacin.
III Procariota S No Replicacin.
Eucariota No No Replicacin en el ncleo.
Sintetiza la cadena retrasada.
Eucariota No No Reparacin en el ncleo.
Eucariota S No Replicacin en la mitocondria
Eucariota S No Replicacin en el ncleo.
Replicacin de la cadena lder.
Eucariota S No Reparacin en el ncleo.
REPLICN
En Procaritas un genoma consta de un
nico replicn. El mayor de tales
replicones es el cromosoma bacteriano.

El cromosoma Eucarita contiene gran


nmero de replicones. Todos los
replicones de un cromosoma deben
dispararse durante un ciclo celular aunque
no se activen de forma simultnea.
REPLICACIN DEL GENOMA
BACTERIANO
REPLICACIN DEL GENOMA
EUCARIOTA
Origen de replicacin
Elementos necesarios para el Proceso
de Replicacin

Cadena molde

Protenas accesorias

DNA polimerasa
Primer dNTPs
Topoisomerasa

Helicasa

Primasa

Protenas de unin a
cadena sencilla
DNA DNA pol. I
Cadena lder
pol. III
Cadena retrasada

Ligasa

Visin Molecular del Replisoma en E.coli


1. Primasa sintetiza fragmentos cortos de RNA (cebador).

2. La DNA Polimerasa III elogan los cebadores de RNA con DNA


nuevo
Etapas de la
Replicacin del
DNA
3. LA DNA Polimerasa I elimina los cebadores de RNA y
rellena los huecos.

4. La DNA ligasa une los fragmentos adyacentes


La replicacin
ocurre en la fase S
del ciclo celular
Replicacin de genomas lineales

Primera ronda de replicacin

Segunda ronda de replicacin


Papel de la telomerasa en la replicacin

Elongacin
Telomerasa

RNA molde
TRANSCRIPCIN
Karina Lpez Lpez (Ph.D)
Facultad de Ciencias Agrcolas
Universidad Nacional de Colombia
TRANSCRIPCIN
Es el proceso por el cul la informacin gentica
representada por la secuencia de nucletidos en
la molcula de DNA de una clula o virus es
copiada en molculas de RNA, las cules son
sintetizadas utilizando el DNA como templado.

Cuando el templado es una molcula de RNA


se denomina transcripcin inversa, proceso
que ocurre en algunos virus.
PROPIEDADES DEL RNA
(cido ribonucletido)

1. Es de cadena sencilla.
2. Tiene un azcar ribosa.
3. Tiene la base nitrogenada Uracilo.
TIPOS DE RNA

1. RNA mensajero (RNAm): sirve como


intermediario en la sntesis de
protenas.

2. RNAs funcionales: RNA activos que


no se traducen a protenas.
a) RNA de transferencia (RNAt)
b) RNA ribosomal (RNAr)
c) RNA pequeos nucleares (RNAsn)
Vision global de la transcripcin
Cadena codificante y cadena molde

Cadena
codificante

Cadena
molde

La secuencia del transcrito (RNA) es complementaria


a la cadena molde e idntica a la cadena codificante.
Polimerizacin
del transcrito
5-3
RNA POLIMERASA

Enzima que cataliza la formacin de una cadena


polinucleotdica de RNA utilizando como molde la secuencia
de bases de una molcula de DNA.
RNA POLIMERASA
PROCARIOTA

Esta compuesta por el ncleo


de la enzima (subunidades: 2,
, , ) y el Factor sigma ().

El Factor sigma dirige a


complejo enzimtico al sitio
especifico de inicio de la
transcripcin.

Una nica RNA Polimerasa


parece ser la responsable de la
sntesis de todos los tipos de
RNA conocidos.
PROMOTOR

Es una secuencia de DNA que seala el inicio de


la transcripcin del RNA.

Esta situado ro arriba de la secuencia codificante


del gen e indica a la RNA Polimerasa donde
iniciar la transcripcin (+1).
Gen

Transcripcin

Promotor Sequencia codificante del gen

Promotores fuertes de E. coli

Secuencias consenso
de muchos promotores
de E. coli

Regin 35 Caja de Pribnow Sitio de inicio de la


transcripcin (+1)
ETAPAS DE LA TRANSCRICPCIN

1. La RNA Polimerasa se 2. Inicio de la


une al promotor. polimerizacin
3. Elongacin de la cadena

4. Terminacin de la cadena
TERMINACIN DE LA TRANSCRIPCIN

Terminadores independientes de
Rho, en donde la RNApol puede
terminar la transcripcin en
secuencias especficas sin la
ayuda de ningn factor extrnseco
a ella misma. Formacin de un
horquilla rica en U.

Terminadores dependientes de
Rho, en donde para que haya
terminacin se requiere la adicin
de un factor proteco denominado
Rho.
ANTIBITICOS QUE BLOQUEAN LA SNTESIS
DE RNA EN PROCARIOTAS

ANTIBIOTICO ORIGEN BLANCO/ MEC.ACCIN

ESTREPTOLIDIGINA Streptomyces lydicus Se une a la subunidad


de la RNApol y bloquea la
transcripcin.
ACTINOMICINA D Streptomyces antibioticus Se une al DNA y bloquea
la transcripcin

RIFAMPICINA Nocardia mediterranei Se une a la subunidad


de la RNApol y bloquea la
transcripcin.
BLEOMICINA Streptomyces verticulus Forma un nick en el DNA
y bloquea la transcripcin
POLIMERASAS EUCARITICAS

Hay reportadas tres


tipos de RNApol
eucariticas:

1. RNApol I
2. RNApol II
3. RNApol III
POLIMERASAS EUCARITICAS

RNA POLIMERASA TIPO I: Transcribe RNA


ribosmico.

RNA POLIMERASA TIPO II: Transcribe RNA


mensajero.

RNA POLIMERASA TIPO III: Transcribe RNA de


transferencia, RNA 5S y RNAs pequeos.
PROMOTOR EUCARIOTA

+1
-26

Elemento TATA Elemento Elemento


cadena iniciador Cadena
arriba (Inr) abajo
Inicio de la
transcripcin Formacin del complejo de
en Eucariotas preiniciacin
MODIFICACIONES DEL RNA
MENSAJERO

Caperuza Cola de Poli A

Regin codificante
Proteccin del
extremo 5 mediante
la adiccin de una 7-
metil-guanosina.
ADICCIN DE COLAS DE POLI-A
Caperuza Cola de Poli A

Regin codificante

Estas colas de Poli-A (100 a 200 nucletidos) se


adicionan en el ncleo y se cree protegen al RNAm
de nucleasas y fosfatasas que lo degradaran.

En Procaritas, las colas de Poli A estan


relacionadas con inestabilidad del RNA mensajero.
Unidad de Transcripcin
Eucarita
Regin promotora Regin codificante

Intrn Intrn

Regin 5 con Regin 3 con


elementos elementos
regulatorios regulatorios
EXN: Segmento de un gen eucaritico de su transcrito
primario, que alcanza el citoplasma como parte de un RNAm
maduro, RNAr o RNAt.

INTRN: Es parte de un transcrito primario o DNA


codificante, que es removido por corte y empalme (splicing)
durante el procesamiento del RNA y no es includo en el
RNAm, RNAr o RNAt, maduro y funcional.
Visin global de la Maduracin del pre-RNA
TRADUCCIN
Karina Lpez Lpez (Ph.D)
Facultad de Ciencias Agrcolas
Universidad Nacional de Colombia
TRADUCCIN

Proceso en donde la secuencia de nucletidos


en la molcula de RNA determina la secuencia
de aminocidos de la protena.

Tres tipos de RNA participan en la sntesis de


protenas: RNA mensajero (RNAm), RNA de
transferencia (RNAt) y RNA ribosomal (RNAr).
FUNCIONES DE LOS RNAS EN LA
SNTESIS DE PROTENAS

El RNAm, transporta la informacin gentica


desde el DNA bajo la forma de una serie de
palabras cifradas en cdigos de 3 bases, cada
una de las cules especifica para un aa partcular.

El RNAt, es la clave para decifrar las palabras del


RNAm. Cada tipo de aa tiene su propio RNAt al
que se une para ser transportado hasta el extremo
creciente de una cadena polipptidica.
El RNAr, se asocia con protenas para formar
ribosomas. Estas estructuras se desplazan
fisicamente a lo largo de la molcula del RNAm y
catalizan la unin de los aa para formar cadenas
polipptidicas. Tambin fijan los RNAt y
protenas accesorias para la sntesis de protenas.
TRADUCCIN EN PROCARIOTAS

Protena naciente

Ribosoma RNAt
aminoacilado
TRADUCCIN EN EUCARIOTAS

Ncleo

Transcripto
primario
Procesamiento

Transporte
EL CODIGO GENTICO

El Cdigo Gentico es la correspondencia


que existe entre la secuencia de cuatro bases
de los cidos nuclecos y los 20 aminocidos
presentes en las protenas.

El Cdigo Gentico es un cdigo universal,


degenerado, sin comas, sin empalmes y de
tripletes.
EL CDIGO DE TRIPLETE (CODN)

4 bases: A T C G 20 aminocidos

1 base ------ 4 combinaciones (4 aa)

2 bases ------- 4X4 = 16 combinaciones (16 aa)

3 bases ------- 4 X 4 X 4 = 64 combinaciones (64 aa)


UN CDIGO SIN EMPALMES
NI COMAS

Cdigo
empalmado

Cdigo No
empalmado

Los codones son ledos seguidamente, a partir de un punto de inicio


especfico, sin que existan solapamiento entre ellos ni puntuacin que
los separe entre s o delimite entre ellos.
EL CDIGO GENTICO ES DEGENERADO

64 tripletes dan origen a 20 aminocidos......algunos


aminocidos son codificados por ms de un triplete.
EL CODIGO ES UNIVERSAL

Desviaciones conocidas del Cdigo Gentico Universal

Cdigo Cdigo
Universal Poco comn*
Cmo descifrar el Cdigo Gentico?

RNAm (Poli-U)

Ensayo de enlace por filtracin

M. Nirenberg y H. Matthaei (1961)


EL CDIGO GENTICO
CODONES DE TERMINACIN

UAG: Fue el primer codn de terminacin descifrado


y se le denomino ambar. Mutantes que presenta
mutaciones que forman este codn de terminacin se
denominan mutantes ambar.

UGA: Denominado codn opal.

UAA: Denominado codn ocre.


EL FENMENO BAMBOLEO

Situacin en la cul el tercer nucleotido del anticodon


(5) puede formar dos o ms alineamientos.
RNA DE TRANSFERENCIA

Son las molculas adaptadoras que


traducen el codon de tres nucletidos en el
RNAm, en el correspondiente aminocido.
Son parte de la maquinaria de traduccin.
En 1958 CRICK, propuso:

9Cada aminocido es transportado a la


molcula molde (RNAm) por una molcula
adaptadora.

920 molculas adaptadoras, uno para cada


aminocido.

9Cada molcula adaptadora contena una


secuencia de nucletidos que le permita
emparejarse con el molde.
CARACTERSTICAS DE LOS RNAt
1. La ESTRUCTURA del RNA de transferencia guarda el
secreto de la especificidad entre un RNA mensajero y el
aminocido que este designa.

2. Presentan cuatro tallos de doble cadena y tres


horquillas de cadena simple. Una de las horquillas porta el
ANTICODON.

3. Cada aminocido es cargado a su RNAt especfico por un


enzima denominada AMINOACIL RNAt SINTETASA.

4. Plegamiento SIMILAR en todos los RNAt


diferencindose slo en el anticodon.
ESTRUCTURA DEL RNAt
CARGADO DE LOS AA EN EL RNAt POR
LA AMINOACIL SINTETASA

5
RIBOSOMAS
Grandes complejos macromoleculares que
ensamblan aminocidos para formar protenas
cuya secuencia esta codificada en un RNAm
especifico.

Estn compuestos de una subunidad pequea y una


subunidad grande, formadas por diferentes tipos de
RNAr y un grupo de protenas.
ESTRUCTURA DE LOS RIBOSOMAS
CARACTERISTICAS DE
LOS RIBOSOMAS

Polipptido en
crecimiento
RNAt
liberado del
sitio E
Centro peptidil
transferasa

Centro decodificante
Movimiento del ribosoma
Hay tres sitios de unin para el RNAt:

a) Sitio A: Por Aminoacil, el RNAt porta el


aminocido que ser ligado al polipeptido.

b) Sitio P: Por Peptidil, el RNAt contiene el


polipptido en crecimiento.

c) Sitio E: Por Exit, el RNAt no porta un


aminocido y esta listo para liberarse del
ribosoma.
CARACTERSTICAS DE
LA TRADUCCIN
1. El RNAm se une a la subunidad pequea.
2. El RNAt une las dos subunidades ribosomales.
3. La subunidad pequea porta el centro Codificante,
que asegura que slo RNAt adecuados se unan.
4. La subunidad grande porta el centro Peptidil
transferasa, donde el enlace peptdico es formado.
5. Estos dos centros estn compuestos de RNAr; por
tanto, la enlace peptdico es llevado cabo por los
RNAr y asistido por las protenas.
ETAPAS DE LA TRADUCCIN

1. INICIACIN DE LA CADENA

2. ELONGACION DE LA CADENA

3. TERMINACIN DE LA CADENA
INICIO DE LA TRADUCCIN

Complejo de iniciacin 30S:

RNAm
Subunidad 30S ribosomal
Factores de iniciacin IF1 e
IF2
Formilmetionina-RNAtfmet

PROCARIOTA
SECUENCIA SHINE DALGARNO EN
PROCARIOTAS
INICIO DE LA TRADUCCIN

Iniciando en el extremo
5, la subunidad 40S ms
el RNAtmet escanean el
RNAm en buscar del sito
AUG.

EUCARIOTA
ETAPAS DE ELONGACIN DE LA TRADUCCIN

Factores de elongacin
EF- Tu y EF-G
ETAPAS DE ELONGACIN DE LA TRADUCCIN

En Eucariotas slo
hay sitios A y P.

Los factores de
elongacin se
denominan eEF1 y
eEF2.
TERMINACIN DE LA TRADUCCIN

Factores de liberacin RF
ANTIBIOTICOS QUE BLOQUEAN LA
TRADUCCIN EN PROCARIOTAS

Antibitico Blanco
Kanamicina RNAr 16S
Neomicina RNAr 16S
Estreptomicina Ribosoma 30S
Tetraciclina Sitio A del ribosoma
Cloranfenicol Peptidiltransferasa
Puromicina Sitio A del ribosoma
cido fusidico Factor de elongacin G
MODIFICACIN POSTRADUCCIONAL

1. Plegamiento del polipptido naciente con ayuda


de chaperonas.

2. Adiccin de grupos fosfatos (cinasas) o


eliminacin de grupos fosfatos (fosfatasas),
empleado para activar o desactivar una enzima.

3. Etiquetado de la protena naciente, para dirigirla


al ncleo, a la mitocondria, anclarla a la
membrana o secretarla.
ETIQUETADO DE
PROTEINAS SECRETADAS
REGULACIN DE LA
EXPRESIN GENICA

Karina Lpez Lpez (Ph.D)


Facultad de Ciencias Agrcolas
Universidad Nacional de Colombia
Para que regular la expresin
genica?
NIVELES DE REGULACIN
1. Sntesis del transcripto primario (transcripcin).

2. Modificacin posttranscripcional del RNA mensajero.

3. Degradacin del RNA mensajero.

4. Sntesis de protenas (traduccin).

5. Modificacin posttraduccional de las protenas.

6. Transporte y etiquetado de las protenas.

7. Degradacin de las protenas.


Transcripcin
Transcrito primario Nucleotidos
Procesamiento
postranscripcional
Degradacin
RNAm maduro del RNAm
Traduccin

Protena Aminocidos
(inactiva)

Procesamiento
postraduccional Degradacin de
la protena
Protena
modificada
(activa)
Etiquetado de la protena
y transporte
REGULACIN TRANSCRIPCIONAL
PROCARIOTA EUCARIOTA
Protena
Activadora

Promotor Operador Regin


codificante Estado reprimido: apagado
Estado activo: encendido

Factores de intensificador
transcripcin
Protena
Represora

Estado reprimido: apagado Estado activo: encendido


PROTEINA ACTIVADORA: Protena que se une a la
region promotora de un gen e induce la
transcripcin.

PROTEINA REPRESORA: Protena que se une a la


region promotora de un gen y bloquea la
transcripcin.

FACTORES DE TRANSCRIPCIN: Protenas que se


unen al DNA y alteran el nivel basal de la
. transcripcin.
Regulacin de la
Transcripcin en Procariotas
Los genes que codifican para enzimas de
una misma ruta metablica se agrupan en
operones.

Sitio de unin Sitio de unin del


del activador represor (operador)

Secuencias regulatorias Genes transcritos como una


unidad
MECANISMOS DE CONTROL
Regulacin Positiva Regulacin Negativa

Operon Lactosa y OperonTriptofano


REGULACIN DEL OPERON
LACTOSA
Componentes del Operon lac

i z y a
5 3
3 5
P O

i = represor P = Promotor
z = -galactosidasa O = Operador
y = permeasa
a = transacetilasa
CONTROL NEGATIVO DEL
OPERON LAC
A) Ausencia de lactosa

Pol
i z y a
5 R 3
3 5
P O

R
Represor
La protena represora (R) codificada por el gen i,
bloquea la transcripcin del operon lac
(z, -galactosidasa; y, permeasa; a, transacetilasa)
al unirse a la regin operadora (O).
CONTROL NEGATIVO DEL
OPERON LAC
A) Presencia de lactosa
RNAm Lac

i z y a
5 Pol 3
3 5

P O

Rep

Lactosa

La lactosa induce la expresin del operon lac,


Rep
al unirse a la protena represora (R) y evitando
su unin a la regin operadora (O).
Represor inactivo
CONTROL POSITIVO DEL
OPERON LAC POR GLUCOSA
ATP
Adenilil Bajo niveles de glucosa
ciclasa
cAMP P Pi

cAMP
CAP RNAm Lac

i cAMP z y a
5 CAP Pol 3
3 5

P O

Bajos niveles de glucosa activan la adenil-ciclasa, la cul convierte el ATP en


AMP cliclico (cAMP). cAMP se une a la proteina activadora por catabolito
(CAP) y estimula su unin a secuencias reguladoras en donde interactua con
la RNAPol y activa la transcripcin del operon lac.
El Opern Triptfano
Descubierto en E. coli por Yanofsky y
colaboradores en 1970, el transcrito de 7kb
procedente de este opern codifica para 5
enzimas involucradas en la sntesis del
Triptfano a partir del Corismato.

En este opern la traduccin esta acoplada a la


transcripcin, lo cul permite a las bacterias,
responder de forma inmediata a cuaquier
cambio en las necesidades de triptfano.
REGULACIN DEL OPERON TRIPTFANO

R P O L Atenuador E D C B A
5 3
3 R 5

Bajos niveles de Trp

R R RNAm completo de operon Trp 3min

Represor
Represor
activado
Traduccin inmediata
Altos niveles de Trp

Triptfano
RNAm atenuado
LA ATENUACIN

Es un mecansmo que controla la capacidad de la RNA


polimerasa de leer atravs de un atenuador.

Un atenuador es un terminador intrnseco localizado al


principio de una unidad de transcripcin.

Una caracterstica comn de la atenuacin es que un


evento externo controla la formacin de una horquilla
necesaria para la terminacin intrnseca, impidiendo que
la RNApol transcriba los genes estructurales.
MECANISMO DE ATENUACIN DE LA
TRANSCRIPCIN

1. Altos niveles de Trp


Formacin de una
horquilla entre las
regiones 3 y 4 que seala
Crecimiento de la el fin de la transcripcin
cadena polipeptdica

Ribosoma
3 4
Pol
RNA
1 2 Polimerasa
es liberada
del templado

1 2 3 4
Atenuador
MECANISMO DE ATENUACIN DE LA
TRANSCRIPCIN

1. Bajos niveles de Trp


Alternacin de la
horquilla entre las
El ribosoma inicia en regiones 2 y 3
la regin 1

Crecimiento de la
cadena polipeptdica

Ribosoma 2 3
La transcripcin contina
RNAm
1 4

Pol
1 2 3 4
FACTOR DE TRANSCRIPCIN

Protenas que no forman parte de la molcula de


RNA polimerasa, pero que son necesarias para la
iniciacin de la transcripcin. En si estas protenas
controlan dnde, cundo y cmo se expresan los
genes.
MOTIVOS ESTRUCTURALES DE LOS
FACTORES DE TRANSCRIPCION

1. Hlice-giro-hlice 2. Cierre de Leucina 3. Dedos de zinc


Gene regulado por Glucocorticoides
Transcripcin
Transcrito primario Nucleotidos
Procesamiento
postranscripcional
Degradacin
RNAm maduro del RNAm
Traduccin

Protena Aminocidos
(inactiva)

Procesamiento
postraduccional Degradacin de
la protena
Protena
modificada
(activa)
Etiquetado de la protena
y transporte
PROCESAMIENTO
POSTRANSCRIPCIONAL Y
DEGRADACIN DEL RNAm

Caperuza Cola de Poli A

Regin codificante
PROCESAMIENTO
POSTRADUCCIONAL

1. Plegamiento del polipptido naciente con ayuda


de chaperonas.

2. Adiccin de grupos fosfatos (cinasas) o


eliminacin de grupos fosfatos (fosfatasas),
empleado para activar o desactivar una enzima.

3. Etiquetado de la protena naciente, para dirigirla


al ncleo, a la mitocondria, anclarla a la
membrana o secretarla.
DEGRADACIN DE LA PROTENA
La degradacin de protenas es un proceso
altamente controlado para evitar la degradacin de
poliptidos incorrectos.

Las vas de degradacin se restrigen a a organelos


celulares (lisosomas) o estructuras
macromoleculares (proteosomas).

Un mecanismo muy utilizado es la ubiquitinilacin.


Las protenas a degradar se etiquetan con un
polipptido pequeo (ubiquitina) que dirige su
destruccin en el proteosoma.