UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

CURSO: BIOQUMICA Y NUTRICION

PRACTICA No 7

DOSAJE DE AMILASA SERICA Y URINARIA

La amilasa, enzima del grupo de las hidrolasas, se produce principalmente en la

fraccin exocrina del pncreas y en las glndulas salivales.
Su accin se dirige particularmente a escindir los enlaces alfa 1-4 glucosdicos de
los polisacridos como almidn y glucgeno.
En pacientes con pancreatitis aguda, la amilasa srica empieza a elevarse en las
primeras 2 a 3 horas de la enfermedad, alcanzando los valores ms elevados entre
las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los niveles
normales entre el 3 y 6 da. Tambin se ve aumentada en este caso la excrecin
urinaria de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 das, luego de que la
actividad srica ha alcanzado los niveles normales.
Tambin es posible encontrar valores aumentados en pacientes con ulcera gstrica
o duodenal perforada, obstruccin intestinal, obstruccin de conductos biliares,
pancreatitis crnica, hipertiroidismo, carcinoma de cabeza de pncreas,
administracin de opiceos y en general cualquier caso de abdomen agudo o
intervencin quirrgica en regiones prximas al pncreas.
Las parotiditis bacterianas y virales, que producen bloqueo de la secrecin de
amilasa salival, se asocian tambin con elevaciones en los niveles de amilasa
srica.

PANCREATITIS AGUDA:

Definicin: Es un desorden inflamatorio del pncreas, en el cual la funcin

pancretica normal debe ser restaurada una vez que la causa primaria del evento
agudo es superado.
Causas:

- Pancreatitis por clculos biliares: 60% (en nuestro medio)

- Pancreatitis alcohlica: 80% (en pases Anglosajones)
- Pancreatitis de causa idioptica: 30%
- Pancreatitis por tumores
- Pancreatitis por condiciones metablicas asociadas
- Hipertrigliceridemia
- Hipoparatiroidismo
- Hipercalcemia
- Hiperlipoproteinemia Tipo V; tambin tipos I y IV
- Pancreatitis por Toxinas (Insecticidas)
- Pancreatitis por picadura de escorpin en Amrica del Sur y Central
- Pancreatitis por Metanol
- Pancreatitis traumtica (Trauma abdominal)
- Pancreatitis Iatrognica: ERCP, por corte esfnter de Oddi Ciruga
pancreatobiliar,
transplante renal-Vasculitis- SIDA-Parasitosis

PANCREATITIS CRNICA:

Definicin: Es un estado inflamatorio crnico que determina un dao irreversible

de la estructura y funcin pancretica. El curso clnico de la pancreatitis crnica
puede consistir en ataques recurrentes agudos o una relativa progresin de
sntomas.
En 1988 la clasificacin Marseilles - Roma de Pancreatitis reconoci la Pancreatitis
Crnica Obstructiva subsecuente a la pancreatitis crnica. sta es causada por la
lesin obstructiva, es la forma ms comn de pancreatitis, la que se caracteriza
por cambios crnicos irreversibles.

Causas:

- Pancreatitis Alcohlica
- Pancreatitis Idioptica
- Pancreatitis Crnica Tropical
- Pancreatitis Hereditaria
- Pancreatitis por Hipoparatiroidismo
- Pancreatitis por Lesiones Traumticas del Conducto Ductal
 Experimento A: DETERMINACIN DE AMILASA EN SUERO

FUNDAMENTOS DEL METODO:

En este mtodo el sustrato, almidn tamponado, se incuba con la muestra,
producindose la hidrlisis enzimtica. Esta se detiene por el agregado de reactivo
de yodo, que al mismo tiempo produce color con el remanente de almidn no
hidrolizado. La disminucin de color respecto de un sustrato control (sin muestra)
es la medida de la actividad enzimtica, que se expresa en Unidades Amilolticas
(Smith & Roe)/decilitro (UA/dl), comparables con las Unidades Sacarognicas
(Somogy)/decilitro.

MATERIALES Y REACTIVOS:

- Espectrofotmetro.
- Micro pipetas y pipetas capaces de medir los volmenes indicados.
- Tubos de ensayo y cubetas de lectura.
- Bao Mara a 37C.
- Reloj o timer.
- Sustrato: solucin de almidn 500 mg/l, tamponada a pH 7 con buffer
fosfato 0.1 mol/l en NaCl 0.15 mol/l.
- Reactivo de yodo: solucin 0.01 eq/l de yodo en HCl 0.02 mol/l.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Preparar los siguientes tubos:

Control Muestra
Sustrato 1 ml 1 ml
Dejar unos minutos en bao de agua a 37C y agregar:
Muestra --- 20 uL
Incubar a 37C. A los 730 exactos, agregar:
Reactivo de yodo 1 ml 1 ml
Mezclar por agitacin suave. Retirar los tubos del bao y agregar:
Agua destilada 8 ml 8 ml
Mezclar por inversin.
Leer en espectrofotmetro a 640 nm, llevando a cero el aparato con agua
destilada.
Experimento B: DETERMINACIN DE AMILASA EN ORINA

El procedimiento es igual que el caso anterior, solamente que en este caso la

muestra en lugar de suero es orina diluida la cual debe obtenerse de la siguiente
manera:
El paciente debe orinar descartando esta miccin, dos horas despus vuelve a
orinar y recoge toda la orina. Esta muestra, que corresponde a dos horas de
diuresis, se diluye a 200 ml con agua destilada. La determinacin se efecta con
20 uL de esta dilucin, obtenindose el resultado directamente en Unidades
Amilolticas/hora.

CALCULO DE LOS RESULTADOS:

Para ambos experimentos se emplear la siguiente frmula:

Abs. Control - Abs. Muestra

Amilasa UA/dl = --------------------------------------- x 1000
Abs. Control

Unidades: Una Unidad Amilolticas (UA) es la cantidad de enzima contenida en 100

ml de muestra, que puede hidrolizar 10 mg de almidn en 30 minutos, en las
condiciones de la reaccin. En esta tcnica se incuban 20 uL de muestra con 0.5
mg de almidn contenidos en 1 ml de Sustrato durante 7 minutos y medio, lo que
equivale a incubar 100 ml de suero con 10,000 mg de almidn durante 30
minutos. Si todo el almidn fuera hidrolizado, la actividad amilsica de la muestra
sera de 1000 UA/dl. Para obtener las unidades de actividad amilsica, la fraccin
de almidn digerido se multiplica por 1000.
VALORES DE REFERENCIA:

Suero Orina
(UA/dl) (UA/hora)
Normal <120 <260
Pancreatitis aguda 300 a 12000 Ms de 900
Pancreatitis crnica Hasta 200 Ms de 300
Parotiditis 200 a 350 350 a 750
Parotiditis con complicacin pancretica Ms de 350 Ms de 750
Procesos abdominales agudos (sin Normal Normal
pancreatitis)

CUESTIONARIO:

1.- Explique como se produce la activacin de las enzimas producidas por el

pncreas exocrino?
2.- En una pancreatitis que importancia tiene el dosaje de las enzimas: lipasa,
tripsina, elastasa y fosfolipasa A2?
3.- Explique como se produce la digestin completa del almidn en nuestro tubo
digestivo.
4.- Cul es el cuadro clnico de una pancreatitis aguda?
5.- Qu otros exmenes auxiliares se pueden realizar para confirmar el
diagnstico de pancreatitis?