Prctica 4.

Determinacin de acetaminofn en tabletas por HPLC

Objetivo

Llevar a cabo la identificacin el principio activo Paracetamol en una forma farmacutica comercial
slida, mediante el tiempo de retencin obtenido en HPLC.
Determinar la concentracin del principio activo presente en la forma farmacutica proporcionada,
lo cual se utilizars las reas bajo la curva obtenidas con la sustancia de referencia y muestra.

Resultados

Concentracin terica final de paracetamol en la solucin de referencia y en la solucin de la

muestra

Peso promedio de 10 tabletas = 644.7 mg

Estndar Alcuota de 1 mL Alcuota 5 mL
10.2 mg 10 mL (F.M) 10 mL (F.M) 50 mL
1 mg= 0.998 mg (pureza)
0.01007 mg / mL

Concentraciones tericas de muestras

Muestra 1= 32.1 mg
639.15 mg --------- 500 mg Alcuota 1 mL
32.1 mg ----------- x = 25.11 mg 50 mL (F.M.) 50 mL (F.M.) = 0.010044mg/mL

Muestra 2 =32.1 mg
639.15 mg ------- 500 mg Alcuota 1 mL
32.1 mg --------- x = 25.11 mg 50 mL (F.M.) 50 mL (F.M.) = 0.0100044 mg/mL

AREA BAJO LA
RPLICA Tr CURVA
a) 3.353 1758557 X= 1759724
ESTANDAR b) 3.353 1760215 DER=
c) 3.387 1760400
a) 3.367 1735600 X= 1737424
MUESTRA 1
b) 3.367 1739248 DER=

a) 3.373 1708585 X= 1706360.5

MUESTRA 2
b) 3.367 1704136 DER=

Para cada porcin de muestra tomada:

mg de paracetamol= DC (Am/Aref)

Para la muestra 1 y 2 mg paracetamol= 10-1 x .01007 (1737424 / 1759724)

Mg paracetamol= 9.94 x10 -4 mg

Discusin

Conclusiones

La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) puede llevar a cabo con una alta
reproducibilidad en tiempos de retencin y rea bajo la curva, la determinacin de la concentracin
practica del paracetamol (acetaminofem).

Cuestionario

1. Defina los siguientes trminos:

Volumen de elusin: Es el volumen de eluyente requerido para causar la elusin. Bajo
condiciones normales de una mezcla conocida de los solutos en una cierta tcnica, el volumen
de elucin puede ser suficiente informacin para identificar los solutos.

Volumen de columna: Volumen cero o muerto (V0 o Vm). Es el volumen de eluyente que se
consume sin que se detecte ningn componente. Se define igual que el volumen de retencin,
pero el tiempo utilizado es el tiempo muerto:

Tiempo muerto (t0 o tm): Es el tiempo de retencin del componente inerte o gas portador.
Tiempo de retencin (tr): Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce la
mezcla y el instante en que se detecta la seal propia del componente en su mxima
intensidad. Los tiempos de retencin no son reproducibles, ni siquiera en una misma columna
cromatogrfica.
Tiempo de retencin relativo: Es la razn entre los tiempos de retencin corregidos del
componente considerado, i, y de otro, p, que se toma como patrn de referencia:

Lnea base: Es la porcin del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando solo
sale de la columna el gas portador.

Resolucin: Es el parmetro que expresa el grado de separacin que se puede obtener en un

sistema cromatogrfico para dos componentes dados. Relaciona la capacidad separadora de
un sistema cromatogrfico para dos componentes. Se define como:

Donde Rs es la resolucin, tRA y tRB son los tiempos de retencin de los componentes A y B,
y aA y aB son las anchuras de los picos del cromatograma de los anteriores componentes.
La resolucin puede observarse directamente sobre el cromatograma de picos. Se tendr una
buena resolucin si los picos no se solapan, y est perfectamente delimitado cada pico, sin que
coincida el final de uno con el principio del siguiente.
 Una pobre resolucin es debida principalmente a:
o Hay demasiada muestra en la columna.
o La columna o placa es corta.
o La fase mvil no discrimina entre los componentes.
o La columna es demasiado gruesa.

Eficiencia: Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso terico, y se define ste como la
seccin terico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de particin durante el flujo de fase
mvil. Cuanto mayor es el nmero de platos terico (N) mayor ser la eficiencia de la columna.
El nmero de platos tericos mide la capacidad de la columna para separar los componentes,
no la retencin de los mismos. La eficiencia o el nmero de platos se puede observar
directamente a partir del cromatograma, observando la agudeza de los picos. La eficiencia de
una columna puede determinarse a partir de un pico del cromatograma

mediante la siguiente ecuacin:

Donde tR es el tiempo de retencin del pico y W1/2 es ancho del pico medido a la mitad de la
altura del mismo.

2. Proporcione ejemplos de otros 3 frmacos que puedan determinarse por HPLC.

Aminofilina
Dipropionato de Betametasona
Fenobarbital

3. Qu sensibilidad de deteccin puede alcanzar este mtodo?

99.9%

4. Qu contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol (acetaminofn) materia prima como

producto de degradacin?
Adems de paracetamol, los dems componentes (excipientes) son celulosa polvo, celulosa
microcristalina, estearato magnsico, almidn de maz y dixido de silicio, estos pueden ser
contaminantes en la muestra. Los excipientes son los componentes del medicamento
diferentes del principio activo (sustancia responsable de la actividad farmacolgica). stos se
utilizan para conseguir la forma farmacutica deseada (cpsulas, comprimidos, soluciones,
etc.) y facilitan la preparacin, conservacin y administracin de los medicamentos. Es el nico
componente que puede diferir cuando comparamos un medicamento genrico y su equivalente
de marca.
5. Por qu se requieren disolventes de alta pureza grado HPLC, en cromatografa de lquidos de alta
resolucin?
Porque es un mtodo muy sensible y para obtener buenos cromatogramas y para que sea
compatible con el detector, el grado de pureza en el disolvente es importante para que este no
modifique su sensibilidad ni contamine la muestra ya que si est contaminada puede producir
picos indeseables.
 6. Qu se entiende por un sistema isocrtico y uno en gradiente?
Isocrtico, el solvente conserva la misma concentracin durante todo el tiempo de corrida
(muestreo o anlisis), sea que se trate de un solvente puro o de mezclas de solventes.
Gradiente, lo cual significa que la concentracin del solvente utilizado vara durante la corrida.
Esto depende del tipo de muestra, de columna y de la necesidad del anlisis de mejorar alguna
separacin (depende del analista o investigador).

Bibliografa
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_reversa.pdf
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 11va Edicion, Tomo I, pp. 808-809,851-852,1041-1043
https://www.quiminet.com/articulos/seleccion-y-uso-de-solventes-en-cromatografia-hplc-14775.htm