Es DETECCIN INDIRECTA

El experimento 2D HSQC (Heteronuclear Single-Quantum Correlation) permite obtener un mapa de correlacin de desplazamiento
qumico heteronuclear 2D entre heteronucleos 1H y X-ligados directamente (comnmente, 13C y 15N). Se utiliza ampliamente porque
se basa en la deteccin de protones, ofreciendo una alta sensibilidad en comparacin con el experimento HETCOR 2D convencional
detectado con carbono.

Una protena esta compuesta por una serie de monmeros de aminocidos. Aunque hay 19 aminocidos diferentes cada uno con una
cadena lateral distinta, la cadena principal de la protena es un patrn invariable de NH-C-CO como se muestra en la Figura

Cuando se sintetiza bajo las condiciones adecuadas, puede producirse una protena de tomo pesado que contiene ncleos activos de
RMN; Sin embargo, un ncleo 15N tiene una relacin giromagntica muy baja.

Un impulso RF 90o1H crea una polarizacin transversal en los ncleos 1H. Siguiendo el pulso, se deja que los ncleos evolucionen
durante un periodo de tiempo 1 / (4J), que es el tiempo de relajacin longitudinal. A continuacin, se utilizan al mismo tiempo un
impulso de 180 1H y 15N. Durante el tiempo de relajacin posterior, los ncleos 1H desarrollan una polarizacin que es antiphase a
15N. Finalmente, un impulso de 90 1H y 15N, de nuevo simultneo, realiza la transferencia de INEPT de magnetizacin antifsica
desde el ncleo 1H al ncleo 15N. Despus de la transferencia de INEPT, se permite que los ncleos 15N evolucionen durante antes
de que una transferencia INEPT inversa mueva la polarizacin 15N a 1H y se registre una seal desacoplada 15N.

Este experimento proporciona correlacin entre el carbono aliftico y sus protones unidos. La versin de tiempo constante (CT) de 1
H-13 C HSQC se utiliza normalmente ya que evita la cuestin de la divisin de la seal debido a acoplamientos 13 C-13 C J
homonucleares que reduce la resolucin espectral. [4] El "tiempo constante" se refiere a todo el perodo de evolucin entre los dos
pasos de INEPT que se mantiene constante en este experimento. Si se establece que este periodo de evolucin es el inverso de la
constante de acoplamiento J, entonces el signo de la magnetizacin de aquellos carbonos con un nmero impar de carbono aliftico
unido ser opuesto a aquellos con un nmero par. Por ejemplo, si el C de leucina aparece como un pico positivo (2 carbonos alifticos
unidos), entonces los C (3 carbonos alifticos unidos) y C (1 carbonos alifticos unidos) pareceran negativos.

As, en el espectro HSQC de una protena aparecer una seal por cada aminocido y este experimento constituye un verdadero
"carn de identidad" de la protena. Contando el nmero de seales en el espectro ya sabemos cuntos aminocidos tiene la protena,
aunque esta sera una informacin que se puede obtener de manera mucho menos costosa mediante otras tcnicas. Ms interesante
es la informacin que proporciona la posicin de las seales en el espectro. Tal y como se muestra en la Figura 1, las protenas que
estn desplegadas muestran una dispersin de seales muy pobres, sobretodo en la dimensin de protn y que contrasta con la
diversidad de desplazamientos qumicos que se observan en una protena con estructura terciaria (o cuaternaria). Esto es as porque
la conformacin plegada aade una contribucin adicional al desplazamiento qumico que permite dispersar an ms las seales.

El HSQC 15 N es normalmente el primer espectro heteronuclear adquirido para la asignacin de resonancias donde cada pico de
amida se asigna a un residuo particular en la protena. Si la protena se pliega, los picos suelen estar bien dispersos, y la mayora de
los picos individuales se pueden distinguir. Si hay un gran grupo de picos gravemente superpuestos alrededor de la mitad del espectro,
eso indicara la presencia de elementos no estructurados significativos en la protena. En los casos en que existe una superposicin
severa de resonancias, la asignacin de resonancias en los espectros puede ser difcil. La asignacin del espectro HSQC requiere
otros experimentos, idealmente utilizando experimentos de resonancia triple con protenas marcadas con 15N y 13C, que
proporcionan conectividades secuenciales entre los residuos de manera que las resonancias puedan estar enlazadas a residuos
particulares y secuencialmente asignadas. La asignacin del espectro es esencial para una interpretacin significativa de los
experimentos de RMN ms avanzados como la determinacin de la estructura y el anlisis de relajacin.