Procedimiento

Preparacin de la Planta y el Extracto

Para la extraccin se procedi a la preparacin de la muestra Bidens
pilosa, primero se realiz la pesada de la planta , a continuacin el
secado en una estufa de tipo esttica dejando por dos das a una
temperatura de 40 C , despus de obtener la muestras seca se
procedi la reduccin de tamao de la droga vegetal hojas de
Bidens pilosa con un molino de discos y finalmente se obtuvo
pulverizado y se procedi al tamizado droga pulverizada.Se continuo
con el procesos de extractivo de tipo maceracin; se prepar una
solucin hidroalcoholica 370ml (OH/H2O) 9:1 y se peso de la muestra
63g Bidens pilosa pulverizada, se procedi a agregar la droga vegetal
pulverizada en un envase mbar despus se agreg la solucin
hidroalcoholica, el cual consiste en el macerado . A los tres das se
realizo la filtracin y secado en estufa a 40 C.
(M.H. Rossi SP384167) se deposit en el Herbrio do Estado Eneida
P.K. Fidalgo del Instituto Botnico, So Paulo, Brasil. Las partes areas
secas de la planta se pulverizaron y se extrajeron exhaustivamente
con una solucin de etanol-agua (9: 1) a temperatura ambiente
durante 3 das (3 veces). El disolvente se elimin a baja presin para
obtener un extracto seco de etanol (EtOH). Despus de realizar
cromatografa rpida de columna de gel de slice 60 con vaco y
aplicar disolventes con diferentes polaridades, se obtuvieron tres
fracciones de EtOH. Se denominaron fracciones de cloroformo (CHCl _
{3}), acetato de etilo (EtOAc) y metanol (MeOH) segn el respectivo
disolvente utilizado. Los extractos se alojaron a temperatura caliente
en un dispositivo secador protegido contra la luz.
Determinacion de la Actividad anti-inflamatoria
La inflamacin inducida por carragenano en la pata de ratn
representa un modelo clsico de formacin de edema e hiperalgesia,
que ha sido ampliamente utilizado en el desarrollo de frmacos
antiinflamatorios no esteroideos (22). Se inyect carragenano (300 g
/ pata; 50 l) en la superficie plantar de la pata trasera Ratones (n =
10) para inducir edema. Las patas posteriores izquierdas se
inyectaron slo con PBS (pH 7,4; 50 l). Un pretratamiento oral con
EtOH o EtOAc (150 mg.Kg-1), o slo solucin salina (50 l) o la
Indometacina (5 mg.kg-1) se precedi 1h antes del tratamiento con
carragenano. Todos los extractos se diluyeron en solucin salina
tamponada con fosfato (PBS). Los animales de control recibieron
solamente vehculo (0,1 ml / 10 g de peso corporal). La pata
contralateral recibi el mismo volumen de PBS (50 l). El edema se
midi pletismogrficamente 30, 60, 120 y 240 minutos despus. Los
resultados se expresaron como la diferencia en volumen entre la pata
de carragenano y la pata de PBS.
anlisis estadstico
El clsico agente flogstico Carragenano fue eficaz para producir
edema como se muestra en la Figura 5. Los animales pretratados con
los extractos polifenlicos (150 mg.kg-1 vo) presentaron una
disminucin significativa en el edema de la pata en comparacin con
el grupo pretratado con solucin salina (NC = Controles negativos). La
comparacin entre los datos obtenidos de los controles negativos y el
grupo pretratado con la indometacina estndar (5mg.kg-1) revel que
el estndar tambin era muy eficaz para suprimir el edema. A los 30,
60, 120 y 240 minutos despus de la induccin del edema, la
indometacina fue capaz de disminuir los volmenes de la pata en el
34%, 30%, 25% y 60%, respectivamente, en comparacin con los
controles negativos. Similar al efecto demostrado por Indomethacin,
el extracto de EtOAc caus una disminucin de 31, 41, 41 y 55% en el
edema, mientras que el extracto de EtOH mostr un menor efecto en
este sentido (20, 26 y 36% de disminucin, respectivamente) .
Actividad antiinflamatoria oral de los extractos de polifenoles de
Bidens pilosa
Edema de pata inducido por carragenano en ratones. Los animales
tostados pretratados con los extractos de polifenoles de Bidens pilosa
(EtAc y EtOH, 150 mg.kg-1, por va oral) o solo con solucin salina (50
L, control negativo) o Indometacin (5 mg.kg-1, control positivo) .
Patas monitoreadas en
30, 60, 120 y 240 min despus de la inyeccin flogstica (carragenano
al 1% en PBS, 50 l).
Las patas se monitorearon a 30, 60, 120 y 240 min despus de la
inyeccin flogstica (carragenano al 1% En PBS, 50 \ mu l). Todos los
valores se expresan por medio de la diferencia en el volumen entre
las patas traseras derecha e izquierda (L) SD. Los resultados son
valores medios de 10 animales por tratamiento. Estadsticamente
significativa en comparacin con el grupo PC (P <0,001).
Por lo tanto, los dos extractos polifenlicos se ensayaron para
determinar su actividad antiinflamatoria in vivo. Los datos obtenidos
mediante el ensayo de edema de pata inducido por carragenano se
compararon y revelaron que tanto el extracto de EtOH como su
fraccin de EtOAc, cuando se solubilizaron en etanol / agua (1:10; v /
v) y se administraron oralmente a ratones en ayunas

.2. Actividad antiinflamatoria. B. pilosa se utiliza comnmente para

tratar trastornos inflamatorios. Los fitoqumicos antiinflamatorios
presentes en B. pilosa se enumeran en la Tabla 11. La ciclooxigenasa-
2 (COX-2) es una enzima fisiolgicamente importante que convierte el
cido araquidnico en prostaglandina (PGE2). Su expresin es
inducida por una serie de estmulos externos que indican su
implicacin en enfermedades inflamatorias y se utiliza como
marcador inflamatorio 42. Yoshida y sus colegas estudiaron los
efectos de los extractos acuosos de B.pilosaaeriales en la produccin
de COX-2 y PGE2 as como en la activacin de las proteinas activadas
por elmitgeno (MAPK) en fibroblastos drmicos humanos normales
(HDFs) en la citoquina responsetoinflammatoria, IL-1. , Y JNK a
diferentes grados e indujo la expresin de COX-2. La expresin de
COX-2 en HDFs se regul principalmente por p38 despus de la
estimulacin de IL-1. Consistentemente, el inhibidor de p38
SB203580 bloque esta expresin. Usando esta plataforma de
clulas, B. pilosa extractos se espera para la inhibicin de la
inflamacin. El extracto en funcin de la dosis suprimi la activacin
de p38 y JNK y moderadamente suprimido ERK1 / 2, as como
supresin de la expresin de COX-2 y la produccin de PGE2 [42]. Este
trabajo apoya el uso de B. pilosa como un agente antiinflamatorio, sin
embargo, los nocompoundsresponsiblefor la actividad antiinflamatoria
de B.Pilosa fueron identificados. En otro estudio tambin se inform la
actividad antiinflamatoria, as como la actividad antialrgica de B.
pilosa [37]. En este estudio, se utiliz polvo seco de la partcula
benfica de Bpilosa, que haba sido pretratado con la enzima
celulosina. Otros resultados mostraron una administracin teraputica
de los antibiticos tratados con celulosina. DNP (2,4-dintrofenil)
-Ascaris como antgeno. Este tratamiento tambin redujo la
disminucin de la piel, induciendo la anafilaxia percutnea y la
produccin de mediadores inflamatorios secundarios, la histamina y
los frmacos subcutneos [37]. El anlisis psicoqumico mostr que el
tratamiento con clulas aument el porcentaje de cidos cafeicos y
flavonoides. El estudio sugiere que la biloba y sus fenoles tienen
funciones antiinflamatorias. Los fenlicos y los polianios son los
principales fitoqumicos anti-inflamatorios presentes en B. pilosa
(Tabla 11). Sorprendentemente,
Los compuestos fenlicos tales como la luteolina (103) y el cafeato de
etilo (161), que son constituyentes de B. pilosa tambin han sido
reportados como poseedores de actividad antiinflamatoria. La
luteolina fue reportada para exhibir actividad antiinflamatoria en
macrfagos. Xagorari y colegas mostraron que la luteolina inhiba la
liberacin de citoquinas inflamatorias, TNF- e interleucina-6 en RAW
264.7cellsfollowingLPSstimulation [41] .ItinhibitedTNF-produccin
con un valor IC50 de 1M.El mecanismo antiinflamatorio fundamental
de la luteolina se inform que la inactivacin de Akt y NF- B
activacin [41]. Adems, se inform que la luteolina confera actividad
antiinflamatoria a travs de la inhibicin de la expresin de iNOS
estimulada por LPS en clulas microgliales BV-2. Inhibi la microglia
activada por LPS de una manera dependiente de la dosis con un valor
de IC50 de 6,9 \ mu M. Por otra parte, inmunoblot y RT-PCR los datos
demostraron que la luteolina suprimido IB- degradacin y iNOS
expresin en LPS-activado microglia [39]. Kim y sus colegas afirmaron
que la luteolina puede tener efectos beneficiosos sobre las
enfermedades inflamatorias neurales a travs de la inhibicin de la
iNOS expresin [39]. Un estudio relacionado revel que la luteolina
disminuy la actividad transcripcional de NF-B RelA a travs de la
inhibicin parcial de TNF-mediada NF- B DNA vinculante actividad.
Luteolin tambin

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. Fotso, A.F., Longo, F., Djomeni, P.D.D., Kouam, S.F., Spiteller, M.,
Dongmo, A.B. & Savineau, J.P. ( 2013). Analgesic and
antiinflammatory activities of the ethyl acetate fraction of Bidens
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