7MA.

SEMANA

IDENTIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS

Se entiende por identificacin de los microorganismos al conjunto de tcnicas y

procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un microorganismo

En investigacin bsica donde se asla un determinado microorganismo que debe

identificarse para comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno
nuevo para poder clasificarlo.

DEFINICIN

Es importante conocer los mtodos en los cuales se basa la identificacin de los

microorganismos. No todos los microorganismos se identifican por las mismas
tcnicas.

Mtodos basados en tincin diferencial

Es posible sacar conclusiones en relacin con la morfologa de una bacteria,

examinando una lmina que fue sometida a un proceso de tincin diferencial.

Mtodos basados en criterios morfolgicos

Los rasgos morfolgicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas por

muchos aos a clasificar organismos.

Mtodos basados en pruebas bioqumicas

Modernamente adquiere ms importancia el uso de mtodos basados en biologa

molecular donde, a travs de procedimientos y reactivos, se pueden detectar
deter- minadas secuencias de ADN que son propias de un determinado agente
microbiano.

Mtodos basados en tipificacin con fagos

En la mayora de los casos la identificacin no se realiza con base a un solo

mtodo, sino a la combinacin de ms de uno. Ejemplo: identificacin de bacterias
con base a criterios mor- folgicos, tincin diferencial, pruebas bioqumicas y
serolgicas.
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS DE IDENTIFICACIN DE LOS
MICROORGANISMOS

METODOS DE IDENTIFICACION DE LOS MICROORGANISMOS

Las pruebas bioqumicas han sido ampliamente utilizadas para diferenciar

bacterias. Estas prue- bas se fundamentan en demostrar si el microor- ganismo es
capaz de fermentar azcares, la presencia de enzimas, la degradacin de com-
puestos, la produccin de compuestos colorea- dos, etc.

Mtodos basados en ensayos serolgicos

Mtodos basados en biologa molecular

Los mtodos serolgicos, implican la utilizacin de preparaciones de

inmunoglobulinas especficas provenientes del suero o de un reactivo, y que
pueden ser de gran utilidad en la identificacin microbiana en muestras puras o en
muestras biolgicas

La interaccin entre un virus bacteriano (fago) y su clula bacteriana sensible es

sumamente especfica, ya que el proceso de adsorcin se encuentra mediado por
receptores especficos tanto en el virus como en la clula bacteriana.

MICROSCOPIO

El Microscopio es una herramienta ptica muy relevante ya que desde su creacin

fue posible poder apreciar elementos y organismos ciertamente diminutos que
antes de su aparicin no podan visualizarse conforme. Por eso es que su llegada,
sin lugar a dudas, marc un salto en este sentido y una de las grandes
beneficiadas fue la investigacin cientfica que encontr en l un gran aliado y
soporte a la hora de avanzar en ciertas investigaciones que justamente implicaban
el conocimiento de elementos y organismos muy pequeos.

Entonces el microscopio es aquel instrumento ptico que est compuesto por unos
lentes que son los encargados de ampliar las imgenes que se enfocan y que son
muy pequeas para ser vistas por el ojo humano. Est diseado especialmente
para poder apreciar elementos muy, muy pequeos y que obviamente resultan
prcticamente imperceptibles para la visin humana.

TIPOS DE MICROSCOPIO

Hay varios tipos de microscopios disponibles en el mercado. Seleccionar un tipo

adecuado no es una tarea simple, ya que tienes la necesidad de determinar para
qu fin ser utilizado exactamente. Abajo podrs ver los tipos de microscopios
modernos para toda tarea cientfica o de hobby.

Microscopio compuesto

Un microscopio compuesto es un aparato ptico hecho para agrandar objetos,

consiste en un nmero de lentes formando la imagen por lentes o una
combinacin de lentes posicionados cerca del objeto, proyectndolo hacia los
lentes oculares u el ocular. El microscopio compuesto es el tipo de microscopio
ms utilizado.

Un microscopio ptico

Un microscopio ptico, tambin llamado "microscopio liviano", es un tipo de

microscopio compuesto que utiliza una combinacin de lentes agrandando las
imgenes de pequeos objetos. Los microscopios pticos son antiguos y simples
de utilizar y fabricar.
Un microscopio digital

Un microscopio digital tiene una cmara CCD adjunta y esta conectada a un LCD,
o a una pantalla de computadora. Un microscopio digital usualmente no tiene
ocular para ver los objetos directamente. El tipo triocular de los microscopios
digitales tienen la posibilidad de montar una cmara, que ser un microscopio
USB.

Microscopio fluorescente o "microscopio epi-fluorescente"

Microscopio fluorescente o "microscopio epi-fluorescente" es un tipo especial de

microscopio liviano, que en vez de tener un reflejo liviano y una absorcin utiliza
fluorescencia y fosforescencia para ver las pruebas y sus propiedades.

Un microscopio electrnico

Un microscopio electrnico es uno de los ms avanzados e importantes tipos de

microscopios con la capacidad ms alta de magnificacin. En los microscopios de
electrones los electrones son utilizados para iluminar las partculas ms pequeas.
El microscopio de electrn es una herramienta mucho ms poderosa en
comparacin a los comnmente utilizados microscopios livianos.
Un microscopio estreo

Un microscopio estreo, tambin llamado "microscopio de diseccin", utilice dos

objetivos y dos oculares que permiten ver un espcimen bajo ngulos por los ojos
humanos formando una visin ptica de tercera dimensin.

La cmara de microscopio

La cmara de microscopio es un aparato de video digital instalado en los

microscopios livianos y equipados con USB o un cable AV. Las cmaras de
microscopio digitales son habitualmente buenas con microscopios trioculares.

TIPOS DE MICROORGANISMOS

Microorganismos Patgeno

Estos solo pueden ser observados pode manera microscpica por aparatos
especializados. Este tipo de microorganismo a diado para la salud de los ser
humanos, ya que pueden traer enfermedades. Tienen la peculiaridad de ser no
disueltos en el agua, por lo que se convierten en cogulos y pueden ser virus,
bacterias y parsitos.

Virus

Se denomina como un agente de tipo infeccioso, celular y microscpico acelular,

que solo puede desarrollarse habitando dentro de las clulas de otros organismos.
Los virus son agentes sumamente infecciones y pueden daar todos los
organismo en donde se alojan, puedes ser en plantas, animales, humanos y hasta
arqueas y bacterias. Estos son sumamente pequeo y casi invisible, pueden
verse gracias aun microscopio, pero no imposibles ante el ojo humano su
visibilidad.

Microorganismos del Suelo

Son considerados como el componente mas esencial del suelo, ya que estos son
parte del desarrollo y lo que es la dinmica de al superficie de la tierra. Este tipo
de microorganismos son los que le suministran al suelo directamente nutrientes,
de esta manera se fija el nitrgeno. Estos crean solubilizacion de lo que son los
compuestos inorgnicos para que las plantas puedan tener una fcil mejor
absorcin. Fomenta el desarrollo y aumenta la capacidad de campo, aumentando
el desarrollo radicular en las plantas para mejorar lo que es la asimilacin de los
nutrientes que estn necesitan.

Hongos

Son plantas de organismos que no contienen clorofila, y son provistos por el talo y
son ramificado y filamentosos. Son microorganismo muy adaptables y su
desarrollo puede darse en cualquier superficie y tierra. Aunque son muchos, aun
no se determina el numero de especies que estos contengan, ya que son
altamente variados y de diferentes formas y tamaos. Son altamente til en la
medicina y juegan un papel descomponedor la cual transforma la materia orgnica
en una sustancia simple.
Microorganismos Efectivos

Son aquellos microorganismos que pueden entrar en contacto con la materia

orgnica y aportan sustancias que son altamente beneficiosas como cidos
orgnicos, vitaminas, antioxidantes, minerales, entre otros

Microorganismos Aerobios

Estos tipos de microorganismos se caracterizan por tener la facultad de poder vivir

y desarrollarse en presencia de los que es el oxigeno diatomico. Estos
microorganismos no contienen oxgenos ni los emplean en ninguna de sus
actividades en cuanto metabolicamente se refiere. Microorganismos

Saprofitos

Estos comnmente habitan en el organismo humano, pero algunos se alimentan

de materia orgnica. Estos microorganismo son de tipo heterotrofo vegetal, es
decir que se alimenta de materias que son vegetal. Mayormente estos
microorganismos son porciones de materia muerte, podrida, putrefacta y muchas
veces ligados con materia descompuesta y desechos del cuerpo.

Parsitos

Se denomina parsito aquellos que se alimenta de otra especie, en el caso de

microorganismos, estos se alimentan de otras ndoles. A los parsitos tambin se
les llaman huesped u hospedador, y el organismo hospedador del parsito no sale
invicto, ya que puede causarle mucho dao y en e caso de un animal o un
humano, hasta puede a llegar a ser mortfero.

TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO

Atendiendo a su estado fsico:

lquidos
semislidos
slidos

Atendiendo a su utilidad prctica:

Medios para aislamientos primarios:

Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de
organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales
como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios
para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)

Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden

sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo
a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y
grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina)

Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal

potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K).

Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que

satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su
identificacin (Lowenstein).

Medios para identificacin:

Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades

fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias.
Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi
cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin)

CARACTERISTICAS Y CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero

los ms importantes son aquellos que se basan en:

a) Su consistencia

b) Su utilizacin

c) Su composicin

d) Su origen

SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).

1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose

por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana
de una determinada concentracin.

2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un

agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar Gelatina: Es una
protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su
punto de fusin es bajo, El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los
ms importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar
bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel.

3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a

stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios
slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias

SEGN SU UTILIZACIN.

1)Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para
que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar
comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo.

2)Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias

nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el
crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por
adicin de sangre u otros productos biolgicos que aportan dichos factores.

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de

ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de
estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin
microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de
enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo
impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina
inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms
restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen
habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que
inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio
inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram
negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos.

5)Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas

bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar
fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin.

6)Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad

especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo.
Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el
crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser
metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado.

7)Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a

partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtencin de vacunas,
en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la
multiplicacin suelen ser lquidos.

8)Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por

diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como
controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de
Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:

a) haciendo pases peridicos de placa a placa,

b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y

c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no
pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse introduciendo la
torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio

ATENDIENDO A SU COMPOSICIN.

Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los

medios de cultivo pueden ser clasificados en:

1)Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se

preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su
composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente
constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones
experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta.

2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin

exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente
definida.

3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos

para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos
grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores
de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo .).Ciertos grmenes
no crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo
exclusivamente en clulas vivas con unas caractersticas determinadas

Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.

b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de

crecimiento bajo una forma
de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
CRECIMIENTO MICROBIOLGICO

1.1. CICLO CELULAR

Las clulas aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo apropiado

van utilizando los nutrientes que tienen disponibles, sintetizando sus propios comp

onentes celulares y dividindose en cuanto duplican su masa y su material

gentico. El tiempo que tarda una clula en cumplir ese proceso se denomina
tiempo de generacin () y puede variar desde unos 20 minutos en condiciones
ptimas hasta varios meses en condiciones ambientales. Cada vez que transcu

rre un tiempo de generacin, el nmero de clulas se duplica, siguiendo, por tanto,

un incremento exponencial.

2. CINTICA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO DISCONTINUO.

PARMETROS.

En este apartado vamos a revisar el estudio de la cintica del crecimiento

de microorganismos que crecen aislados que no forman ningn tipo de estructura.
Esta es la forma de crecimiento de las levaduras (hongo unicelular) y bacterias.

Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos microbianos para

predecir cmo va a evolucionar un cultivo, cmo va a ir consumindose el
substrato y cmo se van a ir acumulando los productos del cultivo. Conociendo
estos factores es posible iniciar el cultivo a mayores escalas.

2.1 TRATAMIENTO DEL CRECIMIENTO COMO PROGRESIN GEOMTRICA

Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero de

individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de
generacin(). De esta forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N) al
cabo de un nmero de generaciones (n) usando la ecuacin siguiente:

N = N0 2g (ecuacin 1)
siendo N0 el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de generaciones
se puede calcular de la siguiente forma:

g = t / (ecuacin 2)

donde t es el tiempo transcurrido.

Por consiguiente, combinando las ecuaciones 1 y 2:

N = N0 2t/ (ecuacin 3)

Las ecuaciones exponenciales son muy difciles de manejar grficamente, por ello
es mejor transformarlas en otras ms simples. Para transformar una ecuacin
exponencial en una recta, tomamos logaritmos en los dos trminos y resulta:

lnN = lnN0 + (t/) ln2 (ecuacin 4)

logN = log N0 + (t/) log2

El logaritmo del nmero de clulas crece linealmente con el tiempo a razn de una
constante igual a ln2/. Si el tiempo de generacin es muy grande, el crecimiento
tendr poca pendiente (ser lento) y si es pequeo el crecimiento ser rpido. En
un crecimiento equilibrado, todos los parmetros de crecimiento (nmero de
clulas, biomasa de cultivo, acumulacin de metabolitos primarios, protenas,
cidos nucleicos etc.) evolucionan en paralelo. Por tanto, en la ecuacin anterior N
puede representar cualquiera de estos factores.

2.2. TRATAMIENTO DEL CRECIMIENTO EN FUNCIN DE LA TASA DE

CRECIMIENTO
Otra forma de representar la cintica es considerando el incremento en el nmero
de clulas (dN) en un intervalo corto de tiempo (dt). En este caso, la ecuacin que
describe la cintica es la siguiente:

dN/dt = N (ecuacin 5)

esto es: el incremento del nmero de clulas (dN) por unidad de tiempo (dt) es
proporcional al nmero de clulas presentes en el cultivo (N). A la constante de
proporcionalidad () se le denomina tasa de crecimiento.

Integrando la ecuacin anterior durante el tiempo de cultivo, se transforma en la

siguiente funcin exponencial:

N = N0 et (ecuacin 6)

la transformacin de esta ecuacin en una recta (tomando logaritmos) rinde lo

siguiente:

lnN = lnN0 + t (ecuacin 7)

El incremento del logaritmo del nmero de clulas aumenta linealmente con el

tiempo siendo la constante de proporcionalidad .

Comparando esta ecuacin (7) con la similar presentada ms arriba (4), podemos
concluir que = ln2/ y, por consiguiente, que = ln2/. Es decir, que hay una
correlacin inversa entre el valor de la tasa de crecimiento () y el tiempo de
generacin ().

Estas ecuaciones nos permiten relacionar los parmetros de crecimiento y

predecir cul ser el nmero de clulas, masa celular, etc. despus de un cierto
tiempo de cultivo (t) si conocemos ; o bien, poder calcular la tasa de
crecimiento a partir de medidas experimentales del incremento en el nmero de
clulas, biomasa, etc. como se observa en el siguiente ejemplo:

3. RENDIMIENTO (Ys) DE LOS CULTIVOS.

El grfico siguiente representa la variacin de la biomasa (o nmero de clulas,

etc.) de un cultivo a lo largo del tiempo. En este cultivo, se va consumiendo un
substrato cuya concentracin decrece de forma proporcional al crecimiento de la
biomasa.

A la tasa especfica de consumo de substrato (qs) la podemos considerar la

velocidad con la que el organismo consume el substrato. Evidentemente, cuanto
mayor sea la tasa de consumo mayor ser la tasa de crecimiento ().

qs = Ys/ (ecuacin 8)

Asimismo, cuanto mayor sea el rendimiento del substrato consumido, tambin

mayor ser la tasa de crecimiento. Sin embargo, hay una cierta compensacin
entre la tasa de consumo del substrato y el rendimiento de forma que los
microorganismos que tienen altas tasas de consumo de substrato tienen
rendimiento ms bajos (o cuando se dan las condiciones para una alta tasa, el
rendimiento disminuye). A esta relacin inversa se le conoce con el nombre
de efecto Pasteur.

Por ltimo, nos falta relacionar la velocidad de crecimiento () con la concentracin

de substrato (S). En condiciones de substrato abundante, la concentracin de
este no afecta al valor de ; pero cuando el substrato se hace limitante, s existe
ese efecto. La expresin matemtica que relaciona ambos parmetros se conoce
con el nombre de ecuacin de Monod y es la siguiente:

= max [S/(Ks+S)] (ecuacin 9)

En esta ecuacin la tasa de crecimiento () depende de la mxima que puede

alcanzar el microorganismo (max), de la concentracin de substrato (S) y de un
valor constante, Ks, que representa la concentracin de substrato a la que se
alcanza una tasa de crecimiento igual a la mitad de la mxima. La ecuacin de
Monod tendr mucha importancia al tratar de cultivos continuos. Para que se
cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser independiente de la concentracin
de substrato. En la prctica, los valores de Ks suelen ser muy bajos, lo que indica
que los microorganismos crecen con tasas () muy prximas a las mximas
(max) a concentraciones de substrato bajas y slo cuando estas son
extremadamente bajas, la velocidad de crecimiento se reduce. Esto es debido a
que los sistemas de transporte de nutrientes suelen tener valores de Km
considerablemente reducidos (La Km indica la concentracin de substrato a la que
la velocidad de transporte es la mitad de la mxima).

4. CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO LQUIDO

Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos las clulas

que se producen en cada divisin forman una suspensin de clulas libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar
cuatro fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento
microbiano (Fig. 2):

1.- Fase lag o de adaptacin durante la que los microorganismos adaptan su

metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y
condiciones de cultivo). En esta fase no hay incremento en el nmero de clulas,
pero hay gran actividad metablica, aumento en el tamao individual de las
clulas, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las clulas.

2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima

y el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a
velocidad mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas
durante esta fase se explica con los modelos matemticos descritos
anteriormente.

Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio

de cultivo bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa fase de
latencia y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa

u otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un
metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener
importancia industrial.

Fig. 2. Fases del crecimiento microbiano

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algn nutriente

esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la
fase exponencial hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento
microbiano. La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente
represente con mayor fidelidad el estado metablico real de los microorganismos
en los ambientes naturales.
4.- Fase de muerte: Si la incubacin contina despus de que una poblacin
microbiana alcanza la fase estacionaria, las clulas pueden seguir vivas y
continuar metabolizando, pero va a comenzar una disminucin progresiva en el
nmero de clulas viables y cuando esto ocurre se dice que la poblacin ha
entrado en fase de muerte.

5. CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO SLIDO

Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los

cultivos lquidos se presentan tambin en cultivos slidos. La cintica de
crecimiento, en este caso, se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de
clulas viables por unidad de superficie o por unidad de masa.

Cuando una clula aislada e inmvil comienza a crecer sobre un substrato slido,
el resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente,
se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula bacteriana viva y
aislada que si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas
da lugar a la produccin de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el nmero
inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las
colonias da lugar a lo que se llama un csped cuando se realizan los cultivos en
placas de laboratorio.

En el caso de microorganismos mviles (deslizantes) o en el de los hongos

filamentosos que tienen un crecimiento trfico no se producen colonias aisladas
sino formaciones ms difusas o miceliares.

6. CONCEPTO DE MUERTE DE UN MICROORGANISMO

Desde el punto de vista microbiolgico, un microorganismo muere cuando pierde

de orma irreversible la capacidad de dividirse. Como consecuencia de esta
prdida, no se

produce aumento en el nmero de microorganismos y, por tanto, no hay

crecimiento. Sin embargo, un microorganismo puede estar muerto desde el punto
de vista microbiolgico y continuar desarrollando una actividad metablica que se
traduzca, por ejemplo, en liberacin de toxinas. Por otra parte, hay que considerar
que la capacidad de multiplicacin (crecimiento) de un microorganismo puede
verse transitoriamente afectada por lesiones o por las condiciones fsicas o
qumicas del entorno. En estos casos, podramos considerar como muertos
microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si las condiciones son de
nuevo favorables.

7. MEDIDA DEL CRECIMIENTO Y ENUMERACIN DE

MICROORGANISMOS

Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de

microorganismos.

Los mtodos mas utilizados son el recuento de viables en placa y el mtodo

turbidimtrico:

1.- Recuento de viables: Consiste en la dilucin de una muestra (con solucin

salina estril, buffer fosfato, agua peptona) hasta que las bacterias se diluyan lo
suficiente como para contar con precisin. Se siembra un volumen determinado de
cultivo o muestra sobre el medio de cultivo slido adecuado para estimar el
nmero de viables contando el nmero de colonias que se forman puesto que
cada una de estas deriva de una clula aislada. Las placas de final de la serie
debe tienen entre 25 y 250 colonias (o entre 30 y 300 colonias). Menos de 25 las
colonias no son aceptables por razones estadsticas, y ms de 250 colonias en
una placa es probable que produzcan colonias muy cerca unos de otros para ser
distinguidos como distintas unidades formadoras de colonias (UFC).

En ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es demasiado

baja, stos se pueden recolectar por filtracin a travs de una membrana (de 0.2
m de tamao de poro) y posterior colocacin de la membrana en un medio de
cultivo adecuado para que se formen las colonias.
Las relaciones de dilucin, pueden presentarse ya sea con dos puntos (:) o barras
(/). Una barra indica la proporcin de una parte a un conjunto, por ejemplo, 1 / 2
significa 1 de 2 partes, con de un total de 2 partes. Dos puntos indica la proporcin
de 1 parte a 2 partes, con un total de 3 partes. As, 1 / 2 es igual a 1:1, pero 1:2 es
igual a 1 / 3.

2.- Mtodo turbidimtrico: el sistema se basa en que las clulas en suspensin

dispersan la luz causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa
en suspensin y, por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el
parmetro de medida ms fcil de usar en los cultivos de laboratorio. La densidad
de clulas debe ser del orden de 10 5 por ml. Esta metodologa se basa en la ley de
Lambert-Beer.

8VA SEMANA

Pruebas de esterilidad autoclave

La prueba de esterilidad tiene fundamento en la deteccin de formas viables de

microorganismos, en medios de cultivo adecuados para el crecimiento de
bacterias, hongos y levaduras que se encuentran como contaminantes en
productos estriles.

Recomendaciones especiales para la prueba de esterilidad

Para evitar una contaminacin accidental la prueba debe llevarse a cabo en
condiciones aspticas por lo que peridicamente se realizar el control ambiental
de las reas de trabajo, as como del equipo y material empleados. Los envases
de las muestras deben desinfectarse previamente a su anlisis. A los productos
envasados al vacio, se les debe introducir aire filtrado a travs de algodn estril.
Si el producto tiene diluyente o algn aplicador anexo, tambin debe cumplir la
prueba de esterilidad. Se debe llevar a cabo una prueba en blanco como testigo,
paralela a los anlisis de las muestras.

Pruebas de esterilidad en medios de cultivo y soluciones

Preparar los medios de cultivo a partir de medios deshidratados comerciales o
preparados en base a sus formulaciones. Ajustar el pH con soluciones 1N de
hidrxido de sodio o 1N de cido clorhdrico para que, despus de esterilizar en
autoclave, se obtenga el valor indicado en cada caso. Esterilizar a 121C durante
15 minutos.
Medio A. Medio fluido de cioglicolato
Mezclar los ingredientes hasta que estn completamente disueltos en agua,
calentar si es necesario. Ajustar el pH, calentar nuevamente sin hervir y filtrar a
travs de papel filtro humedecido. Aadir la solucin de resarsurina de sodio y
envasar en tubos adecuados. Esterilizar. El medio presenta coloracin rosa
superficial por la oxidacin del mismo, la cual no debe rebasar la tercera parte del
volumen total. Si la coloracin es mayor, se puede calentar una vez en bao de
agua hasta que la coloracin desaparezca. Usarse cuando la coloracin se
reestablezca a la dcima parte del volumen total del medio.
Medio B. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80
Preparar el medio como lo realiza para el medio A, adicionar por cada litro de
medio 50 mL de polisorbato 80. Esterilizar.
Medio C. Medio Fluido de tioglicolato con penicilanasa
Preparar el medio como se indica en el medio A. A cada tubo de medio estril
adicionar suficiente penicilinasa estril para inactivar la penicilina presente en la
muestra.
Medio D. Medio fluido de tioglicolato con polisorbato 80 adicionado de
penicilinasa
Preparar el medio como indica medio B. A cada tubo con medio estril, adicionar
suficiente penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio E. Caldo soya tripticasena
Disolver los ingredientes en 500 mL de agua, calentando suavemente hasta que la
disolucin sea completa y llevar al aforo a 1000 mL. Ajustar el pH, filtrar y envasar
en tubos adecuados. Esterilizar.
Medio F. Caldo soya tripticasena con polisorbato 80
Preparar el medio como se indica en el medio E. Adicionar 5 ml de polisorbato 80
por cada litro de medio.
Medio G. Caldo soya tripticasena con penicilinasa
Preparar el medio como se indica en Medio E. Adicionar la cantidad suficiente de
penicilinasa para inactivar la penicilina presente en la muestra.
Medio H. Caldo soya tripticasena con polisorbato 80 adicionado de
penicilinasa
Preparar el medio como se indica en medio F. A cada tubo con medio estril
adicionar suficiente penicilinasa estril para inactivar la penicilina presente en la
muestra.
Solucin I. Solucin al 1% de peptona
Disolver un gramo de digerido pptico de tejido animal en 1000 mL de agua
destilada, filtrar y ajustar el pH a 7.10.2, Distribuir en envases conteniendo 100
mL cada uno y esterilizar.
Solucin II. Solucin al 1% de peptona con polisorbato 80
Preparar la solucin como se indica en I. Agregar 1 mL de polisorbato 80 por cada
litro de solucin. Envasar y esterilizar.
Solucin III. Solucin al 0.85% de cloruro de sodio
Disolver 8.5g de cloruro de sodio en agua destilada y llevar al aforo a 1000 mL,
distribuir en envases conteniendo 100 mL cada uno y esterilizar.
Solucin IV. Solucin de peptona y extracto de carne con polisorbato 80
Disolver los ingredientes en agua destilada, llevar al aforo a 1000 mL, ajustar el
pH, envasar y esterilizar.
Solucin V. Solucin de penicilinasa
Preparar la solucin de penicilinasa y valorarla en unidades Levy. Esterilizar la
solucin de penicilinasa por filtracin a travs de membrana.
Solucin VI. Meristato de isopropilo
Utilizar meristato de isopropilo esterilizado por filtracin a travs de membrana con
pH del extracto acuoso de 5.5 o mayor. Determinar el pH del extracto acuoso y
envasar en frascos estriles.
Como se puede observar, es crtico que los medios estn estriles, lo que se hace
mediante esterilizacin por calor hmedo en la mayora de los casos, razn por la
cual la autoclave debe estar funcionando correctamente, en ICLAB contamos con
personal calificado y apto para realizar pruebas de calibracin, ajuste y validacin
de esterilizacin por ste mtodo.

NOCIONES DE PREPARACIN DE MEDIOS DE PRODUCCIN

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien
en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Existen medios cuya composicin permite el crecimiento de:

1. un gran nmero de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de

Sabouraud),

2. determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los

denominados medios selectivos.

3. Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas

fisiolgicas o test bioqumicos (utilizacin de citratos, acidificacin a partir de
azcares, etc.).

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgnicos

(hidratos de carbono, aminocidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgnicos (P, Fe,
N, Mg, S, etc)

2. Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidificante (agar-

agar), tampones, indicador de pH, etc.

Durante las prcticas se van a manejar medios de cultivo de composicin muy

variada y de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios slidos,
semislidos y lquidos. Este ltimo aspecto es importante a la hora de la
preparacin de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintticos se pueden
preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir
comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que aadir
la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composicin, la caducidad, y
la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe
esterilizarse

9NA. SEMANA

MICROBIOLOGA DEL AMBIENTE

La Microbiologa Ambiental tiene como objetivo el estudio de la

ecologamicrobiana, es decir las relaciones entre los microorganismos y el
medioambiente (aire, suelo y agua), tanto en su aspecto de contaminantes como
ensu utilizacin para la descontaminacin medioambiental. La microbiologa
ambiental es el estudio de los microorganismos que existen en ambientes
naturales o artificiales. El origen de los trabajos cientficos eneste campo se basa
en las observaciones de Anthony van Lewenhoeck (1677).Los microorganismos
existen como clulas aisladas o como agrupaciones celulares. Las clulas
microbianas aisladas son capaces de llevar a cabo sus unciones vitales de
crecimiento, generacin de energa y reproduccin independiente de otras clulas.
Adems pueden alcanzar una elevada densidad poblacional en cultivos y son ms
fciles de manipular para estudios genticos, el descubrimiento de que el ADN
constituye el material gentico surgi de un estudio de transferencia gentica en
bacterias .Como ciencia biolgica bsica suministra herramientas ms verstiles
para determinar la naturaleza de los procesos caractersticos de la vida, Se ocupa
de muchos problemas prcticos que son importantes en medicina, agricultura y la
industria. Enfermedades importantes en humanos plantas y animales son
causadas por microorganismos, desempean funciones importantes en la fertilidad
de los suelos y en la produccin animal, procesos industriales a gran escala se
basan en microorganismos, este ltimo condujo al desarrollo de la
Biotecnologa .El papel de los microorganismos en el ambiente es doble:

(1) suministran los compuestos inorgnicos con una valencia adecuada para que
las plantas superiores puedan utilizarlos (ciclos del nitrgeno y del azufre) y

(2) contribuyen a la continua descomposicin y mineralizacin de la

materiaorgnica en putrefaccin.

MICROBIOLOGIA DEL AGUA

La microbiologa acutica es el estudio de los microorganismos y sus actividades

en estuarios, mares, manantiales, lagos y ros. Se ocupa de los virus, bacterias,
algas, protozoos y hongos microscpicos que habitan las aguas naturales.

Algunos de estos son habitantes naturales de las aguas otros son transitorios que
penetran es ese medio llevados por el aire o tierra o como resultado de procesos
industriales y domsticos

MICROBIOLOGIA DEL AIRE

La atmsfera no tiene una microbiota autctona pero es un medio para la
dispersin de muchos tipos de microorganismos (esporas, bacterias, virus y
hongos), procedentes de otros ambientes. Algunos han creado adaptaciones
especializadas que favorecen su supervivencia y permanencia. Los
microorganismos dispersados por el aire tiene una gran importancia biolgica y
econmica. Producen enfermedades en plantas, animales y humanos, causan
alteracin de alimentos y materiales orgnicos y contribuyen al deterioro y
corrosin de monumentos y metales. La Microbiologa del aire comienza en el
siglo XIX, con Pasteur y Miquel que disearon mtodos para estudiar... (Ver ms)
los microorganismos en el aire y descubrir la causa de algunas enfermedades.
Desde entonces numerosos investigadores han trabajado en este campo tanto en
el aire exterior como en recintos cerrados. Las enfermedades transmitidas por el
aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las respiratorias (neumona,
tosferina, tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe), sistmicas (meningitis,
sarampin, varicela, micosis) y alrgicas.

10MA. SEMANA

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS (FRUTAS Y VEGETALES)

Es el estudio de los microorganismos, un variado grupo de organismos diminutos

que se encuentran como clulas individuales o como conglomerados de las
mismas; una clula microbiana es capaz de realizar los procesos de crecimiento,
generacin de energa y reproduccin, en forma independiente de otras clulas,
capacidad que no poseen las clulas animales y vegetales. En este grupo
encontramos bacterias, hongos (levaduras y mohos), protozoos y algas
microscpicas adems de los virus que no son organismos considerados
celulares. La microbiologa trata entonces de estudiar estas clulas y su relacin
con el hombre, los animales y el medio ambiente, indagando sobre su estructura,
funcionamiento, diversidad y evolucin. Gracias a la invencin del microscopio se
pudieron hacer considerables diferenciaciones entre los microorganismos hasta
llegar a constituir los cinco reinos que hoy se conocen: animal, vegetal, hongos,
protista y monera.
IDENTIFICACIN DE LOS MICROORGANISMOS EN LOS ALIMENTOS

Los microorganismos son identificados mediante pruebas especiales que se

realizan en un laboratorio, estos anlisis son parte fundamental en la
monitorizacin del sistema de aseguramiento de una empresa, permitiendo
establecer criterios para mejorar los procesos operativos que se desarrollan en
una empresa y de esta manera prevenir y evitar las enfermedades transmitidas
por los alimentos.

11VA. SEMANA

MICROBIOLOGIA DEL SUELO

Microbiologa del Suelo. Rama de la microbiologa que ha surgido producto del

creciente reconocimiento de los numerosos procesos llevados a cabo por
las bacterias, hongos y otros microbios en el suelo. Tiene como objetivo estudiar la
poblacin microscpica del suelo y su participacin en las transformaciones que
ocurren en el suelo, adems, estudia la importancia que posee esa poblacin para
la nutricin de las plantas y el rendimiento de las cosechas.

Composicin del Suelo

Un suelo normal, como medio de cultivo, est formado por constituyentes slidos,
lquidos y gaseosos, comprendidos en los grupos siguientes:

Partculas minerales: varan grandemente en tamao e incluyen desde

piedras hasta arena fina, arcilla y limo.

Restos de plantas y animales: comprenden hojas frescas cadas y otras

partes de plantas, as como cuerpos muertos de insectos, y otras formas
animales. Estos pueden estar muy o parcialmente descompuestos. En este
estado se les denomina humus.

Agua: la fase lquida del suelo comprende agua libre microscpica y

contiene en solucin una concentracin variable de sales inorgnicas y
ciertos compuestos orgnicos.
 Gases: la atmsfera del suelo se compone de anhdrido carbnico, oxgeno,
y otros gases, pero en menor proporcin.

Microorganismos: en el suelo vive la poblacin microbiana, conjuntamente

con las races de las plantas superiores, y con las formas animales, que
hacen de l un sistema vivo.

De lo anterior puede comprenderse que el suelo es un medio de cultivo ideal que

contiene todos los nutrientes orgnicos e inorgnicos que requieren la mayora de
los microorganismos.

Grupos de microorganismos

La poblacin de organismos del suelo se ha dividido en tres grupos:

Microorganismos autctonos o nativos: son caractersticos de cada suelo

particular y siempre estn presentes.

Microorganismos zimgenos: se desarrollan bajo la influencia de

tratamientos especficos del suelo como son: adicin de materia orgnica,
fertilizacin y aereacin.

Microorganismos transitorios: son los introducidos en el suelo

intencionalmente, ejemplos: abonos bacterianos, y los que no se introducen
intencionalmente, ejemplos: patgenos que causan enfermedades a las
plantas. Pueden morir rpidamente o sobrevivir en el suelo, en los restos de
plantas.
CULTIVO

CARDAMOMO

El cultivo del cardamomo requiere una cierta preparacin. La limpieza del terreno
consiste en hacer un aclareo de la maleza, asegurndose de mantener la sombra.
De hecho, el cardamomo necesita estar protegido del sol para crecer bien. A
continuacin, prepare los hoyos de plantacin dndoles forma cuadrada con unos
40 cm de lado, con una separacin de 2 metros entre cada uno. Luego de la
plantacin de las plantas jvenes, cubra cada ejemplar con una capa de tierra y
pajote. Tradicionalmente, la plantacin se realiza a partir de rizomas fragmentada
de la semi-enterrados: es la propagacin vegetativa o por divisin de rizoma. La
renovacin de las plantaciones se realiza slo despus de unos veinte aos, ya
que algunas especies siguen siendo productivas incluso despus de sesenta
aos. Para cosechar el cardamomo hay que cortar uno por uno los frutos justo
antes de su plena madurez. Para el mantenimiento del cultivo, alcanza con
desherbar una vez por semana y proceder a un mulching o alcochado de cada
planta cada dos semanas para conservar la humedad. El rendimiento de los
cultivos vara en funcin de varios factores, incluyendo la variedad, la regin y los
cuidados que reciban. As, la produccin puede ir de 200 kg a 1200 kg por
cosecha. En cuanto los problemas fitosanitarios, afortunadamente el cardamomo
no est expuesto a los ataques de enfermedades.

MANGO

Propagacin:
Es importante la seleccin del material vegetativo a utilizar, el mango se propaga
casi exclusivamente por semilla, lo cual puede emplearse para propagar plantas
francas, pero no es lo ms indicado, lo recomendado es utilizarlas como patrones
o porta injertos.

Las plantas propagadas por semilla varan considerablemente en vigor, tolerancia

a las enfermedades y caractersticas de la fruta. Las semillas deben provenir de
frutos maduros colectados en rboles padres que estn libres de plagas y
enfermedades y que tengan un buen desarrollo.

El mtodo usado en Guatemala para propagar el mango es por medio de injerto, el

material utilizado como patrn o porta injerto es el mango criollo conocido como
mango de coche o de racimo.

Tipos de propagacin:

Propagacin Sexual: es una prctica muy conocida en virtud de su bajo costo y a

travs de la cual se obtienen rboles a pi franco, con excepcin de las plantas
provenientes de semillas poli-embrinicas cuyos descendientes son fieles al tipo
de la planta madre, las que provienen de semillas monoembrinicas (ej. Tomy
atkins) presentan gran variabilidad. Este tipo de propagacin solo se justifica
cuando el objetivo perseguido es la multiplicacin de variedades poliembrinicas o
la produccin de patrones para injertacin.

Propagacin Asexual: se emplean varios mtodos asexuales o vegetativos, entre

los cuales destacan: injertacin, estacas o acodos areos y el cultivo de tejidos.
En nuestro medio el ms utilizado es la injertacin.

Mtodos injertacin:

Existen varios mtodos de injertacin: injerto terminal o de pa, veneer o chapa

lateral, injerto de yema, injerto de corona, injerto intermedio o doble injertacin. El
ms utilizado es el de chapa lateral.

Injerto tipo veneer o de chapa lateral

Este mtodo de injerto es utilizado en la propagacin asexual de mango

logrndose pegues de hasta el 98 %.

Dentro de las ventajas principales se menciona la obtencin de plantas ms

robustas y de menor costo, al no ser necesaria la utilizacin de papel bolsas
plsticas para proteger los brotes tiernos de la radiacin solar como en el injerto
de pa Terminal. Una desventaja al comparar estos 2 mtodos de injerto es que el
de chapa lateral requiere de mayor tiempo en vivero para poder ser transportado
al campo definitivo; adems en ambos deben existir suficientes plantas madres
para la obtencin de varetas como material reproductivo.

PAPAYA

PROPAGACIN

Propagacin Vegetativa.

Se realiza mediante esquejes obtenidos de las ramificaciones del arbolito de forma

artificial ya que el papayo no se ramifica hasta cuando tienen tres o cuatros aos.
Los rboles viejos sufrirn la operacin de desmoche o eliminacin de la cabeza o
cogollo del rbol, provocando as la produccin de ramas o cogollos laterales.

Los esquejes sern los brotes de 25-30 cm que se cortan y se cauterizan con
agua caliente a unos 50 C. Estos esquejes se plantan en macetas que se colocan
en lugares protegidos de los rayos solares y con humedad hasta la emisin de
races.

Este mtodo de propagacin es muy laborioso y costoso ya que implica el

mantenimiento de plantaciones de ms de tres aos para la obtencin de plantas
madre.

Propagacin por semilla.

Es la forma ms econmica y fcil de propagar el papayo. Se obtendrn distintos

resultados, segn se empleen semillas procedentes de rboles femeninos
fecundados con papayos masculinos o semillas procedentes de rboles femeninos
y hermafroditas.

El poder germinativo de las semillas del papayo suele ser corto, por lo que se har
una siembra lo ms cerca posible a la poca de recoleccin. Esta siembra puede
ser directa sobre el terreno o previa en semillero. La siembra en semillero se har
empleando macetas de turba y plstico negro de 10 cm de dimetro y 15 cm de
profundidad.
La tierra del semillero deber mantenerse hmeda, cuando las plantitas tengan
unos 10-15 cm (unos dos meses despus de la siembra) de altura se
transplantarn al terreno de cultivo.

PIA

Generalmente, la siembra se inicia con las primeras lluvias de la temporada y se

prolonga hasta el mes de septiembre. Con el uso del riego, la siembra puede
realizarse durante todo el ao, por lo tanto sta se puede programar, trayendo
como beneficio la obtencin de cosechas en forma escalonada y continua, para
suplir el mercado.

Seleccin y Tratamiento de la Semilla

La propagacin o reproduccin de la Pia se realiza por el mtodo asexual,

utilizando los retoos que emergen de las diferentes partes de la planta, conocidos
como coronas, bulbillos y yemas axilares.

Es indispensable que el material de propagacin que se vaya a utilizar en la

siembra provenga de semilleros certificados, utilizando material uniforme, del
mismo tamao o peso, para la obtencin de parcelas con plantas similares. Antes
de la siembra se recomienda desinfectar la semilla haciendo una inmersin en un
insecticida y fungicida, para prevenir el ataque de plagas y enfermedades.

El tratamiento consiste en sumergir la semilla en la "solucin" por un tiempo de

aproximadamente un minuto y luego se deja secar al aire libre por 24 horas o ms
para posteriormente sembrarlas y evitar intoxicaciones en los jornaleros.

CAF

Siembra: Se siembra la semilla, la germinacin ocurre despus de 45-50 das, y

se le llaman fsforos, 15 das despus empiezan a salir las primeras hojas, el
nombre que reciben es chapolas, luego se transplantan en bolsas negras al
almacigo, que consiste en una estructura que protege a los futuros rboles del sol
y la lluvia. Entre 150-180 das, los rboles se transplantan al campo.
1 Floracin: Entre los primeros 540-600 das se da la primera floracin, y 240-
270 das mas tarde se da el primer fruto maduro.

Recoleccin: Debido a la topografa en Colombia, la recoleccin se hace

manualmente, el caf esta plantado principalmente en laderas. Con el propsito de
mejorar la calidad, los recolectores solo recogen los granos maduros.

Beneficio: En Colombia usa el mtodo de lavado, el cual es llamado BENEFICIO.

Despulpar: Los productores usan la despulpadora para quitar la cereza del grano,
el agua es el principal factor usado en esta etapa. Esta mquina clasifica los
granos por peso y tamao.

Fermentacin: Este proceso que usualmente tiene un tiempo entre 18-24 horas,
se realiza dentro de tanques de agua. Con la fermentacin el muclago o capa
viscosa se descompone.

Lavado: Se realiza en los mismos tanques o en canales ubicados en el

BENEFICIO, con el lavado se elimina el muclago.

Secado: Este proceso se hace al sol. En algunas fincas se usa hornos que
trabajan con energa, carbn o madera. La humedad permitida para realizar la
compra es de 12%.

Beneficio Ecolgico: Este mtodo usa menos agua y solo tiene un paso, que es
desde la cereza (grano maduro) hasta el pergamino lavado. La mquina es
conocida como DESMUGILIZADORA y se llama BECOLSUB, que a su vez tiene
una mquina llamada DESLIM. Este proceso reduce el uso del agua en un 72%.

Trilla: En este paso se elimina el pergamino, y dejando el grano verde listo para
ser clasificado por mquinas seleccionadoras que lo hacen por tamao y peso. De
igual manera Igualmente se realiza una seleccin manual, llamado mujeres y en
los ltimos aos se estn usando mquinas electrnicas que clasifica el caf, para
finalmente para obtener el caf verde exportable.