Informe de trabajo: Determinacin de Ketoprofeno por

Espectrofotometra UV-Vis.
Fecha de entrega: 24/Abril/2017

Introduccin:

-Importancia de la determinacin: La espectrofotometra UV es una de las muchas tcnicas de

espectroscopia de absorcin que se puede usar para el control de calidad de los frmacos. La
espectrofotometra UV-Vis permite la identificacin y cuantificacin de contaminantes de
naturaleza orgnica presentes en una muestra de frmaco de manera simple y con una sola
medicin. Tambin puede usarse para asegurar que una muestra de frmaco tenga el principio activo
dentro de las cantidades que producen un efecto teraputico en el paciente, pero fuera de las
cantidades que producen efectos txicos. Sin la espectrofotometra UV-Vis, el control de calidad en
la industria farmacetica se vera sumamente limitado y podra llevar a la comercializacin de
frmacos contaminados o con efectos txicos o insuficientes.

-Descripcin del proceso y los resultados obtenidos: El proceso general para la determinacin de
un compuesto en una muestra usando espectrofotometra UV-Vis es el siguiente: Primero hay que
pesar una cantidad de muestra definida usando instrumentacin analtica para reducir la
incertidumbre del proceso.
Se necesita preparar una disolucin del compuesto en cuestin que permita el paso de la luz UV-
Violeta. La solucin debe ser pticamente clara o transparente, ya que las partculas de una
suspensin pueden dispersar la luz incidente y generar resultados errneos. El solvente usado debe
asegurar la disolucin de la muestra, pero permanecer pticamente claro. Esto implica que se
pueden agregar solventes cido-base que den lugar a un pH de solucin ptimo para solubilizar
completamente el compuesto (sin llegar a un pH que pueda corroer o daar las celdas de cuarzo).
Una vez elegido el o los solventes, hay que preparar una serie de soluciones con una concentracin
molar entre 103 y 106 M, ya que ese el intervalo de concentraciones que el
espectrofotmetro UV-Vis del laboratorio puede medir. La primera serie debera ser a partir de un
estndar de la sustancia o principio activo que se est analizando.
2
Se prepara una disolucin madre a partir del estndar, comnmente de 10 M y luego se hacen
las disoluciones necesarias para alcanzar se rango de concentraciones. La serie de disoluciones
estndar se usar para poder generar la curva de calibracin (5 a 7 puntos experimentales). Al
mismo tiempo, se harn diluciones de la muestra de soluto a analizar; con concentraciones que las
posicionen en la parte media de la curva de calibracin.
Se mide la absorbancia de un blanco (el solvente usado sin muestras del analito), y luego se procede
a medir la absorbancia de las disoluciones estndar para formar la curva de calibracin.
Una vez obtenida la curva de calibracin, se pasa a medir la absorbancia y obtener el espectrograma
de la o las disoluciones de la muestra. Posteriormente, hay que comparar los espectros, y determinar
max, y las diferentes para todos los compuestos involucrados. Si los espectros no tienen zonas
donde las traslapen con otras absorbancias para otro componente, se analiza la o las
involucradas. Si hay traslape de los espectros, entonces determinar las 1 2, 3, etc. para todos los
componentes usando curvas de calibracin. Finalmente se trata la muestra y se lee en 1 2, 3
etc.
Los resultados obtenidos sern una curva de calibracin, y un espectrograma de la muestra que se
compararn entre s para obtener informacin de la muestra analizada.

Antecedentes:
-Generalidades del Ketoprofeno: El Ketoprofeno ((RS)-2-(3-benzoillfenil) cido propanoico)
es un frmaco anti-inflamatorio no esteroideo. Tiene efectos analgsicos y antipirticos.
Comnmente prescrito para aliviar dolor, inflamacin, y rigidez. Tambin sirve para aliviar dolor
por artritis o incluso por dolores de cabeza, clicos
menstruales, dolor muscular, o reducir fiebre. Se
metaboliza en el hgado conjugndose con cido
glucornico, siendo hidrolizado en su anillo bencnico por
las enzimas CYP3A4 y CYP2C9. Inhibe las COX-1 y
Ilustracin 1: Estructura de
COX-2 reversiblemente, inhibiendo la produccin de
Ketoprofeno. prostaglandinas y causando un efecto analgsico. Tiene
riesgo de producir problemas cardiovasculares, desde
ataques al corazn hasta ataques fulminantes. Tambin puede casar lceras estomacales, sobre todo
en pacientes mayores. Tiene una masa molar de 254.281 g/mol y, un punto de fusin de 95C.

-Fundamento de la tcnica y la instrumentacin: La espectrofotometra UV-Vis es una

tcnica que usa la absorbancia de la luz dentro del rango de la luz ultravioleta y la luz visible (
10 nm a 400 nm y 400 a 700 nm , respectivamente por parte de un analito para causar la
excitacin de los electrones presentes en el mismo hacia niveles de energa ms altos; dando lugar a
la obtencin de un espectrograma que muestra la absorbancia de la luz UV-Vis por parte del analito
a una especfica. Esto implica que solamente cuando la luz incidente sobre el analito cause
excitacin de sus electrones a un estado mayor de energa, habr absorcin de la luz en una
especfica.
De acuerdo a la Ley de Beer-Lambert, cuando un haz de radiacin monocromtico con potencia Po
choca contra un bloque de material absorbente; al atravesar longitud b del material con n tomos
iones, etc; su potencia disminuye a valor P. Esto ocurre porque parte de la luz se absorbe y el resto
se transmite, dando lugar a los conceptos de Absorbancia y Transmitancia. . Regularmente, la
Transmitancia (T) y la Absorbancia (A) no pueden medirse si el medio no es transparente. La
dispersin o atenuacin por partculas suspendidas pueden afectar estas variables, definidas as:
P solucin P
T= =
P solvente Po

A=log 10 ( PP solucin
solvente ) P
=log ( )=log
10
Po 10 (T )

Po=Potencia de radiacin despus de pasar a travs de celdas o cubetas con solvente.

P=Potencia de radiacin despus de pasar a travs de celdas o cubetas con solucin de analito
Ley de Beer-Lambert:

log 10 ( PoP )=( Absorbitividad molarLongitud por donde pasa la luzConcentracin de la solucin)
log 10 ( PoP )=(bc)
La ley de Beer-Lambert se limita porque la absorbancia est relacionada linealmente con la
longitud. Hay desviaciones cuando b es constante, y solamente describe sistemas con
concentraciones bajas de soluto. Requiere que el medio absorbente sea homogneo y que no
disperse la radiacin (nada de turbidez), la radiacin incidente deben ser rayos paralelos entre s, y
preferentemente, debe ser monocromtica.

El costo de la instrumentacin es superior a 30,000 dlares. Un espectrofotmetro est compuesto

por: Fuentes, selectores de longitud de onda, recipientes de muestra, transductores de radiacin, y
procesadores de seal con dispositivos de lectura.
-Fuentes: Lmparas de deuterio e H. Produce espectro continuo en regin ultravioleta. Son de bajo
voltaje. Emiten tambin un poco IR y visible. Usa filamento de W a 2870 K en medio de caja de Ni.
Produce salidas entre 160 y 800 nm. Apertura entre dos electrodos restringe descarga a trayectoria
angosta.
-Celdas de cuarzo o slice fundida para usarse por debajo de 350 nm y hasta 2000 nm. Las mejores
son cubetas tienen ventanas completamente perpendiculares al haz de luz.
-Monocromadores: Permiten llevar a cabo barrido del espectro usando espejos rendijas o prismas.
Se usan monocromadores de red fabricados a partir de una red patrn (superficies pticamente
planas, pulidas y cnicas) con 100 surcos/mm. Estn compuestos por una rendija que proporciona
imagen ptica rectangular, lente o espejo colimador que produce haz paralelo de radiacin, un
prisma que dispersa radiacin en longitudes de onda, un enfocador, y una rendija de salida.
-Selectores de longitud de onda: Ancho de banda angosto intensifica selectividad. Idealmente solo
debe haber una . Se usan filtros de interferencia (Fabry Perot) y Filtros de adsorcin. Los primeros
usan interferencia ptica para proporcionar bandas angostas. Suelen estar compuestos de NaF o
MgF
-Detectores: Fotomultiplicadores multiplican la corriente producida por la luz incidente por 10^9.
Cuando la luz entra al fotomultiplicador, se convierte en electrones emitidos al vaco y lanzados
hacia los ctodos y nodos presentes, creando una seal elctrica medible.
-Transductores de radiacin: Convierten la energa radiante en sea elctrica. Idealmente tiene anta
sensibilidad, alta relacin seal ruido, y respuesta constante. Hay transductores de fotones y de
calor.

-Muestras utilizadas: Para la muestra se us Ketoprofeno marca Profenid intravenoso en

solucin inyectable de 100 mg.
Procedimiento:
-Diagrama de flujo con datos (cantidades, concentraciones, etc.)

Datos y observaciones:
-Fuentes de incertidumbre, diagrama de espinas:
Espectro de absorcin con valores de max y :

Imagen 1: Espectrograma de luz UV-visible para la muestra experimental de Ketoprofeno. Lambda max=260
nm
Imagen 2: Espectrograma de luz UV-visible para el estndar experimental de Ketoprofeno . Lambda
max=260.6 nm.

Valor de Epsilon: 15309 L mol-1 cm -1 (Obtenido tericamente de: Szab, R. K.

(2010). Decomposition of some pharmaceuticals by Advanced Oxidation Processes (Doctoral dissertation,
Universit de Poitiers).

-Todos los datos en tablas con pie de figura:

Valores de concentraciones tericas, con Ley de Beer y obtenidas con Espectrofotmetro para las
disoluciones estndar y la muestra.
Valor de Epsilon: 26208.1034
L mol1 cm1
Longitud de celda: 1 cm
mL Solucin Concentracin Absorcin Concentraci Concentracin
Disolucin Est. terica (260 nm) n real espectrofotmetro:
1 3 0.000012 0.3167 1.2084E-05 0.000012
2 7 0.000028 0.2951 1.12599E-05 0.000028
3 10 0.00004 1.0728 4.09339E-05 0.00004
4 13 0.000052 1.3506 5.15337E-05 0.000052
5 15 0.00006 1.5779 6.02066E-05 0.00006
6 18 0.000072 1.9169 7.31415E-05 0.000072
7 22 0.000088 2.3016 8.78202E-05 0.000088
Rplica 1
muestra - 0.0001195 1.7661 6.73876E-05 0.00007
Rplica 2
muestra - 0.0001195 1.765 6.73456E-05 0.00007
Rplica 3
muestra - 0.0001195 1.766 6.73837E-05 0.0000699
Promedio
muestra - 0.0001195 1.7657 6.73723E-05 6.99667E-05
Tabla 1: Valores de concentraciones tericas, usando Ley de Beer (Concentracin real), y las obtenidas
experimentalmente con Espectrofotmetro. Valor de dilucin 2 no eliminado todava para mejorar curva.
Valor de Epsilon obtenido con grfica de Concentracin Espectrofotmetro Vs. Absorbancia a 260 nm (Tabla
3 y Grfico 1). Se considera que la b es de 1 cm, porque esa era la medida de las celdas usadas.

Disolucin Absorcin (260 nm) Concentracin de espectrofotmetro:

1 0.3167 0.000012
3 1.0728 0.00004
4 1.3506 0.000052
5 1.5779 0.00006
6 1.9169 0.000072
7 2.3016 0.000088
Tabla 2: Valores utilizados para construir grfica de Concentracin de Espectrofotmetro Vs. Absorbancia a
260 nm. Se elimina disolucin 2 para mejorar curva de calibracin.

m (Epsilon) 26208.10345 0.007512414 b

Sm 312.7081471 0.018489489 Sb
R2 0.999430859 0.01844713 Sy
Tabla 3: Datos relevantes de la regresin estadstica lineal.

Grfico de Concentracin molar obtenida con Espectrofotmetro Vs. Absorbancia a 260 nm

2.5

f(x) = 26208.1x + 0.01

2 R = 1

1.5

Absorbancia
1

0.5

0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Concentracin (M)

Grfica 1: Concentracin molar de disoluciones 1,3,4-7 y promedio de la muestra vs. Sus absorbancias,
ambas medidas con espectrofotmetro.
Grfica 2: Curva de calibracin usando las siete diluciones del estndar 10-4 haciendo uso del
espectrofotmetro.

Clculos:
-Concentracin real de la disolucin medida:
Para obtener la concentracin real de la disolucin medida se usar la Ley de Beer-Lambert:

A=log 10 ( PoP )=( Absorbitividad molarLongitud por donde pasa la lu 23.925 ppm zConcentracinde la s
A=log 10 ( PoP )=( bc )
A=(bc )

A
c=
b
 =26208.1034 L mol1 cm1

b=1 cm

A ( promedio de muestra )=1.7657

A
c=
b

1.7657
c ( promediode muestra)= =6.7372105 M
26208.1034(L mol1 cm1)1 cm

Para obtener la incertidumbre del promedio de la muestra se usarn los datos estadsticos obtenidos
con la regresin lineal de la curva de calibracin que fue realizada:

Incertidumbre combinada= ( Sy ) + ( Sb )
2 2

2
Incertidumbre combinada= ( 1.844102 ) + ( 1.848 102 )
2

Incertidumbre combinada ( UCMuestra )=2.6106102

(
2 2
UCMuestra Syb Sm
CMuestra
=
Promedio [muestra ]b
+ )( )
m

(
2
( 1.844102 ) (7.512103)
)(
2
UCMuestra 312.7081
CMuestra
= 5 3
(6.737210 )(7.51210 )
+
26208.10345 )
UCMuestra
=1.4679
CMuestra

( UCMu 2 2
U [ Muestra ] S
[ Muestra ]
=
CMu )( )
+
x n
 (
2 2 2

)(
8
U [ Muestra ]
[ Muestra ]
=
2.610610
1.4679
+
5.773510
5
6.9933 10 3 )
U [ Muestra ]
= 0.01779
[ Muestra ]

U [ Muestra ]
[ Muestra ] =6.7372105 0.01779 M
[ Muestra ]

Incertidumbre expandida:
5
U [ Muestra]=0.017796.737210

6
U [ Muestra]=1.198610

Incertidumbre absoluta:

Uabs=U [Muestra ]2

Uabs=2.397106

-Concentracin real de la disolucin madre de la muestra:

Para determinar la concentracin real de la disolucin madre, ser necesario tomar la concentracin
real de la muestra obtenida con incertidumbre, y hacer diluciones reversas hasta llegar a la
disolucin madre original:

U [ Muestra ]
[ Muestra ] =6.7372105 1.1986106 M
[ Muestra ]

Primero se hace una dilucin reversa 100:1:

6.7372105 moles Ketoprofeno

100 mL dis
1000 mL dis muestra 6.7372103 moles Ketoprofeno
=
1 mL dilucin 1 1 L dis dilucin 1

Posteriormente se hace una dilucin reversa 10:1

6.7372103 moles Ketoprofeno

10 mL dilucin1
1000 mL dilucin 1 6.7372102 moles Ketoprofeno
=
1 mL dilucin 2 1 L dis dilucin 2
 Concentracinreal de la disolucinmadre de lamuestra=6.7372102 M

Para la incertidumbre se tiene que tomar en cuenta la incertidumbre de pipetas de 1 mL, y matraces
volumtricos de 10 y 100 mL usando datos de fabricante:

( ) )( [ Madre ])
2 2 2
U vol U vol U vol
U [ Madre]= ( U [Muestra] ) +
2
(
Vpipeta1 mL
+ )(
Vmatraz 10 mL
+ )(
Vmatraz 100 mL

( ( 1 mL ) ( 10 mL ) ( 100 mL ) ) (6.737210
0.008 2 0.02 2 2
6 2 0.08
(
U [ Madre]= 1.198610 +) + + 2
)

4
U [ Madre ] =5.5817210

[Madre]U= 6.7372102 M 5.58172104

-Contenido de Ketoprofeno en muestra comercial utilizada:

Para obtener el contenido de Ketoprofeno en la muestra comercial utilizada se deben usar los datos
de masa originalmente pesada y los datos de la muestra comercial en su envase:
Masaoriginal de muestra :0.082 g

Contenido terico de Ketoprofeno en cada contenedor d e Profenid I .V . :0.1 g

Se sabe que la disolucin madre tiene una molaridad real de 6.7372102 5.58172104 M . Por
ende, lo que hay que hacer es obtener las moles de esa disolucin madre y comparar con el
contenido terico de Ketoprofeno en cada envase I.V.

2 4
[Madre]U= 6.737210 5.5817210 M

6.7372102 moles Ketop r ofeno

254.281 g Ketoprofeno
1 L dis disolucin madre 17.1314 g KPF
=
1 mol Ketoprofeno 1 L dis . Madre
Se elimina el volumen para obtener gramos reales de Ketoprofeno sacados de la muestra de
Profenid I.V. original:

17.1314 g KPF
1
1 L dis . Madre
=17.13 mgde Ketprofeno en 1 mL disolucin Madre .
1000

Esto significa que de los 100mg de Ketoprofeno que debera haber, solamente 17.1314 son
Ketoprofeno y el resto es Excipiente, de acuerdo a los clculos realizados hasta ahora. Ahora, hay
que tomar en cuenta que el Profenid I.V. usado haba sido depletado prcticamente hasta la mitad,
tomando un total de 135 mg del contenedor original. Esto significa que los 17.1314 mg obtenidos
en realidad corresponden para 82 mg de Profenid I.V. y no para los 270 mg originales:

17.1314 mg KPF x g KPF

= =56.4083 mg KPF en un envase de Profenid I .V .
82mg de Profenid I . V . 270 mg Profeni d I .V .

Para sacar la incertidumbre habr que considerar incertidumbres de matraces volumtricos de 10 y

100 mL, as como de pipetas de 1 mL y la balanza analtica usada para pesar:

Incerdidumbre de balanza ( UB )=1104

4
110


1104


2

Incertidumbre combinada balanza ( UCB ) =

( ( ) ) ([ g KPF en Ma
2 2 2 2
U vol U vol U vol
UKPF=
[ Muestra ])(
U [ Muestra ]
+
Vpipeta 1 mL )(
+
Vmatraz 10 mL ) 2
+ ( UCB ) + (
Vmatraz 100 mL

( 0.008 2 0.02 2
) ) ( 17.1314 mg )
2
0.08
2
UKPF= ( 0.01779 ) + ( 1 mL )(+
10 mL ) 2
(
+ ( 1.4104 ) +
100 mL
 ' 4
UKPF 3.36205 10 g

Masa de Ketoprofeno por envase de Profenid I . V .=0.05640 3.36205 104 g

Resultado:

Masa de Ketoprofeno por envase de Profenid I . V .=0.05640 3.36205 104 g

Referencia :100 mg 5 mg

Anlisis de resultados: Tras hacer todos los clculos necesarios, se logr determinar que cada
envase de Profenid I.V. de 100 mg contiene en realidad 56.40 mg de Ketoprofeno puro, mientras
que lo dems es un excipiente que probablemente sirve para ayudar a la disolucin del frmaco en
sangre. Este clculo se obtuvo despus de considerar la condicin de que el Profenid I.V. utilizado
en esta prctica ya haba sido usado previamente, y que solamente se usaron 82 mg de Profenid I.V.
con 17.1314 mg de Ketoprofeno dentro para la preparacin de la disolucin madre y de las
muestras. Las incertidumbres obtenidas resultaron ser sumamente satisfactorias, ya que son
menores por varios rdenes de magnitud en el caso de la disolucin madre y solamente por un
orden de magnitud para la concentracin real de la muestra y la masa de KPF real en cada envase de
Profenid I.V. La R cuadrada fue sumamente satisfactoria, con un valor de 0.9994. Esto habla muy
positivamente de la realizacin del experimento y la preparacin de las muestras, a pesar de que se
tuvo que eliminar la dilucin 2 para mejorar este valor. El valor de psilon para la muestra fue
determinado usando la pendiente de la grfica 1, aunque se encontr un artculo citado
anteriormente que usa condiciones similares a las usadas aqu y que al medir absorbancia de
Ketoprofeno a 260 nm obtiene un valor de 15309 L mol-1 cm -1 en comparacin a los 26208
obtenidos con la grfica. Resulta claro que este lote de Profenid (6MXA014) tiene una cantidad
muy reducida de Ketoprofeno en comparacin a la referencia y por ende debera reportarse el
problema a COFEPRIS o PROFECO para prevenir la salida de productos con principio activo
insuficiente al mercado.

Conclusiones:
-El Profenid I.V. est fuera de los valores de referencia, teniendo 56.40 mg de Ketoprofeno en vez
de los 100 mg que debera tener.
-Los valores de R cuadrada para el experimento fueron muy satisfactorios (0.9994), indicando que
la preparacin de muestras, estndares, y sus diluciones; as como el uso adecuado del
espectrofotmetro fueron llevadas a cabo adecuadamente.
-El valor de psilon obtenido con la grfica se desva mucho de los reportados por otros autores (de
15309 L mol-1 cm -1 y 26208 L mol-1 cm-1, respectivamente).
 X
Sergio Emiliano Casco Loeza
Analista, Q.F.B.

Bibliografa:
-Skoog, D. A. (2014). Skoog and West's fundamentals of analytical chemistry. Andover: Cengage Learning
EMEA pp 335-399.

-Ketoprofen. (n.d.). Retrieved April 24, 2017, from http://www.chemspider.com/Chemical-

Structure.3693.html

- (n.d.). Retrieved April 24, 2017, from

https://www2.chemistry.msu.edu/faculty/reusch/virttxtjml/spectrpy/uv-vis/spectrum.htm

- Encontrar un producto. (n.d.). Retrieved April 24, 2017, from http://www.marienfeld-

superior.com/index.php/347/articles/pipetas-volumetricas-de-vidrio.html

- Szab, R. K. (2010). Decomposition of some pharmaceuticals by Advanced Oxidation Processes (Doctoral

dissertation, Universit de Poitiers).