Manual de Procedimientos Según Susceptibilidad de Patogenos Con Impacto Hospitalario

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA LA
DETERMINACiN DE SUSCEPTIBILIDAD
ANTIBITICA EN PATOGENOS DE IMPORTANCIA
HOSPITALARIA.
CODIGO: MNL-R01.5030.012
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INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

REDES EN SALUD PBLICA
Autores: ngela Muoz Delgado. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiologa.

Carolina Duarte Valderrama. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiologa
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Manual de procedimientos para la
determinacin de susceptibilidad
Antibitica en patgenos de impacto
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CONTENIDO
1. INTRODUCCiN 3
2. OBJETIVOS 3
3. ALCANCE DEL MANUAL 4
4. RESPONSABILIDAD 4
5. DEFINICIONES Y ABREViATURAS 4
6. CONDICIONES GENERALES 7
7. FUNDAMENTO 7
8. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO 7
9. MATERIALES Y REACTIVOS 7
10. EQUiPOS 7
11. DESCRIPCION 8
11.1 MICROORGANISMOS A CONSIDERAR 8
11.2 DETERMINACiN DE LA SUSCEPTIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS 8
11. 2. 1 Enterobacterias aisladas de infeccin hospitalaria (diferentes de Salmonella y Shigella) 12
11.2.2 Pseudomonas aeruginosa 18
11.2.3 Acinetobacter spp 19
11.2.4 Burkholderia cepacia 20
11.2.5 Stenotrophomonas maltophilia 21
11.2.6 Staphylococcus spp 21
11.2.7 Enterococcus spp 25
12. DOCUMENTOS DE REFERENCiA 29
13. CONTROL DE REVISIONES 29
14. ANEXOS 29
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1. INTRODUCCiN
Desde la dcada de los 90, la Resistencia Bacteriana (RB) ha sido considerada por la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS) como un problema global que requiere de atencin por parte de los sistemas
de salud pblica y que requiere del desarrollo de actividades que permitan su contencin. Las acciones
recomendadas por la OMS a nivel internacional, incluyen la vigilancia y control de la RB y de las
infecciones intrahospitalarias, especialmente por grmenes multirresistentes (1).
La emergencia de la resistencia a los antimicrobianos es un fenmeno natural que resulta de procesos

evolutivos dados por la interaccin de factores biolgicos y epidemiolgicos (2). Entre los factores
biolgicos se encuentran: la resistencia innata, mutaciones espontneas, reservorio de genes de
resistencia y la capacidad de los microorganismos de compartir mecanismos de resistencia a travs de
informacin gentica (3).
En los ltimos aos se ha observado en muchos microorganismos, considerados como totalmente

sensibles a los antibiticos, una marcada y amplia tendencia a la resistencia, de igual forma, se ha
reportado el rpido desarrollo de resistencia a nuevos antibiticos casi tan pronto como estos aparecen
en el mercado (4).
Bajo este contexto, la realizacin, comprensin y buena lectura de las tcnicas de susceptibilidad
antibimicrobiana (antibiograma) cobra vital importancia, tanto por el inters del paciente infectado como
en una perspectiva de responsabilidad pblica. El antibiograma debe mirarse como la unin de mltiples
conceptos que se integran en una sugerencia acerca de la actividad de un antimicrobiano sobre un
determinado patgeno, presente en un determinado sitio anatmico. Teniendo una adecuada
comprensin de sta tcnica, se podrn obtener conocimientos, tanto sobre los mecanismos de
resistencia bacteriana involucrados, as como del comportamiento biolgico de algunos agentes
antimicrobianos (5).
En este manual se presentan las tcnicas y procedimientos necesarios para llevar a cabo un
antibiograma adecuado para los diferentes patgenos ms comnmente involucrados en infecciones
hospitalarias, as como la manera de realizar una correcta interpretacin para definir la susceptibilidad
antibitica de cada microorganismo y los posibles mecanismos de resistencia implicados.
2. OBJETIVOS
A corto plazo:
Estandarizar los procedimientos de laboratorio usados en la determinacin de la susceptibilidad

antimicrobiana que garanticen la calidad de los resultados.
Capacitar en la deteccin de mecanismos inusuales de resistencia bacteriana en patgenos
Gram negativos de inters hospitalario.
Capacitar para la deteccin y reporte de aparicin temprana de nuevos mecanismos de
resistencia o el aumento significativo de los ya existentes.
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A mediano plazo:
Establecer un Sistema Nacional de Redes de Laboratorio para la vigilancia de la resistencia a los

antimicrobianos y la evaluacin externa de la calidad utilizando metodologas estandarizadas por
el laboratorio.
Fortalecer los laboratorios de salud pblica departamentales en la determinacin de perfiles de
susceptibilidad antibitica.
A largo plazo:
Implementar un sistema de vigilancia nacional de la resistencia a los antimicrobianos oportuno,

sostenible y de calidad en los laboratorios de bacteriologa a nivel nacional y establecer un flujo
de informacin y capacitacin multidireccional que garantice el diagnstico de la resistencia
antimicrobiana en Colombia.
3. ALCANCE DEL MANUAL
Este documento aplica para la determinacin de susceptibilidad antimicrobiana y la deteccin de

posibles mecanismos de resistencia bacteriana en patgenos de importancia a nivel hospitalario.
4. RESPONSABILIDAD
Laboratorios clnicos de IPS la red pblica y privada del pas: Sern los encargados de la
deteccin temprana de los aislamientos, su informe al clnico y el envo de los aislamientos para
su confirmacin, as mismo debern participar del programa de control de calidad en la deteccin
de susceptibilidad antimicrobiana del INS.
Laboratorios Municipales, Distritales y Departamentales de Salud Pblica: Estarn a cargo de la
recepcin de aislamientos para confirmacin, aquellos que tengan capacidad tcnica debern
hacer la confirmacin fenotpica de los aislamientos y en caso contrario debern remitir los
aislamientos al Grupo de Microbiologa del INS en tanto se fortalecen, al igual que las IPS, los
LSP debern ingresar al programa de control de calidad en determinacin de susceptibilidad
antimicrobiana delINS.
Laboratorios de referencia: Debern adoptar estas recqmendaciones descritas en este manual
para el caso de confirmaciones fenotpicas de aislamientos bacterianos involucrados en
resistencia bacteriana.
Grupo de Microbiologa RNL. Instituto Nacional de Salud: Ser el ente encargado de la vigilancia
de la resistencia bacteriana por medio de la recepcin de todos los aislamientos enviados, a
travs de LSP para realizar la confirmacin y emitir un resultado.
5. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Antibiograma: tcnica utilizada en el laboratorio para evaluar la actividad de los antimicrobianos

frente a los microorganismos responsables de las infecciones. Existen diferentes metodologas para
lograr esta evaluacin entre ellas: Difusin en agar (Disco o E-Test), dilucin en agar y microdilucin
en caldo.
Antibitico: sustancia qumica producida por un ser vivo o derivada sinttica de ella que a bajas
concentraciones mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles,
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generalmente bacterias, Los antibiticos se utilizan en medicina humana, animal u horticultura para
tratar infecciones provocadas por grmenes,
Bacteria: organismo unicelular, capaz de reproducirse a s mismo. Existen distintos tipos de
bacterias, clasificadas segn sus propiedades de crecimiento (aerbicas o anaerbicas, etc.), su
capacidad de teirse con colorantes especiales (Gram positivas, Gram Negativas), segn su forma
(bacilos, cocos, espiroquetas, etc.), Algunas producen infecciones en el ser humano que pueden ser
graves,
Betalactamasa: protenas fijadoras de penicilina que catalizan la hidrlisis del anillo Betalactmico,
separando el enlace amida, impidindole al antibitico inhibir la sntesis de la pared celular. En las
bacterias Gram negativas se encuentran en el espacio periplsmico entre la pared celular y la
membrana externa y en las Gram positivas que carecen de pared son excretadas, aunque todas las
Betalactamasas catalizan la misma reaccin, se han aislado y caracterizado numerosos tipos de
enzimas que se clasifican en forma diversa de acuerdo, por ejemplo, a su secuencia de
aminocidos, peso molecular o especificidad del substrato. La localizacin del gen que codifica la
Betalactamasas es variable, pudiendo localizarse en el cromosoma o estar codificada por plsmidos.
Las cromosmicas son universales en una bacteria especfica mientras que la presencia de ellas
codificadas por plsmidos es variable y transferible entre las diversas especies bacterianas.
Existen adems organismos productores de Betalactamasas de espectro extendido (BLEE), las
cuales han aparecido en clnicas y hospitales en los ltimos aos constituyendo un problema de
salud pblica grave. Las BLEE se derivan de las Betalactamasas clsicas por sustitucin de uno o
ms arninocidos. Los organismos productores de BLEE tienen resistencia a antibiticos que
incluyen cefalosporinas de 3a generacin, penicilinas de espectro extendido y monobactrnicos.
Bombas de eflujo: mecanismos de expulsin de sustancias ubicadas en la membrana
citoplasmtica de las bacterias, los cuales estn compuestas por protenas transportadoras y tienen
la habilidad de excretar drogas, Algunas de estas bombas, exhiben una amplia especificidad y
cubren prcticamente todos los antibiticos, agentes quimioterpicos, detergentes, colorantes y otros
inhibidores. Estas bombas de eflujo trabajan con excepcional eficacia en bacterias Gram negativas
por su accin sinrgica con la barrera de la membrana externa, Algunas bombas de eflujo de
bacterias multirresistentes, caractersticas en Gram negativas, tienen una estructura ms compleja y
atraviesan tanto la membrana citoplamtica como la externa, utilizando tres componentes proteicos.
Esta unidad compleja puede mandar drogas hacia afuera evitando la barrera de la membrana
externa,
Carbapenemasa: son 13-lactamasas capaces de hidrolizar antibiticos de tipos carbapenems.
Pertenecen a tres clases diferentes, segn la clasificacin de Ambler y cols. La clase A incluye 13-
lactamasas que poseen serina en su sitio activo y son inhibidas por el cido clavulnico, en este
grupo destacan las BLEE SME-1 a -2, NMC-A, IMI- 1 a -2, KPC-1 a -3 y GES-2 a -4, La clase B
incluyen 13-lactamasas dependientes de Zinc, se denominan metalo-I3-lactamasas (MBLs), son
resistentes a los inhibidores clsicos de 13-lactamasas, pero son sensibles al EDTA
La mayora de las carbapenemasas, se encuentran asociadas a Integrones clase 1, que fungen como
estructuras genticas que capturan y almacenan genes de resistencia, los integrones por si solos no
son mviles, pero frecuentemente se encuentran asociados a plsmidos o transposones, por lo tanto
la transferencia y diseminacin est asegurada en el ambiente hospitalario si no se toman las
medidas de control adecuadas, De la misma manera esta propagacin puede generar un grave
problema de salud, ya que son muy pocas las opciones teraputicas restantes,
Cepas AlCC: son microorganismos certificados por la American Type Culture Collection. Rockville,
EU, quienes suministran un cultivo puro del microorganismo y del cual garantizan que se cuentan
con unas caractersticas especficas que han sido comprobadas por pruebas morfolgicas,
bioqumicas y rnoleculares.
CLSI: de sus siglas en ingls: Clinical and Laboratory Standards Institute. CLSI es una organizacin
global sin fines de lucro, que desarrolla y promueve el uso voluntario de normas de consenso y
directrices dentro de la comunidad de la salud, Emiten documentos que proporcionan valiosas
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herramientas que le permiten a los laboratorios cumplir con sus responsabilidades de cuidado de la
salud con eficiencia, eficacia, y la aceptacin mundial. Dentro de sus documentos, cuentan con una
emisin anual del denominado: M-100 "Estndares de desempeo para pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana" en donde se brindan recomendaciones acerca de los puntos de corte que deben ser
usados para cada antibitico frente a cada grupo de microorganismos.
Concentracin Mnima Inhibitoria (CIM): la concentracin ms baja de un antimicrobiano que
inhibe el crecimiento visible de un microorganismo despus de su incubacin. La CIM es importante
en diagnsticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente
antimicrobiano y adems para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos. La
CIM pueden ser determinada mediante algunos de los mtodos de antibiograma, siguiendo las
directrices de centros de referencia tales como el CLSI (Clinical Laboratory Institute Standards),
BSAC (British Society for Antimicrobial Chemotherapy) o EUCAST (European Committee on
Antimicrobial Susceptibility Testing). Las CIM puede ser til tambin para definir el tipo de
antimicrobianos a utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes
antimicrobianos especficos.
EDT A: cido etilendiamino tetraactico. Agente quelante de zinc, capaz de inhibir enzimas tipo
Metalo-Beta- Lactamasas, que al utilizarlo en la tcnica de doble disco permite detectar la presencia
de estas enzimas en cepas bacterianas.
Enzima: molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas, actan sobre unas
molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas
productos. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimticas.
E-Test: tiras de plstico inerte que incorporan un gradiente de concentracin de antibitico que
permite realizar antibiogramas cuantitativos, es decir permiten determinar la Concentracin Mnima
Inhibitoria por la tcnica de difusin en agar.
Medio de transporte Cary 8lair: medio de transporte para agentes anaerobios y Gram negativos,
utilizado para la recoleccin y envi de muestras clnicas (materia fecal). El bajo contenido de
nutrientes en el medio y la utilizacin del fosfato como tampn en lugar del glicerofosfato evita el
sobrecrecimiento de microorganismos como tambin minimiza la destruccin bacteriana. El
tioglicolato de Sodio provee un bajo potencial Redox.
Porinas: llamadas tambin protenas de matriz o protenas principales de membrana, se encuentran
en bacterias Gram negativas formando canales de gran tamao que permiten la difusin pasiva de
iones y molculas hidroflicas. Permiten el paso de materiales de desecho tanto al interior como al
exterior de la clula as como la expulsin determinadas sustancias dainas para las bacterias como
los antibiticos.
Resistencia bacteriana: fenmeno creciente caracterizado por una refractariedad parcial o total de
los microorganismos al efecto del antibitico generado principalmente por el uso indiscriminado e
irracional de stos y por la presin evolutiva que se ejerce en el uso teraputico. La emergencia de
la resistencia a los antimicrobianos es un fenmeno natural que resulta de procesos evolutivos
dados por la interaccin de factores biolgicos y epidemiolgicos. Entre los factores biolgicos se
encuentran: la resistencia innata, mutaciones espontneas, reservorio de genes de resistencia y la
capacidad de los microorganismos de compartir mecanismos de resistencia a travs de informacin
gentica. Desde el punto de vista molecular y bioqumico existen bsicamente tres mecanismos por
medio de los cuales una bacteria puede hacerse resistente al efecto del antibitico, a saber:
Inactivacin del antibitico, alteracin del sitio blanco del antibitico y cambios en sus barreras de
permeabilidad. Cabe resaltar que los tres mecanismos pueden ocurrir simultneamente.
Sensidiscos: crculos de papel filtro de reducido dimetro impregnados con antibitico, biosttico u
otro agente para ser probado en microorganismos y determinar su sensibilidad o resistencia de
forma in vitro.
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WHONET: software gratuito desarrollado por el Centro Colaborador de la Organizacin Mundial de

la Salud (OMS) para la Vigilancia de la Resistencia a los antimicrobianos a partir de las bases de
datos generadas por el Laboratorio de Microbiologa de las instituciones de salud.
6. CONDICIONES GENERALES
No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.
7. FUNDAMENTO
No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.
8. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO

Remitirse al manual de bioseguridad del INS. Ref. MNL- A05.001.0000-001
9. MATERIALES Y REACTIVOS
Formulario de registro para el envo de aislamientos para la confirmacin de susceptibilidad

antimicrobiana. REG-R01.5030-029
Cajas de petri
Mechero
Agares para aislamiento primario.
Agar Mueller Hinton. (Anexo 1)
Asas de cultivo
Colorantes de Gram Ref. INT - R01.5030-001
Insumos de equipos automatizados en caso de tenerlos.
Cepas ATCC para control de calidad.
Leche descremada al 20%
Escobillones estriles.
Tubos de Khan de 12 x 75 mm estriles
Solucin salina estril.
Antibiticos en sensidiscos, en tiras de E-test y en polvo
Sensidiscos blancos (sin antibitico).
EDTA
cido Phenil Boronico
Pipetas y puntas
Regleta calibrada para lectura de halos de antibiograma. (Caliper Pie de rey)
10. EQUIPOS
Incubadoras (graduar a 35 +/- 2C)

Microscopio
Cabina de bioseguridad
Congelador a -70C
Cuarto frio - 4C
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Espectrofotmetro
Pipetas automticas.
Equipos automatizados de identificacin bacteriana y determinacin de susceptibilidad antibitica:
Microscan, Vitek, Phoenix. (Equipos de utilizacin opcional y de libre escogencia segn
necesidades del laboratorio)
11. DESCRIPCION
11.1 Microorganismos a considerar.
En este manual se incluirn microorganismos de importancia en infeccin intrahospitalaria:

Enterobacterias (a excepcin de los enteropatgenos), Gram negativos no fermentadores,
Staphylococcus aureus y Enterococcus sp., aislados y considerados clnicamente significativos como
causantes de un proceso infeccioso. No se incluirn grmenes de colonizacin o contaminacin.
11.2 Determinacin de la susceptibilidad a los antimicrobianos.
Para la interpretacin de susceptibilidad e informe de resultados se tendrn en cuenta las normas y

recomendaciones del Instituto de Estndares de Laboratorios Clnicos y (CLSI) vigentes y stas se
aplicarn para cualquiera de los siguientes mtodos:
Difusin en agar (Kirby - Bauer): Para esta tcnica se deber usar agar Mueller Hinton, este
medio de cultivo muestra buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad,
contiene bajo nivel de inhibidores, es adecuado para el desarrollo de la mayora de las bacterias
patgenas y existen suficientes datos recopilados que avalan la experiencia de las pruebas de
sensibilidad realizadas en este medio. Aunque el agar M. Hinton es generalmente confiable para
las pruebas de sensibilidad, se deben comprobar sus caractersticas y se le debe aplicar control
de calidad a cada lote producido o adquirido comercialmente (anexo 1).
Para la tcnica se usarn discos que contienen una concentracin conocida de antibiticos, estos
discos deben ser almacenados en refrigeracin a 8 C o en congelador a -14C o menos para
mantener la droga en condiciones ptimas, los que contienen antibiticos betalactmicos deben
mantenerse nicamente en congelacin para mantener su potencia. Los discos deben ser
sacados del refrigerador o congelador al menos 1 hora antes de su uso a fin de lograr un
equilibrio en la temperatura y as evitar la condensacin que podra ocurrir cuando la humedad
ambiente alcanza los recipientes fros. Es importante tener en cuenta siempre la fecha de
vencimiento emitida por los fabricantes.
El procedimiento para realizar esta tcnica es:
o A partir de un cultivo de 18 a 24 horas del patgeno a estudiar, seleccione 3 4 colonias bien
aisladas de igual morfologa y prepare una suspensin en 4 5 mi de solucin salina estril. Esta
suspensin debe alcanzar una turbidez comparable con la escala 0,5 de Mc Farland que
corresponde a aproximadamente 1 a 2 x 108 UFC/ml, para verificar la turbidez adecuada se
puede utilizar una escala comercial o preferiblemente verificarla usando un espectrofotmetro, la
absorbancia a 625 nm debera ser 0,08 - 0,10. En caso de no alcanzar la turbidez necesaria se
deben adicionar ms colonias y en caso contrario se puede adicionar cuidadosamente ms
solucin salina estril hasta lograr la turbidez ideal.
o Dentro de mximo 15 minutos despus de ajustado el inculo siembre las placas de M. Hinton
con un hisopo estril. Para ello introduzca el hisopo en el tubo donde se prepar la suspensin
bacteriana, humedzcalo bien y luego presione el hisopo contra las paredes del tubo a fin de
escurrir el exceso, inmediatamente inocule la superficie seca del M. Hinton por hisopado en tres
direcciones para asegurar una completa distribucin.
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o Luego de inoculada la caja de agar se debe esperar de 3 a 5 minutos, pero no ms de 15 minutos

para aplicar los discos de los antibiticos seleccionados. Colocar los discos sobre la superficie del
agar inoculada con pinza estril aplicando una ligera presin a una distancia no menor a 24 mm
desde un centro al otro. Debido a que algunas drogas difunden casi instantneamente, un disco
no debe ser removido una vez que tom contacto con la superficie del agar. No deben colocarse
ms de 12 discos por placa de 150 mm y no ms de 5 discos por placa de 100 mm.
o Llevar a incubacin a 35C por 16 a 18 horas y posterior a esto examinar cada placa, midiendo
con una regla calibrada los dimetros de las zonas de inhibicin. Si las placas fueron
satisfactoriamente hisopadas y el inculo fue el correcto, las zonas de inhibicin sern
uniformemente circulares y habr desarrollo confluente. Si el microorganismo estudiado es un
Staphylococcus spp. o Enterococcus spp., incube 24 horas para realizar las lecturas
especialmente de vancomicina y oxacilina.
E-test: Este mtodo utiliza los mismos principios de la difusin por disco pero usando una tira de
plstico que contiene concentraciones crecientes de un determinado antibitico lo cual permite
obtener un valor de Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM). El procedimiento de esta tcnica
consiste en colocar la tira sobre una placa de agar M. Hinton que ha sido inoculada con el
organismo en estudio, siguiendo las mismas indicaciones que se deben tener en cuenta para
Kirby - Bauer. Despus de incubar la placa por 16 a 18 horas, se forma un rea de inhibicin de
forma elptica, en la cual la concentracin inhibitoria mnima puede ser leda directamente (Fig.
1).
M$$de
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bam.eriano
EpsilomelfO
POM
-"Elipsede
inhtbicill"
Figura 1. Representacin esquemtica del mtodo del E-test. (Tomada de:

http://escuela.med.puc.cllpubllboletin/laboratorio/lnterpretacion.html)
Microdilucin en caldo: Esta tcnica se emplea para medir en forma cuantitativa la actividad in
vitro de un agente antimicrobiano contra una bacteria. Para realizar la determinacin, se preparan
unas microplacas con un medio de cultivo lquido, al cual se le agregan varias concentraciones
del agente antimicrobiano a probar. Las placas se inoculan con una suspensin estandarizada de
bacterias (0,5 Mc Farland) y despus de una incubacin de 24h a 35C, se determina la
Concentracin Inhibitoria Mimina (CIM) del antimicrobiano. El resultado final es altamente
dependiente de la metodologa, la cual debe controlarse perfectamente para poder lograr
resultados adecuados y reproducibles.
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Este mtodo se trabaja con volmenes pequeos de caldo y placas estriles de 96 pozos, de
fondo plano o redondo, las cuales se pueden llenar con micropipetas de 8 canales, facilitando as
la realizacin de varias determinaciones en serie y en una misma placa. Por placa pueden ser
estudiados seis aislamientos y la cepa control.
El procedimiento para realizar esta tcnica es:
o Preparacin del medio de cultivo: El medio recomendado por la CLSI es el caldo
Mueller-Hinton ajustado con cationes y para su preparacin se deben seguir las
instrucciones del fabricante y posteriormente realizar pruebas de esterilidad y de
crecimiento.
o Preparacin de la solucin madre y de la solucin de trabajo del antimicrobiano:
Los antibiticos se pueden obtener directamente del laboratorio productor o de otras
fuentes comerciales. No se recomienda la utilizacin de las preparaciones para
aplicacin parenteral. Para las pruebas de sensibilidad se debe conocer el lote, la
potencia (generalmente expresada en !-Ig Ul/mg de polvo) y la fecha de vencimiento
de los antimicrobianos de referencia. El almacenamiento de la droga debe hacerse
segn las recomendaciones del laboratorio productor, o a una temperatura igual o
menor a -20C. Conociendo la potencia de cada frasco de antimicrobiano que va a ser
utilizado para realizar pruebas de sensibilidad, se hacen los clculos para la
preparacin de las soluciones a utilizar. Para determinar la cantidad de polvo
antimicrobiano (ATB) y solvente necesarios para preparar una solucin estndar (SE)
se puede utilizar la siguiente frmula:
Volumen (mi) x concentracin (Ilg/ml)

Peso (mg) =
Potencia del antibitico (Ilg/mg)
Tenga en cuenta que se deben preparar soluciones madres en un volumen no menor de

10ml y con concentraciones de por lo menos 1000 !-Ig/ml (por ej.: 1280 !-Ig/ml) de una
concentracin 10 veces mayor que la ms alta del rango establecido (por ej.: para un rango
establecido de 2 a 512 !-Ig/ml se podra preparar una solucin madre de 5120 !-Ig/ml). Para
pesar los antibiticos se debe usar una balanza analtica bien calibrada, con una precisin
igualo superior al dcimo de miligramo, y se debe evitar pesar cantidades muy pequeas de
droga ya que estas ocasionan alto error (si es posible se recomienda pesar por encima de los
100 mg). Para la preparacin de las soluciones tenga en cuenta las recomendaciones del
fabricante en cuento a solvente, forma de preparacin, recomendaciones de seguridad y
almacenamiento de la solucin. Por lo general, las soluciones madres se pueden alicuotar de
a 1mi y conservar en congelacin a -70C. Luego de tener la solucin madre se debe
preparar una solucin de trabajo haciendo una dilucin 1:1O, para lo cual se mezclan 9ml de
agua destilada estril y 1mi de la solucin madre del antibitico. Esta solucin de trabajo se
puede alicuotar de a 1 mi y conservar a -70C y a partir de esta solucin se deben hacer las
diluciones necesarias para sensibilizar las placas.
o Sensibilizacin de las microplacas: A partir de la solucin de trabajo del antibitico
se prepararan las diluciones a probar por cada antibitico utilizando la frmula C1 x
V1 =C2 x V2, as determina la cantidad de solucin de trabajo y de diluyente a utilizar:
Donde C1= Concentracin solucin de trabajo (ej. 1000ug/ml), V1= Volumen a utilizar
de solucin de trabajo (siempre ser 1mi, ya que esta fue la alcuota que se realiz),
C2= Concentracin final de antibitico (eje:64 Ilg/ml) V2= Volumen final de la
solucin (?)
1000!-lg Iml x 1mi

V2 = ----------------------------------- = 15,62 mi
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64IJg/ml
Por lo tanto, en tubo se debe agregar 1 mi de la solucin de antibitico de 1.000 IJg/ml y

adicione 14,62 mi de Caldo Mueller Hinton para obtener una solucin de antibitico de 32
IJg/ml. Las concentraciones a ensayar para un determinado antibitico, en general, deberan
determinarse de acuerdo a los puntos de corte que se mencionan en las normas CLSI, sin
embargo, el nmero de concentraciones puede ser elegido por quien realiza la prueba
teniendo en cuenta el comportamiento conocido de las cepas y el rango de concentraciones
de CIM de al menos una cepa patrn de control de calidad. En algunos casos especiales
puede ser necesario ensayar concentraciones inusuales (por ej. para evaluar el efecto
sinrgico entre aminoglucsidos y penicilinas o glicopptidos frente a enterococos puede ser
necesario ensayar altas concentraciones de gentamicina y estreptomicina). Una vez se defina
el rango de concentraciones a probar, se colocan tubos marcados con las diferentes
diluciones, en cada tubo se adicionan 5 mi de Caldo Mueller- Hinton y 5 mi de la solucin
anterior. La concentracin ms alta ser la preparada desde de la solucin de trabajo y a
partir de esta se harn las siguientes.
Recuerde que debe cambiar la pipeta entre cada dilucin para evitar arrastrar el antibitico.
Para sensibilizar la placa, se deben dispensar 50 IJL de cada una de las diluciones del
antibitico, en el pozo respectivo, (pozos 1 al 11), el pozo 12 no se debe usar para ninguna
dilucin, aqu solamente se colocaran 50IJI del caldo de cultivo y se emplear como control
de crecimiento.
Una vez que se sensibilicen las microplacas con la solucin del antibitico, (si no se van a
utilizar de inmediato), deben taparse y guardarse en bolsas de plstico e inmediatamente ser
colocadas en congelacin, de preferencia a -70C. A pesar de que el antimicrobiano as
congelado se mantiene estable por 6 meses. Las placas no deben guardarse en
congeladores que tengan sistema de eliminacin de hielo automtico ya que stos cambios
de temperatura y de condensacin de agua, modifican la potencia del antimicrobiano y deben
descongelar 20 a 30 minutos antes de la inoculacin.
o Preparacin del inculo: Siga las mismas indicaciones descritas para Kirby -
Bauer.
o Inoculacin de las microplacas: En cada placa se pueden colocar 7 aislamientos
(filas A-G) y la cepa control ATCC (fila H). Se deben adicionar 50 ul, del inoculo
bacteriano a probar a cada uno de los 12 pozos. El ltimo pozo de la fila contendr
solamente la bacteria y el diluyente y servir como control de crecimiento. El
volumen final en cada pozo de la microdilucin es de 100 ul., Al adicionar 50 ul, de la
suspensin de la bacteria en cada pozo, la dilucin del antibitico es diluida a la
mitad, por lo tanto el rango de concentracin del antibitico ser ahora de la mitad.
La placa debe ser inoculada dentro de los primeros 15 minutos de la estandarizacin del
inoculo.
Incube las placas a 35C durante 18 -20 h en aerobiosis, y no coloque ms de cuatro placas,
una sobre otra, para poder mantener la misma temperatura en todas ellas.
o Lectura e interpretacin: Despus del perodo de incubacin, se determina la
mnima concentracin del antimicrobiano que permiti el desarrollo de la bacteria. La
concentracin siguiente, en la cual ya no se observa desarrollo de la bacteria, se
toma como la CIM la cual se interpreta con ayuda de las tablas CLSI. Los resultados
de esta lectura deben ser consignados en el formulario designado por cada
Institucin para tal fin.
Los rangos de aceptabilidad para diferentes antimicrobianos para las cepas control se
encuentran en el CLS/.
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Sistemas automatizados: Para la determinacin de susceptibilidad antibitica a partir de

equipos automatizados, tenga en cuenta los siguientes requerimientos mnimos:
o El laboratorio debe disponer de un manual de procedimientos para el uso del (los)
equipo (s), que sea actualizado peridicamente y que sea conocido. manejado y
utilizado por el personal que trabaja en microbiologa, dicho manual debe ser
suministrado por la compaa distribuidora del equipo y debe encontrarse en espaol.
o Debe existir un programa de capacitacin continua del personal involucrado en las
actividades rutinarias del rea de microbiologa y el manejo del equipo.
o El personal de microbiologa debe cumplir estrictamente con todos los procesos para
el montaje diario de aislamientos, as como los procesos de control de calidad y
limpieza de los equipos tal cual lo indique la compaa distribuidora del equipo y
llevar registro de estos procesos, con el fin de asegurar la calidad de los
procedimientos, previniendo los errores o en su defecto detectando los errores
producidos.
o El laboratorio debe contar con un programa de mantenimiento preventivo una vez al
mes (establecer un acuerdo con el proveedor) y correctivo del equipo, cada vez que
sea necesario.
o El laboratorio debe contar con un set anual nuevo de cepas ATCC para el control
interno del equipo segn las especificaciones del fabricante.
o El laboratorio debe acordar con el proveedor del equipo la adquisicin de un set de
McFarland para determinacin de turbidez y un nefelmetro, as como los
calibradores del mismo y un manual de calibracin.
o El personal del laboratorio de microbiologa debe leer cuidadosamente todos los
instructivos de cada dispositivo, ya que all se halla la informacin referente a las
limitaciones del procedimiento, as como recomendaciones de cepas y
combinaciones de antibiticos que debe ser evaluados utilizando mtodos
alternativos. Validar internamente todo procedimiento que no se refiera en las
indicaciones del fabricante (por ejemplo: utilizar un medio de cultivo que no est
incluido en el instructivo del fabricante; usar cepas que tengan ms de 24 hs de
incubacin, etc.).
o El laboratorio de microbiologa debe participar de programas de control de la calidad
tanto externos como internos.
As mismo se recomienda que en caso de usar algn equipo automatizado para el cual los paneles de
susceptibilidad no cuenten con las diluciones necesarias para lograr la interpretacin segn los puntos de
corte CLSI vigentes, se revise en conjunto con el comit de infecciones institucional cuales de estos
antibiticos son necesarios en el informe final al clnico y para aquellos que sean indispensables,
complementar el antibiograma con pruebas manuales como difusin en disco (Kirby-Bauer),
Concentracin Mnima Inhibitoria (CIM) manual E-test, teniendo en cuenta que el montaje de estas
pruebas debe realizarse el mismo da, empleando la misma suspensin bacteriana (equivalente a 0.5
McFarland) con la que realizo el montaje del automatizado.
Por otra parte, el uso de equipos no excluye al laboratorio de la realizacin de pruebas confirmatorias
adicionales en casos donde sea necesario.
11.2.1 Enterobacterias aisladas de infeccin hospitalaria (diferentes de Salmonella y

Shigella)
Para estos microorganismos se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en las tablas 1 y
2 segn corresponda para cualquiera de las tcnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilucin en caldo manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se
recomienda usar las cepas Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218 (Para control
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de 3-lctamico/ inhibidor de 3-lactamasa), K/ebsiella pneumoniae ATCC BAA 1705 (Para control de
carbapenemasa tipo KPC) y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (para el control de carbapenemasa
tipo metalo3lactamasa), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas ATCC
recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 1. Antibiticos a testear en antibiograma por cualquier tcnica para Enterobacterias

aisladas de infeccin hospitalaria.
Antibitico Observaciones
Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina
Los criterios de interpretacin para este Antibitico pueden ser usados solo para
Cefalotina y/o cefazolina
predecir resultados de cefalosporinas orales.
Gentamicina ----
Amikacina ----
Amoxicilina - Acido
Representativo del grupo de ~Iactmicos combinados con inhibidores de ~Iactamasas.
Clavulnico (AMC)
Ampicilina / sulbactam (SAM) -------
Representativo de cefalosporinas de tercera generacin, indispensable usarla siempre

Cefotaxima (CTX)
en estos microorganismos.
Representativo de cefalosporinas de tercera generacin, indispensable usarla siempre

Ceftazidima (CAZ)
en estos microorganismos.
No informar. til para el control de calidad de la estimacin del mecanismo de

Cefoxitina (FOX) resistencia a ~Iactmicos. La resistencia enzimtica a FOX casi siempre es debida a
~Iactamasas de tipo AmpC, KPC o metaloplactamasas y no por BLEA o BLEE.
Cefepime -----
til para diferenciar mecanismos de resistencia como BLEE y metalolactamasas
(MBL). La presencia de BLEE siempre puede ser confirmada por resistencia a
Aztreonam aztreonam mientras que la presencia de una MBL que no est acompaada de otro
mecanismo mostrar sensibilidad a este antibitico.
o
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Piperacilina - Tazobactam -----
Trimetoprin - Sulfametoxasol -----
Meropenem La resistencia a carbapenems en enterobacterias es muy importante de vigilar, si se

detectase, se debe aplicar el test de Hodge y de ser posible las tcnicas de inhibicin
Imipenem con EDTA y APB para detectar carbapenemasas.
Detecta mejor los bajos niveles de resistencia a carbapenems aunque con baja
especificidad en cuanto al mecanismo de resistencia implicado. En infecciones
Ertapenem adquiridas en la comunidad solo se puede informar para: Infecciones de piel y partes
blandas, urinarias complicadas, intra - abdominales, genitales y en neumonia.
Aztreonam ------
Ciprofloxacina (CIP) Informe dependiente de comportamiento de Acido Nalidixico.
No se debe informar la sensibilidad a este antibitico y en caso de encontrar

enterobacterias resistentes o intermedias se debe informar sensibilidad disminuida a
CIP. En caso de encontrar sensibilidad a este antibitico montar CIP y levofloxacina
Acido Nalidxico (LEV) por disco Y si se encuentra una disociacin LEV-CIP ;:::5mm puede tratarse de
un nuevo mecanismo plasmidico de resistencia a las quinolonas y debe informarse
tambin sensibilidad disminuida a CIP.
1
Tabla 2. Antibiticos a testear mlnlmo'' en infecciones urinarias no complicadas.
Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina
Cefalotina Los criterios de interpretacin para este Antibitico pueden ser usados solo para predecir resultados
cefazolina de cefalosporinas orales
Cefalosporina de 2da generacin que puede ser una alternativa de tratamiento en caso de resistencia
Cefuroxime
a cefalosporinas de 1ra o a las combinaciones de ~Iactamicos con inhibidores de ~Iactamasas
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determinacinde susceptibilidad
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Cefalosporinade 3ra generacinoral que puede ser una alternativade tratamiento.En caso de
encontraren una infeccinurinariano complicadaunacepaproductorade BLEE3,las cefalosporinas
Cefixime de 2da y 3ra debeninformarsesegnel resultadodel antibiogramay si se observasensibilidada estas
drogas agregar una nota al pi del informe:"Aislamientoproductorde BLEE, probablexito de
tratamientoen infeccinurinariabajanocomplicadade la comunidad".
Ampicilina I
sulbactam
-----
Trimetoprin -
SuIfametoxasol
-----
Ciprofloxacina (CIP) Informedependientede comportamientode AcidoNalidxico.
Proteus spp, M. morganii, Providencia spp. y Serratia spp presentanresistencianatural a los

Nitrofurantoina
nitrofuranos.
Si se encuentranenterobacteriasresistenteso intermedias,con CIP sensiblese debe informarla

Acido Nalidxico sensibilidada esta ltima pero se incluyenota al pi del informe:" Sensibilidaddisminuidaa CIP,
probablexitode tratamientoen infeccinurinariabajano complicadade la comunidad"
Gentamicina tilcomomarcadorepidemiolgicode resistencia.
"Aslarnentos con sensibilidad intermedia a algn antibitico, informarlo tal cual y agregar una nota al
~i del informe:"Probable xito de tratamiento en infeccin urinaria baja no complicada"
Para los aislamientos que presenten resistencia a las drogas testeadas en el antibiograma mnimo
recomendado aqu, debe completarse con los antibiticos del antibiograma mnimo designado para
infecciones hospitalarias por Enterobacterias. (Ver arriba)
11.2.1.1 Pruebas adicionales para Enterobacterias
Adicional a las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, el laboratorio debe realizar pruebas

complementarias para la bsqueda de enzimas responsables de mecanismos de resistencia.
Prueba para la deteccin de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE): Esta prueba

debe realizarse para cualquier Enterobacteria para detectar la presencia de estas enzimas. Se
puede usar la tcnica convencional recomendada por el CLSI la cual consiste en usar
ceftazidime y cefotaxime solos y en combinacin con cido clavulnico, ya sea en difusin por
disco o en microdilucin en caldo (incluyendo sistemas automatizados), para la interpretacin de
los resultados en el caso de la tcnica de difusin por disco se tendr en cuenta como resultado
positivo un aumento mayor o igual a 5mm en el halo de la cefalosporina en combinacin con
cido clavulnico respecto de la cefalosporina sola y para el caso de microdilucin en caldo se
tendr en cuenta como resultado positivo una disminucin mayor o igual a 3 diluciones seriadas
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de la cefalosporina combinada con cido clavulnico versus la cefalosporina sola (ej: MIC
ceftazidime= 8ug/ml; MIC Ceftazidime/clavulanato= 1ug/ml). Para el informe de los antibiticos
beta-Iactamicos tenga en cuenta el resultado de la prueba, si resulta positiva, informe BLEE
positiva e informe resistente las penicilinas, cefalosporinas y aztreonam, para
Amoxicilina/clavulanato, Piperacilina/tazobactam y carbapenems no se debe modificar el
informe. Si las pruebas resultan negativas no se debe modificar el informe de estos antibiticos.
Test de Hodge modificado: Esta tcnica deber realizarse en caso de detectar alguna cepa que
exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a alguno de los antibiticos de tipo
carbapenems, de acuerdo a los puntos de corte CLSI vigentes y resistencia a una o ms
cefalosporinas de tercera generacin.
Procedimiento:
o Hisopar una placa de agar Mueller - Hinton con una suspensin ajustada a 0,5 de la
escala de Mc Farland de la cepa ATCC E. coli 25922
o Incubar la placa durante 10 minutos a temperatura ambiente.
o Colocar un disco de Ertapenem de 10 ug Meropenem 10 ug en el centro de la caja
o Sembrar la cepa sospechosa, tomando de 3 a 5 colonias de un cultivo fresco y
realizando una estra desde el borde de la caja hasta el disco. Se pueden probar
varias cepas en la misma caja y se debe utilizar como control positivo la cepa K.
pneumoniae ATCC BAA 1705
o Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente y luego incube a 35 C por 18 a 24
horas.
Interpretacin de resultados: Si observa una invaginacin del halo de inhibicin alrededor de la

cepa probada, la cepa sospechosa ser productora de carbapenemasa (Fig. 1) Y en este caso se
debe reportar el resultado de la prueba. Si se encuentra un halo completo la prueba puede ser
considerada negativa y en ese caso los antibiticos de tipo carbapenems se deben informar de
acuerdo a los puntos de corte vigentes.
Figura 1. Test de Hodge.
Prueba con EDT A para la deteccin de carbapenemasas tipo Metalo-I3-lactamasas (MBL):

Si se detecta alguna cepa que exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a cualquiera de
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los antibiticos de tipo carbapenems teniendo en cuenta los puntos de corte CLSI vigentes y
resistencia a una o ms cefalosporinas de tercera generacin, adicional al test de Hodge se
pueden realizar otras pruebas que permitan identificar mejor el tipo de carbapenemesa presente
en la cepa, para encontrar las carbapenemasas tipo MBL se deber realizar una prueba en placa
ubicando un disco de EDTA a 1,5 cm entre los discos de IMI y MER, si llegase a existir sinergia o
deformacin del halo de los antibiticos hacia el EDTA, se puede considerar como una prueba
positiva y en ese caso se deben informar la presencia de una carbapenemasas tipo MBL.(Fig. 2)
SE)
,.,~) v., '.-r~-'''''';
15mm
(B)
Figura 2. Prueba de Inhibicin con EDTA para la deteccin de MBL.

(A. Colocacin de los discos en la placa. B. Prueba positiva)
Prueba con Acido Phenil Bornico (APB) para la deteccin de serin- carbapenemasas tipo
2f (KPC): Al igual que en el caso anterior esta prueba se usa en caso de detectar alguna cepa
que exprese resistencia o susceptibilidad intermedia a cualquiera de los antibiticos de tipo
carbapenem teniendo en cuenta los puntos de corte CLSI vigentes y resistencia a una o ms
cefalosporinas de tercera generacin. Las carbapenemasas tipo serin son inhinibles por cido
bornico, por lo tanto para la deteccin de este tipo de carbapenemasas se puede usar una
prueba en placa en donde se ubica un disco de APB a 1,5 cm entre IMP y CAZ, si llegase a
existir sinergia o deformacin de los halos de alguno de antibiticos hacia el APB, se puede
considerar como una prueba positiva y en ese caso se debe informar presencia de enzima tipo
KPC. (Fig. 3)
Figura 3. Prueba de Inhibicin con APB para la deteccin de KPC.

(A. Colocacin de los discos en la placa. B. Prueba positiva)
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11.2.2 Pseudomonas aeruginosa.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en la tabla 3 para
cualquiera de las tcnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby- Bauer, Microdilucin en caldo
manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se recomienda usar las cepas
Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218 (Para control de 3-lctamicol inhibidor de
3-lactamasa), Klebsiella pneumoniae ATCC BAA 1705 (Para control de carbapenemasa tipo KPC) y
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (para el control de carbapenemasa tipo metalo3lactamasa), en
caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas A TCC recomendadas para cada
equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 3. Antibiticos a teslear para P. aeruginosa.
Gentamicina ----
Amikacina ----
En montajes manuales se puede ubicar CAZ junto a Imipenem a 2 cm y a

Ceftazidima (CAZ)
2,7 cm de CAZ/CLAV para detectar BLEEs.
Cefepime -------

La resistencia a carbapenems en no fermentadores es cada vez ms
Meropenem comn y en general los aislamientos que la presentan, suelen ser
multirresistentes. Es importante resaltar la importancia de evaluar la
actividad de los dos carbapenems (IMI y MER) en todos los aislamientos,
ya que no siempre la resistencia es cruzada, si solo se evala la actividad
Imipenem de uno, no se puede extrapolar al otro. Al detectar resistencia, es til
aplicar las tcnicas con EDTA y APB para detectar el tipo de
carbapenemasa presente.
Ciprofloxacina (CIP) --
Aztreonam (ATM) --
En infecciones por cepas multirresistentes o cepas que muestren
resistencia o susceptibilidad intermedia por disco, y que el mdico quiera
Colistina
usarla como tratamiento, se debe evaluar la actividad de estos antibiticos
por MIC. No informar si no se hace MIC
11.2.2.1 Pruebas adicionales para Pseudomonas aeruginosa
Adicional a probar estos antibiticos, se pueden hacer pruebas para la bsqueda de enzimas
responsables de mecanismos de resistencia, tales como: prueba para la deteccin de
Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE), prueba con EDTA para la deteccin de
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carbapenemasas tipo Metalo-3-lactamasas (MBL) y prueba con Acido Phenil Bornico (APB) para la
deteccin de serin- carbapenemasas tipo 2f (KPC) todas descritas previamente para Enterobacterias.
Para el caso de la prueba de BLEE, es importante tener en cuenta que aunque el CLSI no menciona
que se deba realizar a P. aeruginosa, si es importante realizar la bsqueda de este tipo de enzimas
en estos microorganismos; as mismo para la prueba de bsqueda de KPC es importante resaltar que
si bien KPC se caracteriza por la inhibicin con cido fenil bornico (APB), los altos niveles basa les
de cefalosporinasa cromosmica (enzima tipo AmpC) en P. aeruginosa condicionan los resultados de
las pruebas de sinergia entre carbapenemes y discos de APB. Tanto la cloxacilina como la oxacilina
son inhibidores especficos de AmpC y no de KPC, lo que permite superar la baja especificidad del
cido bornico para detectar KPCs en cepas con altos niveles de AmpC. Por lo cual para el caso de
P. aeruginosa se recomienda usar adicional al disco de APB un disco de cloxacilina u oxacilina.
Aquellas cepas donde el mecanismo implicado en la resistencia a carbapenemes fuera enzimas
AmpC, cursarn con una doble inhibicin (APB y CLOXAlOXA). Aquellas cepas donde el mecanismo
implicado en la resistencia a carbapenemes fuera enzimas tipo KPCs, inclusive cuando est presente
en una especie bacteriana con hiperproduccin de AmpC, mostrarn slo inhibicin por APB y no por
CLOXAlOXA.
11.2.3 Acinetobacter spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en las tabla 4 para
Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 35218 (Para control de 3-lctamico/ inhibidor de
3-lactamasa) y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (para el control de carbapenemasa tipo
metalo3lactamasa), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas ATCC
recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 4. Antibiticos a testear en antibiograma para Acinetobacter.
Ampicilina I Sulbactam El sulbactam tiene actividad per se sobre Acinetobacter
Gentamicina -----
Amikacina -----
Ceftazidima (CAZ) -----
Cefepime -----

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La resistencia a carbapenems en no fermentadores es cada vez ms

Meropenem comn y en general, los aislamientos que la presentan, suelen ser
multirresistentes. Es importante resaltar la importancia de evaluar la
actividad de dos carbapenems (IMI y MER) en todos los aislamientos, ya
que no siempre la resistencia es cruzada, si solo se evala la actividad de
Imipenem uno, no se puede extrapolar al otro. Al detectar resistencia, es til aplicar
las tcnicas con EOTA para detectar el tipo de carbapenemasa presente.
Ciprofloxacina (CIP) -----
Trimetoprin I sulfa
(SXT)
-----
Doxiciclina
-----
(DOX)
En infecciones por cepas multirresistentes o cepas que muestren

resistencia o susceptibilidad intermedia por disco, y que el mdico quiera
Colistina
usarla como tratamiento, se debe evaluar la actividad de estos antibiticos
por MIC. No informar si no se hace MIC.
11.2.3.1 Pruebas adicionales para Acinetobacter
Adicional a probar estos antibiticos se deben hacer pruebas para la bsqueda de enzimas
responsables de mecanismos de resistencia, tales como: prueba para la deteccin de
Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE) y prueba con EDTA para la deteccin de
carbapenemasas tipo Metalo-3-lactamasas (MBL) descritas previamente para Enterobacterias.
Para el caso de la prueba de BLEE, es importante tener en cuenta que aunque el CLSI no menciona
que se deba realizar a Acinetobacter, si es importante realizar la bsqueda de este tipo de enzimas
en estos microorganismos; as mismo es importante resaltar que en cepas de Acinetobacter es
comn encontrar enzimas carbapenemasas de tipo OXA, sin embargo estas enzimas no es posible
identificarlas por tcnicas fenotpicas ya que no existen inhibidores que permitan diferenciarlas.
11.2.4 Burkholderia cepacia.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en las tabla 5 para
Escherichia coli ATCC 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, en caso de usar sistemas
automatizados es indispensable usar las cepas ATCC recomendadas para cada equipo y cada panel o
tarjeta.
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Tabla 5. Antibiticos a testear en antibiograma para B. cepacia.
Antibitico
Ceftazidima (CAZ)
Meropenem (MER)
Trimetoprin I sulfa (SXT)
Minociclina
Levofloxacina (LVX)
11.2.5 Stenotrophomonas maltophilia.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en la tabla 6 para
Escherichia coli ATCC 25922 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, en caso de usar sistemas
tarjeta.
Tabla 6. Antibiticos a testear en antibiograma para S. maltophilia.
Antibitico
Ceftazidima (CAZ)
Trimetoprin I sulfa (SXT)
Minociclina
Levofloxacina (LVX)
11.2.6 Staphylococcus spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en la tabla 7 y 8
segn corresponda, para cualquiera de las tcnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilucin en caldo manual, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de calidad se
recomienda usar las cepas Staphylococcus aureus ATCC 29213, Staphylococcus aureus ATCC
43300 (para control de la prueba de meticilino resistencia) y Staphylococcus aureus ATCC BAA 977
o

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(para control de la prueba D), en caso de usar sistemas automatizados es indispensable usar las cepas
ATCC recomendadas para cada equipo y cada panel o tarjeta.
Tabla 7. Antibiticos a testear en antibiograma para Staphylococcus spp.
No interpretar en Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) e informar la sensibilidad a este

Oxacilina (OXA)
antibitico en base a FOX.
Usar para la deteccin de resistencia a meticilino resistencia, importante tener en cuenta que
existen diferencias en los puntos de corte para S. aureus y S. lugdunensis, versus los dems
Staphylococcus y en caso de presentarse disociaciones entre el resultados de OXA y FOX,
Cefoxitin (FOX) se debe proceder segn la especie: 1. Para S. aureus informar directamente segn el
antibitico que resultara ms resistente. 2. En SCN informar segn FOX.
En caso de tener aislamientos meticilino sensibles provenientes de meningitis estafilococcicas
se debe adicionalmente realizar CIM de Cefotaxime y Ceftriazone.
Es importante tener en cuenta que los puntos de corte para este antibitico difieren para S.
aureus y para los Staphylococcus coagulasa negativa. En el mundo se han descrito pocos
aislamientos de S. aureus con resistencia neta a vancomicina y se ha reportado ms
frecuentemente asilamientos que presentan susceptibilidad disminuida a esta droga, de los
cuales se han descripto tres fenotipos en S. aureus: 1) VISA: CIM VAN 4-8 ~g/ml (intermedio),
2) h-VISA: CIM VAN < 2 ~g/ml (sensible) pero capaces de seleccionar subpoblaciones VISA y
3) VRSA: CIM VAN> 16 ~g/ml (resistente) por adquisicin del gen vanA. No es posible
detectar estos fenotipos por la tcnica de difusin con disco, razn por la cual es
indispensable testear este antibitico por alguna tcnica que permita la determinacin de CIM.
Vancomicina
En algunos aislamientos con estos fenotipos se observan caractersticas atpicas, tales como:
crecimiento lento, caractersticas morfolgicas heterogneas y coagulasa dbil. En caso de
encontrar un aislamiento con un valor de CIM > = 2ug/ml, se debe confirmar e informar una
nota al pie as: "El aislamiento presenta sensibilidad a vancomicina de acuerdo con los puntos
de corte CLSI, sin embargo esta sensibilidad es "borderline" y por lo tanto deber
monitorearse estrechamente el progreso del tratamiento porque se han documentado fallas
en el tratamiento con este valor de CIM" En caso de encontrar aislamientos con valores de
CIM intermedios o resistentes, se debe confirmar e informar de inmediato al laboratorio de
referencia.
Para el informe de este antibitico es indispensable tener en cuenta la prueba confirmatoria

Eritromicina
"O" que se describe abajo.
Para el informe de este antibitico es indispensable tener en cuenta la prueba confirmatoria

Clindamicina
"O" que se describe abajo.
Trimetoprin I
sulfametoxazol
-------
Gentamicina -------
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Ciprofloxacina -------
Rifampicina -------
Este antibitico es una nueva glicilciclina muy activa frente a cocos Gram positivos, se debe
informar solo en aislamientos provenientes de infecciones intraabdminales, de piel y de partes
Tigeciclina blandas, o en el caso de aislamientos multirresistentes para los cuales no existan otras
alternativas de tratamiento. Para este antibitico no existen puntos de corte CLSI, sin
embargo se pueden usar los puntos FOA (R <19mm).
An es muy inusual la resistencia a linezolid en Staphylococcus spp, sin embargo cualquier

Linezolid aislamiento que se encuentre por encima del punto de corte de sensibilidad debe ser
confirmado y enviado al laboratorio de referencia.
Minociclina -------
Tabla 8. Antibiticos a testear en antibiograma para Staphylococcus spp. en infeccin urinaria
No interpretar en Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) e informar la sensibilidad a este

Oxacilina (OXA)
antibitico en base a FOX.
Usar para la deteccin de resistencia a meticilino resistencia, importante tener en cuenta que
existen diferencias en los puntos de corte para S. aureus y S. lugdunensis, versus los dems
Cefoxitin (FOX) Staphylococcus y en caso de presentarse disociaciones entre el resultados de OXA y FOX,
se debe proceder segn la especie: 1. Para S. aureus informar directamente segn el
antibitico que resultara ms resistente. 2. En SCN informar segn FOX.
Vancomicina Probar en casos de aislamientos meticilino resistentes.
Trimetoprin I
sulfametoxazol
-------
Ciprofloxacina -...._-_ ..
Gentamicina Importante probarlas en aislamientos de S. aureus de orina, teniendo en cuenta la posibilidad
de una bacteremia asociada.
Rifampicina
Nitrofurantoina -------
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11.2.6.1 Pruebas confirmatorias para Staphylococcus spp.
Prueba fenotpica confirmatoria de Staphylococcus meticilino resistente: Un alto porcentaje

de aislamientos de Staphylococcus son resistentes a meticilina, esta resistencia esta mediada
por una modificacin en el sitio blanco del antibitico, las protenas ligadoras de penicilina (PBP).
La resistencia es de tipo cromosmico y est codificada en el gen mecA contenido en un casette
cromosomal, encargado de elaborar una PBP de baja afinidad para los antibiticos 3lactmicos,
por lo que las cepas de resistentes a meticilina son resistentes a todo el grupo de antibiticos
3lactmicos. Aunque existen en el mercado varias pruebas confirmatorias de este fenotipo de
resistencia, como son agares cromognicos y pruebas de latex entre otras, CLSI recomienda
usar cefoxitin (FOX) ya sea por difusin con disco o por dilucin en caldo para informar como
sensible resistente a oxacilina basado en el resultado de cefoxitin, tal como se describe en la
tabla 7.
Prueba "O": Un grupo importante de antimicrobianos empleados para el tratamiento de las
infecciones por Staphylococcus es el denominado complejo MLSB que incluye macrlidos
(eritromicina), lincosamidas (clindamicina) y estreptograminas B. La elevada capacidad del
germen de generar resistencia a los antimicrobianos se ve reflejada en la resistencia a este
grupo, la cual presenta dos variables, la resistencia constitutiva (MLSBc) y la inducible (MLSBi):
ambas relacionas con la expresin de los genes erm (erythromycin ribosome methylation). La
variable constitutiva presenta elevado nivel de resistencia a cualquier antimicrobiano del grupo
MLSB, a diferencia de la resistencia inducida que presenta nicamente resistencia a los
macrlidos de 14 tomos (eritromicina) y 15 tomos (azitromicina) y sensibilidad in vitro a
macrlidos de 16 tomos, lincosamidas (clindamicina) y estreptograminas B. En las cepas
MLSBi la expresin del gen erm es inducida por algunos compuestos, como la eritromicina, un
potente inductor, mientras que la clindamicina es un inductor dbil que acta lentamente, como
consecuencia de estas caractersticas, las cepas con resistencia MLSBi aparentan
susceptibilidad in vitro a clindamicina, pero al ser usado clnicamente, ocurre in vivo la induccin
de la resistencia con el consiguiente fracaso teraputico. El mtodo ms comn de identificacin
de este tipo de resistencia se basa en la expresin fenotpica (Prueba O); esta prueba identifica
la resistencia inducible mediante la ubicacin en una placa de agar inoculada con el
microorganismo en estudio de un disco de eritromicina a 20 mm de uno de clindamicina, se
interpreta como positiva la prueba cuando a las 18 - 24 horas de incubacin se observa un
achatamiento de la zona de inhibicin producida por el disco de clindamicina en las
proximidades del disco de eritromicina (Fig. 3). Si se observa una prueba positiva se debe
informar resistencia a clindamicina.
Figura 3. Prueba "O" positiva.

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11.2.7 Enterococcus spp.
Para este microorganismo se recomienda usar como mnimo los antibiticos descritos en la tabla 9 - 12
segn corresponda, para cualquiera de las tcnicas de antibiograma disponibles en Colombia (Kirby-
Bauer, Microdilucin en caldo manual, dilucin en agar, Sistemas automatizados, E-Test). Como control de
calidad se recomienda usar las cepas Staphylococcus aureus ATCC 29213 (para los mtodos de difusin
en disco) y Enterococcus faecalis ATCC 29212 (para los mtodos de dilucin), en caso de usar sistemas
tarjeta.
Tabla 9. Antibiticos a testear en antibiograma para Enterococcus spp procedentes de infeccin

severa
Puede ser usado como predictor de susceptibilidad a amoxicilina-cido clavulanico,

piperacilin y piperacilin - tazobactam entre Enterococcus no productores de ~-Iactamasa. La
Ampicilina susceptibilidad a Ampicilina puede ser usada como predictor de susceptibilidad a imipenem.
La resistencia a penicilina y ampicilina debido a la produccin de ~-Iactamasa es inusual, por
lo tanto no se busca de manera rutinaria, sin embargo se detecta utilizando la prueba de ~-
lactamasa basado en nitrocefin.
Teicoplanina
------
La presencia de inhibicin de crecimiento parcial o presencia de algn crecimiento dentro de

la zona de inhibicin indica resistencia.
A los microorganismos con zonas de inhibicin interpretadas como intermedio, se les debe
Vancomicina determinar las concentraciones inhibitorias mnimas (CIM) de acuerdo a las recomendaciones
del CLSI.
Ver tabla 12.
Gentamicina alta carga Ver tabla 12
Espectinomicina alta carga Ver tabla 12
Ampicilina -Sulbactam .------

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REDESENSALUDPBUCA hospitalarios. 2012 -Ago - 28
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Tabla 10. Antibiticos a testear en antibiograma para Enterococcus resistentes a vancomicina
Linezolid .......
Minocic\ina ---_ ...
Tigeciclina .......
Tabla 11. Antibiticos a testear en antibiograma para Enterococcus spp recuperados de infecciones
urinarias no complicadas
Puede ser usado como predictor de susceptibilidad a amoxicilina-cido clavulanico,

piperacilin y piperacilin - tazobactam entre Enterococcus no productores de ~-Iactamasa,
La susceptibilidad a Ampicilina puede ser usada como predictor de susceptibilidad a
Ampic\ina imipenem.
La resistencia a penicilina y ampicilina debido a la produccin de ~-Iactamasa es inusual,
por lo tanto no se busca de manera rutinaria, sin embargo se detecta utilizando la prueba
de ~-Iactamasa basado en nitrocefin.
Teicoplanina
La presencia de inhibicin de crecimiento parcial o presencia de algn crecimiento dentro

de la zona de inhibicin indica resistencia,
A los microrganismos con zonas de inhibicin interpretadas como intermedio, se les debe
Vancomicina determinar las concentraciones inhibitorias mnimas (CIM) de acuerdo a las
recomendaciones del CLSI.
Ver tabla 12,
Ciprofloxacina
Nitrofuranos
-
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Tabla 12. Pruebas para la deteccin de alta resisitencia a aminoglucocidos y vancomicina en Enterococcus spp.
Agar Mueller Agar BHI

Hinton
120 IJg disco de Gentamicina Gentamicina 300 IJg disco de Estreptomicina Estreptomicina Vancomicina
entamicina 500 IJ ImL 500 ImL estreptomicina 1000 uo ImL 2000 uc ImL 6 uc ImL
Recomendaciones Recomendaciones 101J1 del tubo Recomendaciones Recomendaciones 101J1 del tubo 101J1 del tubo 0.5 de
estndar estndar 0.5 de estndar estndar 0.5 de McFarland
McFarland McFarland
35.:t2C; aerobiosis I 35.:t2C; aerobiosis I 35.:t2C; 35+2C'
- , 35.:t2C; 35.:t2C; 35.:t2C; aerobiosis
aerobiosis aerobiosis aerobiosis aerobiosis
16 -18 horas I 24 horas I 24 horas 16 -18 horas 24 - 48 horas(si 24 - 48 I 24 horas
es susceptible a horas(si es
las 24 horas, susceptible a
reincube) las 24 horas,
reincube
6mm= resistente Algn crecimiento= >1 colonia= 6mm= resistente Algn >1 colonia= >1 colonia= Resistencia a
Resistente Resistente. crecimiento= Resistente. la vancomicina
7-9mm= poco 7-9mm= poco I Resistente presuntiva.
concluyente concluyente
10 mm= ;::: 10 mm=

susceptible susceptible
Correlacin CIM = r
R= ;:::500IJg/mL "
\..:
s= s 500IJg/mL 'F..:u
-1
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O
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.. ..,---~----I?)'tjflfI,'iAWlttaa:rree;s~isSttaian1cc:Jiia;aa1
..; Prueba dtam~je' %Alta ~~~i~t~ricia
a Gentamicina Alta resisten,~i~aestreptomicina . vancomicina
F: -::<:x:'('';' 'o'. "'
Determinar la CIM para

vancomicina y las
Resistente= no presenta sinergia con ampicilina, penicilina y vancomicina. preubas de motilidad y
produccin de pigmento
Susceptible= presenta sinergia con ampicilina, penicilina y vancomicina, que son tambin susceptibles. para diferencias de las
especies con resistencia
Si el resultados de difusin en disco es poco concluyente, realice dilucin en agar o microdilucin en caldo para confirmar adquirida (VanA y VanB)
de las especies con
resistencia intrnseca con
(VanC) como E.
gallinarum y E.
casseiflavus.
ATCC E. faecalis ATCC E. faecalis E. faecalis ATCC E. faecalis A TCC E. faecalis E. faecalis ATCC
29212- Susceptble ATCC 29212 29212- ATCC 29212- Susceptble
E. faecalis ATCC 29212- 14-20 mm Susceptble 29212- E. faecalis ATCC 51299
51299 - Resistente Susceptble E. faecalis A TCC Susceptble - Resistente
E. faecalis 51299 - E. faecalis
ATCC 51299 Resistente ATCC 51299
- Resistente - Resistente
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DE
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12. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
1, World Health Organization, World Alfiance for Patient Safety: Forward Programme 2008-2009.
2008, WHO: France. p.80.
2. Tenover, F.C. and J.M. Hughes, The challenges of emerging infectious diseases. Development
and spread of multiply-resistant bacterial pathogens. JAMA, 1996. 275(4): p. 300-4.
3. Struelens, M.J., The epidemiology of antimicrobial resistance in hospital acquired infections:
problems and possible solutions. BMJ, 1998. 317(7159): p. 652-4.
4. Coronado, V.G., et al., Ciprofloxacin Resistance among Nosocomial Pseudomonas aeruginosa
and Staphylococcus aureus in the United States. Infect Control Hosp Epidemiol, 1995. 16(2): p.
71-75.
5. Noriega. L.M En qu ayuda el antibiograma al mdico clnico en la atencin de sus pacientes?
Rev Chillnfect 2004; 21 (SupI1): S34-S38.
6. Ministerio de salud de Argentina. Manual de procedimientos para la determinacin de la
sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. 2001.
7. Organizacin Panamericana de la Salud. Gua para el uso correcto de los equipos automatizados
para identificacin bacteriana y su correspondiente prueba de susceptibilidad. 2011.
8. Red Whonet Argentina. Protocolo de trabajo acordado. XIII taller Whonet Argentina. Mar del Plata
9 al 11 de mayo de 2011.
9. Clinical and Laboratory Standar Institute (CLSI). Performance Standars for Antimicrobial
Susceptibility Testing; Twenty-Second Informational Supplement. M100-S22. Vol. 32 W.3. 2012.
13. CONTROL DE REVISIONES
14. ANEXOS.
ANEXO 1. Medio Mueller - Hinton.
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ELABORO
Angela Muoz
Bacteriloga Contratsta.
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Bacteriloga Contratista.
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J J Maria Elena Realpe
Delgado
Coordinadora Grupo
Microbioloqa.
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NACIONAL
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ANEXO 1. Medio Mueller - Hinton.
Es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos

aerbicos por el mtodo de Kirby-Bauer. Este medio tambin es conocido como Agar M-H.
Ha sido recomendado para llevar a cabo las pruebas de susceptibilidad a antibiticos, utilizando discos
impregnados con una alta concentracin de un antimicrobiano. El Agar Mueller Hinton cumple con los
requerimientos de la Organizacin Mundial de la Salud y est especificado en la FDA. Este medio es el
seleccionado por la CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) para realizar las pruebas de
susceptibilidad, por su alta reproducibilidad, su bajo contenido de substancias inhibidoras y el crecimiento
satisfactorio que presentan la mayora de los patgenos no fastidiosos. Con este medio se han llevado a
cabo una gran cantidad de estudios sobre susceptibilidad antimicrobiana.
En este medio la infusin de carne y la peptona de casena proveen la fuente de nitrgeno, vitaminas,
carbn y aminocidos. El almidn es agregado para absorber cualquier metabolito txico y el agar es
adicionado como agente solidificante.
Preparacin. Siga las instrucciones del fabricante y almacene a 4C por no ms de una semana.
Control de calidad.
Se debe realizar a cada lote de medio preparado aunque provenga del mismo frasco de medio o para
cada lote de placas adquiridas comercialmente (Independiente de que se cuente con el certificado de
calidad del proveedor). Los parmetros mnimos a controlar son:
1. pH: Debe encontrarse entre 7,2 y 7,4 Y para calcularlo se debe usar un pHmetro de sensibilidad
de ms o menos 0,01 unidades de pH. Debe calcularse a temperatura ambiente y luego de que el
medio haya solidificado, para ello puede usar un electrodo de superficie correctamente calibrado
o puede dejar solidificar el agar alrededor del bulbo del electrodo. Las tiras de pH no estn
recomendadas para calcular este parmetro.
2. Contenido de es" y Mg++: Se puede determinar mediante un ensayo usando P. aeruginosa
ATCC 27853 frente a discos de aminoglucsidos, especialmente gentamicina y comparando con
los halos recomendados en la tabla 3 del documento M100S15 del CLSI (rango aceptable:16-
21mm)
3. Contenido de z-". Se puede evaluar usando P. aeruginosa ATCC 27853 frente a discos de
imipenem y comparando con los halos recomendados en la tabla 3 del documento M100S15 del
CLSI. (Rango aceptable: 20-28mm)
4. Contenido de Timina lTimidina: Se puede evaluar usando una cepa de Enterococcus faecalis
ATCC 29212 33186 frente a discos de Trimetoprin sulfa, el medio con cantidades adecuadas
de estos compuestos mostrar un halo de inhibicin claro y definido de 20 mm o ms.
5. Profundidad del agar: El CLSI recomienda una profundidad de 4mm, con una variacin permitida
de ms o menos 0,5 mm.
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Kelly Orolcb \lal~as
'1_ ~PRQBQ;LJ
Maria-Elena Realpe
Delqado
Coordinadora Grupo
Microbiologa.
~D

Manual de Procedimientos Según Susceptibilidad de Patogenos Con Impacto Hospitalario

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Manual de Procedimientos Según Susceptibilidad de Patogenos Con Impacto Hospitalario

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA LA

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Autores: ngela Muoz Delgado. Profesional M.Sc. Grupo de Microbiologa.

3. ALCANCE DEL MANUAL 4

8. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO 7

13. CONTROL DE REVISIONES 29

La emergencia de la resistencia a los antimicrobianos es un fenmeno natural que resulta de procesos

En los ltimos aos se ha observado en muchos microorganismos, considerados como totalmente

Estandarizar los procedimientos de laboratorio usados en la determinacin de la susceptibilidad

Establecer un Sistema Nacional de Redes de Laboratorio para la vigilancia de la resistencia a los

Implementar un sistema de vigilancia nacional de la resistencia a los antimicrobianos oportuno,

3. ALCANCE DEL MANUAL

Este documento aplica para la determinacin de susceptibilidad antimicrobiana y la deteccin de

Antibiograma: tcnica utilizada en el laboratorio para evaluar la actividad de los antimicrobianos

Manual de procedimientos para la

WHONET: software gratuito desarrollado por el Centro Colaborador de la Organizacin Mundial de

No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.

No aplica (N/A) Remitirse al numeral 8.

8. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO

Formulario de registro para el envo de aislamientos para la confirmacin de susceptibilidad

Incubadoras (graduar a 35 +/- 2C)

En este manual se incluirn microorganismos de importancia en infeccin intrahospitalaria:

11.2 Determinacin de la susceptibilidad a los antimicrobianos.

Para la interpretacin de susceptibilidad e informe de resultados se tendrn en cuenta las normas y

o Luego de inoculada la caja de agar se debe esperar de 3 a 5 minutos, pero no ms de 15 minutos

Figura 1. Representacin esquemtica del mtodo del E-test. (Tomada de:

Volumen (mi) x concentracin (Ilg/ml)

Tenga en cuenta que se deben preparar soluciones madres en un volumen no menor de

1000!-lg Iml x 1mi

Manual de procedimientos para la

Por lo tanto, en tubo se debe agregar 1 mi de la solucin de antibitico de 1.000 IJg/ml y

Sistemas automatizados: Para la determinacin de susceptibilidad antibitica a partir de

11.2.1 Enterobacterias aisladas de infeccin hospitalaria (diferentes de Salmonella y

Tabla 1. Antibiticos a testear en antibiograma por cualquier tcnica para Enterobacterias

Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina

Ampicilina / sulbactam (SAM) -------

Representativo de cefalosporinas de tercera generacin, indispensable usarla siempre

Representativo de cefalosporinas de tercera generacin, indispensable usarla siempre

No informar. til para el control de calidad de la estimacin del mecanismo de

Piperacilina - Tazobactam -----

Trimetoprin - Sulfametoxasol -----

Meropenem La resistencia a carbapenems en enterobacterias es muy importante de vigilar, si se

Ciprofloxacina (CIP) Informe dependiente de comportamiento de Acido Nalidixico.

No se debe informar la sensibilidad a este antibitico y en caso de encontrar

Ampicilina Representativo de clase para Amoxicilina y Ampicilina

Ciprofloxacina (CIP) Informedependientede comportamientode AcidoNalidxico.

Proteus spp, M. morganii, Providencia spp. y Serratia spp presentanresistencianatural a los

Si se encuentranenterobacteriasresistenteso intermedias,con CIP sensiblese debe informarla

Gentamicina tilcomomarcadorepidemiolgicode resistencia.

11.2.1.1 Pruebas adicionales para Enterobacterias

Adicional a las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, el laboratorio debe realizar pruebas

Prueba para la deteccin de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE): Esta prueba

Interpretacin de resultados: Si observa una invaginacin del halo de inhibicin alrededor de la

Figura 1. Test de Hodge.

Prueba con EDT A para la deteccin de carbapenemasas tipo Metalo-I3-lactamasas (MBL):

Figura 2. Prueba de Inhibicin con EDTA para la deteccin de MBL.

Figura 3. Prueba de Inhibicin con APB para la deteccin de KPC.

11.2.2 Pseudomonas aeruginosa.

Tabla 3. Antibiticos a teslear para P. aeruginosa.

En montajes manuales se puede ubicar CAZ junto a Imipenem a 2 cm y a

Piperacilina - Tazobactam -----

11.2.2.1 Pruebas adicionales para Pseudomonas aeruginosa

11.2.3 Acinetobacter spp.