Tcnicas de diagnstico de enfermedades causadas por enteroparsitos

Dr. Ral Tello Casanova (*)

y Blgo. Marco Canales Ramos (**)

Introduccin

El objeto de esta publicacin es divulgar los mtodos de diagnstico ms apropiados y de fcil uso para la deteccin
de los parsitos intestinales, los cuales pueden ser realizados por personal profesional, tcnico o auxiliar.

Diagnstico de enteroparsitos

Los mtodos de diagnstico se clasifican en: parasitolgicos, porque recuperan e identifican directamente al
parsito, y serolgicos, por detectar la reaccin inmune del hospedero contra el agente invasor (1).

A) Mtodos Parasitolgicos
a) Recoleccin y recepcin de la muestra: Las heces adecuadamente rotuladas deben ser procesadas y ledas el
mismo da de su evacuacin.
b) Procesamiento:
(1)Caractersticas fsicas: Evaluar cantidad, consistencia, aspecto (moco y/o sangre), color, olor.
(2)Parasitolgico: Buscar helmintos visibles como Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Taenia sp,
Diphyllobothrium pacificum, etc.
b.2) Examen Microscpico
Deteccin de trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y/o huevos, y otros elementos (leucocitos, hemates, hongos,
fibras musculares, almidones). Este examen incluye tcnicas que pueden dividirse en:
(1) Mtodos Directos

1.1 Examen directo o en fresco

Deteccin de trofozotos o quistes de protozoarios, y huevos o larvas de helmintos en buena cantidad.
1.1.1 Procedimiento: - Colocar 2mg de heces por separado en ambos extremos de una lmina portaobjetos. Agregar
una gota de solucin salina al 0.85% en uno, y una de solucin yodada de D'Antoni o Lugol en el otro. Se
homogenizan y colocan cubreobjetos o celofn recortado. Si hay moco o sangre, separarlos y teirlos con azul de
metileno de Loeffler para observar leucocitos y/o identificar amebas. Si la muestra es lquida, tomar la alcuota con
una pipeta pasteur. - Leer al microscopio (100x, 400x) (2,3,4).
1.2 Tcnica de Kato
Examen rpido para la bsqueda de huevos de helmintos. No se observan protozoarios.
1.2.1 Procedimiento:
Colocar 100 mg de heces sobre una lmina limpia de 30x40 mm, haciendo un extendido grueso a lo largo
de la misma.
Cubrir con una tira de celofn de 22x30 mm, previamente humedecida en solucin glicerinada de verde de
malaquita al 3%, o colocar unas gotas de esta solucin sobre el extendido y luego cubrir con celofn. Dejar
en reposo por 1 hora a T ambiente, por 30 minutos a 37C.
Examinar la lmina al microscopio (100x, 400x) (1,2,3).
(2) Mtodos de Concentracin
2.1 Tcnica de Sedimentacin espontnea en tubo
Tello adapt esta tcnica, que detecta con alta sensibilidad diversos enteroparsitos, desde amebas hasta
huevos y larvas.
2.1.1 Procedimiento
Homogenizar 2-5g de heces con 10-20ml de solucin salina fisiolgica.
Verter la mezcla en un tubo cnico de centrfuga de 50ml de capacidad, filtrndola a travs de gasa.
Completar el volumen del tubo con ms solucin salina y tapar el mismo, hermticamente. Agitar y dejar
reposar por 45 minutos como mnimo.
Tomar con una pipeta dos alcuotas: una de la mitad del sedimento y otra del fondo del tubo. Colocarlas en
portaobjetos diferentes y a la alcuota del fondo agregarle gotas de Lugol, luego cubrirlas con laminillas de
celofn.
Observarl al microscopio (100x, 400x) (4,5).
2.2 Tcnica de Baermann modificada en copa por Lumbreras
Aprovecha la capacidad de migracin de trofozotos y larvas, como Balantidium y Strongyloides, hacia el
fondo de la copa (hidrotropismo, geotropismo, termotropismo).
2.2.1 Procedimiento
Colocar 5-10 g de heces en una copa que contiene rejilla y gasa doblada.
 Verter por las paredes de la copa, solucin salina a 37C, hasta cubrir las heces. Dejar en reposo a T
ambiente por 30 a 45 minutos.

Retirar rejilla y heces, absorbiendo luego con pipeta, parte del sedimento del fondo y depositndolo en una
lmina excavada de Adams o en un blister.
Observar al microscopio, con menor aumento (25x, 100x) (4,6).
Esta tcnica tambin puede ser empleada usando esputo, en los casos sospechosos o de control de
autoinfestacin por Strongyloides stercoralis (7).
2.3 Tcnica de Sedimentacin rpida de Lumbreras
Para deteccin de huevos de enteroparsitos de mayor densidad (Fasciola, Paragonimus, etc.).
2.3.1 Procedimiento
Homogenizar 4-8 g. de heces con 10-20 ml. de agua corriente filtrada.
Trasvasar la mezcla a un recipiente de 200-300ml de capacidad, tamizndola con un colador.
Completar el volumen con agua corriente filtrada y dejar reposar por 20 minutos.
Decantar los 2/3 del sobrenadante y volver a completar el volumen con ms agua corriente filtrada. Repetir
lo mismo hasta que el sobrenadante quede limpio, a intervalos de 5 minutos.
Verter el ltimo sedimento a una placa petri. Observar al estereoscopio (4,8).
La Tcnica de Graham (cinta adhesiva) para diagnstico de E. vermicularis, debe ser utilizada en todos los
casos de escozor anal y/o en nios en edad escolar. Se realiza haciendo toques anales diurnos y nocturnos.
(3) Otros
3.1 Cultivo en agar o agar en placa
Para casos no detectados en examen de rutina y con sospecha clnica de Strongyloidiosis o controles post-
tratamiento. Tener cuidado de sellar la placa, una vez introducida las heces en el centro de la misma, con cinta
adhesiva o similar. Se busca, al microscopio, durante una semana, larvas o huellas de ellas dejadas en el agar (3,9).
3.2 Cultivo en carbn o Dancescu
Heces y carbn en polvo forman una mezcla homognea, que es ubicada en el centro de una placa petri vaca.
Agregar unas gotas de agua estril y sellar la placa. Se identifican larvas de Strongyloides sp en las gotas de agua
agregadas (2,10).
3.3 Coloracin de Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun
Basada en la cido-resistencia, se emplea en el diagnstico de coccidias intestinales (2,3).
B) Mtodos Serolgicos

Los mtodos indirectos tienen real importancia cuando se los elige como alternativa a procedimientos invasivos en
cuadros complicados extraintestinales.

Existen tcnicas que detectan la presencia de inmunoglobulinas especficas antiparasitarias en el suero del
paciente, cuando se percibe un conglomerado (Hemaglutinacin indirecta: HAI), un precipitado (Doble difusin: DD,
contrainmunoelectroforesis: CIEF) o ausencia de hemlisis (Fijacin de complemento: FC). En otras se recurre a
conjugados enzimticos (Enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA) o fluorescentes (Inmunofluorescencia
directa e indirecta: IFD e IFI) para visualizar la reaccin antgeno-anticuerpo. Otras ms recientes caracterizan
fracciones antignicas, para luego revelar la reaccin con conjugados enzimticos (Western Blot: WB) o amplificar la
seal de inters (Polimerase chain reaction: PCR) (1,2,3).

La deteccin de coproantgenos dar un nuevo impulso a estas pruebas. La criptosporidiosis ha sido diagnosticada
empleando IFI y ELISA con sensibilidades de 80% y especificidades de 95%. Empleando PCR se mejora hasta en
100 veces (1). Para la strongyloidiosis se han empleado IFI y ELISA, con sensibilidades menores al 90%. La
implementacin del WB en el pas mejorar su diagnstico (1,2).
Bibliografa
1. Atas, A. Parasitologa Clnica; 3 edicin, Publicaciones Tcnicas Mediterrneo Ltda, Chile. 1996.
2. Ash, L; Orihel, T. Parasites: A Guide to Laboratory Procedures and Identification; ASCP PRESS, Chicago, USA.
1991.
3. Garca, L; Bruckner, D. Diagnostic Medical Parasitology; 3rd edition, American Society of Microbiology,
Washington, USA. 1993.
4. Larragn, M. Comparacin de los principales mtodos de diagnstico para Enteroparsitos. Tesis de Bachiller en
Medicina - U. P. Cayetano Heredia. 1993.
5. Tello, R. Empleo de una nueva tcnica parasitolgica rpida de sedimentacin espontnea en el diagnstico de
protozoarios y helmintos. V Jornadas Cientficas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. 1998.
6. Lumbreras, H. Aplicacin de la "Tcnica de Baermann modificada en copa" en el diagnstico y control
teraputico de la Balantidiosis. Rev. Med. Per. 1961;30:21-25.
7. Tello, R. Examen de esputo empleando la Tcnica de Baermann para el diagnstico de Autoinfestacin por
Strongyloides stercoralis. Libro de resmenes del Simposio Internacional "Parasitismo Intestinal en el hombre",
Sociedad Peruana de Parasitologa; Lima, Per. 1988.
8. Lumbreras, H; Cantella, R; Burga, R. Acerca de un procedimiento de sedimentacin rpida para investigar
huevos de Fasciola hepatica en las heces, su evaluacin y uso en el campo. Rev. Med. Per. 1962; 31:167-174.
9. Terashima, A; Snchez, E; Tello, R. et al. Diagnstico de Strongyloides stercoralis por cultivo en agar. Libro de
resmenes del XIV Congreso Latinoamericano de Parasitologa; Acapulco, Mxico. FLAP, 1999.
10. Terashima, A; Snchez, E; Tello, R. et al. Empleo de la tcnica de Dancescu para el diagnstico de
Strongyloides stercoralis. Libro de resmenes del XIV Congreso Latinoamericano de Parasitologa; Acapulco,
Mxico. FLAP, 1999.

(*) Profesor Asociado de Medicina. Jefe Docente del Laboratorio de Parasitologa del Instituto de Medicina Tropical
"Alexander von Humboldt", Universidad Peruana Cayetano Heredia.
(**) Investigador Asociado de los Laboratorios de Parasitologa e Inmunologa del Instituto de Medicina Tropical
"Alexander von Humboldt", Universidad Peruana Cayetano Heredia.