1 TEORIA

1.1 Generalidades

As enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas. Elas esto

entre as biomolculas mais notveis devido a sua extraordinria especificidade e poder
cataltico, que so muito superiores aos dos catalisadores produzidos pelo homem.
Praticamente todas as reaes que caracterizam o metabolismo celular so catalisadas
por enzimas.

Como catalisadores celulares extremamente poderosos, as enzimas aceleram a

velocidade de uma reao, sem, no entanto participar dela como reagente ou produto.
Atuam ainda como reguladoras deste conjunto complexo de reaes.

As enzimas so, portanto, consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular.

A parte da enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas, e os fatores

que influenciam nesta velocidade a cintica enzimtica. A cintica de uma enzima
estudada avaliando-se a quantidade de produto formado ou a quantidade de substrato
consumido por unidade de tempo de reao.

Victor Henri props, em 1903, que uma enzima liga-se molcula de seu substrato
para formar o complexo ES (Enzima/Substrato), sendo este um passo obrigatrio no
processo cataltico enzimtico. Esta idia foi expandida em uma teoria geral da ao
das enzimas, especialmente por Leonor Michales e Maud Menten, em 1913. Eles
propuseram que a enzima primeiro combina-se reversivelmente com o substrato, para
formar o complexo enzima-substrato, em um passo reversvel relativamente rpido:

(Equao 1)
A seguir, em um passo mais lento, o complexo ES se rompe com o aparecimento da
enzima livre e a formao do produto da reao, P:

(Equao 2)

A segunda reao a mais lenta neste modelo e, por tanto, limita a velocidade da
transformao global do reagente em produto. Disto resulta que a velocidade da reao
enzimtica deve ser proporcional concentrao da substancia reagente no segundo
passo, ES.

1.2 Inibio

Muitos fatores podem influenciar na cintica enzimtica, tais como inibio por alguma
substancia e condio externas, como, Ph e temperatura.

Um grande nmero de substncias pode inibir a atividade enzimtica. Algumas dessas

substncias so constituintes da clula e outras so estranhas, levando com a sua
presena a alteraes significativas do metabolismo. Quando o inibidor produzido
pela prpria clula, a variao na sua concentrao vai ser muito empregado pela
prpria clula como uma forma de controle da velocidade das reaes. Esse
mecanismo vai possibilitar ao organismo responder a diferentes condies fisiolgicas.

Os inibidores podem ser reversveis ou irreversveis, de acordo com a estabilidade

gerada pela sua ligao com a enzima:

Os inibidores irreversveis se ligam as enzimas levando a inativao definitiva

desta. Estes inibidores so muito txicos para o organismo j que no so
especficos, sendo capazes de inativar qualquer enzima.
J os inibidores reversveis podem ser divididos em dois grupos: os competitivos
e os no-competitivos. Essa diviso baseada na presena ou no de
competio entre o inibidor e o substrato pelo centro ativo da enzima.
 - Os inibidores competitivos competem com o substrato pelo centro ativo da enzima.
Estas molculas apresentam configurao semelhante ao substrato e por isso so
capazes de se ligarem ao centro ativo da enzima. Eles produzem um complexo
enzima-inibidor que semelhante ao complexo enzima-substrato.

- Os inibidores no-competitivos no tem semelhana estrutural com o substrato de

reao que inibem. A sua inibio se d pela sua ligao a radicais que no
pertencem ao grupo ativo. Esta ligao vai alterar a estrutura da enzima e inviabiliza
a sua catlise.

Fatores externos que podem influenciar so:

Temperatura: Quanto maior a temperatura, maior a velocidade da reao, at se

atingir a temperatura tima; a partir dela, a atividade volta a diminuir, por
desnaturao da molcula. De modo geral as enzimas desnaturam-se em
temperaturas acima de aproximadamente 60C.
Ph: Anlogo temperatura, existe um pH timo, onde a distribuio de cargas
eltricas da molcula da enzima e, em especial do stio cataltico, ideal para a
catlise. De modo geral, em Ph muito cido ou alcalino, as enzimas so
inativadas.

2 EQUAES

2.1 Equao de Michaelis e Menten

A figura 1 mostra a relao entre [S] e V 0 para uma reao enzimtica. A curva que
expressa esta relao possui a mesma forma para a maioria das enzimas, sendo
expressa pela Equao de Michaelis e Menten, derivada por estes pesquisadores
partindo de sua hiptese bsica de que, nas reaes enzimticas, o passo limitante da
velocidade a quebra do complexo ES para formar o produto e a enzima livre.
A equao de Michaelis-Menten (Equao 3) a equao da velocidade para uma
reao catalisada enzimaticamente e com um nico substrato. uma expresso da
relao quantitativa entre a velocidade inicial V 0, a velocidade mxima Vmx e a
concentrao inicial de substrato [S], todas relacionadas atravs da constante de
Michaelis-Menten, Km. a constante de Michaelis-Menten uma constante dinmica, ou
de pseudo-equilbrio, que expressa a relao entre as concentraes reais no estado
estacionrio ao invs de concentraes no equilbrio.

(Equao 3)

Uma relao numrica importante emerge da Equao de Michaelis-Menten no caso

especial quando V0 exatamente a metade de Vmx (figura 1). Ento:
 (Equao 4)

Km equivalente concentrao de substrato no qual V 0 igual metade de Vmx, e

indica a afinidade de uma enzima pelo seu substrato. Quanto menor for o valor de K m,
maior ser a afinidade da enzima pelo seu substrato.

2.1.1 Ordem da reao

2.1.1.1 Primeira ordem

Ocorre quando a concentrao de substrato bem menor que K m. Ento:

(Equao 5)

Considerando

(Equao 6)

Onde K a constante de velocidade de primeira ordem dada em min -1.

2.1.1.2 Ordem zero

Ocorre quando a concentrao de substrato muito maior que K m.

 (Equao 7)

2.2 Equaes com a presena de inibidores

2.2.1 Inibidores Reversveis competitivos

Equao de Michaelis-Menten com a presena de um inibidor competitivo, onde I

indica o inibidor e KI a constante de velocidade do inibidor.

(Equao 8)

2.2.2 Inibidores Reversveis no-competitivos

A equao da velocidade para esse caso :

(Equao 9)

2.2.3 Inibidores Irreversveis

Equao de Michaelis-Menten com a presena de um inibidor irreversvel :

(Equao 10)
3 EXEMPLOS DE CINTICA ENZIMATICA COM INIBIO

Um exemplo da aplicao de inibio enzimtica pode ser demonstrado durante o

processo de obteno de lcool por Saccharomyces cerevisiae. Um trabalho realizado
por SANTOS et al (2010) que teve como objetivo avaliar e compara processos em
separado ou em simultneo de bagao de cana-de-aucar para obteno de lcool por
S. Cerevisiae, mostro que em seu processo ocorre um efeito inibitrio e que foi feito
algum processo para evitar tal inibio.

O bagao de cana foi preparado e aps isso o prximo passo a hidrolise e a

fermentao. A hidrlise enzimtica realizada por celulases (endoglucanase e
exoglucanase), que quebram a celulose em celobiose, e esta , subsequentemente,
convertida em duas molculas de glicose pela -glucosidase. Entretanto, a atividade da
endoglucanase inibida pela celobiose e a da -glucosidase pela glicose. Uma
hiptese para se evitar inibio da -glucosidase pela glicose fazendo um processo
continuo alimentado, no qual o produto retirado na mesma proporo em que o reator
alimentado com substrato. Para esse trabalho a forma de evitar a inibio utilizada foi
a sacarificao e fermentao simultneas. Uma vez que a glicose est sendo formada,
tambm est sendo consumida para a produo de etanol, levando a uma maior
converso de celulose.

Outro trabalho realizado na UFV (Universidade Federal de Viosa) realizado por

Monteiro et al (2004) mostrou a qualidade protica de linhagens de soja com ausncia
do Inibidor de Tripsina Kunitz. Com esse trabalho foi mostrado que a eliminao
gentica do Inibidor de Tripsina Kunitz promove melhora acentuada na digestibilidade
da protena de soja, comprovando que esse inibidor o principal fator antinutricional
responsvel pela diminuio da digestibilidade da protena de soja e,
conseqentemente, pela menor absoro desta pelo organismo animal, sendo assim a
soja poder ser melhor aproveitada para diversos fins alimentcios.
4 DIMINUIO DO EFEITO INIBITRIO

Sob determinadas condies, a velocidade de transferncia do substrato em produto

proporcional quantidade de enzima. Desvios da linearidade podem ocorrer devida a:
presena de inibidores na prpria soluo de enzima; presena de substancias txicas;
presena de um ativador que dissocia a enzima; e limitaes impostas pelo mtodo de
anlise. A fim de se evitar o efeito causado por estes fatores recomenda-se utilizar nos
ensaios cinticos, sempre que possvel: enzimas com alto grau de pureza; substratos
puros; e mtodos de analise confivel.

Conhecer a cintica enzimtica tambm muito importante para diversos processos

que dependem de enzimas, como por exemplo, a produo de etanol e derivados de
leite, pois desta forma, conhecendo bem a cintica, fica mais fcil controlar fatores
externos como ph e temperatura que podem atuar como fatores inibitrios.

5 CONCLUSO

As enzimas esto presentes no nosso dia-a-dia mais do que possamos imaginar, alm
de serem vitais ao organismo podem auxiliar em vrios fatores, at mesmo nas
indstrias, como por exemplo, indstrias de alimentos como foi visto no decorrer do
trabalho.

A cintica de reaes apresenta diversos objetivos, dentre eles esto: Medir a

velocidade das reaes que se processam; Estudar a influencia de cndies de
trabalho (concentrao de reagente e das enzimas, temperatura, Ph, conentrao de
ativadores e de inibidores) naquelas velocidades; Correlacionar as velocidades das
transformaes com alguns dos fatores que as afetam; Colaborar na otimizao de
processos; Estabelecer critrios para controle de processos; e Projetar o reator mais
adequado.
6 REFERNCIAS

JUNIOR, A. F.; Enzimas e suas aplicaes e cintica enzimtica. Florianpolis, 2010.

MONTEIRO, M. R. P.; COSTA, N. M. B.; OLIVEIRA, M. G. A.; PIRES, C. V.; MOREIRA,

M. A. Qualidade protica de linhagens de soja com ausncia do Inibidor de Tripsina
Kunitz e das isoenzimas Lipoxigenases. Revista de Nutrio. 2004; vol 17. Campinas
SP.

SANTOS, J. R. A.; SOUTO-MAIOR, A. M.; GOUVEIA, E. R.; MARTN, C. Comparao

entre processos em SHF e em SSF de bagao de cana-de-acar para a produo de
etanol por Saccharomyces cerevisiae. Qumica Nova. Vol 33. So Paulo, 2010.

Apostila de cintica enzimtica. Disponvel em:

<http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/apostilas/Apostila_cinetica_enzimatic
a_ju.pdf >. Acesso em: 16 de novembro de 2010.

Enzimas. Disponvel em:

<http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/const_microorg/e
nzimas.htm>. Acesso em: 16 de novembro de 2010.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA RURAL
ENGENHARIA DE ALIMENTOS

CAMILA PEREIRA FRACALOSSI

TRABALHO DE FSICO-QUMICA II

REAES ENZIMTICAS

ALEGRE
2010