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Laboratorio de Biologa del Desarrollo

30/Marzo/2017

Practica 2: Desarrollo temprano del pez cebra

(Danio rerio)

A B C

D E F

Imagen 1.
G H I Desarrollo
embrionario
de Danio
rerio
mostrada en
J micrografas
, las
letras
K L muestran el
orden del

Equipo 4:

Abrego Hernndez Sonia Jacqueline

Aguilar Jimnez Yesenia

Anaya Vergara Mtzi Lucero

Demesa Castaeda Alba Vernica

INTRODUCCIN
En los ltimos aos el pez Danio rerio, comnmente conocido como pez
cebra ha tomado gran notoriedad en campos cientficos como lo es el
estudio del desarrollo de vertebrados [1]. Esto se debe a las ventajas que
tiene como modelo de estudio; Un ciclo de vida, de aproximadamente de 12
semanas, lo que permite que el anlisis gentico sea relativamente simple,
se desarrollan rpidamente por lo que en 24 hrs despus de la fecundacin
el embrin tiene ya formados la mayora de tejidos y primordios de rganos.
Otra de las caractersticas importantes es la transparencia de los embriones
o desarrollo al descubierto (no en una cubierta opaca), que adems se
desarrollan fuera de la madre, lo que permite que puedan observarse las
clulas y su destino durante todo el desarrollo. Adems el pez cebra tiene
grandes camadas, se puede reproducir durante todo el ao y es fcil de
mantener [1][2]. Por otra parte, el pez cebra es el primer vertebrado en el
que se ha intentado una mutagnesis intensiva[1], gracias a esto se han
podido determinar las funciones de muchos genes crticos para el correcto
desarrollo de vertebrados. Adems los embriones de pez cebra son
permeables a pequeas molculas colocadas en el agua, lo que ha dado la
oportunidad a los cientficos de poner a prueba medicamentos que podran
resultar perjudiciales en el desarrollo de los vertebrados. Con todas estas
caractersticas el pez cebra es uno de los principales organismos usados
para estudiar el desarrollo de los vertebrados. El ciclo vital del pez cebra,
como se ilustra en la imagen 2 comienza con el huevo del pez que tiene
aproximadamente 0,7mm de dimetro, con una gran masa de Vitelio. Luego
ocurre la fecundacin, cuando un espermatozoide penetra por el micrpilo
fusionando su membrana con la del ovocito, y esto ocurre de 20 a 60
segundos despus de que los gametos son descargados. Esto da comienzo a
la segmentacin, que como no se extiende al Vitelio, resulta en un montculo
de clulas (aproximadamente 64, despus de 2 horas) sobre el mismo [2].
Las segmentaciones llevan al embrin, al estadio de esfera en el que hay
aproximadamente 1000 clulas que yacen sobre el Vitelio. Luego de unas 5,5
horas de la fecundacin se pasa al estadio conocido como escudo, pues las
clulas forman una estructura con forma de escudo, que reviste a la capa
sincital vitelnica dorsal. Posteriormente se da la transicin de la blstula
media o inicio a la gastrulacin con la involucin de clulas endodrmicas y
mesodrmicas, formndose la epibolia. Al pasar 9 horas la notocorda ya
puede ser distinguible, la gastrulacin termina a las 10 horas y es seguida de
la formacin de somitas y la neurulacin [2]. El sistema nervioso se
desarrolla rpidamente, durante las siguientes 12 horas el embrin se alarga
y se reconocen los primordios de los rganos principales (organognesis).
Luego de 18 horas hay 18 somitas y el cuerpo comienza a moverse [1][2].
Luego de 2 das sucede la eclosin a una larva con vejiga natatoria, esta
comienza a nadar y alimentarse. A las 90 horas pos fecundacin podemos
observar el pez joven aun translucido (su cloracin final se ver hasta que
sea un adulto), que alcanzara su madures hasta los 3 meses, periodo en el
que se observaran ms claramente las diferencias morfolgicas entre sexos.
Las hembras tendrn un vientre ms ancho o abultado que el de los machos,
y tambin sern mayores en tamao. Adems los machos presentaran una
coloracin ms dorada [1][2][3].

Imagen 2.
 MATERIALES
Pecera Porta objetos
Red Pipeta Pasteur
Sifn Pipeta de vidrio
Organismo muestra (pez zebra) Pro pipeta
Microscopio Caja petri (varias)
Microscopio ptico Lmpara

METODOLOGA

1. Llenar Los acuarios de vidrio con agua de la llave con pH 7,4 7,6 y a
una temperatura de 28C aproximadamente, desclorada, **nota: tener
el agua al aire libre por 1 dia para que se volatice tal sustancia.
2. capturar espesimenes de pez cebra machos tanto como hembras.
*nota: capturar alrededor de 50 peces, mitad hembras y la otra mitad
machos.
3. una vez obtenidos los peces para la practica, llenar una pecera con
agua. *nota: el agua
con que se llene la pecera debe ser previamente desinfectada de cloro
llevando a cabo el siguiente proceso: poner un recipiente con agua al
interperie (asolearla), dejar ah por un tiempo determinado y colocar el
agua dentro de la pecera
4. colocar los peces dentro, y alimentarlos, aclimatarlos , y dividir a las
hembras de los machos.
5. pasando 5 das colocar a las hembras y los machos en una zona en
la superficie aislada mediante una red, esperar a que el espcimen se
cruce y se reproduzca logrando obtener huevo de en diferentes
estados embrionario.
6. colocar una lmpara en direccin al fondo de la pecera ( ver donde se
encuentran los huevos).
7. Recolectar 5 mililitros de agua del fondo de la pecera.
8. esta cantidad de lquido colocarla en una caja petri para observarlo a
detalle en el microscopio .
9. Pasar con ayuda de una pipeta pasteur las muestras a un porta objetos
para visualizarlas en el microscopio ptico.
RESULTADOS

Primera sesin

1. Despus de cruzar a los organismos macho y hembra del gnero de pez

cebra (danio rerio), ocurri el proceso llamado ovacin y procedimos a sacar
los huevos de la pecera con ayuda de una pipeta de vidrio, los colocamos en
una caja petri y posteriormente los fuimos a observar en el microscopio, y as
se mostraban en esta primera toma de muestra:

1ra 2da 3ra

muestra muestra muestra

2.
Imagen 2. Estas imgenes nos muestran huevos del individuo pez cebra,
en tres tomas de muestra diferentes (denotadas por los nmeros del 1 al
3 ) pero se puede apreciar en todas las imgenes que todos tienen
aproximadamente
Posteriormente, conun ayuda
tiempo de
de vida
unade algunos minutos transcurridos.
pipeta pasteur succionamos y
Imagen 3. Micrografa de un huevo de pez
trasladamos el huevo a un cebra vista en un microscopio ptico, donde
portaobjetos para que pudiera ser apenas se puede apreciar una pequea
protuberancia que es el embrin de 1 clula
visualizado en el microscopio ptico (encerrada con la marca roja).
para una observacin de su morfologa ms detallada y con ms resolucin.
Fueron observados con los lentes que tiene la resolucin de x4 y x7, y el
resultado se muestra en la siguiente imagen: *nota: solo mostramos la
fotografa de uno ya que toda las muestras que tomamos tenan la misma
morfologa (se encontraban en el mismo estadio embrionario).

Segunda sesin
3. En esta segunda sesin de estudio del
organismo danio rerio, repetimos el
procedimiento de la primera sesin, con
ayuda de una pipeta de vidrio bamos a
sacar muestras de huevos pero en esta
ocasin solo se encontr una muestra y no
Imagen 4. Huevo de pez
estaba fertilizada, por lo que finalizamos la cebra no fecundado.
segunda sesin; La foto de la nica muestra encontrada se muestra a
continuacin:

Tercera sesin:
 4. repetimos procedimiento de la primera sesin, haba mucha muestra y
con ayuda de la pipeta
sacamos del agua
algunos huevos. Haba
mucha variabilidad de
etapas del desarrollo del
pez cebra (Danio rerio)
algunas que obtuvimos
y pudimos visualizar,
identificar y clasificar
fueron: etapas como:
A)
zigoto de una sola celula(0-1 h)(imagen A) ,
blstula media 256 clulas aprox. (2 hs)

1 2 3
A A A
Imagen 5. A) En estas imgenes podemos apreciar el zigoto de una sola
clula del huevo de pez cebra (el blastodisco sealado en cada imagen
con una flecha roja), las imgenes 1A Y 2A son micrografas de un
microscopio normal, y la imagen 3A es una micrografa de un microscopio
(imagen B), gstrula epibolia50% (5

hs)(imagen C), gstrula escudo

embrionario (6 hs)(imagen D),
embrin de 24 hs (imagen E), embrin de 48 hs y periodo de eclosin (embrin de
tres das) (Imagen F), cada una de las obtenidas fueron visualizadas en el
microscopio normal y en el microscopio ptico. Nuestros resultados a
continuacin:

B)

1B 2B
1
2
 Imagen 6. B) aqu podemos apreciar blstula media 256 clulas
aproximadamente, las flechas negras nos estn sealando la capa
sincital vitelinica y el polo animal, y las flechas rojas nos estan
sealando el polo vegetal, la imagen 1B es vista a travez de un
microscopio normal y la imagen 2B a travez de un microscopio optico.

C) D)

Imagen 8.C) micrografa donde

Imagen 9. D) enseesta imagen
puede observar la gstrula
podemos apreciar, el huevo en
epibolia50% (5 etapa
hs) de gstrula escudo
embrionario (6 hs), la flecha
roja seala el escudo

E) F)

Imagen 10. E) en esta micrografa Imagen 11. F) En esta

podemos apreciar un embrin de
24 hs, la flecha blanca nos est
sealando la vescula otica
(odo), la roja nos seala la
somita.
micrografa podemos apreciar
embrin de 48 hs y periodo de
eclosin (embrin de tres das),
la flecha blanca nos seala el
ojo, la flecha roja el cerebro
medio, y la amarilla el cerebro
anterior.
A
)

5. Finalmente hicimos la toma de algunos videos de los huevos en etapa de

embrin de 48 hs (donde el organismo ya tena movimiento).

DISCUSIN DE RESULTADOS
CONCLUSION

BIBLIOGRAFA

1. Lewis Wolpert, Jessell, Lawrence, Meyerowitz, Robrtson, Smith . (2007).

Principios del Desarrollo, tercera edicin. First publishd by Current Biology
Ltd. and Oxford University Press 1998, scond edition 2002: Panamericana.

2. Scott F. Gilbert, Susan R. Singer. (2003). Biologa del Desarrollo.

Sunderland Massachusetts: editorial medica PanamericanaS.A arcelo T. de
alvelar 2145-Bueenos Aires-Argentina.

3. Maria Enrica Pasinia *, Francesca Bertolottoa, Paola Fasanoa. (January 15,

2010). The role of models in science: an experience with Drosophila. En The
role of models in science: an experience with Drosophila(1165). aDepartment
of Biomolecular Sciences and Biotechnology, Universit di Milano, Via Celoria
26, 20133 Milano, Italy: WCES-2010.

4. Bruce Alberts Alexander Johnson Julian Lewis David Morgan Martin Raf
Keith Roberts Peter Walter. (2015). Molecular Biology of THE CELL sixth
edition. Published by Garland Science, Taylor & Francis Group, LLC, an
informa business, 711 Third Avenue, New York, NY 10017, US 3 Park Square,
Milton Park, Abingdon, OX14 4RN, U: Garland Science.

5. Curtis H.., Schnek A. (2008). Curtis Biologa. Madrid Espaa: Medica

Panamericana.

6. Mary S. Tyler. (2000). Developmental Biology, A Guide for Experimental

Study. Sunderland: Sinauer Associates.