Manual de Garantia Da Qualidade Analítica PDF

ISBN 978-85-7991-055-5
9 788579 91055 5
MANUAL DE GARANTIA DA QUALIDADE ANALTICA

Resduos e Contaminantes em Alimentos
MANUAL DE
GARANTIA
DA QUALIDADE ANALTICA

Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Secretaria de Defesa Agropecuria (SDA)
MANUAL DE
GARANTIA
Misso
Promover o desenvolvimento sustentvel e a
competitividade do agronegcio em benefcio
da sociedade brasileira.
BRASLIA - 2011
2011 Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento.
Todos os direitos reservados. Permitida a reproduo desde que citada a fonte.
A responsabilidade pelos direitos autorais de textos e imagens desta obra do autor.
1a edio - Ano 2011

Tiragem: 1.000
Elaborao, distribuio e informaes:
MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO
Secretaria de Defesa Agropecuria (SDA)
Coordenao-Geral de Apoio Laboratorial (CGAL)
Esplanada dos Ministrios, Bloco D, Anexo B, sala 440
CEP 70043-900 - Braslia - DF
Telefones: (61) 3218-2535
www.agricultura.gov.br
E-mail: cgal@agricultura.gov.br
Central de Relacionamento: 0800 704 1995
COORDENAO EDITORIAL: Dario Abbud Righi (CGAL/Mapa)

Edna Silvana (Lanagro/PE)
Assessoria de Comunicao Social Eleonora Vieira dos Santos (Lanagro/MG)
Eliene Alves dos Santos (Lanagro/MG)
Eugnia Azevedo Vargas (Lanagro/MG)
EQUIPE TCNICA DO PROJETO: Fabiano Aurlio da Silva Oliveira (Lanagro/MG)
Fernando Antunes Lopes (Lanagro/SP)
Coordenao Helena Mller Queiroz (Lanagro/SP)
Angelo de Queiroz Mauricio (CGAL/Mapa) Igor Olivares (Lanagro/SP)
Concepo e Reviso Tcnico-Cientfica Josefa Abucter Lima (Lanagro/MG)
Marcelo Cludio Pereira (CGAL/Mapa) Ktia Letcia Carvalho (Lanagro/MG)
Welington Ferreira de Magalhes (DQ/ICEx/UFMG) Lilian Costa (Lanagro/PA)
Marcelo Cludio Pereira (CGAL/Mapa)
Consultoria Maria Aparecida Brum (Lanagro/RS)
Welington Ferreira de Magalhes (DQ/ICEx/UFMG) Nlio Fleury Filho (Lanagro/GO)
Welington Ferreira de Magalhes (DQ/ICEx/UFMG)
Redao, Desenvolvimento e Colaborao
Angelo de Queiroz Mauricio (CGAL/Mapa) Apoio
Beatriz Rauber (Lanagro/RS) Rede Nacional de Laboratrios Agropecurios
Impresso no Brasil/Printed in Brazil
Catalogao na Fonte
Biblioteca Nacional de Agricultura BINAGRI
Brasil. Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento.

Manual de garantia da qualidade analtica. / Ministrio da Agricultura Pecuria
e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuria. Braslia : MAPA/ACS, 2011.
227 p.
ISBN 978-85-7991-055-5
1. Controle de qualidade. 2. Medicamento. 3. Analise qumica I. Secretaria

de Defesa Agropecuria. II. Ttulo.
AGRIS Q55, L70

CDU 636.084.41
SUMRIO
Apresentao.............................................................................................7
Prefcio......................................................................................................9
Parte I.......................................................................................................13
Introduo e Requisitos Gerais..........................................................13
I.1 Objetivo................................................................................ 13
I.2 Responsabilidades................................................................. 13
I.3 Evitando Contaminao ........................................................ 13
I.4 Padres de Trabalho (Analticos),
de Referncia e MRC............................................................. 14
I.5 Cadeia de Custdia de Padres de Trabalho (Analticos)......... 15
I.6 Preparao, Uso e Armazenamento de Solues Padro........ 15
I.7 Reagentes e suas Solues..................................................... 16
I.8 Recepo, Armazenamento e Preparao
de Amostras.......................................................................... 16
I.9 Desenvolvimento e Otimizao do Procedimento Analtico.... 17
I.10 Validao de Procedimentos Analticos ................................. 19
I.11 Condues do Processo de Validao .................................... 22
Parte II......................................................................................................25
Parmetros e Critrios de Aceitao de Desempenho
de um Procedimento Analtico........................................................ 25
II.1 Nveis de Interesse Analtico................................................... 25
II.2 Critrios de Desempenho Aplicveis Deteco por EM ....... 26
II.3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e Faixa
de Trabalho (FT)..................................................................... 28
II.4 Seletividade e Efeito Matriz.................................................... 33
II.5 Veracidade/Recuperao ....................................................... 37
II.6 Preciso................................................................................. 40
II.7 Limites de Deteco (LD), Limite de Quantificao (LQ),
Limite de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC)..... 42
II.8 Incerteza de Medio Analtica (IMA)..................................... 50
II.9 Estudo de Robustez, Escopo e Portabilidade.......................... 64
II.10 Expresso e Interpretao dos Resultados
de Medies.......................................................................... 67
II.11 Relatrio de Validao........................................................... 71
Parte III.....................................................................................................73
Estudos de Estabilidade.....................................................................73
III.1 Estabilidade do Analito na Matriz
no Processada...................................................................... 73
III.2 Estabilidade do Analito na Matriz Processada ........................ 74
III.3 Estabilidade do Analito no Extrato ou na Soluo
de Abertura de Amostra........................................................ 75
3
III.4 Estabilidade das Solues Padro........................................... 76
III.5 Estabilidade dos Padres de Trabalho e dos Materiais
de Referncia no Certificados ............................................. 76
Parte IV....................................................................................................79
A Rotina Analtica e o Controle de Qualidade Analtica (CQA)......79
Parte V.....................................................................................................81
Ampliao do Escopo do Procedimento Analtico Validado:
Incluso de Nova Matriz ou Novo Analito em Procedimento
Analtico Validado..........................................................................81
V.1 Procedimento de Determinao do Efeito de Matiz
para a Incluso de Nova Matriz ou Novo Analito
Comparando-se Duas Curvas de Calibrao........................... 82
V.2 Estudo de Veracidade e Preciso para a Incluso
de Nova Matriz ou Novo Analito............................................ 84
Parte VI....................................................................................................85
Aspectos Especficos da Validao de Procedimentos
Analticos para as Diferentes Categorias de Analitos..................... 85
VI.1 Resduos de Medicamentos Veterinrios ................................85
VI.2 Resduos de Praguicidas (Agrotxicos) ....................................89
VI.3 Contaminantes Inorgnicos ...................................................97
VI.4 Micotoxinas..........................................................................112
ANEXO I......................................................................................................................127
Clculos da Estimativa dos Parmetros da Regresso pelo
Mtodo dos Mnimos Quadrados Ordinrios (MMQO)................ 127
ANEXO II................................................................................................131
Qualidade do Ajuste e Verificao da Homoscedasticidade
ou Heterocedasticidade da Resposta Instrumental na
Regresso pelo MMQO................................................................ 131
ANEXO III...............................................................................................139
Avaliao dos Pontos Duvidosos, Aberrantes,
Extremos (outliers) e Critrios de Aceitao para a
Linearidade no MMQO................................................................... 139
ANEXO IV...............................................................................................141
Avaliao da Incerteza de Previso da Concentrao do
Analito na Curva de Calibrao Clculo de Incerteza
de Calibrao no MMQO.................................................................141
ANEXO V................................................................................................143
Planilhas de Clculos no Excel validado..........................................143
4
ANEXO VI...............................................................................................145
Clculo da Estimativa dos Parmetros da Regresso
pelo Mtodo dos Mnimos Quadrados Ponderados (MMQP).......145
ANEXO VII..............................................................................................149
Qualidade do Ajuste e Verificao da Heterocedasticidade
da Resposta Instrumental na Regresso pelo MMQP....................149
ANEXO VIII.............................................................................................151
Avaliao dos Pontos Duvidosos, Aberrantes, Extremos (outliers)
e Critrios de Aceitao para a Linearidade no MMQP.................... 151
ANEXO IX...............................................................................................153
Avaliao da Incerteza de Previso da Concentrao do
Analito na Curva de Calibrao, Clculo de Incerteza
de Calibrao no MMQP..................................................................153
ANEXO X................................................................................................155
Glossrio: Definies, Vocbulos, Termos, Siglas e Abreviaes...155
ANEXO XI...............................................................................................177
Matrizes Representativas (Praguicida e Micotoxinas)...................177
ANEXO XII..............................................................................................179
Planejamento Fatorial para o Estudo de Robustez........................179
Planejamentos Fatoriais Completos............................................. 180
Planejamentos Fatoriais Fracionrios........................................... 190
Critrios de Aceitao, Anlise dos Resultados dos
Planejamentos Fatoriais.............................................................. 195
ANEXO XIII.............................................................................................205
Referncias Normativas e Bibliogrficas.........................................205
ANEXO XIV............................................................................................211
Quadros Comparativos: Manual de Garantia da Qualidade
Analtica versus outras Referncias Normativas ............................211
Quadros Comparativos....................................................................212
Abrangncia do Manual de Garantia da Qualidade Analtica
em Relao aos Parmetros de Validao Preconizados
pelas Principais Normas e Referncias Utilizadas.......................... 212
5
6
APRESENTAO
APRESENTAO
Apresentao
Ao longo dos anos nos quais os laboratrios da rede do Minist-

rio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (Mapa) tm conduzido seus
trabalhos analticos, convivemos com diversos cenrios e perspectivas,
enfrentamos vrios desafios, superamos inmeras adversidades e alcana-
mos importantes vitrias.
Contudo, nenhuma vitria foi to significativa quanto a implanta-

o dos conceitos referentes validao de mtodos de ensaio e garantia
da qualidade analtica nos trabalhos do dia a dia da Rede Nacional de
Laboratrios Agropecurios no que diz respeito rea de resduos e con-
taminantes em alimentos.
Durante muito tempo, os procedimentos de validao e da garantia

da qualidade dos resultados ficaram dispersos, cada laboratrio possuin-
do seus prprios procedimentos em face da vasta gama de guias e docu-
mentos internacionais existentes.
Com a publicao deste Manual de Garantia da Qualidade Analti-

ca, o Mapa rene, em um nico documento didtico e elucidativo, a biblio-
grafia mais atual referente ao assunto, produzindo um guia de referncia
de alto nvel que aponta as tendncias e vanguardas em relao ao controle
analtico de perigos qumicos.
Este Manual tem por objetivo esclarecer e disseminar conceitos tec-

nicamente consistentes, bem como instruir os laboratrios, de forma clara
e didtica, sobre como realizar um estudo de validao passo a passo e im-
plantar procedimentos de garantia de qualidade de resultados, de modo
a permitir uma avaliao objetiva de seu prprio desempenho e de seus
mtodos de ensaio.
A implantao efetiva dos requisitos e orientaes constantes deste

Manual no a maneira mais curta de se fazer as coisas, mas , sem dvi-
da, a garantia inequvoca e inquestionvel da confiabilidade, qualidade e
competncia tcnica de qualquer laboratrio que o utilize.
A todos os que se dedicaram, contriburam e se empenharam nos

incontveis esforos de elaborao do Manual de Garantia da Qualida-
de Analtica, agradecemos fortemente. Estejam certos de um trabalho
bem feito.
Angelo de Queiroz Mauricio
7
ANOTAES
8
PREFCIO
PREFCIO
Prefcio
O resultado de uma medio sempre usado para subsidiar alguma

tomada de deciso, seja ela a conformidade de um produto ou servio a
alguma especificao, ao requisito de alguma norma nacional ou interna-
cional ou obedincia a alguma lei. Essa tomada de deciso pode tambm
constituir o atendimento a algum contrato ou critrio interno ou externo
de qualidade.
No entanto, o resultado de qualquer medio est sempre sujeito

a erros, sejam eles sistemticos ou aleatrios, os quais resultam na per-
da de sua acurcia. Nesse sentido, necessrio que os laboratrios de
ensaios que realizam tais medies disponham de orientaes cientficas
e conceitualmente consistentes de como proceder para reduzir os erros
e aumentar a confiabilidade dos resultados das medies, reduzindo-se
gradualmente os riscos da tomada de deciso. Particularmente no caso
das medies analticas, so escassas as publicaes com essas orienta-
es, especialmente em lngua portuguesa. Soma-se a isso o fato de que
so muitas as divergncias conceituais e as desarmonias de vocabulrios
entre as publicaes existentes, sendo que vrias no apresentam consis-
tncia estatstica e metrolgica.
Considerando a necessidade de se dispor de orientaes harmoni-

zadas e cientificamente consistentes dentro do cenrio nacional de con-
trole de resduos e contaminantes em alimentos, assim como a de atender
s crescentes exigncias de qualidade dos resultados analticos de nossos
compradores internacionais de alimentos, o Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento (Mapa), por intermdio da Secretaria de De-
fesa Agropecuria (das) e da Coordenao-Geral de Apoio Laboratorial
(CGAL), resolveu redigir e publicar este Manual de Garantia da Qualida-
de Analtica. Ele foi elaborado em ampla consonncia com as mais recen-
tes verses do Vocabulrio Internacional de Metrologia (VIM) e do Guia
sobre Terminologia em Qumica Analtica do Codex Alimentarius CAC-
-GL72/2009, assim como com os requisitos das normas ABNT ISO/IEC
17025/2005 Requisitos Gerais para a Competncia de Laboratrios de Ca-
librao e Ensaio, ISO 11843-1/1997 Capability of Detection Part 1: Terms
and Definitions, ISO 11843-2/2000 Capability of Detection Part 2: Methodo-
logy in the Linear Calibration Case, e srie ISO 5725 Accuracy (Trueness and
precision) of method measurements and results.
Assim, o presente Manual foi idealizado e concebido visando for-

necer referncias conceituais consistentes e pormenorizadas dos critrios
analticos que devem ser observados pelos laboratrios da Rede Nacional
de Laboratrios Agropecurios que prestam servios ao Plano Nacional de
9
Controle de Resduos e Contaminantes (PNCRC) em Produtos de Origem
Animal e Vegetal. Entretanto, esta obra no se circunscreve somente aos
laboratrios que trabalham com a determinao de resduos e contami-
nantes em alimentos, podendo ser aplicada em diversas reas da atividade
analtica laboratorial.
Elaborado para ser uma ampla fonte de informaes, o Manual de

Garantia da Qualidade Analtica dividido em seis partes e 14 anexos,
perfazendo um total de 20 sees.
A ParteI apresenta os cuidados gerais que devem ser observados

em relao qualidade analtica das instalaes, ao recebimento e guarda
das amostras e reagentes e ao desenvolvimento, otimizao e conduo do
processo de validao dos procedimentos analticos.
A ParteII, juntamente com os anexos nela citados, define e descre-

ve os procedimentos de estimao dos parmetros de validao para a
avaliao do desempenho de um procedimento analtico, estabelecendo
os critrios mnimos de aceitao que devem ser atingidos para que um
determinado procedimento analtico seja considerado validado.
A ParteIII trata da realizao dos estudos de estabilidade, essencial

para que se possa garantir a qualidade do resultado analtico, estimando o
tempo mximo que uma amostra pode aguardar anlise sob determinadas
condies ou por qual perodo de tempo uma soluo reagente pode ser
reutilizada sem comprometer o resultado analtico.
A ParteIV contm informaes sobre a rotina analtica e os controles

de qualidade analticos que devem ser utilizados para monitorar as corri-
das analticas, permitindo que o analista possa prover evidncias seguras
de que o sistema analtico est operando sobre controle estatstico de qua-
lidade, dentro de faixas consideradas adequadas ao propsito de uso.
A Parte V descreve os procedimentos que devem ser observados

para a incluso de novos analitos ou matrizes em procedimento j valida-
dos para outro(s) analito(s) e matriz(es).
A ParteVI abrange as especificidades inerentes a quatro categorias

de analitos: 1) Resduos de Medicamentos Veterinrios; 2) Resduos de
Praguicida (Agrotxico); 3) Contaminantes Inorgnicos; e 4) Micotoxinas.
A proposta disponibilizar informaes minuciosas sobre a determinao
desses analitos de maneira concentrada, em uma nica seo.
Em relao aos anexos, eles foram elaborados com a finalidade de

complementar as informaes apresentadas nas sees anteriores, facili-
tando o entendimento e a utilizao deste Manual. Os anexos I a IX e XII
trazem os detalhes do tratamento estatstico, incluindo planejamentos fa-
toriais, necessrios para extrair de forma confivel as informaes contidas
10
nos resultados das medies, e subsidiam estatisticamente as tomadas de
decises nos nveis de confiana desejados. O Anexo X traz um extenso
glossrio dos termos usados no manual, auxiliando na sua leitura. Demos
preferncia s definies constantes no Vocabulrio Internacional de Me-
trologia (VIM) ou a aquelas do Codex Alimentarius. Os anexos XI, XIII e
XIV apresentam, respectivamente, a bibliografia, uma relao de matrizes
representativas e quadros comparativos deste Manual com outros docu-
mentos e normas nacionais e internacionais, permitindo uma avaliao de
suas correspondncias e respectivas abrangncias.
Por fim, entendemos que este Manual configura-se como uma

ferramenta til a todos que atuam na rea analtica laboratorial, bem
como a estudantes e pesquisadores. No entanto, nenhum documento
completo e perfeito, assim, crticas e sugestes de melhoria sero sem-
pre bem-vindas, para que possamos promover o seu contnuo aprimo-
ramento em edies futuras.
Marcelo Cludio Pereira

Welington Ferreira de Magalhes
11
ANOTAES
12
PARTE 1
PARTE 1
Introduo e Requisitos Gerais
Parte I
Introduo e Requisitos Gerais
I.1 Objetivo
Este Manual foi elaborado com o objetivo de estabelecer parme-
tros e critrios de aceitao aplicveis validao de mtodos analticos
e rotina analtica dos laboratrios pblicos e privados que pertencem
ou desejam pertencer Rede Nacional de Laboratrios Agropecurios,
credenciados ou autorizados a realizar anlises para o Plano Nacional de
Controle de Resduos e Contaminantes.
A validao dos procedimentos analticos, segundo os requerimen-

tos deste Manual, visa garantir a qualidade metrolgica dos resultados ana-
lticos, conferindo-lhes rastreabilidade, comparabilidade e confiabilidade.
I.2 Responsabilidades
Os parmetros e critrios descritos neste documento devem ser
observados por todos os laboratrios pertencentes Rede Nacional de
Laboratrios Agropecurios, credenciados para determinao de resdu-
os e contaminantes em produto de origem animal e vegetal.
O laboratrio que pretenda solicitar credenciamento ou ampliao

de escopo, na rea de resduos e contaminantes, tambm deve atender aos
requerimentos presentes neste Manual.
Alteraes nos procedimentos, parmetros e critrios estabelecidos

podero ser necessrios devido especificidade de determinados procedi-
mentos analticos ou peculiaridade do laboratrio. Nestes casos, modifica-
es podero ser consideradas desde que sejam adequadamente justifica-
das, garantindo sua consistncia cientfica e conceitual com os princpios
deste Manual e o no comprometimento da rastreabilidade, da compara-
bilidade e da confiabilidade dos resultados analticos gerados.
I.3 Evitando Contaminao

O laboratrio e as reas afins (recepo, armazenamento de amos-
tras, armazenamento de reagentes, lavagem de vidrarias e instrumentos,
sala de preparo e extrao, descarte em geral) necessitam ser planejados
tendo em vista diminuir ao mximo a possibilidade de contaminaes.
13
Procedimentos operacionais devem ser escritos de forma a padro-
nizar todas as operaes realizadas, contemplando desde a recepo das
amostras at a emisso dos resultados. Sempre que possvel, o fluxo de
amostras, instrumentos, reagentes e vidrarias deve ser unidirecional.
Reagentes e solues de altas concentraes devem ser manipula-

dos em locais distintos daqueles onde so preparadas as solues de baixa
concentrao. Na impossibilidade deve ser demonstrada, por intermdio
de controles, a ausncia de contaminao cruzada.
Especial ateno deve ser dispensada ao sistema de exausto utiliza-

do, de forma a minimizar os riscos de contaminao.
O controle de insetos e roedores, no laboratrio e em suas pro-

ximidades, somente poder ser efetuado se devidamente autorizado
pelo responsvel do laboratrio e deve ser feito sob seu controle, de
preferncia, sem a utilizao de substncias qumicas volteis ou alta-
mente impregnantes.
Artigos de borracha, plsticos e lubrificantes so fontes frequentes

de interferncia e devem ser usados com cautela. Quando necessrio, o
selamento de recipientes deve ser feito com PTFE Politetrafluoroetileno
(teflon) ou silicone.
I.4 Padres de Trabalho (Analticos),

de Referncia e MRC
Na validao devem ser utilizados materiais/padres de referncia
certificados e homologados pela Farmacopeia Brasileira ou outras insti-
tuies competentes, nacionalmente ou internacionalmente reconhecidas.
A utilizao de material/padro de trabalho permitida, desde que

o material/padro de trabalho seja devidamente rastrevel a um material/
padro de referncia, que por sua vez tenha sido calibrado com um Mate-
rial de Referncia Certificado (MRC).
Os MRC, materiais/padres de referncia, padres de trabalho

(analticos) e demais padres devem ser armazenados em local seco, quan-
do necessrio protegido da luz, de preferncia em baixas temperaturas
e sempre sob condies controladas e monitoradas, visando diminuir as
taxas de degradao, contaminao ou perdas por evaporao. As condi-
es de armazenamento prescritas pelos fornecedores dos MRC e demais
padres devem ser estritamente observadas.
14
I.5 Cadeia de Custdia de Padres de
Trabalho (Analticos)
Os padres de trabalho (analticos) devem possuir cadeia de cust-
dia, para permitir total rastreabilidade sobre seu uso, qualidade, procedn-
cia e origem.
As seguintes informaes devem constar da cadeia de custdia:
1. Cdigo de identificao (CAS);
2. Identificao da substncia (IUPAC, DCB/DCI, nome comum);
3. Procedncia;
4. Origem;
5. Prazo de validade;
6. Pureza;
7. Anlises suplementares;
8. Quantidade adquirida;
9. Quantidade utilizada e destinao;
10. Quantidade restante;
11. Responsvel pelas informaes.
I.6 Preparao, Uso e Armazenamento de

Solues Padro
O processo de preparao das solues padro deve ser devidamen-
te registrado, identificando os componentes e as respectivas quantidades.
As solues devem ser devidamente rotuladas e datadas, acondicionadas
em recipientes adequados e hermeticamente fechados, para evitar perdas
de solventes volteis e contaminaes, e armazenadas temperatura ade-
quada, se possvel entre 10C e -18C.
A preparao das solues padro deve ser baseada em sua massa,

usando balanas com resoluo de pelo menos 0,01 mg, deve-se evitar pe-
sar massas de padres inferiores a 10 mg. A massa de tara (do recipiente de
pesagem) nunca deve ser inferior a 0,1g, massa (carga) mnima de calibra-
o das balanas analticas, que so balanas da classe I (Portaria Inmetro
15
n 236 de 1994), pois elas no podem ser calibradas abaixo de cem vezes a
sua diviso de verificao.
Recomenda-se que logo aps o seu preparo e acondicionamento em

frasco adequado, as solues padro sejam pesadas. Recomenda-se que
essa pesagem seja refeita antes e aps a utilizao de qualquer volume des-
sas solues. As datas e valores dessas pesagens e os nomes dos tcnicos
que prepararam ou utilizaram a soluo padro devem ser anotados para
controle (cadeia de custdia).
Solues padro estoque (de referncia) e de trabalho armazenadas

devem ser comparadas com solues recm-preparadas, para se averiguar
se h diferenas nas concentraes e, dessa forma, estabelecer o prazo de
validade de utilizao.
O estabelecimento dos prazos de validade deve fazer parte dos pro-

cedimentos de validao do mtodo analtico, caso o laboratrio opte por
trabalhar com armazenamento de solues. Admite-se que a determinao
do prazo de validade seja conduzida de forma concorrente rotina analtica.
O laboratrio, para preparo de solues padro, necessita ser clima-

tizado e todas as operaes devem ser realizadas sob uma faixa de tempe-
ratura previamente estabelecida.
I.7 Reagentes e suas Solues

As especificaes tcnicas dos reagentes analticos devem ser com-
patveis com a finalidade de seu uso, de forma a evitar a ocorrncia de
contaminaes e/ou interaes que venham interferir na qualidade dos
resultados analticos.
Os reagentes devem ser preferencialmente armazenados em suas

embalagens originais, nas condies preconizadas pelo fabricante. O labo-
ratrio deve manter controle efetivo sobre o estoque dos reagentes.
I.8 Recepo, Armazenamento e Preparao

de Amostras
As amostras recebidas no laboratrio devem ser avaliadas em re-
lao aos aspectos de inviolabilidade e adequabilidade do recipiente de
conteno, identificao, conservao e quantidade encaminhada. Estan-
do as amostras de acordo com os requisitos de recepo, elas devem ser
16
cadastradas e receber um cdigo, numrico ou alfanumrico, o qual ser
associado, no mnimo, s seguintes informaes:
1. Origem;
2. Data de recepo;
3. Estado de conservao;
4. Quantidade;
5. Tipo de amostra (especificao).
Aps a recepo, as amostras devem ser encaminhadas para a pre-

parao, antes da anlise, ou armazenadas de acordo com as suas peculia-
ridades e requisitos especficos.
I.9 Desenvolvimento e Otimizao do

Procedimento Analtico
O desenvolvimento e a otimizao de um procedimento analtico
no constituem sua validao e sim a precedem, como mostrado na Figu-
ra1. No entanto, quando feito pelo laboratrio, essas atividades trazem
muita expertise na execuo do procedimento analtico e muitas informa-
es teis para o planejamento e conduo da validao.
A validao de um procedimento analtico sem sua prvia otimi-

zao intralaboratorial pode resultar no no atendimento aos requisitos
de validao, alm de perda de tempo, trabalho e recursos do laboratrio.
A otimizao interna do procedimento analtico inclui as calibraes

dos instrumentos de medies, a verificao (qualificao) da adequao
dos instrumentos de medies e das instalaes do laboratrio ao proce-
dimento analtico, bem como a verificao da adequao dos reagentes e
demais insumos analticos, o treinamento dos analistas etc.
Na otimizao do procedimento analtico feito um estudo dos

efeitos dos diversos fatores experimentais que podem afetar o resulta-
do analtico, procurando-se estabelecer as condies experimentais que
produzam um resultado com acurcia adequados ao propsito de uso do
resultado analtico.
O procedimento de otimizao pode usar os planejamentos fatoriais

sequenciais, a metodologia de anlise de superfcie de respostas [4,14,29,30]
ou os algoritmos ou mtodos SIMPLEX [4,29,30,37]. As informaes obti-
17
das durante a otimizao do procedimento analtico constituem um estu-
do prvio de sua robustez.
Quando for necessrio desenvolver um procedimento analtico para

uma combinao analito-matriz (um dado analito em uma dada matriz) de
interesse, podemos iniciar por pesquisar se existe algum procedimento j
desenvolvido para aquele analito, ou outra substncia com propriedades
qumicas semelhantes, na matriz de interesse ou em uma matriz semelhan-
te. Caso exista, usamos esse procedimento sem alteraes para a anlise de
um MRC, ou uma amostra de controle, ou uma matriz branca fortificada,
da combinao analito-matriz de nosso interesse. Avaliamos ento a vera-
cidade e a preciso, i.e., a exatido ou acurcia desse procedimento. Caso
a exatido do procedimento original no atenda ao propsito de uso, pro-
cedemos ento a alteraes desse procedimento, visando sua adaptao
combinao analito-matriz de nosso interesse.
Durante o desenvolvimento e a otimizao de um procedimento

analtico, especial ateno deve ser dada a algumas de suas etapas, como
discutido a seguir:
1. No processo de extrao, digesto ou abertura a alquota de

amostra utilizada deve ser totalmente desintegrada durante.
Excetuando os casos onde isso no necessrio ou inapropria-
do (e.g. determinao de resduos presentes em superfcies).
2. Durante o processo de concentrao, especial ateno deve ser

dada etapa de evaporao do solvente, devido ao fato de que
alguns analitos podem ser perdidos por arraste. A temperatura
de evaporao deve ser a mais baixa possvel e um pequeno
volume de solvente, com alto ponto de ebulio, deve ser utili-
zado de forma a minimizar o arraste. No se recomenda o uso
de corrente de ar, pela possibilidade de contaminao, oxidao
e introduo de umidade no sistema.
3. A estabilidade do analito sob o processo de extrao, no extrato

e sob a temperatura do injetor automtico deve ser considera-
da e demonstrada durante o desenvolvimento do mtodo. Caso
disponvel, a estabilidade do analito poder ser demonstrada
por intermdio da apresentao de trabalhos cientficos publi-
cados, os quais devero ser anexados ao dossi de validao.
18
I.10 Validao de Procedimentos Analticos
A validao um estudo experimental e documentado que objetiva
demonstrar que o procedimento analtico avaliado adequado finalida-
de proposta, de forma a assegurar a confiabilidade dos resultados obtidos.
essencial que a validao seja realizada sobre o procedimento ana-

ltico exatamente da forma que ele ser executado na rotina do laboratrio.
O planejamento, a preparao e a execuo da validao devem se-

guir protocolos de validao detalhados contemplando:
1. Adequao ao uso pretendido: finalidade e mbito de aplicao;
2. Responsvel tcnico do projeto;
3. Pessoal tcnico envolvido com as respectivas responsabilidades;
4. Identificao das unidades, equipamentos/instrumentos uti-

lizados;
5. Procedimento Operacional Padro (POP) inicial de execuo do

procedimento analtico para pr-validao;
6. Parmetros de desempenho e critrios de aceitao;
7. Experimentos de pr-validao e de validao propriamente dita;
8. Caractersticas de desempenho dos equipamentos/instrumentos;
9. Qualificao dos materiais (padres, reagentes, amostras e al-

quotas, entre outros);
10. Realizao dos experimentos da pr-validao: dados (regis-

tros) e concluso;
11. Realizao dos experimentos da validao: dados (registros)

e concluso;
12. POP final e definitivo para a execuo do procedimento analti-

co na rotina;
13. Relatrio final de validao.
Em se tratando de mtodo normalizado, os parmetros crticos (ve-

racidade e preciso) devem ser avaliados com o intuito de demonstrar que
os procedimentos preconizados atendem aos critrios de aceitao estabe-
lecidos neste Manual.
19
Caso sejam realizadas alteraes no procedimento normalizado, a
validao dever ser conduzida na extenso necessria. No mnimo, os
estudos de veracidade e de preciso devero ser realizados.
Aps o trmino dos estudos de validao, o laboratrio deve deixar

IMEDIATAMENTE DISPONVEIS (o que significa produzir e deixar cpia
impressa pronta para ser entregue ao Mapa) os seguintes documentos, os
quais comporo o chamado Pacote de Validao do laboratrio:
1. O procedimento de validao empregado pelo laboratrio nos

estudos, escrito na forma de POP ou documento padronizado
do laboratrio;
2. O respectivo relatrio de validao. Neste relatrio devem es-

tar claramente descritos os parmetros de validao estudados
e os resultados obtidos, bem como uma avaliao sobre o cum-
primento dos critrios de aceitao para cada um dos parme-
tros estudados. Salienta-se que o relatrio de validao no se
resume apenas aos dados brutos, razo pela qual se recomenda
a utilizao do modelo de relatrio de validao estabelecido
pela CGAL/SDA;
3. Todos os dados brutos referentes a cada um dos ensaios e par-

metros estudados durante a validao e constantes do respec-
tivo relatrio.
Um fluxograma geral, mostrando as etapas de desenvolvimento e

otimizao do procedimento, sua validao, utilizao na rotina de anli-
ses e controle estatstico, mostrado na Figura1.
Em relao validao e garantia da qualidade de procedimentos

analticos, recomendamos a leitura e consulta das referncias bibliogr-
ficas [34] e [57] do anexo XIII as quais, por sua relevncia e amplitude,
constituem-se em contribuies notveis a esta rea do conhecimento, bem
como as referncias [10], [15], [16], [29], [33], [34], [35], [36] e [47].
20
Figura1 Delineamento experimental, fluxograma das etapas bsicas
de desenvolvimento, validao e controle na rotina de um procedi-
mento de anlise qumica
INCIO
Desenvolver o procedimento
analtico
Otimizar o procedimento
analtico
sim
Validao do
Reotimizar o procedimento
procedimento
analtico otimizado. *Rever
analtico.
Ver Figura 3 critrios
de
validao
Parar o uso do
procedimento na
rotina.
Procedimento no
no validado
O procedimento
sim analtico no pode
ser usado na rotina
Causa do Utilizao do
sim
descontrole procedimento
encontrada. analtico na rotina
Procedimento
novamente
sob controle.
Durante a rotina:
1. Fazer controles
peridicos com
amostras de
controle.
2. Construir cartas
de controle.
Procurar a causa da
Procedimento
falta de controle
sobre controle
estatstico do no sim
estatstico
procedimento
FIM
Nota: *Desde que os critrios legais de aceitao estabelecidos sejam atendidos.

Fonte: Adaptado das refs. [15, 34, 57, 58]
21
I.11 Condues do Processo de Validao
A validao de um procedimento analtico constitui o primeiro nvel
e primeira ferramenta da garantia da qualidade de um sistema de quali-
dade laboratorial. Os demais nveis do sistema de qualidade e suas fer-
ramentas so o controle de qualidade interno, a participao em ensaios
interlaboratoriais colaborativos e/ou de proficincia, culminando com a
acreditao do procedimento analtico validado (Figura2 [34]).
Para minimizar a carga de trabalho do processo de validao, reco-

menda-se que seja adotado um planejamento cuidadoso e estatisticamente
consistente, que permita combinar ensaios de forma a determinar diferen-
tes parmetros de validao em um mesmo experimento. A Figura3 mostra
um fluxograma alternativo para a conduo do procedimento de validao.
Os experimentos de veracidade e preciso podem ser combinados

se um MRC ou outro material de referncia ou padro adequado for utili-
zado nas anlises qumicas, para o levantamento desses parmetros.
Se o laboratrio optar por determinar a repetitividade associada a

cada combinao de instrumentos analticos, analistas, entre outras; o con-
junto desses dados tambm pode ser levado em considerao na estimao
da preciso intermediria (reprodutibilidade intralaboratorial).
Figura2 A validao de um procedimento analtico no contexto do

sistema de gesto da qualidade de um laboratrio
CREDENCIAMENTO
Mapa
Ensaios interlaboratoriais
Cartas de controle
Controle estatstico
Validao
Procedimento e
sistema analtico.
Escopo. Adequao Incerteza de
ao propsito de uso medio
Resultado analtico
confivel, rastrevel e
comparvel
Fonte: Adaptado das refs. [34, 59].
22
Figura3 Conduta do procedimento de validao: delineamento ex-
perimental, fluxograma alternativo das etapas de validao
INCIO
CCAS: Estudo da Linearidade, Sensibilidade:
Construir a curva de calibrao

CCAS: obter as leituras Testar a no
replicadas da resposta Homocedasticidade
instrumental em cada nvel da Ver Figura 4 e
calibrao Anexo II
sim
MMQO MMQP
Calcular os parmetros da regresso:

a, b, sa, sb e cov (a,b)
Testar a qualidade do ajuste ( Ver Figura 5 )

Decidir por ajuste de reta ou polinmio
CCMBF ou CCEMBF
Repetir o Estudo da Linearidade,
Sensibilidade com curvas de calibrao
SELETIVIDADE sim matrizadas a matriz ou nova matriz a incluir
Testar efeito de matriz
ou a incluso de
no nova matriz Comparar a curva de calibrao no
matrizada CCAS com a curva de calibrao
matrizada CCMBF ou CCEMBF
Efeito de
Continuar usando as no matriz
CCAS na validao
significativo
e na rotina
sim
Usar as CCMBF ou as CCEMBF

na validao e na rotina
Fonte: Adaptado das refs. [34, 57]
23
33
Estudo da Exatido:
Determinao da recuperao com MRC ou com
fortificao de matriz
Estudo da Preciso de Repetitividade e/ou

Reprodutibilidade
Replicaes do estudo de exatido
Estimar a incerteza de medio

Usar o mtodo Bottom-Up ou o mtodo Top-Down
Calcular CC e CC ou LD
Usar os dados da curva de calibrao
conjunta de trs dias e do clculo de
Calcular
sim
incerteza, ou das 20 replicaes de CCCCee CC
Calcular
anlises de fortificaes no LMR ou ou LD
no LMDR
CC ou
LD
no
Estudo de Robustez
Usar um planejamento fatorial dos
tratamentos (fatores) que afetam o
resultado da anlise ou uma
abordagem clssica de variar um fator
de cada vez
FIM
FIM
24
PARTE 2
Parmetros e Critrios de
PARTE 2
Aceitao de Desempenho de
um Procedimento Analtico
Parte II
Parmetros e Critrios de Aceitao de
Desempenho de um Procedimento Analtico
II.1 Nveis de Interesse Analtico

Os parmetros e os critrios de validao aplicveis s determina-
es dos analitos (resduos ou contaminantes) devem levar em conside-
rao o nvel de concentrao de interesse, ou simplesmente o nvel de
interesse limite mximo permitido ou limite mximo de resduo (L) ou
teor mximo de contaminante (TMC) ou limite mnimo de desempenho
requerido (LMDR), ou o limite de quantificao (LQ) ou assemelhados
no qual alguma deciso ser tomada.
Para as substncias permitidas (toleradas), devem ser levados em

considerao os Limites Mximos Permitidos (LMR ou TMC).
Quando no houver LMR ou TMC definidos para os analitos permi-

tidos, deve ser tomado como referncia o valor arbitrado estabelecido nas
normativas publicadas pela rea competente do Mapa.
Para os analitos banidos ou proibidos, os laboratrios devem utilizar

como referncia o Limite Mnimo de Desempenho Requerido (LMDR)
estabelecido nas normativas especficas.
Quando no houver LMDR definido para o mtodo de quantifi-

cao do analito banido ou proibido, deve ser tomado como referncia o
valor arbitrado estabelecido nas normativas publicadas pela rea compe-
tente do Mapa.
Alguns requisitos para tcnicas especficas como espectrometria de

massas (EM) devem ser observados durante o processo de validao de
um procedimento analtico. So apresentados, a seguir, critrios de desem-
penho aplicveis tcnica de deteco por espectrometria de massas (EM).
25
II.2 Critrios de Desempenho Aplicveis
Deteco por EM
Os mtodos de espectrometria de massas (EM) so adequados como
mtodos de confirmao, quando usados aps separao cromatogrfica.
A deteco por espectrometria de massas deve ser realizada com a

utilizao de tcnicas de EM, tais como: registro de espectro total de massa
(varrimento total); monitoramento seletivo de ons (MIS) ou tcnicas EM/
EM como monitoramento de reaes mltiplas (MRM) ou ainda EM/EM
combinadas com modos adequados de ionizao.
Quando a determinao por EM for efetuada por meio de varrimen-

to total, obrigatria a presena no espectro de no mnimo quatro ons com
intensidades relativas 10% do pico base. Pelo menos quatro ons devem
atender ao critrio das tolerncias mximas permitidas de intensidades re-
lativas de ons, expressas em porcentagem, conforme Tabela1.
Quando a determinao for efetuada no modo MIS, o on molecular

deve, de preferncia, ser um dos ons diagnsticos selecionados; estes no
devem ter exclusivamente origem na mesma zona da molcula. A razo
sinal/rudo para cada on diagnstico deve ser maior ou igual 3:1 e as in-
tensidades relativas de ons devem estar de acordo com a Tabela1.
Tabela1 Tolerncias mximas permitidas para as intensidades rela-

tivas de ons utilizando diversas tcnicas analticas de espectrometria
de massas
CG-EM (IQ), CG-EM/EM,
Intensidade relativa
CG-EM (IE) LC/EM, CL-EM/EM
(% do pico de base)
(relativa)
>50% 10% 20%
20%-50% 15% 25%
10%-20% 20% 30%
10% 50% 50%
Fonte: Deciso 2002/657/CE Quadro 4 [10].
Deve-se verificar a variabilidade das intensidades relativas dos ons

no padro de calibrao e amostras fortificadas.
Sempre que os fragmentos forem medidos com outra tcnica que

no a do varrimento total, deve-se usar um sistema de pontos de identifi-
cao (Tabela2).
Um mnimo de quatro pontos de identificao requerido no caso

de confirmao de substncias proibidas e um mnimo de trs pontos de
identificao para substncias com Limite Mximo Permitido estabelecido.
26
Tabela2 Pontos de identificao de acordo com a tcnica de espec-
trometria de massas utilizada
Pontos de
Tcnica de EM Identificao
Obtidos por on
Espectrometria de massas de baixa resoluo 1,0
on precursor (espectrometria de massa de baixa resoluo) 1,0
Produtos de transio (espectrometria de massas de baixa resoluo) 1,5
Espectrometria de massa de alta resoluo 2,0
on precursor (espectrometria de massas de alta resoluo) 2,0
Produtos de transio (espectrometria de massas alta resoluo) 2,0
Obs.: Cada on s pode ser contabilizado uma vez. Nos produtos de transio esto includos os produtos de
segunda e de terceira gerao.
A CG-EM com a utilizao da ionizao por impacto eletrnico considerada uma tcnica diferente da
CG-EM que utiliza a ionizao qumica.
Diferentes analitos podem ser utilizados para aumentar o nmero de pontos de identificao apenas se
os derivativos resultarem de reaes com mecanismos diferentes.
A Tabela3 apresenta exemplos de nmero de pontos de identifica-

o utilizando diferentes tcnicas analticas e suas combinaes (n = 1).
Tabela3 Pontos de identificao utilizando diferentes tcnicas anal-

ticas e suas combinaes
Pontos de
Tcnica (s) Fonte de Identificao
Identificao
CG-EM (IE ou IQ) N n
CG-EM (IE + IQ) 2 (IE) + 2 (IQ) 4
CG-EM (IE) + CG-EM (IQ) (2
2 (Derivativo A) + 2 (Derivativo B) 4
derivativos)
CL-EM N n
CG-EM/EM 1 precursor + 2 ons produtos 4
CL-EM/EM 1 precursor + 2 ons produtos 4
2 ons precursores, cada um com
CG-EM/EM 5
um on produto
2 ons precursores, cada um com
CL-EM/EM 5
um on produto
1 precursor, 1 on produto e 2 ons
CL-EM/EM/EM 5,5
produtos de primeira gerao
EM de alta resoluo N 2n
CG-EM e CL-EM 2+2 4
CG-EM e EM de alta resoluo 2 + 1 4
Nota: n = 1.
Detectores seletivos utilizados em CG ou CL, tais como captura

de eltrons (ECD), fotomtrico de chama (FPD), de nitrognio e fsforo
(NPD), arranjo de diodos (DAD) e de fluorescncia (FL) s oferecem
27
seletividade limitada. Seu uso, mesmo em combinao com colunas de
diferentes polaridades, pode fornecer somente evidncia confirmat-
ria limitada.
Essas limitaes podem ser aceitveis para os resduos frequente-

mente encontrados, especialmente se alguns resultados forem tambm
confirmados atravs de uma tcnica de deteco mais especfica. Tais limi-
taes no grau de confirmao devem ser mencionadas ao se apresentar os
resultados da anlise.
A Tabela4 apresenta exemplos de mtodos adequados para anlise

confirmatria de substncias.
Tabela 4 Exemplos de mtodos adequados para anlise confirmatria

de substncias
Tcnica (s) Critrio
CG ou LC e EM Se o nmero suficiente de ons monitorado
CL/DAD Se o espectro UV caracterstico
CL/FL Em combinao com outras tcnicas
TLC bidimensional (espectro-
Em combinao com outras tcnicas
fotometria)
Apenas se combinado com duas ou mais tcnicas
CG/ECD, NPD, FPD
de separao*
Derivatizao Se esta no for o primeiro mtodo de escolha
CL/Imunograma Em combinao com outras tcnicas
CL/UV/VIS (com comprimento
Em combinao com outras tcnicas
de onda nico)
Fonte: Codex Alimentarius Commission Discussion Paper Methods of Analysis for Residues of Veterinary
Drugs in Foods-Cx/Rvdf 10/19/60, April 2010.
Nota: *Outros sistemas cromatogrficos (aplicando fases estacionrias ou mveis de diferentes seletividades)
ou outras tcnicas.
II.3 Curvas de Calibrao, Linearidade,

Sensibilidade e Faixa de Trabalho (FT)
Linearidade a capacidade de o mtodo produzir resultados direta-
mente proporcionais concentrao do analito na amostra, dentro de um
intervalo especificado.
De uma forma mais geral, a linearidade a capacidade de o proce-

dimento analtico produzir curvas de calibrao que podem ser adequada-
mente ajustadas pela equao de uma reta (funo afim).
A sensibilidade do procedimento analtico principalmente deter-

minada pelo gradiente, a inclinao da curva de calibrao. Se a curva de
calibrao uma reta, a sensibilidade constante em toda a faixa de traba-
28
lho e determinada, principalmente, pela inclinao b da reta de calibra-
o. Se a curva de calibrao no retilnea, ento a sensibilidade ser a
determinada principalmente pela derivada da curva de calibrao. Neste
caso, a sensibilidade varivel com a concentrao dentro da faixa de tra-
balho. Um dos fatores que pode reduzir o tamanho da faixa de trabalho
a reduo da sensibilidade (inclinao) da curva de calibrao em algum
de seus extremos (o outro fator a incerteza de medio, como ser discu-
tido na posteriormente na II.7.2). Por exemplo, se a curva de calibrao
um polinmio de segundo grau com concavidade para baixo, ento a
sensibilidade diminui com o aumento da concentrao, e pode ocorrer que
acima de uma dada concentrao a inclinao da curva se torne muito pe-
quena, tendendo a zero, formando por exemplo um plateau. Nesse caso
pode ocorrer que a faixa de trabalho v do limite de quantificao (LQ), em
unidades e de concentrao do analito na amostra de ensaio (no domnio
da amostra de ensaio) at uma dada concentrao mxima, que ainda tem
incerteza de medio menor que a incerteza mxima aceitvel (Imax), mas
cuja sensibilidade se tornou inaceitavelmente pequena.
Tendo em vista que o objetivo principal das anlises realizadas para

o PNCRC avaliar se as amostras esto ou no violadas, a curva de cali-
brao deve ser construda de forma que o limite mximo permitido se
encontre preferencialmente prximo da regio central da curva de cali-
brao, o centroide, ou prximo do baricentro, dependendo se a curva de
calibrao homoscedstica ou heterocedstica, respectivamente.
No caso de substncias banidas, o LMDR deve estar contemplado

na curva de calibrao.
II.3.1 Procedimento de Estimao e Critrios de Aceitao da

Curva de Calibrao e da Linearidade
Trs so os tipos possveis de curva de calibrao que podem

ser elaboradas:
1. CCAS Curva de Calibrao do Analito em Soluo: construda

a partir dos padres de calibrao do analito puro em solvente.
Este tipo de curva de calibrao somente poder ser utilizado se
comprovada a inexistncia do efeito de matriz.
2. CCMBF Curva de Calibrao da Matriz Branca Fortificada:

construda a partir da matriz branca fortificada com os padres
de calibrao do analito puro.
3. CCEMBF Curva de Calibrao do Extrato da Matriz Branca

Fortificado: construda a partir do extrato da matriz branca for-
tificado com os padres de calibrao do analito puro.
29
De uma forma geral, o planejamento de elaborao da curva analti-
ca deve contemplar os seguintes critrios:
O nmero de nveis de concentrao das solues padro de calibra-

o, designado por I, deve ser no mnimo cinco, I5.
Cada i-simo nvel de concentrao deve ter sua soluo prepara-

da independentemente no mnimo trs vezes, J3. Isso resultar em um
nmero total Nx de solues de calibrao independente igual a Nx=IJ.
Cada uma das Nx solues de calibrao deve ser medida (injetada,

apresentada) no instrumento de medio analtica um nmero L de vezes.
Isso resultar em um nmero total de leituras da resposta instrumental
igual a Ny=IJL=NxL. Se L=1 ento Nx=Ny.
1. O nmero total de respostas instrumentais Ny deve ser igual ou

superior a 30 (Ny30).
2. Todas as Ny leituras instrumentais devem ser feitas aleato-

riamente.
Dessa forma, as curvas analticas devem ser obtidas a partir de, no

mnimo, cinco nveis (I5) de concentrao, preferencialmente distribudos
de forma equidistante, se as respostas instrumentais forem homoscedsticas.
Todos os i-simos nveis de concentrao da curva de calibrao de-

vem ser preparados em pelo menos trs rplica (J3). Cada j-sima rplica
da i-sima concentrao deve ser lida (injetada, inserida, apresentada, co-
locada) no instrumento de medio analtica no mnimo uma vez (L1).
As J replicatas de cada nvel de concentrao devem ser replicatas

independentes, e no somente subalquotas de uma mesma soluo de ca-
librao. Isso significa que as J solues padro de uma mesma concentra-
o devem ser preparadas independentemente e injetadas no instrumento
de medio analtica L vezes cada (L1).
As leituras (medidas instrumentais das solues padro de calibra-

o) devem ser feitas em ordem aleatria, inclusive as leituras das solues
padro de calibrao de mesma concentrao, adotando-se os devidos cui-
dados para evitar contaminaes cruzadas.
Os ajustes das curvas de calibrao no devem ser forados a passar

pela origem (pelo zero).
Se os desvios-padro de repetitividade da resposta instrumental em

cada nvel de concentrao (syi) da curva de calibrao no forem estatisti-
camente iguais, sugerindo heterocedasticidade, significa que os dados da
30
calibrao devem ser tratados pelo Mtodo dos Mnimos Quadrados Pon-
derados (MMQP) ver Anexo VI.
No caso de homoscedasticidade podem ser usados ambos os M-

todos dos Mnimos Quadrados Ordinrios (MMQO) ver Anexo I ou o
MMQP. Observao: o MMQO um caso particular do MMQP, assim no
caso de homoscedasticidade ambos os mtodos levam ao mesmo resultado.
No entanto, como o MMQO um caso particular do MMQP, a utiliza-

o deste ltimo sempre correta e recomendada, eliminando, no caso, a ne-
cessidade de se fazer o teste de homoscedasticidade da curva de calibrao.
Em ambos os casos, os parmetros da reta de calibrao o inter-

cepto e a inclinao devem ser estimados, assim como suas incertezas
(desvios-padro), sa e sb, respectivamente, e a covarincia, sab
2
= cov ( a, b ) ,
entre eles.
A faixa linear de trabalho deve compreender os valores de LMR

ou LMDR por meio da equivalncia funcional estabelecida pela curva
de calibrao.
A avaliao dos parmetros ajustados da curva de calibrao, de sua

qualidade e da linearidade deve ser conduzida conforme indicado do Ane-
xoI ao AnexoVI e nos fluxogramas das figuras 4 e 5.
Caso seja verificado que a curva de calibrao no estatisticamente

bem representada por uma reta (funo afim), pode-se proceder ao ajuste
da curva de calibrao outras funes, incluindo os polinmios de ordem
superior a um (curva de calibrao polinomial). Deve-se evitar polinmios
de graus altos. Polinmios de at terceiro grau devem satisfazer a quase
totalidade das situaes experimentais.
A soluo analtica geral para a regresso de polinmios de grau um

(reta), grau dois (parbola) ou graus maiores pelos mtodos dos Mnimos
Quadrados Ordinrios (MMQO) ou Ponderados (MMQP) ou Generali-
zados (MMQG) envolve clculo matricial [29,31,48,49,50,51]. Ela mais
complexa, mas perfeitamente factvel em qualquer computador pessoal.
Com essa soluo analtica, alm de obter os valores dos parmetros ajus-
tados, tem-se tambm a matriz das varincias e covarincias dos parme-
tros ajustados. Os elementos dessa matriz so usados na lei de propagao
das incertezas para se estimar a incerteza de calibrao na concentrao do
analito interpolada na curva de calibrao.
31
Figura 4 Ajuste da curva de calibrao da resposta instrumental (RI)
versus a concentrao das solues padro de calibrao. Procedimen-
to para a escolha da regresso pelo MMQO ou pelo MMQP. Estimao
dos parmetros de ajuste suas incertezas e covarincias. Avaliao da
qualidade dos dados e do modelo ajustado por inspeo visual (grfi-
ca) dos resduos e tratamento de valores extremos (esprios, duvido-
sos, aberrantes, outliers) Continua na Figura5
INCIO
1
MMQP RI = aw + bw xi
Estimao do intercepto aw, da
inclinao bw, dos desvios padro saw
Dados da Curva de e sbw, da covarincia cov(aw,bw) e do
Calibrao: Coef. Cor. Lin. rw
Resp. Inst. vs. Conc.
No
MMQO RI = a + b xi
Estimao do intercepto a, da Inspeo Visual dos
inclinao b, dos desvios Homo-
Dados e dos Grficos
padro sa e sb, da covarincia cedasticidade
(Curva de calibrao e de
cov(a,b) e do Coef. Cor. Lin. ( = 0,05)
resduo)
r(yi,xi).
Sim
Excluso de Dados
(mximo 22,2 % do nmero Outliers
original de dados sem excluir ( =0,05)
nvel de concentrao)
MMQO ou MMQP No
RI = a + b xi + cxi2 +
Estimao de a, b, c, das Sim Sim
varincias sa, sb, sc, das Ajuste de Falta de
covarincias cov(a,b), cov(a,c), polinmio ajuste
cov(b,c), e do Coef. Cor. do
ajuste ou Coef. de
Determinao R = r(yi,yicalc).
No
No
Reduzir a faixa de calibrao ou
alterar condies de deteco ou o 1
procedimento analtico.
32
Figura 5 Avaliao da qualidade do ajuste: Teste r para a linearidade
entre x e y no caso da reta. Teste de r para a linearidade entre y e ycalc
no caso de ajuste polinomial
2
Calcular No Sim
tR = tr ou tRw = trw Reta Calcular tr ou trw
tR ou tRw > t , tr ou trw > t ,
Sim No Reduzir a faixa de calibrao ou No Sim

alterar condies de deteco ou
o procedimento analtico
Ajuste da curva de
calibrao
adequado
Fim
II.4 Seletividade e Efeito Matriz

A seletividade a extenso na qual um procedimento analtico pode
determinar analito(s) particular(es) em mistura(s) ou matriz(es) sem a in-
terferncia de outros componentes de comportamento semelhante. Portan-
to, a capacidade do procedimento analtico de discriminar entre a subs-
tncia a analisar e substncias anlogas (ismeros, metablitos, produtos
de degradao, substncias endgenas, componentes da matriz, isbaros
e componentes que possam gerar interferncia poliatmica, entre outras).
A verificao da seletividade do procedimento analtico deve ser

realizada a partir da comparao entre os sinais (resposta instrumental)
advindos do processamento da matriz, do extrato/digerido da matriz for-
tificada e do analito puro em solvente.
33
Algumas tcnicas instrumentais, como espectrometria de massas aco-
plada cromatografia, podem ser altamente seletivas, garantindo uma iden-
tificao inequvoca do analito e nenhum ou quase nenhum efeito de matriz.
Efeito Matriz um estudo de seletividade que objetiva averiguar

possveis interferncias causadas pelas diversas substncias que compem
a matriz amostral, gerando, basicamente, fenmenos de diminuio ou
ampliao do sinal instrumental ou resposta instrumental.
O estudo de efeito matriz no necessita ser realizado no caso de se

utilizar uma curva de calibrao CCMBF E CCEMBF.
II.4.1 Procedimento de Determinao do Efeito Matriz
Preparar uma curva de calibrao CCAS com no mnimo cinco n-

veis I de concentrao (I5), usando solues padro de calibrao, no
matrizadas, de analito puro em solvente puro.
Analisar, usando a CCAS, amostras elaboradas no mnimo em trs

nveis de fortificao, de tal forma que o limite permitido se encontre pre-
ferencialmente na regio central dos nveis. Um mnimo J de seis rplicas
(J6) por nvel de fortificao de:
1. Analito em solvente puro (amostra no matrizada);
2. Analito em matriz branca ou em extrato/digerido de matriz

branca (amostra matrizada).
Aps as anlises replicadas dessas amostras matrizadas e no matri-

zadas, realizadas usando a CCAS, proceder avaliao dos resultados das
concentraes do analito obtidas nas vrias fortificaes analisadas como
indicado a seguir.
II.4.2 Procedimentos de Avaliao e Critrios de Aceitao do

Efeito Matriz
Utilizando os dados obtidos dos experimentos, usando a CCAS, de

anlise do analito em solvente e dos extratos/digeridos de matriz bran-
ca fortificados: aplicar o teste F (Fischer-Snedecor), de homogeneidade de
varincias, para verificar se as varincias das amostras no matrizadas e
matrizadas podem ser consideradas estatisticamente iguais, em cada nvel
i de fortificao.
Para tanto, aplicam-se os seguintes clculos para cada nvel i de

concentrao (fortificao), comparando-se amostras no matrizadas com
aquelas matrizadas:
34
s2
Fcalc ,i = si2,1
i ,2 (1)
Onde:
e so as varincias das sextuplicatas das amostras no ma-

trizadas e matrizadas, em cada nvel de concentrao, com a maior
varincia no numerador.
Ao mesmo tempo, obtm-se o valor crtico tabelado de Fcrit,a,ni1,ni2,

com ni,1=ni,115 graus de liberdade no numerador e ni,2=ni,215
graus de liberdade no denominador. Adotar um nvel de significncia
a=0,05 (5%) ou nvel de confiana 1a=0,95 (95%).
Se em um dado nvel de concentrao i o valor de Fcalc,i for menor

que o Fcrit,a,ni1,ni2, as varincias desse nvel de concentrao podem ser
consideradas iguais, ou seja, a matriz no tem efeito importante sobre
a preciso do mtodo nesse nvel de fortificao i considerado. Nesse
caso, os desvios-padro desses dois grupos de anlises podem ser agru-
pados e a igualdade das mdias dos dois conjuntos de amostras pode
ser testada com a distribuio t de Student: comparao das mdias de
concentrao do nvel i.
Desse modo, calculam-se:
1. e = mdias das concentraes do analito em amostras

com matriz (extrato/digerido de matriz branca fortificado) e
sem matriz (analito puro em solvente puro), respectivamente,
em cada nvel de concentrao (fortificao).
2. si,1 e si,2 = desvios-padro das concentraes do analito no

i-simo nvel de fortificao.
3. O valor da estatstica tcalc,i:
(2)
Onde:
s 2
=
(ni ,1 1) si2,1 + ( ni ,2 1) si2,2
(n i ,1 + ni ,2 2 ) (3)
ni,1 e ni,2 = so os nmeros de replicatas nas amostras 1 e 2 (no ma-

trizada e matrizada ou vice-versa).
35
O valor crtico tabelado de tcrit,a,n obtido, para cada nvel i, a
partir da tabela da distribuio de Student para (ni=ni,1+ni,22) graus
de liberdade e nvel de significncia a=0,05 (5%) ou nvel de confiana
1a=0,95 (95%).
Se em um dado nvel de concentrao i o valor de Fcalc,i for maior

que o Fcrit,a,ni1,ni2, as varincias no podem ser consideradas estatistica-
mente iguais no nvel de fortificao i considerado. Verifica-se ento o efei-
to de matriz com a distribuio t de Student, usando a seguinte equao:
(4)
Neste caso, para a obteno do valor crtico tabelado tcrit,a,n, o n-

mero de graus de liberdade para cada nvel i igual a:
(5)
Se o valor de tcalc,i calculado pela eq.(2) ou pela eq.(4), conforme o

caso, for menor que o tcrit,a,n, pode-se concluir que a matriz no afeta o
ensaio no i-simo nvel de fortificao.
Se o valor de tcalc,i calculado pela eq.(2) ou pela eq.(4), conforme o

caso, for maior que o tcrit,a,n , pode-se concluir que a matriz tem um efeito
estatisticamente significante sobre o resultado.
Para aceitao da no existncia de efeito matriz, no deve haver

efeito matriz em nenhum nvel de concentrao das fortificaes.
II.4.3 Procedimento Alternativo para Determinao do

Efeito Matriz
Outro procedimento, mais simples, para verificar a existncia do

efeito de matriz, consiste em comparar os interceptos e as inclinaes de
um par de curvas de calibrao.
As curvas de calibrao devem ser construdas a partir de solues

de calibrao de analito puro em solvente puro (CCAS) e de solues de
36
calibrao matrizadas obtidas da fortificao de extrato/digerido de ma-
triz branca (CCEMBF).
Ambas as curvas de calibrao devem contar com no mnimo cinco

(I5) nveis de concentrao, um mnimo de trs (J3) repreparos inde-
pendentes das solues de calibrao e Ny30.
As comparaes estatsticas dos pares de interceptos e inclinaes

so feitas como mostrado na Parte V Ampliao do Escopo do Procedi-
mento Analtico Validado: Incluso de Analito ou Matriz em Procedimento
Analtico Validado.
Caso os resultados desses procedimentos indiquem a presena de

efeito matriz, o analito deve ser quantificado na rotina, adotando-se uma
das possibilidades a seguir:
1. Usar solues de calibrao obtidas de material de refern-

cia certificado.
2. Usar solues de calibrao obtidas da matriz branca fortificada

ou extrato de matriz branca fortificado com o analito.
3. Promover mudanas no procedimento analtico de forma a eli-

minar o efeito de matriz, alterando, por exemplo, o pr-trata-
mento da amostra ou a separao do analito ou as condies e a
deteco do analito.
4. Analisar as amostras de ensaio pelo mtodo de adio.
II.5 Veracidade/Recuperao
O vocabulrio internacional de metrologia define a veracidade
como: grau de concordncia entre a mdia de um nmero infinito de va-
lores medidos repetidos e um valor de referncia.
A veracidade a concordncia entre a mdia de um nmero sufi-

cientemente grande de resultados de um ensaio e o valor de referncia
aceito convencionalmente como verdadeiro.
A veracidade est inversamente relacionada ao erro sistemtico ou

correo ou ao fator de correo.
A determinao da veracidade deve ser feita por intermdio de

ensaios de recuperao utilizando-se material de referncia certificado
MRC. Caso no haja MRC disponvel, a determinao da recuperao deve
ser feita por intermdio de matriz branca fortificada. Na falta de uma ma-
triz branca pode-se usar uma amostra de ensaio com baixa concentrao
do analito.
37
No se deve confundir a recuperao com a eficincia de extrao
ou de digesto da amostra. A recuperao mede a tendncia total do pro-
cedimento analtico e, portanto, uma expresso de sua veracidade.
A recuperao tem por objetivo corrigir o resultado da anlise dos

erros sistemticos oriundos dos efeitos de extrao ou digesto e das per-
das advindas de todas as etapas da marcha analtica, realizadas at a lei-
tura da resposta instrumental, tais como limpeza (clean-up), diluies ou
pr-concentrao, derivatizaes, secagens.
Para corrigir o resultado pela recuperao, pode-se usar o fator

de recuperao, frec, cujo inverso o fator de correo de recuperao,
FCrec=1/frec, e , portanto, um fator multiplicativo; ou usar uma correo
de recuperao, Crec, que uma parcela aditiva.
O fator de recuperao frec, ou o fator de correo da recuperao

FCrec ou a correo de recuperao Crec deve ser inserido na funo de me-
dio (modelo de medio) ou equao do mensurando para fins da esti-
mao da incerteza de medio, mesmo se a correo de recuperao no
for efetuada.
II.5.1 Procedimento de Determinao da Veracidade/

Recuperao
Analisar seis rplicas de Material de Referncia Certificado (MRC)

ou de matriz branca, antes e aps fortificao com os padres de calibra-
o, em no mnimo trs nveis de concentrao (alta, mdia e baixa).
Para as substncias permitidas, os limites de interesse estabelecidos

(LMR/TMC) devem se encontrar preferencialmente na regio central dos
nveis de concentrao da curva de calibrao.
Para as substncias banidas, o LMDR deve estar prximo ao Menor

Nvel Calibrado (MNC).
Quando a recuperao obtida a partir de fortificaes de matriz

branca, o fator de recuperao frec calculado pela equao:
(6a)
Onde:
cf = teor medido aps fortificao da matriz branca;
cnf = teor medido na matriz branca no fortificada, i.e., antes

da fortificao;
38
cad = teor do analito puro adicionado matriz branca.
Quando a recuperao obtida a partir do uso do MRC, o fator de

recuperao calculado por meio da equao:
(6b)
Onde:
cmed = teor medido na anlise do MRC;
cMRC = teor declarado no certificado do MRC.
Dependendo se o estudo de determinao da recuperao foi feito

com Matriz branca fortificada ou com MRC, a correo de recuperao Crec
calculada pelas seguintes equaes, respectivamente:
(6c)
(6d)
Para corrigir o resultado usando o fator de recuperao, multipli-

ca-se o resultado no corrigido pelo fator de correo de recuperao,
igual ao inverso do fator de recuperao. Independentemente se o fator
de recuperao foi obtido atravs de fortificao ou com MRC:
FCrec=1/frec ou FCrec=1/frec,MRC (6e)

Calcular o fator recuperao mdio e/ou a correo de recuperao
mdia e o coeficiente de variao (CV) em cada nvel de concentrao do
estudo de veracidade/recuperao.
II.5.2 Critrios de Aceitao da Veracidade/Recuperao
A veracidade do procedimento analtico medida pela eq.(6a) ou

eq.(6b) deve estar compreendida dentro de intervalos especificados por
norma, legislao especfica, contrato com o cliente, ou na falta desses,
especificados internamente no laboratrio ao redor de 100%, de acordo
com as respectivas faixas de concentraes. Excepcionalmente, valores
fora das faixas especificadas podero ser aceitos desde que devidamen-
te justificados.
A Tabela5 apresenta os critrios de aceitao para a veracidade,

aplicveis anlise de resduos e contaminantes em produtos de ori-
gem animal.
39
Tabela5 Faixas de Aceitao do Fator de Recuperao acima e abaixo
de 100%
Concentrao (C) Intervalos (%)
c 1 mg/kg -50 % a +20%
1 mg/kg < c < 10 mg/kg -30 % a +10 %
c 10 mg/kg -20 % a +10 %
Fonte: Deciso 2002/657/CE, Quadro 2.
II.6 Preciso
a estimativa da disperso de resultados entre ensaios independen-
tes, repetidos de uma mesma amostra, amostras semelhantes ou padres,
em condies definidas.
As trs maneiras de express-la so por meio da repetitividade, da

preciso intermediria (ou reprodutibilidade interna ou reprodutibilidade
intralaboratorial) e da reprodutibilidade. Sendo que a reprodutibilidade de
um procedimento analtico somente pode ser estimada mediante a participa-
o de um ensaio interlaboratorial colaborativo (EC), raramente disponvel.
II.6.1 Repetitividade
a preciso intracorrida, ou seja, o grau de concordncia entre os

resultados de medies sucessivas, efetuadas sob as mesmas condies de
medio (ver definies no AnexoX).
II.6.2 Preciso Intermediria ou Reprodutibilidade

Intralaboratorial
Tambm denominada reprodutibilidade interna, refere-se preci-

so intermediria avaliada sobre a mesma amostra, amostras idnticas ou
padres, utilizando o mesmo mtodo, mesmo laboratrio, mas alterando
algumas condies, tais como: dias de anlise, analistas, equipamentos e
condies ambientais, entre outras, se necessrio.
II.6.3 Procedimento de Determinao da Repetitividade
Preparar e analisar um conjunto de amostras constitudas de ma-

trizes brancas fortificadas ou de MRCs, no mnimo em trs nveis de con-
centrao, com as substncias a analisar, de tal forma que os limites per-
mitidos se encontrem preferencialmente na regio central dos nveis de
concentrao e o LMDR seja contemplado, conforme se trate de substn-
cias permitidas ou banidas.
40
Para cada nvel, a anlise deve ser realizada em, pelo menos, seis
rplicas independentes.
Calcular a concentrao determinada para cada amostra replicada.
Calcular as concentraes mdias, os desvios-padro de repetitivi-

dade (sr) e os coeficientes de variao de repetitividade (%) das amostras
fortificadas em cada nvel de concentrao.
II.6.4 Procedimento de Determinao da Preciso Intermediria

ou Reprodutibilidade Intralaboratorial
Preparar e analisar um conjunto de amostras constitudas de ma-

trizes brancas fortificadas ou de MRCs, no mnimo em trs nveis de con-
centrao, com as substncias a determinar, de tal forma que os limites
permitidos se encontrem preferencialmente na regio central dos nveis e
concentrao e o LMDR seja contemplado, conforme se trate de substn-
cias permitidas ou banidas.
Para cada nvel de concentrao, a anlise deve ser realizada em,

pelo menos, seis rplicas independentes.
Repetir estes passos pelo menos mais duas vezes em dias diferentes,
variando sempre que possvel os operadores, os instrumentos, as condi-
es ambientais, lotes de reagentes e solventes, entre outros fatores expe-
rimentais. Assim o estudo da preciso intermediria constitui-se essen-
cialmente de repetidos estudos de repetitividade em diferentes condies
experimentais dentro de um laboratrio.
Calcular a concentrao detectada para cada amostra replicada.
Calcular a concentrao mdia, os desvios padro de reprodutibili-

dade (sR) e os coeficientes de variao para cada nvel de concentrao das
amostras fortificadas, combinando todos os resultados de cada nvel.
II.6.5 Critrios de Aceitao da Preciso
Em condies de repetitividade, o coeficiente de variao deve tipi-

camente situar-se abaixo de dois teros dos valores apresentados na Tabe-
la6 conforme a faixa de concentrao.
No caso de anlises repetidas de uma amostra em condies de re-

produtibilidade intralaboratorial, o coeficiente de variao intralaborato-
rial da mdia no deve exceder aos valores da Tabela6.
41
Tabela6 Critrios de Aceitao da Reprodutibilidade
Concentrao (c) Coeficiente de Variao (CV) (%)
c < 1 mg/kg 35
1 mg/kg c < 10 mg/kg 30
10 mg/kg c < 100 mg/kg 20
100 mg/kg c < 1 mg/kg 15
1 mg/kg c <10 mg/kg 10
10 mg/kg c < 100 mg/kg 7.3
100 mg/kg c < 1 g/kg 5,3
1 g/kg c < 10 g/kg 3,7
10 g/kg c < 100 g/kg 2,7
100 g/kg c < 1 kg/kg 2,0
Nota: CV = uc(canal)/canal, isto , o coeficiente de variao igual incerteza combinada da concentrao do
analito dividido pela prpria concentrao do analito.
II.7 Limites de Deteco (LD), Limite de

Quantificao, (LQ), Limite de Deciso (CC)
e Capacidade de Deteco (CC)
II.7.1 Limite de Deteco (LD)
Esse termo definido no VIM como: Valor medido, obtido por um

dado procedimento de medio, para o qual a probabilidade de declarar
falsamente a ausncia de um componente em um material b, sendo a a
probabilidade de declarar falsamente a sua presena (ver AnexoX).
Essa definio completamente equivalente definio de limite

mnimo detectvel da varivel lquida de estado da norma ISO 11843 [24,
25] e com a definio de Capacidade de Deteco (CCb) para substncias
banidas da Deciso 2002/657/CE [10].
Assim, o valor de CCa calculado no nvel de concentrao zero

(como no caso de uma substncia banida) o limite de deteco, mesmo
para as substncias toleradas, e essa a abordagem que recomendamos.
II.7.2 Limite de Quantificao (LQ)
O VIM no define esse termo. Vrias definies e diferentes proce-

dimentos so apresentados na literatura e em diferentes normas interna-
cionais (ver AnexoX).
A grande maioria das definies de LQ da literatura consistente

com a seguinte definio: O limite de quantificao a menor concentra-
42
o ou teor que pode ser quantificada com a maior incerteza aceitvel ou
Incerteza Mxima Aceitvel (Imax).
Portanto, para se determinar o LQ preciso estabelecer primeira-

mente, seja por lei ou resoluo legal de organismo normalizador nacional,
por norma nacional ou internacional, por acordo contratual ou informal
com o cliente ou, na falta das alternativas anteriores, por deciso interna
do laboratrio, qual a Imax para cada combinao analito-matriz do es-
copo analtico. Essa abordagem por critrio ou baseada nos riscos.
Para calcular o LQ usando a Incerteza Mxima Aceitvel, proce-

de-se ao clculo da incerteza da medio analtica, conforme mostrado
na seo 8 Incerteza de Medio Analtica, da Parte II, para concentraes
cada vez mais baixas do analito, a partir do nvel mais baixo calibrado,
at se encontrar a concentrao que atinge a Imax.
Esse mesmo procedimento pode ser usado para estabelecer o limite

superior de concentrao (csup,Imax), acima do nvel mais alto calibrado, a
partir do qual a Imax ultrapassada. Lembrar que a incerteza de medio
sempre aumenta medida que nos distanciamos do baricentro da curva
de calibrao. Dessa forma possvel estabelecer uma faixa de trabalho
usando critrios estatsticos e metrolgicos. Nesse sentido, a faixa de tra-
balho (FT) estatisticamente definida pelo intervalo de concentrao den-
tro do qual a incerteza de medio inferior ou igual Incerteza Mxima
Aceitvel (Imax):
LQFTcsup,Imax
Os conceitos de limite de deciso e limite mnimo detectvel da vari-

vel lquida de estado foram introduzidos pela norma ISO 11843 [24,25] com
o objetivo de propor um mtodo para determinar o limite a partir do qual
um sistema de medio pode ser declarado diferente do seu estado bsico.
II.7.3 Limite de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC)
So parmetros definidos na Deciso 2002/657/CE [10] que medem

o desempenho do procedimento analtico, levando em considerao a in-
certeza da medio no nvel de concentrao no qual se toma alguma deci-
so, o chamado nvel de interesse.
II.7.4 Procedimento de Determinao do CC
De acordo com a srie de normas ISO 11843 [24,25], os clculos do

CC devem ser realizados, preferencialmente, utilizando a curva de cali-
brao adequada para o procedimento analtico, conforme escolha feita
43
nas sees 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e Faixa de Traba-
lho e 4 Seletividade e Efeito Matriz, da Parte II.
II.7.5 Limite de Deciso (CC) para Substncias Permitidas ( = 5%)
Usando os dados dos pontos de trs curvas de calibrao, adequa-

das ao procedimento analtico com nveis de concentrao em torno da
concentrao do limite definido (ver as sees 3 Curvas de Calibrao, Li-
nearidade, Sensibilidade e Faixa de Trabalho e 4 Seletividade e Efeito Matriz, da
Parte II) e medidas em trs dias diferentes, calcular:
(7)
Onde:
CCa: o valor da concentrao do analito correspondente ao CCa

nas unidades de concentrao do resultado final.
LMR: a concentrao do LMR nas mesmas unidades de concentra-

o do resultado final.
u cLMR: a incerteza combinada na concentrao do analito no nvel

do LMR, levando em considerao a incerteza de amostragem, se dis-
ponvel; a incerteza de reprodutibilidade intralaboratorial; a incerteza
de recuperao e a incerteza de calibrao no nvel de concentrao
do LMR obtida da curva de calibrao conjunta de trs dias.
Para determinar ucLMR procede-se da seguinte forma:

1. Construir uma curva de calibrao conjunta de trs dias, jun-
tando em uma nica curva de calibrao todos os pontos de trs
curvas de calibrao obtidas em trs dias diferentes, consecuti-
vos ou no.
2. Ajustar a essa curva de calibrao conjunta de trs dias a reta

de calibrao pelo MMQO ou MMQP, conforme necessrio (ver
seo 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e Faixa
de Trabalho, da Parte II, e Anexo I a Anexo IV ou Anexo VI a
AnexoIX).
3. Calcular u calib
usando uma ou outra das equaes eq.(A.IV.1a),
eq.(A.IV.1b) ou eq.(A.IV.1c) do AnexoIV no caso de ajuste pelo
MMQO; ou as equaes eq.(A.IX.1a), eq.(A.IX.1b) ou eq.(A.
IX.1c) do Anexo IX no caso de ajuste pelo MMQP. Nessas equa-
es fazer x* = xLMR e y* = ycalcLMR. ycalcLMR a resposta instru-
mental calculada para xLMR na curva de calibrao conjunta de
44
trs dias. Tambm os demais parmetros dessas equaes o
intercepto, a inclinao, suas incertezas ou desvios padro e a
covarincia cov(a,b) so aqueles obtidos na curva de calibra-
o conjunta de trs dias.
u u
4. Calcular cLMR= (canal) usando a eq.(15) como mostrada
c
no item 8.2 Clculo da Incerteza pela Metodologia Top-Down,
da Parte II.
5. Usar na eq.(15) urepro=sreproLMR.
Caso o laboratrio no queira utilizar os dados da curva de calibra-

o conjunta, poder utilizar o CC calculado a partir dos resultados de
anlise de pelo menos 20 matrizes brancas fortificadas na concentrao do
LMR, por tipo de matriz analisada no escopo do procedimento validado.
Dessa forma, CC ser calculado por:
(8)
Onde:
sreproLMR: o desvio-padro amostral das concentraes determi-

nadas dessa srie de 20 anlises no nvel de concentrao do
LMR, em condies de preciso intermediria ou reprodutibili-
dade intralaboratorial.
Para obter sreproLMR, podem ser usados os dados do ensaio de repro-

dutibilidade interna do laboratrio. A partir desses dados pode-se obter
um modelo matemtico da reprodutibilidade intralaboratorial em funo
da concentrao, por meio de um ajuste pelo mtodo dos mnimos quadra-
dos (linha de tendncia no Excel).
II.7.6 Limite de Deciso (CC) para Substncias Banidas ( = 1%)
Usando os dados dos pontos de trs curvas de calibrao adequa-

das ao procedimento analtico, com nveis de concentrao em torno da
concentrao do LMDR definido (ver as sees 3 Curvas de Calibrao,
Linearidade, Sensibilidade e Faixa de Trabalho e 4 Seletividade e Efeito Matriz,
da Parte II), e medidas em trs dias diferentes, calcular:
(9)
Onde:
CC: o valor de concentrao do analito correspondente ao CC

nas unidades finais de concentrao do resultado final.
45
uc0: a incerteza combinada na concentrao do analito no nvel de
concentrao zero, levando em considerao a incerteza de amostra-
gem, se disponvel; a incerteza de reprodutibilidade intralaborato-
rial; a incerteza de recuperao e a incerteza de calibrao no nvel
de concentrao zero, ou seja, o desvio-padro do intercepto obtido
da curva de calibrao conjunta de trs dias.
Para determinar uc0 procede-se da seguinte forma:

vos ou no.

de calibrao pelo MMQO ou MMQP, conforme necessrio
(ver seo 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e
Faixa de Trabalho, da Parte II, e Anexo 1 a Anexo IV ou Ane-
xoVI a AnexoIX).
3. Calcular ucalib
s
= obtendo a raiz quadrada do valor da vari-
a
ncia do intercepto obtida pela eq.(A.I.11) do AnexoI, no caso
de ajuste pelo MMQO, ou da eq.(A.VI.13), do AnexoVI, no caso
de ajuste pelo MMQP.
4. Calcular u c0
u
= (c
c anal
) usando a eq.(15) como mostrada no
item 8.2 Clculo da Incerteza pela Metodologia Top-Down, da
Parte II. Usar na eq.(15) urepro=sreproLMDR.
Caso o laboratrio no queira utilizar os dados da curva de calibrao

conjunta, poder utilizar o CC calculado a partir dos resultados de anlise
de pelo menos 20 matrizes brancas fortificadas na concentrao do LMDR
ou inferior o CC esperado, por exemplo, por tipo de matriz analisada no
escopo do procedimento validado. Dessa forma, CC ser calculado por:
(10)
Onde:
sreproLMDR: o desvio-padro amostral das concentraes do analito

dessa srie de 20 anlises no nvel de concentrao do LMDR ou in-
ferior, em condies de preciso intermediria ou reprodutibilidade
intralaboratorial.
Para obter sreproLMDR, podem ser usados os dados do ensaio de repro-

dutibilidade interna do laboratrio. A partir desses dados, pode-se obter
da concentrao, atravs de um ajuste pelo mtodo dos mnimos quadra-
46
II.7.7 Procedimento de Determinao do CC
De acordo com a srie de normas ISO 11843 [24,25], os clculos do

CC devem ser realizados, preferencialmente, utilizando os procedimen-
tos da curva de calibrao adequada para o procedimento analtico, con-
forme escolha feita nas sees 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibi-
lidade e Faixa de Trabalho e 4 Seletividade e Efeito Matriz.
II.7.8 Capacidade de Deteco (CC) para Substncias

Permitidas ( = 5%)
Uma vez calculado CC para as substncias permitidas, usando os

dados dos pontos de trs curvas de calibrao adequadas ao procedimento
analtico, com nveis de concentrao em torno da concentrao do LMR
definido (ver as sees 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e
Faixa de Trabalho e 4 Seletividade e Efeito Matriz) e medidas em trs dias
diferentes, calcular:
(11)
Onde:
ucLMR: a incerteza padro combinada no nvel de concentrao

do LMR da curva de calibrao conjunta de trs dias, cujo clculo
mostrado anteriormente.
De acordo com a Figura3, na Deciso 2002/657/CE [10], na eq.(11), deve-

ria aparecer ucCCb, a incerteza padro combinada da concentrao do analito na
capacidade de medio. Porm, seu valor, particularmente no MMQO, muito
prximo daquele de uxLMR que adotamos para simplificar o procedimento.
De forma anloga, caso o laboratrio no queira utilizar os dados da

curva de calibrao conjunta, poder utilizar o CC calculado a partir dos
resultados de anlise de pelo menos 20 matrizes brancas fortificadas na
concentrao do LMR, por tipo de matriz analisada no escopo do procedi-
mento validado. Dessa forma, CC ser calculado por:
(12)
Onde:
sreproLMR: o desvio-padro amostral das concentraes do analito des-

sa srie de 20 anlises no nvel de concentrao do LMR, em condi-
es de preciso intermediria ou reprodutibilidade intralaboratorial.
47
De acordo com a Figura3, na Deciso 2002/657/CE [10], as ma-
trizes brancas deveriam ser fortificadas no CC cujo valor em geral
muito prximo do LMR. Na eq.(12) tambm deveria aparecer sreproCCb, o
desvio-padro de reprodutibilidade intralaboratorial na capacidade de
medio. Porm seu valor, particularmente no MMQO, muito prximo
daquele de sreproLMR que adotamos para simplificar o procedimento.
Para obter sreproLMR podem ser usados os dados do ensaio de reprodu-

tibilidade interna do laboratrio. A partir desses dados pode-se obter um
modelo matemtico da reprodutibilidade intralaboratorial em funo da
concentrao, por meio de um ajuste pelo mtodo dos mnimos quadrados
(linha de tendncia no Excel).
II.7.9 Capacidade de Deteco (CC) para Substncias

Banidas ( = 5%)
Uma vez calculado CC para as substncias banidas, usando os da-

dos dos pontos de trs curvas de calibrao adequadas ao procedimento
analtico, com nveis de concentrao em torno da concentrao do LMDR
definido (ver as sees 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade
e Faixa de Trabalho e 4 Seletividade e Efeito Matriz), medidos em trs dias
diferentes, calcular:
(13)
Onde:
uc0: a incerteza combinada na concentrao do analito no nvel de

concentrao zero, levando em considerao a incerteza de amostra-
gem, se disponvel, a incerteza de reprodutibilidade intralaborato-
rial, a incerteza de recuperao e a incerteza de calibrao no nvel
de concentrao zero, ou seja, o desvio-padro do intercepto, obtido
da curva de calibrao conjunta.
Para determinar uc0 procede-se da seguinte forma:

vos ou no.

de calibrao pelo MMQO ou MMQP, conforme necessrio (ver
seo 3 Curvas de Calibrao, Linearidade, Sensibilidade e Faixa
de Trabalho, da Parte II, e Anexo I a Anexo IV ou Anexo VI a
AnexoIX).
48
3. Calcular ucalib
s
= obtendo a raiz quadrada do valor da vari-
a
ncia do intercepto obtida pela eq.(A.I.11) do AnexoI, no caso
de ajuste pelo MMQO, ou da eq.(A.VI.13), do Anexo VI, no
caso de ajuste pelo MMQP.
4. Calcular u c0
u
= (c
c anal
) usando a eq.(15) como mostrada no
item 8.2 Clculo da Incerteza pela Metodologia Top-Down, da Par-
te II. Usar na eq.(15) urepro=sreproLMDR.
Caso o laboratrio no queira utilizar os dados da curva de calibra-

o conjunta, poder utilizar o CCb calculado a partir dos resultados de
anlise de pelo menos 20 matrizes brancas fortificadas na concentrao do
LMDR ou inferior, o CC, por exemplo, por tipo de matriz analisada no
escopo do procedimento validado. Dessa forma, calcular:
(14)
Onde:
sreproLMDR: o desvio-padro amostral das concentraes do analito

dessa srie de 20 anlises no nvel de concentrao do LMDR ou
inferior, em condies de preciso intermediria ou reprodutibili-
dade intralaboratorial.
De acordo com a Figura3, na Deciso 2002/657/CE [10] as ma-

trizes brancas deveriam ser fortificadas no CCb cujo valor em geral
muito prximo e abaixo do LMDR. Tambm, na eq.(14) deveria apare-
cer sreproCCb, o desvio-padro de reprodutibilidade intralaboratorial na
capacidade de medio. Porm seu valor, particularmente no MMQO,
muito prximo e maior que aquele de sreproLMDR, que adotamos para
simplificar o procedimento.
Para se obter sreproLMR, podem ser usados os dados do ensaio de repro-

dutibilidade interna do laboratrio. A partir desses dados pode-se obter
da concentrao, mediante um ajuste pelo mtodo dos mnimos quadra-
II.7.10 Critrios de Aceitao do CC e CC
CC e CC devem ser inferiores ao Limite Mnimo de Desempenho

Requerido (LMDR), no caso de substncias banidas.
Para as substncias com LMR definidos, CCa e CCb so sempre

maiores que o LMR, devendo ser o mais prximo possvel dele.
49
CCb no deve ultrapassar mais de duas vezes o valor em frao da
unidade do CV da Tabela6, conforme a faixa de concentrao do analito,
multiplicado pelo LMR:
II.8 Incerteza de Medio Analtica (IMA)

O Vocabulrio Internacional de Metrologia (VIM) [22,28] define a in-
certeza como um parmetro no negativo que caracteriza a disperso dos
valores atribudos a um mensurando, com base nas informaes utilizadas.
A incerteza (preciso) e a tendncia (veracidade) constituem as duas

mais importantes caractersticas (parmetros) metrolgicas e de qualidade
de um resultado de medio, permitindo a comparabilidade e a avaliao
da conformidade do resultado de medio em relao a normas, a limites
legais ou contratuais ou a valores de referncias [16,18]. Portanto, a incer-
teza a principal caracterstica metrolgica do resultado de uma medio
para se estabelecer e se verificar o atendimento ao critrio de adequao
ao uso pretendido [35,36]
A incerteza de medio deve ser relatada juntamente com todo re-

sultado de medio. Um resultado de medio no est completo se faltar
alguma expresso de sua incerteza. A ISO 17.025 [23] preconiza que a in-
certeza de medio seja avaliada ou que pelo menos seus principais com-
ponentes sejam estimados.
A incerteza final do resultado de uma medio, obtida de uma com-

binao das incertezas de mltiplas fontes, chamada de Incerteza Padro
Combinada, sendo representada pelo smbolo uc(y). Onde y representa o
mensurando, o resultado analtico.
As fontes que mais contribuem para a incerteza combinada do re-

sultado analtico so:
1. As incertezas de amostragem, subamostragem e de preparo de

amostras de anlise;
2. A incerteza de reprodutibilidade ou de preciso intermediria

(ou reprodutibilidade intralaboratorial), urepro ou uprecint;
3. A incerteza relacionada com a estimao da recuperao, caso

o resultado seja corrigido por ela, ou com a faixa permitida de
variao da recuperao, se o resultado no for corrigido pela
recuperao, urecup.
50
4. A incerteza de previso da curva de calibrao do instrumento de
medio analtica, ucalib. (ver exemplo na Figura8 e na Figura9).
A incerteza de previso da curva de calibrao constituda das in-

certezas devido:
1. indicao da resposta instrumental para a amostra;
2. Ao intercepto da reta de calibrao;
3. inclinao da reta de calibrao; e
4. covarincia entre o intercepto e a inclinao da reta de calibrao.
A primeira dessas quatro contribuies a maior delas, enquanto a

covarincia negativa entre o intercepto e a inclinao da curva de calibra-
o a nica contribuio que leva a uma reduo da incerteza combinada
da concentrao do analito, no caso da curva de calibrao ser uma reta.
Existem duas metodologias para estimar a incerteza de medio,

denominadas de Bottom-Up e Top-Down.
Essencialmente, no h diferenas significativas no processo de cl-

culo de incerteza dessas duas metodologias. Elas consistem em combinar,
por meio da lei de propagao das incertezas, as fontes significativas de
incerteza identificadas para o procedimento de medio. A diferena entre
essas duas metodologias est no grau de detalhamento e aprofundamento
do clculo e no sentido lgico desse clculo
As quatro etapas bsicas dessas metodologias para o clculo da in-

certeza, esquematizadas no fluxograma da Figura6, so:
1. Especificar o mensurando;
2. Identificar as fontes de incerteza;
3. Quantificar ou estimar as incertezas de cada fonte de incerteza;
4. Calcular a incerteza padro combinada.
A essas quatro etapas bsicas podemos adicionar outras duas eta-

pas acessrias:
1. Calcular a incerteza expandida; e
2. Realizar uma anlise crtica da incerteza de medio estimada

e, se necessrio, sua re-estimao ou a de algum componente
significativo.
Na etapa1 de especificao do mensurando, escrevemos a equao

do mensurando que relaciona as grandezas de entrada obtidas de medi-
51
es diretas com a grandeza de sada (ver exemplo na Figura6). Um deta-
lhado procedimento de medio deve ser estabelecido nessa etapa.
Na etapa2 de identificao das fontes de incerteza, recomenda-se a

elaborao um diagrama de causa e efeito ou diagrama de Ishikawa, para
representar visualmente as interaes das fontes de incerteza identificadas
(ver Figura8).
A exaustiva anlise do procedimento de medio, um amplo conhe-

cimento cientfico e a experincia do processo de medio e das caracters-
ticas fsico-qumicas do mensurando so imprescindveis para o bom xito
da etapa2.
Na etapa3 procede-se a uma valorao das incertezas de cada com-

ponente de incerteza elencado na etapa2.
Para tanto, utiliza-se a estimao do Tipo A, baseada na anlise

estatstica de medies repetidas feitas durante o processo de medio
do mensurando; ou a estimao do Tipo B, que se baseia em outras in-
formaes que no aquelas utilizadas na estimao do Tipo A, tais como
caractersticas do instrumento de medio fornecidas por seu fabricante,
certificados de calibrao ou de MRC, classe de exatido de instrumentos
e padres e outras medies no ligadas diretamente do mensurando,
como aquelas da validao de procedimento analtico.
Na etapa4 de clculo da incerteza combinada recomendvel a ela-

borao de uma planilha eletrnica de clculos, especialmente no caso da
metodologia Bottom-Up, para permitir o uso adequado da lei de propa-
gao das incertezas, combinando corretamente os valores das incertezas
padro das fontes de incertezas quantificadas na etapa3 (ver Figura10).
recomendvel a construo de um histograma de causa e efeito

ou histograma de Yshikawa ou de espinha de peixe (ver Figura9), apre-
sentando as fontes que mais contribuem para a incerteza combinada do
mensurando. Esse histograma auxilia na interpretao dos resultados e no
planejamento de melhorias no procedimento de medio, bem como na
aquisio de novos equipamentos.
52
Figura6 Fluxograma das quatro etapas bsicas do procedimento de
clculo para a estimao da incerteza de medio
INCIO
Especificar o Mensurando Etapa 1
Declarar claramente o que est sendo medido, incluindo a equao do

mensurando, que a relao matemtica entre o mensurando e as grandezas
de entrada das quais ele depende, e o procedimento de medio.
As informaes, quanto especificao do mensurando, devem constar nos
POPs ou em outras descries do procedimento analtico.
Etapa 2 Identificar as Fontes de Incerteza
Listar as possveis fontes de incerteza. Isso incluir as fontes que contribuem

para a incerteza das grandezas de entrada da equao do mensurando
estabelecida na Etapa 1, mas pode tambm incluir outras fontes, como aquelas
decorrentes de hipteses qumicas e das grandezas de influncia.
Quantificar as Incertezas Etapa 3
Medir ou estimar a incerteza padro associada a cada fonte potencial de

incerteza identificada. Geralmente possvel estimar ou determinar uma nica
contribuio de incerteza associada a diversas fontes distintas agrupadas entre
elas. tambm importante considerar se os dados disponveis abrangem
suficientemente as fontes de incerteza, e programar cuidadosamente
experimentos e estudos adicionais para assegurar que todas as fontes sejam
adequadamente consideradas e estimadas.
Etapa 4 Calcular a Incerteza Combinada
As informaes obtidas na etapa 3 consistiro de diferentes contribuies quantificadas

para incerteza total, sejam associadas a fontes individuais ou aos efeitos combinados de
diversas fontes. As contribuies tm que ser expressas como desvio-padro e
combinadas conforme a lei de propagao das incertezas, para se ter uma incerteza
padro combinada. O fator de abrangncia apropriado pode ser aplicado para se chegar
a uma incerteza expandida.
Consideremos o exemplo da anlise do metal cdmio em uma dada

amostra por absoro atmica. O procedimento dessa anlise consiste basi-
camente na pesagem da alquota de anlise, abertura da amostra com mistu-
ra de cidos a quente, seguida de diluies ou pr-concentrao da soluo
de abertura e, finalmente, a injeo da soluo diluda no espectrmetro.
Os dados da curva de calibrao (ver Exemplo A.5 do Guia EU-

RACHEM de clculo de incerteza) ajustados pelo MMQP levou aos se-
guintes valores para os parmetros da reta de calibrao: a=3,4276x10-3,
sa = 4,090 x 10-4, b = 2,5555 x 10-1 kg/mg, sb = 1,3984 x 10-3 kg/mg e
cov(a,b)=-4,1109x10-7kg/mg.
53
A faixa para o fator de recuperao permitida para o ensaio de
90% a 110%, ou frecmin=0,9 e frecmax=1,1. Uma dada amostra foi analisada
duas vezes K = 2, dando uma resposta instrumental mdia RIamos = 0,19,
com desvio-padro de s(RIamos)=3,5271x10-3. A concentrao do analito na
curva de calibrao , portanto, canalCC=0,73009mg/kg (Figura7).
A soluo de abertura da amostra passou por uma pr-concentra-

o antes de sua leitura na absoro atmica, tal que 100ml da soluo
de abertura foi evaporada at atingir 10 mL. Logo houve um fator de
pr-concentrao de 10vezes. Logo a concentrao do analito na amos-
tra de ensaio canal=0,07009mg/mol (Figura7).
Nesse nvel de concentrao do analito na amostra, a incer-

teza de reprodutibilidade interna do procedimento estimada em
urepro=srepro=3,6504x10-3mg/kg.
A Figura7 mostra a equao do mensurando e o clculo da concentra-

o do analito na curva de calibrao e sua concentrao na amostra de ensaio.
II.8.1 Clculo da Incerteza pela Metodologia Bottom-Up
A metodologia Bottom-Up aquela preconizada pelo BIPM, pela ISO

e outras instituies internacionais de padronizao, mediante o Guia para
a Expresso da Incerteza de Medio, conhecido como ISO-GUM [38,39].
Ela tambm indicada pela EURACHEM [16].
Nessa metodologia, procura-se fazer a combinao exaustiva de to-

das as fontes de incerteza do procedimento de medio. Partindo-se das fon-
tes de incerteza de todas as medies diretas das grandezas de entrada pre-
sentes na equao do mensurando e das grandezas de influncia, constri-se
um diagrama de causa e efeito, como aquele mostrado na Figura8 para o
exemplo da anlise de cdmio por espectroscopia de absoro atmica.
A Figura9 apresenta a planilha eletrnica (Excel) detalhada para

combinar as incertezas de todas as fontes de incerteza representadas na
Figura8. Essa planilha est disponvel, juntamente com este Manual, no
stio eletrnico do Mapa na internet.
54
Figura7 Exemplo de Funo de medio ou equao do mensurando
para a concentrao de um metal determinada pela espectroscopia de
absoro atmica (EAA)
canal Concentrao do analito na amostra de ensaio analisada. Unidades: mg/kg

ccalc Concentrao calculada do analito na amostra de ensaio sem correes. Unidades: mg/kg
canalCC Concentrao do analito interpolada na curva de calibrao. Unidades: mg/L
Aamostra Absorvncia mdia da amostra de reinjeo em duplicatas. Unidades: adimensional
a Intercepto da reta de calibrao obtido do ajuste pelo mtodo dos mnimos quadrados pon-
derado. Unidades: adimensional
b Inclinao da reta de calibrao, sensibilidade, obtida do ajuste pelo mtodo dos mnimos
quadrados ponderado. Unidades: L/mg
cov(a,b) Covarincia entre o intercepto e a inclinao da reta de calibrao obtida do ajuste pelo m-
todo dos mnimos quadrados ponderado absoluto. Unidades: kg/mg
Vfabert Volume final da soluo de abertura/extrao/digesto da amostra. Unidades: mL
mbruta Massa bruta do recipiente de pesagem e da amostra seca. Unidades: g
mtara Massa de tara do recipiente de pesagem vazio. Unidades: g
Vidil1 Volume inicial, alquota, da soluo de abertura da amostra para sua primeira diluio.
Unidade: mL
Vfdil1 Volume final da primeira diluio da soluo de abertura da amostra. Unidade: mL
Vidil2 Volume inicial, alquota, da soluo de abertura da amostra para sua segunda diluio.
Unidade: mL
Vfdil2 Volume final da segunda diluio da soluo de abertura da amostra. Unidade: mL
Creproint Correo nula de reprodutibilidade interna ou de preciso intermediria. Unidades: mg/kg
FCrecup Fator de correo unitrio de recuperao, FCrecup = 1/frec, se no se faz a correo pela recuper-
ao, caso contrrio ele diferente de um. Unidade: adimensional
A Dose Semanal Admissvel Provisria DSAP de massa corprea

adotada em 2 de junho de 1995 pelo Comit Cientfico da Alimentao Hu-
mana CCAH : DSAP = 7 g/kg http://ec.europa.eu/food/fs/sc/scf/reports/
scf_reports_36.pdf.
Isso significa 0, 070 mg para uma pessoa de 100 kg.
55
Figura8 Exemplo de um diagrama de causa e efeito ou diagrama de
Ishikawa para o clculo de incerteza de uma determinao de Cd por
espectroscopia de absoro atmica (EAA)
Vfabert
C calib
C vartemp C calib C Resol mamost C calib C calib
C repet mbruta mtara

C resol
U(C anal )
Tempo
a
Analistas Vidil1
Aemis b
Ambiente
Vidil2
Abertura de Cov(a,b)
mostra Vfdil1
C reproint C EAA Apad FC recup
Vfdil2
C pad
Calibrao FC dil
do EAA
C calib C repet
C vartemp C resol
Nota: Aemis=Aamostra que aparece na equao do mensurando (Figura7).
Figura9 Histograma mostrando a incerteza combinada da concen-

trao de Cd determinada por EAA e as suas maiores contribuies
positivas, conforme calculado pela planilha mostrada na Figura8.
0,006
0,005
0,004
0,003
0,002
0,001
0
Aamostra a b FCrecup Creproint uc(y)
A contribuio de incerteza para o fator de correo de recuperao

foi calculada supondo uma faixa permitida para o fator de recuperao de
90% a 110%.
Se essa faixa fosse de 95% a 105% essa contribuio passaria a ser

0,0021ng/kg, a segunda maior, e a incerteza combinada de Canal seria
0,0044 mg/kg.
56
Figura10 Exemplo de uma planilha de clculo de incerteza simples para
a determinao de Cd por espectroscopia de absoro atmica (EAA)
Os dados da curva de calibrao mostrados na Tabela A.II.1 foram

ajustados pelo MMQP e levam aos parmetros acima.
57
II.8.2 Clculo da Incerteza pela Metodologia Top-Down
A metodologia Top-Down consiste em usar a incerteza de repro-

dutibilidade, obtida em ensaios colaborativos, ou a incerteza de preciso
intermediria (reprodutibilidade intralaboratorial), obtida em estudo de
validao interna, ou ainda de dados de controle de qualidade de longo
prazo, como uma estimao da incerteza do resultado analtico. A essa fon-
te de incerteza pode-se adicionar algumas outras fontes significativas.
A incerteza combinada do resultado final da concentrao do anali-

to na amostra uc(Canal), pode por exemplo ser obtida pela combinao das
quatro maiores fontes de incerteza citadas, atravs da expresso dada pela
eq.(15) (ver Figura11 na Tabela7 e a Figura12):
(15)
Onde:
canal a concentrao do analito na amostra de ensaio.
canalCC a concentrao do analito interpolada na curva de calibrao.
urepro a incerteza de reprodutibilidade obtida dos dados de parti-

cipao em ensaios colaborativos (reprodutibilidade) ou dos dados
de preciso intermediria uprecint (ou reprodutibilidade intralaborato-
rial), conforme sua disponibilidade.
ucalib a incerteza devida previso da concentrao do analito na

curva de calibrao.
urec a incerteza associada estimao da recuperao ou com a fai-

xa permitida da recuperao, conforme o resultado seja, respectiva-
mente, corrigido ou no por ela.
uamostragem a incerteza devida ao processo de amostragem que leva

amostra que chega ao laboratrio. Ela a maior fonte de incerteza
do resultado analtico, mas em geral desconhecida. Neste caso, as-
sumir o valor zero e reportar que a incerteza declarada no leva em
considerao a incerteza de amostragem.
ccalib = canal/canalCC o coeficiente de sensibilidade para a incerteza de

calibrao, obtido da equao do mensurando escrita como uma
funo da concentrao do analito interpolada na curva de cali-
58
brao. Este coeficiente de sensibilidade decorre do fato de que as
unidades de concentrao da curva de calibrao podem no ser as
mesmas do resultado, assim como da existncia de outras medies
(massas, volumes etc.), alm da resposta instrumental do instru-
mento de medio analtica.
crec o coeficiente de sensibilidade associado ao fator de correo da

recuperao FCrec=1/frec, que neste caso igual concentrao do
analito calculada ccalc e no corrigida pelo fator de recuperao. Se
na equao do mensurando for usada uma correo de recuperao
(Crec) e no o fator de correo da recuperao (FCrec) esse coeficiente
de sensibilidade ser unitrio crec=1.
Em geral, as incertezas associadas aos processos de amostragem,

subamostragens e preparo de amostra no tm sido consideradas nos cl-
culos de incerteza de resultados analticos devido grande dificuldade
para a obteno dos dados necessrios para a estimao das incertezas
dessas fontes.
de reconhecimento internacional que a incerteza de amostragem

em amostras representativas da populao (amostras no representativas
causam erros sistemticos nos estimadores estatsticos e devem ser rea-
mostradas) a maior fonte de incerteza do resultado analtico [17].
Em geral, a amostragem no responsabilidade do laboratrio de

anlise qumica, o qual no costuma ter controle sobre ela. No entanto,
o laboratrio deve descartar toda amostra recebida que no atenda aos
requisitos mnimos de qualidade estabelecidos neste Manual, na seo 8
Recepo, Armazenamento e Preparao de Amostras, da Parte I.
A eq.(15) se baseia na aplicao da lei de propagao das incertezas

sobre a equao de medio simplificada:
(16)
Onde:
ccalc a concentrao do analito obtida nos clculos feitos com os

valores medidos na anlise sem correes.
Camostragem a correo nula de amostragem.
Crepro a correo nula de reprodutibilidade intralaboratorial ou pre-

ciso intermediria, mas sua incerteza no nula.
59
Ccalib a correo nula de calibrao do instrumento analtico, mas
sua incerteza no nula.
ccalib = canal/canalCC o coeficiente de sensibilidade para a incerteza de

calibrao obtido da equao do mensurando escrita como uma fun-
o da concentrao do analito interpolada na curva de calibrao.
Crec a correo de recuperao, que pode ser nula ou no, depen-

dendo, respectivamente, se a recuperao no ser usada ou ser
usada para corrigir o resultado.
FCrec o fator de correo da recuperao, que est relacionado ao

fator de recuperao frec pela relao FCrec=1/frec. Se a recuperao
no for usada para corrigir o resultado, ento frec=FCrec=1. A rela-
o entre a correo de recuperao e o fator de recuperao dada
pela equao:
(17)
A incerteza de calibrao ucalib, que aparece na eq.(15) calculada a

partir da incerteza da resposta instrumental para a amostra (uRIamostra), da in-
certeza do intercepto (ua=sa) ou (saw), da incerteza da inclinao (ub=sb) ou
(sbw) e da covarincia entre o intercepto e a inclinao cov(a,b) ou cov(aw,bw)
da reta de calibrao (vide anexosI e VI), atravs da eq.(18), a seguir, que
a equao E3.3 do Guia EURACHEM/CITAC QUAM2000 [10]:
(18)
A incerteza de recuperao urec, que aparece na eq.(15) depende se

o resultado ser corrigido ou no pela recuperao. Se o resultado final da
concentrao for corrigido pela recuperao, ento a incerteza da medio
da correo de recuperao urec=u (Crec) ser aproximada pela incerteza
da reprodutibilidade intralaboratorial urec=srepro.
Se uma faixa para a correo de recuperao (Crec) ou para o fator de

recuperao (frec) permitida e o resultado no corrigido pela recupera-
o, ento a incerteza da recuperao feita por uma estimao do TipoB,
atravs da eq.19, quando se usa a correo de recuperao Crec, ou atravs
da eq.20, quando se usa o fator de recuperao frec ou o fator de correo
da recuperao FCrec, respectivamente.
60
(19)
ou
(20)
Figura11 Exemplos de utilizao da metodologia Top-Down para o

clculo da incerteza combinada da concentrao de Cd determinada
por EAA
(a)
(b)
Notas: (a) Clculo da incerteza levando em considerao apenas a incerteza de preciso intermediria e a
incerteza no fator de correo da recuperao. Seu valor, 0,005576mg/kg, corresponde a 98% da
incerteza 0,005689mg/kg, calculada na metodologia Bottom-Up, na planilha mostrada na Figura9.
Cenrio (c) na Tabela7.
(b) Clculo da incerteza levando em considerao a incerteza de preciso intermediria, a incerteza
no fator de correo da recuperao e a incerteza de previso na curva de calibrao. Seu valor
0,0056692mg/kg corresponde a 99,7% da incerteza 0,005689mg/kg, calculada na metodologia
Bottom-Up, na planilha mostrada na Figura9. Cenrio (b) na Tabela7.
Obs.: Os dados numricos foram extrados de clulas da planilha apresentada na Figura8.
61
Tabela 7 Clculo da incerteza combinada da concentrao de Cd de-
terminada por EAA pela metodologia Top-Down
Incertezas (contribuies) / mg/kg
Cenrios Inc. Comb.
Amostragem Repro int Recup Calib
(a) 0,005 0,00365 0,004215 0,0010234 0,007559
(b) 0 0,00365 0,004215 0,0010234 0,005669
(c) 0 0,00365 0,004215 0 0,005576
(d) 0 0,00365 0,00365 0,0010234 0,005262
(e) 0 0,00365 0 0,0010234 0,00379
Notas: (a) A incerteza de amostragem a maior fonte de incerteza e a incerteza de recuperao aquela
devida faixa permitida de recuperao. Resultado no corrigido pela recuperao.
(b) A incerteza de amostragem no computada e a incerteza de recuperao aquela devida faixa
permitida de recuperao. Resultado no corrigido pela recuperao.
(c) As incertezas de amostragem e de calibrao do instrumento analtico no so computadas e a
incerteza de recuperao aquela devida faixa permitida de recuperao. Resultado no corrigido
pela recuperao.
(d) A incerteza de amostragem no computada e a incerteza de recuperao aquela estimada como
sendo igual incerteza de reprodutibilidade interna. Resultado corrigido pela recuperao.
(e) As incertezas de amostragem e de recuperao no so computadas.
Obs.: As colunas 2 a 5 mostram as contribuies para a incerteza combinada da concentrao do analito na
amostra de ensaio, devido s quatro fontes de incerteza mais expressivas nos ensaios de anlises qumicas: a de
amostragem, a de reprodutibilidade interna, a de recuperao e a de calibrao do instrumento de medio
analtica em diferentes cenrios.
Figura12: Clculo da incerteza combinada da concentrao de Cd de-

terminada por EAA pela metodologia Top-Down
0,008
0,007
0,006
0,005
0,004
0,003
0,002
0,001
0
Amostrag Repro int Recup Calib Inc comb
(a) (b) (c) (d) (e)
Obs.: As contribuies para a incerteza combinada da concentrao do analito na amostra de ensaio se devem
s quatro fontes de incerteza mais expressivas nos ensaios de anlises qumicas para cinco cenrios, conforme
dados da Tabela7.
62
II.8.3 Critrios de Aceitao da Incerteza de Medio
importante enfatizar que cada resultado analtico tem sua prpria

incerteza, uma vez que as fontes de incerteza no so sempre as mesmas,
pois no mnimo a incerteza de calibrao muda a cada nova calibrao
realizada, seja aquela do instrumento analtico como o espectrmetro ou o
cromatgrafo etc., sejam aquelas dos instrumentos de medio de massa
(balana) de volume (bureta, pipetas etc.). Tambm variam continuamente
as fontes de incerteza, relacionadas s grandezas de influncia, especial-
mente aquelas envolvendo condies ambientais e experimentais da bate-
lada de anlises. Alm do mais, a incerteza de um resultado analtico em
geral uma funo (dependente) do prprio valor da concentrao do ana-
lito (heteroscedasticidade). Quando essa dependncia funcional (uc vs. canal)
de proporcionalidade ou uma reta em uma dada faixa de concentra-
o do analito, ento o coeficiente de variao (CV) ou incerteza relativa
constante. Porm, essa constncia de CV pode no existir, especialmente se
a faixa de concentrao validada do analito de algumas ordens de gran-
deza. Dessa forma, recomenda-se que os clculos de incerteza sejam feitos
a cada batelada de anlises. No entanto, o laboratrio pode desenvolver
estratgias para reduzir a carga trabalho desses clculos, por exemplo, por
meio do modelamento funcional da incerteza de medio com a concen-
trao u(canal)=f(canal). Vale lembrar que, neste caso, o modelo desenvolvido
deve ser periodicamente revalidado e pode ser constitudo, por exemplo,
de um polinmio, um crescimento exponencial ou outra funo qualquer
ajustada aos dados acumulados de uc vs. canal.
A incerteza combinada padro ou a expandida do resultado da an-

lise qumica no deve exceder o limite mximo de incerteza estabelecido
por legislao ou norma especfica.
Na falta do valor do limite mximo de incerteza, relatado no par-

grafo anterior, um dos quatro critrios a seguir dever ser usado conforme
as faixas de concentraes do analito estabelecidas na Tabela6:
1. Se a incerteza padro combinada do resultado de anlise for

calculada incluindo a preciso intermediria (incerteza ou des-
vio-padro de reprodutibilidade intralaboratorial), ento a in-
certeza padro combinada relativa no deve exceder em mais de
um tero (1/3) os valores da Tabela6:
(21)
2. Se a incerteza padro combinada do resultado de anlise for cal-

culada incluindo a incerteza ou o desvio-padro de preciso de
repetitividade (no incluindo a incerteza ou o desvio-padro de
reprodutibilidade intralaboratorial), ento a incerteza padro
63
combinada relativa no deve exceder em mais de um tero (1/3)
os valores da incerteza (preciso) de repetitividade; logo, ela
no deve ser maior que oito nonos (8/9) dos valores da Tabela6:
(22)

calculada incluindo uma incerteza do Tipo B associada a uma
faixa de recuperao permitida, quando essa recuperao no
usada para corrigir o resultado da medio, ento a incerteza
combinada padro relativa no deve exceder em mais de dois
teros (2/3) os valores da Tabela6:
(23)

calculada incluindo a preciso de reprodutibilidade (incerteza
ou desvio-padro de reprodutibilidade ou incerteza de ensaios
interlaboratoriais colaborativos), ento a incerteza padro com-
binada relativa no deve exceder mais de duas vezes os valores
da Tabela6:
(24)
II.9 Estudo de Robustez, Escopo e Portabilidade

O estudo da robustez de um procedimento analtico procura avaliar
o quo sensvel o resultado analtico a variaes nas condies experi-
mentais do procedimento analtico, os chamados fatores ou tratamentos
ou grandezas de influncia [22].
A robustez no uma grandeza fsica ou qumica, assim no se pode

atribuir-lhe um valor numrico. Para avaliar a robustez, verifica-se experi-
mentalmente se a variao de cada fator estudado tem efeito significativo
sobre a qualidade metrolgica do resultado analtico. Se nenhum dos fa-
tores estudados e plausveis de afetar o resultado da medio tiver efeito
significativo, o procedimento analtico considerado robusto.
Um procedimento robusto produz resultados mais reprodutveis ao

longo do tempo e, principalmente, apresenta maior portabilidade para ou-
tro laboratrio dentro da organizao, no pas ou at no exterior.
64
A portabilidade a caracterstica de um procedimento analtico que
permite sua transferncia para outro local, sem perda de suas caracters-
ticas metrolgicas e de desempenho analtico. Por isso, a implementao
de um novo procedimento analtico reconhecidamente robusto se torna
uma tarefa grandemente facilitada, e produzir resultados to confiveis
quanto no laboratrio original onde foi desenvolvido e/ou validado. As-
sim, a robustez pode ser um dos fatores importantes a considerar, aps a
veracidade e a preciso, quando da escolha de um procedimento analtico
novo para o laboratrio.
Para o estudo de robustez feita a anlise de um MRC, ou um pa-

dro, ou uma matriz branca fortificada, ou um extrato de matriz branca
fortificada, ou uma Amostra de Controle de Qualidade (ACQ), em no m-
nimo dois nveis para cada fator que pode afetar o resultado da anlise.
recomendvel replicar os experimentos.
As diferenas entre os nveis estudados dos fatores devem represen-

tar a variabilidade com a qual esses fatores podero variar durante a rotina
de anlises do laboratrio.
Avalia-se a variao de uma funo resposta, ou simplesmente res-

posta, do procedimento analtico em funo das variaes nos fatores que
podem influenciar a resposta do procedimento analtico.
Como o objetivo da validao demonstrar a adequao ao prop-

sito de uso do resultado analtico, a funo resposta a estudar deve con-
templar as caractersticas metrolgicas do resultado analtico, como a sua
veracidade (erro sistemtico ou tendncia ou correo ou recuperao) ou
a sua preciso intermediria ou, preferencialmente, uma combinao des-
sas duas caractersticas metrolgicas, tal como a soma do erro sistemtico
com a preciso intermediria.
As informaes do desempenho do procedimento analtico obtidas

durante a fase de desenvolvimento, ou de otimizao, ou de pr-validao,
so de grande valia na escolha dos fatores a estudar durante essa fase.
Alguns dos fatores que podem afetar o resultado analtico so: con-
dies de armazenamento, condies ambientais e/ou de preparao da
amostra, origem e estabilidade dos reagentes, composio da amostra, ta-
manho (massa ou volume) da amostra, as condies de pH, temperatura,
tempo, composio da mistura de solventes ou reagentes para a abertura/
extrao/digesto/limpeza/derivatizao da amostra e regulagens (set
up) do instrumento de medio analtica, entre outras.
As etapas do estudo de robustez so:
1. Identificar os possveis fatores que possam influenciar os resultados.
65
2. Variar levemente cada fator em pelo menos dois nveis (tratamen-
tos). Essas variaes devem ser da mesma ordem daquelas que
podem ocorrer durante o uso do procedimento analtico na rotina.
3. Realizar um teste de robustez utilizando a abordagem clssica,

variando um fator de cada vez, ou utilizando a abordagem do
planejamento fatorial completo ou fracionrio (ver AnexoXII).
Essa ltima abordagem prefervel, uma vez que exige menor
nmero de experimentos, mais rpida, eficiente e econmica.
4. Identificados na etapa anterior os fatores que tm efeitos mais

significativos sobre o resultado da medio analtica, um novo
estudo mais detalhado realizado apenas com esses fatores
mais significantes. O objetivo estabelecer a faixa de variao
aceitvel desses fatores, de forma que no comprometa a vera-
cidade e a preciso do resultado analtico.
5. Os fatores que afetam significativamente o resultado analtico e

as faixas permitidas de suas variaes devem ser explicitamente
identificados no procedimento de anlise, ressaltando-se os cui-
dados especiais com esses fatores.
Caso seja verificado atravs do estudo de robustez que a funo

resposta do procedimento analtico no influenciada ou fracamente
influenciada por pequenas variaes dos fatores, as condies experimen-
tais, o procedimento analtico classificado como: Procedimento analtico
robusto e adequado para as anlises de rotina. Neste caso, relatar apenas
as restries de variabilidade das condies experimentais que mais in-
fluenciam o resultado analtico, estabelecendo as suas variaes permiti-
das para uso do procedimento analtico na rotina.
Caso seja verificado pelo estudo de robustez que a funo resposta

do procedimento analtico fortemente influenciada por pequenas varia-
es dos fatores, as condies experimentais, o procedimento analtico po-
der ser classificado em uma das seguintes classes:
1. Procedimento analtico no robusto e inadequado para as anlises

de rotina.
2. Procedimento analtico de uso restrito neste caso devero ser de-

talhadamente relatadas as restries de variabilidade e de con-
trole das condies experimentais que sero permitidas para
uso do procedimento analtico.
3. Procedimento analtico no robusto e inadequado para as anlises de

rotina na faixa de variao estudada dos fatores de influncia.
O escopo do procedimento analtico consiste na relao dos fatores

e nas faixas de variao autorizadas para cada fator, que estabelece as
66
condies dentro das quais o procedimento analtico pode ser usado de
forma a produzir resultados metrologicamente corretos e confiveis.
O escopo em parte determinado pelo estudo de robustez, uma

vez que este determina as condies de uso confivel do procedimen-
to analtico.
Durante a validao do procedimento analtico, pode-se fazer um

estudo de robustez simplificado, apenas identificando os fatores que mais
influenciam o resultado analtico e determinando as faixas de variao
desses fatores.
O estudo de robustez mais abrangente e detalhado dos fatores que

mais influenciam o resultado analtico pode ser feito concomitantemente
com o uso do procedimento analtico na rotina.
II.10 Expresso e Interpretao dos Resultados

de Medies
Os resultados das concentraes de cada analito em cada amostra
devem ser acompanhados de suas incertezas e da unidade de medio
conforme o formato: Nome ou smbolo do mensurando=(valor da concentrao
do analitoincerteza)unidades.
Os resultados devem tambm conter, conforme o caso, a seguinte

expresso ou assemelhada: O valor numrico aps o sinal refere-se incerteza
padro combinada.
Exemplos de resultado de anlise, conforme dados da Figura10 e

da Tabela7:
1. Concentrao de cdmio = (0,0730 0,0057) mg/kg, no cor-

rigida pela recuperao, em que o valor numrico aps o sinal
refere-se incerteza padro combinada no considerando a
incerteza de amostragem.
2. Concentrao de cdmio = (0,0730 0,012) mg/kg, no corri-

gida pela recuperao, na qual o valor numrico aps o sinal
refere-se incerteza expandida para uma probabilidade de
abrangncia de 95% e fator de abrangncia k=2,1098, no con-
siderando a incerteza de amostragem.
3. Concentrao de cdmio=(0,07300,0076)mg/kg, no corri-

gida pela recuperao, em que o valor numrico aps o sinal
refere-se incerteza padro combinada, considerando a incerte-
za de amostragem.
67
4. Concentrao de cdmio = (0,0695 0,012) mg/kg, corrigida
pelo fator de recuperao frec=1,05 (105%), em que o valor nu-
mrico aps o sinal refere-se incerteza expandida para uma
probabilidade de abrangncia de 95% e fator de abrangncia
k=2, no considerando a incerteza de amostragem.
A interpretao de um resultado de medio, quando de sua compa-

rao com um valor de referncia ou com limites mnimos e/ou mximos
estabelecidos e consequente, a tomada de deciso deve levar em conside-
rao a sua incerteza de medio. Neste sentido, Regras de deciso devem
ser previamente estabelecidas por lei, norma, contrato ou acordo entre as
partes envolvidas.
O estabelecimento das Regras de deciso deve levar em considerao

as especificaes para o produto e a probabilidade de se tomar decises
erradas; a probabilidade de falsa rejeio (falsa no conformidade, falso
no conforme, falso positivo) ou a probabilidade de falsa aceitao (falsa
conformidade ou falso negativo). Isto , essas regras dependem de o forne-
cedor ou o comprador correrem riscos.
Algumas possibilidades de Regras de deciso contemplando bandas

de segurana ou de salvaguarda [18] so representadas na Figura13. Ou-
tras possibilidades mais complexas de Regras de deciso podem ser esta-
belecidas, por exemplo, incluindo a necessidade de mais medies, ou a
comparao com outra especificao alternativa, definindo valor mximo
para a incerteza de medio etc.
Um rgo oficial fiscalizador pode adotar a posio de comprador

ou de vendedor conforme a deciso a tomar. Por exemplo: em autuaes,
o rgo fiscalizador pode adotar a posio de um comprador, evitando
punir injustamente o fiscalizado, se outros riscos mais importantes no
precisam ser considerados. No entanto, quando a tomada de deciso visa
reduzir os riscos dos consumidores, o rgo fiscalizador deve adotar a
posio de vendedor, adotando a menor regio de conformidade, como
por exemplo, na Figura 13.2(d), na Figura 13.2(e) ou na Figura 13.3(g),
conforme o caso.
68
Figura13.1 Interpretao de um resultado de medio em diferentes
possibilidades de comparaes
(a) Vref - U < Res < Vref Vref < Res < Vref + U
Res
Vref
Regio de Regio de
rejeio ou de Regio de aceitao ou de igualdade ou rejeio ou de
desigualdade de conformidade desigualdade
ou de no Vref - U < Res < Vref + U ou de no
conformidade Res = Vref conformidade
Res < Vref - U Res > Vref + U
Lmax + U
(b) U
Res
L max
Regio de
Regio de aceitao ou de conformidade rejeio ou de
Res < Lmax + U no
conformidade
Res > Lmax + U
Lmin - U
(c)
U Res
Lmin
Regio de
rejeio ou de Regio de aceitao ou de conformidade
no Res > Lmax + U
conformidade
Res < Lmin- U
Notas: A incerteza expandida U igual a mltiplo k da incerteza padro combinada u do resultado analtico:
U = ku. Em geral, k = 2.
(a) Igualdade entre o resultado Res e um valor de referncia Vref.
(b) Comparao do resultado Res com um limite mximo Lmax, minimizando o risco de falso conforme
do comprador.
(c) Comparao do resultado Res com um limite mnimo Lmin, minimizando o risco de falso conforme
do comprador.
69
Lmax - U
(d) U
Res
Lmax
Regio de aceitao ou
de conformidade Regio de rejeio ou
Res < Lmax + U de no conformidade
Res > Lmax + U
Lmin + U
(e)
U
Res
Lmin
Regio de aceitao ou
Regio de rejeio ou
de conformidade
de no conformidade
Res > Lmax + U
Res < Lmin - U
Notas: A incerteza expandida U igual ao mltiplo k da incerteza padro combinada u do resultado analtico:
U = ku. Em geral k = 2.
(d) Comparao do resultado Res com um limite mximo Lmax, minimizando o risco de falso conforme
do vendedor.
(e) Comparao do resultado Res com uma faixa, intervalo, com limite mnimo e mximo, minimizando
o risco do vendedor.
70
Lmin- U Lmax + U
(f)
U U Res
Lmin Lmax
Regio de Regio de
rejeio ou de Regio de aceitao ou de rejeio ou de
no conformidade no
conformidade Lmin - U < Res < Lmax + U conformidade
Res < Lmin - U Res > Lmax + U
Lmin + U Lmax - U
(g)
U U Res
L Lmax
min
Regio de Regio de
rejeio ou de rejeio ou de
Regio de aceitao ou de
no no
conformidade
conformidade conformidade
Lmin - U < Res < Lmax + U
Res < Lmin - U Res > Lmax + U
Notas: A incerteza expandida U igual a mltiplo k da incerteza padro combinada u do resultado analtico:
U = ku. Em geral k = 2.
(f) Comparao do resultado Res com uma faixa, intervalo, com limite mnimo e mximo, minimizando
o risco de falso conforme do comprador.
(g) Comparao do resultado Res com uma faixa, intervalo, com limite mnimo e mximo, minimizando
o risco de falso no conforme do vendedor.
II.11 Relatrio de Validao

Aps a validao, um documento deve ser redigido no qual os de-
sempenhos alcanados pelo procedimento validado so relatados. Esse
documento deve conter o maior nmero possvel de informaes de forma
a permitir uma forte evidncia para demonstrar a qualidade do procedi-
mento validado e sua adequao ao uso pretendido. Algumas das infor-
maes que devem constar deste relatrio final de validao so:
1. Identificao do Laboratrio, local, perodo de realizao dos

experimentos de validao, data de sua concluso, incluindo a
confeco do relatrio final;
2. Nomes e assinaturas do gerente da qualidade, gerente tcnico,

aprovao do documento, relao dos tcnicos que participa-
ram da validao.
71
3. A identificao do(s) analito(s) validados e a sua forma de
apresentao nas matrizes validadas e.g., slida/natural-
mente contaminada/solvel em/suspenso em/digervel
em/incluso em/resduo de/contaminao de/metablico
de/subproduto de/degradao de etc. e, quando apropria-
do, incluir a especificao, por exemplo: arsnico total, metil
mercrio, Cr(III), FeO.
4. Declarao do uso pretendido, estabelecendo requisitos de ten-

dncia e incertezas mximas aceitveis. Por exemplo: A anlise
de triagem de micotoxinas com teor entre 0,1 a 50 ng/g em se-
mentes alimentcias com faixa de recuperao permitida entre
60% e 120% e incerteza expandida relativa mxima de 25%.
5. Especificar a faixa de concentrao validada de cada analito

(e.g., 0500 ng/g) para cada matriz do conjunto de matrizes
validadas e explicitamente especificadas.
6. Um protocolo descrevendo equipamentos, materiais, reagentes,

calibrao dos instrumentos de medio analtica qualificados
para o procedimento analtico validado.
7. Recomendaes de segurana necessrias para equipamentos

e pessoas.
8. Procedimento analtico final e definitivo, no qual, alm de to-

das as etapas detalhadamente descritas, devem estar relatadas
todas as recomendaes de cuidados especiais em relao ao
controle e s faixas aceitveis dos fatores que tm efeito signifi-
cativo no resultado analtico, conforme detectado no estudo de
robustez. Por exemplo: i - Extrao temperatura (605)C por
(505) min sob agitao vigorosa; ii - Fluxo de gs carreador de
(8010) mL/minuto etc.
9. Os registros, as anlises estatsticas e o status do critrio de acei-

tao para cada parmetro de desempenho estudado.
10. Uma declarao relativa ao atendimento ou no do uso pretendido.
Evidentemente, outras informaes podem estar presentes nes-

se relatrio.
72
PARTE 3
PARTE 3
Estudos de Estabilidade
Parte III
Estudos de Estabilidade
Os procedimentos apresentados objetivam determinar a estabilida-
de das solues padro, dos analitos nas matrizes de origem animal ou
vegetal e dos padres de trabalho.
A estabilidade do analito nas mais diversas situaes deve ser deter-

minada de modo a reproduzir as reais condies de armazenamento, ma-
nuseio e anlise; levando-se em considerao a matriz especfica na qual o
analito dever ser pesquisado.
Dados de publicaes cientficas podem ser utilizados para de-

monstrar a estabilidade do analito em soluo e/ou na matriz, desde que
haja similaridade entre as condies estabelecidas no estudo e no labora-
trio em questo.
Os estudos de estabilidade tambm podem ser realizados em par-

ceria por laboratrios da Rede Brasileira de Laboratrios Agropecu-
rios, e os dados decorrentes podero ser utilizados para demonstrar a
estabilidade do analito nas diversas situaes. Para tanto, necessrio
que haja similaridade entre as condies do analito nos laboratrios que
realizam os estudos.
As estabilidades dos padres de calibrao e padres internos, em

soluo, devem ser avaliadas.
Os dados podem ser apresentados graficamente, de forma a facilitar

a avaliao.
Admite-se um padro como estvel quando for observada uma de-

gradao mxima de at 5% em relao a uma referncia recm-preparada.
III.1 Estabilidade do Analito na Matriz

no Processada
O estudo visa a demonstrar a estabilidade dos analitos nas matrizes
no perodo entre o recebimento da amostra e o incio da anlise.
O perodo de tempo estudado deve ser superior ao tempo mximo

previsto de armazenamento para o incio da anlise da amostra.
Este estudo deve, preferencialmente, ser realizado com o uso de ma-

trizes naturalmente contaminadas.
73
sugerido que o estudo de estabilidade na matriz no processada
seja realizado de forma exploratria, conforme demanda do Mapa.
Para tal, o laboratrio deve reservar amostras naturalmente con-

taminadas, armazenando-as sob temperaturas de congelamento e ana-
lis-las em no mnimo seis rplicas, periodicamente, em intervalos de
tempo predeterminados.
O analito considerado estvel por um intervalo de tempo, enquan-

to os resultados dessas anlises indicarem igualdade estatstica com o pri-
meiro resultado do incio do estudo.
Pode-se usar o teste hiptese de t de Student, usando as equaes

eq.(1) a eq.(5), como mostrado no item 4.2 Procedimentos de Avaliao
e Critrios de Aceitao do Efeito Matriz, da Parte II, para se verificar essa
igualdade de resultados.
Neste caso, os desvios-padro (varincias) no numerador e no

denominador que aparecem nas equaes (1), (3), (4) e (5) so aqueles
obtidos das anlises replicadas em dois momentos diferentes do estudo
de estabilidade.
O estudo pode no ser realizado devido sua impraticabilidade

para algumas matrizes.
III.2 Estabilidade do Analito na Matriz Processada

O estudo visa a demonstrar a estabilidade dos analitos nas matrizes
no perodo entre o processamento da amostra e o incio da anlise.
A estabilidade do analito na matriz processada deve ser realizada

sempre que o laboratrio adote a prtica na qual a amostra no analisada
imediatamente aps o processamento.
O perodo de tempo estudado deve ser superior ao tempo mximo

previsto de armazenamento para o incio da anlise da matriz processada.
Devem-se tomar amostras de matriz branca homogeneizada. O ma-

terial deve ser dividido em alquotas, cada uma fortificada com a substn-
cia a ser avaliada.
Armazenar as alquotas sob as condies nas quais o laboratrio

as armazena, no perodo entre o processamento da amostra e o incio
da anlise.
74
Analisar seis rplicas das alquotas armazenadas, periodicamente,
em intervalos de tempo predeterminados, e definir o tempo mximo de
estabilidade dos analitos estudados procedendo a testes t como na seo
1 Estabilidade do Analito na Matriz no Processada, da Parte III.
No necessrio provar a estabilidade dos analitos na matriz pro-

cessada caso o laboratrio inicie a anlise da amostra imediatamente aps
seu processamento.
III.3 Estabilidade do Analito no Extrato ou na

Soluo de Abertura de Amostra
O estudo visa a demonstrar a estabilidade dos analitos nos ex-
tratos no perodo entre a extrao/digesto da amostra e o incio da
anlise instrumental.
A estabilidade do analito no extrato deve ser realizada sempre que o

laboratrio adote a prtica na qual o extrato no analisado imediatamen-
te aps a extrao/digesto.
O perodo de tempo estudado deve ser superior durao da cor-

rida analtica ou ao tempo mximo previsto de armazenamento e corri-
da analtica.
Os resultados devem ser comparados com aqueles obtidos da

anlise dos extratos imediatamente aps a extrao/digesto ou aber-
tura de amostra.
Devem-se tomar extratos de matriz branca. O extrato deve ser adi-

cionado com a substncia a ser avaliada em uma concentrao que con-
temple a faixa de trabalho.
Armazenar os extratos sob as condies nas quais o laboratrio

os armazena, no perodo entre a extrao/digesto da amostra e a an-
lise instrumental.
Analisar no mnimo seis rplicas dos extratos armazenados periodi-

camente, em intervalos de tempo predeterminados, e definir o tempo m-
ximo de estabilidade dos analitos estudados procedendo a testes t como na
seo 1 Estabilidade do Analito na Matriz no Processada, da Parte III.
No necessrio provar a estabilidade dos analitos caso o labora-

trio inicie a anlise da amostra imediatamente aps a extrao/digesto.
75
III.4 Estabilidade das Solues Padro
A estabilidade das solues padro deve ser demonstrada sempre
que no houver alguma referncia prvia para o seu prazo de validade.
A estabilidade da soluo padro deve ser estudada nas condies e

no perodo de armazenamento nos quais a soluo padro armazenada
no laboratrio.
Recomenda-se comparar a resposta instrumental gerada por uma

soluo padro armazenada com a resposta instrumental gerada por
uma soluo padro recm-preparada (a partir de um padro dentro do
prazo de validade).
O estudo deve ser realizado em todos os tipos de soluo padro,

partindo da soluo padro estoque, passando pela soluo padro inter-
mediria, at a soluo padro de trabalho.
Caso o estudo de estabilidade seja feito em uma soluo diluda,

essa estabilidade pode ser considerada para solues mais concentradas,
desde que ambas sejam armazenadas sob as mesmas condies.
O procedimento o mesmo da seo anterior, comparando-se com

testes t os sinais de sextuplicatas obtidos em diferentes perodos de arma-
zenamento com o sinal da soluo recm-preparada.
III.5 Estabilidade dos Padres de Trabalho e dos

Materiais de Referncia no Certificados
Padres de trabalho e materiais de referncia no certificados pode-
ro ter o prazo de validade expandido, desde que seja realizado o moni-
toramento contnuo de sua estabilidade, conforme recomendado a seguir.
Para monitoramento contnuo da estabilidade desses padres

deve-se elaborar uma planilha ou grfico-controle para cada padro,
constando o registro da relao de reas (ou alturas) dos picos obtidos
cromatograficamente, entre o padro em estudo e um padro de refern-
cia. Dessa forma, os seguintes passos devem ser seguidos e registrados:
1. Injetar no cromatgrafo uma soluo contendo um padro

de referncia e o padro de trabalho utilizado na rotina do
laboratrio, ambos dentro do prazo de validade indicado
pelo fornecedor.
2. Registrar em um grfico-controle a relao das reas (ou alturas)

entre os dois picos gerados.
76
3. Quando o padro de trabalho utilizado na rotina expirar o pra-
zo de validade, realizar o mesmo estudo descrito acima, utili-
zando sempre o padro de referncia dentro da validade.
Caso a diferena entre as reas seja inferior a 5%, uma nova data de
validade poder ser estabelecida para o padro em estudo. Sugere-se ex-
pandir a validade por mais trs meses, repetir os procedimentos descritos
acima e, caso a relao das reas continue inferior a 5%, expandir a valida-
de por mais trs meses. E assim proceder, sucessivamente.
O padro de referncia pode ser o mesmo utilizado como padro in-

terno (surrogate) ou como controlador do equipamento. Por exemplo, qui-
nalfos ou propoxur para cromatografia lquida e bromofs ou clorpirifos
metlico para cromatografia gasosa.
O padro de referncia utilizado no estudo deve sempre estar den-

tro do seu prazo de validade.
77
ANOTAES
78
PARTE 4
PARTE 4
A Rotina Analtica e o Controle
de Qualidade Analtica (CQA)
Parte IV
A Rotina Analtica e o Controle de Qualidade
Analtica (CQA)
Como a validao no garante que o desempenho do mtodo na ro-

tina analtica do laboratrio permanecer o mesmo perpetuamente, faz-se
necessrio monitorar as corridas analticas para garantir que os resultados
continuem vlidos no decorrer do tempo, de acordo com o que foi estabe-
lecido durante a validao.
Todos os procedimentos adotados na rotina analtica devero ser

respaldados pelos estudos de validao do procedimento analtico.
A curva de calibrao utilizada na rotina deve conter pelo menos

cinco nveis (incluindo, quando necessrio, o zero), devendo esta ter a
mesma faixa de trabalho estudada na validao do mtodo.
No mnimo uma Amostra Controle de Qualidade (ACQ) Branca de

Matriz deve estar presente por batelada de amostras.
As ACQ de Matriz Branca Fortificada devem simular nveis de con-

centrao de interesse. Para tal, fortificaes devem ser feitas em nvel bai-
xo, mdio e alto, sendo que o LMR/TMC deve estar representado em um
desses nveis ou prximo a eles.
No mnimo uma ACQ de Matriz Branca Fortificada deve estar pre-

sente por batelada de amostra. Os nveis de fortificao devem ser perio-
dicamente alternados para que o estudo contemple os trs nveis em um
curto intervalo de tempo.
Com esse objetivo, as ACQs devem ser intercaladas entre as amos-

tras. Cada corrida analtica deve ter a seguinte composio:
1. Branco de reagente;
2. Curva de calibrao;
3. Amostras;
4. ACQs (matriz branca fortificada e matriz branca), intercalados

s amostras.
Os resultados das ACQ serviro de base para aceitao ou rejeio

da batelada analtica.
79
Para tanto:
1. As ACQ devem ser incorporadas em intervalos regulares, de-

pendendo do nmero total de amostras da batelada.
2. Os dados devem, preferencialmente, ser registrados grafica-

mente para uma melhor visualizao dos resultados.
Os resultados obtidos nas ACQs correto podem ser utilizados para

estimar continuamente a preciso intermediria ou reprodutibilidade in-
tralaboratorial e a incerteza do procedimento analtico, bem como os valo-
res de CC e CC.
Os critrios de aceitabilidade dos resultados das ACQs so os mes-

mos de quando da validao e esto estabelecidos nas sees especficas.
Adicionalmente, a cada quatro meses, os laboratrios devero reali-

zar uma verificao de desempenho (internal check samples) por intermdio
de amostras rigorosamente elaboradas e distribudas para serem analisa-
das junto com as amostras da rotina analtica. O objetivo estabelecer um
controle interno e independente, ou seja, sem o conhecimento prvio dos
analistas diretamente envolvidos nas anlises.
Os resultados das medies de amostras de ensaio de rotina oriun-

dos de curvas analticas obtidas a partir de padres de calibrao em so-
luo, ou a partir de extrato de matriz branca fortificado com os padres
de calibrao, podem ser corrigidos com a mdia das correes de recupe-
rao ou a mdia dos fatores de recuperao obtidos naquela batelada de
anlises no nvel de concentrao mais prximo do resultado da amostra
de ensaio de rotina.
A correo de recuperao ou o fator de recuperao mdios da ba-

telada de anlises no nvel de concentrao mais prximo do resultado da
amostra de ensaio dever sempre ser relatado juntamente com o resultado
da medio.
O laboratrio deve fazer uso, o mais abundantemente possvel, de

cartas de controle para mostrar de forma visual e rpida que o sistema
de medio analtica est sob controle estatstico. Recomenda-se que no
mnimo sejam feitas cartas de controle do intercepto e da inclinao das
curvas de calibrao da rotina, cartas de controle das recuperaes obtidas
nas ACQ e da preciso de repetitividade e/ou preciso intermediria (re-
produtibilidade intralaboratorial).
A critrio do laboratrio, outras cartas de controle podem ser ela-

boradas, por exemplo, com os valores de LD, LQ, CC CC, da resposta
instrumental do instrumento analtico em algum controle, da rea, da in-
tensidade ou largura a meia altura de um dado pico cromatogrfico de
controle, entre outros.
80
PARTE 5
PARTE 5
Ampliao do Escopo do
Procedimento Analtico Validado
Parte V
Ampliao do Escopo do Procedimento Analtico
Validado: Incluso de Nova Matriz ou Novo
Analito em Procedimento Analtico Validado
No caso de procedimento analtico j credenciado, o laboratrio pode-

r solicitar ao Mapa a extenso de escopo incluindo novo analito ou matriz.
Entende-se aqui como nova matriz, por exemplo, tecidos diferentes

de uma mesma espcie (e.g., fgado e rim bovino) ou o mesmo tecido de
espcies diferentes (e.g., rim bovino e rim suno) ou at tecidos diferentes
de espcies diferentes (e.g., rim bovino e fgado suno).
No contexto deste Manual, chamaremos de novo analito ou de

nova matriz aquele(a) que se deseja incluir no escopo do procedimento
analtico originalmente validado, e de velho analito ou de velha matriz
aquele(a) que foi usado(a) na validao original do procedimento analtico.
Para incluir novos analitos, em procedimento analtico mono ou

multirresduo validado, os parmetros de validao devem ser definidos
para os novos analitos e o desempenho do procedimento analtico, em re-
lao aos demais analitos, necessita ser reavaliado de forma a demonstrar
que a incluso do novo analito no altera o desempenho geral do procedi-
mento analtico para os velhos analitos.
Para a incluso de nova matriz ou novos analitos, os seguintes es-

tudos devem ser apresentados: Linearidade; Seletividade/Efeito Matriz;
Veracidade/Recuperao e Preciso, de forma a comprovar que a incluso
de nova matriz no altera o desempenho do mtodo.
A determinao de CC e CC e da incerteza de medio deve ser

refeita para a nova combinao matriz-analito.
As curvas de calibrao envolvidas nesses estudos devem contem-

plar uma faixa de calibrao que inclua os nveis de interesse (LMR ou
TMC ou LMDR ou LQ) de ambas as matrizes ou, alternativamente, os
nveis de concentrao do analito na nova matriz podem ser diludos ou
pr-concentrados at atingirem a faixa de calibrao na velha matriz.
Para a incluso da nova matriz, o estudo comparativo do efeito de

matriz entre as duas curvas de calibrao envolvendo a nova matriz e a
velha matriz semelhante ao estudo apresentado na seo 4 Seletividade
e Efeito Matriz, da ParteII.
81
Para tanto, aplica-se o teste t para os parmetros a e b das duas cur-
vas analticas para cada analito do escopo do mtodo validado.
V.1 Procedimento de Determinao do Efeito

de Matiz para a Incluso de Nova Matriz
ou Novo Analito Comparando-se Duas
Curvas de Calibrao
Duas matrizes brancas ou extratos de matrizes brancas devem ser
fortificadas em pelo menos cinco nveis de concentrao, obtendo-se cinco
ou mais nveis de calibrao. Os nveis de concentrao devem contemplar
os respectivos nveis de interesse do analito estabelecidos para cada matriz.
A injeo (leitura) no instrumento de medio analtica deve ser feita

em pelo menos seis rplicas por nvel de concentrao em ordem aleatria.
Aps a realizao das duas curvas de calibrao, aplicar o teste t de

Student para verificar a igualdade estatstica dos interceptos a1 e a2 e das
inclinaes b1 e b2 das curvas de calibrao com a velha e a nova matriz da
seguinte forma:
Aplicar o teste F (Fischer-Snedecor), homogeneidade de varin-

cias, para verificar se as varincias dos interceptos da curva de cali-
brao (de calibrao) da velha e da nova matriz so estatisticamente
iguais, calculando-se:
(25)
Onde:
e so as varincias dos interceptos da curva de calibrao

(de calibrao) da velha e da nova matriz com a maior varincia
no numerador.
Ao mesmo tempo obtm-se o valor tabelado de Fa,crit,a,n1,n2 com

n 1 = Nx1 1 graus de liberdade no numerador e n 2 = Nx2 1 graus de
liberdade no denominador. Adotar um nvel de confiana de 95%.
Se Fa,calc for menor que o Fa,crit,a,n1,n2 as varincias podem ser considera-

das iguais. Neste caso, os desvios-padro dos dois interceptos so agrupa-
dos para formar o desvio-padro agrupado sa,p, e a igualdade dos dois in-
terceptos testada com a distribuio t de Student, comparao de mdias.
Desse modo, calculam-se:
82
(26)
Onde:
(27)
e Nx1 e Nx2 so os nmeros de nveis de concentrao independente-

mente replicados das curvas analticas (de calibrao) na velha e na
nova matriz.
O valor tabelado de ta,a,n obtido a partir da tabela da distribuio

de t de Student para n=Nx1+Nx22 graus de liberdade e o nvel de sig-
nificncia desejada a=0,05 (5%) ou nvel de confiana 1a=0,95 (95%).
Se Fa,calc for maior que o Fa,crit,a,n1,n2 tabelado as varincias no podem

ser consideradas estatisticamente iguais. Verifica-se ento o efeito de ma-
triz com a distribuio t de Student, usando a seguinte equao:
(28)
Neste caso, para a obteno do valor crtico tabelado ta,crit,a,n o nme-

ro de graus de liberdade igual a:
(29)
Se o valor de ta,calc for menor que o ta,crit,a,n, pode-se concluir que as

curvas analticas com as duas matrizes tm o mesmo intercepto.
Se o valor de ta,calc for maior que o ta,crit,a,n pode-se concluir que as cur-
vas analticas com as duas matrizes tm interceptos diferentes.
Repetir os testes F e t para as inclinaes b1 e b2, usando-se as mes-

mas equaes eq.(25) a eq.(29) anteriormente citadas, apenas trocando as
letras a por letras b.
83
Se os interceptos a1 e a2 das curvas analticas (de calibrao) da velha
e da nova matriz forem iguais entre si e o mesmo ocorrer com as inclina-
es b1 e b2, ento pode-se incluir a nova matriz no escopo do mtodo vali-
dado e at mesmo usar a curva de calibrao na velha matriz para quantifi-
car o analito na nova matriz. Isto , no h um efeito de matriz significativo
diferenciando a nova matriz da velha matriz.
O estudo do efeito de matriz para a incluso de novos analitos se-

melhante ao descrito nos pargrafos anteriores dessa seo para a incluso
de nova matriz, mas agora comparando a curva de calibrao contendo os
novos analitos juntamente aos velhos analitos com a curva de calibrao
contendo apenas os velhos analitos. Sendo as duas curvas de calibrao na
mesma matriz da validao original para os velhos analitos.
Procede-se ento aos testes F e t das equaes eq.(25) a eq.(29). Se

no houver diferena significativa entre os interceptos a1 e a2, assim como
entre as inclinaes b1 e b2 entre as curvas de calibrao contendo apenas
os velhos analitos e a curva de calibrao contendo simultaneamente os
novos e os velhos analitos, ento no h efeito de matriz devido incluso
dos novos analitos.
V.2 Estudo de Veracidade e Preciso para a

Incluso de Nova Matriz ou Novo Analito
Tendo sido aprovada a incluso da nova matriz ou dos novos anali-
tos atravs da comparao de suas curvas de calibrao, procede-se ento
aos estudos da veracidade e da preciso para cada analito novo e velho
na nova e na velha matriz, conforme mostrado nas sees 5 Veracidade/
Recuperao e 6 Preciso, da Parte II.
Esses novos estudos de veracidade e preciso devero ser feitos em

pelo menos trs nveis de concentraes diferentes (baixa, mdia alta) da
faixa de trabalho, e no LMR/TMC, ou nos LMR/TMC, se forem distintos
nas diferentes matizes.
Se os critrios de veracidade e preciso estabelecidos nas sees 5

Veracidade/Recuperao e 6 Preciso, da Parte II, forem atendidos para a
nova matriz ou para os novos analitos em todos os nveis estudados, as
incluses desejadas ao escopo do procedimento analtico podero ser soli-
citadas ao Mapa.
Se a veracidade e a preciso dos analitos na nova matriz forem iguais

ao da velha matriz, ento a anlise de rotina dos analitos na nova matriz
poder ser feita com a curva de calibrao da velha matriz.
84
PARTE 6
Aspectos Especficos da Validao
PARTE 6
de Procedimentos Analticos para as

Diferentes Categorias de Analitos
Parte VI
Aspectos Especficos da Validao de
Procedimentos Analticos para as Diferentes
Categorias de Analitos
Nesta parte, trataremos das especificidades que devem ser priorita-

riamente observadas na validao dos procedimentos analticos e durante
as determinaes de rotina dos resduos de Medicamentos Veterinrios,
Praguicidas e Contaminantes Orgnicos e Inorgnicos.
Todos os critrios descritos nesta seo devem ser estimados levan-

do-se em considerao as Partes de II a V deste Manual.
VI.1 Resduos de Medicamentos Veterinrios
VI.1.1 Validaes (Requisitos Mnimos e Critrios de Aceitao)
A validao de procedimentos analticos para determinao de me-

dicamentos veterinrios e contaminantes orgnicos em matrizes de origem
animal dever ser conduzida observando-se os seguintes parmetros de
desempenho e os seus respectivos critrios de aceitao:
1. Seletividade;
2. Efeito Matriz;
3. Linearidade;
4. Recuperao/Veracidade;
5. Preciso (Repetitividade);
6. Preciso (Reprodutibilidade Intralaboratorial);
7. Limite de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC);
8. Robustez.
VI.1.2 Seletividade
Analisar um nmero apropriado de amostras brancas e averiguar a

presena de qualquer interferente (pico cromatogrfico, sinal, trao de on)
na regio de interesse que se espera a eluio do analito.
85
Fortificar amostras em branco representativas em uma concentrao
relevante com substncias que possam interferir na identificao e/ou na
quantificao da substncia a analisar.
VI.1.2.1 Critrios de Aceitabilidade da Seletividade
O sinal interferente deve ser < 30% do sinal na concentrao do Me-

nor Nvel Calibrado.
VI.1.3 Efeito de Matriz
Aplicar os procedimentos de avaliao e os critrios de aceitao da

seo 4 Seletividade e Efeito Matriz, da Parte II deste Manual.
Curvas de calibrao em soluo de analito em solvente puro

(CCAS) s podero ser utilizadas se for demonstrada a no existncia de
efeito de matriz.
VI.1.4 Linearidade
Construir uma curva de calibrao com no mnimo cinco nveis de

concentrao, compreendendo 1, 1,5 e 2,0 vezes o LMDR ou 0,5, 1,0 e 1,5
vez o LMR, em cinco ou mais replicatas.
A linearidade deve ser avaliada pela inspeo visual do grfico

gerado pela regresso linear e pela avaliao estatstica dos resduos,
desde que o coeficiente de correlao ou determinao esteja dentro de
critrios aceitveis.
A curva de calibrao no deve ser forada a passar pela origem.
Calcular o coeficiente de correlao ou determinao.
VI.1.4.1 Critrios de Aceitabilidade
O modelo matemtico utilizado para descrever a curva de calibra-

o deve ser adequado.
VI.1.5 Preciso (Repetitividade e Reprodutibilidade Intralaboratorial)
Aplicar os procedimentos de avaliao e critrios de aceitao da

seo 6 Preciso, da Parte II deste Manual.
86
VI.1.6 Veracidade/Recuperao
Com os dados obtidos no ensaio de reprodutibilidade intralaborato-

rial, calcular a recuperao mdia, por nvel de fortificao.
A recuperao mdia deve estar compreendida nos intervalos

especificados na Tabela5 ao redor de 100%, de acordo com as respec-
tivas concentraes.
VI.1.7 Robustez
Um estudo de robustez deve ser realizado demonstrando a estabi-

lidade do mtodo sob diferentes condies, diferentes fabricantes de insu-
mos e colunas cromatogrficas, dentre outras variaes.
VI.1.8 Limite de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC)
Calcular os valores de CC e CC com os dados obtidos durante a

validao do mtodo.
Os valores de CC e CC devem incluir a incerteza do mtodo no

LMR/LMDR.
O clculo dos valores de CC e CC deve ser realizado a partir da

anlise de amostras fortificadas sob condies de reprodutibilidade.
O laboratrio deve garantir que a incerteza do procedimento analti-

co (desvio-padro) seja considerada nos clculos de CC e CC.
Trs abordagens podem ser utilizadas para calcular os valores de

CC e CC:
1. Resultados obtidos nos ensaios de repetitividade e reprodutibi-

lidade intralaboratorial;
2. Resultados obtidos nas CCMBF em dias diferentes;
3. Resultados obtidos a partir de 20 amostras brancas fortificadas

no LMR.
recomendado que periodicamente os valores de CC e CC sejam

atualizados ou confirmados com dados da rotina.
87
VI.1.8.1 Critrios de Aceitao do CC e CC
CC e CC devem ser inferiores ao Limite Mnimo de Desempenho

Requerido (LMDR), no caso de substncias banidas.
VI.1.9 Estudos de Estabilidade
A estabilidade dos analitos utilizados nas anlises deve ser demons-

trada, simulando as condies s quais o laboratrio submete as amos-
tras/padres.
Os estudos de estabilidade podem ser realizados ao longo dos en-

saios de rotina.
VI.1.9.1 Critrio de Aceitao
Os analitos sero considerados estveis quando for observada uma de-

gradao mxima de at 5%, em relao a uma referncia recm-preparada.
VI.1.10 Extenses de Escopo: Incluso de Novos Analitos ou

de Novas Matrizes
Novos analitos ou matrizes que sero includos num mtodo pre-

viamente validado necessitam ser validados usando os mesmos parme-
tros e critrios definidos anteriormente.
De maneira alternativa, a validao de um novo analito ou matriz

pode ser realizada de forma concorrente durante as anlises de rotina.
Para a avaliao da linearidade do novo analito ou matriz devem

ser adotados os mesmos parmetros utilizados na validao do mtodo.
Amostras de Controle de Qualidade (ACQ) podem ser utilizadas

para avaliao da preciso e da veracidade/recuperao do mtodo na va-
lidao concorrente. Para tal, fortificar ACQs em 0,5, 1 e 1,5 vez o LMR ou
1, 1,5 e 2 vezes o LMDR com o analito de interesse.
Repetir o processo em dias diferentes, sob condies de reprodutibi-

lidade intralaboratorial, at que se obtenham seis anlises por nvel.
Calcular a recuperao mdia e o coeficiente de variao por n-

vel fortificado.
Calcular os valores de CC e CC com os dados obtidos.
88
Os valores de recuperao mdia e de coeficiente de variao obti-
dos devem estar dentro dos intervalos aceitveis utilizados na validao
do mtodo para o analito ou a matriz original.
VI.1.11 Curvas de Calibrao e Amostras de Controle de

Qualidade (ACQs) na Rotina Analtica

respaldados pelos estudos de validao do mtodo.
A curva de calibrao utilizada na rotina deve conter pelo menos

cinco nveis (incluindo o zero), devendo esta ter a mesma faixa de trabalho
estudada na validao do mtodo.
Os valores de recuperao obtidos pelos ACQs devem estar dentro

dos limites estabelecidos na Tabela5 ao redor de 100%, de acordo com as
respectivas concentraes.
VI.2 Resduos de Praguicidas (Agrotxicos)

Devido grande diversidade de agrotxicos empregados na agri-
cultura, os procedimentos analticos multirresduos so especialmente re-
comendveis quando se trata de identificao e quantificao de resduos
em matrizes vegetais.
Quando o mtodo for aplicvel a mais de uma matriz, de um mesmo

grupo ou de grupos distintos de produtos, seu credenciamento poder ser
solicitado apenas com os dados da validao obtidos com a matriz repre-
sentativa. Entretanto, durante a rotina analtica, uma validao simultnea
ou concorrente deve ser conduzida objetivando avaliar o comportamento
do mtodo para as demais matrizes do grupo componente do escopo, de
forma a garantir que o mtodo aplicvel de maneira integral a todas as
matrizes que fazem parte do escopo.
De maneira sistemtica, os parmetros que impactam na qualidade

analtica precisam ser monitorados, conforme descrito na Parte IV A Ro-
tina Analtica e o Controle de Qualidade Analtica, de modo a garantir durante
a rotina analtica que o mtodo continua operando dentro dos parmetros
preconizados. Caso seja observada uma tendncia significativa ou siste-
mtica de desvio dos parmetros, procedimentos devem ser adotados no
intuito de se identificar e corrigir as causas provveis do desvio.
89
VI.2.1 Matrizes Representativas
Para utilizao de matriz representativa, os seguintes critrios de-

vem ser observados:
1. No mnimo uma matriz representativa por grupo de produtos

deve ser avaliada durante a validao, fato indispensvel ao
credenciamento de determinado procedimento analtico.
2. Quando um mtodo for implementado na rotina para uma va-

riedade de matrizes de um mesmo grupo, dados complemen-
tares devero ser coletados de forma a consolidar a validao
concorrente para todas as matrizes do grupo credenciado/
autorizado por intermdio da matriz representativa.
3. Na seleo da matriz representativa, devem ser utilizados os

critrios estabelecidos na Tabela A.XI.1 (CAC/GL 40-1993,
Rev.1-2003), anexa.
4. Matrizes representativas podem ser utilizadas na validao de

mtodos mono e multirresduos.
VI.2.2 Analitos Representativos
1. Todos os analitos contemplados pelo escopo do mtodo neces-

sitam ser validados.
2. Preferencialmente, cada batelada de amostras a ser analisa-

da deve ter uma curva de calibrao contemplando todos
os analitos do escopo do mtodo. Na impossibilidade desse
procedimento, a curva de calibrao deve ser construda uti-
lizando pelo menos o nmero mnimo determinado de anali-
tos representativos.
3. A escolha desses analitos representativos deve ser feita muito

cuidadosamente, de modo a prover evidncia de que represen-
ta o escopo do ensaio. Dessa forma, a escolha deve ser feita de
acordo com a probabilidade de se encontrar determinados re-
sduos na amostra e com as caractersticas fsico-qumicas dos
analitos, optando-se pelos analitos mais crticos (e.g., com res-
posta mais crtica e varivel).
4. O nmero mnimo de curvas de calibrao dos analitos a serem

determinados deve ser 15 analitos mais 25% do total envolvido
no escopo do mtodo. Por exemplo, para um mtodo que possui
em seu escopo 100 analitos, a curva de calibrao deve ser feita
com pelo menos 40 analitos representativos.
90
5. Se o escopo do mtodo for igual ou inferior a 20 analitos, ento
todos os analitos devem ser calibrados.
6. Sempre que uma substncia ultrapassar seu LMR (no confor-

midade) e no fizer parte dos analitos representativos calibra-
dos e dos estudos de recuperao da batelada, o resultado de-
ver ser considerado uma tentativa at a sua calibrao. Assim,
uma nova calibrao deve ser feita, contemplando os analitos
no conformes, alm de um estudo de recuperao do analito
na matriz da respectiva amostra.
VI.2.3 Validaes (Requisitos Mnimos e Critrios de Aceitao)
A validao de procedimentos analticos para determinao de agro-

txicos em matrizes de origem vegetal e animal dever ser conduzida aten-
dendo aos critrios mnimos dos seguintes parmetros de desempenho:
1. Seletividade (interferentes);
2. Efeito Matriz;
3. Linearidade;
4. Recuperao/Veracidade;
5. Preciso (Repetitividade e Reprodutibilidade intralaboratorial);
6. Limite de Quantificao;
7. Limite de Deteco;
8. Robustez;
9. Incerteza de Medio.
VI.2.4 Seletividade (Interferentes)
Analisar no mnimo seis amostras brancas, preferencialmente de

seis fontes distintas, e verificar as possveis interferncias (sinais e picos no
tempo de reteno em que se prev a eluio do analito).
O sinal do interferente deve ser < 30% do sinal na concentrao do

Menor Nvel Calibrado.
91
VI.2.5 Efeito Matriz

seo 4 Seletividade e Efeito Matriz, na Parte II deste Manual.
Curvas de calibrao em soluo s podero ser utilizadas se de-

monstrada a ausncia de efeito matriz.
VI.2.6 Linearidade
Construir uma curva de calibrao com no mnimo cinco nveis de

concentrao, compreendendo os valores de LQ e preferencialmente o
LMR, em cinco ou mais replicatas.
Calcular o coeficiente de correlao ou determinao e as porcenta-

gens dos resduos individuais da curva.
Os resduos de regresso individuais no devem ser maiores que

20% em relao resposta obtida na curva de calibrao.
Quando esses pontos se aproximam ou excedem o LMR (Limite M-

ximo de Resduo), esse valor no deve ser maior que 10%.
Um valor de resduo, em cada nvel, acima de tais limites pode

ser rejeitado por um teste de outlier, desde que o coeficiente de correla-
o ou determinao permanea dentro dos critrios de aceitabilidade
do laboratrio.
VI.2.7 Veracidade/Recuperao e Preciso (Repetitividade e

Reprodutibilidade Intralaboratorial)
Realizar a fortificao de, no mnimo, cinco replicatas de amostras

em dois nveis de concentrao: em um nvel baixo que corresponda ao
Limite de Quantificao (LQ) e em um nvel mais alto, preferencialmen-
te no LMR.
Para a determinao da reprodutibilidade intralaboratorial (preci-

so intermediria), repetir os procedimentos acima, no mnimo em mais
duas ocasies (em condies de reprodutibilidade).
Calcular as porcentagens de recuperao e coeficientes de variao

(CV) das replicatas por nvel de concentrao.
92
O procedimento analtico deve ser capaz de recuperar, em cada n-

vel de fortificao e para cada matriz representativa, de 70% a 120% em
mdia para todos os analitos, com uma preciso de CV 20%.
Excepcionalmente, quando a recuperao baixa, porm consisten-

te (i.e., demonstra boa preciso) e a razo para isso bem estabelecida (e.g.
devido distribuio do agrotxico no processo de partio), uma recupe-
rao abaixo de 70% pode ser aceitvel. Entretanto, um mtodo mais exato
deve ser usado, se praticvel.
A reprodutibilidade intralaboratorial deve ser 20 %, excluindo

qualquer contribuio devida heterogeneidade da amostra.
VI.2.8 Limites de Quantificao
O limite de quantificao do procedimento analtico definido como

o nvel mais baixo no qual foi demonstrado que os critrios de veracidade
e preciso foram atendidos, desde que a relao sinal/rudo seja superior
a seis (S/R 6).
VI.2.9 Limites de Deteco
Limite de deteco do equipamento definido como a concentrao do

analito que produz um sinal de trs vezes a razo sinal/rudo do equipamento.
Para determinar o limite de deteco, diluir o padro, a critrio do

analista, at um nvel de concentrao detectvel.
Injetar em triplicata e utilizar o valor mdio.
Estimar a concentrao correspondente a um sinal equivalente a trs

vezes o rudo.
VI.2.10 Robustez
A robustez do mtodo deve ser demonstrada por intermdio de:
1. Estudos de pr-validao e otimizao do mtodo;
2. Monitoramento por intermdio dos resultados das amostras

controle e verificaes de desempenho do sistema.
Outros estudos podem ser realizados, desde que devidamente

embasados.
93
VI.2.11 Incerteza de Medio
A incerteza de medio deve ser estimada segundo procedimento

estabelecido na seo 8 Incerteza de Medio Analtica (IMA), da Parte II,
deste Manual.
A incerteza de medio expandida (U) relativa dever ser inferior

ou igual a 50% (nvel de confiana de 95%).
VI.2.12 Estudos de Estabilidade (Orientao Geral)
O estudo de estabilidade deve simular as condies nas quais o la-

boratrio submete as amostras/padres (e.g. se o laboratrio armazena
as amostras congeladas por 24 horas, ele deve provar a estabilidade dos
analitos nas amostras nesse perodo, nas mesmas condies).
Os estudos de estabilidade podem ser realizados de forma concor-

rente aos ensaios de rotina.
VI.2.13 Extenses de Escopo (Novos Analitos)
Quando se desejar incluir novos analitos a um mtodo previamente

validado, o laboratrio deve utilizar os mesmos parmetros e critrios defini-
dos anteriormente para garantir sua adequao (validao) aps a incluso.
De maneira alternativa, a validao de novo analito pode ser reali-

zada de forma concorrente, por intermdio do uso de amostras de controle
de qualidade durante as anlises de rotina (e.g. com cada lote de amostras
da rotina, um ou mais produtos da categoria so fortificados na concen-
trao do LQ e em um nvel maior preferencialmente prximo ao Limite
Mximo de resduo.
Determinar a recuperao e ocorrncia de alguma interferncia no

branco de amostra correspondente.
Aps a coleta de cinco dados por nvel de fortificao, calcular a

recuperao mdia e a reprodutibilidade intralaboratorial (CV), sendo que
estes valores devem atender aos critrios descritos na validao.
94
VI.2.14 Calibraes Analticas e Recuperao (Rotina Analtica)

respaldados pelos estudos de validao do mtodo.
Todo resultado acima do LQ deve ser quantificado com o uso de

curva de calibrao e recuperao obtidas de uma matriz do mesmo gru-
po, preferencialmente da mesma matriz da amostra quantificada.
VI.2.14.1 Calibrao Utilizando um nico Nvel de Concentrao
A resposta da amostra necessita estar dentro de 20% da resposta

do padro de calibrao, nos casos em que o LMR ultrapassado.
Se o LMR no for excedido, a resposta da amostra deve estar dentro

de 50% da resposta do padro de calibrao.
VI.2.14.2 Calibrao por Interpolao de Dois Nveis

de Concentrao
Calibrao deve ser feita em triplicata.
A diferena entre os dois nveis no pode ser maior que um fator 4.
As respostas mdias, obtidas de determinaes em replicatas para

cada nvel, devem indicar linearidade aceitvel de resposta, com o maior
fator no representando mais de 120% do mais baixo fator de resposta
(110%, nos casos em que o LMR alcanado ou excedido).
VI.2.14.3 C
alibrao Utilizando Trs ou Mais Nveis
de Concentrao
Neste caso uma funo de calibrao pode ser utilizada para o cl-
culo da concentrao, dentro da faixa contemplada pelo maior e menor
valor da curva de calibrao.
A curva no deve ser forada a passar pela origem.
A linearidade deve ser definida pela inspeo visual do grfico ge-

rado pela regresso linear simples e/ou pela avaliao estatstica dos res-
duos de regresso, desde que o coeficiente de correlao ou determinao
esteja dentro dos critrios de aceitabilidade preconizados.
95
Se algum resduo de regresso, de cada nvel de concentrao, ex-
ceder 20% ( 10% no LMR ou acima dele), uma calibrao alternativa
deve ser utilizada. Geralmente, o uso de uma regresso linear pondera-
da recomendado.
VI.2.14.4 Frequncia Mnima de Calibrao na Rotina Analtica

Todos os Outros Analitos
Analitos Representativos
do Escopo do Mtodo
Dentro de um Programa
Frequncia Mnima de A cada batelada de anlise Contnuo de Anlise a
Calibrao cada trs trs meses
Pelo menos um ponto de Pelo menos um ponto de
calibrao deve contem- calibrao deve contem-
plar o LQ plar o LQ
VI.2.14.5 Determinao da Recuperao na Rotina Analtica
Os nveis de fortificao para determinao das recuperaes dos

analitos devero estar na faixa de calibrao (e.g. no LMR), ou dentro de
um nvel de relevncia para as amostras analisadas. Esse nvel de fortifica-
o deve ser alternado ao longo do tempo.
Sempre que possvel, a recuperao dos analitos do escopo deve ser

determinada em cada batelada de anlise.
Entretanto, a frequncia mnima aceitvel :

Todos os Outros Analitos
Analitos Representativos
do Escopo
Dentro de um programa
Frequncia Mnima
10% dos Analitos repre- contnuo, para incluir to-
de Determinao da
sentativos (pelo menos dos os outros analitos, no
Recuperao
cinco em cada batelada mnimo a cada 12 meses,
de anlises). mas preferencialmente a
cada seis meses.
VI.2.14.5.1 C
ritrios de Aceitao do Desempenho de Recuperao na
Rotina Analtica
A recuperao mdia calculada a partir de um grupo de produtos

(diferentes matrizes).
Limites aceitveis para uma nica recuperao devem normalmente

estar na faixa da recuperao mdia 2 x %DPR e podem ser ajustados
usando dados de reprodutibilidade intralaboratorial (recuperao de roti-
na) ou repetitividade (validao inicial).
96
Entretanto, uma faixa generalizada de 60 a 140% pode ser usa-
da na anlise de rotina de multirresduos. Recuperao fora dessa faixa
usualmente requer reanlise do grupo, mas pode ser admitida em certos
casos justificados. Todavia, recuperaes consistentemente elevadas de-
vem ser investigadas.
Se uma tendncia significativa ocorrer na recuperao ou se resulta-

dos potencialmente inaceitveis (DPRs maiores que 20%) forem obtidos,
as causas devem ser investigadas.
VI.3 Contaminantes Inorgnicos
VI.3.1 Validao (Requisitos Mnimos e Critrios de Aceitao)
Os parmetros a serem calculados durante o processo de validao

de mtodos para a determinao de contaminantes inorgnicos em atendi-
mento s demandas do PNCRC so:
1. Linearidade;
2. Seletividade e Efeito Matriz;
3. Limite de deteco;
4. Limite de quantificao;
5. Preciso (repetitividade e reprodutibilidade intralaboratorial);
6. Recuperao/veracidade;
7. Robustez;
8. Incerteza de Medio.
Antes do processamento dos dados obtidos durante a validao,

recomenda-se avaliar os desvios-padro relativos entre as leituras de cada
replicata e a existncia de valores dispersos (outliers).
VI.3.2 Linearidade
A maioria dos equipamentos de medio existentes estabelece a sua

faixa dinmica linear. necessrio, entretanto, verificar at que ponto a fai-
xa de concentrao do analito coincide com a faixa dinmica linear e asse-
gurar que nenhum outro fenmeno tenha impacto indesejvel na resposta.
A faixa de trabalho e a curva de calibrao devem ser estabelecidas

a partir das concentraes nas quais a linearidade constatada.
97
A linearidade obtida por padronizao interna e externa, formu-
lada como expresso matemtica usada para o clculo da concentrao do
analito a ser determinado na amostra real.
A equao da reta que relaciona a resposta instrumental medida

com a concentrao do analito :
Y = a + BC (30)
Onde:
A = Absorvncia;
b = Inclinao da curva de calibrao (sensibilidade);
c = Concentrao/massa;
a = Interseo com o eixo y, quando c = 0.
Os padres utilizados na construo da curva de calibrao em es-

pectrometria atmica devem ser preparados numa soluo que correspon-
da tanto quanto possvel da soluo da matriz a analisar (por exemplo,
relativo concentrao de cido ou composio).
O trabalho em condies de atomizao isotrmica (por exemplo,

tubo de grafite aquecido transversalmente com plataforma de Lvov inte-
grada) reduz a influncia da matriz na atomizao do analito quando com-
binada com o uso de modificador qumico e com corretor de fundo Zeeman.
A ausncia de interferncias deve ser demonstrada para a adoo da

padronizao externa.
VI.3.2.1 Procedimento de Estimao da Linearidade
Na construo da curva de calibrao devem-se usar seis replicatas

de cada nvel e, pelo menos, cinco nveis de concentrao. Cada uma das
replicatas deve ser lida trs vezes.
Sempre que possvel, empregar os nveis equivalentes ao TMC na

construo da curva de calibrao. Nos casos em que a faixa de concentra-
o do analito no coincidir com a faixa linear do equipamento, deve-se
adequar a faixa capacidade de medio do equipamento.
O primeiro ponto da curva de calibrao deve corresponder ao va-

lor do limite de quantificao. O limite superior da curva geralmente
restringido pela resposta do equipamento. Quando possvel, o nvel de 2,0
TMC dever ser includo.
98
As solues padro devem ser preparadas e a curva de calibrao
deve ser construda da mesma forma como sero empregadas na rotina.
Verificar a ausncia de valores discrepantes para cada nvel de

concentrao, utilizando testes estatsticos apropriados. Recomenda-
-se o emprego do teste de Dixon. Para tanto, os seguintes passos de-
vem ser observados:
1. Ordenar os valores em ordem crescente, isto : x1 < x2 < x3 <...<

xn-1 < xn;
2. Supor a hiptese de que o menor valor, x1, e o maior valor, xn,

so possveis valores dispersos (outliers);
3. Selecionar o risco desejado de falsa rejeio (5%) ou o nvel de

confiana (95%) ;
4. Empregar as seguintes equaes, de acordo com o tamanho

da amostra:
n Razo xn suspeito x1 suspeito
3n7 t10 (xn xn-1)/(xn x1) (x2 x1)/(xn x1)
8 n 10 t11 (xn xn-1)/(xn x2) (xn x1)/(xn-1 x1)
11 n 13 t21 (xn xn-2)/(xn x2) (x3 x1)/(xn-1 x1)
14 n 25 t22 (xn xn-2)/(xn x3) (x3 x1)/(xn-2 x1)
5. Comparar as razes calculadas com os valores da tabela de Dixon.
Verificar a homoscedasticidade, a independncia e a normalidade

da distribuio dos resduos. Recomenda-se o emprego dos testes: Levene,
Durbin-Watson e Anderson-Darling, respectivamente.
Os testes de Dixon, Levene e Durbin-Watson so aplicveis apenas

quando os dados so normais.
Alternativamente, quando possvel, a avaliao dos resduos pode

ser realizada a partir dos dados obtidos de, no mnimo, quatro curvas de
calibrao construdas em dias diferentes. Dessa forma, a avaliao da
linearidade refletir de maneira mais fidedigna a rotina analtica. Nesse
caso, o nmero de replicatas e leituras podero ser os mesmos utilizados
na rotina.
Verificar a homoscedasticidade (homogeneidade das varincias dos

resduos) dos dados, empregando o teste de Levene.
Dada a varivel Y, com m nveis, dividida em j subgrupos, onde nj

o nmero de replicatas do nvel u, calcular o valor de F:
99
(31)
Onde:
Verificar a se os resduos so independentes (aleatrios) pelo empre-

go do teste de Durbin-Watson. Calcular o valor de D:
(32)
Verificar se os resduos possuem distribuio normal pelo emprego

do teste de Anderson-Darling:
1. Ordenar os resduos.
2. Calcular a probabilidade acumulada do resduo padronizado:
100
Onde:
3. Calcular as quantidades:
4. Calcular o valor de A:
Onde:
5. Calcular a estatstica AA:
6. Calcular o valor do p-teste:
(33)
VI.3.2.2 Critrios de Aceitao da Linearidade
O desvio-padro relativo mximo entre as replicatas deve ser esta-

belecido a partir de dados histricos, dados fornecidos pelo fabricante do
equipamento ou em consonncia com a tcnica utilizada.
A partir do teste de Dixon, se o valor encontrado para a razo for

maior que o valor tabelado, ento a suposio de outlier existe e o valor
discrepante deve ser descartado.
Para a avaliao da varincia dos resduos usando o teste de Levene, se:
Fc Ft, os resduos so homocedsticos
Fc > Ft, os resduos so heterocedsticos
101
Dado o teste de Durbin-Watson, os resduos sero independentes
se D 1,5.
Dado o teste de Anderson-Darling os resduos possuem distribuio

Normal, se:
p-valor < 0,05 os resduos so normais
p-valor 0,05 os resduos no so normais
Descartados os valores discrepantes e, em se tratando da varincia ho-

mognea dos resduos e distribuio normal dos dados (resduos aleatrios).
Definir a equao da regresso linear e o coeficiente de determina-

o, R , a partir do mtodo dos mnimos quadrados ordinrios.
2
O valor mnimo de R2 deve ser 0,995. Caso esse valor no seja obti-
do, aplicar o teste t para R2 descrito no Anexo III deste Manual.
VI.3.3 Seletividade e Efeito Matriz
Realizar os procedimentos descritos na seo 4 Seletividade e Efeito

Matriz, da Parte II deste Manual, para a estimao do efeito matriz.
Os experimentos para avaliao da seletividade devem ser condu-

zidos, no mnimo, para os nveis: 0,2 e 1,0 TMC. Recomenda-se o uso do
analito em solvente puro e do analito em matriz branca. Dessa forma, parte
do experimento poder ser utilizada para a extenso de escopo.
VI.3.3.1 Critrios de Aceitao da Seletividade e Efeito Matriz
A variao mxima permitida entre a mdia do valor obtido para

cada nvel das amostras fortificadas e as solues padro no deve ser su-
perior a 10%.
Caso os critrios de aceitao no sejam alcanados, a linearidade,

a veracidade e a preciso estaro seriamente comprometidas, sendo neste
caso necessrio que a curva de calibrao seja construda a partir de amos-
tras brancas fortificadas aps a digesto.
VI.3.4 Limite de Deteco
Limite de deteco o teor mnimo a partir do qual possvel dedu-

zir a presena do analito com certeza analtica razovel (95% de confiana).
102
VI.3.4.1 Procedimento de Avaliao do Limite de Deteco
Realizar a anlise de, no mnimo, 21 replicatas da matriz branca e

utilizar os valores obtidos para calcular:
LD = 3 s (34)
Onde:
s = desvio-padro da mdia dos ensaios com matriz branca (n > 20).
Neste caso, matriz branca aquela que apresenta concentrao que

no interfere nos resultados das determinaes, podendo considerar, mas
no se limitar a:
1. Concentrao de um composto na matriz que resulte em um

sinal do equipamento muito abaixo ao sinal no LQ;
2. Ausncia do sinal.
VI.3.4.2 Critrios de Aceitao do Limite de Deteco
O LD deve ser menor que um dcimo do TMC, exceto se o TMC de

chumbo for inferior a 100 g kg-1. Neste caso, o LD deve ser menor que um
quinto do TMC.
VI.3.5 Limite de Quantificao
Teor mnimo medido a partir do qual possvel medir o analito com

certeza estatstica razovel (95% de confiana).
Se a veracidade e a preciso so constantes em uma gama de con-

centraes centrada no limite de deteco, o limite de quantificao nu-
mericamente igual a seis ou dez vezes o desvio-padro da mdia de en-
saios em branco (n > 20).
VI.3.5.1 Procedimento para avaliao do Limite de

Quantificao
Utilizar os resultados obtidos no ensaio de LD e calcular:
LQ = 10 s (35)
Onde:
s = desvio-padro da mdia dos ensaios com matriz branca (n > 20).
103
VI.3.5.2 Critrios de Aceitao do Limite de Quantificao
O LQ deve ser menos de um quinto do TMC, exceto se o TMC de

chumbo for inferior a 100 g kg-1. Neste caso, o LQ deve ser igual a menos
de dois quintos do TMC.
A confirmao do valor do LQ deve ser realizada, no mnimo com

seis replicatas, a partir da matriz branca fortificada no respectivo nvel
do LQ. Os resultados devem alcanar valores de recuperao de acordo
com a Tabela:
c (g kg-1) Intervalo
1 - 50% a + 20%
> 1 a 10 - 30% a + 10%
10 - 20% a + 10%
(CE 657/2002)
VI.3.6 Preciso
A preciso do mtodo avaliada por meio da repetitividade e da

reprodutibilidade intralaboratorial (ou preciso intermediria).
VI.3.6.1 Procedimentos para Avaliao da Repetitividade
Preparar, no mnimo, seis replicatas de matrizes brancas fortificadas

em dois nveis de concentrao: 0,2 1,0 TMC. Realizar o experimento, no
mnimo, por duas vezes em condies de repetitividade.
Calcular, a partir dos resultados obtidos, a concentrao de cada

amostra, a concentrao mdia para cada nvel de adio, o desvio-padro
(sr) e o desvio-padro relativo em condies de repetitividade (RSDr).
Calcular o desvio-padro relativo terico para cada nvel de concen-

trao utilizando a equao de Horwitz:
RSDHorwitz=2(1 0,5 logC) (36)
Onde:
C: a frao mssica expressa sob a forma de uma potncia de dez.
C: Concentrao (g kg-1) 10-9
Calcular o valor de HORRAT em condies de repetitividade,

HORRATr , segundo a equao:
104
(37)
Onde:
PDPRR : (desvio-padro relativo predito) = 2 C-0,15
C = Concentrao (g kg-1) 10-9
Calcular o limite de repetitividade r, segundo a equao:
r = 2,8 x Sr (38)
VI.3.6.1.1 Critrios de Aceitao da Repetitividade
No caso de anlises de amostras em condies de repetitividade, o

desvio-padro relativo (DPRr) da mdia deve ser menor que dois teros do
valor do DPRHorwitz.
Os valores HORRATr devem ser inferiores a 1.
VI.3.6.2 Procedimentos para Avaliao da Reprodutibilidade

Intralaboratorial ou Preciso Intermediria
Preparar, no mnimo, seis replicatas de amostras em dois nveis de

concentrao: 0,2 1,0 TMC.
Repetir o experimento por pelo menos duas vezes, em dias diferen-

tes, em condies de reprodutibilidade.
Calcular a concentrao obtida para cada replicata e a concentrao

mdia, o desvio-padro, o desvio-padro relativo de cada dia e o desvio-
-padro relativo global para cada nvel.
Calcular o valor de HORRAT em condies de reprodutibilidade

intralaboratorial, HORRATR, segundo a equao:
(39)
Onde:
PRSDR (desvio-padro relativo predito) = 2 C-0, 15
C = Concentrao (g kg-1) 10-9
105
Calcular o limite de reprodutibilidade R, segundo a equao:
R = 2,8 x sR (40)
VI.3.6.2.1 Critrios de Aceitao para Reprodutibilidade Intralaboratorial
No caso de anlises de matrizes brancas fortificadas em condies

de reprodutibilidade intralaboratorial, o desvio-padro relativo (DPR) in-
tralaboratorial dos resultados no deve exceder o valor de DPRHorwitz.
Os valores HORRATR devem ser inferiores a 1.
VI.3.7 Procedimentos para Estimao da Veracidade/Recuperao

utilizando Material de Referncia (MR) ou o Material de
Referncia Certificado (MRC)
O MRC ideal deve apresentar concentraes similares ao TMC na

matriz de interesse.
Quando um MRC apropriado no est disponvel, podem ser utili-

zados materiais de referncia (MR) obtidos a partir de ensaios de profici-
ncia. No caso do emprego do MR, utilizar a incerteza do valor estimado
por consenso.
Analisar, no mnimo, seis replicatas das amostras de MR/MRC em

conformidade com as instrues para o mtodo.
Calcular a mdia, o desvio-padro e o desvio-padro relativo.
Calcular a veracidade pela:
(41)
A veracidade verificada comparando-se a mdia dos resultados

obtidos para o MR/MRC, com o valor aceito como verdadeiro, m, confor-
me procedimento a seguir:
Calcular a incerteza do processo de medio (expressa pelo seu des-

vio-padro), D, pela equao:
(42)
106
Onde:
sL a incerteza do MR/MRC informada e s o desvio-padro

das medidas.
VI.3.7.1 Critrios de Aceitao da Veracidade Empregando

MRC/MR
Se , o processo de medio apresenta a veracida-

de adequada.
Se , o processo de medio no apresenta a veracida-

de adequada.
VI.3.8 Procedimentos para Estimao da Preciso (Repetitividade)

utilizando Material de Referncia (MR) ou o Material de
Referncia Certificado (MRC)
A repetitividade de um processo de medio obtida a partir de um

MR ou MRC avaliada comparando-se o desvio-padro das medidas (s)
com o valor requerido do desvio-padro intralaboratrio (swo).
O swo pode ser calculado a partir da frmula:
(43)
Onde:
m o valor de concentrao estabelecido para o MR/MRC e RSD o

desvio-padro relativo aceitvel para a faixa de frao mssica que
compreende m, de acordo com a Tabela:
c (g kg-1) DPR (%)

10 a 100 20
> 100 a 1000 15
1000 10
(CE 657/2002)
Calcular a seguinte razo:
(44)
107
E comparar com o respectivo valor tabelado, de acordo com
a equao:
(45)
Observao: Na tabela, usar o valor da rea de probabilidade de 1 - 0,95,

ou seja, 0,05 (ou 0,95 quantil da distribuio x2).
VI.3.8.1 Critrios de Aceitao da Preciso (Repetitividade)

Calculada com o Uso de MR e MRC
Se , o processo de medio apresenta a preciso intrala-

boratorial requerida.
Se , o processo de medio no apresenta a preciso in-

tralaboratorial requerida.
Quando os MRCs no estiverem disponveis, aceita-se que a veraci-

dade das medies seja avaliada por meio da recuperao de quantidades
conhecidas do analito adicionadas s matrizes brancas. Chama-se ateno
para o fato de que quando, ao contrrio da contaminao natural, o analito
adicionado no se encontra ligado quimicamente matriz real, os resulta-
dos obtidos com esse mtodo so menos fiveis.
VI.3.9 Procedimentos para a Avaliao da Recuperao/Veracidade
Utilizar os dados obtidos no ensaio de repetitividade.
Calcular a recuperao mdia em cada nvel, segundo estabelecido

na seo 5 Veracidade/Recuperao, da Parte II deste Manual.
VI.3.9.1 Critrios de Aceitao da Recuperao
Os critrios de aceitao esto estabelecidos na seo 5 Veracidade/

Recuperao, da Parte II deste Manual.
VI.3.10 Procedimentos para a Avaliao da Robustez
Para avaliao da robustez do mtodo, recomenda-se o teste de

Youden. Planejamentos fatoriais fracionrios alternativos so descritos no
Anexo XII, deste Manual.
108
Selecionar os fatores a serem avaliados, seus valores nominais (des-
critos no mtodo) e os respectivos valores de variao, preenchendo uma
tabela de acordo com o exemplo:
Fator Nominal Variao

Massa de amostra (g) 5,00 7,50
Volume de HNO3 (concentrado) (mL) 15,0 12,0
Volume de HCl (concentrado) (mL) 5,0 4,0
Temperatura de aquecimento (C) 100 120
Tempo de aquecimento (h) 1,0 1,5
Continer Cadinho Bquer
Agitao Sim No
Executar o ensaio com as combinaes da Tabela a seguir em du-

plicata e aleatoriamente, inclusive entre as replicatas de cada combinao.
Combinao para os ensaios

Valor do fator
1 2 3 4 5 6 7 8
A/a A A A A a a a a
B/b B B b b B B b b
C/c C c C c C c C c
D/d D D d d d d D D
E/e E e E e e E e E
F/f F f f F F f f F
G/g G g g G g G G g
Resultado Observado S T U V W X Y Z
Calcular a mdia e a varincia (s2) para cada combinao de ensaio.
Para determinar o efeito da variao de um fator, encontrar os qua-

tro valores correspondentes s letras maisculas e subtrair dos quatro os
valores correspondentes s letras minsculas, segundo a equao:
(46)
Calcular o efeito para todos os fatores e construir um grfico de bar-

ras horizontais com os resultados, usando o mdulo dos valores.
Estimar a varincia de todos os efeitos empregando a equao:
(47)
Onde:
ni = ni 1 o nmero de graus de liberdade de si2; a estimativa da

varincia do i-simo ensaio.
109
Calcular o erro padro do efeito aplicando a equao:
(48)
Multiplicar o valor do erro puro por 2,306 (valor do t de Student para

oito graus de liberdade, com 95% de confiana, realizados em duplicata)
para traar a linha de significncia dos efeitos no grfico de barras.
Calcular se h diferena estatstica significativa (95%) entre os va-

lores dos resultados obtidos para maisculas e minsculas, empregando
o teste F.
Calcular o desvio-padro dos efeitos (sDi) pela frmula:
(49)
Onde:
D1 valor do efeito (ou diferena).
VI.3.10.1 Critrios de Aceitao da Robustez
Se o valor de algum efeito ultrapassar a linha de significncia do

grfico de barras, pode-se consider-lo significativo e recomenda-se im-
plantar um controle nesta etapa do processo. Caso seja necessrio, reco-
menda-se aprofundar o estudo sobre a influncia dos fatores significativos,
realizando-se um planejamento fatorial completo para eles.
O mtodo ser robusto se Ftabelado for maior que Fcalculado;
O SDi deve ser menor que o desvio-padro obtido em condies de

reprodutibilidade intralaboratorial.
Sempre que o SDi for significativamente maior que o desvio-padro

do mtodo, em condies de reprodutibilidade intralaboratorial, pode
deduzir-se que o conjunto dos fatores tem influncia no resultado, mesmo
que cada fator isoladamente no influencie significativamente, e que o m-
todo no suficientemente robusto face s alteraes ensaiadas;
Observao: A avaliao entre o SDi e o desvio-padro do mtodo em con-

dies de reprodutibilidade pode ser realizada pelo teste F.
110
VI.3.11 Procedimentos para a Avaliao da Incerteza de Medio
Recomenda-se estimar a incerteza de medio segundo procedi-

mento estabelecido na seo 8 Incerteza de Medio Analtica, da Parte II
deste Manual.
VI.3.11.1 Critrios de Aceitao da Incerteza de Medio
Os procedimentos analticos aplicados ao controle oficial devem pro-

duzir resultados cujas incertezas de medio padro sejam inferiores in-
certeza de medio padro mxima calculada por meio da seguinte frmula:
(50)
Onde:
Uf = incerteza de medio padro mxima (g kg-1).
LD = limite de deteco do mtodo (g kg-1).
c = corresponde concentrao em causa (g kg-1).
= um fator numrico cuja utilizao depende de c.
Os valores de a serem utilizados se encontram na tabela a seguir:
c (g kg-1)
50 0,2
51 a 500 0,18
501 a 1.000 0,15
1.001 a 10.000 0,12
> 10.000 0,1
VI.3.12 Procedimentos para Extenso de Escopo (Novas Matrizes)
Para a incluso de novas matrizes em procedimentos analticos vali-

dados devem ser avaliados, no mnimo, os parmetros: Seletividade/Efei-
to Matriz, Veracidade/Recuperao e Repetitividade.
Os estudos devem ser conduzidos nos nveis de 0,2 e 1,0 TMC refe-
rentes matriz nova.
111
Para a avaliao da Seletividade/Efeito Matriz, realizar os procedi-
mentos descritos na seo 4 Seletividade e Efeito Matriz, da Parte II deste
Manual. Neste caso, as comparaes devem ser realizadas entre analito na
matriz branca nova e analito na matriz branca velha. Recomenda-se que
os experimentos conduzidos na extenso de escopo sejam efetuados na
matriz velha e nova simultaneamente, ou seja, no mesmo dia.
Com os dados obtidos a partir do procedimento de Seletividade/Efei-

to Matriz, avaliar os parmetros Veracidade/Recuperao e Repetitividade.
Para fins da extenso de escopo, a avaliao da Repetitividade po-

der ser realizada em apenas um dia.
Observao: Em alguns casos, mesmo os experimentos sendo conduzidos

em sua totalidade como proposto acima, recomenda-se a avaliao da exati-
do com o uso de MRC/MR referente matriz nova. Tal recomendao visa
garantir que a aplicao do procedimento analtico no influenciada pelas
espcies qumicas (orgnicas e inorgnicas) presentes em amostras natural-
mente contaminadas, ou mesmo possveis interaes entre o analito e a ma-
triz. Um exemplo de procedimento analtico que apresenta forte influncia
das espcies qumicas a determinao de arsnio total em pescados.
VI.3.12.1 Critrios de Aceitao da Extenso de Escopo

(Novas Matrizes)
Utilizar o critrio de aceitao para o parmetro Seletividade/

Efeito Matriz descrito na seo 4 Seletividade e Efeito Matriz, da Parte II
deste Manual.
Para os demais parmetros, utilizar os critrios estabelecidos nes-

ta seo.
VI.4 Micotoxinas
Devido ocorrncia natural de diferentes micotoxinas em um mes-
mo produto de origem vegetal ou animal, os procedimentos analticos
multitoxinas so preferencialmente recomendveis.
Quando o procedimento analtico for destinado aplicao a mais

de uma matriz, de uma mesma classe ou de classes distintas de produtos,
seu credenciamento poder ser solicitado apenas com os dados da vali-
dao obtidos para a matriz representativa. Entretanto, validaes curtas
devem ser conduzidas objetivando avaliar o comportamento do procedi-
mento analtico para as demais matrizes do grupo componente do escopo,
de forma a garantir que o procedimento analtico seja aplicvel integral-
112
mente a todas as matrizes integrantes do escopo, conforme procedimentos
descritos neste item.
De maneira sistemtica, os parmetros que impactam na qualidade

analtica precisam ser monitorados, conforme descrito na Parte IV A Ro-
tina Analtica e o Controle de Qualidade Analtica, de modo a garantir durante
a rotina analtica que o procedimento analtico continua operando dentro
dos parmetros preconizados.
VI. 4.1 Matrizes Representativas
Para utilizao de matriz representativa, os seguintes critrios de-

vem ser observados:
1. No mnimo uma matriz representativa por grupo de produtos

deve ser avaliada durante a validao. Tal fato indispensvel
ao credenciamento para determinado procedimento analtico.
2. Quando um procedimento analtico for implementado na rotina

para uma variedade de matrizes de um mesmo grupo, dados
complementares devero ser coletados de forma a consolidar
a validao concorrente para todas as matrizes daquele grupo.
3. Na seleo da matriz representativa, devem ser utilizados os

critrios estabelecidos na Tabela A.XI.2.
4. Matrizes representativas podem ser utilizadas na validao de

procedimentos analticos mono e multitoxinas.
5. A Tabela A.XI.2 deste item apresenta as classes de matrizes

representativas para cada grupo de micotoxinas de interesse,
que podem ser avaliadas como uma combinao de matriz x
micotoxina durante a validao de procedimentos analticos.
Essa tabela baseada nas informaes acumuladas pelo Lacq-
sa/Lanagro-MG, ao longo dos ltimos 15 anos de atividades
de preparo e anlises de micotoxinas em produtos diversos. A
evidncia dada pelos dados de estudos de validao e revali-
dao dos mesmos.
6. Todas as micotoxinas contempladas pelo escopo do procedi-

mento analtico necessitam ser validadas.
7. Preferencialmente, cada batelada de amostras a serem analisa-

das deve ter uma curva de calibrao contemplando todas as
micotoxinas do escopo do procedimento analtico.
8. Se o escopo do procedimento analtico for igual ou inferior a 20

micotoxinas, ento todas as micotoxinas devem ser contempla-
das na curva de calibrao.
113
9. Sempre que uma substncia ultrapassar o nvel mximo requeri-
do (no conformidade) a amostra deve ser reanalisada, de forma
a atender aos requisitos estabelecidos na Parte IV deste Manual.
VI. 4.2 Validao (Requisitos Mnimos e Critrios de Aceitao)
A validao de procedimentos analticos para determinao de mi-

cotoxinas em matrizes de origem vegetal ou animal dever ser conduzida
atendendo aos critrios mnimos dos seguintes parmetros de desempenho:
1. Seletividade;
2. Efeito Matriz;
3. Linearidade (Curva de Calibrao);
4. Veracidade e Preciso;
5. Limite de Deteco (LD); Limite de Quantificao (LQ); CCa e CCb;
6. Robustez;
7. Estudo de Estabilidade;
8. Incerteza de Medio;
9. Valores de HORRAT.
VI.4.2.1 Seletividade
Para se avaliar a presena de possveis interferentes, analisar no m-

nimo seis amostras brancas, preferencialmente de seis fontes distintas e
verificar a ocorrncia de interferncias (sinais e picos no tempo de reteno
em que se prev a eluio da micotoxina).
VI. 4.2.1.1 Critrios de Aceitabilidade
O sinal do interferente deve ser < 30% do sinal apresentado para a

menor concentrao da micotoxina na curva de calibrao. Esse critrio
deve ser utilizado desde que no afete valores de Veracidade e Preciso,
conforme Tabela 8.
VI.4.2.2 Efeito Matriz

seo 4 Seletividade e Efeito Matriz, da Parte II deste Manual.
114
Curvas de calibrao em soluo s podero ser utilizadas se for
comprovada a ausncia de efeito matriz.
Os procedimento analticos que utilizam colunas de imunoafini-

dade na etapa de purificao so considerados, a princpio, sem efeito
matriz, tendo em vista a especificidade de separao das micotoxinas
em um gel (coluna de fase slida de imunosorbente contendo anticorpos
especficos para as micotoxinas pesquisadas para as matrizes perten-
centes ao mesmo grupo da Tabela A.XI.2. Entretanto, preciso avaliar a
capacidade de ligao da coluna de imunoafinidade empregada (ng de
toxinas) e as condies analticas do mtodo para classes de matrizes e
grupos de micotoxinas.
Quando o procedimento analtico em validao estiver destinado

anlise de diferentes matrizes para quantificao das mesmas micotoxinas
pode-se, na etapa de avaliao do efeito matriz, fazer uma composio das
diferentes matrizes do mesmo grupo conforme Tabela A.XI.2.
Se o efeito matriz for comprovadamente positivo na matriz com-

posta, deve-se avaliar cada matriz individualmente. Caso contrrio, a ma-
triz composta pode ser utilizada nos testes de validao e inclusive como
amostra branco nos controles de qualidade de resultados analticos. Vali-
da-se, ento, o procedimento analtico para uma matriz composta e insere-
-se, nos trabalhos de rotina, amostras de controle de qualidade em trs
replicatas para cada matriz do grupo contaminadas (MR, MRC) ou for-
tificadas no nvel requerido. Faz-se necessria a confirmao do LQ para
todas as matrizes.
VI. 4.2.3 Linearidade
Os procedimentos relacionados curva de calibrao devem ser re-

alizados conforme descrito na seo 3 Curvas de Calibrao, Linearidade,
Sensibilidade e Faixa de Trabalho, da Parte II, anexos III e VIII.
Os laboratrios devem estabelecer internamente critrios de aceita-

bilidade dos parmetros da curva de calibrao: S(a), S(b), disperso dos
resduos individuais da curva, coeficiente de correlao.
VI. 4.2.4 V
eracidade e Preciso (Repetitividade e
Preciso Intermediria)
Os procedimentos relacionados Veracidade e Preciso devem ser

realizados conforme as sees 5 Veracidade/Recuperao e 6 Preciso, da
Parte II deste Manual.
115
A veracidade poder tambm ser realizada por comparao dos
resultados obtidos com outro procedimento analtico de ensaio previa-
mente validado ou a partir dos resultados da participao em ensaios
de proficincia.
Os resultados devem ser considerados em termos de recuperao

do valor certificado ou atribudo.
VI.4.2.4.1 Critrios de Aceitabilidade
O procedimento analtico deve apresentar desempenho conforme os

critrios descritos na Tabela 8.
Tabela 8 Critrios de desempenho dos procedimentos analticos

para determinao de micotoxinas em produtos de origem vegetal e
leite (aflatoxina M1)
Nvel Recuperao
Micotoxina DPRr DPRR
(mg/kg) (%)
<1 50 a 120 Recomendado:
Aflatoxinas valor derivado da
1 10 70 a 110 0,66
B1, B2, G1, G2* equao de Horwitz
>10 80 a 110 x
0,01 0,05 60 a 120% Mximo: 2 vezes o
DPRR
Aflatoxina M1 valor derivado da
> 0,05 70 a 110% equao de Horwitz
<5 60 a 130 < 40 < 50
Citreoviridina**
>5 65 a 110 < 25 < 40
>100 - <500 60 a 110 < 20 < 40
Desoxinivalenol
>500 70 a 120 < 20 < 40
<500 60 a 120 < 30 < 60
Fumonisinas B1 e B2
>500 70 a 110 < 20 < 30
<1 50 a 120 < 40 < 60
Ocratoxina A
1 10 70 a 110 < 20 < 30
<20 50 a 120 < 30 < 40
Patulina 20 50 70 a 105 < 20 < 30
>50 75 a 105 < 15 < 25
50 250 60 a 130 < 40 < 60
Toxinas T-2
> 250 60 a 130 < 30 < 50
100 200 60 a 130 < 40 < 60
Toxina HT-2
> 200 60 a 130 < 30 < 50
<50 60 a 120 < 40 < 50
Zearalenona
>50 70 a 120 < 25 < 40
Fonte: Diretiva CE 401/2006.
Notas: * Estes critrios aplicam-se para B1 e para a soma de B1, B2, G1 e G2.
* Critrios estabelecidos com base na EU 401/2006 para zearalenona (DPR) e em procedimentos de
*
validao obtidos pelo Lacqsa/Lanagro-MG.
Para as micotoxinas para as quais no existam critrios de aceitabili-

dade estabelecidos recomenda-se que eles sejam determinados levando-se
116
em considerao a similaridade do procedimento analtico e faixa de con-
taminao, podendo ainda esses critrios serem determinados durante os
procedimentos de validao.
Para anlise de micotoxinas em produtos de origem animal (exceto

leite) deve-se atender aos critrios de validao conforme requisitos e cri-
trios descritos nas sees 2 Critrios de Desempenho Aplicveis Deteco
por EM e 5 Veracidade/Recuperao, da Parte II deste Manual.
Excepcionalmente, quando a recuperao for menor que a esta-

belecida, porm consistente com os dados de preciso, e a causa para
tal desempenho estiver bem estabelecida, a recuperao abaixo do re-
quisito estabelecido poder ser aceitvel desde que devidamente jus-
tificada. Entretanto, um procedimento analtico mais exato deve ser
usado, se praticvel.
VI.4.2.5 Limites de Deteco (LD), Limite de Quantificao (LQ),

Limite de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC)
Os procedimentos relacionados determinao de Limites de De-

teco (LD), Limite de Quantificao, (LQ), Limite de Deciso (CC) e Ca-
pacidade de Deteco (CC) devem ser realizados em consonncia com o
disposto na seo 7 Limites de Deteco, Limite de Quantificao, Limite de
Deciso e Capacidade de Deteco, da Parte II deste Manual.
Os Limites de Deciso (CC) e Capacidade de Deteco (CC) so

necessrios quando se tratar de validao de matrizes de origem animal,
exceto leite.
Aps a estimativa matemtica do Limite de Quantificao (LQ), se-

gundo a ISO11843, este deve ser confirmado em termos de preciso, ve-
racidade (Tabela 8) e incerteza, conforme requisito especfico para o nvel
em que o LQ se encontra, utilizando materiais de referncia ou matrizes
brancas fortificadas com padro.
Analisar no mnimo seis amostras da matriz branca fortificada, de

preferncia de origens diferentes. A relao sinal/rudo deve ser superior
a seis (S/R 6). Sugere-se que na estimativa do LQ pelo modelo proposto
pela ISO 11843, o valor da menor concentrao de padro da curva de ca-
librao seja utilizado como zero (0).
VI.4.2.6 Estudo de Robustez, Escopo e Portabilidade
Os procedimentos relacionados determinao de Robustez, Escopo

e Portabilidade devem ser realizados em consonncia com o disposto na
seo 9 Estudo de Robustez, Escopo e Portabilidade, da Parte II deste Manual.
117
A robustez do procedimento analtico deve ser demonstrada mini-
mamente por intermdio de:
1. Monitoramento do procedimento analtico por intermdio dos

resultados das Amostras Controle e verificaes de desempe-
nho do sistema.
2. Dados de srie histrica de controle intralaboratorial, partici-

pao em programas interlaboratoriais. Dados de preciso in-
termediria, obtidos ao longo de um determinado perodo de
tempo, podem ser utilizados para evidenciar robustez.
A portabilidade a capacidade de o procedimento analtico ser

transportado/transferido para outro local de execuo ou outro equipa-
mento sem, no entanto, perder suas caractersticas metrolgicas e seu de-
sempenho. Os parmetros a serem avaliados para demonstrar portabilida-
de so: linearidade, veracidade, preciso, LQ.
VI.4.2.7 Estudos de Estabilidade (Orientao Geral)
Os procedimentos relacionados a estudos de estabilidade devem ser

realizados em consonncia com o disposto na Parte III Estudos de Estabi-
lidade deste Manual.
O estudo de estabilidade deve ser realizado, preferencialmente, em

materiais considerados homogneos. Deve simular as condies nas quais
o laboratrio submete as amostras e padres. Por exemplo, se o laboratrio
armazena as amostras congeladas por 24 horas ele deve provar a estabili-
dade da micotoxina nas amostras nesse perodo nas mesmas condies. Se
o extrato aps purificao armazenado deve-se evidenciar a estabilidade
da micotoxina nele aps o armazenamento.
Os estudos de estabilidade podem ser realizados ao longo dos en-

saios de rotina a partir da avaliao de soluo padro, de amostras j
analisadas pelo laboratrio e de material de referncia, dentre outros.
VI.4.2.8 Incerteza de Medio
A incerteza para os procedimento analticos que determinam mi-

cotoxinas em alimentos de origem vegetal ou animal deve ser estimada
seguindo os procedimentos citados na seo 8 Incerteza de Medicao Ana-
ltica, da Parte II deste Manual.
Ambas as metodologias aqui citadas so usadas na estimao da

incerteza dos procedimentos analticos: metodologias denominadas de
Bottom-Up e Top-Down.
118
Minimamente, deve-se levar em conta as contribuies dos compo-
nentes de incerteza, preciso intermediria e curva de calibrao.
VI.4.2.9 Valores de HORRAT
Os valores de HORRAT devem ser calculados para os procedimen-

tos analticos de anlise de micotoxinas em alimentos de origem vegetal e
animal seguindo os procedimentos citados no item 3.6 - Preciso, da Parte
VI deste Manual.
VI.4.2.9.1 Critrios de Aceitabilidade dos Valores HORRAT
Os valores de HORRAT devem ser <1.
Valores de HORRAT > 1 e < 2 podero ser aceitos se a causa do de-

sempenho da preciso estiver claramente identificada e os valores de ve-
racidade estiverem de acordo com o requisito na faixa validada (Tabela 8).
VI.4.3 Extenses de Escopo (Novos Analitos)
Quando se desejar incluir novas micotoxinas a um procedimento

analtico previamente validado, o laboratrio deve utilizar os mesmos pa-
rmetros e critrios definidos anteriormente para garantir sua adequao
(validao) aps a incluso.
Na introduo de uma nova micotoxina, a seletividade deve ser ava-

liada. Caso no ocorram mudanas nas condies analticas, repetir tam-
bm as etapas de determinao de Limite de Deciso (CC), Capacidade
de Deteco (CC), LQ, veracidade e preciso. Caso seja necessria alguma
modificao analtica, repetir o procedimento de validao integralmente.
Alternativamente, a validao de nova micotoxina pode ser reali-

zada de forma concorrente, por intermdio do uso de amostras de con-
trole de qualidade durante as anlises de rotina, isto , com cada lote de
amostras da rotina um ou mais produtos da categoria so fortificados
(n=3) na concentrao do LQ um nvel maior preferencialmente o nvel
requerido e um limite correspondente ao ponto da curva de calibrao
mais concentrado.
VI.4.4 Extenses de Escopo (Novas Matrizes)
Quando a matriz a ser introduzida no pertencer a um grupo re-

presentativo de amostras (Tabela A.XI.2) uma validao completa deve
ser conduzida.
119
Quando a matriz pertencer a um determinado grupo representati-
vo, a ampliao do escopo dever ser feita a partir da avaliao de estudos
de seletividade, preciso e veracidade e LQ; com no mnimo um dia de ex-
perimento, conforme descrito neste Manual, e dever atender aos critrios
de desempenho estabelecidos para a validao.
VI. 4.5 Alterao do Nvel de Concentrao Requerido
Caso seja necessrio mudar o limite de referncia (nvel de in-

teresse ou nvel requerido) utilizado no processo de validao, e este
estiver fora da faixa de trabalho da curva de calibrao, deve-se repetir
os experimentos de Limite de Deciso (CC), Capacidade de Detec-
o (CC) e LQ, conforme o item 4.2.5 Limites de Deteco, Limite de
Quantificao,Limite de Deciso e Capacidade de Deteco, desta Parte. Caso
o novo limite esteja dentro da curva de calibrao, avaliar o Limite de
Deciso (CC), Capacidade de Deteco (CC), LD e LQ pelo menos
uma vez.
VI. 4.6 Revalidao
Revalidao o procedimento que deve ser adotado quando hou-

ver alterao nas condies originais da validao que possam afetar os
resultados de medio ou para avaliar o desempenho do procedimento
analtico ao longo de um perodo, conforme previsto pela Norma NBR/
ISO/IEC 17025, item 5.4.5.2.
Dados de srie histrica de controle intralaboratorial, participao

em ensaios de proficincia e testes de homogeneidade de materiais tam-
bm podem ser utilizados para revalidar os procedimentos analticos, des-
de que atendam aos parmetros exatido e preciso.
Os parmetros mnimos que devem ser avaliados na revalidao

so: veracidade, preciso intermediria, HORRAT, LD, LQ e incerteza de
medio do procedimento analtico.
VI.4.7 Calibrao Analtica e Recuperao (Rotina Analtica)

respaldados pelos estudos de validao do procedimento analtico.
120
VI.4.7.1 Frequncia Mnima para Utilizao da Curva de
Calibrao na Rotina Analtica
Para as micotoxinas, cada batelada de amostras deve ser acompa-

nhada de no menos que uma curva de calibrao com, no mnimo, cinco
concentraes, e que pelo menos um ponto da curva de calibrao con-
temple o LQ.
VI.4.7.2 Determinao da Recuperao na Rotina Analtica
Os nveis de fortificao das amostras para determinao das recu-

peraes das micotoxinas devero estar na faixa da curva de calibrao
(e.g. no LR), ou dentro de um nvel de relevncia para as amostras anali-
sadas. Esse nvel de fortificao deve ser alternado ao longo do tempo. Na
rotina, amostras com contaminao fora da faixa da curva de calibrao
devero ser diludas e reinjetadas.
obrigatrio um monitoramento contnuo dos procedimentos ana-

lticos e dos resultados das medies obtidos na rotina laboratorial, reali-
zado com o objetivo de decidir se os resultados analticos esto em con-
formidade com os requisitos estabelecidos, devendo ser empregado para
todos os procedimentos analticos utilizados na rotina. Assim, sempre que
possvel, em uma batelada contendo diferentes matrizes deve-se avaliar a
recuperao de todas as micotoxinas analisadas em pelo menos uma ma-
triz de cada grupo.
Recomenda-se plotar as recuperaes obtidas em grficos de con-

trole (cartas de controle) preferencialmente por micotoxinas e grupo de
matriz, considerando as faixas de contaminao. Caso seja observada uma
tendncia significativa ou sistemtica de desvio de recuperao, procedi-
mentos devem ser adotados no intuito de identificar e corrigir as causas
provveis do desvio.
VI.4.7.2.1 Critrios de Aceitao do Desempenho de Recuperao na Rotina Analtica
Os critrios de aceitabilidade, em termos de recuperao para os

resultados dos controles, devem ser de acordo com aqueles definidos na
Tabela 8 e so baseados na normativa EU 401/2006 e em casos especiais
nos parmetros obtidos durante a validao dos procedimentos analticos.
Se uma tendncia significativa ocorrer na recuperao ou se resul-

tados potencialmente inaceitveis (desvio-padro relativo) maiores que
20% forem obtidos, as causas devem ser investigadas.
121
VI.4.8 Preparo de Amostras para Validao de Procedimento
Analtico e Anlise de Rotina
Para anlise de micotoxinas, o preparo das amostras considerado

aspecto crtico do procedimento, pois impacta significativamente nos n-
veis de contaminao de micotoxinas na amostra, uma vez que a distribui-
o de micotoxinas nos produtos ocorre de forma heterognea. Portanto,
a granulometria e a homogeneidade devem ser observadas, e a totalidade
da massa da amostra recebida pelo laboratrio deve ser preparada.
A granulometria deve estar entre 20 mesh (0,841mm) e 16 mesh

(1,19mm). O laboratrio deve ter procedimentos validados para garantir a
homogeneidade e a granulometria apropriada, assegurando dessa forma
resultados representativos para a amostra analisada.
Se por questes de ajuste das condies de preparo for necessrio

descascar a amostra recebida, deve-se garantir que todas as fraes da
amostra, incluindo podres, chochos e mofados, sejam mantidas na amostra.
As matrizes podem ser classificadas conforme sugestes apresenta-

das na Tabela 9, sendo este agrupamento feito considerando as caracters-
ticas das amostras, o tipo dos equipamentos que podem ser utilizados e os
procedimentos de preparo.
A seleo do moinho deve levar em conta a massa a ser prepa-

rada, alm das caractersticas fsicas das amostras, tais como: dureza e
teor de gordura.
Tabela 9 Condies de preparo de amostras considerando grupos ca-

ractersticos, sugestes quanto ao tipo de equipamento de moagem e
formas de preparo
Tipo de equipamentos
Tipos de
Classe Tipo de amostras sugeridos (considerar o
preparo
tamanho da amostra)
Gros, cereais e leguminosas Moinhos de rotor e martelo
em geral (inteiros, partidos fixos, moedor de caf com Seco
ou esmagados) funcionamento helicoidal
I
Gros, cereais e leguminosas
em geral (inteiros, partidos Moinho tipo faca Pasta
ou esmagados)
Pastas, manteigas, frutas
Moinho com rotor tipo moe-
secas, desidratadas (figo,
dor de carne, moinho de faca Pasta ou
tmara, uva passa e banana,
ou lmina com agitao com seco
II dentre outras), nozes, amn-
hlice, mixer ou processador, Recomen-
doas, amendoim, avels,
liquidificador e homogenei- da-se pasta
pistache, castanhas em
zadores
geral e similares
continua
122
Farelos, farinhas, coco ralado,
caf solvel, caf torrado Homogeneizador mecnico
III Seco
modo, rao, ingredientes ou manual
de rao e similares
Moinhos tipo:
Amostras com casca moedor de caf com fun- Seco ou
castanha-do-brasil, avels, cionamento helicoidal e pasta Reco-
IV
pistache, nozes e amndoas lmina com agitao com menda-se
e amendoins hlice, moinho de rotor e pasta
martelo fixos
Homogeneizador mecnico
V Leite em p Seco
ou manual
Obs.: Alguns moinhos disponveis no mercado que podem ser utilizados para o preparo de amostras para
anlise de micotoxinas: CAF (Modelo: B.22 inox, srie: 12587; 1 CV, 220V), Geiger (Modelo GUM 12;
Srie: 3994; motor: 10019 ou Modelo: UM-25E, srie: 9927), Turrax (modelo Marconi, MA -1700/SGS), Retsch
(Retsch, Modelo: SM 2000, srie: 1271007041), Marconi (Modelo: MA 090/CF, Moinho de rotor e de martelo
fixos, srie: 001438; 1500W, 220V) e Arbel (Modelo: moedor de caf potncia: 1/3 HP, 110/220V, 50/60Hz;
2.75, 220V, srie: 3359).
VI.4.9 Preparo de Solues Padro de Micotoxinas
As solues padro de micotoxinas devem ser preparadas e padro-

nizadas de acordo com os procedimentos descritos na AOAC internacional
(2005). As solues padro utilizadas na rotina deve ser periodicamente
monitoradas por repadronizao, cabendo ao laboratrio definir o perodo
para repadronizao das solues padro de micotoxinas.
As solues padro devem ser preparadas por injeo de solven-

tes apropriados nos frascos (utilizando-se seringa com agulha) para cada
micotoxina, seguindo-se de retirada de fraes das solues concentradas
para preparo das solues estoque, evitando dessa forma a abertura dos
frascos contendo padro slido e consequente disperso das partculas.
As concentraes das solues estoque devem ser calculadas aps

determinao das absorbncias das solues por espectrofotometria UV.
Antes disso, o espectrofotmetro deve ser avaliado quanto ao seu desem-
penho por meio de solues do padro primrio de dicromato de potssio,
segundo AOAC Internacional, ou pelo uso de padro certificado por orga-
nismo nacional de metrologia (National Institute of Standards and Technology
NIST; LGC; Instituto Nacional de Metrologia Inmetro ou outros).
Para algumas micotoxinas no esto disponveis valores de ab-

sortividade. Dessa forma, devem ser preparadas por medio exata das
massas seguida de transferncias quantitativas para frascos volumtricos
calibrados e aferio criteriosa do volume, utilizando micropipetas ou pi-
petas calibradas.
123
Na Tabela 10 esto apresentados os solventes apropriados para o
preparo das solues, assim como os parmetros a serem utilizados na
sua padronizao.
Tabela 10 Parmetros para Padronizao de Solues de Micotoxinas

Faixa de Faixa
Massa
comp. de conc. Absortiv. Molar
Micotoxina Molecular Solvente Indicado
de onda ideal ()
(g/mol)
(nm) (mg/mL)
Benzeno: Acetonitrila
19800 (350 nm)
(98:2, v/v)
Aflatoxina B1 Tolueno: Acetonitrila
330-370 312 8-10 19300 (350 nm)
AFLAB1 (9:1, v/v)
Metanol 21500 (350 nm)
Acetonitrila 20700 (350 nm)
20900 (350 nm)
(98:2, v/v)
Aflatoxina B2 Tolueno: Acetonitrila
330-370 314 8-10 21000 (350 nm)
AFLAB2 (9:1, v/v)
17100 (350 nm)
(98:2, v/v)
Aflatoxina G1 Tolueno: Acetonitrila
330-370 328 8-10 16400 (350 nm)
AFLAG1 (9:1, v/v)
18200 (350nm)
(98:2, v/v)
Aflatoxina G2 Tolueno: Acetonitrila
330-370 330 8-10 18300 (350 nm)
AFLAG2 (9:1, v/v)
18000 (350 nm)
Aflatoxina M1 (9:1, v/v)
330-370 328 8-10
AFLA M1 Acetonitrila 19000 (350 nm)
Clorofrmio 1995 (350 nm)
Benzeno:cido Actico
Ocratoxina 5550 (330nm)
(99:1, v/v)
A OCRA ou 300-400 403 40
OTA Tolueno: cido Actico
5440 (333nm)
(99:1, v/v)
Benzeno 6060 (317nm)
Zearalenona 6000 (314 nm)
280-380 318 50
ZON Metanol 13900 (274 nm)
30000 (236 nm)
Desoxinivale- Metanol 7040 (219 nm)
200-400 296,3 50
nol DON Acetonitrila 6400 (208 nm)
Citreoviridina Metanol 44925 (383 nm)
200-400 402 5
CTV Etanol 48000 (388 nm)
Obs.: O preparo das solues na faixa ideal desejado, mas no podendo ser atendido, dever ser observado
no espectro obtido se a altura do pico est aceitvel.
Solues de DON em metanol podem sofrer degradao aps 30 dias de preparo (AOAC, 2000; Shepherd e
Gilbert, 1988).
Soluo padro de AFLA M1 estvel em acetonitrila por aproximadamente um ms (DRAGACCI et al., 2001).
124
VI.4.10 Armazenamento de Padres
Armazenar os padres slidos e suas solues separadamente das

amostras ou extratos de amostras, em frascos para padro mbar ou fras-
cos protegidos da luz por papel alumnio, vedados com parafilme, sob
temperatura de congelamento (< -15 C).
VI.4.11 Critrios de Aceitabilidade das Solues Padro

de Micotoxinas
Recomenda-se que a diferena entre as concentraes determinadas

na padronizao anterior e a atual seja < 3%
As solues padro de micotoxinas devem ser descartadas quando

observadas alteraes indicativas de deteriorao como: turbidez, separa-
o entre as fases e alterao de cor, entre outras.
A avaliao da pureza ou possvel degradao das solues padro

pode ser realizada por tcnicas de cromatografia em camada delgada e/ou
cromatografia lquida.
125
ANOTAES
126
ANEXOS
ANEXOS
ANEXO I
Clculos da Estimativa dos Parmetros
da Regresso pelo Mtodo dos Mnimos
Quadrados Ordinrios (MMQO)
Construir a curva de calibrao (de calibrao) fazendo o grfico de

todas as Ny leituras versus os I nveis de concentrao. Dessa forma haver
no mnimo seis valores de respostas instrumentais (pontos) para cada n-
vel de concentrao.
Estimar os parmetros de regresso: o coeficiente angular (b) e o

coeficiente linear (a), pelo Mtodo dos Mnimos Quadrados Ordinrios
(MMQO), conforme mostrado a seguir.
Modelo da Reta de Calibrao:
(A.I.1)
Onde:
Yijl =varivel dependente: a resposta instrumental da l-sima leitura

da j-sima preparao do i-simo nvel de concentrao das solues
de calibrao. a varivel resposta na terminologia da ISO 11843;
=intercepto ou interseo;
b=inclinao;
Xi = varivel independente: a concentrao do analito, do i-simo

nvel de concentrao. a varivel lquida de estado na terminolo-
gia da ISO 11843;
eijl=resduos aleatrios da regresso da l-sima leitura da j-sima pre-

parao do i-simo nvel de concentrao das solues de calibrao.
Equao de Regresso Linear de Primeiro Grau, Reta:
(A.I.2)
Onde:
i = (varivel dependente) a resposta instrumental estimada (cal-

culada) pela equao de regresso no i-simo nvel de concentrao;
127
a = estimativa de MMQO da interseo a;
b = estimativa e MMQO da inclinao b;
xi = (varivel independente) so as concentraes conhecidas

do analito nas solues padro de calibrao em cada nvel
de concentrao.
Procede-se estimao da inclinao (b) ou coeficiente angular, da

interseo (a) ou intercepto ou coeficiente linear e das somas quadrticas (S):
(A.I.3)
(A.I.4)
Onde:
(A.I.5)
(A.I.6)
(A.I.7)
(A.I.8)
(A.I.9)
Sendo:
xi = concentrao conhecida do analito em cada i-simo nvel de

concentrao da soluo padro de calibrao;
yijl=resposta instrumental medida da l-sima replicata de reinjeo

da j-sima preparao da i-sima concentrao;
I=nmero de nveis de concentrao da curva de calibrao;
J=nmero de repeties de preparo independentes de cada nvel

de concentrao;
128
L = nmero de replicatas de reinjeo ou de leituras ou indica-
es de respostas instrumentais de cada j-sima preparao da
i-sima concentrao;
Nx=nmero total de nveis independentes de concentrao da cur-

va de calibrao dado por Nx = IJ, para um planejamento balan-
ceado, quando todos os nveis de concentrao so preparados com
igual nmero J de rplicas. Porm, se cada nvel de concentrao
tiver um nmero Ji diferente de replicatas de preparao, o que no
desejvel, ento .
Valor mdio dos I nveis de concentrao da curva de calibrao.
Valor mdio de todas as Nx L respostas instrumentais.

Valor mdio das respostas instrumentais das L replicatas de

leituras da j-sima preparao da i-sima concentrao da curva
de calibrao.
As varincias, ou os quadrados dos desvios padro s2 do intercepto e

da inclinao, assim como a covarincia, cov (a, b) entre eles so dadas por:
(A.I.10)
(A.I.11)
(A.I.12)
O resduo de regresso (eijl) para cada uma das Ny respostas instru-

mentais :
(A.I.13)
Varincia residual do ajuste :
(A.I.14)
129
ANOTAES
130
ANEXO II
Qualidade do Ajuste e Verificao da
Homoscedasticidade ou Heterocedasticidade
da Resposta Instrumental na Regresso
pelo MMQO
Calcular os Ny resduos eyijl a partir da equao de regresso, usan-

do a eq.(A.I.13).
Construir o grfico de disperso dos resduos da regresso em fun-

o da concentrao para avaliar a qualidade do ajuste, i.e.: a linearidade e
a homogeneidade das varincias (homoscedasticidade).
Se a distribuio dos resduos for aleatria, segundo a Figura A.

II.1(a) a seguir, apresentando envoltrio retangular (retas paralelas), con-
siderar que h homogeneidade das varincias e o Mtodo dos Mnimos
Quadrados Ordinrios (MMQO) pode ser de fato aplicado.
Se a distribuio dos resduos apresentar envoltrias na forma de

um cone crescente, como na FiguraA.II.1(b) (retas oblquas), ou decres-
cente (outras formas de envoltrias que no retangular so possveis), con-
siderar que no h homogeneidade das varincia, i.e., heterocedasticidade
das varincias e, neste caso, o Mtodo dos Mnimos Quadrados Pondera-
dos (MMQP) deve ser aplicado.
Para testar a homoscedasticidade, um simples teste F pode ser feito

[33]. Trata-se de um teste F comparando a maior varincia (quadrado do
desvio-padro) das respostas instrumentais ou dos resduos dos nveis de
calibrao com a menor delas. Esse teste mais exigente que o teste de
Cochran e o Hartley, ao qual se assemelha.
Teste F para a homoscedasticidade. Calcula-se os desvios padro syi

das respostas instrumentais independentes em cada i-simo nvel de cali-
brao pela equao:
(A.II.1)
Onde: Os valores mdios que aparecem na equao citada so calcu-

lados de acordo com as equaes eq.(A.I.8) e eq.(A.VI.7). Se o grfico dos
desvios-padro syi em funo das concentraes dos padres de calibrao
131
indicar algum comportamento sistemtico (crescimento ou decrescimen-
to), ento os dados so heterocedticos. A FiguraA.II.2 apresenta esse gr-
fico para os dados da TabelaA.II.1.
Usando a maior varincia e a menor varincia, calcular a estats-

tica discriminante:
(A.II.2)
Ao mesmo tempo obtm-se, de uma tabela de teste F, o valor tabe-

lado de Fh,crit,a,n1,n2 com n1 = Ji,max 1 graus de liberdade no numerador e
n2 = Ji,min 1 graus de liberdade no denominador, Ji,max e Ji,min so, respec-
tivamente, o nmero de reinjees do nvel de calibrao com a maior e
menor varincias. Adotar um nvel de confiana de 95%.
Se Fh,calc for menor que Fh,crit,a,n1,n2, as varincias podem ser conside-

radas iguais. Nesse caso, considera-se que as respostas instrumentais so
homoscedsticas e que o MMQO pode ser usado para obter os parmetros
de regresso da curva de calibrao.
Nota: O teste F aplicado aqui no um teste mltiplo para a homos-

cedasticidade de varincias, por isso mais rigoroso. Ele foi preferido em
detrimento aos testes mltiplos de Hartley [7,29,34], de Cochran [7,25,34]
e Leven-Brown-Forsythe [34], por ser de mais fcil execuo e usar a tabela
de pontos percentuais da funo densidade de probabilidade de Fisher-
-Snedecor, que facilmente encontrada em qualquer livro de estatstica e
no Excel. O teste de Cochram recomendado pela ISO 5725-2 [26].
Exemplo: A Tabela A.II.1 mostra os dados de absorvncia para a

anlise de Cd por espectroscopia de absoro atmica, encontrados no
exemplo A.5 do Guia Eurachem de clculo de incerteza [16].
Estatstica discriminante Fh,calc = F do teste F:
Fh,crit,0,05,2,2 = 19,00 [7,19, 29, 30,31,32]. Como o valor da estatstica

discriminante maior que seu valor crtico no nvel de significncia de
5% (nvel de confiana de 95%), conclui-se por rejeitar a hiptese nula da
homoscedasticidade. Logo, os dados de calibrao so heterocedsticos.
Estatstica discriminante FH,calc = r do teste de Hartley ou teste de

F mximo:
132
(A.II.3)
FH,crit,0,05,2,5 = 202 [7]. Como o valor da estatstica discriminante maior

que seu valor crtico no nvel de significncia de 5% (nvel de confiana de
95%), conclui-se por rejeitar a hiptese nula da homoscedasticidade. Logo,
os dados de calibrao so heterocedsticos.
Estatstica discriminante FC, calc = C do teste de Cochran ou teste de

F mximo:

(A.II.4)
FC,crit,0,05,2,5 = 0,684 [7,26,29,31]. Como o valor da estatstica discrimi-

nante maior que seu valor crtico no nvel de significncia de 5% (nvel de
confiana de 95%), conclui-se por rejeitar a hiptese nula da homoscedasti-
cidade. Logo, os dados de calibrao so heterocedsticos.
Para se calcular a estatstica discriminante FL,calc = tL,calc do teste de

Levene-Brown-Forsythe ou teste de Levene modificado [34], os dados dos
resduos ei,j de regresso pelo MMQO de cada resposta experimental re-
plicada so calculados e divididos em dois grupos (Grupo 1 e Grupo2),
com aproximadamente o mesmo nmero de dados cada um, nG1@nG2. As
rplicas de um mesmo nvel de concentrao no podem ser separadas
em grupos diferentes. Quando o nmero de nveis de concentrao m-
par, exclui-se dos clculos o nvel de concentrao i-simo nvel central
(i=I/2+1), so obtidas as medianas Med1 e Med2 de cada grupo de re-
sduos. Calcula-se ento o valor absoluto dos desvios di,j,1 e di,j,2 de cada
resduo ei,j em relao mediana de seu grupo. Obtm-se as mdias dm,1
e dm,2 e as somas de quadrados dos desvios SQd1 e SQd2 de cada um dos
dois grupos. Finalmente, calcula-se a varincia agrupada s 2p e a estattica t
de Levene tL,calc:
(A.II.5)
Onde:
e (A.II.6)
133
e
(A.II.7)
e

(A.II.8)
(A.II.9)
Os clculos para o teste t de homoscedasticidade de Levene-Brown-

Forsythe dos dados de calibrao da TabelaA.II.1 so mostrados na Tabe-
laA.II.2. O valor de tL maior que o valor de tcrit,a,nG1+nG2-2=tcrit;0,05;10= 2,2281
para o nvel de confiana de 95% e grau de liberdade 10, indicando, surpre-
endentemente e ao contrrio dos trs testes anteriores, em que os desvios-
-padro das respostas instrumentais so homocedsticos.
O teste t de Levene-Brown-Forsythe pouco exigente quanto he-

terocedasticidade dos dados, tendendo a indicar, como no exemplo supra-
citado, homoscedasticidade, mesmo quando vrias outras evidncias indi-
cam o contrrio. Por esse motivo, preferimos o uso de um dos trs testes:
Fh eq.(A.II.2) ou FH eq.(A.II.3) ou FC eq.(A.II.4), acima ao teste t de
Levene-Brown-Forsythe eq.(A.II.5). Recomendamos que quando ocorrer
uma divergncia de concluses, como a desse exemplo entre o teste t de
Levene-Brown-Forsythe e algum dos outros trs testes, que se d prefern-
cia concluso desses ltimos e se proceda a um ajuste pelo MMQP, visto
que ele mais geral e inclui o MMQO.
Tabela A.II.1 Dados da Calibrao de um EAA para anlise de Cd ob-

tidos do Guia Eurachem de clculo de Incerteza [16]
yi =
i j xi = ci s(yi) s2(yi)
resp inst
1 0,1 0,028 0,00057735 3,3333E-07
1 2 0,1 0,029
3 0,1 0,029
continua
134
yi =
resp inst
1 0,3 0,084 0,001527525 2,3333E-06
2 2 0,3 0,083
3 0,3 0,081
1 0,5 0,135 0,002 4,0000E-06
3 2 0,5 0,131
3 0,5 0,133
1 0,7 0,18 0,001527525 2,3333E-06
4 2 0,7 0,181
3 0,7 0,183
1 0,9 0,215 0,008386497 7,0333E-05
5 2 0,9 0,23
3 0,9 0,216
yi =
resp inst
Figura A.II.1 Grfico de disperso dos resduos de ajuste eyijl das res-
postas instrumentais yijl calculados pela eq.(A13) em funo da con-
centrao (ou em funo do valor calculado da resposta instrumental
como mostrado no eixo x dos grficos anteriores)
Fonte: Adaptado da Figura 5.15 de Miller e Miller (2005) [30].
135
Notas: (a) resduos aleatoriamente dispersos ao redor de zero, indicando um ajuste satisfatrio e a homosce-
dasticidade das respostas instrumentais.
(b) resduos crescentes (ou decrescentes) com a concentrao, forma de cone, indicando heterocedas-
ticidade da resposta instrumental e exigindo o ajuste pelo MMQP.
(c) Resduos apresentando uma tendncia decrescente (crescente) e em seguida crescente (decres-
cente), forma de U ou de U invertido, indicando falta de ajuste ou de linearidade (i.e. curva de
calibrao no retilnea) na faixa de calibrao. Nesses casos, a curva de calibrao pode ser ajustada
por um polinmio de ordem superior a um, ou alternativamente reduz-se a faixa de concentrao
da calibrao.
(d) Disperso aleatria satisfatria dos pontos, exceto pelo sexto ponto, que deve ser um valor aber-
rante, duvidoso (outlier).
Figura A.II.2 Grfico dos desvios-padro das respostas replicadas em

cada nvel de concentrao em funo da concentrao das solues
padro de calibrao
0,009
Desvios-padro das respostas instrumentais
0,008
em cada nvel de concentrao
0,007
0,006
0,005
0,004
0,003
0,002
0,001
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Concentrao dos padres de calibrao / mg/L
O comportamento funcional, em geral crescente, dos desvios-pa-

dro indica a existncia de heterocedasticidade.
Particularmente, o ltimo ponto de calibrao apresenta um desvio-pa-

dro surpreendentemente alto em relao aos demais pontos de calibrao.
TabelaA.II.2 Clculos envolvidos no teste t de homoscedasticidade de

Levene-Brown-Forsyte para os dados da curva de calibrao apresenta-
da na TabelaAII.1.
xi yi,j yi,j,calc ei,j Med di,j dm SQd
0,1 0,028 0,0328 -0,0048 -0,0019 0,0029 0,0029 5,846E-05
0,1 0,029 0,0328 -0,0038 0,0019
0,1 0,029 0,0328 -0,0038 0,0019
0,3 0,084 0,081 0,003 0,0049
0,3 0,083 0,081 0,002 0,0039
0,3 0,081 0,081 0 0,0019
0,5 0,135 0,1292 0,0058
0,5 0,131 0,1292 0,0018
0,5 0,133 0,1292 0,0038
continua
136
0,7 0,18 0,1774 0,0026 0,0031 0,0005 0,0052 0,00035742
0,7 0,181 0,1774 0,0036 0,0005
0,7 0,183 0,1774 0,0056 0,0025
0,9 0,215 0,2256 -0,0106 0,0137
0,9 0,23 0,2256 0,0044 0,0013
0,9 0,216 0,2256 -0,0096 0,0127
Os dois grupos de resduos usados para calcular a estatstica discri-

minante do teste-t de homoscedasticidade de Levene-Brown-Forsyte so
marcados pelos sombreados superiores e inferiores.
Os dados do nvel de concentrao 0,5 foram excludos dos clculos.
A varincia agrupada :
(sp)2=(5,846 105 + 3,5742 105) = 4,1588 104.
A estatstica t de Levene-Brown-Forsythe:
tL,calc = |0,0029 0,0052| / [4,1588 104 (1/6 + 1/6)] = 0,0023/1,1774

104 = 0,1953.
137
ANOTAES
138
ANEXO III
Extremos (outliers) e Critrios de Aceitao
para a Linearidade no MMQO
Avaliar os pontos duvidosos, aberrantes, extremos (outliers) da cur-

va de calibrao (de calibrao) calculando-se a estatstica tyijl,calc:
(A.III.1)
Onde:
eyijl = resduoijl = yijlmedido yicalculado dado pela eq.(A.I.13);
sres,yi = desvio-padro amostral dos resduos das respostas ins-

trumentais do i-simo nvel de concentrao calculado pela eq.
(A.III.2), usando os valores de i calculados pela eq.(A.I.2) do ajuste
de MMQO. Seu valor diferente, mas prximo daquele calculado
na eq.(A.I.14):
(A.III.2)
Se o valor de tyijl,calc para um ponto duvidoso de uma curva de cali-

brao for menor ou igual ao valor de t crtico tabelado, tcrit, bilateral, para
nvel de confiana igual a 95% e (JL 1) graus de liberdade, considera-se
que o ponto pertence curva e a faixa at ele linear.
Calcular o coeficiente de correlao linear (r) pelo mtodo dos mni-

mos quadrados ordinrios:
(A.III.3)
139
(A.III.4)
Critrio de aceitao para linearidade (caso das varincias homog-

neas ou homoscedasticidade). Calcular a estatstica tr:
(A.III.5)
Se o valor de tr para a regresso da curva de calibrao (de calibra-

o) for maior ou igual ao valor de t crtico (tabelado) bilateral, para nvel
de confiana igual a 95% e (Nx 2) graus de liberdade, considera-se que a
faixa linear, i.e. rejeita-se a hiptese nula H0: r = 0 de que no h correla-
o entre x e y.
140
ANEXO IV
Avaliao da Incerteza de Previso da
Concentrao do Analito na Curva de Calibrao
Clculo de Incerteza de Calibrao no MMQO
A incerteza padro da concentrao do analito obtida da interpo-

lao na curva de calibrao u (x*) dada pelas equaes eq.(A.IV.1a) ou
eq.(A.IV.1b) ou eq.(A.IV.1c), que so equivalentes entre si.
A incerteza u (x*) no a incerteza da concentrao do analito na

amostra de ensaio, pois ela no leva em considerao as demais fontes de
incerteza do procedimento analtico.
A incerteza u (x*) dada pelas equaes eq.(A.IV.1a) ou eq.(A.IV.1b) ou

eq.(A.IV.1c) apenas a incerteza devido curva de calibrao, e um dos
componentes da incerteza padro da concentrao do analito na amostra.
(A.IV.1a)
(A.IV.1b)
(A.IV.1c)
Onde:
x* = C* = concentrao do analito na soluo injetada no instrumen-

to de medio analtica, obtida por interpolao ou extrapolao na
curva de calibrao.
K = nmero de replicatas verdadeiras de reanlise de alquotas de

anlise da mesma amostra de ensaio. Cada alquota de anlise passa
por todas as etapas do procedimento analtico, desde a etapa inicial
de abertura ou extrao ou digesto etc. at produzir a soluo que
ser injetada uma ou mais vezes no instrumento de medio analtica.
L = nmero de reinjees das solues de cada alquota de anlise

no instrumento de medio analtica.
141
y* = RI* = resposta instrumental mdia das K reinjees no instru-
mento de medio analtica das solues obtidas das reanlises das
K alquotas de anlise da mesma amostra de anlise.
s2(y*) = s2res,y = desvio-padro da resposta instrumental para a solu-

o da amostra injetada no instrumento de medio analtica. No
caso do MMQO, como a repetitividade das respostas instrumentais
so homoscedsticas, usa-se a varincia residual s2res,y, calculada
pela eq.(A.I.14) para estimar s2(y*), i.e. s2(y*) = s2res,y.
142
ANEXO V
Planilhas de Clculos no Excel validado
Para se fazer os clculos do MMQO utilizando as equaes eq.(A.I.3)

a eq.(A.III.5) recomendvel a construo de uma planilha de clculo ele-
trnica com a estrutura mostrada na planilha Excel do arquivo MMQO e
MMQPR do Manual de Validao CGAL Mapa.
Para facilitar a construo da planilha de clculo vale salientar as

seguintes identidades:
(A.V.1)
(A.V.2)
(A.V.3)
(A.V.4)
(A.V.5)
143
ANOTAES
144
ANEXO VI
Clculo da Estimativa dos Parmetros
da Regresso pelo Mtodo dos Mnimos
Quadrados Ponderados (MMQP)
O ajuste da reta de calibrao pelo Mtodo dos Mnimos Quadrados
Ponderados (MMQP) deve ser feito nos casos em que a resposta instru-
mental heterocedstica na faixa de calibrao, i.e., repetitividades dife-
rentes, desvios-padro estatisticamente diferentes, nos diversos nveis de
concentrao das solues de calibrao.
Existem duas abordagens de MMQP: a absoluta, MMQPA, e a rela-

tiva, MMQPR. Usaremos neste Manual o MMQPR para evitar problemas
com a representao numrica computacional de nmeros grandes, como
pode ocorrer em mtodos analticos cromatogrficos.
O modelo linear dado pela eq.(A.I.1) assim como as definies asso-

ciadas a essa equao continuam valendo no MMQP.
Para enfatizar a diferena entre os parmetros ajustados pelo MMQO

daqueles obtidos pelo MMQP, a equao regresso dada pela eq.(A.I.2)
reescrita como:
(A.VI.1)
Onde:
i=varivel dependente: a resposta instrumental estimada (calculada)

pela equao de regresso do MMQP no i-simo nvel concentrao.
aw=estimativa de MMQP da interseo a.
bw=estimativa da inclinao b.
xi=varivel independente: so as concentraes conhecidas do anali-

to nas solues padro de calibrao em cada nvel de concentrao.
Procede-se estimao da inclinao (bw) ou coeficiente angular, da

interseo (aw) ou intercepto ou coeficiente linear e das somas quadrticas
(Sw) para o caso do MMQP:
145
(A.VI.2)
(A.VI.3)
Onde:
(A.VI.4)
Todas as respostas instrumentais mdias de um dado nvel de

concentrao tm o mesmo peso wi, que usado para as J respostas instru-
mentais mdias de cada nvel.
A constante knorm de normalizao da eq.(A.VI.4) no MMQPA knorm = 1.
No MMQPR podemos usar qualquer outro valor knorm constante para

normalizar os pesos.
Usaremos como valor de knorm a mdia das varincias das respostas

instrumentais dos I nveis de concentrao da curva de calibrao, confor-
me definido na eq.(A.VI.5):
(A.VI.5)
(A.VI.6)
146
(A.VI.7)
(A.VI.8)
(A.VI.9)
(A.VI.10)
O denominador na eq.(A.VI.2) e na eq.(A.VI.3) o Sxxw

definido na eq. (A.VI.10).
(A.VI.11)
(A.VI.12)
As varincias ou os quadrados dos desvios-padro s2, do intercep-

to e da inclinao, assim como a covarincia, cov(aw,bw) entre eles so
dadas por:
(A.VI.13)
147
(A.VI.14)
(A.VI.15)
O resduo de regresso (eyijl) para cada uma das Ny respostas instru-

mentais :
(A.VI.16)
A varincia residual do ajuste obtida dos resduos dados pela

eq.(A.VI.16) no tem nenhum significado no MMQP. Define-se tambm o
resduo ponderado eyijlw como:
(A.VI.17)
A varincia residual do ajuste obtida dos resduos dados pela eq.(A.

VI.17) representa a varincia do ponto de peso unitrio, que raramente faz
parte dos valores experimentais.
148
ANEXO VII
Qualidade do Ajuste e Verificao da
Heterocedasticidade da Resposta Instrumental
na Regresso pelo MMQP
Calcular os Ny resduos normalizados (ou padronizados ou reduzi-
dos) eyijl,norm a partir da regresso ponderada, usando a eq.(A.VII.1). Esses
resduos normalizados so na verdade estatsticas t de Student.
(A.VII.1)
Construir o grfico de disperso dos resduos normalizados da regres-

so em funo da concentrao para comprovar a no homogeneidade das
varincias (heterocedasticidade).
Se a distribuio dos resduos normalizados for aleatria, segundo a

FiguraA.II.1(a), apresentando envoltrio retangular retas paralelas na
FiguraA.II.1(a) comprova-se que no h homogeneidade das varincias,
i.e., heterocedasticidade, e o Mtodo dos Mnimos Quadrados Ponderados
(MMQP) deve ser, de fato, aplicado.
Se a distribuio dos resduos normalizados apresentar envoltrias na

forma de um cone crescente, como na FiguraA.II.1(b) (retas oblquas) ou
decrescente (outras formas de envoltrias que no a retangular so poss-
veis), conclui-se que a heterocedasticidade (os desvios-padro si de cada
nvel de concentrao) no foi adequadamente estimada a partir dos da-
dos de calibrao disponveis. Nesse caso devemos aumentar o nmero J
de replicatas de repreparo das solues de calibrao.
Se o problema persistir, refazer toda a curva de calibrao.
Formas em U ou em U invertido indicam falta de ajuste ou de li-

nearidade (i.e., curva de calibrao no retilnea) na faixa de calibrao.
Nesses casos, a curva de calibrao pode ser ajustada por um polinmio
de ordem superior a um, usando o MMQP, ou alternativamente reduz-se a
faixa de concentrao da calibrao.
149
ANOTAES
150
ANEXO VIII
Extremos (outliers) e Critrios de Aceitao
para a Linearidade no MMQP
Avaliar os pontos duvidosos, aberrantes, extremos (outliers) da cur-
va de calibrao (de calibrao) por meio da estatstica:
(A.VIII.1)
Onde:
eijl = yijlmedido yicalculado. Notar que no o resduo ponderado defini-

do na eq.(A.VI.17) e sim o da eq.(A.VI.16).
Sres,yi = desvio-padro amostral das respostas instrumentais do

i-simo nvel de concentrao calculado pela eq.(A.III.2), mas ago-
ra usando os valores de i calculados pela eq.(A.VI.1) do ajuste
de MMQP. Seu valor diferente, mas prximo daquele calculado
pela eq.(A.VI.6):
(A.VIII.2)
Se o valor de tyijl,calc para um ponto duvidoso de uma curva de cali-

brao for menor ou igual ao valor de t crtico tabelado, tcrit, bilateral, para
nvel de confiana igual a 95% e (JL 1) graus de liberdade, considera-se
que o ponto pertence curva e a faixa at ele linear.
Calcular o coeficiente de correlao linear (rw) pelo mtodo dos m-

nimos quadrados ponderado:
151
(A.VIII.3)
Onde:
(A.VIII.4)
Critrio de aceitao para linearidade (caso das varincias heterog-

neas ou heterocedasticidade). Calcular a estatstica trw:
(A.VIII.5)
Se o valor de trw para a regresso da curva de calibrao for maior

ou igual ao valor de t crtico (tabelado) bilateral, para nvel de confiana
igual a 95% e (Nx 2) graus de liberdade, considera-se que a faixa linear,
i.e., rejeita-se a hiptese nula H0: rw = 0 de que no h correlao entre x e y.
152
ANEXO IX
Avaliao da Incerteza de Previso da
Concentrao do Analito na Curva de Calibrao,
Clculo de Incerteza de Calibrao no MMQP
A incerteza padro da concentrao do analito obtida da interpo-
lao na curva de calibrao u (x*) dada pelas equaes eq.(A.IX.1a) ou
eq.(A.IX.1b) ou eq.(A.IX.1c), que so equivalentes entre elas.
A incerteza u (x*) no a incerteza da concentrao do analito na

amostra de ensaio, pois ela no leva em considerao as demais fontes de
incerteza do procedimento analtico.
A incerteza u (x*) dada pelas equaes eq.(A.IX.1a) ou eq.(A.IX.1b) ou

eq.(A.IX.1c) apenas a incerteza devido curva de calibrao e um dos
componentes da incerteza padro da concentrao do analito na amostra.
(A.IX.1a)
(A.IX.1b)
(A.IX.1c)
Onde:
(A.IX.2)
o peso da resposta instrumental obtida para a soluo da amostra

de ensaio cujo desvio-padro amostral sy*=s(y*).
153
A constante de normalizao knorm definida pela eq.(A.VI.5) e que
aparece nas equaes eq.(A.VI.13), eq.(A.VI.14), eq.(A.VI.15), eq.(A.IX1b)
e eq.(A.IX.1c) deve ser substituda pelo valor unitrio (1) quando se usar
as equaes, apresentadas anteriormente, no MMQPA. A no observncia
dessa nota causa de erro em alguns softwares comerciais e em bibliogra-
fias de estatstica para a qumica.
A ttulo de exemplo, a equao (2.18) em Meier e Zund (2000, p. 98);

a equao (5.17) em Miller e Miller (2005, p. 151); e a equao (8.28) em
Massart et al. (1997, p. 200) so diferentes entre si e no resultam em valor
igual ao dado pela eq.(A.IX.1a). As equaes dessas referncias tambm
so diferentes da eq.(A.IX.1b) e da eq.(A.IX.1c) citadas anteriormente, que
com knorm = 1 so idnticas equao (21) em Cetama (1986, p. 361).
154
ANEXO X
Glossrio: Definies, Vocbulos, Termos,
Siglas e Abreviaes
Neste documento so adotadas preferencialmente as definies dos
termos e vocbulos empregadas no Vocabulrio Internacional de Metrolo-
gia (VIM) [22,28]. So tambm adotadas as definies do Codex Alimenta-
rius [9] presentes no documento Guidelines on Analytical Terminology
CAC/GL 72-2009, que por sua vez adota as definies do VIM. Final-
mente, so relatadas definies do livro Analytical Chemistry, Theoretical
and Metrological Fundamentals de Kaus Danzer2007 [47], do Guia Eura-
chem1998 The Fitness for Purpose of the Analytical Measurement [15],
do Orange Book da IUPAC [45] e de algumas normas ISO.
Acurcia ou exatido:Grau de concordncia entre um valor medido e um

valor verdadeiro de um mensurando [21].
Grau de concordncia entre o resultado de um ensaio e o valor de refern-
cia aceito.
A acurcia determinada pela veracidade (trueness) e preciso.
Adequado ao propsito (fit for purpose), ou adequao ao propsito (fit-

ness for purpose), ou adequado ao propsito de uso, ou adequado ao uso
pretendido:Grau com o qual o resultado de um procedimento de medi-
o permite ao usurio tomar uma deciso tecnicamente e administrati-
vamente correta para um dado propsito (seo 18.6.1 do IUPAC Orange
Book [45] e [36].
Um processo formal de avaliar que um procedimento adequado para
dada aplicao [33].
Alquota de ensaio ou alquota analtica:A quantidade de material (usu-

almente homogeneizado) tomada da amostra de ensaio ou amostra analti-
ca e sobre a qual a anlise realizada. Uma subamostra representativa da
amostra de ensaio, ou seja, a alquota que ser analisada.
Amostras de Controle de Qualidade (ACQ):So amostras de matrizes

brancas adicionadas com o analito, em trs concentraes: baixa (0,5 ve-
zes o LMR), mdia (1,0 vezes o LMR) e alta (1,5 vezes o LMR). No caso
de substncia proibida com o LMDR estabelecido, ou seu equivalente, os
controles de baixa devem ter concentrao igual zero, os controles de
mdia devem ter concentrao igual ao limite de deteco do mtodo e
os controles de alta devem ter concentrao igual ao Limite Mnimo de
Desempenho Requerido. As ACQ so usadas para monitorar o desempe-
nho de anlises qumicas e para avaliar integridade, validade e confiabi-
lidade dos resultados.
155
Amostra de laboratrio ou amostra laboratorial:Amostra enviada para e
recebida pelo laboratrio.
Amostra de ensaio ou amostra analtica:Amostra preparada a partir da

amostra de laboratrio, da qual so retiradas as alquotas ou pores de
ensaio ou as alquotas ou pores analticas. Amostra laboratorial de-
pois da remoo de quaisquer partes que no sero analisadas, e.g. ossos,
solo aderido. Pode ser ou no cominuda e misturada antes de se retirar as
alquotas de ensaio, de acordo com a necessidade ou o propsito do ensaio.
Analito: A espcie qumica, substncia, que ser identificada e/ou cuja

concentrao (ou massa) ser determinada em uma amostra de ensaio.
Analito representativo:Analito escolhido, de acordo com as sua carac-

tersticas e propriedades fsico-qumicas, para representar um grupo de
analitos susceptveis de serem semelhantes quanto ao seu comportamento
analtico, sob determinado procedimento analtico multirresduos.
Calibrao: Operao que estabelece, numa primeira etapa e sob condi-

es especificadas, uma relao entre os valores e as incertezas de medio
fornecidas por padres e as indicaes correspondentes com as incertezas
associadas; numa segunda etapa, utiliza esta informao para estabelecer
uma relao visando obteno de um resultado de medio a partir de
uma indicao [22,28].
Nota1: Uma calibrao pode ser expressa por meio de uma declarao,
uma funo de calibrao, um diagrama de calibrao, uma curva de ca-
librao ou uma tabela de calibrao. Em alguns casos, pode consistir de
uma correo aditiva ou multiplicativa da indicao com uma incerteza
de medio associada.
Nota2: Convm no confundir a calibrao com o ajuste de um sistema de
medio, frequentemente denominado de maneira imprpria de autoca-
librao, nem com a verificao da calibrao.
Nota3: Frequentemente, apenas a primeira etapa na definio acima en-
tendida como sendo calibrao.
Capacidade de Deteco (CC): o teor mais baixo que pode ser detecta-
do, identificado e/ou quantificado numa amostra com uma probabilidade
de erro .
Chemical Abstracts Service (CAS):Servio de Resumos Qumicos.
Comparao Interlaboratorial (CI) ou Ensaios Interlaboratoriais (EI):

Organizao, realizao e avaliao de ensaios ou medies de um mes-
mo item ou itens similares por dois ou mais laboratrios de acordo com
condies predeterminadas [ISO 13528:2005].
156
Condio de preciso intermediria:Condio de medio num conjunto
de condies, as quais compreendem o mesmo procedimento de medio,
o mesmo local e medies repetidas no mesmo objeto ou em objetos simi-
lares, ao longo de um perodo extenso de tempo, mas pode incluir outras
condies que envolvam mudanas.
Nota 1: As condies que podem variar compreendem novas calibraes,
padres, operadores e sistemas de medio.
Nota 2: conveniente que uma especificao referente s condies conte-
nha, na medida do possvel, as condies que mudaram e as que no.
Nota 3: Em qumica, o termo condio de preciso interserial (intercorri-
da, interbatelada) , algumas vezes, utilizado para designar este conceito.
Condio de repetitividade:Condio de medio num conjunto de con-

dies, as quais compreendem o mesmo procedimento de medio, os
mesmos operadores, o mesmo sistema de medio, as mesmas condies
de operao e o mesmo local, assim como medies repetidas no mesmo
objeto ou em objetos similares durante um curto perodo de tempo.
Nota 1: Uma condio de medio uma condio de repetitividade apenas
com respeito a um conjunto especificado de condies de repetitividade.
Nota 2: Em qumica, o termo condio de preciso intrasserial (intracor-
rida, intrabatelada) , algumas vezes, utilizado para designar este conceito.
Condio de reprodutibilidade:Condio de medio num conjunto de

condies, as quais compreendem diferentes locais, diferentes operadores,
diferentes sistemas de medio e medies repetidas no mesmo objeto ou
em objetos similares.
Nota 1: Os diferentes sistemas de medio podem utilizar procedimentos
de medio diferentes.
Nota 2: Na medida do possvel, conveniente que sejam especificadas as
condies que mudaram e as que no mudaram.
Controle de Qualidade (CQ):Conjunto de atividades do sistema de ges-

to da qualidade focado em demonstrar que os requisitos de qualidade so
atendidos. constitudo do conjunto de atividades planejadas para moni-
torar, verificar e controlar a qualidade dos resultados analticos, tais como:
a anlise de amostra branca, ou de amostra de controle, ou de material de
referncia certificado, a elaborao de cartas de controle e a participao
em avaliaes externas de qualidade, como os ensaios interlaboratoriais
colaborativos e de proficincia.
Controle de Qualidade Interno (CQI):Conjunto de aes que um laborat-

rio de qumica analtica pode utilizar para assegurar que os resultados pro-
duzidos esto adequados finalidade proposta. Na prtica, a adequao
ao propsito determinada por uma comparao entre a exatido obtida
157
no laboratrio, em tempo determinado, com o nvel de exatido requerido.
O CQI, portanto, inclui procedimentos prticos de rotina que possibilitam
ao analista aceitar um resultado ou grupos de resultados como adequados
ao propsito ou rejeitar os resultados e repetir as anlises.
Curva de calibrao:Expresso da relao entre uma indicao e o valor

medido correspondente [22,28].
Nota 1: Uma curva de calibrao expressa uma relao biunvoca que no
fornece um resultado de medio, pois ela no contm informao a res-
peito da incerteza de medio.
Nota 2: O termo curva analtica muitas vezes usado como sinnimo de
curva de calibrao.
Curva de Calibrao de Analito em Solvente (CCAS): Curva de calibra-

o, sem ajuste de matriz ou no matrizada, de um instrumento de me-
dio obtida a partir de solues padro de calibrao, preparadas pela
dissoluo do analito puro em um solvente puro.
Curva de Calibrao de Extrato de Matriz Branca Fortificado com o Ana-

lito (CCEMBF):Curva de calibrao, com ajuste de matriz ou matrizada,
de um instrumento de medio obtida a partir de solues padro de cali-
brao, preparadas por meio da fortificao do extrato/digerido/soluo
de abertura de uma matriz branca da amostra a analisar com o analito
puro. A obteno do extrato (no fortificado) de matriz branca deve ser
feita com uma massa de matriz branca igual massa de amostra a analisar
e para volume igual ao obtido na extrao de amostras a analisar. Diluies
de uma soluo de calibrao obtida dessa forma devem ser feitas com o
extrato no fortificado de matriz branca.
Curva de Calibrao de Matriz Branca Fortificada com o Analito (CCM-

BF):Curva de calibrao, com ajuste de matriz ou matrizada, de um ins-
trumento de medio obtida a partir de solues padro de calibrao
preparadas por meio da fortificao da matriz branca da amostra a anali-
sar com o analito puro, seguida da extrao/digesto/abertura, de forma
a obter um volume fixo de soluo. Diluies de uma soluo de calibra-
o obtida dessa forma devem ser feitas com o extrato no fortificado de
matriz branca.
Curva de Calibrao Matrizada (CCM) ou Curva de Calibrao com

Ajuste de Matriz: a curva de calibrao ou caracterstica de resposta
construda a partir da matriz branca fortificada, do extrato de matriz bran-
ca fortificado, ou do material de referncia certificado, ou do extrato do
material de referncia certificado.
DCB: Denominao Comum Brasileira
DCI: Denominao Comum Internacional
158
Desvio-Padro Relativo de Repetitividade (DPRr), Repeatability Rela-
tive Standard Deviation (RSDr), ou Coeficiente de Variao de Repetiti-
vidade (CVr):Desvio-padro relativo calculado de resultados gerados sob
condies de repetitividade:
Desvio-Padro Relativo de Reprodutibilidade (DPRR), Reproducibility

Relative Standard Deviation (RSDR) ou Coeficiente de Variao de Re-
produtibilidade (CVR):Desvio-padro relativo calculado de resultados
gerados sob condies de reprodutibilidade:
Desvio-Padro de Repetitividade (sr):Desvio-padro amostral (experi-

mental) calculado de resultados gerados sob condies de repetitividade.
Desvio-Padro de Reprodutibilidade (sR):Desvio-padro amostral (experi-

mental) calculado de resultados gerados sob condies de reprodutibilidade.
Ensaio (Estudo, Comparao) interlaboratorial:Estudo em que diversos

laboratrios medem uma grandeza em uma ou mais pores idnticas de
um material estvel e homogneo, em condies documentadas, cujos re-
sultados so compilados em um nico relatrio [47].
Ensaio (Estudo) Colaborativo (EC): Determinao do desempenho de um

procedimento de medio ou de ensaio mediante comparaes (ensaios ou
estudos) interlaboratoriais.
Ensaio (Estudo) de Proficincia (EP): Determinao do desempenho de

um laboratrio de medio ou de ensaio por meio de comparaes (en-
saios ou estudos) interlaboratoriais [ISO 13528:2005].
Avaliao do desempenho de um participante sob critrios preestabelecidos
por comparaes (ensaios ou estudos) interlaboratoriais [ISO 17043:2010].
Erro aleatrio:Componente do erro de medio que, em medies repeti-

das, varia de maneira imprevisvel.
Erro alfa () ou erro do tipo I: a obteno de um resultado de anlise

que estabelece a no conformidade de uma amostra quando ela de fato
conforme. tambm chamado de falso no conforme, ou falso positivo, e
de risco do vendedor ou do produtor.
Erro beta () ou erro do tipo II: a obteno de um resultado de anlise

que estabelece a conformidade de uma amostra quando ela de fato no
conforme. tambm chamado de falso conforme, ou falso negativo, e de
risco do comprador ou do cliente.
159
Erro de medio:Diferena entre o valor medido de uma grandeza e um
valor de referncia.
Erro sistemtico:Componente do erro de medio que, em medies repe-

tidas, permanece constante ou varia de maneira previsvel.
Escopo ou aplicabilidade:Os analitos, matrizes e concentraes para os

quais o procedimento analtico pode ser usado satisfatoriamente.
Nota: Alm da definio da faixa de capacidade de desempenho satisfat-
rio de cada fator, a definio da aplicabilidade (escopo) pode incluir adver-
tncias como a conhecida interferncia de outros analitos e a no aplicabili-
dade do procedimento analtico a certas matrizes e situaes.
Exatido ou Acurcia:Ver acurcia.
Fator de abrangncia:Nmero maior do que um, pelo qual uma incerteza

padro combinada multiplicada para se obter uma incerteza de medio
expandida [22,28].
Nota: Um fator de abrangncia geralmente simbolizado por k (ver tam-
bm o Guia ISO/IEC 98-3:2008, 2.3.6).
Faixa de Trabalho (FT) ou faixa de medio ou faixa validada: Conjunto

de valores de um mensurando para os quais os erros do procedimento me-
dio analtica esto dentro de limites especificados (adaptado de [15,45]).
O intervalo entre as concentraes inferior e superior do analito na amos-
tra de ensaio dentro da qual foi determinado que o procedimento analtico
adequado ao uso pretendido (adaptado de [47])
Faixa de linearidade ou faixa linear ou faixa dinmica linear:Faixa de

concentrao na qual a resposta instrumental linear com a concentrao
do analito [47].
Em geral, quando se refere a uma faixa linear, considera-se o comporta-
mento funcional da curva de calibrao. Nesse caso, a concentrao do
analito a qual essa definio se refere aquela no domnio de concentrao
das solues padro de calibrao. Para evitar dvidas, recomendamos
usar as expresses: faixa de linearidade da calibrao, ou faixa linear da
calibrao, ou faixa dinmica linear da calibrao.
No se deve confundir a faixa de linearidade da calibrao com a faixa de
trabalho ou faixa validada. A primeira est no domnio de concentrao do
analito nas solues de calibrao, enquanto a segunda est no domnio de
concentrao do analito nas amostras de ensaio, o mensurando. A diferen-
a entre esses domnios de concentrao depende do tipo de unidades de
medio de cada um e de fatores de diluio ou pr-concentrao das solu-
es de extrao/abertura/digesto das amostras de ensaio e determina-
da pela funo de medio (equao do mensurando). Quando alquotas
da soluo de extrao/abertura/digesto so submetidas diretamente ao
instrumento de medio analtica, sem diluies ou pr-concentraes, a
160
constante de proporcionalidade entre esses dois domnios pode, mas no
obrigatoriamente, ser igual unidade.
Funo analtica ou funo avaliao:Funo inversa da funo de cali-

brao, x=f1(y), que descreve a dependncia do valor analtico (concen-
trao do analito no padro de calibrao) com o valor medido (resposta
instrumental) [47].
Exemplo: No caso em que a funo de calibrao a equao da reta
y=a+bx, ento a funo analtica ser x=(ya)/b.
Funo de medio: Funo de grandezas cujo valor, quando calculado

a partir de valores conhecidos das grandezas de entrada no modelo de
medio, medido da grandeza de sada no modelo de medio [22,28].
Nota 1: Se um modelo de medio h(Y, X1, ..., Xn) = 0 pode ser escrito expli-
citamente como Y = f(X1,..., Xn), onde Y a grandeza de sada no modelo de
medio, a funo f a funo de medio. Geralmente, f pode simbolizar
um algoritmo que fornece, para os valores da grandeza de entrada x1,..., xn,
um valor de sada nico correspondente a y = f (x1, ..., xn).
Nota 2: A funo de medio tambm utilizada para calcular a incerteza
de medio associada ao valor medido de Y.
Nota 3: Costuma-se tambm chamar a funo de medio de equao do
mensurando ou equao de medio, embora esses termos no cons-
tem do VIM.
Funo de calibrao:Equao para a estimao do valor de uma gran-

deza y a partir de um dado valor de uma grandeza analtica x: y = f(x).
A funo de calibrao pode ser conhecida a priori por leis naturais ou esti-
mada experimentalmente por meio de amostras de calibrao. A funo de
calibrao representa aquele segmento da funo resposta escolhido para
estimar o valor analtico de uma amostra de ensaio [47].
Exemplos: O tipo de funo de calibrao mais usado em qumica analtica
a equao da reta ou funo afim: y=a+bx, onde y a resposta instru-
mental (e.g., absorvncia, rea de pico etc.) e x a concentrao do analito
na soluo padro de calibrao. Costuma-se dizer nesses casos que a fun-
o de calibrao linear, mas a expresso mais estritamente correta seria
calibrao linear na concentrao. Funes de calibrao no lineares na
concentrao so, por exemplo, y=aebx, que tem concavidade para cima e
sensibilidade crescente com o aumento da concentrao; y=abecx, que
tem concavidade para baixo e sensibilidade decrescente com o aumento da
concentrao; ou ainda polinmios de segundo (y=a+bx+cx2) ou terceiro
graus (y=a+bx+cx2+dx3). Essas duas ltimas so lineares nos parmetros
ajustados a, b, c, e d, mas no na concentrao x.
Funo resposta:Relao entre a resposta de um instrumento analtico

e a quantidade do analito. A funo resposta completa frequentemente
no retilnea [47].
161
O intervalo de concentrao da funo resposta contm, em seu interior, o
intervalo de concentrao da funo de calibrao.
Garantia da qualidade:Conjunto das aes sistemticas planejadas e ne-

cessrias para prover a adequada confiana de que o resultado analtico
satisfar um dado requisito de qualidade.
Grandeza:Propriedade de um fenmeno, de um corpo ou de uma subs-

tncia, que pode ser expressa quantitativamente sob a forma de um nme-
ro e de uma referncia [22,28].
Nota 1: O conceito genrico de grandeza pode ser dividido em vrios
nveis de conceitos especficos.
Nota 2: A referncia pode ser uma unidade de medida, um procedimento
de medio, um material de referncia ou uma combinao desses.
Nota 3: As sries ISO 80000 e IEC 80000 Quantities and units fornecem os
smbolos das grandezas. Os smbolos das grandezas so escritos em itli-
co. Um dado smbolo pode indicar diferentes grandezas.
Nota 4: O formato preferido pela IUPAC-IFCC para designar as grandezas
na rea de medicina laboratorial Sistema-Componente; tipo de grandeza.
Exemplo: Plasma (Sangue)on sdio; concentrao em quantidade de
substncia igual a 143 mmol/L em determinada pessoa, em determina-
do instante.
Nota 5: Uma grandeza, conforme aqui definida, escalar (valor num-
rico associado a uma unidade de medida). Entretanto, um vetor ou um
tensor, cujas componentes so grandezas, tambm considerado como
uma grandeza.
Nota 6: O conceito de grandeza pode ser genericamente dividido em,
por exemplo, grandeza fsica, grandeza qumica e grandeza biolgica, ou
grandeza de base e grandeza derivada.
Grandeza de entrada:Grandeza que deve ser medida, ou grandeza cujo

valor pode ser obtido de outro modo, para calcular um valor medido de
um mensurando [22,28].
Exemplo: Quando o comprimento de uma haste de ao a uma tempera-
tura especificada o mensurando, a temperatura real, o comprimento na
temperatura real e o coeficiente de dilatao trmica linear da haste so
grandezas de entrada.
Nota 1: Uma grandeza de entrada frequentemente uma grandeza de sa-
da de um sistema de medio.
Nota 2: As indicaes, as correes e as grandezas de influncia so gran-
dezas de entrada.
Grandeza de sada:Grandeza cujo valor medido calculado utilizando-se

os valores das grandezas de entrada em um modelo de medio [22,28].
162
Grandeza de influncia:Grandeza que, em uma medio direta, no afeta
a grandeza efetivamente medida, mas afeta a relao entre a indicao e o
resultado de medio [22,28].
Exemplo 1: Frequncia na medio direta da amplitude constante de uma
corrente alternada com um ampermetro.
Exemplo 2: Concentrao em quantidade de substncia de bilirrubina, em
uma medio direta da concentrao, em quantidade de substncia de he-
moglobina no plasma sanguneo humano.
Exemplo 3: Temperatura de um micrmetro utilizado na medio do com-
primento de uma haste, mas no a temperatura da prpria haste que pode
fazer parte da definio do mensurando.
Exemplo 4: Presso ambiente na fonte inica de um espectrmetro de mas-
sa, durante uma medio de uma frao molar.
Nota 1: Uma medio indireta compreende uma combinao de medi-
es diretas, em que cada uma delas pode ser afetada por grandezas
de influncia.
Nota 2: No Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (GUM), o
conceito grandeza de influncia definido como na 2a edio do VIM,
contemplando no somente as grandezas que afetam o sistema de medi-
o, como na definio anterior, mas tambm as que afetam as grandezas
efetivamente medidas. Alm disso, no GUM este conceito no est limita-
do a medies diretas.
Heterocedasticidade:Antnimo de homoscedasticidade.
Homoscedasticidade:Igualdade dos desvios-padro de diferentes amos-

tras estatsticas. Em uma curva de calibrao, refere-se igualdade esta-
tstica dos desvios-padro das replicatas das respostas instrumentais em
diferentes nveis de concentrao das solues padro de calibrao.
HORRATR Reproducibility Horwitz Ratio, razo de Horwitz de re-

produtibilidade:Desvio-Padro Relativo de Reprodutibilidade (DPRR)
ou Coeficiente de Variao de Reprodutibilidade (CVR), dividido pelo
Desvio-Padro Relativo de Reprodutibilidade (DPRRH) ou Coeficiente de
Variao de Reprodutibilidade (CVRH) estimado por meio da equao de
Horwitz, na qual w a frao de massa do analito (com ambos, numera-
dor e denominador, nas mesmas unidades):
HORRATr Repeatability Horwitz Ratio, razo de Horwitz de repetiti-

vidade:Desvio-Padro Relativo de Repetitividade (DPRr), ou Coeficiente
de Variao de Repetitividade (CVr), dividido pelo Desvio-Padro Rela-
tivo de Repetitividade (DPRrH) ou Coeficiente de Variao de Repetitivi-
dade (CVrH) estimado pela equao de Horwitz, na qual w a frao de
163
massa do analito (com ambos, numerador e denominador, nas mesmas
unidades), e usando a hiptese sr = 2/3 sR:
Incerteza de medio: Parmetro no negativo que caracteriza a disperso

dos valores atribudos a um mensurando, com base nas informaes utili-
zadas [22,28].
Nota1: A incerteza de medio compreende componentes provenientes de
efeitos sistemticos, tais como componentes associados a correes e va-
lores atribudos a padres, assim como a incerteza definicional. Algumas
vezes no so corrigidos efeitos sistemticos estimados; em vez disso so
incorporados componentes de incerteza de medio associados.
Nota2: O parmetro pode ser, por exemplo, um desvio-padro denomina-
do incerteza padro (ou um de seus mltiplos) ou a metade de um interva-
lo tendo uma probabilidade de abrangncia determinada.
Nota3: A incerteza de medio geralmente engloba muitos componentes.
Alguns deles podem ser estimados por uma avaliao do Tipo A da incer-
teza de medio, a partir da distribuio estatstica dos valores provenien-
tes de sries de medies e podem ser caracterizados por desvios-padro.
Os outros componentes, que podem ser estimados por uma avaliao do
Tipo B da incerteza de medio, podem tambm ser caracterizados por
desvios-padro estimados a partir de funes de densidade de probabili-
dade baseadas na experincia ou em outras informaes.
Nota4: Geralmente para um dado conjunto de informaes, subentende-se
que a incerteza de medio est associada a determinado valor atribudo
ao mensurando. Uma modificao desse valor resulta em modificao da
incerteza associada.
Incerteza de Medio Analtica (IMA): Incerteza de medio associada ao

mensurando obtido atravs de um procedimento de anlise qumica validado.
Incerteza de medio expandida ou incerteza expandida: Produto de

uma incerteza padro combinada por um fator maior do que o nmero
um [22,28].
Nota1: O fator depende do tipo de distribuio de probabilidade da gran-
deza de sada e da probabilidade de abrangncia escolhida.
Nota2: O termo fator nesta definio se refere ao fator de abrangncia.
Nota3: A incerteza de medio expandida chamada de incerteza glo-
bal, no pargrafo 5 da Recomendao INC-1 (1980) (ver o GUM), e sim-
plesmente incerteza, nos documentos IEC.
Incerteza Mxima Aceitvel (Imax): Incerteza de medio mxima de-

terminada em funo do risco mximo aceitvel de se tomar uma deciso
164
errada quando usando um resultado de medio. Ela pode ser estabelecida
por norma, legislao, contrato ou internamente no laboratrio. Resulta-
dos de medio com incertezas maiores que a incerteza mxima aceitvel
no so adequados ao uso pretendido.
Intervalo de abrangncia: Intervalo, baseado na informao disponvel,

que contm o conjunto de valores verdadeiros de um mensurando, com
probabilidade determinada [22,28].
Nota1: Um intervalo de abrangncia no est necessariamente centrado
no valor medido escolhido (ver o Guia ISO/IEC 98-3:2008/Supl.1).
Nota2: No recomendvel que um intervalo de abrangncia seja de-
nominado intervalo de confiana para evitar confuso com o conceito
estatstico (ver o Guia ISO/IEC 98-3:2008, 6.2.2).
Nota3: Um intervalo de abrangncia pode ser deduzido de uma incerteza
de medio expandida (ver o Guia ISO/IEC 98-3:2008, 2.3.5).
Instrumento de medio:Dispositivo utilizado para realizar medies, indi-

vidualmente ou associado a um ou mais dispositivos suplementares [22,28].
Nota 1: Um instrumento de medio que pode ser utilizado individual-
mente um sistema de medio.
Nota 2: Um instrumento de medio pode ser um instrumento de medio
indicador ou uma medida materializada.
Nota 3: Em qumica analtica comum encontrarmos os termos instru-
mento de medio analtica ou instrumento analtico, e.g.: espectr-
metro de absoro atmica, cromatgrafo, peagmetro, balana, bureta,
pipeta, termmetro, multmetro, rgua etc.
International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC):Unio de

Qumica Pura e Aplicada.
Limite de Deciso (CC): o limite a partir do qual se pode concluir que

uma amostra no conforme com uma probabilidade de erro .
Limite de Deteco (LD): Valor medido, obtido por um dado procedimen-

to de medio, para o qual a probabilidade de declarar falsamente a au-
sncia de um componente em um material b, sendo a probabilidade de
declarar falsamente a sua presena.
Essa definio equivalente definio de capacidade de deteco (CCb)
[9,22,28,47].
Nota1: A IUPAC recomenda valores convencionais para e b iguais a 0,05.
Nota2: s vezes, usa-se a abreviao LD (LOD, em ingls).
Nota3: O termo sensibilidade no deve ser empregado no sentido de
limite de deteco.
Esta definio e suas notas so aquelas do 4.18 do VIM 2009 [22] e do
JCGM200:2008 [28]. A definio de LD corresponde definio de capa-
165
cidade de deteco (CCb) da Deciso 2002/657/EC e definio de valor
mnimo detectvel da varivel lquida de estado da ISO11843-1.
Limite de Quantificao (LQ) ou limite de determinao: Existem vrias

definies desse termo na literatura:
Um valor analtico, xLQ, acima do qual a determinao analtica pos-
svel com uma dada preciso mnima. A condio de preciso deve ser
declarada em cada caso. (DANZER,2007) [47]
a menor concentrao que pode ser determinada com veracidade e pre-
ciso de repetitividade aceitveis. (EURACHEM,1998) [15]
o menor teor ou concentrao de um analito que pode ser estimada com
confiabilidade aceitvel. (AOAC2002) [2]
Concentrao igual ou maior que a menor concentrao da curva de cali-
brao. (ANVISA,2007) [3]
Teor mnimo medido a partir do qual possvel medir o analito com certe-
za estatstica razovel (95% de confiana). Se a veracidade e a preciso so
constantes numa gama de concentraes centrada no limite de deteco, o
limite de quantificao numericamente igual a seis ou dez vezes o desvio-
-padro da mdia de ensaios em branco (n > 20). (EC/333/2007) [12]
A definio do Codex Alimentarius (CAC/GL72-2009) [9]: Uma carac-
terstica de desempenho geralmente expressa em termos de um sinal ou
um valor medido que produzir uma estimativa que ter um desvio-pa-
dro relativo DPR especificado, em geral 10% (ou 6%).
Onde LQ o limite de quantificao, sQ o desvio-padro nesse ponto e

kQ um multiplicador cujo valor igual ao recproco do desvio-padro
relativo (DPR) selecionado.
O DPR aproximado de uma estimativa de s, baseada em n graus de liber-
dade .
Nota: Se s conhecido e constante, ento sQ=s0, uma vez que o desvio-
-padro da quantidade estimada independente da concentrao. Subs-
tituindo kQ pelo DPR obtm-se: LQ=10s0. Nesse caso LQ exatamente
igual a 3,04 vezes o limite de deteco, considerando que os dados so
normais a=b=0,05. No LQ uma identificao positiva pode ser alcana-
da com uma razovel e/ou previamente estabelecida confiana para uma
dada matriz e usando um procedimento analtico especfico.
Esta definio estabelece as bases para tratar as excees ao caso simples
descrito, i.e., envolvendo distribuies no-normais e heterocedasticida-
de, e.g. o processo de contagem (Poisson) como aquele usado em PCR em
tempo real.
Limite Mximo de Resduo (LMR): a concentrao mxima de um dado

resduo admissvel em determinada matriz.
166
Nota 1: Os valores de LMR so estabelecidos pela Coordenao de Con-
trole de Resduos e Contaminantes (CCRC).
Limite Mnimo de Desempenho Requerido (LMDR):Teor mnimo de

uma substncia a analisar em uma amostra que deve ser detectvel e pas-
svel de confirmao [10].
Nota 1: Tem o objetivo de padronizar o desempenho analtico mnimo re-
querido do procedimento analtico cuja substncia, sob anlise, no possui
limite permitido definido. Nesses casos, CC e CC devem ser menores
que o LMDR.
Nota 2: Os valores do LMDR so estabelecidos pela Coordenao de Con-
trole de Resduos e Contaminantes (CCRC).
Limite de Referncia (LR): o teor mximo admissvel de determinada

substncia em determinada matriz, estabelecido por legislao nacional ou
internacional, pelo cliente interno ou externo.
Material de Referncia Certificado (MRC):Material de referncia, acom-

panhado por um certificado, com um ou mais valores de propriedades,
atestado por um procedimento que estabelece sua rastreabilidade ob-
teno exata da unidade na qual os valores da propriedade so expressos.
Cada valor certificado acompanhado por uma incerteza para um nvel de
confiana estabelecido [22,28].
Matriz branca ou amostra branca:Matriz isenta da substncia a analisar

ou cujo nvel de concentrao seja suficientemente baixo de modo a no
interferir nos resultados de medio.
Matriz representativa:Matriz escolhida para representar um grupo de

matrizes de composio semelhante e usada durante a validao de um
procedimento analtico, para o qual se tenha demonstrado que no h di-
ferena significativa do resultado do analito quando medido na matriz re-
presentativa e na matriz representada.
Menor Nvel Calibrado (MNC): a concentrao (ou massa) mais baixa

do analito com a qual o instrumento de medio analtica foi devidamente
calibrado [10].
Medio: Processo de obteno experimental de um ou mais valores que

podem ser, razoavelmente, atribudos a uma grandeza [22,28].
Nota 1: A medio no se aplica a propriedades qualitativas.
Nota 2: A medio implica a comparao de grandezas e engloba conta-
gem de entidades.
Nota 3: A medio pressupe uma descrio da grandeza que seja com-
patvel com o uso pretendido de um resultado de medio, de um pro-
cedimento de medio e de um sistema de medio calibrado que opere
167
de acordo com um procedimento de medio especificado, incluindo as
condies de medio.
Mensurando: Grandeza que se pretende medir [22,28].

Nota 1: A especificao de um mensurando requer o conhecimento do tipo
de grandeza, a descrio do estado do fenmeno, do corpo ou da substn-
cia da qual a grandeza uma propriedade, incluindo qualquer componen-
te relevante e as entidades qumicas envolvidas.
Nota 2: Na segunda edio brasileira do VIM, o mensurando defini-
do como a grandeza especfica submetida medio e na IEC 60050-
300:2001, como a grandeza submetida medio.
Nota 3: A medio, incluindo o sistema de medio e as condies sob
as quais ela realizada, pode modificar o fenmeno, o corpo ou a subs-
tncia, de modo que a grandeza que est sendo medida pode diferir do
mensurando como ele foi definido. Nesse caso, necessria uma corre-
o adequada.
Exemplo 1: A diferena de potencial entre os terminais de uma bateria
pode diminuir quando, na realizao da medio, utilizado um voltme-
tro com uma condutncia interna significativa. A diferena de potencial
em circuito aberto pode ser calculada a partir das resistncias internas da
bateria e do voltmetro.
Exemplo 2: O comprimento de uma haste de ao em equilbrio com a tem-
peratura ambiente de 23C ser diferente do comprimento temperatura
especificada de 20C. Nesse caso, necessria uma correo.
Nota 4: Em qumica, analito, o nome de uma substncia ou de um com-
posto so termos utilizados algumas vezes para mensurando. Tal uso
incorreto porque esses termos no se referem a grandezas.
Mtodo analtico:Sequncia lgica de operaes, descritas genericamente

e resumidamente, usadas na execuo de uma anlise qumica de um dado
analito ou um conjunto de analitos em uma matriz, usando determinada
tcnica analtica [47, ISO3524-1].
Mtodo multirresduo:Mtodo analtico capaz de identificar e quantificar

vrios tipos de analitos de um mesmo grupo qumico ou de grupos qumi-
cos distintos, em determinada matriz.
Mtodo ou procedimento normalizado:Procedimento analtico desenvol-

vido, validado e aprovado em ensaios interlaboratorias colaborativos por
um organismo de normalizao.
Mtodo ou procedimento oficial: Procedimento analtico desenvolvido,

validado e aprovado em ensaios interlaboratorias, por organismo de nor-
malizao ou outras organizaes, devidamente homologado pelo rgo
legalmente competente.
168
Nota 1: Os mtodos descritos na Farmacopeia Brasileira so considerados
mtodos oficiais. Por analogia, tambm so reconhecidos os mtodos des-
critos nas principais farmacopeias.
Nvel de interesse ou nvel requerido: A concentrao da substncia a

analisar em uma amostra que significativa para determinar a sua confor-
midade com a legislao [10].
Padro interno (surrogate): Composto puro ou elemento adicionado

amostra de ensaio, cujo comportamento qumico-fsico considerado
como representativo do analito nativo. s vezes, como nas tcnicas analti-
cas envolvendo espectrometria de massa, so usadas molculas do analito
marcadas com algum istopo de seus elementos constitutivos.
Padro de referncia:Padro, geralmente tendo a mais alta qualidade me-

trolgica disponvel em um dado local ou em uma dada organizao, a
partir do qual as medies executadas so derivadas.
Padro de trabalho (padro analtico, padro de calibrao):Padro uti-

lizado rotineiramente para calibrar ou controlar medidas materializadas,
instrumentos de medio ou materiais de referncia. Um padro de tra-
balho geralmente calibrado por comparao a um padro de referncia.
Em laboratrios qumicos, o padro de trabalho , em geral, chamado de
padro analtico ou de calibrao.
Plano Nacional de Controle de Resduos e Contaminantes (PNCRC)
Preciso de medio (preciso):Grau de concordncia entre indicaes ou

valores medidos, obtidos por medies repetidas, no mesmo objeto ou em
objetos similares, sob condies especificadas [22,28].
Nota 1: A preciso de medio geralmente expressa numericamente por
indicadores de incerteza tais como: disperso, desvio-padro (s), varincia
(s2), ou coeficiente de variao (CV), sob condies de medio especifica-
das. Uma menor preciso indicada por um elevado desvio-padro.
Nota 2: As condies especificadas podem ser, por exemplo, condies
de repetitividade, condies de preciso intermediria ou condies de re-
produtibilidade (ver ISO 57253: 1994).
Nota 3: A preciso de medio utilizada para definir a repetitividade, a
preciso intermediria e a reprodutibilidade de medio.
Nota 4: O termo preciso de medio algumas vezes utilizado, errone-
amente, para designar a exatido de medio.
Preciso intermediria (z):Preciso de medio sob um conjunto de con-

dies de preciso intermediria [22,28].
Nota 1: Os termos estatsticos pertinentes so apresentados na ISO
5725-3: 1994.
169
Probabilidade de abrangncia:Probabilidade de que o conjunto de va-
lores verdadeiros de um mensurando esteja contido em um intervalo de
abrangncia especificado [22,28].
Nota 1: Esta definio se refere abordagem de incerteza, como apresen-
tado no GUM.
Nota 2: A probabilidade de abrangncia tambm chamada de nvel da
confiana no GUM.
Probabilidade de erro alfa (a): a probabilidade de cometer o erro a. Isto

, a probabilidade de obter um resultado no conforme quando a amostra
de fato conforme.
Probabilidade de erro beta (b): a probabilidade de cometer o erro b. Isto

, a probabilidade de classificar uma amostra como conforme quando ela
de fato no conforme.
Procedimento analtico: Conjunto de operaes, descritas especifica-

mente e detalhadamente, usadas na execuo da anlise de um analito
particular ou um conjunto de analitos, de acordo com um dado mtodo
analtico [47, ISO3524-1].
Rastreabilidade metrolgica ou rastreabilidade: Propriedade de um re-

sultado de medio pela qual tal resultado pode ser relacionado a uma
referncia por meio de uma cadeia ininterrupta e documentada de calibra-
es, cada uma contribuindo para a incerteza de medio [22,28].
Nota 1: Para esta definio, a referncia pode ser definio de uma unidade de
medida por meio de sua realizao prtica, ou um procedimento de medio que
engloba a unidade de medida para uma grandeza no ordinal, ou um padro.
Nota 2: A rastreabilidade metrolgica requer uma hierarquia de calibrao
estabelecida.
Nota 3: A especificao da referncia deve compreender a data em que ela
foi utilizada no estabelecimento da hierarquia de calibrao, juntamente com
qualquer outra informao metrolgica relevante sobre a referncia, tal como
a data na qual foi realizada a primeira calibrao da hierarquia de calibrao.
Nota 4: Para medies com mais de uma grandeza de entrada no modelo
de medio, cada valor de entrada deve ter sua prpria rastreabilidade e a
hierarquia de calibrao envolvida pode formar uma estrutura ramificada
ou uma rede. O esforo envolvido no estabelecimento da rastreabilidade
metrolgica para cada valor da grandeza de entrada deve ser proporcional
sua contribuio relativa para o resultado de medio.
Nota 5: A rastreabilidade metrolgica de um resultado de medio no
assegura que a incerteza de medio seja adequada para um dado objetivo
ou que exista uma ausncia de erros humanos.
Nota 6: Uma comparao entre dois padres pode ser considerada como
uma calibrao se ela for utilizada para verificar e, se necessrio, corrigir o
valor e a incerteza de medio atribudos a um dos padres.
170
Nota 7: O ILAC considera que os elementos necessrios para confirmar a
rastreabilidade metrolgica so uma cadeia de rastreabilidade ininterrup-
ta a um padro internacional ou a um padro nacional, uma incerteza de
medio documentada, um procedimento de medio documentado, uma
competncia tcnica reconhecida, a rastreabilidade metrolgica ao SI e os
intervalos entre calibraes (ver ILAC P-10:2002).
Nota 8: O termo abreviado rastreabilidade , s vezes, utilizado com o
significado de rastreabilidade metrolgica, assim como de outros con-
ceitos, tais como rastreabilidade de uma amostra, de um documento, de
um instrumento ou de um material, em que o histrico de um item im-
portante. Portanto, prefervel utilizar o termo completo rastreabilidade
metrolgica para evitar quaisquer dvidas.
Recuperao ou fator de recuperao:Frao da concentrao ou da quan-

tidade de analito presente, ou adicionado, ou presente e adicionado na
alquota da amostra de ensaio, que extrada e apresentada para o instru-
mento de medio. A recuperao mede toda a parte do analito que no
extrada da amostra, ou que se perde nas etapas analticas anteriores
medio instrumental.
Replicatas independentes: Para fins deste documento, definimos como

replicatas independentes aquelas replicatas para as quais todo o pro-
cesso experimental de medio ou de anlise qumica, ou de produo
de uma soluo de calibrao, ou de obteno de uma amostra de ensaio
etc. repetido desde a sua etapa inicial. No so replicatas independentes
os vrios valores de respostas instrumentais obtidos de releituras de uma
nica injeo no instrumento de medio analtica, de uma mesma soluo
padro de calibrao, ou de uma mesma soluo de amostra de ensaio.
Para que essas respostas instrumentais sejam independentes suas solues
devem ser repreparadas desde o incio e cada soluo repreparada lida
uma nica vez no instrumento de medio analtico.
Repetitividade de medio ou repetitividade (r):Preciso de medio sob

um conjunto de condies de repetitividade [22,28].
As condies de repetitividade so aquelas em que todos os fatores que
podem alterar o resultado da medio so mantidos constantes ou contro-
lados, isto , mesmo procedimento de medio, mesmo analista, mesmas
temperatura, presso e umidade ambientes, mesmo laboratrio, mesmos
fornecedores e lotes de reagentes, e replicatas de medio realizadas em
curto perodo de tempo.
Reprodutibilidade de medio ou reprodutibilidade (R):Preciso de me-

dio sob um conjunto de condies de reprodutibilidade [22,28].
Nota: Os termos estatsticos pertinentes so apresentados na ISO 5725-
1:1994 e na ISO 5725-2:1994. As condies de reprodutibilidade so aquelas
em que todos os fatores que podem alterar o resultado da medio so va-
riados na maior extenso possvel que se pode ter na rotina. As replicatas
171
de medio so feitas em dias diferentes, em intervalo de tempo abrangen-
te, em laboratrios, instrumentos e analistas diferentes, entre outros.
Resposta Instrumental (RI): a indicao (valor indicado, leitura, resul-

tado) do instrumento de medio quando uma amostra de ensaio ou uma
soluo de calibrao inserida no instrumento de medio, e.g.: absor-
vncia, rea de pico, pH, diferena de potencial eltrico etc.
Sada de um sistema analtico com uma reao a certo estmulo [47].
Resultado de medio: Conjunto de valores atribudos a um mensurando,

completado por todas as outras informaes pertinentes disponveis [22,28].
Nota 1: Um resultado de medio geralmente contm informao per-
tinente sobre o conjunto de valores, alguns dos quais podem ser mais
representativos do mensurando do que outros. Isso pode ser expresso na
forma de uma Funo de Densidade de Probabilidade (FDP).
Nota 2: Um resultado de medio geralmente expresso por um nico va-
lor medido e uma incerteza de medio. Caso a incerteza de medio seja
considerada desprezvel para alguma finalidade, o resultado de medio
pode ser expresso como um nico valor medido. Em muitas reas, essa a
maneira mais comum de expressar um resultado de medio.
Nota 3: Na literatura tradicional e na edio brasileira anterior do VIM, o
resultado de medio era definido como um valor atribudo a um mensu-
rando obtido por medio, que poderia ser representado por uma indica-
o, ou um resultado no corrigido, ou um resultado corrigido, de acordo
com o contexto.
Robustez:Susceptibilidade de um procedimento analtico a alteraes das

condies experimentais, as quais podem ser expressas como uma lista dos
materiais da amostra, das substncias a analisar, das condies de arma-
zenamento, das condies ambientais e/ou de preparao da amostra em
que o mtodo pode ser aplicado tal como apresentado ou com pequenas al-
teraes especficas. Relativamente a todas as condies experimentais que
possam, na prtica, estar sujeitas a variaes (por exemplo, estabilidade dos
reagentes, composio da amostra, pH, temperatura), devem ser indicadas
quaisquer alteraes susceptveis de afetar os resultados analticos.
Propriedade de um procedimento analtico que indica sua insensibilidade
a mudanas de condies operacionais conhecidas sobre o resultado do
procedimento e, portanto, sua adequao a seu propsito de uso [47].
Seletividade:Propriedade de um sistema de medio, utilizado com um

procedimento de medio especificado, segundo a qual o sistema fornece
valores medidos para um ou vrios mensurandos, tal que os valores de
cada mensurando sejam independentes uns dos outros, ou de outras gran-
dezas associadas ao fenmeno, corpo ou substncia em estudo [22,28].
Exemplo 1: Aptido de um sistema de medio composto por um espec-
trmetro de massa para medir a razo entre correntes inicas geradas por
172
dois compostos especificados, sem interferncia de outras fontes especifi-
cadas de corrente eltrica.
Exemplo 2: Aptido de um sistema de medio para medir a potncia
de uma componente de um sinal a uma determinada frequncia sem
sofrer interferncias de componentes do sinal ou de outros sinais, em
outras frequncias.
Exemplo 3: Aptido de um receptor para discriminar entre um sinal de-
sejado e sinais no desejados, tendo geralmente frequncias ligeiramente
diferentes da frequncia do sinal desejado.
Exemplo 4: Aptido de um sistema de medio de radiao ionizante
para responder a uma radiao particular a ser medida na presena de
radiao concomitante.
Exemplo 5: Aptido de um sistema de medio para medir a concentrao
em quantidade de substncia de creatinina no plasma sanguneo por um
procedimento de Jaff sem ser influenciado pelas concentraes de glicose,
urato, cetona e protena.
Exemplo 6: Aptido de um espectrmetro de massa para medir a abun-
dncia em quantidade de substncia do istopo 28Si e do istopo 30Si no
silcio proveniente de um depsito geolgico sem influncia mtua ou
do istopo 29Si.
Nota 1: Em fsica, existe somente um mensurando; as outras grandezas
do mesmo tipo do mensurando so grandezas de entrada para o sistema
de medio.
Nota 2: Em qumica, as grandezas medidas envolvem frequentemente
componentes diferentes do sistema submetido medio e estas grande-
zas no so, necessariamente, do mesmo tipo.
Nota 3: Em qumica, a seletividade de um sistema de medio obtida
normalmente para grandezas associadas a componentes selecionadas em
concentraes dentro de intervalos estabelecidos.
Nota 4: O conceito de seletividade em fsica (ver Nota 1) prximo daque-
le da especificidade, como s vezes utilizado em qumica.
a extenso na qual um conjunto de n analitos podem ser medidos simul-
taneamente por (no mnimo) n sensores (canais detectores) sem interfern-
cia de outros componentes e, portanto, podem ser determinados indepen-
dentemente e sem distrbios [47].
a extenso na qual um procedimento analtico pode determinar analito(s)
particular(es) em uma mistura(s) ou matriz(es) sem a interferncia de ou-
tros componentes de comportamento semelhante.
Nota 5: Seletividade o termo recomendado em qumica analtica para
expressar a extenso na qual um procedimento analtico particular pode
determinar analito(s) na presena de outros componentes. A seletividade
pode ser graduada. O uso do termo especificidade para o mesmo conceito
desencorajada, pois em geral isso leva a confuses.
173
Sensibilidade:Quociente entre a variao de uma indicao de um sis-
tema de medio e a variao correspondente do valor da grandeza me-
dida [22,28].
Nota 1: A sensibilidade pode depender do valor da grandeza medida.
Nota 2: A variao do valor da grandeza medida deve ser grande quando
comparada resoluo.
Nota em [47]: Em medies analticas , de fato, a quociente diferencial do
valor medido para o valor analtico.
Sistema Analtico: Conjunto de circunstncias que contribuem para a qua-

lidade do resultado analtico, incluindo equipamentos, reagentes, proce-
dimentos, materiais de ensaio, pessoal, condies ambientais, medidas de
garantia da qualidade (seo 18.6.1 do IUPAC Orange Book [45]).
Soluo padro de calibrao ou soluo de calibrao ou padro de

calibrao: Uma soluo (ou outra diluio) do analito e, se usado, do
padro interno usada para a calibrao do instrumento de medio ana-
ltica. Ela pode ser preparada a partir de um padro de trabalho e pode
ser matrizada.
Tcnica analtica ou princpio de medio:Princpio fsico ou qumico e/

ou instrumental usado na determinao de um analito. o fenmeno que
serve como base para uma medio.
Aplicao analtica genrica de um princpio cientfico [47].
Tendncia (Bias): Estimativa de um erro sistemtico [22,28].

a diferena entre a esperana de um resultado de ensaio e um valor de
referncia aceito [47].
a diferena entre uma mdia de um nmero suficiente de resultados de
medio em condies de repetitividade e o valor verdadeiro convencio-
nal estabelecido por um padro, material de referncia ou MRC. A ten-
dncia uma medida da veracidade, quanto maior a tendncia menor a
veracidade do resultado da medio.
Validao:Verificao na qual os requisitos especificados so adequados

para um uso pretendido [22,28].
Exemplo: Um procedimento de medio, normalmente utilizado para a
medio da concentrao da massa de nitrognio em gua, pode tambm
ser validado para a medio no soro humano.
Confirmao por exame e fornecimento de evidncia objetiva de que os
requisitos especficos para determinado uso pretendido so atendidos
(ISO17025 [23]).
Processo pelo qual estabelecido, por estudo em laboratrio, que as ca-
ractersticas de desempenho de um procedimento atendem aos requisitos
para um uso pretendido [47].
174
Valor convencional: Valor atribudo a uma grandeza por um acordo, para
um dado propsito [22,28].
Exemplo 1: Valor convencional da acelerao da gravidade, gn = 9,806
65 m.s-2.
Exemplo 2: Valor convencional da constante de Josephson, KJ-90 = 483
597,9 GHz.V-1.
Exemplo 3: Valor convencional de um dado padro de massa, m =
100,00347 g.
Nota 1: O termo valor verdadeiro convencional algumas vezes utiliza-
do para esse conceito, porm seu uso desaconselhado.
Nota 2: Um valor convencional algumas vezes uma estimativa de um
valor verdadeiro.
Nota 3: Geralmente considera-se que um valor convencional est associado
a uma incerteza de medio convenientemente baixa, que pode ser nula.
Valor analtico: Magnitude de uma grandeza analtica (x) medida em uma

amostra de ensaio, em um primeiro momento, e atribuda a uma amostra
de referncia usada para calibrao, em um segundo momento [47].
Portanto, podemos interpretar essa definio dizendo que o valor analtico
o valor convencional definido no 2.12 do VIM [22,28] e chamado de va-
lor verdadeiro convencional nas edies anteriores do VIM. Por exemplo,
o valor analtico pode ser o valor do teor de um analito em um MRC ou o
valor da concentrao de uma soluo padro de calibrao.
Veracidade ou veracidade de medio:Grau de concordncia entre a m-

dia de um nmero infinito de valores medidos repetidos e um valor de
referncia [22,28, 9].
Nota 1: A veracidade no uma grandeza e, portanto, no pode ser ex-
pressa numericamente. Porm, a norma ISO 5725 apresenta medidas para
o grau de concordncia.
Nota 2: A veracidade est inversamente relacionada ao erro sistemtico,
porm no est relacionada ao erro aleatrio.
Nota 3: No se deve utilizar o termo exatido de medio no lugar de ve-
racidade e vice-versa [22,28]. A veracidade geralmente expressa como
um erro sistemtico, ou uma correo, ou um vis. estimada por meio de
correes, ou fatores de correes oriundos de calibraes, recuperaes,
efeito de matriz, ou outros efeitos sistemticos.
o grau de concordncia entre o valor mdio obtido de uma grande srie
de resultados de ensaio e um valor de referncia aceito [47,45].
Verificao:Provimento de evidncia objetiva de que um dado item aten-

de a requisitos especificados [22,28].
Exemplo 1: Confirmao de que um dado material de referncia, como de-
clarado, homogneo para o valor e para o procedimento de medio em
questo, at uma poro, do material sob medio, com massa de 10 mg.
175
Exemplo 2: Confirmao de que as propriedades relativas ao desempenho
ou aos requisitos legais so atendidas por um sistema de medio.
Exemplo 3: Confirmao de que uma incerteza alvo pode ser obtida.
Nota1: Quando aplicvel, recomenda-se que a incerteza de medio seja
levada em considerao.
Nota 2: O item pode ser, por exemplo, um processo, um procedimento de
medio, um material, um composto ou um sistema de medio.
Nota3: Os requisitos especificados podem ser, por exemplo, as especifica-
es de um fabricante.
Nota4: Em metrologia legal e geralmente na avaliao da conformidade,
a verificao, conforme definida no VIML, compreende o exame e a mar-
cao e/ou a emisso de um certificado de verificao para um sistema
de medio.
Nota5: A verificao no deve ser confundida com calibrao. Nem toda
verificao uma validao.
Verificao de Procedimento Analtico (VPA): Processo de verificao/

avaliao de desempenho, documentado, aplicvel ao procedimento (m-
todo) analtico normalizado ou oficial. Objetiva comprovar se o referido
procedimento analtico opera adequadamente nas condies de rotina do
laboratrio, em conformidade com os critrios de aceitao estabelecidos
neste Manual.
O mtodo para a verificao do procedimento analtico constitui-se no
mnimo da anlise em replicatas e em condies de preciso intermediria
de um MRC ou outro material de referncia, para a estimao da veraci-
dade (correo, fator de correo, recuperao) e da preciso de repetiti-
vidade e intermediria do procedimento analtico, isto , a acurcia ou
exatido do procedimento.
A qualificao ou verificao de um procedimento analtico uma valida-
o simplificada.
176
ANEXO XI
Matrizes Representativas (Praguicida
e Micotoxinas)
Tabela A.XI.1 Seleo de matrizes representativas para validao de

procedimentos de determinao de praguicidas
Grupos de Propriedades Espcies
Classe de Produtos
Produtos Comuns Representativas
Produtos de Origem Vegetal
Hortalias frondosas do
Espinafre, alface
Alto teor de gua gnero Brassica, hortal-
I brcolis, repolho, couve
e clorofila ias frondosas, legumi-
e vagem
nosas
Ma, pera, pssego,
Alto teor de gua Pomos; drupas, peque-
cereja, morango, uva,
e ausncia ou nas frutas e bagas, hor-
II tomate, pimento,
baixo teor de talias de frutos, razes e
melo, batata, cenoura,
clorofila tubrculos
cogumelo, salsa
III Alta acidez Frutas ctricas Laranja, limo
Alto teor de
IV Passas, tmaras
acares
Alto teor leos/ Abacate, semente de
V Oleaginosas; castanhas
gorduras girassol, noz, pistache
Ausncia ou baixo Cereais em gros e seus
VI Trigo, arroz, milho
teor de gua produtos
Produtos de alta e.g.: Alho, lpulo, ch,
especificidade especiarias, oxicoco
Produtos de Origem Animal
Carne bovina, carne de
Carnes
frango
Vsceras Fgado, rim
Gorduras da carne
Leite Leite de vaca
Ovos Ovos de Galinha
Obs.: Produtos de alta especificidade no podem ser validados por intermdio do uso de espcies representativas.
177
Tabela A.XI.2 Grupo de matrizes, por categoria, a serem utilizadas
na validao de procedimento analticos e no controle de qualidade
para micotoxinas
Matrizes consideradas similares pertencentes
Classe Categoria
mesma categoria
Amendoim, pasta de amendoim, farelo de amendoim,

Amndoas e
I avels, castanha-do-brasil, pistache, nozes, amndoas
amendoim
em geral e suas respectivas pastas ou manteigas e coco
Arroz, milho, cevada centeio, trigo, farinha de milho,

II Cereais
trigo, farinha de trigo
Rao e ingredi- Farelo de soja, farelo de trigo, farelo de milho, raes
III
entes de rao de frango, suno, equino e bovina
Uva-passa, ameixa, damasco, tmara, figo, banana,
IV Frutas secas
dentre outras
Leguminosas e
V Feijo, lentilhas e leguminosas em geral
oleaginosas
Caf verde Caf verde
VI Caf torrado e
Caf torrado ou solvel
solvel
VII Leite Leite fludo, leite em p
VIII Algodo Caroo de algodo e farelo de algodo
Obs.: Na caracterizao do grupo, foram levados em considerao os seguintes parmetros: dureza, com-
posio centesimal, interferentes analticos (pigmentos e outros), processo de preparo de amostras.
178
ANEXO XII
Planejamento Fatorial para o Estudo
de Robustez
Uma das mais eficientes estratgias para realizar o estudo de robus-

tez utilizar os chamados planejamentos fatoriais completos ou fracio-
nrios. Existem outros planejamentos, tais como o planejamento fatorial
com ponto central, planejamento estrela, planejamento fatorial com face
centrada e ponto central, planejamento Plackett-Burman, planejamento
Doehlert etc. [4,10,19,29,40,41,42,43,44]. Os planejamentos fatoriais fra-
cionrios saturados so chamados de abordagem de Youden na Deciso
2002/657/EC [10].
O planejamento fatorial reduz o nmero de experimentos (ou en-

saios ou amostras) ao mnimo necessrio para detectar os efeitos princi-
pais e/ou os efeitos de interao dos fatores (tratamentos na linguagem
da ANOVA), que podem influenciar significativamente no resultado da
medio do procedimento analtico, afetando, assim, na qualidade metro-
lgica e na confiabilidade do procedimento analtico.
Devido sua eficincia, os planejamentos fatoriais permitem a re-

duo do tempo e dos custos para a realizao da validao de um proce-
dimento analtico.
Planejamentos fatoriais so constitudos de combinaes de condi-

es experimentais, os fatores ou tratamentos, nas quais alguns ou todos
os fatores estudados ocorrem conjuntamente com dois ou mais nveis de
outro fator (definio adaptada de [14]).
Os fatores ou tratamentos so as grandezas de entrada ou de in-

fluncia que podem afetar as respostas, as variveis de sada, do pro-
cesso em estudo. Um processo pode apresentar mais de uma resposta
(FiguraA.XII.1).
Na validao de um procedimento analtico, o processo o prprio

procedimento analtico. A funo resposta, ou simplesmente resposta,
a tendncia (erro sistemtico ou correo) do resultado analtico experi-
mental, a concentrao ou o teor do analito, em um MRC ou um padro,
ou uma matriz branca fortificada, ou um extrato de matriz branca forti-
ficada, ou uma Amostra de Controle de Qualidade (ACQ). Preferencial-
mente a resposta uma combinao da tendncia e da preciso do ensaio,
por exemplo, suas somas. Os fatores so as condies experimentais que,
espera-se, possam alterar o resultado analtico.
179
Os fatores podem ser quantitativos ou qualitativos, contnuos ou
discretos. Exemplos: temperatura 40C ou 60C; tempo de extrao 50min
ou 55min; solvente acetonitrila ou etanol; coluna cromatogrfica A ou B;
laboratrio A ou B; matriz fgado ou msculo etc.
Os nveis dos fatores so os diferentes valores, dois ou mais, que eles

podem assumir. O nmero de nveis, estudados para cada fator no pre-
cisa ser igual (planejamentos de nveis misturados). No entanto, os plane-
jamentos mais usados experimentalmente so aqueles de mesmo nmero
de nveis por cada fator.
FiguraA.XII.1 Representao de um sistema ou processo que, sob a

ao de diversos fatores, responde de formas diferentes
Fator 1 Resposta1
Sistema
Resposta 2
Fator 2 ou
.
processo .
. .
. .
Resposta N
Fator N
Obs.: Os detalhes ou o mecanismo de funcionamento do sistema ou processo so desconhecidos (caixa preta).

possvel apenas alterar os valores dos fatores e medir as respostas resultantes.
Planejamentos Fatoriais Completos

Se todas as combinaes possveis dos nveis de todos os fatores
aparecem no planejamento ento ele chamado de planejamento fato-
rial completo.
Um planejamento fatorial completo de f (fatores) e p (nveis de cada

fator) designado planejamento pf. O nmero total de experimentos (ou
ensaios ou amostras) Nexp em um tal planejamento : Nexp=pf. Exemplos:
Um fatorial completo com dois fatores (f=2) e dois nveis por fator (p=2)
exigir quatro experimentos (ou ensaios ou amostras): Nexp=22=4. Um
fatorial completo com dois fatores (f=2) e trs nveis por fator (p=3) exigi-
r nove experimentos (ou ensaios ou amostras): Nexpf=32=9. Um fatorial
completo com sete fatores (f=7) e dois nveis por fator (p=2) exigir 128
experimentos (ou ensaios ou amostras): Nexpf=27=128.
Neste Anexo sero discutidos apenas os planejamentos fatoriais de

dois nveis, que so os mais aplicados em estudos de robustez. Nesses pla-
180
nejamentos atribuem-se, ao nvel mais alto de cada fator, os smbolos + ou
+1, ou uma letra maiscula que representa o fator. Ao nvel mais baixo de
cada fator, so designados os smbolos ou 1, ou uma letra minscula
que representa o fator. Os fatores, por sua vez, so simbolizados por n-
meros ou letras em negritos.
Os planejamentos fatoriais completos podem ser representados por

quadrados, cubos ou hipercubos no espao dimensional dos fatores. A Fi-
guraA.XII.2 apresenta os planejamentos fatoriais completos 22 e 23, e um
planejamento fatorial fracionrio 23-1.
A matriz quadrada NexpfNexpf, contendo as diversas combinaes

de nveis dos fatores para cada experimento (ou ensaio ou amostra) a rea-
lizar e as combinaes dos sinais para o clculo da resposta mdia global
M e dos efeitos principais dos fatores e de suas interaes, chamada de
tabela de coeficientes de contraste. A TabelaA.XII.1 e a TabelaA.XII.2
mostram os coeficientes de contraste para os planejamentos fatoriais com-
pletos 22 e 23, respectivamente, dentro de retngulos tracejados.
A matriz Nexpff apresentada nas reas sombreadas das tabelas deste

Anexo chamada de matriz planejamento [44]. Ela contm todas as
combinaes dos nveis dos fatores que sero utilizados em cada experi-
mento planejado.
Para construir a tabela de coeficientes de contraste de um planeja-

mento fatorial completo, deve-se proceder da seguinte forma:
1. Constri-se primeiro uma coluna de coeficientes de contrastes

da mdia global M contendo somente sinais positivos e com
Nexpf elementos ou linhas.
2. Do lado direito da coluna de M, coloca-se a coluna com os coefi-

cientes de contrastes do fator 1, constituda de uma alternncia
de sinal negativo e positivo, comeando com o sinal negativo.
3. Do lado direito da coluna do fator 1, coloca-se a coluna com os

coeficientes de contrastes do fator 2, constituda de uma alter-
nncia de dois sinais negativos e dois sinais positivos, comean-
do com os sinais negativos.
4. Do lado direito da coluna do fator 2, coloca-se a coluna com

os coeficientes de contrastes do fator 3, constituda de uma al-
ternncia de quatro sinais negativos e quatro sinais positivos,
comeando com os sinais negativos.
5. Adicionam-se as colunas dos coeficientes de contrastes dos fa-

tores at o ltimo fator a estudar, sempre dobrando em relao
coluna anterior o nmero de sinais negativos e positivos em
sequncia da alternncia. Nesse ponto est terminada a cons-
181
truo de todas as combinaes de experimentos (ou ensaios ou
amostras) a se realizar no estudo de robustez (reas sombreadas
nas tabelas de coeficientes de contrastes mostradas neste Anexo).
6. Para obter as colunas dos contrastes dos efeitos de interao

basta multiplicar os coeficientes de contraste dos fatores que in-
teragem entre si em cada linha de cada experimento (ou ensaio
ou amostra). Assim, para calcular os coeficientes de contraste da
coluna da interao 12, multiplicam-se os elementos da coluna
do fator 1 pelos elementos da coluna do fator 2, linha aps linha;
para obter os coeficientes de contraste da coluna da interao
13, multiplicam-se os elementos da coluna do fator 1 pelos ele-
mentos da coluna do fator 3; para determinar os coeficientes de
contraste da coluna da interao 123, multiplicam-se os elemen-
tos da coluna do fator 1 pelos elementos da coluna do fator 2 e
pelos elementos da coluna do fator 3, linha aps linha, e assim
por diante at obter a ltima interao de todos os fatores que
se deseja estudar.
Figura A.XII.2 Representao grfica em um sistema de coordenadas

dos planejamentos fatoriais completos
(+) 3 4 1327,845
5 8
1 5 8
980,508
Solvente
1427,147
1083,617
x3
Tempo
151,37 0
( ) 1 2 1065,525
3
-1 1433,305
1
3 1
-1
1
Te -1
( ) (+) m
pe 0
2
0
ra x1
Temperatura tu
ra -1
737,731 R1
1
-1 x2
-1
2
(a) (b) (c)
Notas: (a) 22, fatores: temperatura e solvente, nas circunferncias os nmero dos experimentos.
(b) 23, fatores: temperatura, razo de impregnao e tempo (Figura7 em [41]).
(c) Planejamento fatorial fracionrio 23-1 para trs fatores genricos x1, x2 e x3, somente os experimen-
tos 2, 3, 5 e 8 do fatorial completo so realizados (Figura1 em [40]).
Tabela A.XII.1 Planilha para um planejamento fatorial completo 22

com duplicata dos experimentos
Exp./ Fatores Int. Respostas
Amostra M 1 2 12 Ri,1 Ri,2 Rm,i Varr,i
1 + + 57(5) 61(3) 59 8
2 + + 92(7) 88(8) 90 8
3 + + 55(2) 53(6) 54 2
4 + + + + 66(4) 70(1) 68 8
sp: 2,55
Efeitos: 67,75 22,5 13,5 8,5
sefeito 1,803
Fonte: Adaptao da Tabela 3.1 em [4].
182
Notas: Ri,j a resposta da j-sima replicata do i-simo experimento.
Rm,i a resposta mdia em cada experimento i replicado.
Varr,i a varincia das respostas replicadas em cada experimento i do planejamento fatorial.
Obs.: A tabela dos coeficientes de contraste mostrada na matriz 44 circundada pela linha tracejada.
A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento mostrada na
rea sombreada.
Na Tabela A.XII.1, os fatores so a temperatura (1) nos nveis 40C ()

e 60C (+) e o solvente de extrao (2) nos nveis acetonitrila () e etanol (+).
As respostas R i,1 e R i,2 so as recuperaes percentuais do analito em

cada experimento de extrao. A resposta mdia global M=67,75.
O efeito principal da temperatura 22,5 maior que o efeito principal

do solvente 13,5.
O efeito de interao da temperatura e do solvente 8,5 o menor

dos efeitos. Teste F: a diferena entre as varincias 8 e 2 no significativa
(Fcalc=4, Fcrit;a;n1;n2=Fcrit;0,05;1;1=161,5, p-valor= 29,5%)
O desvio-padro agrupado 2,55 e o desvio-padro do efeito 1,80.

A ordem sorteada de execuo dos experimentos replicados est indicada
pelos nmeros entre parnteses e sobrescritos ao lado das respostas do
experimento.
Tabela A.XII.2 Planilha para um planejamento fatorial completo 23

com duplicata dos experimentos
Exp./ Fatores Interaes
Amostra M 1 2 3 12 13 23 123 Ri,1 Ri,2 Rm,i Varr,i
1 + + + + 56(7) 52(12) 54,0 8
2 + + + + 85(9) 88(10) 86,5 4,5
3 + + + + 49(11) 47(15) 48,0 2
4 + + + + 64 (2)
62 (1)
63,0 2
5 + + + 65(13) 61(5) 63,0 8
6 + + + + 92(6) 95(16) 93,5 4,5
7 + + + + 57(14) 60(3) 58,5 4,5
8 + + + + + + + + 70 (8)
74(4) 72,0 8
sp: 2,28
Efeitos: 67,31 22,88 13,88 8,88 8,63 0,88 0,88 0,13
sefeito 1,14
Fonte: Adaptao das tabelas 3.3 e 3.4 em [4].
Notas: Ri,j a resposta da j-sima replicata do i-simo experimento.

Rm,i a resposta mdia em cada experimento i replicado.
Varr,i a varincia das respostas replicadas em cada experimento i do planejamento fatorial.
Obs.: A tabela dos coeficientes de contraste mostrada na matriz 88 circundada pela linha tracejada.
A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento mostrada na rea sombreada.
183
Na Tabela A.XII.2, os fatores so a temperatura (1) nos nveis 40C
() e 60C (+); o solvente de extrao (2) nos nveis acetonitrila () e etanol
(+); e o tempo de extrao (3) nos nveis 100min () e 120min (+).
As respostas Ri,1 e R i,2 so as recuperaes percentuais do analito em

cada experimento de extrao. A resposta mdia global M=67,31.
O efeito principal da temperatura 22,8 maior que o efeito principal

do solvente 13,88, o qual, por sua vez, maior que o efeito principal do
tempo 8,88. O efeito de interao da temperatura e do solvente 8,63 o
maior dos efeitos de interao, sendo todos os demais efeitos de intera-
o insignificantes (desprezveis). O desvio-padro agrupado 2,28 e o
desvio-padro do efeito 1,14.
A ordem sorteada de execuo dos experimentos replicados est in-

dicada pelos nmeros entre parnteses e sobrescritos ao lado das respostas
do experimento.
Fazendo-se um teste F de homogeneidade de varincias [ver a eq.(1)

e pargrafos seguintes ou eq.(A.II.2) e pargrafos seguintes], com graus de
liberdade do numerador e do denominador iguais a 1 (duplicata menos
1), entre todos os pares de varincias dos experimentos, conclumos que
todos os pares tm varincias iguais.
Exemplo: Fcalc=8/2=4<161,4=Fcrit,0,05;1;1=Fcrit,a,n1,n2, isto , mesmo as

duas varincias mais diferentes no so estatisticamente diferentes entre si
(logo, so iguais), no nvel de confiana de 95%. Embora esse no seja um
teste de hiptese mltiplo para testar a simultnea igualdade entre todas
essas varincias, ele d uma forte evidncia dessa igualdade mltipla.
Assim, pode-se assumir que o desvio-padro do efeito sefeito = 1,61

uma medida da incerteza de todos os efeitos. Dessa forma, um Intervalo de
Confiana (IC) ao redor do valor dos efeitos pode ser calculado usando o
tcrit,a,n = tcrit;0,05;2 = 2,776 para 4 graus de liberdade (n = Nexp Nexpf = 16 8 = 4)
e 95% de nvel da confiana. Logo, o IC ao redor de cada efeito ser de
(2,776 1,14 = 3,16).
Somente os IC dos efeitos de interao 13, 23 e 123 contm o zero e

so insignificantes, enquanto os trs efeitos principais e o da interao 12
so significativamente diferentes de zero.
As tabelas dos coeficientes de contrastes para os planejamentos fa-

toriais completos 24 e 25, que levam a 16 e 32 experimentos (ou ensaios ou
amostras), respectivamente, so mostradas na Tabela A.XII.3 e na Tabe-
laA.XII.4, respectivamente.
Os experimentos (ou ensaios ou amostras) para o estudo de robus-

tez so realizados nas combinaes de nveis dos fatores apresentadas nas
184
colunas dos fatores principais e indicadas nas reas sombreadas nas tabe-
las de coeficientes de contrastes presentes neste Anexo.
Recomenda-se que cada um dos Nexpf experimentos (ou ensaios ou

amostras) de um planejamento fatorial sejam replicados J vezes, na medi-
da em que isso no aumente exageradamente o nmero total de experi-
mentos replicados: Nexp=JNexpf (notar a diferena entre os ndices dessa
equao). A replicao dos experimentos (ou ensaios ou amostras) reduz
a chance de que respostas de experimentos (ou ensaios ou amostras) es-
prios ou duvidosos (outliers) conduzam super ou subestimao dos
efeitos e interaes.
A realizao de todos os Nexp experimentos (ou ensaios ou amos-

tras), incluindo as J replicaes, deve ser feita em ordem aleatria e no
segundo o seu nmero no planejamento. Na TabelaA.XII.1 e na TabelaA.
XII.2, a ordem de realizao dos experimentos (ou ensaios ou amostras)
indicada pelos nmeros entre parnteses sobrescritos direita de cada
resposta.
Para se calcular a mdia global ou grande mdia M usa-se a seguin-

te equao:
(A.XII.1)
Exemplos: A mdia global do fatorial da TabelaA.XII.1 :
M=67,75=(59+90+54+68)/4.
A mdia global do fatorial da TabelaA.XII.2 :
M=67,31=(54,0+86,5+48,0+63,0+63,0+93,5+58,5+72,0)/8
Os efeitos principais dos fatores, tambm chamados de efeitos de

primeira ordem, so designados pelos seus nmeros ou smbolos em ne-
grito: 1, 2, 3 etc., ou p, V, T etc.
Os efeitos de interao de dois, trs ou mais fatores, tambm cha-

mados de efeitos de segunda, terceira ordem etc., so designados pelas
justaposies de seus nmeros ou smbolos em negrito dos fatores que
interagem: 12, 13, 123 etc., ou pV, pT, pTV etc.
Em geral, um efeito de interao dos fatores torna-se menor quanto

maior a ordem desse efeito de interao.
O clculo de qualquer efeito principal ou de interao se faz soman-

do as respostas mdias Rm,i dos Nexpf experimentos (ou ensaios ou amos-
185
tras), cada uma multiplicada pelo i-simo sinal + ou que aparece na
coluna do efeito na tabela dos coeficientes de contraste do planejamento
fatorial (i), dividido por metade dos experimentos (ou ensaios ou amos-
tras) do fatorial:
(A.XII.2)
Exemplos: O efeito principal do fator 1 (temperatura T), na

Tabela.A.XII.1, :
Efeito1=T=22,5=(59+9054+68)/2.
O efeito principal do fator 2 (solvente S), na Tabela.A.XII.1, :
Efeito2=S=13,5=(5990+54+68)/2.
O efeito de interao dos fatores 1 e 2 (temperatura T e solvente S),

na Tabela.A.XII.1, :
Efeito 12=TS=8,5=(599054+68)/2.
O efeito de interao dos fatores 1, 2 e 3 (temperatura T, solvente S e

o tempo t), na Tabela.A.XII.2, :
Efeito 123=TSt=0,125=(54+86,5+4863+6393,558,5+72)/4 @0,13.
Uma consequncia da eq.(A.XII.2) que todos os efeitos so ob-

tidos da diferena entre duas metades das respostas do planejamento
fatorial. Por isso, esses efeitos so tambm chamados de contrastes, na
linguagem estatstica.
Quando um ou mais experimentos (ou ensaios ou amostras) so re-

plicados, pode-se calcular a varincia de repetitividade varr,i associada da
cada i-simo experimento (ou ensaio ou amostra) do planejamento fatorial
replicado pela expresso:
(A.XII.3)
Para o caso particular de duplicatas, J=2, a eq. (A.XII.3) se torna:
(A.XII.4)
186
Se considerarmos como vlida a hiptese de que todas as varincias
varr,i de cada experimento (ou ensaio ou amostra) replicado so iguais en-
tre si, a chamada hiptese de homoscedasticidade, que pode no ser ver-
dadeira e pode ser testada estatisticamente com um teste F, ento uma
varincia agrupada varp pode ser obtida pela equao:
(A.XII.5)
O desvio-padro agrupado, igual raiz quadrada da varincia agru-

pada, sp=(varp), mede o desvio-padro de uma nica medio da respos-
ta do experimento no caso de validade da hiptese de homoscedasticida-
de. Portanto, sp uma estimativa da incerteza de repetitividade de cada
um dos experimentos (ou ensaio ou amostra) do planejamento fatorial.
No caso da validade da hiptese de homoscedasticidade citada an-

teriormente, e para o planejamento balanceado (mesmo nmero J de rpli-
cas para todos os Nexpf experimentos do planejamento fatorial), o desvio-
-padro associado a todos os efeitos, isto , a incerteza padro dos efeitos :
(A.XII.6)
Exemplo: Aplicando a eq.(A.XI.5) nos dados da ltima coluna da

Tabela.A.XII.1 obtm-se a varincia agrupada:
varp=(8+8+8+2)/(84)=26/4=6,5
Logo, o desvio-padro agrupado sp = 6,5 = 2,5495 e os ex-

perimentos foram duplicados, J = 2. Ento, aplicando a eq.(A.XII.6):
sefeito=2,5495/2 =1,803.
Se a incerteza combinada do ensaio j estiver sido calculada, con-

forme as metodologias apresentadas na seo 8 Incerteza de Medio Ana-
ltica, da Parte II, ela (ou seu quadrado) deve ser preferencialmente usada
no lugar de sp ou de sp2 na eq.(A.XII.6). Na falta da incerteza combinada,
prefere-se tambm usar o desvio-padro da preciso intermediria sR no
lugar de sp na eq.(A.XII.6).
Um teste t bilateral pode ser feito para um dado nvel de confiana

1a/2 e grau de liberdade n igual ao nmero total de experimentos repli-
cados menos o nmero de experimentos do fatorial n=NexpNexpf, encon-
trando-se na tabela de pontos percentuais de t de Student, o t crtico, tn,1a/2.
187
O efeito somente considerado significativo, isto , diferente de zero, se
seu mdulo for maior que tn,1a/2sefeito. Em geral se usa a=0,05, ou seja
95% de nvel de confiana. Existem outras formas de testar a significncia
de um dado efeito como usando ANOVA ou um grfico de probabilidades
normais [4,19,29,43,44].
TabelaA.XII.3 Tabela dos coeficientes de contraste para um planeja-

mento fatorial completo 24
Exp. M 1 2 3 4 12 13 14 23 24 34 123 124 134 234 1.234
1 + + + + + + + +
2 + + + + + + + +
3 + + + + + + + +
4 + + + + + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + + + + +
7 + + + + + + + +
8 + + + + + + + +
9 + + + + + + + +
10 + + + + + + + +
11 + + + + + + + +
12 + + + + + + + +
13 + + + + + + + +
14 + + + + + + + +
15 + + + + + + + +
16 + + + + + + + + + + + + + + + +
Obs.: A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento mostrada na
rea sombreada.
Exemplo: Usando o fatorial 24 da TabelaA.XII.3, estuda-se a resolu-

o de separao entre dois picos cromatogrficos em funo da variao
em dois nveis dos fatores: 1= temperatura; 2 = percentagem do solvente
A, na mistura de solventes; 3 = velocidade do fluxo do solvente; e 4 = tipo
do solvente A, etanol () ou acetonitrila (+).
As respostas para os 16 experimentos 1 a 16, no replicados nessa

ordem, so: 52, 61, 124, 113, 85, 66, 185, 192, 98, 86, 201, 194, 122, 139, 289,
286 (valores da Tabela 4.2 em [4]). Calculam-se os contrastes dos efeitos
principais dos fatores 2 e 4, do efeito de interao desses dois fatores e do
efeito de interao dos quatro fatores, usando a eq.(A.XII.2) e os sinais das
colunas 2, 4, 24 e 1.234 da TabelaA.XII.3, respectivamente, a saber:
188
Clculos semelhantes levam a todos os valores dos demais contrastes:
1 =-2,38; 2 =109,38; 3 =54,38; 12 =-1,13; 13 =2,88; 14 =1,13; 23 =25,63; 24 =

21,88; 34 = 9,88; 123 = 2,63; 124 = -2,63; 134 = 5,38; 234 = 0,13; 1.234 = -8,88.
Como no h replicao, no se pode calcular as varincias varr,i e

nem o sp.

mento fatorial completo 25
Exp. M 1 2 3 4 5 12 25 124 135 235 345 1.235 1.345 2.345 12.345
1 + + + + + +
2 + + + + + + +
3 + + + + + +
4 + + + + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + + + + + +
7 + + + + + + + +
8 + + + + + + + + +
9 + + + + + + + +
10 + + + + + + +
11 + + + + + +
12 + + + + + + + + + + + + +
13 + + + + + + + + + +
14 + + + + + + + + +
15 + + + + + + + +
16 + + + + + + +
17 + + + + + + +
18 + + + + + + + +
19 + + + + + + + + +
20 + + + + + + + + + +
21 + + + + + + +
22 + + + + + + + +
23 + + + + + + + + +
24 + + + + + + + + + +
25 + + + + + + + + +
26 + + + + + + + +
27 + + + + + + + + +
28 + + + + + + + +
29 + + + + + + + + +
30 + + + + + + + +
31 + + + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 12 25 124 135 235 345 1.235 1.345 2.345 12.345
Obs.: Para economizar espao, so mostrados apenas os coeficientes de contrastes da media global, dos cinco
fatores principais e de dez interaes dos fatores.
A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento mostrada na rea sombreada.
Fica como exerccio a obteno dos coeficientes de contraste das outras 16 interaes: 13, 14, 15, 23, 24, 34,
35, 45, 123, 125, 134, 145, 234, 245, 1.234, 1.245, que esto faltando para completar a matriz 3232 da
tabela de coeficientes de contrastes desse planejamento.
189
Planejamentos Fatoriais Fracionrios
Quando o nmero de parmetros superior a cinco, o total de ex-
perimentos de um planejamento fatorial completo se torna muito grande.
Nesses casos pode-se reduzir o tempo e o custo de realizao do estudo de
robustez, diminuindo o nmero de experimentos a realizar, por meio do
uso dos chamados planejamentos fatoriais fracionrios.
Nos planejamentos fracionrios, no possvel estimar todos os

efeitos e as interaes possveis de maneiras completamente independen-
tes. Efeitos principais se confundem com os de interao e estes se confun-
dem com efeitos de interao de ordem superior.
Devido a esses confundimentos, os contrastes calculados por meio

da tabela de coeficientes de contrastes no so os efeitos principais puros
ou os efeitos de interao puros de uma dada ordem. Os contrastes so, na
verdade, a soma de dois ou mais efeitos de ordens diferentes. Lembrando
que, em geral, os efeitos de ordem superior so menores que os efeitos de
ordem inferior. Esses contrastes estimam aproximadamente bem o efeito
de ordem inferior. A literatura especializada usa novos smbolos para esses
contrastes e no os smbolos dos nmeros em negrito. Por motivo de sim-
plificao, continuaremos a us-los neste Manual.
Assim, em trabalhos com planejamentos fatoriais fracionrios, pro-

cura-se, em geral, construir planejamentos fatoriais que, de preferncia, s
confundam os efeitos principais com os efeitos de interao de ordem trs
ou superiores do planejamento, isto , no h confundimento entre efeito
principal e efeito de interao de ordem dois.
Por causa desses inconvenientes, s utilizamos planejamentos fato-

riais fracionrios para fazer uma triagem entre os muitos fatores a estudar,
de modo a evidenciar os fatores que apresentam maiores efeitos.
Aps a triagem dos fatores que mais afetam o procedimento ana-

ltico com um planejamento fatorial fracionrio, pode ser conveniente ou
necessrio fazer-se um estudo mais detalhado dos efeitos principais e de
interaes desses fatores mais importantes, agora em menor nmero, com
um planejamento fatorial completo.
Um planejamento fatorial fracionrio de frao meia para planeja-

mentos com dois nveis e f fatores reduz o nmero de experimentos pela
metade, relativamente ao planejamento completo. Tal planejamento de
frao meia denotado 2f1. Assim, um planejamento de frao meia para
trs fatores denotado 231 e tem quatro (Nexpf=231=22=4) experimentos
em vez dos oito experimentos do fatorial completo 23. Analogamente, o
fatorial de frao meia 251 tem 16 (Nexpf=251=24=16) experimentos, em
vez dos 32 do fatorial completo 25.
190
Um fatorial fracionrio de frao um quarto () para planejamentos
com dois nveis e f fatores reduz o nmero de experimentos para a quarta
parte, relativamente ao planejamento completo. Tal planejamento de fra-
o denotado 2f2. Assim, um planejamento de frao para cinco fa-
tores denotado 252 e tem oito (Nexpf=252=23=8) experimentos em vez
dos 32 do fatorial completo 25. Um fatorial de frao para trs fatores
no pode existir, pois resultaria em um nmero de experimentos (232=2)
menor que o nmero de fatores a estudar.
Em planejamentos fatoriais fracionrios 2fk, h uma resoluo m-

xima que se pode alcanar igual a f, no mximo. O planejamento de reso-
luo mxima tem a menor quantidade de confundimentos entre efeitos
e tambm a maior eficincia para detectar efeitos principais dos f fatores
estudados. Exemplo: Para o planejamento fatorial fracionrio 241 podem-
-se construir planejamentos de resoluo quatro ou trs; no caso do pla-
nejamento fatorial fracionrio 283 podem-se construir planejamentos de
resoluo cinco, quatro ou trs.
A notao para indicar a resoluo de um planejamento fatorial fra-

cionrio um ndice em algarismos romanos. Exemplos: O planejamento
tem resoluo quatro, enquanto o planejamento de resoluo trs
estuda o mesmo nmero de fatores com o mesmo nmero de experimen-
tos (ensaios), mas menos eficiente que o planejamento . O planeja-
mento tem resoluo trs, a menor possvel para um fatorial 274 (esse
o planejamento que aparece na Tabela11 da Deciso 2002/657/EC [10]
(ver TabelaA.XII.7). No mostraremos aqui como se obtm o valor da re-
soluo de um planejamento fatorial fracionrio (ver a bibliografia espe-
cializada [4, 29,43]).
Planejamentos fatoriais fracionrios de resoluo trs confundem

efeitos principais com os efeitos de interao de segunda ordem (e.g., ou
). Os planejamentos fatoriais fracionrios de resoluo quatro no con-
fundem mais seus efeitos principais com os efeitos de interao de segunda
ordem, mas os confundem com os de terceira ordem (e.g., ou ou
). Os planejamentos fatoriais fracionrios de resoluo cinco somente
confundem efeitos principais com os efeitos de interao de quarta ordem
(e.g., ou ou ). Quanto mais alta a resoluo mais pura fica a
estimativa dos efeitos principais a partir dos contrastes de primeira ordem.
Em alguns casos, possvel construir diferentes planejamentos fa-

toriais fracionrios com a mesma resoluo, quando ela menor que a re-
soluo mxima. Esses diferentes planejamentos tm diferentes eficincias
entre si. Exemplo: Trs planejamentos diferentes podem ser constru-
dos com a mesma resoluo trs.
O planejamento fatorial fracionrio com o menor nmero de experi-

mentos ainda maior que o de fatores chamado de planejamento fatorial
fracionrio saturado. Exemplo: Para sete fatores o planejamento fatorial
191
fracionrio saturado 274, que um planejamento de frao 1/16, e resulta
em oito (23) experimentos em vez dos 128 experimentos do planejamento
completo 27. Para cinco fatores o planejamento fatorial fracionrio satura-
do 252, que tambm tem oito experimentos. Para cinco fatores no existe
o planejamento fracionrio de frao 1/8, que resultaria em menos experi-
mentos (253=4) que fatores.
A Tabela A.XII.5, a Tabela A.XII.6 e a Tabela A.XII.7 mostram os

coeficientes de contraste para os planejamentos fatoriais fracionrios ,
e , respectivamente, todos de apenas oito experimentos (ensaios).
Para construir a tabela de coeficientes de contraste de um planeja-

mento fatorial fracionrio de frao meia para estudar f fatores, procede-se
da seguinte forma:
1. Constri-se primeiramente uma tabela de coeficientes de con-

trastes da mdia e dos efeitos principais de um planejamento fa-
torial completo, para um fator a menos do que se deseja. Assim,
para obter o planejamento 241 para quatro fatores, necessrio
construir a tabela do planejamento completo 23. Dessa forma,
tm-se os coeficientes de contrastes para a mdia global e para
os f1 fatores que se deseja estudar.
2. Justape-se direita da tabela construda, no passo anterior, a

coluna dos contrastes do f-simo fator obtido, multiplicando-se
os elementos das colunas anteriores linha a linha.
3. Constri-se cada uma das colunas das interaes da mesma for-

ma que para um planejamento fatorial completo, multiplicando
os elementos das colunas dos fatores que interagem.
Tabela A.XII.5 Planilha para um planejamento fatorial fracionrio

sem replicao
Amostra M 1 2 3 4 12 13 14 23 24 34 R
1 + + + + + + + 52
2 + + + + + 86
3 + + + + + 201
4 + + + + + 113
5 + + + + + 122
6 + + + + + 66
7 + + + + + 185
8 + + + + + + + + + + + 286
Contr.: 138,87 2,25 114,75 51,75 69,75 8,75 24,75 26,75 26,75 24,75 8,75
Notas: Contr. = contrastes.
Relao geradora do fator 4: 4=123.
Obs.: A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento mostrada na rea
sombreada.
192
Na Tabela A.XII.5, os fatores so a temperatura (1) nos nveis 40C
() e 60C (+); o solvente de extrao (2) nos nveis acetonitrila () e eta-
nol (+); o tempo de extrao (3) nos nveis 100min () e 120min (+); e
a granulometria da amostra sob extrao (4) nos nveis 150 Mesh () e
200Mesh (+).
As respostas R so as recuperaes percentuais do analito em cada

experimento (ou ensaio ou amostra) de extrao.
Os padres de confundimento so: 1=234, 2=134, 3=124, 4=123,

12=34, 13=24, 14=23 e I=1234.
Tabela A.XII.6 Planilha para um planejamento fatorial completo

em replicao
Amostra M 1 2 3 4 5 12 13 14 15 23 R
1 + + + + + + 52
2 + + + + + + + 92
3 + + + + + 198
4 + + + + 113
5 + + + + + 122
6 + + + + 76
7 + + + + + + 189
8 + + + + + + + + + + + 286
Contr.: 141,0 1,5 111,0 54,5 67,0 4,5
Notas: Contr. = contrastes.
Relaes geradoras: 4=123, 5=23.
Obs.: A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento (ou ensaio)
mostrada na rea sombreada.
Os fatores so a temperatura (1) nos nveis 40C () e 60C (+); o

solvente de extrao (2) nos nveis acetonitrila () e etanol (+); e o tempo
de extrao (3) nos nveis 100min () e 120min (+); a granulometria da
amostra sob extrao (4) nos nveis 150 Mesh () e 200Mesh (+); e o volume
de solvente de extrao (5) nos nveis 150ml () e 200ml (+).
As respostas R so as recuperaes percentuais do analito em cada

experimento (ou ensaio ou amostra) de extrao.
Os padres de confundimento so: 2=35, 3=25, 5=23, 1=234, 2=134,

3=124, 4=123 e I=1234.
Para evitar erros, sempre aconselhvel usar uma planilha eletrni-

ca para obter as tabelas dos coeficientes de contrastes dos planejamentos
fatoriais desejados e para os clculos de seus efeitos.
As tabelasA.XII.8, A.XII.9, A.XII.10,A.XII.11 eA.XII.12 apresentam

os coeficientes de contrastes para os planejamentos fatoriais fracionrios
193
no saturados , , , ,e . Todos esses planejamentos
apresentam resoluo mxima e no misturam os efeitos principais com
os de interao de segunda e nem de terceira ordens. Assim, eles tm efi-
cincias, suficientemente altas para os estudos de robustez e levam a 32
(Nexpf=32) experimentos no replicados. Essas tabelas foram construdas
sob a hiptese de que os efeitos principais dos fatores diminuem do pri-
meiro fator para o ltimo. Se essa ordem de importncia for verificada
aps o estudo de robustez, ento esses planejamentos so os de maior
eficincia para detectar os efeitos principais dos fatores, apesar dos con-
fundimentos inerentes dos fatoriais fracionrios. Por isso, no uso dessas
tabelas, sempre conveniente ordenar, com base nas expectativas e expe-
rincias anteriores, os fatores em ordem decrescente de importncia espe-
rada para atribuir-lhes os seu smbolos numricos 1, 2, 3 etc., procurando
fazer com que o fator1 seja o mais importante e assim sucessivamente,
aps o estudo de robustez.
As planilhas eletrnicas para planejamentos fatoriais fracionrios das

tabelasA.XII.7, A.XII.8, A.XII.9, A.XII.10, A.XII.11 e A.XII.12, assim como
outros fatoriais fracionrios, envolvendo no mximo 32 (Nexpf32) experi-
mentos no replicados, podem ser encontradas, juntamente com este Manu-
al de Garantia da Qualidade Analtica, no stio do Mapa: <www.agricultura.
gov.br>. Dessa forma o usurio deste Manual poder sempre encontrar um
planejamento fatorial mais conveniente aos seus interesses e objetivos.
As planilhas eletrnicas para planejamentos fatoriais completos at

sete fatores e planejamentos fatoriais fracionrios at seis fatores (231, 241,
251, 252, 261, 262, 263) so apresentadas na referncia [40] e esto dispon-
veis no stio: <http://lqta.iqm.unicamp.br/>.
O conjunto das 12 tabelas de coeficientes de contrates apresentadas

no AnexoXII disponibiliza ao usurio deste Manual de Garantia da Qua-
lidade Analtica uma gama de possveis escolhas de planejamentos para
realizar seu estudo de robustez particular. Os vrios exemplos numricos
includos permitem um autotreinamento do pessoal tcnico, refazendo os
clculos apresentados.
Aconselhamos que, para um nmero mais baixo de fatores, o usu-

rio faa mais replicaes de modo a, se possvel, realizar 32 ou no mximo
48 experimentos no total. Por exemplo, para os planejamentos fatoriais 23
ou 241 ou 252 ou 274 poder-se-ia realizar quatro, cinco ou seis replicaes
por experimento; para os planejamentos fatoriais 24 ou 251 ou 262, a reali-
zao de duas replicaes por experimento j levaria aos 32 experimentos
e de triplicatas a 64 experimentos.
Os nmeros de replicaes para cada experimento de um planeja-

mento fatorial no precisam ser todos iguais (planejamento no balance-
194
ado). Pode-se, inclusive, no replicar alguns experimentos. Sempre que
possvel procure replicar no mnimo dois experimentos, replicando um
experimento entre aqueles que contiverem o maior nmero de sinais nega-
tivos (nveis baixo) e outro entre aqueles de maior nmero de sinais positi-
vos (nveis altos) na matriz de planejamento.
Para facilitar a realizao dos experimentos na bancada, aconse-

lhvel construir um formulrio de registro dos experimentos, contendo a
matriz de planejamento com os valores dos nveis de cada fator no lugar
dos sinais + ou . possvel tambm substituir os nmeros em negrito,
smbolos dos fatores, por sua identificao textual. Esse formulrio con-
ter tambm os campos para anotar os valores das respostas replicadas,
avaliadas em cada experimento. Um exemplo de formulrio de registros
apresentado na TabelaA.XII.13, para o planejamento 23 apresentado na Ta-
belaA.XII.2, com a adio de mais replicaes de alguns dos experimentos
de forma no balanceada.
Critrios de Aceitao, Anlise dos Resultados

dos Planejamentos Fatoriais
De posse dos valores dos efeitos e ou contrastes do planejamento
fatorial realizado, necessrio verificar se o valor de algum efeito/con-
traste principal ou de interao de segunda ordem, demonstrado como
significativo, maior que trs vezes o desvio-padro da preciso interme-
diria (reprodutibilidade interna) sR do procedimento analtico (Ateno:
essa comparao com sR e no com CVR).
Se todos os efeitos/contrastes principais ou de segunda ordem so

menores que 3sR, ento o procedimento analtico poder ser classificado
como procedimento analtico robusto e adequado para as anlises de ro-
tina, na faixa de variao estudada dos fatores de influncia. Especificar
essas faixas por fator.
Se um ou mais desses efeitos/contrastes de segunda ordem maior

que 3 sR, o procedimento analtico dever ser classificado como pro-
cedimento analtico de uso restrito, na faixa de variao estudada dos
fatores de influncia. Especificar essas faixas por fator. Nesse caso pode-se
tambm refazer o estudo de robustez para aqueles fatores que foram signi-
ficativos e uma faixa de variao (nvel alto menos nvel baixo) mais curta,
verificando a adequao nessa nova faixa.
Se um ou mais desses efeitos/contrastes principais maior que

3 sR, o procedimento analtico dever ser classificado como procedi-
mento analtico no robusto e inadequado para as anlises de rotina, na
faixa de variao estudada dos fatores de influncia.
195
TabelaA.XII.7 Tabela dos coeficientes de contraste para um plane-
jamento fatorial fracionrio saturado com triplicata dos ensaios
Exp./ Fatores Respostas
Amostr. M 1 2 3 4 5 6 7 Ri,1 Ri,2 Ri,3 Rm,i Varr,i
1 + + + + 54 (7)
58 (12)
56 (19)
56 4
2 + + + + 65(9) 66(21) 67(10) 66 1
3 + + + + 51(17) 45(11) 57(15) 51 36
4 + + + + 50(2) 52(23) 54(1) 52 4
5 + + + + 50(13) 58(5) 54(24) 54 16
6 + + + + 67(6) 70(20) 73(16) 70 9
7 + + + + 42(22) 39(14) 45(3) 42 9
8 + + + + + + + + 60(8) 64(18) 68(4) 64 16
sp: 3,45
Contr.: 56,88 12,25 -9,25 1,25 -0,75 6,75 0,25 3,75
sefeito 1,41
Nota: Contr. = contrastes.
Relaes geradoras: 4=123, 5=23, 6=13, 7=12.
Obs.: Esse o planejamento fatorial que aparece na Tabela11 da Deciso 2002/657/EC [10], usando letras
maisculas e minsculas no lugar dos sinais e em ordem transposta dessa tabela. As correspondncias dos
smbolos dos fatores entre essas duas tabelas so: 1=C, 2=B, 3=A, 4=G, 5=D, 6=E, 7=F.
Como a TabelaA.XII.7 apresenta um planejamento saturado, os con-

trastes dos efeitos principais j se confundem com os contrastes de efei-
tos de interao de segunda ordem e com os contrastes de interaes de
ordem superiores: 1=27=36=45=234, 2=17=35=46=134, 3=15=25=47=124,
4=12=34=56=123, 5=13=24=57, 6=14=23=67, 7=15=26=37,
Se considerarmos as varincias dos oito experimentos iguais entre si

(hiptese de homoscedasticidade), ento o intervalo de confiana para 95%
de nvel de confiana e grau de liberdade n=NexpNexpf=248=16 e
t crtico tcrit,a,n=tcrit;0,025;16=2,120 ser: IC=tcrit,a,nsefeito=2,121,41=2,99.
Assim, conclumos que somente os contrastes relacionados aos efei-

tos principais 1, 2, 5 e 7 so significativamente diferentes de zero. No en-
tanto, essa concluso deve ser encarada com cautela, pois um teste F [vide
eq.(1) e pargrafos seguintes ou a eq.(A.II.2) e pargrafos seguintes] entre
os pares das varincias dos experimentos, com graus de liberdade dois (tri-
plicata menos 1) para o numerador e denominador, tem um F crtico igual
a Fcrit,a,n1,n2=Fcrit;0,05;2;2=19,00, porm, o Fcalc para os experimentos trs e dois,
Fcalc,a,n1,n2=36/1=36, maior que 19, implicando em diferena significativa
dessas duas varincias, logo na heterocedasticidade dessas duas varincias.
No calculamos aqui os contrastes associados aos efeitos de intera-

o de segunda ordem. Em um estudo de robustez pode valer a pena, tam-
bm, calcul-los e estudar suas significncias. Lembramos que os contras-
tes em um planejamento fatorial fracionrio no medem os efeitos puros
devido aos confundimentos. Nesse exemplo, seria conveniente fazer um
estudo com um planejamento completo 24 dos fatores 1, 2, 5 e 7.
196
mento fatorial fracionrio
Exp. M 1 2 3 4 5 6 12 13 14 15 16 23 24 25 26
1 + + + + + + + + + +
2 + + + + + + +
3 + + + + + + +
4 + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + + + +
7 + + + + + + +
8 + + + + + + + + + +
9 + + + + + + + +
10 + + + + + + +
11 + + + + + + +
12 + + + + + + + + + +
13 + + + + + + + +
14 + + + + + + + + +
15 + + + + + + + + +
16 + + + + + + + + + +
17 + + + + + + + +
18 + + + + + + +
19 + + + + + + +
20 + + + + + + + + + +
21 + + + + + + + +
22 + + + + + + + + +
23 + + + + + + + + +
24 + + + + + + + + + +
25 + + + + + + + +
26 + + + + + + + + +
27 + + + + + + + + +
28 + + + + + + + + + +
29 + + + + + +
30 + + + + + + + + +
31 + + + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 6 12 13 14 15 16 23 24 25 26
Nota: Relaes geradoras: 6=12345.
Obs.: Para economizar espao, apenas os coeficientes de contrastes da mdia global, dos seis fatores principais
e de nove interaes de fatores so mostrados.
A matriz planejamento dos nveis alto e baixo para cada fator em cada experimento (ou ensaio ou amostra)
197
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 12 13 14 15 16 17 23 24
1 + + + + + + + + +
2 + + + + + + + +
3 + + + + + + +
4 + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + +
7 + + + + + + + +
8 + + + + + + + + + + +
9 + + + + + + + +
10 + + + + +
11 + + + + + + + +
12 + + + + + + + + + + +
13 + + + + + + +
14 + + + + + + + + + +
15 + + + + + + + + +
16 + + + + + + + + + +
17 + + + + + + + + +
18 + + + + + +
19 + + + + + + +
20 + + + + + + + + + +
21 + + + + + + + +
22 + + + + + + + + + + +
23 + + + + + + + +
24 + + + + + + + + +
25 + + + + + + + +
26 + + + + + + + + + + +
27 + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
29 + + + + + + +
30 + + + + + + + +
31 + + + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 12 13 14 15 16 17 23 24
Nota: Relaes geradoras: 6=12345, 7=2345.
Obs.: Para economizar espao, apenas os coeficientes de contrastes da mdia global, dos sete fatores princi-
pais e de oito interaes de fatores so mostrados.
198
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 12 13 14 15 16 17 18
1 + + + + + + + +
2 + + + + + +
3 + + + + + + + +
4 + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + + +
7 + + + + + + + +
8 + + + + + + + + + + + +
9 + + + + + + + +
10 + + + + + +
11 + + + + + + + +
12 + + + + + + + + + + + +
13 + + + + + + + +
14 + + + + + + + + + +
15 + + + + + + + +
16 + + + + + + + +
17 + + + + + + + +
18 + + + + + +
19 + + + + + + + +
20 + + + + + + + + + + + +
21 + + + + + + + +
22 + + + + + + + + + +
23 + + + + + + + +
24 + + + + + + + +
25 + + + + + + + +
26 + + + + + + + + + +
27 + + + + + + + +
28 + + + + + + + +
29 + + + + + + + +
30 + + + + + + + + + +
31 + + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 12 13 14 15 16 17 18
Nota: Relaes geradoras: 6=12345, 7=2345, 8=1345.
Obs.: Para economizar espao, apenas os coeficientes de contrastes da mdia global, dos oito fatores principais
e de sete interaes de fatores so mostrados.
199
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 12 13 14 15 16 17
1 + + + + + + + + +
2 + + + + + +
3 + + + + + + + +
4 + + + + +
5 + + + + + + + +
6 + + + + +
7 + + + + + + +
8 + + + + + + + + + + + +
9 + + + + + + +
10 + + + + + +
11 + + + + + + + +
12 + + + + + + + + + + +
13 + + + + + + + +
14 + + + + + + + + + + +
15 + + + + + + + + +
16 + + + + + + + +
17 + + + + + + +
18 + + + + + +
19 + + + + + + + +
20 + + + + + + + + + + +
21 + + + + + + + +
22 + + + + + + + + + + +
23 + + + + + + + + +
24 + + + + + + + +
25 + + + + + + + + +
26 + + + + + + + + + +
27 + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
29 + + + + + + + +
30 + + + + + + + + +
31 + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 12 13 14 15 16 17
Nota: Relaes geradoras: 6=12345, 7=2345, 8=1345, 9=1245.
Obs.: Para economizar espao, apenas os coeficientes de contrastes da mdia global, dos nove fatores princi-
pais e de seis interaes de fatores so mostrados.
200
TabelaA.XII.12: Tabela dos coeficientes de contraste para um planeja-
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 14 15 16
1 + + + + + + + + + +
2 + + + + +
3 + + + + + + +
4 + + + + + +
5 + + + + + + +
6 + + + + + +
7 + + + + + + + +
8 + + + + + + + + + + +
9 + + + + + + +
10 + + + + + +
11 + + + + + + + +
12 + + + + + + + + + + +
13 + + + + + + + +
14 + + + + + + + + + + +
15 + + + + + + + + +
16 + + + + + + + +
17 + + + + + +
18 + + + + + + +
19 + + + + + + + + +
20 + + + + + + + + + +
21 + + + + + + + + +
22 + + + + + + + + + +
23 + + + + + + + +
24 + + + + + + + + +
25 + + + + + + + + +
26 + + + + + + + + + +
27 + + + + + + + +
28 + + + + + + + + +
29 + + + + + + + +
30 + + + + + + + + +
31 + + + + + + +
32 + + + + + + + + + + + + + + + +
Exp. M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 14 15 16
Nota: Relaes geradoras: 6=12345, 7=2345, 8=1345, 9=1245, 10=1235.
Obs.: Para economizar espao, apenas os coeficientes de contrastes da mdia global, dos dez fatores principais
e de cinco interaes de fatores so mostrados.
201
Tabela A.XII.13
Lanagro-MG/CGAL/SDE/Mapa
Formulrio de Registro de Estudo de Robustez com
Planejamento Fatorial Laboratrio WelMAG
Procedimento em Validao: POP-LWM-019 - Anlise de Resduos de
Medicamentos em Carne Bovina por HPLC
Resp. da Validao: _________________________________ Data Incio: 19ago10

Tcnico da Validao: __________________________________ Data Fim: 11set10
Fatores Respostas replicadas

1Temperatura
3 Tempo Extr
2 Solv Extr
Exp./
Ensaio/ Ri,1 Ri,2 Ri,3 Ri,4 Ri,5 Ri,6
Amostra
1 40 MeCN 100 56(7) 54(26) 55(23) 53(19) 54(21) 52(12)

2 60 MeCN 100 85(9) 88(10)
3 40 EtOH 100 49(11) 47(15) 48(27)
4 60 EtOH 100 64(2) 63(18) 63(25) 62(1)
5 40 MeCN 120 65(13) 63(22) 61(5)
6 60 MeCN 120 92(6) 95(16)
7 40 EtOH 120 57(14) 60(3)
8 60 EtOH 120 70(8) 71(17) 72(28) 73(20) 72(24) 74(4)
Obs.: Os fatores so a temperatura de extrao (1) nos nveis 40C

() e 60C (+); o solvente de extrao (2) nos nveis MeCN=acetonitrila
() e EtOH=etanol (+); e o tempo de extrao (3) nos nveis 100min ()
e 120min (+).
As respostas Ri,1 e R i,6 so as recuperaes percentuais do analito em

cada experimento de extrao. Planejamento no balanceado dos Nexp=8
ensaios do planejamento fatorial com Nexp=28 ensaios no total.
Verifica-se que com esses novos resultados as mdias Rm,i dos ex-
perimentos 1 a 8 so as mesmas que aparecem na TabelaAXII.2. Logo
os valores dos efeitos principais e de interao tambm so os mesmos.
As varincias varr,i, para os experimentos 1 a 8, so agora: 2; 4,5; 1; 0,67;
4; 4,5; 4,5 e 2.
Um novo teste F entre as duas varincias mais diferentes entre si

(4,5 e 0,67) resulta em: Fcalc=4,5/0,67=6,7<10,1=Fcrit,0,05;1;3=Fcrit,a,n1,n2, isto
, essas duas varincias ainda so estatisticamente iguais no nvel de con-
fiana de 95%.
202
O novo valor do desvio-padro agrupado sp=[(52 + 14,5 + 21
+ 30,67 + 24 + 14,5 + 14,5 + 52)/(5+1+2+3+2+1+1+5)] = [45,51 / 20]
= 1,51. E o novo desvio-padro dos efeitos sefeito=0,57. O tcrit,a,n crtico para
20 graus de liberdade (n=NexpNexpf=288=20) : tcrit,a,n=tcrit;0,05;20=2,09.
O IC ao redor de cada efeito ser de (2,090,57=1,19).
Logo, como antes, os efeitos de interao 13, 23 e 123 so insignifi-

cantes, enquanto os trs efeitos principais e o da interao 12 so significa-
tivamente diferentes de zero.
203
ANOTAES
204
ANEXO XIII
Referncias Normativas e Bibliogrficas
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quality assurance. Trends Anal. Chem. v. 23 p. 535-552, 2004.
210
ANEXO XIV
Quadros Comparativos: Manual de Garantia
da Qualidade Analtica versus outras
Referncias Normativas
Os quadros que se seguem fazem uma comparao simplificada
dos contedos dos sete documentos ou normas internacionais com este
Manual de Garantia da Qualidade Analtica.
Na primeira srie de quadros, o Manual comparado com quatro do-

cumentos, nesta ordem: a Deciso EC/657/2002 [10]; SANCO 10684/2009
[11]; EC/333/2007 [12] e CODEX ALINORM 09/32/31-2009 [46].
Na segunda srie de quadros, o Manual comparado com os

outros trs documentos, nesta ordem: INMETRO DOQ-CGECRE-008
Rev 03 Fev/2010 [21]; Guia EURACHEM 1998 Fit for Purpose [15] e
IUPAC-AOAC Thompson 2002 [35].
211
Quadros Comparativos
212
Abrangncia do Manual de Garantia da Qualidade Analtica em Relao aos Parmetros de
Validao Preconizados pelas Principais Normas e Referncias Utilizadas
Documentos
Parmetros de
EC/333/ CODEX ALINORM
Validao Manual de Gar. Qual. Analtica EC/657/2002 SANCO 10684/2009(1)
2007 09/32/31 2009
II.3
Curvas de calibrao matrizadas ou no
matrizadas.
Pelo menos com cinco nveis de Calibrao Bracketing.
3.1.1.5
concentrao. Extratos com nveis altos
Pelo menos com
Linearidade de resduos devem ser
Seis rplicas para cada nvel de concentrao. cinco nveis de con-
diludos at a faixa de
Intervalo de trabalho. centrao, incluindo
Sensibilidade calibrao. 172 - Ajuste
MMQO/ MMQP(2). o zero.
Prev a calibrao por de regresso
Homoscedasticidade/Heterocedasticidade Intervalo de trabalho.
Faixa de interpolao entre dois ND de reta. Curva
Equao da Reta ou polinmio. Equao da Reta.
trabalho pontos. de calibrao
Grau de ajuste da calibrao com testes Grau de ajuste dos
Prev a calibrao com matrizada.
estatsticos. dados na curva.
Calibrao um ponto.
polinomial Aceitabilidade dos parmetros. ajustados da Aceitabilidade dos
Prev calibrao exclusi-
curva de calibrao. parmetros ajustados

va dos analitos repre-
Faixa de trabalho do LQ at a maior concen- da curva.
sentativos.
trao com incerteza = Imax
Sensibilidade determinada pela derivada da
curva de calibrao.
Documentos
Parmetros de
Manual de Gar. Qual. SANCO 10684/ EC/333/
Validao EC/657/ 2002 CODEX ALINORM 09/32/31 2009
Analtica 2009(1) 2007
II.4.1 a II.4.2 - Anlise de 162-163 - Para procedimentos
trs nveis, seis rplicas de analticos de triagem (screening).
analito em soluo e de Anlise de 30 matrizes brancas
matriz branca fortificada de diferentes fontes. Testar
3.1.1.1 - Estimar Avaliao visual substncias potencialmente
usando curva de calibrao
os efeitos dos da resposta
Seletividade / no matrizada (CCAS). interferentes.
possveis interfe- instrumental
Especificidade Teste F e Teste t. 164 - Para procedimentos ana-
rentes por fortifi- em branco de ND
II.4.3 - Testes estatsti- lticos quantitativos. Definio e
cao de matriz reagente e em
Efeito de Matriz cos sobre o intercepto e importncia.
branca amostra de
a inclinao das curvas 175-180 - Para procedimentos
(n 20). controle.
de calibrao matrizada analticos de confirmao. Defi-
(CCMBF ou CCEMBF) e nio. FTIR e MS acoplada a Gc
no matrizada (CCAS). e LC. Relao de possveis mto-
Teste F e Teste t. dos analticos de confirmao.
Documentos
Parmetros de
Analtica 2009(1) 2007
3.1.1.2 - Ensaios

com MRC; ou Recuperao
Veracidade II.5 - Ensaios com MRC Se possvel
3.1.2.1 - com mdia de fortifi-
ou com matriz branca for- a veracidade 165-168 - Definio e limites.
matriz branca caes no nvel
Tendncia tificada em trs nveis de deve ser Usar MRC ou fortificaes ao
fortificada em de interesse
213
concentrao, seis rplicas verificada redor do MRL(3).
trs nveis de e no nvel de
Recuperao por nvel. com MRC.
concentrao, seis reportagem.
rplicas por nvel.
Documentos
Parmetros de
Analtica 2009(1) 2007
3.1.2.1 - Repeti-
214
tividade: ensaios
com amostras
II .6.3 - Repetitividade:
em trs nveis de
Preciso de ensaios com amostras de
concentrao, seis 165-166 -Definio e limites.
Repetitividade controle em trs nveis de Mnimo de cin-
rplicas por nvel. 169 - Preciso de repetitividade
concentrao, seis rplicas co replicatas de
por nvel.
3.1.2.3 - Re- e reprodutibilidade. Estudo em
Preciso fortificaes no
produtibilidade diferentes dias, com pools de
Intermediria II.6.4 - Reprodutibilidade nvel de interes- HorRatr < 2.
intralaboratorial: diferentes tecidos (matrizes),
(Reprodutibilidade intralaboratorial: repetio se e no nvel de HorRatR < 2.
repetio dos diferentes lotes de reagentes,
intralaboratorial) dos ensaios de repetitivida- reportagem.
ensaios de repe- diferentes equipamentos etc.
de em trs dias. DPR de re-
titividade em trs (reprodutibilidade intralabora-
Preciso de II.6 - Reprodutibilidade: produtibilidade.
dias. torial).
Reprodutibilidade participao em ensaios
3.1.2.4 - Reprodu-
colaborativos.
tibilidade: partici-
pao em ensaios
colaborativos.

Documentos
Parmetros de
SANCO 10684/ CODEX ALINORM
Validao Manual de Gar. Qual. Analtica EC/ 657/ 2002 EC/ 333/ 2007
2009(1) 09/32/31 2009
II.7.4 a II.7.6 CC. 3.1.1.5 - CC Mtodo des-
II.7.7 a II.7.9 CC. crito na norma ISO 11843 ou
Limite de deciso
Utilizando a curva de previso analisando 20 ou mais matrizes
(CC)
da calibrao (ISO 11843) e brancas.
ND ND ND
principais fontes de incerteza. 3.1.1.6 - CC Mtodo descrito
Capacidade de
Pela anlise de 20 matrizes na norma ISO 11843 ou ana-
deteco (CC)
brancas fortificadas no LMDR lisando 20 ou mais matrizes
ou no LMR. brancas fortificadas em CCa.
Documentos
Parmetros de
Manual de Gar. Qual. CODEX ALINORM
Validao EC/ 657/ 2002 SANCO 10684/ 2009(1) EC/ 333/ 2007
Analtica 09/32/31 2009
II.8.1 - Metodologia
Bottom-Up (ISO GUM).
II.8.2 - Metodologia ISO GUM (ISBN 92-67- Define a incerteza
10188-9);
190 - Determina a
Top-Down, conside- padro de medio u e
Incerteza de obrigatoriedade e
rando as incertezas de EURACHEM/CITAC a incerteza expandida
Medio Analtica ND se reporta ao Guia
amostragem, repro- QUAM:2000. de medio U, mas no
(IMA) EURACHEM/CITAC
dutibilidade interna, DPR de reprodutibili- descreve seus procedi-
QUAM:2000.

tendncia e de calibra- dade. mentos de estimao.
o. (Guia EURACHEM/
CITAC QUAM:2000)
215
Documentos
Parmetros de
Validao EC/657/2002 SANCO 10684/2009(1) EC/333/2007
Analtica 09/32/31 2009
II.7.1 - Corresponde 173 - Intercepto
216
Trs vezes o desvio-
Limite de ao valor do CC LD = CC (ver Qua- mais trs vezes o
ND -padro do branco
Deteco (LD) calculado como para dro 9 dessa norma). desvio-padro resi-
(n>20).
substncias banidas. dual do ajuste.
II.7.2 - Estimado a
partir da Incerteza
Mxima Aceitvel
(Imax), definida por
norma, legislao Menor nvel fortifi- 174 - Intercepto
Limite de Seis ou dez vezes o
especfica, contrato cado validado com mais dez vezes o
Quantificao ND desvio-padro do
com o cliente ou pelo veracidade e preciso desvio-padro do
(LQ) branco (n>20).
laboratrio. aceitveis. residual do ajuste.
Abordagem por crit-
rios ou baseada nos
riscos. Adequao ao
uso pretendido.
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Parmetros de
Validao EC/657/2002 SANCO 10684/2009(1) EC/333/2007
Analtica 09/32/31 2009
II.9 - Estudo feito

com planejamento
183 - Determina o
fatorial completo
Recuperao mdia uso de planejamen-
Escopo/ ou fracionrio de 3.1.1.3 - Estudo feito
e reprodutibilidade to fatorial para o
Aplicabilidade mxima resoluo ou com planejamento
interna em validao ND estudo de robustez(4)
fracionrio saturado fatorial saturado
concorrente (on- e relaciona alguns
Robustez (youden) ou variando (youden).
-going validation). fatores que podem
fator a fator.
ser estudados.
II.11 - Relatrio de
validao.
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Validao EC/ 657/ 2002 SANCO 10684/ 2009(1) EC/ 333/ 2007
Analtica 09/32/31 2009
IV.1 - Estabilidade do
analito na matriz no
185 - Estabelece
a necessidade de
processada. 3.1.1.4.
estudo de estabili-
IV.1 - Estabilidade Estabilidade do anali-
dade do analito nas
Estabilidade ps- processamento. to em soluo. ND ND
solues padro e na
IV.3 - Estabilidade do Estabilidade do anali- matriz. Estudo por
analito em soluo. to na matriz.
um perodo mnimo
IV.4 - Estabilidade das de 90 dias.
solues padro.
Notas: ND - No Descrito.
(1)
Substitui a SANCO/3131/2007.
(2)
MMQ = Mtodo dos Mnimos Quadrados Ordinrios (MMQO) ou Ponderados (MMQP).
(3)
Usa erradamente o termo accuracy onde deveria usar truenesss.
(4)
Usa o termo ruggedness e no o termo robustness.

217
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Manual de Gar. Qual. Guia EURACHEM 1998 Fit IUPAC-AOAC
Validao CGCRE-008 Rev 03
Analtica for Purpose Thompson 2002
Fev/2010(5)
218
6.26 6.30 A3 - Linearidade:
II.3 O limite inferior da Prope o uso de curvas de calibrao na
Curvas de calibrao matri- 8.2.2 faixa de trabalho rotina mais simples que na validao.
zadas ou no matrizadas. Ajuste de reta o LD/LQ. Teste informal da linearidade pelo exame
Pelo menos com cinco pelo MMQ. Faixa de linearidade do grfico dos resduos do ajuste da reta.
nveis de concentrao. Pelo menos com cin- por inspeo visual da O uso do coeficiente de correlao
Seis rplicas para cada co nveis de concen- curva de calibrao ou enganoso e inadequado para testar
nvel de concentrao. trao. do grfico de resduos linearidade e deve ser evitado.
Intervalo de trabalho. Nmero de replicatas com dez ou mais nveis Seis nveis ou mais de calibrao
Linearidade
MMQO/ MMQP(2). igual ao da rotina. de concentrao. equidistantes.
Homoscedasticidade / Faixa de linearidade Inspeo visual do Faixa de 0-150% ou 50-150% da conc.
Sensibilidade
heterocedasticidade. por inspeo visual da grfico da resposta do analito.
Equao da Reta curva de calibrao. instrumental vs con- Duplicata ou triplicata em ordem aleat-
Faixa de trabalho
ou polinmio. Indica testes para centrao de matriz ria das solues de calibrao.
Grau de ajuste da calibra- valores discrepan- branca fortificadas ou A7 - Faixa validada no necessariamen-
Calibrao
o com testes estatsticos. tes (outliers), para com diversos MRCs. te igual faixa de linearidade e depende
polinomial
Aceitabilidade dos par- homoscedasticidade MMQP no caso de da incerteza de medio.
metros ajustados da curva. e ANOVA para linea- heterocedasticidade. O nvel de interesse deve estar dentro da
Faixa de trabalho do LQ ridade. Outras funes que faixa validada.
at a maior concentrao Indica outras funes no a reta. No reco- A10 - Sensibilidade: o gradiente da
com incerteza = Imax. no caso da curva de menda polinmio de funo de calibrao. No o considera

Sensibilidade determina- calibrao no grau > 2. til para a validao, mas o para os
da pela derivada da curva ser reta. 6.44 - Sensibilidade: o procedimentos de garantida da qualida-
de calibrao. gradiente da curva de de para a verificao dos instrumentos
calibrao. de medio.
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Validao
Analtica Rev 03 Fev/2010(5) for Purpose Thompson 2002
II.4.1 a II.4.2 - Anlise de A2
trs nveis, seis rplicas de Deve ser avaliada para
8.2.1 6.13 6.19
analito em soluo e de qualquer interferente im-
Comparao dos resul- Comparao dos resul-
matriz branca fortificada portante provvel de estar
tados da anlise com a tados da anlise com a
usando curva de calibra- presente.
amostra e materiais de re- amostra e materiais de re-
Seletividade/ o no matrizada (CCAS). Define o ndice de seleti-
ferncia pelo mtodo em ferncia pelo mtodo em
Especificidade Teste F e Teste t. vidade como a razo da
estudo e outros mtodos estudo e outros mtodos
II.4.3 - Testes estatsticos sensibilidade da curva de
validados. independentes validados.
Efeito de Matriz sobre o intercepto e a calibrao matrizada sem o
Analisar amostras con- Analisar amostras con-
inclinao das curvas interferente e a inclinao
tendo vrios interferentes tendo vrios interferentes
de calibrao matrizada da resposta instrumental vs
suspeitos na presena do suspeitos na presena do
(CCMBF ou CCEMBF) e a concentrao do inter-
analito de interesse. analito de interesse.
no matrizada (CCAS). ferente na mesma matriz
Teste F e Teste t. branca.

219
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Manual de Gar. Qual. INMETRO DOQ-CGCRE-008 Rev 03 IUPAC-AOAC
Validao Guia EURACHEM 1998 Fit for Purpose
Analtica Fev/2010(5) Thompson 2002
6.30 6.36
220
A veracidade expressa em termos da
8.2.6
tendncia.
Estimada atravs de MRC ou
Comparao com um MRC ou com A4 - Veracidade:
ensaio colaborativo ou pela
outro procedimento analtico bem Medir a tendncia
recuperao.
caracterizado (validado) de pre- com MRC.
II.5 - Ensaios com Recomenda corrigir o resultado se ferncia baseado em um mtodo
Veracidade Uso de procedimen-
MRC ou com ma- a recuperao for significativa(6).
analtico primrio. to de referncia.
triz branca fortifica- Recomenda comparar o resulta-
Tendncia Determinao da mdia e do Uso de fortificao
da em trs nveis de do da anlise do MRC com seu
desvio-padro de ensaios replicados para medir a recu-
concentrao, seis certificado usando o erro relativo
Recuperao com MRC. perao.
rplicas por nvel. ou o ndice z-escore ou o erro
Dez replicaes. A6 - Recovery: por
normalizado.
6.46 6.47 - Recuperao: estudo de fortifica-
Considere como recuperao ape-
Obtidas de MRCs. o no A.4.
nas o ensaio com amostra (matriz
branca) fortificada.
Obtidas de fortificaes em diferentes
concentraes de matriz branca ou
amostra de ensaio.

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Validao 1998 Fit for
Analtica 03 Fev/2010(5) Thompson 2002
Purpose
8.2.6.3 - Usa o CV. A5
II.6.3 - Repetiti-
8.2.6.3.1 - Repetitividade: Especificada como desvio-padro ou desvio-
vidade: ensaios
desvio-padro sr em condies -padro relativo = CV.
com amostras de 6.37 6.40 -
de repetitividade. Limite de Prec. intermediria spi ou total stot, prec. de
controle em trs Ensaios com
Preciso de repetitividade (r): repet. sr ou intrabateladas sib e prec. entre ou
nveis de concen- MRC, MR,
Repetitividade r = tv,a 2 sr. interbateladas seb: spi = stot = [sib2/nr+ seb2],
trao, seis rplicas matriz branca
8.2.6.3.2 - Preciso intermedi- onde nr = num. replicatas do resultado das
por nvel. fortificada, dez
Preciso ria: desvio-padro spi em condi- amostras de ensaio na rotina, em geral 1.
II.6.4 - Reproduti- replicatas para
Intermediria es de preciso intermediria. Prec. em geral i) const. ou ii) proporcional
bilidade intralabo- cada nvel na
(Reprodutibilidade 8.2.6.3.3 - Desvio-padro sR em canal : CV = const.
ratorial: repetio faixa de traba-
intralaboratorial) condies de reprodutibilidade: Avaliar em no mnimo um nvel alto e outro
dos ensaios de lho.
indica a equao de Horwitz- baixo da faixa canal validada. Um teste F ade-
repetitividade em Calcular sr, r, sR
Preciso de -Thomson para estimar sR. Limite quado para avaliar a homoscedasticidade.
trs dias. e R em funo
Reprodutibilidade de reprodutibilidade (R): Experimentos podem ser planejados para es-
II.6 - Reprodutibili- da concentra-
R = tv,a 2 sR. timar a preciso em diferentes combinaes
dade: participao o.
Nmero de replicaes 7. de condies intermedirias, estimando-se
em ensaios colabo-
Avaliao da preciso pelo os efeitos entre-dias, entre-equipamentos,
rativos.
HORRAT. entre-tcnicos etc. (ANOVA)

221
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INMETRO DOQ-CGCRE-008 Guia EURACHEM 1998 Fit for IUPAC-AOAC
Validao Manual de Gar. Qual. Analtica
Rev 03 Fev/2010(5) Purpose Thompson 2002
222
II.7.4 a II.7.6 CC.
6.20 - menciona nesta
Limite de deciso II.7.7 a II.7.9 CC.
seo que a ISO 11843 usa
(CC) Utilizando a curva de previso da
o termo valor mnimo de-
calibrao (ISO 11843) e principais ND ND
tectvel da varivel lquida
Capacidade de fontes de incerteza.
de estado, logo CC no
deteco (CC) Pela anlise de 20 matrizes brancas lugar de LD.
fortificadas no LMDR ou no LMR.

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Manual de Gar. Qual. Guia EURACHEM 1998 Fit IUPAC-AOAC
Validao CGCRE-008 Rev 03
Analtica for Purpose Thompson 2002
Fev/2010(5)
A13 - Prope que um componente de incerteza
6.41 6.43
devido variao possvel da matriz dentro da
Deve combinar as classe definida seja avaliada.
incertezas das fontes de
A14 - Lei de propagao das incertezas (mtodo
II.8.1 - Metodologia preciso de longo termo
Bottom-Up) incluindo as fontes de variabilidade
Bottom-Up (ISO ND (prec. inter.), tendncia
detectadas na validao: sr e seb, ou seja preci-
GUM). Cita o uso do erro (correo), calibrao
so intermediria ou reprod. interna. Incluir as
II.8.2 - Metodologia normalizado para dos instrumentos de
fontes de no homogeneidade e variabilidade
Top-Down, conside- avaliar participa- medio (em geral
Incerteza de da matriz. Considerar a dependncia da incerte-
rando as incertezas o em ensaio de pequena em relao s
Medio Analtica za com a conc. Calcular a incerteza expandida.
de amostragem, proficincia se o la- duas primeiras) e algum
(IMA) Recomenda fator de abrangncia k 3 para
reprodutibilidade boratrio calcular a efeito significante
procedimentos apenas validados internamente
interna, tendncia e incerteza expandida detectado no estudo de
no laboratrio.
de calibrao. (Guia do resultado analti- robustez.
B1 - Detalhes sobre a determinao experimental
EURACHEM/CITAC co (8.2.6.1.3). Pode-se ampliar a incer-
dos coeficientes de sensibilidade usando dados
QUAM:2000) teza se uma correo
do estudo de robustez.
significativa estimada,
B1 - Recomenda a avaliao de incerteza por
mas o resultado no
julgamento na impossibilidade de estimaes
corrigido por ela.
mais estatsticas.

223
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Validao
Qual. Analtica Rev 03 Fev/2010(5) Purpose Thompson 2002
A8
224
6.20 6.23
8.2.4 Para procedimentos em que a faixa
Recomenda seu clculo para
validada no inclui o zero e nem
Recomenda seu clculo anlises de concentraes baixas
est prxima dele, no necessrio
para anlises de concen- (traos).
determinar LD.
traes baixas (traos). a) LD como zero dos brancos
O conceito tem muitos problemas:
Calcula o LD como zero somado a trs vezes o desvio-pa-
vrias e diferentes abordagens envol-
II.7.1 - Cor- ou a mdia dos brancos dro do branco s0. 10 replicatas
vem a incerteza no zero sem especi-
responde ao somada a um mltiplo t b) LD de branco fortificado su-
ficar as condies, as estimativas so
Limite de valor do CC do desvio-padro cessivas vezes em concentrao
tendenciosas para baixo e assumem
Deteco (LD) calculado como do branco. baixa em, no mnimo, dez rpli-
um questionvel comportamento nor-
para substn- Recomenda a verificao cas por concentrao. Clculo
mal em baixas concentraes.
cias banidas. experimental do LD com como em a).
LD apresentados em literatura e bro-
fortificao no valor calcu- c) LD = 0 + 4,65 s0.
churas de instrumentos analticos so
lado em, no mnimo, sete O LD para procedimento quali-
menores que LD prticos e no so
rplicas. tativo obtido por fortificaes
adequados como LD de validao.
Um LD para cada combi- cada vez mais baixas (dez repli-
s0 do branco determinado com, no
nao matriz/analito. catas cada) at a concentrao
mnimo, seis replicatas. LD calculado
que no d 100% de positivos.
na base de 3s0.

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Analtica 03 Fev/2010(5) for Purpose Thompson 2002
8.2.5 A9
Indica que LQ = MNC (especial- 6.24 6.25 Apresenta as definies mate-
II.7.2 - Estimado a mente para anlise de traos) mticas arbitrrias de LQ como
Calcula o LQ como zero
partir da Incerteza M- excluindo o branco. 10% DPR ou 2LD questionando
ou a mdia dos brancos
xima Aceitvel (Imax), Calcula o LQ como zero ou a a garantia do uso do procedi-
somada a um mltiplo 5,
definida por norma, mdia dos brancos somada mento acima desses limites.
6 ou 10 do desvio-padro
legislao especfica, a um mltiplo 5, 6 ou 10 do No recomenda o uso de LQ.
Limite de do branco. Dez replicatas.
contrato com o cliente desvio-padro do branco. Recomenda expressar a incer-
Quantificao (LQ) LQ obtido por inspeo
ou pelo laboratrio. Recomenda que a maneira teza de medio como funo
visual da curva de s vs. c
Abordagem por crit- mais realista determinar o LQ da concentrao, e comparar
de fortificaes sucessivas
rios ou baseada nos experimentalmente por fortifi- essa funo com os critrios de
acima de LD.
riscos. Adequao ao caes sucessivas, com base em adequao ao uso pretendido
uso pretendido.
Menor nvel fortificado
critrios aceitao de desvio-pa- acordado entre o laboratrio
validado.
dro pr-definidos (abordagem e o cliente ou usurio final do
pr-critrios). resultado analtico.

225
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Manual de Gar. Qual. Guia EURACHEM 1998 Fit for IUPAC-AOAC
Validao CGECRE-008 Rev 03
Analtica Purpose Thompson 2002
Fev/2010(5)
226
A1 - Escopo/aplicabilidade:
6.45 O relatrio da validao: identidade/
Fazer variaes deliberadas no especiao; faixas de conc. matrizes
II.9 - Estudo feito
procedimento e investigar os validadas; procedimento definitivo;
com planejamento
subsequentes efeitos sobre seu recomendaes de controle e de segu-
fatorial completo
desempenho. rana etc.
ou fracionrio de
Escopo/ 8.2.6.4 - Estudo Planejar experimentos para moni- A11 - robustez: Define rugedness
mxima resoluo
Aplicabilidade feito com plane- torar os efeitos sobre a veracidade como a resistncia a pequenas varia-
ou fracionrio
jamento fatorial e a preciso, variando sistemati- es nas condies experimentais do
saturado (youden)
Robustez saturado (youden) camente as variveis que podem procedimento. Variar fator a fator ou
ou variando fator a
afetar o desempenho do procedi- usar o planejamento fatorial fracio-
fator.
mento analtico significativamente. nrio (youden). Exemplos de fatores
II.11 - Relatrio de
Indica o uso do mtodo de a alterar: alteraes no instrumento,
validao.
planejamento fatorial saturado operador, marca de reagente, conc. de
(youden). reagente, pH, temperatura e/ou tempo
de um processo.

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Parmetros de
INMETRO DOQ-CGECRE-008 Guia EURACHEM 1998 Fit IUPAC-AOAC
Validao Manual de Gar. Qual. Analtica
Rev 03 Fev/2010(5) for Purpose Thompson 2002
IV.1 - Estabilidade do analito
na matriz no processada.
IV.1 - Estabilidade ps- pro-
cessamento.
Estabilidade ND ND ND
IV.3 - Estabilidade do analito
em soluo.
IV.4 - Estabilidade das solu-
es padro.
Notas: ND - No Descrito.
canal = concentrao do analito.

(2)
MMQ = Mtodo dos Mnimos Quadrados Ordinrios (MMQO) ou Ponderados (MMQP)
(5)
numerao das sees desse documento coloca, inadequadamente, a seo 8.2.6.3 preciso e a seo 8.2.6.3 robustez como subsees da seo 8.6 Tendncia/Recuperao, dando a falsa
A
impresso de que esse causa daqueles.
(6)
Usa na nota da seo 8.2.6 o termo exatido quando deveria usar veracidade.

227
ISBN 978-85-7991-055-5
9 788579 91055 5

MANUAL DE
GARANTIA

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MANUAL DE GARANTIA DA QUALIDADE ANALTICA

Resduos e Contaminantes em Alimentos

1a edio - Ano 2011

COORDENAO EDITORIAL: Dario Abbud Righi (CGAL/Mapa)

Impresso no Brasil/Printed in Brazil

Brasil. Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento.

1. Controle de qualidade. 2. Medicamento. 3. Analise qumica I. Secretaria

AGRIS Q55, L70

Ao longo dos anos nos quais os laboratrios da rede do Minist-

Contudo, nenhuma vitria foi to significativa quanto a implanta-

Durante muito tempo, os procedimentos de validao e da garantia

Com a publicao deste Manual de Garantia da Qualidade Analti-

Este Manual tem por objetivo esclarecer e disseminar conceitos tec-

A implantao efetiva dos requisitos e orientaes constantes deste

A todos os que se dedicaram, contriburam e se empenharam nos

Angelo de Queiroz Mauricio

O resultado de uma medio sempre usado para subsidiar alguma

No entanto, o resultado de qualquer medio est sempre sujeito

Considerando a necessidade de se dispor de orientaes harmoni-

Assim, o presente Manual foi idealizado e concebido visando for-

Elaborado para ser uma ampla fonte de informaes, o Manual de

A ParteI apresenta os cuidados gerais que devem ser observados

A ParteII, juntamente com os anexos nela citados, define e descre-

A ParteIII trata da realizao dos estudos de estabilidade, essencial

A ParteIV contm informaes sobre a rotina analtica e os controles

A Parte V descreve os procedimentos que devem ser observados

A ParteVI abrange as especificidades inerentes a quatro categorias

Em relao aos anexos, eles foram elaborados com a finalidade de

Por fim, entendemos que este Manual configura-se como uma

Marcelo Cludio Pereira

A validao dos procedimentos analticos, segundo os requerimen-

O laboratrio que pretenda solicitar credenciamento ou ampliao

Alteraes nos procedimentos, parmetros e critrios estabelecidos

I.3 Evitando Contaminao

Reagentes e solues de altas concentraes devem ser manipula-

Especial ateno deve ser dispensada ao sistema de exausto utiliza-

O controle de insetos e roedores, no laboratrio e em suas pro-

Artigos de borracha, plsticos e lubrificantes so fontes frequentes

I.4 Padres de Trabalho (Analticos),

A utilizao de material/padro de trabalho permitida, desde que

Os MRC, materiais/padres de referncia, padres de trabalho

As seguintes informaes devem constar da cadeia de custdia:

1. Cdigo de identificao (CAS);

2. Identificao da substncia (IUPAC, DCB/DCI, nome comum);

9. Quantidade utilizada e destinao;

10. Quantidade restante;

11. Responsvel pelas informaes.

I.6 Preparao, Uso e Armazenamento de

A preparao das solues padro deve ser baseada em sua massa,

Recomenda-se que logo aps o seu preparo e acondicionamento em

Solues padro estoque (de referncia) e de trabalho armazenadas

O estabelecimento dos prazos de validade deve fazer parte dos pro-

O laboratrio, para preparo de solues padro, necessita ser clima-

I.7 Reagentes e suas Solues

Os reagentes devem ser preferencialmente armazenados em suas

I.8 Recepo, Armazenamento e Preparao

5. Tipo de amostra (especificao).

Aps a recepo, as amostras devem ser encaminhadas para a pre-

I.9 Desenvolvimento e Otimizao do

A validao de um procedimento analtico sem sua prvia otimi-

A otimizao interna do procedimento analtico inclui as calibraes

Na otimizao do procedimento analtico feito um estudo dos