Espectrofotometra UV

Este captulo revisa los principios de la determinacin cuantitativa y la

identificacin en espectrofotometra UV. La espectrofotometra UV es un
mtodo oficial en Ph.Eur. Esta usado para el control de calidad de ingredientes
activos, excipientes y productos farmacuticos. Instrumentacin se discute
brevemente y algunos consejos prcticos en relacin con la espectrofotometra
UV. Tambin se discuten en este captulo, ejemplos de cmo se utiliza la
tcnica Identificacin y determinaciones cuantitativas en relacin con los
ingredientes y los productos se discuten en los Captulos 21 y 22,
respectivamente.

7.1 Principio de Determinacin Cuantitativa

Cuando la radiacin electromagntica monocromtica (radiacin con una sola

longitud de onda) con la intensidad de I0 pasa a travs de una solucin de un
analito, parte de la radiacin es absorbida por el analito mientras que el resto
pasa a travs. Cuando la intensidad de la radiacin monocromtica
transmitida, que se mide en la parte posterior de la solucin, es I (figura 7.1), la
absorbancia de la radiacin (A) se define como:

Donde T es la transmitancia (I / I0).

La ley de Beer rige la medicin de la absorcin de radiacin por una solucin

de molculas. De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia (A) es proporcional
a la longitud de la trayectoria a travs de la cual pasa la radiacin (b) y la
concentracin de la sustancia en la solucin (c):
Cuando b se expresa en centmetros y c en moles por litro (M), e se denomina
absortividad molar, que es constante para esa sustancia en particular. La ley
de Beer establece que la absorbancia es proporcional a la absortividad molar, a
la longitud de la trayectoria ya la concentracin del analito en la solucin.
Cuando e y b son conocidos desde antes, la concentracin molar desconocida
de un frmaco se puede determinar leyendo la absorbancia. La absorbancia
especfica se puede usar para calcular las concentraciones en% (g / 100 ml). La
absorbancia especfica se define como:

Y esto se refiere a la absorbancia de una solucin que contiene 1 g de la

sustancia disuelta en 100 ml de disolvente medida a una longitud de onda
definida a una longitud de trayectoria de 1 cm. Mr es la masa molecular
relativa (masa molar). La absorbancia especfica tambin se escribe como A
(1%, 1 cm). La longitud de trayectoria se especifica para el equipo utilizado y
las mediciones se realizan normalmente a una longitud de trayectoria de 1 cm.
La absorbancia de un analito debe determinarse despus de la calibracin. En
la calibracin se mide la absorbancia de soluciones patrn de concentraciones
conocidas. Un ejemplo de esto se muestra en el recuadro 7.1.

La absorbancia depende de:

. Longitud de onda;

. Disolvente (Figura 7.2);

. PH cuando la sustancia es un cido o una base (Figura 7.3);

. Temperatura (en extensin relativamente pequea).

Es importante que estos parmetros sean los mismos para los estndares y la
solucin de muestra. Si no es as, pueden producirse errores significativos en
las determinaciones cuantitativas. Cuando es imposible producir soluciones
estndar dentro del mismo disolvente y pH que en la solucin de muestra, la
calibracin es ligeramente ms complicada. Esto se debe a que la absortividad
de la sustancia en la solucin patrn puede ser diferente de la de la muestra
Recuadro 7.1 Determinacin de la cafena

Debe determinarse la concentracin de cafena en una solucin acuosa

(solucin de muestra). En primer lugar se prepara una solucin estndar de
cafena en agua con una concentracin conocida de 4.5 x10-5 M. La
absorbancia medida a 273 nm fue 0.454 con una longitud de trayectoria de 1
cm. A partir de esto se puede calcular la absortividad molar de la cafena en las
condiciones dadas:

La lectura de absorbancia de la solucin de muestra fue 0,367 a la misma

longitud de onda (273 nm), con la misma longitud de recorrido (1 cm) y en el
mismo disolvente (agua) que en la solucin patrn. A partir de esto se puede
calcular la concentracin de cafena en la solucin de muestra:
solucin. En tales situaciones, debe utilizarse una adicin estndar. En una
adicin estndar se aade una cantidad conocida de una sustancia qumica de
referencia del analito a la solucin de muestra y la absorbancia se mide tanto
antes como despus de la adicin de la sustancia de referencia. Entonces, la
concentracin de analito se calcula de acuerdo con la ley de Beer [Ecuacin
(7.2)]. Con una adicin estndar, la calibracin se realiza directamente en la
solucin de muestra para evitar cualquier variacin experimental entre las
muestras y las normas de disolvente, el pH y la posible presencia de otras
sustancias. En el recuadro 7.2 se muestra un ejemplo de adicin estndar. La
ley de Beer se aplica a la radiacin monocromtica, es decir, a la radiacin de
una longitud de onda. Esta es una situacin ideal, que en la prctica no se
puede lograr con los instrumentos utilizados. En la prctica, la radiacin
transmitida a la muestra forma un intervalo de longitudes de onda estrechas
(cuanto menor es el mejor), y por consiguiente la muestra es irradiada con
radiacin policromtica. La radiacin policromtica provoca una desviacin de
la ley de Beer. Se ha demostrado que esta discrepancia es mayor cuando el
valor de e (absortividad) vara mucho dentro del intervalo de longitudes de
onda que golpea a la muestra. Por lo tanto, para las mediciones cuantitativas
se debe elegir un rango de longitud de onda estrecha con pequeas
variaciones en la capacidad de absorcin. Esto suele ser el caso en el mximo
de absorcin, que es la longitud de onda de absorcin mxima, como se
muestra para la banda A en la Figura 7.4. Adems, la mejor sensibilidad para el
mtodo (pendiente de la curva de calibracin) se obtiene a los mximos de
absorbancia. Como se muestra en la Figura 7.4, la capacidad de absorcin
vara mucho para la banda B y la sensibilidad es mucho menor que para la
banda A. Adems de exponer la muestra a radiacin con un intervalo de
longitud de onda estrecha, es importante que la concentracin del analito no
sea demasiado alta. En soluciones concentradas, las molculas absorbentes
vienen tan juntas que afectan la distribucin de carga de cada uno

Recuadro 7.2 Determinacin de la cafena por adicin estndar

Debe determinarse la concentracin (c) de cafena en una solucin de muestra.

Debido a que la composicin de la solucin de muestra es desconocida, es
difcil hacer una solucin estndar de cafena para determinar la absortividad
molar. Por lo tanto, se eligi el mtodo de adicin estndar. Dos porciones de
10 ml de la solucin de muestra se recogieron con una pipeta y se llenaron en
dos matraces volumtricos de 20,00 ml. El matraz A se llena entonces hasta la
marca con agua. Al matraz B se aaden 2,00 ml de una solucin estndar de
4,5 - 104 M de cafena en agua y luego se aade agua a la marca. La
absorbancia de la solucin A fue 0,356 a 273 nm (trayectoria de radiacin de 1
cm) mientras que la absorbancia correspondiente para la solucin B era 0,810.
Para la solucin A, podemos establecer la siguiente frmula, basada en la ley
de Beer:
Donde e es la absortividad molar (desconocida) y c es la concentracin
despus de la dilucin (de 10,00 ml a 20,00 ml). Para la solucin B,
establecemos en consecuencia:

Donde c es la concentracin de cafena en la muestra (despus de la dilucin)

mientras que 4.5 105 M es la concentracin de cafena aadida de serie
despus de la dilucin (de2, 00 ml a 20 ml). Las dos ecuaciones (1) y (2) se
pueden combinar de la siguiente manera:

La concentracin en la muestra original fue de 2 3.54x10-5 M = 7.08x 10-5 M

Ya que la solucin de muestra se diluy por un factor de dos en ambos frascos.

otro. Esto afectar su capacidad de absorber la radiacin y podra resultar en la

desviacin de la ley de Beer. Tpicamente, la desviacin de la ley de Beer es
pequea cuando las concentraciones de analito son inferiores a 0,01 M. Para
trabajos prcticos, esto significa que las soluciones relativamente concentradas
deben diluirse antes de realizar las mediciones.

Un tercer requisito prctico importante para la Ley de Cerveza es que el analito

no debe participar en las reacciones qumicas en la solucin. Por lo tanto, el
analito debe ser estable en el disolvente seleccionado, y la solucin no puede
contener sustancias que reaccionan con el analito.

7.2 Principio de identificacin

Adems del anlisis cuantitativo, la espectrofotometra UV tambin se utiliza

para la identificacin de sustancias. La identificacin se basa en espectros UV,
donde la absorbancia de la sustancia se registra en funcin de la longitud de
onda. Diferentes sustancias pueden tener diferentes espectros UV (Figura 7.5).
Se puede identificar una sustancia desconocida por espectrofotometra UV si el
espectro de la sustancia desconocida es idntico a un espectro de referencia
de una sustancia conocida. A pesar de esto, hay que tener cuidado de basar la
identificacin nicamente en la espectrofotometra UV porque diferentes
sustancias pueden tener espectros UV similares. En esos casos

Es necesario complementar la identificacin con otras tcnicas tales como IR

Espectrofotometra.

7.3 Qu sustancias tienen una fuerte absorcin UV?

La absorcin de la radiacin UV implica, como se menciona en el captulo 6, la

transferencia de electrones a orbitales de mayor energa. Dos tipos de
electrones pueden participar en tal excitacin:

. Electrones compartidos por varios tomos y que participan directamente en el

enlace qumico;

. Los electrones no compartidos que estn localizados en un tomo como O, N,

S y halgenos.

Los electrones involucrados en enlaces simples entre C y H y entre C y C se

mantienen en su mayor parte en su lugar. Estos electrones requieren mucha
energa para ser excitados. La absorcin de estos electrones se encuentra slo
a muy bajas longitudes de onda en el rango UV (por debajo de 200 nm), que
contiene una gran cantidad de energa. Por razones prcticas no es habitual
medir por debajo de 200 nm, y normalmente los electrones en enlaces simples
no contribuyen a la absorbancia medida en espectrofotometra UV.

Los grupos absorbentes de una molcula se llaman cromforos. Los enlaces

dobles o triples de compuestos orgnicos son cromforos y contribuirn a la
absorbancia de la radiacin UV. Estos electrones son mucho ms flojos, y
requieren menos energa para ser excitados. La luz UV con longitudes de onda
de 200 nm y superiores contiene suficiente energa para excitar este tipo de
electrones. Los enlaces tpicos dentro de este grupo incluyen C doble enlace a
C, N doble enlace a N, C doble enlace a O, C triple enlace a C y C triple enlace a
N. Adems de los enlaces dobles y triples, los tomos Con electrones no
compartidos dan importantes contribuciones a las propiedades de absorcin de
UV. Esto se debe a que estos electrones son "relativamente flojos" y requieren
poca energa para la excitacin. Estos electrones se encuentran para O y N y
para halgenos. Una propiedad absorbente de UV de una sustancia y el
espectro UV es por lo tanto un resultado de la suma de los diversos electrones
que es fcilmente excitada por la luz UV. Cuando una sustancia contiene
muchos enlaces dobles o triples, dobles enlaces conjugados, anillos aromticos
o contiene una serie de tomos de O, N o halgenos, da una fuerte absorcin
en partes significativas de la gama UV.

7.4 Instrumentacin

Los instrumentos adecuados para medir en el espectro ultravioleta y visible

(espectrofotmetros) estn constituidos por un sistema ptico capaz de
producir radiacin monocromtica en el intervalo de 200-800 nm y un
dispositivo adecuado para medir la absorbancia. Un espectrofotmetro consta
de una fuente de radiacin, un selector de longitud de onda, un recipiente de
muestra (denominado clula o cubeta) y un detector. En la figura 7.6 se
muestra una vista esquemtica de un espectrofotmetro UV. La fuente de
radiacin emite radiacin UV, el selector de longitud de onda selecciona la
longitud de onda que irradia la muestra y el detector mide la intensidad de la
radiacin que pasa a travs de la solucin de muestra (I). La intensidad de esta
radiacin se compara con la intensidad de la fuente de radiacin (I0), y se
convierte mediante un sistema electrnico en unidades de absorbancia [log
(I0 / I)] visualizadas en el instrumento.

Las fuentes de radiacin utilizadas en los espectrofotmetros modernos son

fuentes continuas que emiten radiacin de todas las longitudes de onda dentro
de un rea dada. Debido a que la ley de Beer se aplica a la radiacin
monocromtica, es importante tener un selector de longitud de onda antes del
contenedor de la muestra. Un pequeo intervalo de longitud de onda se dirigir
entonces desde la fuente de radiacin y hacia la clula de muestra. Las
lmparas de deuterio se utilizan normalmente como fuente de radiacin en el
rango UV. Estas lmparas emiten radiacin continua en el rango 160-375 nm.
Muchos espectrofotmetros tambin cubren el rea de radiacin visible. En el
rango visible se utilizan lmparas de tungsteno que emiten radiacin continua
en el rango de 350-2500 nm. Para lograr condiciones estables durante las
mediciones de absorbancia es importante que la radiacin no flucte, es decir,
que la intensidad de radiacin permanezca constante en el tiempo. Esto hace
grandes demandas tanto en las lmparas como en las fuentes de voltaje
correspondientes, y las lmparas son relativamente costosas. El selector de
longitud de onda se coloca normalmente entre la fuente de radiacin y el
recipiente de muestra y slo permite que la radiacin con un intervalo de
longitud de onda estrecha pase de la lmpara a la muestra. Normalmente se
utiliza un monocromador como selector de longitud de onda. Dos
monocromadores comunes utilizados en espectrofotmetros UV / Vis son
prismas y rejillas de reflexin. El esquema de un monocromador basado en una
rejilla de reflexin se muestra en la figura 7.7. El monocromador se utiliza para
dispersar la luz en sus longitudes de onda constituyentes. La radiacin
continua se transmite a travs de una pequea ranura (ranura de entrada) y
hacia un espejo cncavo. La radiacin reflejada por el espejo se enva a una
pequea placa llamada rejilla de reflexin. Se trata de una placa delgada y
plana delgada con un gran nmero de pequeas ranuras paralelas en un
revestimiento reflectante. Para la UV y la regin visible es tpicamente entre
300 y 2000 ranuras / mm, siendo 1200-1400 el ms comn. La radiacin
continua que golpea la rejilla ser reflejada y transmitida en varios ngulos
dependiendo de la longitud de onda. La radiacin de la rejilla golpea un nuevo
espejo cncavo y se pasa a una nueva ranura (ranura de salida). Un intervalo
de longitud de onda pequeo dado pasar a travs de la ranura y sobre la
muestra, mientras que todas las otras longitudes de onda (una visualizada con
lnea de puntos) se reflejan en diferentes ngulos de la rejilla y el espejo y no
pueden pasar a travs de la ranura de salida. La longitud de onda del haz que
irradia la muestra se puede variar continuamente variando la posicin (ngulo)
de la rejilla de reflexin. Cuando la rejilla se gira ligeramente, otra gama de
longitud de onda pequea

Pasan a travs de la ranura de salida y de esta manera se puede seleccionar

otra longitud de onda. El monocromador puede utilizarse tanto en la regin UV
como en la visible. Algunos instrumentos ms nuevos utilizan una matriz de
fotodiodos (Figura 7.8). La radiacin continua es transmitida a travs de la
muestra y golpea la rejilla de reflexin. Esto refleja la radiacin en diferentes
ngulos de acuerdo con la longitud de onda como se discuti anteriormente. La
radiacin reflejada golpea la matriz fotodiodo. Una matriz de fotodiodos es una
matriz de un gran nmero de pequeos fotodiodos que detectan la intensidad
de la radiacin que los golpea. Cada diodo mide la radiacin en un intervalo de
longitud de onda dado. Esto significa que la absorcin de la luz puede ser
detectada y amplificada para dar un espectro de absorcin o una respuesta en
una longitud de onda o en diferentes longitudes de onda. Las muestras a
analizar por espectrofotometra UV convencional se disuelven siempre en un
disolvente adecuado antes de la medicin. La solucin de muestra se coloca en
un recipiente de muestra (clula o cubeta) que se irradia en el
espectrofotmetro. Las celdas de muestra deben tener ventanas fabricadas a
partir de un material que sea transparente a la radiacin utilizada. Son
tpicamente pequeos recipientes de cuarzo, vidrio o plstico, a menudo
hechos con una seccin transversal cuadrada con una anchura interior de
exactamente 1,0 cm. Se pueden suministrar con una tapa para el anlisis de
muestras hechas en disolventes voltiles. La tapa evita la evaporacin durante
la medicin y por lo tanto elimina las fluctuaciones en la concentracin que
pueden causar errores significativos en las determinaciones cuantitativas. Los
recipientes de muestra de vidrio o plstico se pueden utilizar en la gama visible
y son generalmente relativamente baratos. Para mediciones en la regin UV, ni
vidrio ni

Plstico se puede utilizar porque absorben la radiacin electromgnetica en el

rango UV. En tales casos, se deben utilizar recipientes de muestra hechos de
cuarzo. En el espectrofotmetro la intensidad de radiacin que irradia la clula
de muestra (I0) y la radiacin transmitida a travs de la clula (I) se miden
mediante un detector. El sistema electrnico de los instrumentos calcula la
absorbancia [log (I0 / I)], que se muestra en la pantalla instrumental. La
interaccin entre la radiacin y las paredes del recipiente de la muestra es
inevitable; Con prdidas de potencia que ocurren en cada interfaz como
resultado de la reflexin y posiblemente de la absorcin. Con el fin de
compensar estos efectos, la intensidad de la radiacin transmitida a travs de
la clula de muestra que contiene un analito absorbente se compara
generalmente con la intensidad de radiacin que pasa a travs de una clula
idntica que contiene solo disolvente. Los espectrofotmetros UV pueden ser
construidos ya sea por el principio de un solo haz o por el principio de doble
haz (Figura 7.9). Los instrumentos de un solo haz tienen una sola celda de
muestra. Esto significa que la absorbancia de una solucin que contiene solo
disolvente y la solucin de muestra no puede ser medida simultneamente. En
primer lugar, el solvente ms se colocar en la clula de muestra y

La absorbancia del disolvente debe ajustarse a cero. A continuacin, se retira

esa clula y se inserta una clula con la solucin de muestra y se mide la
absorbancia. Dado que la absorbancia del disolvente y la solucin de muestra
no se miden, pueden producirse imprecisiones simultneamente, ya que las
caractersticas de la fuente de radiacin, el detector y la electrnica pueden
cambiar con el tiempo. Esto se ha tenido en cuenta en los instrumentos de
doble haz, donde la radiacin electromagntica de la fuente de radiacin se
divide en dos haces paralelos. Un haz pasa a travs de una clula para el
disolvente (clula de referencia), mientras que el otro haz pasa a travs de otra
clula con la solucin de muestra (clula de muestra). Con esta configuracin,
las absorbancias de la clula de referencia y de la clula de muestra se miden
simultneamente. Los instrumentos de doble viga compensan as las
variaciones en las caractersticas de la fuente de radiacin, el detector y el
sistema electrnico. Esto significa que las mediciones pueden hacerse ms
rpido y con mayor precisin.
7.5 Trabajo Prctico y Desarrollo de Mtodos

En el desarrollo y uso de mtodos basados en espectrofotometra UV, los

siguientes puntos son esenciales:

1. Seleccin del disolvente utilizado para disolver la muestra.

2. Seleccin de la longitud de onda utilizada para leer la absorbancia.

3. Calibracin y preparacin de normas.

4. Manejo de las muestras en el instrumento UV.

Cuando el anlisis se realiza de acuerdo con monografas en Ph.Eur. Los puntos

1-3 se dan en las monografas, y slo el punto 4 requiere una atencin especial
por parte del operador. Sin embargo, al desarrollar un mtodo basado en la
espectrofotometra UV todos los puntos deben ser considerados. Cuando se usa
la espectrofotometra UV, el primer paso en el desarrollo del mtodo es
encontrar un disolvente adecuado. Es esencial que el disolvente disuelva el
analito y que las partculas de otras sustancias no disueltas en la muestra sean
eliminadas antes de la medicin de absorbancia. Las partculas en la solucin
pueden cubrir la dispersin de la luz y la reflexin de la radiacin y las
imprecisiones en la lectura de la absorbancia. La mayor parte de los
ingredientes farmacuticos activos son compuestos orgnicos con grupos
funcionales bsicos y stos generalmente sern bien solubles en soluciones
acuosas cidas (por ejemplo, cido clorhdrico) o en disolventes orgnicos tales
como etanol o metanol. El disolvente utilizado debe ser transparente a la
radiacin en el rango de longitud de onda utilizado (Tabla 7.1).
Todos los disolventes absorben la radiacin a longitudes de onda ms bajas. En
las longitudes de onda ms altas, la mayora de los disolventes son
transparentes (no absorben la radiacin). Por encima de esta longitud de onda,
que se denomina corte, los disolventes pueden utilizarse para la
espectrofotometra UV. El agua y el acetonitrilo tienen un bajo corte UV y se
usan como disolventes por encima de 190 nm, mientras que la acetona tiene
un alto corte UV y slo se puede usar por encima de 330 nm. La decisin final
tambin debe incluir una verificacin de la estabilidad del analito en el
disolvente. El disolvente no debe reaccionar con el analito ni catalizar las
reacciones de descomposicin. Normalmente esto no es un problema, pero la
estabilidad del analito debe ser verificada experimentalmente antes de la
decisin final.

Las lecturas de absorbancia deben ser preferiblemente a la longitud de onda

donde los analitos tienen sus mximos de absorcin. Las mediciones
cuantitativas deben realizarse a esta longitud de onda para obtener la mxima
sensibilidad (Figura 7.10) y para obtener las mejores curvas de calibracin
lineal posibles (Figura 7.4).

A las longitudes de onda en las que el analito tiene una absorbancia fuerte, la
curva de calibracin es pronunciada y dos muestras con poca diferencia en la
concentracin dan como resultado lecturas de absorbancia significativamente
diferentes. En este caso, la sensibilidad, que se define como la pendiente de la
curva de calibracin, es alta. A las longitudes de onda en las que el analito
tiene una baja absorbancia, dos muestras con concentraciones
significativamente diferentes pueden dar lecturas de absorbancia similares. En
este ltimo caso, la pendiente de la curva de calibracin es pequea y la
sensibilidad es baja. Los valores publicados para la absorcin deben usarse con
mucha cautela porque dependen de las condiciones experimentales. Cuando se
desarrollan nuevos mtodos UV, normalmente se aconseja establecer una
curva de calibracin (absorbancia en funcin de la concentracin) basada en
las normas de referencia qumica. Las soluciones estndar deben prepararse de
la misma manera que la muestra, de manera que el disolvente, el pH y la
posible presencia de otras sustancias sean los mismos para la muestra y las
normas. La curva de calibracin debe ajustarse en el rango de absorbancia 0.2-
0.8 porque este rango ofrece la mayor precisin. Las muestras deben diluirse
en consecuencia si las lecturas de absorbancia estn por encima de 0,8
unidades de absorbancia.

Cuando las muestras y las normas se disuelven en disolventes orgnicos, es

importante que todos los recipientes de muestra se cierren con un tapn para
evitar la evaporacin. Especialmente a partir de las clulas de la muestra la
evaporacin puede causar cambios significativos en las concentraciones, ya
que el volumen de stas es generalmente relativamente pequeo (4-5 ml).
Incluso con disolventes como la evaporacin de etanol es significativo y puede
causar problemas en determinaciones cuantitativas.

Es de particular importancia que las clulas de muestra de cuarzo estn

limpias para conseguir la mejor calidad ptica posible. Las paredes no deben
ser tocadas porque las impurezas en las paredes, tales como las manchas de
grasa, etc., pueden producir errores significativos. Antes de las lecturas de
absorbancia, las clulas deben limpiarse con papel para lentes empapado en
metanol o etanol. El secado de las clulas en llamas o hornos no puede
recomendarse porque esto puede cambiar las propiedades tepticas.

7.6 reas de uso y rendimiento

La espectrofotometra UV es particularmente adecuada para el control de

calidad de los ingredientes activos

Y excipientes (vase el captulo 21) y para el control de calidad de frmacos

simples

(Vase el captulo 22). Para muestras ms complejas, el mtodo no se utiliza

directamente, pero la espectrofotometra UV combinada con cromatografa
lquida (HPLC) es un mtodo estndar para el anlisis de productos
farmacuticos (Captulo 13). En este caso, el sistema de HPLC comprende un
detector UV (HPLC-UV). La deteccin UV tambin se utiliza en la electroforesis
capilar y en pruebas de disolucin. Adems, HPLC-UV se utiliza para la
determinacin de frmacos en sangre y orina (Captulo 23). Para que la
espectrofotometra UV sea aplicable, el analito debe tener absorbancia UV o
debe convertirse en una sustancia que absorbe la luz UV.

En comparacin con muchos otros mtodos analticos, la espectrofotometra

UV es rpida y fcil de realizar. Aunque el mtodo requiere un
espectrofotmetro UV, el instrumento es relativamente barato en comparacin
con otros instrumentos utilizados en el anlisis farmacutico.

Por lo tanto, el costo de la utilizacin de la espectrofotometra UV es

relativamente bajo.

Adems, la precisin y la precisin son parmetros importantes en la

evaluacin de un mtodo. La precisin indica la diferencia entre los valores
determinados experimentalmente y el valor verdadero. Los mtodos oficiales
UV para el control de la pureza de las materias primas en Ph.Eur. Se prueban
en un nmero de laboratorios, y la exactitud para stos es generalmente mejor
que 1-3%. Resultados similares tambin se encuentran para los mtodos UV
usados para productos farmacuticos.

La precisin de un anlisis indica la diferencia entre mltiples mediciones

(paralelos) de la misma muestra. La espectrofotometra UV proporciona un alto
grado de precisin, pero la precisin no suele ser tan alta como la obtenida con
la titulacin.

7.7 Prueba del sistema

Cuando se utilizan espectrofotmetros, es esencial que el equipo est calibrado

para asegurar lecturas correctas de longitud de onda y absorbancia. Segn
Ph.Eur., La escala de longitudes de onda se verifica utilizando los mximos de
absorcin de solucin de perclorato de holmio R. Los mximos de absorcin
ledos en el instrumento deben ser los especificados en la Tabla 7.2. La
tolerancia permitida es 1 nm para el intervalo ultravioleta y 3 nm para el
rango visible.
Adems, la escala de absorbancia debe ser calibrada regularmente. Para el
control de la absorbancia de acuerdo con Ph.Eur., Se preparan soluciones de
concentraciones conocidas de dicromato de potasio secado R. La absorbancia
se lee a las longitudes de onda indicadas en la Tabla 7.3, que da para cada
longitud de onda el valor exacto y los lmites permitidos de la absorbancia
especfica. El valor de la absorbancia especfica debe estar dentro de los lmites
especificados.

7.8 Resumen

La espectrofotometra UV es un mtodo clave en el anlisis farmacutico y se

utiliza tanto para la identificacin de materias primas y productos
farmacuticos como para determinaciones cuantitativas. Un haz de luz UV se
dirige a travs de la clula de muestra. En las determinaciones cuantitativas, la
absorbancia se lee a una longitud de onda dada. Basndose en la ley de Beer,
la absorbancia se convierte en una concentracin. La identificacin se basa en
espectros de absorbancia y las sustancias se identifican mediante la
comparacin de sus espectros de absorbancia con espectros de referencia