El material gentico se compacta en un rea discreta de la clula formando los cromosomas.

stos se encuentran en los virus, clulas procariotas, en el ncleo de clulas eucariortas y en

cloroplastos y mitocondrias.

Diferencias entre eucariotas y procariotas

La diferencia fundamental est en la cantidad de ADN que es inferior en procaioras que en
procariotas como por
ejemplo: en E. coli el ADN mide 1.3 mm y tiene 4.2 Mb mientras que una clula humana tiene
1.8 mm y 6000 Mb pero
si hay 10 elevado a 13 clulas, el ADN humano mide 2 x 10E13 m.
En la siguiente tabla se muestran las diferencias ms importantes:

El cromosoma eucaritico
Los cromosomas se encuentran en el ncleo celular separados del resto de la clula por la
membrana nuclear. Un cromosoma tiene tres partes fundamentales: centrmero, telmero y
los brazos.

El centrmero (constriccin cromosmica primaria) es la estructura a la que se une el huso

acromtico. La regin centromrica aparece normalmente como un y su posicin define la
relacin entre las longitudes de los dos brazos centromricos que es una caracterstica muy
til. Segn la posicin del centrmero los cromosomas se clasifican en:

Telocntricos con el centrmero en un extremo.

Acrocntricos con el centrmero alejado del centro.
Metacntricos con el cromosoma en el centro.
Los telmeros son secuencias situadas en los extremos de los cromosomas que les dan
estabilidad. Se encuentran sobre todo en los cromosomas eucariticos lineales.
El nmero de nucleolos difiere de un organismo a otro, variando entre uno y muchos. Los
nucleolos contienen ARN ribosmico, un componente muy importante de los ribosomas.
Losnucleolos se encuentran situados en las constricciones secundarias de los cromosomas
llamadas organizadores nucleolares, que ocupan lugares especficos en el cromosoma.
En los centrmeros y telmeros se encuentra asociado ADN satlite que son segmentos de
ADN altamente repetitivo y moderadamente repetitivo.

Los cromosomas eucariticos estn la mayor parte del ciclo celular como una sola cromtida y
como dos cuando se replica. La replicacin del ADN es semiconservativa, esto se demostr
en un experimento en el que se marc con tritio una cromtida. Entonces se procedi a
replicar esta cromtida en presencia de tritio y se obtuvo un cromosoma de dos cromtidas
marcadas. Se hizo volver a replicarse, esta vez sin presencia de tritio y se obtuvieron cuatro
cromtidas formando dos cromosomas. Cada cromosoma tena una molcula marcada y la
otra no con lo que en la replicacin se conservaba para el nuevo cromosoma una de las
cromtidas parentales.

Organizacin del cromosoma eucaritico

En clulas eucariticas que no se hayan sometidas a divisin celular el cromosoma re- cibe el
nombre de cromatina. La cromatina consiste en fibras que contienen protenas, ADN (en
cantidades muy parecidas) y una pequea porcin de ARN. Las protenas que se asocian al
ADN son bsicas y se llaman histonas. Las histonas que participan son H1, H2A, H2B, H3 y
H4 y su porcentaje de aminocidos bsicos y caractersticas son:

A continuacin se desglosan por orden de empaquetamiento los diferentes niveles, desde el

primero hasta el ltimo sucesivamente:
Primer nivel: nucleosoma
Esta estructura vista al microscopio se ve como si fuera un collar de perlas del que las cuentas
son los nucleosomas.

El nucleosoma est formado por un octmero de histonas en el que hay dos subunidades de
las histonas H2A, H2B, H3 y H4 de las que sobresale un extremo amino de aproximadamente
30 aminocidos que permite la unin de otras protenas para las funciones de transcripcin,
replicacin y reparacin. Alrededor de este octmero se arrolla el ADN con dos vueltas (166
pares de bases aprox). El espaciamento entre las cuentas est formado por ADN que se llama
ADN puente o ADN de unin.
El nucleosoma mide 6 nm y se considera la unidad bsica de empaquetamiento del ADN. Los
nucleosomas se vuelven a organizar con la ayuda de la histona H1 habiendo una por cada
nucleosoma.

Segundo nivel: fibra de 30 nm.

El nucleosoma que contiene H1 se pliega en una conformacin que se supone en zigzag (pero
tambin se piensa que en hlice o con interacciones cruzadas) colocndose prximas a la
salida y entrada del nucleosoma; y cuya apariencia sugiere que los nucleosomas
interaccionan mediante contactos entre sus molculas H1. Esta fibra que se forma tiene 30 nm
de espesor, en el que se aprecian los nucleosomas. Las histonas H1 se disponen de manera
que forman el eje central sobre el que se arrollan los nucleosomas. Por cada vuelta de la
espiral que forma esta fibra hay seis nucleosomas. A este arrollamiento de los cromosomas
sobre s mismos se le llama solenoide.

Tercer nivel: fibra de 300 nm.

Algunos autores proponen que el solenoide a su vez se enrolla en bucles de 300 nm,
formando otras estructuras llamadas cronmeros.
Si eliminamos las histonas del cromosoma en metafase mittica se puede ver que los
cromosomas tienen un esqueleto central densamente teido. Desde este esqueleto se
proyectan lazos de ADN que comienzan y acaban en el
esqueleto. Este esqueleto central llamado andamio est compuesto por la enzima
toposiomerasa II (tambin llamada condensina que enlazan o desenlazan nudos o lazos en
una cadena) y por protenas SMC (Structural Maintenance of Chromosomes o Mantenimiento
de la estructura del cromosoma) en el que parece haber regiones especiales llamadas
regiones de unin al andamio. Para eso, se estima que existen las llamadas zonas SAR
(Scaffold Attachment Region o Regiones de Unin al Andamio) que son zonas de la fibra de
30nm (asas) muy ricas en amina y timina para unirse al andamio, dando lugar a una fibra de
300 nm.
El empaquetamiento en este punto es de 2.000 veces la hebra de ADN.

Cuarto nivel: cromosoma

Se produce por el arrollamiento de la fibra de 300 nm sobre s misma formando una espiral y
empaquetando el ADN hasta 10.000 veces formando una cromtide. La unin de dos
cromtidas hermanas a travs de las condensinas.

Cromosomas politnicos y plumosos

Los cromosomas politnicos o gigantes (miden ms o menos 2 mm) se descubrieron
enDrosophila y se han observado en otros dpteros. Estos cromosomas tienen bandas y se
producen en ciertas clulas secretoras que no se dividen. Este sistema de bandas est muy
especializado.
En estas clula,s Balbiani descubri estrcuturas largas y con forma de salchicha que
presentaban engrosamientos y estras cruzadas. Esto eran cromosomas que se daban en los
tejidos secretores de los dpteros aunque l no se dio cuenta.

Estos cromosomas eran cromosomas que se replican varias veces sin que se produzca una
separacin real de las cromtidas con lo que el cromosoma se alarga y se hace ms grueso.
El conjunto de rplicas se denomina cromosoma politnico. Este cromosoma queda unido por
el cromocentro, que es la zona de fusin de las regiones heterocromatnicas situadas
alrededor de los centrmeros de los pares cromosmicos. A lo largo del cromosoma politnico
se encuentran estras llamadas bandas que varan en anchura y morfologa. Hay regiones
engrosadas llamadas PUFFS y a veces muy distendidas llamadas ANILLOS DE
BALBIANI que se piensa que corresponden a regiones de sntesis de ARN. No hay una
relacin uno a uno de bandas y genes, aunque se piensa que los genes activos estn en las
bandas ms claras.
Los cromosomas plumosos son cromosomas cuya fibra de ADN tiene muchos lazos y su
longitud vara entre 0.4 y 0.8 mm.

Cariotipo
Es el conjunto de cromosomas y su morfologa en metafase de una clula que se ordenan
colocndolos por parejas de cromosomas homlogos.
Para los seres humanos hay 23 pares de cromosomas homlogos de los que 22 son
autosomas (son los cromosomas no sexuales) y uno son los sexuales. En total hay 46
cromosomas de los que la mitad se heredan del padre y la otra mitad de la madre con lo que
la especie humana es diploide (parejas de cromosomas homlogos).

Los cromosomas se agrupan en categoras (A-G, X, Y) segn su longitud (estn dispuestos

desde mayor longitud hasta menor longitud), segn el ndice centromrico, segn la posicin
de las constricciones cromosmicas y segn la posicin de las bandas de tincin. Los
gametos son clulas n, es decir, con un slo cromosoma: sin parejas. As cuando se produce
la fecundacin, se producen clulas 2n. En el ciclo celular puede variar la importancia de la
fase n o 2n segn el tipo de organismo. El ser n o 2n no aporta la suficiente informacin sino
que tambin es importante la longitud, I.C.,

Heterocromatina y eucromatina
Si hacemos reaccionar el ADN con el tinte Feulgen hay una parte que se tie intensamente y
otra que no tanto. La parte que se tie intensamente se llama heterocromatina y la parte que
no eucromatina. La mayora de los genes activos se encuentran en la eucromatina

La heterocromatina puede ser constitutiva o facultativa. La de tipo constitutivo es un rasgo

permanente de una posicin concreta del cromosoma y es un carcter hereditario. La
heterocromatina facultativa puede estar presente o ausente en una posicin determinada del
cromosoma.

LA REPLICACIN

Escherichi Replicacin
Metafase mittica de Vicia faba
coli dividindose semiconservativa

FUNCIONES QUE DEBE CUMPLIR EL CROMOSOMA: SIGNIFICADO

GENTICO DE LA REPLICACIN

Las principales funciones que debe cumplir un cromosoma son la

de replicarse (producir copias de si mismo), la de transmitirse de una
clula a otra y de una generacin a la siguiente y la de expresar la
informacin que contiene.

Bacteria Bacteria dividindose Bacterias descendientes

El significado gentico de la replicacin es el de conservar la informacin

informacin gentica, de manera que cuando una bacteria se divide, de
lugar a una bacteria hija que contenga la misma informacin gentica.

En organismos eucariontes el significado de la divisin celular es el

mismo, una clula cuando se divide origina dos clulas hijas idnticas
con la misma informacin gentica.

MODELOS DE REPLICACIN PROPUESTOS: SEMICONSERVATIVO,

CONSERVATIVO Y DISPERSIVO

Modelo Semiconservativo: Cuando Watson y Crick (1953) propusieron

el modelo de la Doble Hlice indicaron que dicho modelo sugera una
forma sencilla de replicacin. El modelo de replicacin propuesto por
Watson y Crick supona que el ADN doble hlice separa sus dos hebras y
cada una sirve de molde para sintetizar una nueva hebra siguiendo las
reglas de complementariadad de las bases nitrogenadas. Dicho modelo
recibin el nombre de Semiconservativo, ya que las dos dobles hlices
recin sintetizadas poseen una hebra vieja (una mitad vieja) y otra hebra
nueva (mitad nueva).

Frente al modelo Semiconservativo propuesto por Watson y Crick (1953)

se postularon otros posibles modelos de replicacin del ADN, uno de
ellos se denomin Modelo Conservativo y otro Modelo Dispersivo.

Modelo Conservativo: cuando el ADN doble hlice se replica se

producen dos dobles hlices, una de ellas tienen las dos hebras viejas
(esta intacta, se conserva) y la otra doble hlice posee ambas hebras de
nueva sntesis.
Modelo Dispersivo: Cuando el ADN doble hlice se replica se originan
dos dobles hlices, cada una de ellas con hebras que poseen tramos
viejos y tramos de nueva sntesis en diferentes proporciones.

Los siguientes esquemas representan los tres Modelos de Replicacin:

Semiconservativo Conservativo Dispersivo

LA REPLICACIN DEL ADN BACTERIANO SE AJUSTA AL MODELO

SEMICONSERVATIVO: EXPERIMENTOS DE MESELSON Y STAHL (1958)

Meselson y Stahl (1957) disearon un experimento para tratar de

averiguar la forma en la que se realiza la replicacin del ADN en E. coli,
es decir, la pregunta que se plantearon fue: Qu modelo de replicacin
del ADN sigue E. coli, semiconservativo, conservativo o dispersivo?. Para
contestar a esta pregunta, disearon un experimento en el que marcaban
el ADN de la bacteria E. coli con Nitrgeno pesado N15, para ello hicieron
crecer las bacterias durante 14 generaciones sucesivas en un medio que
contena como nica fuente de Nitrgeno N15. Durante estas 14
generaciones el ADN de las bacterias las bacterias se haba sintetizado
con bases nitrogenadas con Nitrgeno pesado (N15). Posteriormente,
comprobaron que podan distinguir el ADN del las bacterias que crecan
en un medio normal (con N14) del ADN de las bacterias que haban
crecido durante 14 generaciones en N15. Para ello extrajeron el ADN de
ambos tipos de bacterias y lo centrifugaron en un gradiente de densidad
de CsCl. El resultado fue que la densidad del ADN de las bacterias que
haban crecido en presencia de N15 era mayor que el ADN de las
bacterias que haban crecido con N14. Una vez comprobado que eran
capaces de distinguir el ADN de ambos tipos de bacterias, continuaron el
experimento de la siguiente forma: Las bacterias que haban estado
creciendo en Nitrgeno pesado (N15) las pasaron a un medio de cultivo
que contena N14 (Nitrgeno normal) y a distintos tiempos, media
generacin, una generacin, dos generaciones, tres generaciones de
replicacin, tomaban una muestra del cultivo bacteriano, extraan el ADN
y centrifugaban en gradiente de densidad de CsCl.
Esquema Experimentos Meselson y Stahl (1958)
Cuando extraan el ADN de la bacterias que llevaban una generacin
creciendo en N14 y centrifugaban en CsCl, obtenan una sola banda de
densidad intermedia (N14-15)entre la del ADN N14 y el ADN N15. Si extraan
el ADN de las bacterias que llevaban dos generaciones creciendo en
N14 y centrifugaban en gradiente de CsCl obtenan dos bandas, una
correspondiente al ADN N14 y otra de densidad intermedia (N14-15) entre la
del ADN N14 y el ADN N15. La absorbancia a 260 nm es directamente
proporcional a la cantidad de ADN que contiene una banda, de manera
que al medir la absorbancia de las dos bandas obtenidas en la segunda
generacin, obtenan que ambas contenan igual cantidad de ADN (1:1).
Al extraer y centrifugar en CsCl el ADN de las bacterias que llevaban tres
generaciones creciendo en N14, obtenan dos bandas, una
correspondiente al ADN N14 y otra de densidad intermedia (N14-15) entre la
del ADN N14 y el ADN N15. La cantidad de ADN que contena la banda
correspondiente al ADN N14 era tres veces mayor que la encontrada en
la banda de densidad intermedia (N14-15), proporcin (3:1).

Los resultados obtenidos por Meselson y Stahl (1958) se ajustaban a un

modelo de replicacin semiconservativo. Para asegurarse, aislaron la
banda de ADN de densidad intermedia (N14-15) obtenida a partir de las
bacterias que llevaban una generacin en N14, desnaturalizaron el ADN
de la banda mediante calor para separar sus dos hlices y,
mantenindolas desnaturalizadas, centrifugaron en CsCl. Si la replicacin
de E. coli se ajustaba al modelo semiconservativo, una de las hlices
debera estar construida con N15 (la vieja) y la otra hlice con N14 (la
nueva) y, al centrifugar en gradiente de densidad esperaramos obtener
dos bandas una ms densa correspondiente a la hlice construida con
N15 y otra menos densa sintetizada con N14. El resultado obtenido por
Meselson y Stahl (1958) fue precisamente el esperado para una
replicacin semiconservativa.
 Resultados centrifugacin CsCl Matthew Meselson y Franklin W. Stahl

Si la replicacin del ADN de E. coli se ajustar al modelo Conservativo al

centrifugar el ADN de las bacterias despus de un generacin en medio con N 14,
hubieran obtenido dos bandas una de densidad correspondiente al N 14 y otra de
densidad correspondiente al N15. Nunca habran observado, en este caso, una
banda de ADN de densidad intermedia (N14-15).

EL ADN BACTERIANO ES CIRCULAR: EXPERIMENTO DE CAIRNS (1963)

Cairns en 1963, llev a cabo otro experimento en la bacteria E. coli que

adems de demostrar que la replicacin de su ADN se ajustaba al
modelo Semiconservativo propuesto por Watson y Crick (1953), tambin
demostraba que el ADN de E. coli es circular. Se trata se la primera
evidencia citolgica (mediante observacin al microscopio) de la
circularidad del cromosoma bacteriano, ya que mediante tcnicas de
construccin de mapas de conjugacin, ya se haba demostrado
previamente por Jacob y Wollman (1958) que el ADN bacteriano tena
un mapa circular.

El experimento que realiz Cairns (1963) consisti en mantener un

cultivo de E. coli creciendo durante dos generaciones sucesivas en un
medio que contena Timidina tritiada (TH3), es decir, utilizaron un
nucletido (la Timina) marcado con un istopo radiactivo (tritio, H3). Por
tanto, cuando las bacterias sintetizaban su ADN empleaban dicho
nucletido marcado. Adems, Cairns (1963) desarroll un sistema para
extraer el ADN de E. coli sin romperlo (intacto) y extenderlo sobre un
portaobjetos para posteriormente realizar una autorradiografa, revelarla
y observar los resultados al microscopio. Para realizar la autorradiografa,
empleaba una emulsin fotogrfica que colocaba en contacto directo con
la preparacin, de forma que en aquel lugar de la preparacin en que
exista TH3, las partculas b del tritio impresionaban la emulsin
fotogrfica y al revelarla apareca una macha o punto en ese lugar. Las
autorradiografas correspondientes a la primera generacin de
replicacin presentaban imgenes de puntos formando un crculo. En las
autorradiografas correspondientes a la segunda generacin de
replicacin se observaban imgenes de puntos en forma de la letra
griega q pero que mostraban una regin del interior con doble cantidad
de puntos.
Cairns (1963) interpret que el cromosoma de E. coli era circular, que se
replicada de modo semiconservativo, que exista un punto de inicio de la
replicacin, un origen, y un punto de crecimiento (PC). Sin embargo, esta
interpretacin fue errnea, ya que en E. coli existe un solo punto de
iniciacin de la Replicacin (Ori C) pero existen dos puntos de
crecimiento (PC), ya que la replicacin en E. coli, como veremos ms
adelante es bidireccional.

Autorradiografa de la 2 generacin de Replicacin

J. Cairns
con TH3
 LA DIVISIN CELULAR EN EUCARIONTES: MITOSIS Y CITOCINESIS.

El ciclo celular consta esencialmente de dos fases que habitualmente se

alternan, La interfase y la divisin celular. A su vez la Interfase de
subdivide en periodo G1, periodo de sntesis S y periodo G2. La duracin
relativa de G1, S y G2 vara de un organismo a otro y dentro del mismo
organismo segn el tejido. La divisin celular comprende a su vez dos
fenmenos diferentes e independientes que son la mitosis o cariocinesis
(reparto del material nuclear) y la citocinesis (reparto del citoplasma).
Habitualmente, despus de una mitosis se produce una citocinesis. En
G1 los cromosomas estn constituidos por un solo cromatidio procedente
de la segregacin anafsica anterior. Para que una clula somtica
vuelva a entrar en divisin es necesario que antes se replique el material
hereditario, por tanto, las clulas que entran en mitosis han pasado
previamente por un perodo S de sntesis de ADN. De forma que cuando
las clulas entran en mitosis, los cromosomas estn en estado de dos
cromatidios.

La Mitosis o Cariocinesis (reparto del material nuclear) consta de laza

siguientes fases: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. Cuando una
clula somtica con 2n cromosomas entra en mitosis, todos sus
cromosomas estn en estado de dos cromatidios. Los dos cromatidios
hermanos de cada cromosoma son idnticos, contienen la misma
informacin gentica ya que se han originado a partir de doble hlice de
ADN mediante replicacin semiconservativa.

En la Interfase el material nuclear, la cromatina, se encuentra

descondensada y se observa el nucleolo.

Profase: la cromatina se va contrayendo gradualmente y al final de

la profase desaparece la membrana nuclear y el nucleolo y los
cromosomas comienzan a dirigirse al centro de la clula al
ecuador.

Metafase: los cromosoma alcanzan su mximo grado de

condensacin presentando sus bordes ntidos y se sitan en la
placa ecuatorial (centro de la clula). Tiene lugar la insercin de los
microtbulos (fibras) del huso acromtico en los cinetocoros
centromricos. En la placa ecuatorial hay 2n cromosomas
constituidos por dos cromatidios.
 Anafase: segregacin o separacin de los cromatidios hermanos
de cada cromosoma y emigracin a polos opuestos. Este tipo de
segregacin se denomina Anfitlica, los dos cromatidios de un
cromosoma se separan y viajan a polos anafsicos opuestos. A
cada polo viajan 2n cromatidios.

Telofase: Termina la emigracin a polos opuestos se descondensan

los cromatidios se reconstruye la membrana nuclear y se
reorganiza el nucleolo. Finalmente aparecen dos ncleos hijos
idnticos que cada uno contiene 2n cromatidios.

Despus la citocinesis reparte el material citoplasmtico y aparecen dos

clulas hijas idnticas. La citocinesis en clulas vegetales se produce por
coalescencia de vesculas del aparto de Golgi que dan lugar al
fragmoplasto figura en forma de tonel que adquiere el huso acromtico,
al ser empujadas sus fibras hacia fuera, el crecimiento de dicho tabique
se produce del interior hacia el exterior de la clula. En las clulas
animales la citocinesis tiene lugar por estrangulamiento de fuera hacia
dentro.

Fases del ciclo celular : meristemo radicular de cebolla

Anafase
Interfase Profase Metafase
Temprana

Anafase Tarda Telofase temprana Telofase tarda Dos clulas

LA REPRODUCCIN CROMATDICA SE AJUSTA AL MODELO

SEMICONSERVATIVO: EXPERIMENTO DE TAYLOR Y Col. (1957).
Taylor y colaboradores (1957) realizaron un experimento con clulas del
meristemo radicular de Vicia faba (juda) para tratar de averiguar como
tiene lugar la replicacin de los cromatidios en esta especie eucarionte.
El experimento consisti en someter a las races durante un periodo de
Sntesis (periodo S) a la accin de la Timidina tritiada (TH3) y,
posteriormente observar el patrn de marcaje radiactivo de los
cromosomas en la primera metafase mittica despus de la
incorporacin del istopo y en la segunda metafase mittica. Para ello,
despus de la incorporacin del istopo cortaron las races las aplastaron
sobre un portaobjetos y despus realizaron una autorradiografa.

Las autorradiografas obtenidas ponan de manifiesto que las clulas de

la primera metafase mittica despus de la incorporacin del istopo
tenan todos sus cromosomas marcados en sus dos cromatidios con
timidina tritiada (TH3). Sin embargo, las clulas de la segunda metafase
mittica despus de la incorporacin del istopo tenan todos sus
cromosomas marcados pero solamente en uno de sus dos cromatidios.

La explicacin que dieron a estos resultados fue que el cromatidio se

comportaba como si fuera una doble hlice de ADN y que se replicaba de
forma semiconservativa. Para poder distinguir las clulas del meristemo
radicular de Vicia faba de la 1 Metafase mittica de las clulas de la 2
Metafase mittica, trataron las raices con colchicina durante la primera
divisin mittica. La colchicina inhibe la formacin de las fibras del huso
acromtico y, como consecuencia, se impide la anafase o separacin de
los cromatidos hermanos a polos opuestos apareciendo clulas con
doble cantidad de cromosoma (poliploides). Por tanto, las clulas de la 2
Metafase tenan doble nmero de cromosomas que las clulas de la 1
Metafase.

El siguiente esquema pone de manifiesto que si se supone que el

cromatidio es una doble hlice de ADN que se replica de forma
semiconservativa, se obtienen los resultados observador por Taylor y
colaboradores, es decir, todos los cromosomas de la clula estn
marcados en sus dos cromatidios en la 1 Metafase y todos los
cromosomas de la clula estn marcados en un solo cromatidio en la 2
Metafase.

Existen mtodos de tincin ms recientes que permiten comprobar sin

necesidad de realizar un marcaje radiactivo que la replicacin de los
cromatidios se ajusta al modelo semiconservativo. Las clulas pasan por
dos periodos de sntesis sucesivos en presencia de bromodesoxiuridina
(BUdR). Posteriormente se tien los cromosomas con Giemsa y con un
colorante fluorescente. La bromodesoxiuridina es un anlogo de la
Timina y la sustituye durante la replicacin. Los cromatidios constituidos
por dos cadenas con BUdR se tien de color ms claro que los
cromatidios que tienen una hlice original y otra con BUdR que se tien
de color oscuro. Este tipo de tincin origina los que se denomina
cromosomas en arlequn, y es especialmente adecuado para distinguir
intercambios entre cromtidas hermanas.

2 Metafase (cromosomas en arlequn)

ALTERACIONES DEL CICLO CELULAR

Lo habitual es que despus de un perodo S de sntesis se produzca una

mitosis o cariocinesis seguida de una citocinesis. Sin embargo, en
ocasiones en algunos tipos de clulas animales o vegetales de forma
natural o bien mediante tratamientos con determinados compuestos, es
posible obtener variaciones en el ciclo de divisin.

Las principales variaciones en el proceso de divisin celular se han

resumido en la siguiente tabla:

VARIACIONES EN EL CICLO DE DIVISIN CELULAR

Variaciones en la Endorreduplicacin: Varios perodos S sucesivos sin
Replicacin y entrar en mitosis. Cuadruplocromosomas. Politenia
reparto del (cromosomas gigantes de Drosophila melanogaster).
material Haplocromosomas: Dos mitosis sucesivas sin perodo S
hereditario entre ambas.
Endomitosis: No desaparece la membrana nuclear,
mitosis dentro del ncleo. Aparecen clulas poliploides.
Variaciones que Variaciones en la anafase: inhibicin de la formacin del
afectan a los huso acromtico. Con colchicina (c-mitosis) mediante
estados anoxia (a-mitosis). Se duplica el nmero de cromosomas
mitticos y aparece una clula poliploide.
No reorganizacin del nucleolo: por mutaciones en la
ARN Polimerasa I
 Cariocinesis sin Citocinesis: La cafena inhibe la
citocinesis, aparecen clulas binucleadas (con dos
ncleos)
Variaciones que
Citocinesis sin Cariocinesis: el bromuro de etidio
afectan a la
provoca que las clulas se paren en profase y se reparta
citocinesis en
el citoplasma (citocinesis) sin haberse repartido el
relacin con la
material del ncleo.
cariocinesis
Citocinesis en clulas anucleadas: en algunos
organismos en determinados momentos se observa que
clulas sin ncleo reparten su citoplasma.

CARACTERSTICAS DE LA REPLICACIN EN BACTERIAS: NICO PUNTO

DE ORIGEN, REPLICN

Como ya hemos visto la replicacin en bacterias se ajusta al modelo

semiconservativo. En las bacterias existe un solo origen de replicacin,
denominado Ori C y, a partir de este nico punto de origen, la replicacin
progresa en dos direcciones, de manera que existen dos puntos de
crecimiento (PC) u horquillas de replicacin. El cromosoma bacteriano
ser una unidad de replicacin se le denomina replicn.

El origen de replicacin en E. coli es una secuencia de 245 pb que

contiene una secuencia de 13 pb repetida tres veces en tndem. Adems
esta regin contiene cuatro zonas de unin a la protena Dna A que se
encarga de separar las hlices para comenzar la replicacin.

Cuando las molculas de ADN circular se replican se observan lo que se

denominan "ojos o burbujas" de replicacin. La forma que adoptan los
intermediarios de la replicacin se parece a de la letra griega .

Burbuja Forma

EUCARIONTES: MUCHOS ORGENES DE REPLICACIN. MLTIPLES

REPLICONES.

La principal diferencia de la replicacin de virus y bacterias con la

replicacin de eucariontes radica en que los eucariontes poseen muchos
orgenes de replicacin, probablemente debido a la enorme cantidad de
ADN que poseen y a que su material hereditario en la inmensa mayora
de los casos esta repartido en varias molculas de ADN distintas o varios
cromosomas. Por tanto, los eucariontes tienen en cada cromosoma
muchos orgenes de replicacin, y como consecuencia, muchos
replicones (unidades de replicacin).

Muchos orgenes de replicacin

Esquema con mltiples orgenes de replicacin
en D. Melanogaster

DIRECCIN DE SNTESIS 5' - 3', BIDIRECCIONAL

Las ADN polimerasas de E.coli (las enzimas encargadas de sintetizar

ADN) solamente saben sintetizar ADN en la direccin 5' - 3'. Es decir,
solamente son capaces de aadir nucletidos al extremo 3' OH de otro
nucletido trifosfato. Las ADN polimerasas necesitan un extremo 3' OH al
que aadir nucletidos trifosfato para comenzar la sntesis de ADN.

La replicacin del ADN en E. coli es bidireccional, ya que a partir de un

punto de origen progresa en dos direcciones opuestas, existiendo dos
puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin. Cuando se mira
solamente una de las horquillas de replicacin, una de las hlices se
sintetiza de forma continua, la hlice conductora (tambin llamada hlice
lder), mientras que la otra hlice se sintetiza de manera discontinua,
hlice retardada (tambin llamada hlice retrasada), a base de
fragmentos cortos. Si se observan simultneamente las dos horquillas de
replicacin, a un lado del origen la hlice de nueva sntesis se polimeriza
de forma continua, mientras que al otro lado del origen se polimeriza de
forma discontinua.

Para demostrar que la replicacin es bidireccional se pueden realizar

experimentos que se denominan de pulso y caza, en los que la clula es
expuesta durante un breve periodo de tiempo en un medio con timidina
tritiada TH3 (pulso) y despus se pasa a un medio con timidina no
radiactiva (fra) en exceso (caza). Posteriormente se extiende el ADN se
un portaobjetos y despus se realiza una autorradiografa.

Replicacin bidireccional: Experimento de pulso y caza

SEMIDISCONTINUA, FRAGMENTOS DE OKAZAKI

Debido al antiparalelismo de las dos hlices del ADN y a que las ADN
polimerasas solamente saben sintetiza ADN en la direccin 5'P - 3'OH, la
sntesis de una de las hebras se puede realizar de forma continua,
mientras que la otra hlice para poder sintetizarla al mismo tiempo se
necesita polimerizarla a base de ir aadiendo pequeos fragmentos
(fragmentos o piezas de Okazaki). Como una hlice se sintetiza de forma
continua y la otra lo hace de forma discontinua, se dice que la
Replicacin es Semidiscontinua.

INICIACIN MEDIANTE ARN CEBADOR

Como ya hemos dicho anteriormente, las ADN polimerasas solamente

saben sintetizar ADN en la direccin 5' - 3' aadiendo nucletidos al
extremo 3' OH de otro nucletido. Para que puedan iniciar la sntesis de
ADN necesitan un extremo 3' OH al que ir aadiendo nucletidos, y ese
extremo 3' OH lo suministra un ARN de pequeo tamao alrededor de 25
a 30 ribonucletidos que se denomina ARN cebador o "primer".

La sntesis de ADN comienza, por tanto, sintetizando un corto segmento

de ARN denominado cebador, dicho cebador lo sintetiza un enzima
denominado Primasa. La Primasa es una ARN polimerasa que utiliza
como molde ADN. Todos los fragmentos de Okazaki comienzan por un
Cebador. Posteriormente, la Holoenzima de ADN polimerasa III lleva a
cabo la sntesis del fragmento de ADN correspondiente hasta llegar al
siguiente cebador. En ese momento, la ADN polimerasa I sustituye a la
Holoenzima de ADN polimerasa III. La ADN polimerasa I se encarga de
retirar el ARN cebador mediante su actividad exonuetdica 5'P - 3' OH y
al mismo tiempo rellena el hueco sintetizando ADN.

Por ltimo, los dos fragmentos de Okazaki tienen que unirse, es

necesario enlazar el extremo 3'OH de un fragmento con el 5'P del
siguiente fragmento. Dicha labor de sellado y unin de los sucesivos
fragmentos la realiza la Ligasa.

CRCULO RODADOR
Los mecanismos de replicacin en virus y bacterias dependen de la
propia estructura del material hereditario o cromosoma de la especie
procarionte estudiada. Por tanto, el mecanismo de replicacin vara
segn se trata de molculas de ADN circulares doble hlice (E. coli,
papovavirus), ADN cirlar de una hlice (fX174), ADN doble hlice lineal
con redundancia terminal (fago T7) o ADN doble hlice lineal con
extremos cohesivos (fago l). El mecanismo de replicacin puede adoptar
la forma q (E. coli, plasmidios), el modelo del circulo rodador (fX174,
Fago l) o el Lazo de desplazamiento o lazo D (ADN mitocondrial).

En el modelo del crculo rodador una endonucleasa corta una de las

hlices (hlice externa en el esquema) y el extremo 5' se fija a la
membrana. El extremo 3'OH producido por el corte lo utiliza la ADN
polimerasa como cebador para ir aadiendo nucletidos y copiando la
otra hlice (hlice interna en el esquema). Por el otro extremo de la
hlice cortada (el extremo 5') tambin se va sintetizando una nueva
hebra. Lo que se supone que sucede es que la hlice interna girara de
forma continua en el sentido indicado haciendo que cada vez saliera
ms cantidad de la hlice inicialmente cortada por la endonucleasa. La
hlice interna seguira dando vueltas de forma que sera copiada varias
veces al igual que la hlice que emerge por el lado derecho, formndose
una molcula ADN doble hlice muy larga que contienen varias copias
sucesivas del ADN del fago. Estas molculas reciben el nombre de
multmeros o concatmeros. El el caso del fago l, posteriormente una
endonucleasa denominada ter reconoce la secuencia de doce pares de
bases de los extremos cohesivos del fago y produce un corte asimtrico
para liberar copias independientes del ADN doble hlice lineal del fago.
 Esquema Circulo rodador Circulo rodador

REPLICACIN DE LOS TELMEROS

Las molculas ADN doble hlice lineal tienen problemas para replicar sus
extremos, ya que las ADN polimerasas necesitan un extremo 3' OH al
que ir aadiendo nucletidos. Uno de los extremos de cada hlice (el
extremo 5') se puede copiar sin problemas debido a que viene cebado
desde atrs, sin embargo, el extremo contrario (extremo 3') no podra
replicarse ya que no puede ser cebado desde atrs. Como consecuencia
quedara un corto segmento al final sin copiarse y se ira acortando el
ADN por ese extremo en cada ronda de replicacin.

Problemas de replicacin de los extremos

Algunos virus resuelven este problema de una manera sencilla. Por

ejemplo, el fago l cuyo material hereditario es ADN doble hlice lineal con
extremos cohesivos, lo primero que hace cuando infecta a E. coli y va a
replicar su ADN es convertirse en ADN doble hlice circular a travs de
los extremos cohesivos. De este manera, ya han desaparecido los
problemas de replicacin de los extremos lineales.

Otros virus, como los Adenovirus resuelven el problema gracias a la

existencia de una protena que se une al extremo 5' y que contiene un
residuo de serina unido a un nuclotido CTP que suministra el extremo 3'
necesario para que la ADN polimerasa pueda cebarse y copiar el
extremo. La protena que forma un complejo con la ADN polimerasa tiene
80 Kd, sin embargo, la protena que aparece en el interior de las
partculas virales maduras tiene solamente 55 Kd. Por tanto, durante la
maduracin del virus debe ser procesada y pasar de 80 Kd a 55 Kd. El
virus f29 tambin tiene protenas unidas al extremo 5' implicadas en la
replicacin y algunos virus ARN como el virus de la polio poseen
protenas de bajo peso molecular (Vpg) con solo 22 aminocidos estn
unidas al extremo 5' .
 Replicacin de los extremos en Adenovirus

La replicacin de los extremos de los cromosomas eucariticos tambin

supone un problema, ya que los cromatidios son molculas de ADN
doble hlice lineal y se iran acortando en las sucesivas replicaciones. La
manera de solventar este problema consiste en disponer de secuencias
repetidas en los extremos, los telmeros eucariticos contienen una
secuencia corta rica en Guanina repetida cientos de veces ( por ejemplo
la secuencia 5' TTGGGG 3' en el ciliado Tetrahymena). Adems, los
telmeros poseen extremos 3' monocatenarios que pueden autoaprearse
y suministrar un extremo 3' para replicar los extremos cromosmicos.
Un enzima denominado Telomerasa aade estas secuencias a los
extremos cromosmicos. La Telomerasa lleva una corta secuencia de
ARN (por ejemplo AACCCC) que sirve de molde para sintetiza la
secuencia repetida de los extremos (TTGGGG). La telomerasa, es una
transcriptasa inversa, ya que tomando como molde ARN sintetiza ADN.
La adicin de estas secuencias cortas que lleva a cabo la Telomerasa
contrarresta la tendencia al acortamiento de los telmeros durante la
replicacin normal.

La telomerasa tiene un pequeo fragmento de ARN

LAS ADN POLIMERASAS DE E. Coli.

En la bacteria E. coli Arthur Kornberg encontr tres ADN polimerasas

diferentes, la ADN Pol I, ADN Pol II y ADN Pol III. Por sus estudios sobre
la replicacin del ADN y las polimerasas le concedieron el Premio Nobel
en 1959.

Las principales etapas de la sntesis de ADN son:

Sntesis de los desoxirribonucletidos monofosfato (dNMPs):

dAMP, dTMP, dGMP y dCMP.

Fosforilacin mediante Quinasas de los dNMP, para convertirlos en

desorribonucletidostrifosfato dNTPs: dATP, dTTP, dGTP y dCTP.

Polimerizacin o sntesis del ADN: seleccin de los dNTPs

complementarios a las de la cadena molde y formacin del enlace
fosfodister entre el extremo 3' del nucletido (dNTP)
anteriormente incorporado y el extremo 5'P del siguiente dNTP.

Las ADN Polimerasas de E. coli solamente saben sintetizar (polimerizar)

ADN en la direccin 5'P - 3'OH.

Las principales caractersticas de las ADN Polimerasas de E.coli, se

pueden resumir en la siguiente tabla:

ADN Pol I ADN Pol II ADN Pol III

Estructura
900.000
PM (dalton) 109.000 90.000
Multmero
Constitucin Monmero Monmero
asimtrico
N Polimerasas/clula 400 Desconocido
10-20

Actividad/Funcin

Polimeras 5'-3'
/Elongacin
SI SI SI
Exonucleasa 3'-
SI SI SI
5'/Correctora
SI NO NO
Exonucleasa 5'-
3'/Reparacin
La ADN Pol III y la ADN Pol I son las enzimas que intervienen
directamente en la replicacin del ADN de E. coli. La ADN Pol I tiene un
papel reparador, retira los cebadores con su actividad exonucleasa 5'- 3'
y rellena el hueco con su actividad polimerrasa 5'- 3'.

A la ADN Pol II se la asigna exclusivamente una funcin reparadora, pero

la muchas de sus caractersticas y el papel que juega en la replicacin
del ADN, si es que juega alguno, son desconocidas.

La ADN Pol III es la enzima que realiza la mayora de la replicacin del

ADN, el corazn cataltico del enzima lo constituyen las subunidades a
(encargada de la polimerizacin), e (realiza la funcin correctora de
pruebas) y q (ensamblaje de las subunidades?). Realmente, el complejo
enzimtico que lleva a cabo la replicacin es un multmero
denominado Holoenzima de ADN Pol III que posee muchas cadenas o
subunidades polipeptdicas. Este multmero es realmente un dmero
asimtrico, una mitad del dmero se encarga de sintetizar la hlice
retardada y la otra mitad sintetiza la hlice conductora. La subunidad t
interviene en la unin del dmero, el complejo g-d produce la unin al
ADN molde y la subunidad b sujeta el enzima al ADN.
 Esquema de la formacin y composicin del Holoenzima de ADN
Pol III

El proceso de sntesis de ADN tiene que producir dos molculas

exactamente iguales, ya que cualquier error que se cometa durante la
replicacin, si no se repara, se convertir en una mutacin. Por tanto, Las
ADN polimerasas deben ser bastante fieles copiando el ADN. Para ello
poseen una funcin correctora de pruebas que retira el ltimo nucletido
que la polimerasa haya introducido de forma incorrecta, dicha funcin, se
denomina funcin exonucleasa 3' - 5' y la lleva a cabo la subunidad e de
la ADN Pol III.

En el siguiente esquema se indica como la subunidad e de la ADN Pol III

retira la Adenina introducida de forma incorrecta mediante la funcin
exonucleasa 3' - 5'.

LAS ADN POLIMERASAS EUCARITICAS

Las ADN polimerasas eucariticas tienen una diferencia interesante con
las ADN polimerasas de E. coli, ya que se utilizan dos polimerasas
diferentes una para sintetizar la hlice conductora y otra para producir la
hlice retardada. La ADN polimerasa sintetiza la hlice retardada
mientras que la ADN polimerasa sintetiza la hlice conductora. En la
siguiente tabla se resumen las polimerasas de mamferos:

ENZIMA FUNCIN
Sntesis Hlice retardada. Sntesis del cebador: 10 bases de
ADN Pol ADN y 25 de ARN.

ADN Pol Sntesis de la Hlice conductora.

ADN Pol Polimerizacin de las Piezas de Okazaki.

Unin de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250
ADN Pol pb).

ADN Pol Sntesis ADN mitocondrial.

REPLICACIN DEL ADN MITOCONDRIAL: LAZOS D

La replicacin del ADN mitocondrial en mamferos se ajusta al modelo del

Lazo de Desplazamiento o lazo D. Las dos hlices del ADN mitocondrial
se pueden diferenciar en base a su densidad, existiendo una hlice
Ligera (L) y otra hlice pesad (H). En primer lugar, se inicia la replicacin
o sntesis de la nueva Hlice Ligera (L), sin que se comience la
replicacin de la nueva hlice pesada. El origen de replicacin de la
hlice ligera (L) es diferente al de la hlice pesada (H), de forma que
existen dos orgenes de replicacin diferentes para cada una. Adems,
una vez iniciada la replicacin de la nueva hlice ligera (L), la sntesis es
unidireccional, tienen lugar en una sola direccin y avanza desplazando a
la otra hebra. Cuando se ha sintetizado, aproximadamente, 2/3 de la
nueva hlice ligera, comienza la sntesis de la nueva hlice pesada (H),
en una sola direccin opuesta a la de sntesis de la hlice ligera L. Por
consiguiente, la sntesis de la nueva hlice L termina antes que la de la
nueva hlice H. Como se puede ver, la replicacin del ADN mitocondrial
es diferente a la del cromosoma de E. coli, existen dos orgenes de
replicacin diferentes para cada hlice y la replicacin es unidireccional.
Replicacin ADN mitocondrial ADN mitocondrial
 OTRAS ENZIMAS QUE INTERVIENEN EN LA REPLICACIN: LIGASAS,
GIRASAS, TOPOISOMERASAS, ETC.

Adems de las ADN polimerasas I y III, de la ARN-Polimerasa o Primasa

que sintetiza el cebador y de las Ligasas que unen las piezas de
Okazaki, en la replicacin del ADN intervienen otras enzimas. Algunas de
estas enzimas son las siguientes:

Helicasas: son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que

mantienen unidas las dos cadenas de la doble hlice. Entre las
helicasas de E. coli se encuentran las protenas Dna B y Rep. La
protena Rep parece ayudar a desenrollar la doble hlice por
delante de la polimerasa.

La protena SSB: se une al ADN de hlice sencilla y lo estabiliza

retrasando la regeneracin de la doble hlice.

La accin de las Helicasas durante la replicacin genera retorcimientos

que deben ser eliminados. El ADN circular puede sufrir enrollamientos y
retorcimientos, dichos superenrollamientos se generan y eliminan por
enzimas denominadas Topoisomerasas.

Topoisomerasas: pueden producir o eliminar nudos o enlaces en

una hlice. existen toposiomerasas de la clase I que cortan
solamente una de las dos hlices y topoisomerasas de la clase II
que cortan ambas cadenas. En E. coli, las enzimas Topi I i Topo III
pertenecen a la clase I, mientras que la la Girasa es de la clase II.
Cuando se separan las dos hlices durante el avance de la
horquilla de replicacin se producen superenrollamientos positivos
en otras regiones que relajan la tensin. La Girasase necesita para
eliminar los superenrollamientos positivos que se generan por
delante de la horquilla de replicacin.
Retorcimientos y enrollamientos del ADN circular
Superenrrolamiento en ADN doble hlice circular.