MICROBIOLOGIA SANITARIA I

UNI FIA
LABORATORIO N1 : DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS

INDICE

I.- OBJETIVOS.............................................................................................................. 1
II.- FUNDAMENTO TERICO.......................................................................................1
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS.................................2
MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS..............................................................3
TRMINOS DESCRIPTIVOS PARA LA MORFOLOGA DE COLONIAS EN LA
SUPERFICIE DE UN MEDIO SLIDO..............................................................4
CARACTERSTICAS PTICAS.......................................................................6
III.- MATERIALES.......................................................................................................... 7
IV.- PROCEDIMIENTO..................................................................................................8
V.- RESULTADOS........................................................................................................11
VI.- DISCUSIN Y OBSERVACIONES.......................................................................14
VII.- CONCLUSIONES................................................................................................15
VIII.- RECOMENDACIONES.......................................................................................17
IX.- CUESTIONARIO...................................................................................................17
X.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................................22
XI.- ANEXOS...............................................................................................................22
Anexo1: Materiales usados en el laboratorio....................................................22
Anexo2: Muestras del cultivo en el laboratorio..................................................23

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RESUMEN

INTRODUCCION

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DISTRIBUCIN UNIVERSAL DE MICROORGANISMOS

III.- OBJETIVOS

Aprender a utilizar los equipos y materiales en el laboratorio de microbiologa, necesarios

para la preparacin de medios de cultivo y conteo.
Probar la formacin de microorganismos expuestos en la naturaleza, con requerimientos
especiales de cultivo, tales como el agar nutritivo, agar saboureud y caldo nutritivo.
Exponer el agar nutritivo y caldo estriles a diferentes condiciones de contaminacin en el
laboratorio y observar el desarrollo de microrganismos en dichos medios de cultivo.
Conocer los factores que influyen en el crecimiento de microorganismos.
Realizar un recuento de bacterias heterotrficas mediante la unidad formadora de
colonias(U.F.C)
Segn las muestras, determinar el grado de contaminacin y el tipo de contaminante en
los diferentes sectores de la facultad.

IV.- MARCO TERICO

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal.
Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera
sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen
mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy

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reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.

Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para
un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el
mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C
proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el
crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio

Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de
luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos.

PH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro,
aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la
presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden
sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.

Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros
como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores
(hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saprofitos tienen rangos ms amplios.

Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de
formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano
normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para
esterilizar los medios de cultivo es la autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como
agente esterilizante)

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PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como
mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de
estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones
para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban
originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin
embargo, la 5 preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo
provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles. Actualmente, la forma ms extendida de
aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente
fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no
suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos
sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos
carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y
sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a menudo
se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades
metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos
microorganismos.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como
albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los
medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos
no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este
solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son
de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios
lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.

MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS:

Agar Nutritivo

El agar Nutritivo garantiza el crecimiento de todos los microorganismos de importancia clnica

tanto Gram positivos como gramnegativos, hongos y levaduras, adems de proporcionar una
herramienta para el mantenimiento y confirmacin de aislamientos primarios El agar Nutritivo

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se prepara a partir del medio de cultivo deshidratado, materia prima producida por la casa BBL
y tiene la siguiente composicin:

g/L Extracto de carne.................................... 3.0 g

Peptona........ ........................................... 5.0 g

Agar........................................................ 15.0

Caldo Nutritivo

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales. Est descripto en muchos procedimientos para el anlisis
de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Contiene pluripeptona (una
mezcla de partes iguales de peptona de carne y de casena) y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarias para el adecuado desarrollo
bacteriano.

Puede ser utilizado adems, como pre enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. a
partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos txicos y
sustancias inhibitorias. Composicin ( gr /litro)

Pluripeptona......................................................................................................................5.0.
Extracto de carne.....................................................................................................3.0.

PH final: 6.9 0.2

Agar Sabouraud

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y

saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.Recomendado para el aislamiento y
desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo). En el
medio de cultivo, la peptona, la triptena y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido,
inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y levaduras. El agar es el
agente solidificante. Puede ser suplementado con otros agentes selectivos de crecimiento.
Glucosado Composicin (en gramos por litro)

Peptona..........................................................................................................................5.0.
Triptena.........................................................................................................................5.0.
Glucosa..........................................................................................................................40.0.

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Cloranfenicol......................................................... .....................................................0.05.
Agar...............................................................................................................................15.0.

PH final: 5.6 0

TRMINOS DESCRIPTIVOS PARA LA MORFOLOGA DE COLONIAS EN LA SUPERFICIE

DE UN MEDIO SLIDO

CRECIMIENTO MICROBIANO
En microbiologa, la palabra crecimiento se define como un incremento en el nmero de
clulas. El crecimiento es un componente esencial de la funcin microbiana, ya que en la
naturaleza cualquier clula tiene un periodo de vida finito y la especie se mantiene como
resultado del crecimiento continuo de la poblacin.

FORMA:

Fig.- 1 Siluetas de microorganismos segn su forma

MARGEN O BORDE:

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Fig.-2
Siluetas de
microorganismos segn el margen o borde

ELEVACIN DE LA COLONIA:

Fig.-3 Siluetas de microorganismos segn la elevacin

SUPERFICIE
Lisa
Rugosa
Plegada

COLOR: Se usan trminos comunes para definirlo y se especifica si el pigmento producido

difusible o no.

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CARACTERSTICAS PTICAS

LUZ TRANSMITIDA (observar a travs de la colonia)

Opaca: no permite el paso de luz
Traslcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos observados
a travs de la colonia.
Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos observados a
travs de la colonia.

LUZ REFLEJADA (observar la superficie de la colonia)

Opaca
Brillante

CULTIVO EN CALDO
Al igual que en los medios slidos, en los medios lquidos las caractersticas de la bacteria
sembrada se reflejan en las caractersticas que presenta el caldo inoculado como son:
Turbidez: Opacidad ms o menos densa, signo de crecimiento.

Fig.-4

Crecimiento en caldo nutritivo

Pelcula: Crecimiento casi continuo sobre el lquido

Sedimento: Depsito de clulas en el fondo del tubo que se re suspende al agitar.

MATERIALES
Materiales que se necesita:

- Tubos de prueba
- Guantes de asbesto
- Probeta
- Piceta
- Esptula
- Algodn
- Vaso de precipitado
- Pipeta
- Vagueta
- Papel Kraft
- Termmetro
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- Esptula
- Canastilla
- Gradilla

Equipos que se utiliza:

- Enclave
- Horno
- Cocinilla elctrica

Medios de cultivo:

- Agar nutritivo (Concentracin: 20 g en 1 litro)

Se utiliz 2.76 g de agar en 120 ml de agua.
- Caldo nutritivo (Concentracin: 8 g en 1 litro)
Se utiliz 1.08 gr de caldo en 135 ml de agua.
- Agar saboraud (Concentracin: 65 g en 1 litro)
Se utiliz 4.875 g de agar en 75 ml de agua.

PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO A: Colonias de bacterias desarrolladas en placas en medio agar
nutritivo

1.- Se tienen 4 tubos a 45C con Agar nutritivos

previamente preparados .Flamear en el mechero y
verter el contenido en 4 placas Petri de la siguiente
manera:

2.- Luego que el agar nutritivo ha solidificado, llevar a experimentacin las placas
exponindolas al aire libre de diferentes ambientes por 15 minutos.

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PLACA 1

GRUPO 1
AMBIENTE Bao de mujeres (FIA)
HORA 5:05 5:20 pm

GRUPO 3
AMBIENTE Bao de varones (FIA)
HORA 5:06 5:21 pm

PLACA N 2:

Dividir la placa de la siguiente manera

Fig.-5 Placa de Petri dividido en 4 sectores

PLACA N 3:

Placa de Petri estril no abrir.

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Fig.-6 Placa de Petri estril N3 del Grupo 1

PLACA N 4:

Placa de Petri no estril, no abrir.

3.- Despus de realizar la recoleccin de muestras, invertir las placas y llevar a la incubadora
a una temperatura de 37 por un periodo de 48 horas(segn el manual del laboratorio).Despus
de este tiempo llevarlas a refrigerar.

Observacin: se dejaron en la incubadora las muestras por 4 das.

PROCEDIMIENTO C: Cultivo de hongos en placas con agar saboraud

1.- En una placa Petri verter el Agar Saboraud ya preparado y solidificado. Exponerlo a un
ambiente determinado y esperar 15 minutos.

2.-Esperar 48 horas para ver el resultado (ideal). Se visualiz 7 das despus.

V.- RESULTADOS
PROCEDIMIENTO A:

Placa N Placa N 4
Placa N 1 Placa N 2
Grupo 3 (No Estril)
(Estril) (Estril)
(Estril)

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Sector Sector
Ambiente:
C D
laboratorio Sector A Sector B
1 Inocula Inocula No abrir No abrir
de Pelo Huella
dor dor no
microbiologia
Estril estril
N de
36 1 7 0 3 - 3
Colonias
X1 =4mm
X1 = 1cm (3) (4)
X2 = 1mm (4) X2 = 1mm
X3 = 2mm (1) (1)
X4 = 3mm (1) X1 = 4mm X3 = 2mm X1 = 1mm
Tamao - - -
X5 = 4mm (2)
(1)
X6 = 9mm
(1)

5 Lisos
Margen o 29 Lisos 3 Liso
1 Liso 2 - - -
borde 7 Ondulados
Ondulados

34 Plana
2 Convexa
6 Planas 3 Planos
Elevacin con boton 1 Plano - - -
1 Convexa

Cromogn
21 Blanco
esis o 1 Blanco 7 Blancos
5 Crema - - - 3 Amarillas
pigmentaci
10 Amarillo
n

16 Opaco 7
Carcter 3 Opacos
20 1 Traslucido Traslucido - -
ptico -
Traslucidos s

Placa Placa N 4
Placa N 1 Placa N 2
Grupo N 3 (No Estril)
(Estril) (Estril)
(Estril)
Ambiente:
Sector Sector C Sector D
Bao Sector B
2 A Inoculador Inoculador No abrir No abrir
varones(FI Huella
Pelo Estril no estril
A)
N de
27 0 0 2 4 3 5
Colonias
Tamao X1 = 1mm X1 = 3mm X1 = 1mm X1 =
(14) X2 = 4mm (1) 6mm (2)
X2 = 2mm X2 = 5mm X2 =
(3) (1) 8mm (1)
X1 = 1mm
X3 = 3mm X3 = 6mm
(1)
(6) (1)
X2 = 1.5mm
X4 = 5mm X4 = 16mm
(1)
(1) (1)
X3 = 2.5mm
X5 = 15mm
(1)
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X4 = 3mm
(1)
(1) X5 = 14mm
X6 = 3cm (1)
(1)
X7 = 8cm
(1)

25 Lisos 1 Liso 1 Ondulado

Margen o 1 rizoide
1 rizoide 2 rizoides 3 Lisos
borde 1 Liso 3 Lisos
1 lobular 1 Lobular
1 Lobular

1 Convexo 3
Elevacin 2 Planos 4 Planos
26 planas Planas 5 Planos

Cromogn
esis o 23 Cremas 1 Blanco 3
4 Blancos 5 Cremas
pigmentac 4 Amarillos 1 rojo Cremas
in

Carcter 27 Opacos 3 1
3 Opacos Traslucido
ptico 2 Opacos Opacos
1 Traslucido
4 Opacos

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Placa Placa N 4
Placa N 1 Placa N 2
Grupo N 3 (No Estril)
(Estril) (Estril)
(Estril)
Ambiente:
Sector Sector C Sector D
Bao Sector B
3 A Inoculador Inoculador No abrir No abrir
varones(FI Huella
Pelo Estril no estril
A)
N de
20 0 2 1 2 0 10
Colonias

X1 = 1mm
X1 = 1mm
(7)
(3)
X2 = 0.5mm
X2 = 2mm
(1)
(2)
X3 =
X3 = 3mm
0.25mm (1)
(1)
X4 = 1.3mm X1 = 0.5mm
X4 = 4mm
(2) (1)
X1 = 1mm (2)
Tamao X5 = 2mm X2 = 1mm
X5 =
(6) (1)
6.5mm (1)
X6 = 3cm
X6 = 8.5mm
(1)
(1)
X7 = 0.2cm
(1)
X = 0.3cm
(1)

17 Lisos 1 Liso
Margen o 2 Lisos 1 rizoide
2 rizoides 1Ondula 1 Ondulado
borde
1 Ondulado do 9 Planos

2
Elevacin Convexos 2 Planos 1 Plano 2 Planos
10 Planos
18 planas
Cromogn
esis o 3 Cremas 2 Blanco 1 Blanco 1 Blanco
pigmentac 17 Blancos 1 Amarillo 10 Blancos
in
10 Opacos
Carcter 20 Opacos 2
2 Opacos
ptico Opacos 1 Opaco

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Placa Placa N 4
Placa N 1 Placa N 2
Grupo N 3 (No Estril)
(Estril) (Estril)
(Estril)
Ambiente: Sector Sector C Sector D
Sector B
4 Biblioteca(FIA A Inoculador Inoculador No abrir No abrir
Huella
) Pelo Estril no estril
N de
Colonia 32 4 0 1 7 0 6
s
X1 = 1mm (5) X1 = 1mm
X2 = 2mm (11) X1 = 1mm (1)
X3 = 0.5mm X1 = (1) X2 = 2mm
(1) 1mm X2 = 1.5mm (2)
X4 = 3mm (4) (2) (1) X3 = 3mm
X5 = 4mm (4) X2 = X3 = 2mm (2)
Tamao X6 = 5cm (1) 1.5mm X1 = 2mm (3) X4 = 5mm
X7 = 6cm (2) (1) X4 = 3mm (1)
X8 > 1cm (2) X3 = 3 (1)
X9 = 8cm (1) mm (1) X5 = 4mm
X10 = 10cm (1) (1)

3 Lisos
2
17 Lisos
Margen 1 rizoides
4 3 Lobular Ondulad
Ondula 1 Lisa 2 Liso os
o borde 12 Ondulado
dos 2 Ondulado
1 Lobular
1
Lobular
4 Convexo
6 Planas botn
Elevaci 4
1 Plana 1 Convexo
n 32 planas Planas
botn 2 Planas

2
Cromog amarilla
nesis 4 s
11 Amarillo 6 Blancas
o Blanca 1 Blanca
21 Blancos 1 Amarilla
pigment s 4
acin
Blancas
Carcte 20 Opacos 12 1 Traslucida 4
r ptico Traslu Opacas
cida
20 2
Opaca
GRUPO s1 2 3 4 5 Traslucid
as
Lab. Bao de Lab.
Ambiente CEIA Biblioteca
Microbiologa Mujeres Fisicoqumica
N de Hongos 17
X1 = Alternaria
sp (3) X1
Tipo de Hongo
= Levaduras
(14)
Colonias 16
Algunas algonodosas
caractersticas de color verde
oliva y cafes
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PROCEDIMIENTO B: CRECIMIENTO DE BACTERIAS EN CALDO NUTRITIVO

Tubo estril Tubo no estril Tubo estril

Grupo N 2
Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril
Cantidad de
Escaso escaso regular
Crecimiento
Distribucin de
Sedimento sedimento pelcula
crecimiento
Olor aromtico aromtico Imperceptible

Tubo estril Tubo no estril Tubo estril

Grupo N 4
Pipeta estril Pipeta estril Pipeta no estril
Cantidad de escaso escaso abundante
Crecimiento
Distribucin de Sedimento anaerobia sedimento Pelcula aerobia
crecimiento
Olor Aromtica imperceptible ptrido

PROCEDIMIENTO C: CULTIVOS DE HONGOS EN PLACAS CON AGAR SABOURAND

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GRUPO 1
OBSERVACIONES AMBIENTE
Estuvo expuesto al ambiente por 15min. Bao FIA
Tiempo de cultivo 6 das.
FECHA DE EXPOSICIN 25/08/16
HORA DE EXPOSICIN 4:48 5:03 pm
NMERO DE HONGOS OBSERVADOS 16
TIPO DE HONGOS alternaria (2)
GRUPO 4 rhizopus (0)
aspergillus (1)
penicillium (3)
OBSERVACIONES AMBIENTE
Estuvo expuesto al ambiente por 15min. saccharoneces
Biblioteca (2)
CARACTERSTICAS verde azulado
Tiempo de cultivo 6 das.
FECHA DE EXPOSICIN verde amarillento
25/08/16
verde negrusco
HORA DE EXPOSICIN 4:49 5:04 pm
negrusco marron
NMERO DE HONGOS OBSERVADOS 10
blanco
GRUPO2
TIPO DE HONGOS
OBSERVACIONES (4) asporangios
AMBIENTE
Estuvo expuesto al ambiente por 15min. (1) alternarias
Laboratorio fisicoqumica
Tiempo de cultivo 72 horas (3) penicilina
FECHA DE EXPOSICIN (2) levadura
25/08/16
CARACTERSTICAS
HORA DE EXPOSICIN Verde
4:49 negruzco
5:04 pm
Verde amarillento
NMERO DE HONGOS OBSERVADOS 14
Verde claro
TIPO DE HONGOS (11) aspergillus
(3) penicillium

CARACTERSTICAS verde amarillento

GRUPO 5
textura algodonosa.
verde azuladas
OBSERVACIONES gris verdosas, gris oliva
AMBIENTE
GRUPO
Estuvo 3
expuesto al ambiente por 15min. Laboratorio de Microbiologa
Tiempo de cultivo 6 das.
OBSERVACIONES AMBIENTE
FECHA DE EXPOSICIN
Estuvo expuesto al ambiente por 15min. 25/08/16
Centro FIA
TiempoDE
HORA de EXPOSICIN
cultivo 6 das. 5:45 6:00 pm
FECHA
NMERO DEDE
EXPOSICIN
HONGOS OBSERVADOS 25/08/16
9
HORA DE EXPOSICIN 4:50 5:03 pm
TIPO DE HONGOS (1) esporangiosporas
NMERO DE HONGOS OBSERVADOS 15(1) aspergillus
TIPO DE HONGOS alternaria (6)
(2) alternaria
(5) penicillium
rizopus (2)
CARACTERSTICAS verde amarillento
aspergillus (1)
gris verdosas
esporangiusporas (3)
CARACTERSTICAS verde azulado
verde amarillento
verde negrusco

VI.- DISCUSIN

PROCEDIMIENTO A :
- El nmero de colonias en el grupo 1 (bao de mujeres FIA) es menor al nmero de
colonias en el grupo 3 (bao de varones FIA) para la placa Petri N1, se observan las
diferentes caractersticas de los ambientes como ventilacin, humedad, partculas, nmero
de personas presentes ,etc.

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- Para las placa N 2 del grupo 1 sector D inoculador no estril, no se observ ninguna
colonia a comparacin del grupo N3 a pesar de la exposicin del inoculador en un medio

contaminado.
- La falta de colonias en la placa N3 para el grupo 1 se debe a que el inoculador expuesto
sobre el cultivo ha sido anticipadamente esterilizado.

- La placa N3 para el grupo 3 no debera presentar colonias, por que el inoculador ha sido
anticipadamente esterilizado; sin embargo, podemos notar la presencia de una colonia por
lo que podemos pensar que fue contaminado casualmente.

PROCEDIMIENTO B :
-Tanto para el grupo 2 como para el grupo 4 , en pipeta y tubo no estril se observa el
crecimiento de bacterias con sus respectivas caractersticas.
-Para los dos grupos las condiciones de pipeta y tubo estril muestran un escaso
crecimiento de bacterias ,lo cual se puede deber a un cierto grado de contaminacin al
momento de transportar los tubos.

PROCEDIMIENTO C :
- Se observaron en todas las placas el crecimiento de hongos y levaduras.
- En la placa del grupo 4 ,donde tal muestra fue tomada en la biblioteca(FIA),se
encontraron hongos y levaduras .Hecho que demuestra una falta de ventilacin e higiene
dentro de la biblioteca de la facultad. Posteriormente se pas a la identificacin.
- El ambiente ms contaminado de hongos fue observado a travs de la placa del grupo 1,
donde la muestra fue tomada en el bao de caballeros de la FIA.

VII.- CONCLUSIONES

PROCEDIMIENTO A:
- Las condiciones del medio influyen en el crecimiento de diversos tipos de
microorganismos, es importante preservar la higiene del ambiente.
- El conocimiento sobre el tipo de cultivo ayuda a la identificacin de microorganismos, lo
cual para cada tipo se requieren nutrientes especficos.
- La buena utilizacin de los elementos y equipos de laboratorio permiten la efectividad
en la prctica de laboratorio y en la identificacin de microorganismos.
- Es evidente segn los resultados de laboratorio el grado de contaminacin al que
estamos expuestos en la FIA debido al nmero de bacterias encontradas en las
muestras.

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- Se observ que predominan los microorganismos de elevacin convexo y de carcter
pticos opaco.

PROCEDIMIENTO B:

- Es posible identificar microorganismos mediante diversos medios de cultivo. Para este

caso se utiliz el caldo nutritivo.

- Los microorganismos estn sujetos al estado estril o no estril y como bien se puede
observar en este experimento no hay mucho desarrollo. Los cultivos aromticos fueron
los que prevalecieron.

- Observamos que este experimento depende de la esterilizacin de los materiales a

usar en cada caso.

PROCEDIMIENTO C:

- Los microorganismos como los hongos se desarrollan en ambientes hmedos, por lo

cual cada ambiente de la facultad presenta esta caracterstica por lo cual se han podido
desarrollar.

- Para cada ambiente de la facultad existe una diferencia entre el nmero de hongos y su
clasificacin, depende mucho del medio. Por ejemplo, el ambiente ms contaminado en
este procedimiento es el Bao de Caballeros FIA, donde se puede apreciar hongos y
levaduras en mayor cantidad.

- Es importante la identificacin de los hongos despus de realizado el experimento, ya

que previene, advierte y controla acerca del cuidado e higiene en los diversos sectores
de la FIA.

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VIII.- RECOMENDACIONES
En todos los experimentos se debe tomar muy en cuenta la seguridad del
procedimiento y el correcto uso de los materiales de laboratorio.
No agitar los tubos de ensayo al momento de observar los resultados, pues ya no
se distingue adecuadamente la distribucin del crecimiento (anillo o sedimento).
Procurar tener selladas las placas Petri, para evitar el ingreso de microorganismos.
Hacer un control riguroso de los tiempos requeridos en los experimentos para
evitar complicaciones posteriores.
Realizar bien la medicin del peso de los medios de cultivo, as como del volumen
de agua destilada, para llevar a cabo los experimentos de manera exitosa.
No contaminar los materiales ya esterilizados como las pipetas, placas, tubos de
ensayo, etc.
Al momento de hacer el trasvase del agar nutritivo hacia los recipientes de prueba
demorar el menor tiempo posible, ya que si la temperatura de esta baja de 45C
tiende a solidificarse.
Se debe asegurar la correcta ubicacin de las placas Petri en el ambiente a tomar
las muestras, a fin de obtener resultados ptimos en condiciones identificadas
previamente.
Se debe tomar en cuenta la vida media de los microorganismos, los cuales viven
aproximadamente 48 horas luego de ser cultivados, pasado ese tiempo, su
identificacin y su estudio no dara resultados ptimos.

IX.- FUENTES DE INFORMACION

X.- ANEXOS

XI.- CUESTIONARIO

1. Qu factores influyen en la microbiologia del aire?

La atmsfera no tiene una microbiota autctona, pero es un medio para la dispersin rpida y
global de muchos tipos de microorganismos. Adems hay una importante transferencia de ellos
y de sus metabolitos gaseosos entre la atmsfera, la hidrosfera y la litosfera. Aunque la
atmsfera es un ambiente hostil para los microorganismos, en la troposfera inferior se
encuentran un gran nmero de ellos.

Las nubes poseen agua, intensidad de luz y concentracin de CO2 suficiente

para permitir el crecimiento de los microorganismos fotoauttrofos.

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En zonas industriales, puede haber, incluso, la suficiente concentracin de
sustancias orgnicas en la atmsfera que permita el crecimiento de algunos
microorganismos hetertrofos.

Los microorganismos pueden ser transportados rpidamente, en forma de

bioaerosoles, a travs de grandes distancias con el movimiento del aire que
representa el mejor camino de dispersin. Algunos han creado adaptaciones
especializadas que favorecen su supervivencia y su dispersin en la atmsfera.

2. Cules son las caractersticas principales de aspergillus, rhizobium, penicillium y

sacharomyce cerevisae?

Aspergillus
200 especies de distribucin cosmopolita, conocidos como mohos negros.
Capaces de utilizar una gran variedad de sustratos a causa de la gran cantidad de
enzimas que producen.
Pueden producir micotoxinas, aflatoxinas, la ms potente es la aflatoxina carcingena
B1.
Pueden producir enfermedades en seres humanos, aspergilosis, Aspergillus fumigatus.
Aplicacin industrial: obtencin de cido ctrico y glucnico (A. niger).
Estructuras somticas: micelio de hifas desarrolladas septadas, hialinas, con clulas
plurinucleadas.

Rhizobium

Las bacterias Rhizobium son organismos de vida libre que habitan en la rizosfera y se
alimenta de los restos de organismos muertos. Estas contienen un plsmido que codifica
informacin que es vital para la infeccin y la nodulacin de la planta hospedadora
correspondiente.

Son bacilos mviles, Gram-negativos, con dos capas de pared celular (la primera capa est
hecha por carbohidratos y protenas, y la segunda capa por lpidos y carbohidratos),
procariotas, aerobios (necesita oxgeno para crecer), mviles (al hacerse el test de
motilidad, el agar se vuelve amarillo y no de su color original morado-), beta (digiere la
hemoglobina), crece casi en cualquier temperatura, pero su desarrollo es ms ptimo a una
temperatura de 25 C (77 F), sus dimensiones son de 0.5-0.9 x 1.2-3.0 m, y cuenta con
flagelos.

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Penicillium

Descripcin micolgica.- Hongo filamentoso que presenta conidiforos tabicados

de pared lisa (200-300 m), ramificado al final, con mtulas (de 8-12 m) y filides
en forma de botella (de 7-12 m), donde nacen conidios lisos, elipsoidales (de 2,5-4
m) azules o verde-azulados en cadenas, sin ramificar, con un penacho o pincel
caracterstico. Colonias de crecimiento rpido, vellosas, aterciopeladas, verdosas
con una corona radial ancha y blanca, a 25 C (no crecen o crecen pobremente a 37
C). Puede haber gotas de exudado sobre la superficie de la colonia. Reverso
habitualmente amarillento o cremoso. Esporulacin abundante. Olor aromtico,
especiado o afrutado (a manzana o a pia).
Habitat.- El Penicillium es un gnero grande y encontrado casi por todas partes, y
siendo comnmente el gnero de hongos ms abundante en suelos. La fcil
proliferacin de los Penicillium en los alimentos es un problema. Algunas especies
producen toxinas y pueden hacer el alimento no comestible o an peligroso. El
micelio del hongo, conjunto de filamentos tubulares llamados hifas, crece en la
superficie de frutas, pan, quesos y otros alimentos. Es una buena prctica desechar
los alimentos que demuestran el desarrollo de cualquier moho. Se encuentra con
frecuencia en los edificios hmedos y mohosos donde deteriora diferentes
materiales de construccin, entre los que resaltan el papel de decoracin (crece
bien en la cola empleada para su adhesin a las paredes). No muestra una notable
variacin estacional. Las mximas concentraciones de conidios en el aire se
alcanzan en invierno y primavera (mayores en las reas urbanas que en las
rurales). Su temperatura ptima de crecimiento es de 23 C, pero crece entre 5 y 37
C. Es alimento de caros como Acarus siro y Tyrophagus pultrescentiae. Puede
encontrase colonizando las vas respiratorias de pacientes con alergias respiratorias
y producir reactividad cutnea. Se han descrito casos
de otomicosis, endoftalmitis, queratitis, infecciones cutneas, esofagitis,
neumonas necrotizantes o infecciones diseminadas en pacientes con [neoplasias]
o inmunodepresin.

Reproduccin.- La reproduccin asexual se produce en Penicillium mediante unas

clulas, los conidios, que se forman en el extremo de hifas especializadas,
losconidiforos. stos son ramificados y en forma de abanico. Los rganos sexuales
son gametangios arrollados en hlice.

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Saccharomyces cerevisiae

La levadura de cerveza es un hongo unicelular, un tipo de levadura utilizado industrialmente

en la fabricacin de pan, cerveza y vino

Caractersticas:

Morfologa elptica u ovoide

Alta capacidad fermentativa.
Formadora de esporas (ascosporas con 4 esporas)
No asimila nitratos ni escinde arbutina.

Crecimiento en presencia de etanol.

Fermenta y asimila glucosa, galactosa, maltosa, sacarosa y rafinosa.
No fermenta ni asimila lactosa.

3. Qu ingredientes contiene el caldo nutritivo, Agar sabouraud y Agar nutritivo?

Agar Nutritivo

A principios de 1900 la APHA (American Public Health Association) sugiri esta formulacin
como un medio de cultivo estndar para el anlisis de agua. El Agar Nutritivo se encuentra
descrito en los Mtodos

Estndar de la APHA y de la AOAC (Association of Oficial Analytical Chemists) para el anlisis

de agua, leche y sus derivados, alimentos y otros materiales.

El Agar Nutritivo sigue siendo un medio ampliamente utilizado para el cultivo de

microorganismos no fastidiosos.

En este medio el extracto de carne y la peptona aportan la fuente de nitrgeno, vitaminas y

carbono. El agar es adicionado como agente solidificante.

Agar Nutritivo Cantidad

Extracto de carne 3g
Peptona 5g
Agar 15g
Agua 1000ml

Caldo Nutritivo

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de microorganismos con
escasos requerimientos nutricionales.

Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros
materiales de importancia sanitaria.
Caldo Nutritivo Cantidad
Extracto de carne 3g 24
Peptona 5g
Agua 1000ml
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Agar Sabouraud

Es un medio para el cultivo de hongos y levaduras. El Agar Sabouraud es una modificacin del
Agar de Dextrosa. Este medio es usado para el cultivo de hongo patgenos, particularmente de
aquellos asociados con infecciones de la piel. La alta concentracin de dextrosa y la acidez
del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos. Con la adicin de cicloheximida,
estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de
dermatofitos.

Agar Sabouraud Cantidad

Pluripeptona 10g/l
Cloranfenicol 0.05g/l
Glucosa 40g/l
Agar 15g/l

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X.- REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

- Michael Madigan, John Martinko, Jack Parker, Biologa de los microorganismos,
Madrid, Editorial Pearson ,2004.
-Michael J.Pelczar, Elementos de Microbiologa, Mxico, Editorial Mc-Graw Hill, 1984.

Pginas webs:

M Concepcin Casado Gonzlez, Medios de cultivo en un laboratorio de

Microbiologa. [Consulta: 17 de setiembre del 2016] Disponible en:
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf

Dr. Vctor Silva, Identificacin de Hongos, Facultad de Medicina. [Consulta: 17 de

setiembre del 2016] Disponible en:
http://www.sochinf.cl/documentos/presentaciones_microbiologia_cli_2011/15_dr_Silva
.pdf

XI.- ANEXOS
Anexo1: Materiales usados en el laboratorio

Fig.-9 Pipeta estril y no estril Fig.-10 Inoculadores

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Fig.-11 Tubos y gradilla

Anexo2: Muestras del cultivo en el laboratorio

Fig.-12 Cultivo de AS del Grupo 4 Fig.-13 Cultivo de CN del Grupo 1

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Fig.-14 Cultivo de AS del Grupo 1 Fig.-15 Cultivo de AS del Grupo 2

Fig.-16 Muestras de los grupos

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