VIRUS DEL DENGUE

El virus del dengue (DEN) es un arbovirus del gnero Flavivirus de la familia Flaviviridae.
Posee cuatro serotipos inmunolgicos: DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4 causante
del dengue. Esta alta incidencia de casos ha favorecido la investigacin para comprender
el ciclo de vida viral, y; los medios de replicacin de este virus son muy importantes para
crear una vacuna.

El DENV es un virus icosaedro de 50 nm, aproximadamente, conformado por

una membrana lipdica (obtenida de las clulas del husped), sobre la cual
se insertan las protenas de membrana y de envoltura. El interior del virus
contiene el complejo riboproteico conformado por la protena de la cpside y
el genoma viral que consiste en una nica hebra de ARN de sentido positivo
que codifica para un polipptido nico, que contiene tanto las protenas
estructurales, que harn parte de la partcula viral, como las protenas no
estructurales, que intervienen durante los procesos de ensamblaje y
replicacin del ARN genmico, entre otras

Ciclo viral intracelular

Entrada, fusin y denudacin de la partcula
La entrada del virus en clulas mamferas y en las de mosquito se inicia con
el acercamiento del DENV a la superficie de la clula; luego, la protena E
interacta con protenas o proteoglucanos de la membrana celular que
median la unin y la posterior endocitosis del virus (14,17,29) (figura 2).
Experimentalmente, se ha demostrado que el dominio III de la protena E
interacta con el receptor para laminina LAMR1 (39,40), la protena de
adhesin celular ICAM-3 o DC-SIGN (Dendritic CellSpecific Intercellular
Adhesion Molecule-3-Grabbing Non-integrin, CD209) (41) y con
proteoglucanos como el heparn sulfato (42), entre otras molculas. La
participacin de la protena DC-SIGN en la adsorcin de DENV, fue
demostrada por Tassaneetrithep et al. tras transfectar una poblacin de
clulas dendrticas resistentes a la infeccin, las cuales, cuando expresaron
establemente el receptor, se volvieron vulnerables a la infeccin con los
cuatro serotipos de DENV (41). Tio et al. (2005) sometieron un
homogenizado de clulas de rin de cerdo (lnea PS, clon D) a una
electroforesis en dos dimensiones y una transferencia sobre nitrocelulosa;
luego, evaluaron con un ensayo de VOPBA (Virus Overlay Protein Binding
Assay) las posibles interacciones entre las diferentes protenas celulares y
cada uno de los cuatro serotipos del DENV. Las protenas que se unieron
selectivamente a cada uno de los virus, fueron analizadas por
espectrometra de masas de tipo MALDI-TOF, demostrando de esta forma
que el receptor para laminina LAMR1 interacta especficamente con la
protena E delos serotipos 1, 2 y 3 de DENV, lo cual sugiere que esta
protena es un posible receptor viral (39). Estos hallazgos indicaran que,
dependiendo del tipo celular, los diferentes serotipos virales pueden utilizar
diferentes molculas receptoras. Por otro lado, se ha demostrado que, para
favorecer la entrada del virus a las clulas, participan los
glucosaminoglucanos o proteoglucanos presentes en la matriz extracelular o
que estn asociados a las protenas de superficie de las clulas. Los
proteoglucanos como el heparn sulfato, por su alta carga negativa, pueden
actuar como un receptor primario para favorecer el acercamiento de las
partculas virales a la superficie celular y, una vez establecido este
acercamiento, facilitaran la interaccin de la protena E con protenas de la
superficie para favorecer la endocitocis del virus (42). El sistema de
correceptores es el utilizado por el virus HIV-1 que se une inicialmente al
receptor CD4, para luego interactuar con la molcula CCR5 y finalizar el
proceso de entrada (43). La participacin de un correceptor para la infeccin
por DENV, podra explicar por qu este virus puede infectar diferentes tipos
celulares (44), pues este mecanismo le permitira al virus interactuar
inicialmente con el heparn sulfato presente en casi todos los tipos celulares
y luego asociarse con un receptor, que promueva la endocitosis. Este ltimo
evento depende de las clatrinas. Luego, la vescula endoctica se transforma
en un endosoma temprano y posteriormente en un endosoma tardo, el cual
se fusiona con un lisosoma que acidifica el pH de la vescula. El cambio de
pH induce los cambios de conformacin del dominio II de la protena E, que
favorecen la exposicin y el anclaje inmediato del pptido de fusin a la
membrana de la vescula, lo que conlleva finalmente a la liberacin de la
nucleocpside al citoplasma.

Replicacin del ARN viral

Cuando la nucleocpside se halla libre en el citoplasma, se inician los
procesos de traduccin y replicacin del ARN (13, 50). El ARN genmico viral
del DENV es monocatenario de sentido positivo, con un nico marco de
lectura que traduce un polipptido completo, el cual es procesado en el
retculo endoplsmico por proteasas celulares y la actividad NS3pro, que
libera de forma ordenada a las tres protenas estructurales (C, prM/M y E) y
las siete protenas no estructurales (NS1, NS2A, NS2B. NS3, NS4A, NS4B,
NS5) encargadas de la replicacin del genoma y el ensamblaje viral (1). La
replicacin del ARN viral es un proceso que no est totalmente entendido;
sin embargo, in vitro se han detectado tres especies de ARN, denominadas
ARN de 20S, 20/28S y 40S, segn el valor del coeficiente de sedimentacin.
Los ARN de 20S conocidos como formas de replicacin, no son degradados
por las ARNasas y estn constituidos por dos cadenas de ARN cada una con
polaridad contraria (negativa y positiva). La existencia de las formas de
replicacin sugiere que estas formas incluyen los intermediarios negativos
que actan como plantilla para la generacin de los ARN de sentido positivo.
El otro tipo de ARN, los ARN heterogneos de 20 a 28S, son denominados
intermediarios de replicacin y corresponden a hebras de ARN de sentido
positivo en proceso de elongacin. Por ltimo, los ARN de 40S pueden ser
degradados por ARNasas y, al parecer, es el ARN gen- mico encontrado en
los virus ensamblados; por lo tanto, estos ARN pueden ser utilizados para la
traduccin proteica o para conformar, junto con protena C la
ribonucleoprotena, los nuevos viriones (1). Durante la traduccin, el
polipptido recin sintetizado es acompaado por las protenas chaperonas
BiP, calnexina y calreticulina; luego, cada una de las protenas virales se
organiza en la membrana del retculo endoplsmico y es procesada por
proteasas como la furina, la signalasa o la NS3Pro, para finalmente ser
modificadas despus de la transduccin (plegamiento y glucosilacin).

Ensamblaje, maduracin y liberacin del DENV

Los mecanismos que promueven, regulan y coordinan el ensamblaje del
virus, no son conocidos completamente. Sin embargo, por microscopa
electrnica y criomicroscopa, se ha sugerido que el proceso de ensamblaje
de las partculas del DENV sucede en distensiones del retculo endoplsmico
denominadas membranas convolutas (convolute), donde ocurre de forma
simultnea la traduccin de la protena y el ensamblaje del virus (35). El
proceso de ensamblaje comienza con la formacin de la nucleocpside
gracias a la interaccin del ARN genmico y la protena C en presencia de
pequeas gotas de lpidos (11); sobre esta primera estructura luego se
asocian las protenas prM/M y E, que deben estar inmersas en la membrana
del retculo endoplsmico. Posteriormente, suceden dos etapas de
maduracin de la part- cula viral. Primero se organizan de forma
heterodimrica las protenas prM/M y E, en donde la primera recubre a la
segunda; este recubrimiento le confiere un aspecto rugoso a la superficie
del virus cuando se observa por microscopa electr- nica. En el segundo
paso, esta partcula inmadura transita desde el retculo endoplsmico hasta
las regiones cis y trans del aparato de Golgi, donde se inicia la segunda
etapa de maduracin. En esta ltima etapa, los cambios de conformacin y
de rotacin de la protena E generan homotrmeros antiparalelos de la
misma, lo que le da una apariencia lisa a la superficie del virus. Por ltimo,
un nuevo procesamiento proteoltico sobre la protena prM/M por la proteasa
furina, independiza el pptido pr y la protena M. Esta nueva modificacin
estabiliza los homotrmeros de E y mantiene unido al pptido pr. Finalmente,
cuando el virus es liberado, el pH neutro del espacio extracitoplsmico
induce el desprendimiento del pptido pr y la protena E adquiere la
conformacin final que puede ser reconocida por las molculas receptoras
de la clula sensible e iniciar un nuevo ciclo de infeccin en otra clula La
morbilidad y mortalidad causadas por la infeccin por DENV, estn dadas
por la complejidad de eventos que se presentan en el transcurso de la
infeccin. Algunos pacientes desarrollan cuadros febriles y dolores
generalizados que se resuelven rpidamente sin dejar secuelas. A este tipo
de manifestacin clnica se le conoce como dengue (fiebre de dengue).
Otros pacientes, por el contrario, presentan dolores intensos, fiebre alta e
incrementos en la permeabilidad vascular, lo que conlleva a la prdida de
plasma y hemorragias pleurales y gastrointestinales, entre otros. Estos
signos son agrupados en dos entidades clnicas conocidas como dengue con
signos de alarma y dengue grave con manifestaciones hemorrgicas o sin
ellas, llamado anteriormente dengue hemorrgico, o fiebre hemorrgica por
dengue (2,21,58-63). Las principales clulas diana de la infeccin por DENV
son los monocitos, los macrfagos, las c- lulas dendrticas y los linfocitos
CD4+ y CD8+. In vitro se ha reportado que se infectan clulas del endotelio,
varias lneas celulares hepticas, fibroblsticas y neuronales (44). Una vez
establecida la infeccin en el husped, las clulas expresan como primera
lnea de defensa el interfern (IFN) de tipo I ( y ), que busca inhibir la
replicacin viral. Por otro lado, se inicia el proceso de presentacin de
antgenos mediante el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) de tipo
I y II, lo que conlleva a que clulas como las NK (natural killer) ataquen a las
clulas infectadas y liberen, junto a los linfocitos T, el IFN de tipo II (). Esta
actividad es el fenmeno responsable del control de la infeccin, ya que se
establece un estado antiviral mediado por IFN que evita la replicacin del
virus en las clulas infectadas o la infeccin de nuevas clulas. Adems,
esta sealizacin puede inducir la apoptosis de las clulas infectadas o
alteradas (60). Por otro lado, los linfocitos T desempean un papel
preponderante en el establecimiento y control de la respuesta inmunitaria
frente al virus. Tanto los linfocitos CD4+ como los CD8+ estimulados por
diferentes citocinas, como el IFN (tipo I y II) y el factor de necrosis tumoral
alfa (TNF), se activan y secretan citocinas que pueden tener un carcter
proinflamatorio o antiinflamatorio. En resumen, esta respuesta inmunitaria
es la que normalmente se presenta en los pacientes infectados por primera
vez que logran resolver la infeccin; sin embargo, en los pacientes que
sufren una nueva infeccin con un serotipo diferente al que caus la primera
(frecuente en zonas endmicas donde circula ms de un serotipo de DENV),
ocurre un fenmeno que estimula y exacerba la respuesta inmunitaria del
paciente, lo que aumenta las probabilidades de que desarrolle dengue
grave, con manifestaciones hemorrgicas o sin ellas (5,64-68). El desarrollo
del dengue grave y su asociacin con las reinfecciones est bien
argumentada clnica y experimentalmente. Una de las teoras ms
aceptadas y polmica, se denomina potenciacin de la infeccin
dependiente o mediada por anticuerpos, que se presenta cuando los
anticuerpos producidos y dirigidos contra el serotipo de DENV que caus la
infeccin por primera vez, reconocen y forman complejos con el segundo
serotipo de virus causante de la reinfeccin. Estos complejos virus-
anticuerpos se unen a los monocitos y macrfagos mediante los receptores
Fc, favoreciendo la penetracin del virus. Este mecanismo incrementa la
proporcin de clulas infectadas, la viremia y la capacidad de dispersin del
virus en el organismo. Esto explica por qu algunos pacientes con dengue
grave poseen ttulos virales ms altos en comparacin con los pacientes con
dengue sin signos de alarma. Adems, el fenmeno de la potenciacin de la
infeccin dependiente o mediada por anticuerpos estimula la activacin en
clulas como linfocitos y macrfagos, induciendo la liberacin de citocinas y
otros factores solubles que alteran, entre otros aspectos, la fisiologa del
tejido endotelial, lo que facilita la extravasacin y la formacin de edemas,
petequias y hemorragias La evidencia clnica de la potenciacin de la
infeccin dependiente o mediada por anticuerpos est dada por los cientos
de casos de dengue grave con manifestaciones hemorrgicas que se han
descrito en Tailandia, donde el dengue es hiperendmico y la poblacin ms
vulnerable a la infeccin son los menores de 15 aos quienes han sufrido
por lo menos una infeccin por DENV (70). Por otra parte, los menores de un
ao que presentan signos de dengue grave al ser infectados por primera
vez por un serotipo de DENV, desarrollan estos signos por la presencia de
anticuerpos anti-DENV transmitidos verticalmente por sus madres (71). Sin
embargo, la literatura tambin reporta casos de dengue grave con
manifestaciones hemorrgicas en pacientes infectados por primera vez.
Esto sugiere que el desarrollo de estas manifestaciones puede tener otras
causas adicionales, como la edad de los pacientes (72, 73), el sexo (62) y
factores genticos del individuo, como la raza y algunos polimorfismos
asociados a los genes HLA, TNF-, y CD209 (74-76). Por otra parte, el
serotipo y el genotipo del virus tambin pueden estar relacionados con la
gravedad de la enfermedad (2). Otro mecanismo que se ha asociado al
desarrollo de dengue grave, es la lisis de las clulas endoteliales, mediada
por complemento y dependiente de anticuerpos, especialmente aquellos
dirigidos contra NS1, que reconocen un antgeno an no identificado
presente en la superficie del endotelio. Esta interaccin activa el sistema de
complemento que altera la permeabilidad vascular, induce la disfuncin del
tejido y lisis de las clulas endoteliales (24,25,64,77,78). Por otro lado, la
gravedad de la enfermedad puede deberse a las grandes concentraciones y
a la constante permanencia de algunas de citocinas producidas y liberadas
por clulas como linfocitos, macrfagos y endoteliales, entre otras. Como se
dijo anteriormente, las clulas infectadas y las no infectadas, responden al
est- mulo inducido por IFN de tipo I y II que activan sobre stas, la
proliferacin, la diferenciacin y la apoptosis. Adems, pueden estimular la
expresin de algunas molculas de adhesin y de receptores que
promueven de nuevo la expresin de citocinas y otros mediadores solubles
(61). Esta activacin inmunitaria constante sostiene una sealizacin que
afecta a las clulas, alterando la funcin del endotelio, de los linfocitos y de
los macrfagos (60,61,79). Entre los mediadores solubles que se han
detectado en pacientes infectados con DENV, se encuentran citocinas de
tipo Th1 y Th2 (T helper lymphocytes) secretadas por linfocitos CD4+ o
CD8+ (5,60,61,79,80). En pacientes con diagnstico de dengue sin signos
de alarma, se detectan citocinas de tipo Th1 como IFN e interleucina 2 (IL-
2), mientras que, en los pacientes con dengue grave, se detectan citocinas
de tipo Th2, como las IL-4, IL-6, IL-8 e IL-10. Particularmente, la IL-8 se
presenta en grandes concentraciones en el suero de estos pacientes y, en
algunos casos, este incremento se asocia con un aumento en la
permeabilidad vascular, la efusin pleural y la muerte de los pacientes (68).
El otro grupo de molculas que se expresa en exceso en las clulas
infectadas y no infectadas, son las molculas de adhesin como ICAM-1,
VCAM-1, E, L y P-selectina, entre otras. Estas molculas facilitan el
reconocimiento, la unin y la posterior diapdesis de clulas como los
monocitos, que atraviesan la barrera endotelial y circulan en los espacios
intersticiales. Esto permite, por un lado, la propagacin del virus a otras c-
lulas y tejidos, y, por otro, el paso de lquido y mediadores solubles que
estimulan los procesos inflamatorios (5, 66, 78). En resumen, durante la
infeccin por DENV la respuesta inmunitaria puede resolver la infeccin, sin
causar grandes traumatismos en el individuo o, por el contrario, puede
llevar al organismo a un aparente caos, donde la constante estimulacin
conlleva a la activacin celular, el aumento de la expresin de mediadores y
de receptores que inducen en algunos casos daos tisulares irreversibles, lo
que aumenta la gravedad de la enfermedad (4, 46, 60, 61, 63, 74).
Finalmente, aunque en los ltimos aos se han definido e identificado varios
factores que pueden favorecer directa o indirectamente el desarrollo de las
formas ms graves de dengue, no se han establecido con claridad las
principales causas que incrementan de forma notoria la respuesta
inmunitaria en algunos pacientes. Adems, el aumento de casos de dengue
con manifestaciones atpicas, como miocarditis, encefalitis, hepatitis o
insuficiencia renal, sugiere cambios en el perfil de la enfermedad que
podran deberse a cambios del tropismo del virus; esto ltimo muestra la
necesidad de conocer ms sobre el virus y los posibles mecanismos que
est utilizando para infectar diferentes tipos celulares o diferentes tejidos.
En los ltimos aos, a partir del conocimiento de la estructura del virus, se
ha propuesto, por ejemplo, el bloqueo de la actividad NS3pro con
inhibidores especficos, el bloqueo de la polimerasa NS5 con nucletidos
modificados y, ms recientemente, se est usando la deteccin de la
protena NS1 en el suero, como una prueba diagnstica de mayor
sensibilidad. Es indudable que el nuevo conocimiento sobre la estructura y
la funcin de las diferentes protenas virales y sobre el ciclo viral, aumenta
las posibilidades de plantear nuevas estrategias farmacolgicas o vacunales
que permitan evitar o tratar la enfermedad.

NATURALEZA:
El virus del dengue es la causa de dos enfermedades que difieren de su severidad. Existe
un serotipo que apareci hace unos 200 aos y que provoca una fiebre leve (DEN-1).
Tambin existe un serotipo ms grave de la enfermedad que causa la fiebre hemorrgica y
fue identificado despus de la Segunda Guerra Mundial. El virus del dengue se encuentra
en Asia, frica y Amrica del Sur y es transmitido por mosquitos de la familia de Aedes.
Este mosquito est muy extendido en los bosques y zonas hmedas, ya que estas reas
son favorables para la reproduccin. El virus del dengue es responsable de ms de 100
millones de casos de fiebre leve, y ms de 500,000 casos de fiebre hemorrgica al ao. De
esta cifra, alrededor de 25.000 personas mueren.

TIPOS DE VIRUS:
El virus del dengue pertenece a la familia de los Flavivirus, y se puede dividir en cuatro
diferentes serotipos DEN-1, DEN-2, DEN-3 y DEN-4. Estos cuatro serotipos tienen
diferencias en la composicin de su genoma y sus antgenos en la superficie. Una persona
infectada por uno de estos virus es inmune de por vida contra l, pero no est protegida
contra los otros tres serotipos. La investigacin reciente ha demostrado que cada serotipo
se pueden dividir en genotipos dependiendo de dnde se encuentra el virus en el mundo y
cada genotipo podra subdividirse en intra-genotipos de acuerdo con las diferencias en la
composicin del genoma.