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LA MOLINA
INTEGRANTES:
Del Carpio Uzquisa, Melani
Makka Crdova, Minako
Melgar Saboya, Henry
Prez Gonzales, Francisca
Vinces Vergaray, Suali
FACULTAD: Pesquera
HORARIO DE CLASES: Lunes 9-10am, Viernes 8-10am
PROFESOR(A): Juan Carlos Palma
FECHA DEL INFORME: 9 de diciembre del 2016
5. Bibliografa
1 INTRODUCCION
Las tcnicas instrumentales son de gran importancia debido al establecimiento de
diversos mtodos para determinar la composicin qumica de numerosas muestras de
materia. En un principio la mayor parte de los anlisis se ejecutaban separando los
componentes de inters, denominados analitos, los cuales se encontraban en una
muestra mediante precipitacin, extraccin o destilacin, proporcionando informacin
acerca de la cantidad relativa de uno o ms componentes utilizando la gravimetra y
volumetra.
2 REVISION LITERARIA
Dentro del campo de la analtica ambiental, hay tres tipos de tcnicas instrumentales muy
utilizadas:
A = .b.C
Donde:
A es la absorbancia de la muestra
es la absortividad especfica de la especie que estamos estudiando. Depende tanto de
la naturaleza qumica de la especie qumica como de las condiciones de medida.
b es el espesor de muestra que es atravesado por la radiacin
C es la concentracin del analito en la muestra
A= -logT
Las tcnicas espectroscpicas pueden clasificarse en funcin de su aplicacin a tomos
o a molculas, y en funcin de que lo medido sea la energa absorbida o emitida. De este
modo tendremos:
La fuente de radiacin
El monocromador
Las celdas o cubetas
Sistema de medida
Las celdas o cubetas son los dispositivos en los que se coloca la muestra a analizar, y
que sern atravesados por la radiacin, por lo que deben disponerse perpendicularmente
al paso de sta. Segn la clase de radiacin se deben usar cubetas de distinta naturaleza:
No todas las molculas fluorescen, porque pueden presentar otras vas de relajacin
alternativas, por ejemplo las vibracionales. El que una molcula sea o no capaz de
fluorescer depender en gran medida de su estructura. As, la mayora de los compuestos
con anillos aromticos fluorescen, y dentro de stos lo hacen en mayor cuanta los que
presentan estructuras rgidas.
El nebulizador.
El atomizador.
La fuente de radiacin.
El monocromador.
El detector.
Ilustracin 5
- Est basada en que cada elemento presente en una muestra va a emitir, una vez
excitado, radiacin a una longitud de onda especfica.
- La fase estacionaria; se trata del material inmvil sobre el que se produce la separacin
de los analitos.
- La fase mvil, que es el fluido que arrastra a la muestra a travs de la fase estacionaria.
- Detector, aparato que registra una propiedad fsico-qumica del analito que va saliendo
(eluyendo) de la fase estacionaria.
Las caractersticas de cada uno de estos componentes varan segn el tipo de tcnica.
Existe un gran nmero de tcnicas cromatogrficas, de entre ellas las ms utilizadas en
qumica del medio ambiente son:
Cromatografa inica.
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
Cada molcula se desplaza por efecto del campo, alcanzando rpidamente una velocidad
constante al equilibrarse la fuerza impulsora (fuerza del campo elctrico) con la
resistencia al avance (fuerza de friccin o rozamiento) impuesta por el medio en el que se
desplaza.
vE==qf=ZefvE==qf=Zef
Al ser el medio de soporte a su vez un polielectrolito, est constituido por iones, que son
atrados y as recubren los iones de la muestra, lo que altera el comportamiento de stos
en el campo. Todo ello hace que el tratamiento terico cuantitativo de la electroforesis sea
muy difcil y que esta tcnica resulte poco til para obtener informacin precisa sobre la
estructura de las molculas. Sin embargo, es enormemente til como tcnica analtica y
preparativa.
2. Zonal: la muestra se aplica como una mancha o banda y sus componentes migran
a travs de un disolvente, utilizando adems un medio que da soporte a ste. En
este caso no se determina la movilidad, sino que el nico objetivo de la tcnica es
separar los componentes de la muestra.
3. Continua: la muestra se aplica tambin en una zona, pero se suministra
continuamente a lo largo del proceso (para ms informacin, vanse las pp.250-2
de Freifelder, 1999).
Los procesos electroqumicos en que se basna tienen lugar en las llamadas celdas
electroqumicos.
Una cuba electroltica, formada de material inerte y que va a contener la disolucin objeto
de anlisis.
Dos o tres conductores elctricos, los electrodos.
Un circuito externo responsable de generar el campo elctrico entre los electrodos
Las tcnicas electroanalticas pueden clasificarse en dos grupos:
* Tcnicas interfaciales, basadas en los fenmenos que ocurren en las interfases
electrodo disolucin.
Las ms habituales en el campo medioambiental son las potenciometras.
* Tcnicas no interfaciales, basadas en fenmenos que ocurren en el seno de la
disolucin. La ms habitual en el estudio de muestras ambientales es la
conductimetra(GARCA, 2007)
2.2.4. Potenciometria
2.2.5. Conductimetria
La determinacin conductimtrica es una tcnica ampliamente difundida para las
determinaciones de control de calidad. Estas determinaciones sencillas, econmicas y
tienen una serie de aplicaciones. En primer lugar est el control de la calidad del agua, ya
sea potable o de uso industrial, seguido por la determinacin de la conductividad de las
soluciones en aplicaciones industriales tales como en las electrlisis; ya que el consumo
de energa elctrica durante la electrlisis depende en gran medida de ella. Asimismo, las
determinaciones conductimtricas se usan ampliamente en los laboratorios de anlisis;
por ejemplo, para determinar el contenido de salino de soluciones durante la evaporacin
de agua en calderas, la determinacin de las solubilidades de electrlitos y sus
concentraciones, y las constantes de los cidos y bases. Algunas determinaciones son del
tipo indirecto, tales como la determinacin de CO 2 en agua expuesta a atmsferas
cargadas del gas y la determinacin de SO 2 atmosfrico absorbido en soluciones de
perxido de hidrgeno. (Pardo, 2016)
2.2.6 Voltamperometria
2.2.7 Electrogravimetra
3 TCNICAS INSTRUMENTALES
3.1. MTODOS ESPECTROQUMICOS
3.1.1. Espectroscopia de absorcin molecular UV-Visible
La espectroscopa UV-visible puede utilizarse para determinar muchas
caractersticas fsico-qumicas de los compuestos y, por tanto, puede proporcionar
informacin como la identidad.
A continuacin se presentan un ejemplo.
Temperatura de fusin de las protenas y los cidos nucleicos
Los espectros de absorbancia de las protenas resultan principalmente de
la presencia de los aminocidos aromticos triptfano, tirosina y
fenilalanina. Una protena a temperatura ambiente tiene una estructura o
conformacin terciaria especfica que crea un entorno electrnico
determinado para los aminocidos aromticos. Si se calienta la protena, a
una cierta temperatura, se desdobla o funde y pierde su estructura. En este
proceso, el entorno electrnico de los aminocidos aromticos cambia, lo
que resulta en cambios o variaciones espectrales. Puede utilizarse anlisis
multicomponente para determinar la cantidad de cada aminocido
aromtico que est presente en una protena intacta.
El cido desoxirribonuclico (DNA) en su estado nativo, consta de dos
cadenas de molculas de desoxirribosa enlazadas helicoidalmente. Las
cadenas estn unidas por enlaces de hidrgeno entre las bases purina y
pirimidina (la adenina se une a la timina (A-T) y la guanina a la citosina (G-
C)). Estas bases son las principales responsables de la 15 Principios y
aplicaciones de espectroscopa UV-visible absorbancia UV del DNA, con un
mximo a 260 nm
Como en un sistema multicomponente, la absorcin observada de una
molcula de DNA debe ser igual a la suma de las absorbancias
individuales: Sin embargo, la absorbancia observada es siempre
significativamente menor que la esperada debido a que el enlace de
hidrgeno entre las bases cambia su entorno electrnico. Cuando se
calienta una molcula, el enlace de hidrgeno se rompe, la doble hlice se
desenrosca y la absorbancia aumenta, de manera que se acerca a la
esperada de la suma de todas las bases. Este proceso de
desnaturalizacin tambin se conoce como fusin.
En un experimento de fusin de DNA, se aumenta paso a paso la
temperatura de una disolucin de DNA y se mide la absorbancia a 260 nm
a cada temperatura, representndose como una curva de fusin. El punto
medio del rango de temperatura sobre el que ocurre la fusin, es el valor
Tm. El Tm de una muestra particular de DNA depende principalmente del
porcentaje de parejas G-C de la muestra, cada una de las cuales contiene
tres enlaces de hidrgeno (en contraste, cada pareja A-T contiene dos
enlaces de hidrgeno). Cuanto mayor es el porcentaje de parejas G-C en la
muestra, mayor es el Tm observado.
Aplicaciones ambientales
Los anlisis ambientales se enfocan a la deteccin y/o cuantificacin de muchas
substancias diferentes en una diversidad de matrices. Estos anlisis pueden ir
desde qumicos de pesticidas y herbicidas hasta hidrocarburos aromticos
polinucleares (PAHs), compuestos clorados mezclados en el aire, agua y tierra. En
muchos casos el problema inicial es la obtencin y preparacin de la muestra. Las
muestras de agua son muy variables, desde agua potable hasta aguas
industriales. En muchos casos las agencias de regulacin de calidad tienen
procedimientos estndar especficos para el anlisis de materiales dados en una
matriz dada. Con algunas excepciones los mtodos de anlisis oficiales son
menos sensitivos y consumen mayor tiempo que los mtodos que se desarrollaron
en los comienzos de la cromatografa. En Estados Unidos, la agencia de
proteccin ambiental (EPA) especific procedimientos para el monitoreo de
efluentes industriales en 1977. Los mtodos 603 hasta el 613 separan en 13
clases los 113 contaminantes orgnicos que son monitoreados por cromatografa
de gases.
Otras aplicaciones
Tambin se hacen anlisis cromatogrficos para la determinacin de metanos
trihalogenados, los cuales daan la salud por la desinfeccin del agua de piscinas
con cloro. Se hacen anlisis de componentes de la acrilamida. Se determinan los
residuos de ditiocarbamato en los alimentos dietticos. La determinacin de
aceites minerales en el agua. Anlisis de herbicidas en campos de golf. Para
determinar los grados de alcohol en bebidas como la cerveza. Para la
determinacin de componentes aromticos en alimentos y bebidas.
Las aguas residuales de las industrias de tratamiento de leche presentan las siguientes
caractersticas generales:
-Alta biodegradabilidad.
Por otro lado, las aguas residuales generadas en la fabricacin de helados presentan una
baja carga contaminante, aunque la presencia de nitrgeno amoniacal en cantidades
elevadas hace aconsejable su tratamiento biolgico con nitrificacin-desnitrificacin. En la
siguiente tabla, elaborada por la Federacin nacional de industrias lcteas, se resumen
las caractersticas de los vertidos en funcin de su origen.
( Contaminacin de las aguas, 2008)
Figura 5. Cuadro del origen del vertido ( Contaminacin de las aguas, 2008).
3.4.2. Potenciometra
La determinacin del pH en el mosto y el vino es una medida complementaria de la acidez
total porque nos permite medir la fuerza de los cidos que contienen. Por definicin el pH
es el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidrgeno:
pH = log [H+]
Con el mtodo volumtrico del patrn coloracin consiste que la acidez total es la suma
de todas las acideces valorables, cuando se lleva al vino a pH 7 por adicin de una
solucin alcalina valorada. Se utiliza el azul de bromotimol como indicador para alcanzar
el punto de equilibrio.
Este mtodo es muy similar al anterior, salvo que en lugar de utilizar luz blanca se utiliza
luz ultravioleta a una longitud de onda de 366 nm (Pippy, 1970). El procedimiento consiste
en hacer incidir luz ultravioleta a unos 10 cm sobre la superficie del pescado
examinndolo por ambos lados. Se pueden distinguir larvas de Anisakis y
Pseudoterranova que se muestran de un color fluorescente azulado, y las Contracaecum
que aparecen en amarillo. Generalmente no es un mtodo destructivo, es relativamente
rpido y adecuado para visualizar y extraer nematodos del pescado con carne
pigmentada. Sin embargo, para una mayor eficacia requiere que se congele y descongele
la muestra. Cuando las larvas se someten a un proceso de congelacin, la emisin de
fluorescencia es intensa mientras que en larvas vivas por lo general no hay emisin de
fluorescencia a no ser que hayan sido sometidas a tratamientos posteriores (Tejada et al.,
2006b). La muerte de la larva no coincide en muchos casos con la emisin de
fluorescencia por lo que se considera que es un mtodo inadecuado para discriminar
entre larvas vivas y muertas (Rodrguez-Mahillo et al., 2008;Solas et al., 2008; Vidaek et
al., 2009a; 2009b; 2010).
Este mtodo elimina el problema del grosor de las piezas cuando son evaluadas por
emisin de fluorescencia. Los filetes son sometidos a una presin previa con el fin de
conseguir un espesor de 1-2 mm, para lo cual los filetes dorsales y ventrales sin piel se
introducen individualmente en bolsas de plstico transparente, se someten a presin con
prensa hidrulica, se congelan a -18C durante un periodo igual o superior a 12 h y
posteriormente se someten a inspeccin visual bajo una fuente de luz UV a 366 nm (Karl
y Leinemann, 1993).El mtodo adems de permitir la cuantificacin de las larvas, permite
conocer su ubicacin en el filete. Sin embargo, se trata de un mtodo destructivo y al
realizarse en productos congelados no discrimina entre larvas vivas y muertas.
Se utiliza de preferencia en filetes sin piel y detecta las larvas hasta una profundidadde 8-
9 mm (Heia et al., 2007). La precisin del mtodo depende del nivel de contraste, no
necesita contacto directo con el producto y se puede aplicar para trabajar en lneas de
produccin en tiempo real lo que permite tomar decisiones sobre el procesado posterior
en funcin de la zona infestada.
4.5. Electrocucin
4.6. Irradiacin
4.7. Western-blot
4.8. Inmunohistoqumica
Para contabilizar las larvas enteras muertas de ambos lotes (lotes 1 y 2), las muestras se
colocaron en cmara oscura, se observaron con luz ultravioleta (366 nm) y se tomaron
fotografas con una cmara digital (Coolpix 5000, Nikon, Tokyo, Japn) con luz visible y
luz ultravioleta (366 nm). La fluorescencia emitida por las larvas con luz ultravioleta
permiti verificar su presencia, integridad y cuantificacin. En todas las muestras (Tnx,
Rnx) se contabilizaron las larvas enteras y por diferencia se obtuvo la cantidad de larvas
rotas. Se calcul el porcentaje de retencin de larvas en cada tipo de tamizado
Figura 7.Esquema de la extraccin de protena para inmunodeteccin a partir de msculo
de merluza con infestacin artificial (50 larvas/100 g msculo) y sometidos a tratamientos
de digestin y digestin ms calentamiento.
Figura 8. Esquema del estudio de la separacin mecnica de msculo de merluza con
5. BIBLIOGRAFIA
Pardo, M. d. (2016). Determinaciones Conductimetricas. veracruz.
Bermejo, R., & Moreno, A. (2014). Analisis instrumental. Madrid, Espaa: Editorial
Sintesis, S.A.
Paseiro, P., Simal, J., & Muniategui, S. (s.f.). Espaa: Universidad de Santiago de
Compostela.
Ponce, F. O. (2013). Efecto sobre los alrgenos de las larvas L3 de anisakis al aplicar.
Madrid.