DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

PRCTICA DE LABORATORIO N 03

BIOMOLCULAS

I. INTRODUCCIN

A travs de la historia el hombre siempre ha tratado de buscar la razn de por qu las cosas
son de esa manera y busca resolver los enigmas que lo rodean. La estructura interna del ser
humano y que la compone no se ha visto ajeno a esta curiosidad. Uno de los enigmas que se
tena durante el siglo XX, fue de qu forma se traspasaba el material gentico de generacin en
generacin, quien lo haca y como lo haca. Al principio se crea que las protenas eran las que
transportaban este material, pero luego, gracias a varios estudios y experimentos de cientficos,
entre ellos Maurice Wilkins, pero sobre todo Watson y Crick (considerados padres del ADN),
con su experimento de los rayos X, lograron descubrir la interna del ADN (doble hlice) y que el
patrimonio gentico del ser humano se basa en 23 pares de cromosomas. Adems de
comprob con esto que las estructuras que transportaba el material gentico eran los cidos
nucleicos (unidades bsicas del ADN). En pocas palabras este fue uno de los descubrimientos
ms importantes del siglo XX.
En el siguiente trabajo y experimento que se realiz, se intent a travs de una serie de
situaciones y pasos, extraer el ADN de una fibra vegetal, en este caso una coliflor, y as de esta
forma tener una visin ms amplia de la estructura del ADN y comprobar empricamente lo que
descubrieron estos cientficos.
El ADN (cido desoxirribonucleico) es la informacin gentica bsica que se transmite de una
generacin a otra y que codifica los datos necesarios para la sntesis de protenas
indispensables para el funcionamiento de la clula o partcula viral.
El ADN est conformado por combinaciones de cuatro bases nitrogenadas denominadas
"nucletidos": adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C), unidas en dos ejes de azcar-
fosfato. Como polos opuestos de un imn, la adenina siempre estar apareada a la timina y la
guanina a la citosina, y viceversa (en combinaciones A-T, T-A, C-G y G-C).
Grficamente, una molcula de ADN es representada como una doble hlice, es decir, como
una escalera caracol, cuyos peldaos se mantienen unidos por dos cadenas o hebras en sus
extremos. En este modelo, los escalones son las uniones A-T, T-A, C-G y G-C, mientras que las
hebras son ejes de azcar-fosfato que funcionan como un esqueleto. (Battaner Arias, 1993)
Sin dudas se puede considerar al descubrimiento de la estructura de la molcula del ADN
(cido desoxirribonucleico) como el hallazgo cientfico ms importante del siglo XX. Es como si
se hubiera terminado de leer un libro sobre la vida lleno de incgnitas y el ADN fuera la clave
para escribir otro en que dichas incgnitas son reveladas.

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

1
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

El trabajo publicado por Watson y Crick en abril de 1953 permiti establecer que el DNA
era la molcula encargada de portar el cdigo gentico y por lo tanto la llave de la herencia y la
evolucin. El conocimiento de cmo se almacenaba y duplicaba la informacin gentica
permiti el estudio de la biologa a otro nivel inicindose la era de la Biologa molecular adems
de recibir sus autores el premio Nobel de Fisiologa y Medicina. En 1978 el descubrimiento de
las enzimas de restriccin mereci tambin el otorgamiento del mismo premio a Werner Arber,
Daniel Nathans y Hamilton Smith ya que su descubrimiento condujo al desarrollo de la
tecnologa conocida como del ADN recombinante que culmin con una nueva rama del saber
conocida como Biotecnologa. As, la primera aplicacin prctica de las enzimas
endonucleasas de restriccin fue la manipulacin de la bacteria E. coli para producir insulina.
Las enzimas de restriccin son como tijeras que permiten cortar el ADN en sitios especficos, de
esta forma se puede remover un segmento de ADN e insertar en su lugar otro y a la vez ese
segmento de ADN puede ser incorporado en otro ADN diferente. Mediante esta tecnologa fue y
es posible el clonado de un gen de inters, determinar las funciones de los genes, producir
protenas en organismos unicelulares o en clulas cultivadas in-vitro y decenas de aplicaciones
ms, entre ellas, la obtencin de ratones knock out.
Todas las lneas de desarrollo derivadas de la Biologa molecular y las tecnologas asociadas: el
cultivo celular y los anticuerpos monoclonales. Mediante la tecnologa del ADN es posible
resolver un crimen determinando el patrn gentico de un acusado o de su vctima y asociarlo
con alguna huella hallada en la escena del crimen, por ejemplo, un pelo o una mancha de
sangre o de semen y se puede terminar la identidad de una persona y su relacin con
sus padres biolgicos. Ha sido posible crear bancos de secuencias de ADN, ARN y protenas
de diferentes organismos. A la vez que fue posible completar el mapa gentico del genoma
humano, establecer relaciones filogenticas con otros animales para completar el rbol
evolutivo. As como se conocen tambin los mapas genticos, de virus, bacterias y otros
microorganismos.
La rama del centro muestra las posibilidades de la ingeniera gentica, por un lado, es
posible sintetizar nuevas clases de protenas que pueden derivar en nuevos tipos de animales o
plantas con los que se producen a su vez nuevos productos alimenticios y tambin encarar la
sntesis de nuevos antibiticos. Mediante ingeniera gentica aplicando el proceso denominado
clonado molecular se ha podido producir protenas en masa, utilizando microorganismos o
clulas en cultivo, Estas protenas como las hormonas, entre ellas la insulina, por ejemplo,
tienen una aplicacin importante en medicina.

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

2
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

`` MTODO DE RECONOCIMIENTO DE ADN``

2 OBJETIVOS

1. Reconocer cualitativamente filamentos de ADN en el tejido vegetal.

2. Identificar cualitativamente filamentos de ADN en el tejido animal.

3 MATERIAL

3.1 MATERIAL BIOLGICO

Para el reconocimiento de carbohidratos en el laboratorio de UPN se emple el siguiente

material biolgico:
1 tomate fresco

50 gr. de carne de res.

3.2 REACTIVOS E INSUMOS

En el desarrollo de esta prctica se utiliz los siguientes insumos:

50 gr. de bicarbonato de sodio (farmacia).

100 ml. de agua destilada.

2 cucharitas de sal comn.

2 cucharitas de bicarbonato de sodio.

15 mil de jabn lquido.

3.4 EQUIPOS Y HERRAMIENTAS

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

3
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

El uso de materiales y herramientas en esta prctica es indispensable porque sin estos

no sera posible realizar el reconocimiento de filamentos de ADN.

HERRAMIENTAS:
Tubos de ensayo.

Un vaso de precipitacin.

Una pipeta

1 colador de cocina pequeo.

EQUIPO:

1 licuadora

4 MTODOS

A RECONOCIMIENTO DE FILAMENTOS DE ADN EN TEJIDO VEGETAL

Cortar el tomate en pequeos trozos, mezclar con 200 ml. de agua destilada y licuar por 20
segundos. Descansar 10 segundos. Repetir 3 veces.
Filtrar para recuperar el filtrado.
Preparar la solucin tampn de lisis.
(Mezclar los insumos en un recipiente y remover bien o agitar el preparado)
100 ml. de agua destilada.
2 cucharitas de sal comn.
2 cucharitas de bicarbonato de sodio.
15 ml. de jabn lquido.

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

4
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

Mezclar 50 ml. de la solucin tampn con 50 ml. del filtrado de tomate, tapar y agitar
lentamente por inversin y dejar reposar por 3 minutos.
Filtrar la mezcla.
Llenar la mitad de un tubo de ensayo con el filtrado, agregar lentamente por el costado
alcohol etlico fro.
Observar la formacin de una interfase de color blanco cremoso (Filamentos de ADN)
Con la ayuda de una palillo o pipeta retirar el ADN.

B RECONOCIMIENTO DE FILAMENTOS DE ADN EN TEJIDO ANIMAL

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

5
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

Cortar la carne de res en pequeos trozos, mezclar con 200 ml. de agua destilada y licuar
por 20 segundos. Descansar 10 segundos. Repetir 3 veces.
Filtrar para recuperar el filtrado.
Preparar la solucin tampn de lisis.
(Mezclar los insumos en un recipiente y remover bien o agitar el preparado)
100 ml. de agua destilada.
2 cucharitas de sal comn.
2 cucharitas de bicarbonato de sodio.
15 mil de jabn lquido.
Mezclar 50 ml de la solucin tampn con 50 ml. del filtrado de carne de res, tapar y agitar
lentamente por inversin y dejar reposar por 3 minutos.
Filtrar la mezcla.
Llenar la mitad de un tubo de ensayo con el filtrado, agregar lentamente por el costado
alcohol etlico fro.
Observar la formacin de una interfase de color blanco cremoso (Filamentos de ADN)
Con la ayuda de una palillo o pipeta retirar el ADN.

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

6
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

5 RESULTADOS

En el primer experimento se observ filamentos de ADN presentes en tejido vegetal

(Tomate en este caso)

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

7
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

En el segundo experimento se observ filamentos de ADN presentes en tejido animal

(Carne de res en este caso)

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

8
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

6. CONCLUSIONES

Se logr reconocer filamentos de ADN en tejido vegetal.

Se identific filamentos de ADN en tejido animal.

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla
Heterognea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de ensayo el
ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro. En caso
de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente. Tenemos
que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.

Si se tiene problemas con el filtro, que no est bien hecho y que no filtra bien, por lo
tanto hay que hacer otro. Tambin puede haber complicaciones con la forma de poner
el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.

Con esto podemos saber cmo es el procedimiento del extracto del ADN, as como si
estructura.

Cada uno de los ingredientes tiene su propia funcin. La solucin de sal y jabn sirve
para romper la membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. El lquido de
lentillas elimina las protenas que degradan el ADN. El alcohol etlico sirve para
precipitar el ADN.

7. BIBLIOGRAFA

http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html

http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm

http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm

http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ciencia_a_tu
_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm

http://www.bioapuntes.cl/laboratorio/extrac-adn.htm

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

9
 DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

http://www.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn

Marsh, L., & Chapman, C. Primates in fragments.

susset_c, M. (2015). Clula vegetal - Monografias.com. Monografias.com. Retrieved 10

October 2015, from
http://www.monografias.com/trabajos14/celulavegetal/celulavegetal.shtml

Curso: BIOLOGA GENERAL INGENIERA AMBIENTAL

10