Qumica Analtica II

Cromatografa de Capa Fina

(Thin Layer Chromatography)
Definicin
En esta tcnica la separacin ocurre sobre una capa delgada de
adsorbente que esta adherida a un soporte inerte, generalmente
vidrio.
Historia
El botnico ruso Mikhail Tswett estableci las ventajas de la
cromatografa y fu el primero en utilizar este trmino (1903). Es
recordado como el Padre de la Cromatografa.
Ismailov y Scraiber utilizaron lminas de vidrio para colocar capas
muy delgadas de almina y luego aplicaron extractos vegetales,
dando as la primera forma de Cromatografa de Capa Fina. Egon
Stahl (1956) dio el nombre de Cromatografa de Capa Fina.
Estandariz los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un
auge a la tcnica simple, a bajo costo y eficiente.
Proceso de Adsorcin
La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del
material por la accin de fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der
Wals, puentes de Hidrgeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando
la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia una
competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la
sustancia con el solvente.
Adsorbentes
Los adsorbentes ms utilizados en la Cromatografa de Capa Fina
son:
Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones), se le
encuentra con o sin indicador fluorescente, algunas marcas
tienen sulfato de calcio para darle mayor adhesividad a la placa.
Slica gel G 13% CaCO3
Slica gel H
Slica gel GF254
xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica), presenta
las mismas propiedades adsorbentes que la slica gel pero a
diferencia de sta la capacidad de la almina depende del pH.
Se encuentra tambin en el mercado con o sin adhesivo y con o
sin indicador.
1
Dr. Jos Ramn Verde Calvo
 Qumica Analtica II

Tierra Silcea Kieselguhr, es menos polar que la slica gel y en

consecuencia menos adsorbente por lo que no se pueden hacer
capas gruesas con facilidad y la cantidad de sustancias que se
puede aplicar es menor que en la slica.
Celulosa (Nativa o micro-cristalina), aqu los principios de la
separacin son los mismos que en la cromatografa de papel
pero con la ventaja de que las manchas son mas definidas y
dan mejores separaciones. Se encuentra en el mercado con o
sin adhesivo y con o sin indicador fluorescente.
Poliamidas
Estos adsorbentes deber tener las siguientes caractersticas:
Tamao de Partcula
o Volumen de Poro
o Dimetro de Poro
o rea Superficial
Homogeneidad
Pureza
Preparacin de la Placa Cromatogrfica
Se usan como soporte del adsorbente lminas de: vidrio, plstico
metlicos (ej: Aluminio). Los tamaos de la placa para TLC
convencional son: 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm Hay
placas que contienen un indicador de Fluorescencia : F 254 F366. El
nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de
excitacin del indicador utilizado.
a) Todas las placas debern ser lavadas escrupulosamente mediante
lavado con cido y justamente antes de usarse se frota la
superficie con acetona para quitar cualquier grasa que pueda tener.
b) Se aplica la papilla con el soporte y el solvente adecuado, el mayor
problema es conseguir una consistencia correcta por lo que hay
que seguir las instrucciones del fabricante o de la literatura.
c) La aplicacin puede ser manual con una varilla o mecnica.
d) Activacin de las placas. Las placas se calientan para retirar el
agua que acta como impureza y evita una buena separacin. Con

2
Dr. Jos Ramn Verde Calvo
 Qumica Analtica II

frecuencia el agua esta fuertemente ligada al adsorbente por lo que

se debe calentar fuertemente.
e) Para hacer 5 placas de 20 x 20, se utilizan 25 g de slica gel y 50
ml de agua destilada.
Aplicacin de la muestra
La muestra se aplica en la placa segn el objetivo: Analtico
Preparativo en:
Banda
Punto Mancha
a) Las muestras se aplican con capilares sobre la lnea base, dejando
evaporar el disolvente
b) Hay que tener cuidado de no sobrecargar la mancha pues de lo
contrario se presenta el rayado o escurrimiento
c) Hay que tener cuidado de no maltratar la capa delgada del adsorbente
Desarrollo de la Placa
Es un proceso mediante el cual son transportados a travs de la fase
estacionaria por la fase mvil.
Eleccin del Solvente
Se debe de tomar en cuenta la polaridad de los compuestos a
separar, recordando que los compuestos no polares son afines y
solubles en solventes polares y los compuestos polares son afines a
los solventes polares.
Cmaras para Desarrollo
Existen varios tipos de cmaras:
Normal
Doble Compartimiento
Horizontal
Deteccin Visualizacin
Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de mtodos que
nos permitan visualizar el(los) componente(s) presentes. Tambin se
conoce este procedimiento como Revelado.
3
Dr. Jos Ramn Verde Calvo
 Qumica Analtica II

Estos mtodos son:

a) No destructivos:
i. UV, generalmente a 254 nm y 366 nm. En estas longitudes
se detectan sistemas de dobles enlaces conjugados, cetonas
, no saturadas, anillos aromticos, pero no compuestos
con dobles enlaces aislados.
Productos fluorescentes a 254 nm: fsforo inorgnico,
silicato de zinc, rodamina 6 G, diclorofluoresceina 34 y
fluorescena sdica.
Productos fluorescentes a 366 nm: fluorescena al
ultravioleta.
ii. I2, forma complejos con una gran variedad de compuestos,
puede ser aplicado por pulverizacin en soluciones al 1 % en
Meto o en una cmara con vapores.
iii. , H2O, sobre placas de slica gel con varios compuestos se
logra ver manchas opacas que contrastan en un fondo
semitransparente.
b) Destructivos
i. H2SO4 al 25 % en etanol
ii. H2SO4 + oxidantes (K2Cr2O7, KMnO4, HNO3, CeSO4, al
calentarse dan manchas oscuras por carbonizacin)
iii. HClO4 al 2% en etanol
iv. H3PO4 al 50 % en etanol
v. Haluros metlicos: SbCl3, SbCl5, ZnCl2, FeCl3, al calentarse
producen derivados fluorescentes

4
Dr. Jos Ramn Verde Calvo
 Qumica Analtica II

Evaluacin de un Cromatograma de Capa Fina

Anlisis Cualitativo
Medida de Rf = distancia recorrida desde el origen por el
compuesto/ distancia recorrida desde el origen por el frente del
eluyente
Comparacin Visual de Color/Intensidad
Propiedades UV/IR/MS/NMR
Anlisis Cuantitativo
Semi-cuantitativo
o Comparacin visual del dimetro y la intensidad del color
de la mancha contra una serie de manchas patrones de
concentracin conocida
Cuantitativo
o Espectrofotometra Vis-UV
Fluorescencia
Referencias
1. DOMINGUEZ, Xorge Alejandro. Cromatografa en Papel y en
Capa Delgada. Serie de Qumica. Organizacin de los Estados
Americanos. N 16. U.S.A. 1975
2. Reactivos de Coloracin para Cromatografa en Capa Fina y en
Papel. Merck. Alemania. 1980.
3. Touchstone, Joseph and Dobbins, Murrell F. Practice of Thin
Layer Chromatography. 2nd Edition. Willey Interscience. U.S.A.
1983.
4. Zlatkis, A. and Kaiser, R.E. HPTLC. High Performance Thin-
Layer Chromatography. Vol. 9. Journal of Chromatography
Library. Elsevier. 1977.

5
Dr. Jos Ramn Verde Calvo