ELISA

(Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay)

DEFINICION: La tcnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimtico ampliamente

empleado en el rea mdica para la cuantificacin de molculas especialmente de
aquellas que experimentan cambios en diferentes estados como pueden ser
infecciones por bacterias, virus, hongos o parsitos o fases activas de enfermedades
autoinmunes. Como ejemplo se pueden medir por ELISA hormonas, autoanticuerpos,
inmunoglobulinas contra antgenos de patgenos, toxinas, antgenos. Las tcnicas de
ELISA son tambin muy usadas en los ensayos de nuevos medicamentos para
comprobar sus efectos cuantificando las molculas de inters en cada caso. Existen
numerosas variantes de este tipo de ensayo.Mtodo analtico que depende de la
reaccin Ag-Ac. Tcnica de inmunoensayo en donde el antgeno inmovilizado se
detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un
producto detectable, como cambio de color.

I. ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:

Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos.

TIPOS DE
Lavado para eliminar los antgenos
ELISAfijados deficientemente o no
fijados.

Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima; si

ANTICUERP
los anticuerpos reaccionan con los antgenos, el complejo quedar
ANTIGENO
O
MARCADO
MARCADO
 ELISA ELISA ELISA EN
COMPETITI
DIRECTO INDIRECTO. SANDWICH
VO

solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no

hayan reaccionado.

Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.

Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

II. ELISA Indirecto.

Consta de las siguientes etapas:

Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los

anticuerpos objeto de estudio. Lavado para eliminar los antgenos
fijados deficientemente o no fijados.

Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos

reaccionarn especficamente con los antgenos fijados al soporte.
Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.

Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales

reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos en el paso
anterior y que se encuentran fijados a los antgenos. Lavado para
eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.

Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

Pasos generales de un ELISA.

1. Tapizado del pocillo con el antgeno o anticuerpo.

2. Adicin de la muestra problema con la mezcla de antgenos o
anticuerpos.
3. Unin del antgeno o anticuerpo especfico al anticuerpo o
antgeno tapizado en el pocillo

4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antgeno o

anticuerpo no unido
5. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima

6. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo

7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adicin del substrato
 9. Unin del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color

III. ELISA SANDWICH

A. ELISA Sndwich DAS (Double Antibody Sandwich).

Consta de las siguientes etapas:

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente

patgeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados
deficientemente o no fijados.

Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma,

etc.), de tal forma que si est presente el agente patgeno de diagnstico
(antgeno), reaccionar especficamente con los anticuerpos fijados al
soporte. Lavado para eliminar los antgenos que no hayan reaccionado y los
restos de la muestra no fijados.

Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un

eptopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte)
conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los antgenos
aadidos con la muestra problema y que se encuentran fijados a los
anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan
reaccionado.

Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.

Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

B. ELISA Sndwich HADAS.

Consta de las siguientes etapas:

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente

patgeno a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados
deficientemente o no fijados.

Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma,

etc.), de tal forma que si est presente el agente patgeno de diagnstico
(antgeno), reaccionar especficamente con los anticuerpos fijados al
soporte. Lavado para eliminar los antgenos que no hayan reaccionado y los
restos de la muestra no fijados.
 Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un
eptopo diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte),
los cuales reaccionan con los antgenos aadidos con la muestra problema y
que se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado para eliminar los
anticuerpos que no hayan reaccionado.

Adicin de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos

empleados en el paso anterior. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.

Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.

Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

IV. ELISA Competitivo.

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno

a detectar. Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no
fijados.

Adicin en concentracin conocida de una mezcla de antgenos del

anticuerpo utilizado en el paso anterior, marcados con una enzima y
antgenos desconocidos objeto de estudio. Paralelamente, aadir
nicamente antgenos del anticuerpo usado en el paso anterior, marcados
con una enzima. Lavar para eliminar los antgenos que no hayan
reaccionado.

Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima

marcadora. Se puede parar la reaccin si se desea.

Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado de ambas

pruebas y comparar los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son
anlogas, el antgeno a estudio no tienen nada que ver con los anticuerpos
empleados para tapizar el soporte. Si hay diferencia en las lecturas de
ambos pocillos, el antgeno objeto de estudio, est relacionado
serolgicamente con el anticuerpo empleado para tapizar el soporte y la
diferencia de densidad ptica, es proporcional a la concentracin del
antgeno problema en la muestra.

IMPORTANCIA DE ELISA

- Son utilizados en el diagnstico mdico, la industria de alimentos y control de

medio ambiente.
 - En estudios serolgicos, hematolgicos, endocrinlogos , oncolgicos, en los
trasplantes, la medicina forense y la antropologa.
- Con propsitos mdicos se han aplicado en la determinacin de hormonas y
protenas plasmticas, antgenos tumorales, drogas, Ag- Ac de
microrganismo.
- Los resultados aportan elementos diagnsticos, informacin de una
enfermedad y coadyuvan en la planificacin de tratamiento.

BIBLIOGRAFIA

- Lequin, RM. Enzyme inmunoassay (EIA)/Enzyme-Linked Inmunosorbent

Assay (ELISA). Clinical Chemestry. 2005. 51:12 2415-2418.